CN101590223A - 一种sod复合胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种SOD复合胶囊及其制备方法，所述SOD复合胶囊中含有白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物的重量比为10－50∶10－75∶75－150∶75－150∶200－500，每百克所述的复合胶囊中含有40000－4000000活力单位的超氧化物歧化酶，该超氧化物歧化酶是蝌蚪提取物。所述制备方法是：将葡萄皮、猪心、鹅肝、小麦、红花、苦荞、蝌蚪分别进行包括破碎、浓缩、离心分离、纯化等步骤的处理，获得各种原料的有效成分，再将蝌蚪提取物进行多次包埋，再与其他各个组分进行混合、制粒，即得成品。本发明具有抗氧化功能，可以缓解体力疲劳，增强人体免疫力。
Description
技术领域
本发明涉及一种SOD复合胶囊及其制备方法，所述的胶囊含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、鹅肝提取物、辅酶Q10、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物；可以抗氧化，缓解体力疲劳，增强人体免疫力。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD，Superoxide dismutace)是一种提取于动物红细胞的酶(它在植物界也广泛存在)，它的主要作用是分解和清除机体内过剩的氧自由基。SOD的生理功能可概括为：清除机体代谢工程中产生过量的氧自由基，延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象，如延缓皮肤衰老和脂褐素沉淀的出现；提高人体对由于自由基侵害而诱发疾病的抵抗力，包括肿瘤、炎症、肺气肿、白内障和自身免疫疾病等；提高人体对自由基外界诱发因子的抵抗力，如烟雾、辐射、有毒化学品和有毒医药等，增强机体对外界环境的适应力；减轻肿瘤患者在进行化疗、放疗时的疼痛及严重的副作用，如骨髓损伤及白细胞减少等；消除机体疲劳，增强对超负荷大运动量的适应力。
据科学研究证明，人体的衰老和90％以上的疾病与自由基有关。可惜的是人的机体在25岁以后，随着细胞组织的老化，超氧化物歧化酶的产生率及活力将逐渐降低，再加上外部因素造成氧自由基生成过多，打破了机体原有的自由基生成与清除的动态平衡，使机体免疫调节机制紊乱和全身多部位细胞组织损伤，导致人体疾病的发生与加重，并且加快了机体的衰老，所以人在25岁以后应适当外源性补充一些超氧化物歧化酶，保护机体正常的细胞组织，预防疾病，推迟、减缓老年病的发生。
针对上述存在的问题，中国专利200710048552.X公开了一种用牦牛血制作修饰牦牛血源SOD及修饰牦牛血源SOD抗癌保健食品。此发明中，制备修饰牦牛血源SOD包括溶血热变、超滤浓缩、纯化、修饰的步骤。该保健食品中每克含有修饰牦牛血源、竹根竹叶提取物、虫草提取物、杜仲提取物。其中，该保健品中每克含有修饰牦牛血源SOD3000-8000活性单位，可以制成胶囊服用。但是该保健食品存在以下缺点：其中的超氧化物歧化酶容易受到胃酸的破坏，降低了其有效性；该调理食品中的原料组合缺乏靶向性、稳定性，不能真正发挥SOD的抗氧化增强作用；由于采用牦牛血源提取SOD，故容易造成血液制品交叉感染。因此，需要提出一种新的SOD复合胶囊及其制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种SOD复合胶囊及其制备方法，所述的胶囊含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、鹅肝提取物、辅酶Q10、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物；可以抗氧化，缓解体力疲劳，增强人体免疫力。
本发明的目的是由下述技术方案实现的：
一种SOD复合胶囊，其特征在于：所述复合胶囊中含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 10-50，
辅酶Q10 10-75，
鹅肝提取物 75-150，
小麦胚芽提取物 75-150，
红花提取物 75-150，
苦荞提取物 200-500；
本发明中，每百克所述的复合胶囊中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，该超氧化物歧化酶是蝌蚪提取物。
本发明的另一目的是由下述技术方案实现的：
一种SOD复合胶囊的工艺制备方法，其特征在于：所述的胶囊中含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量份数配比为：
白藜芦醇 10-50，
辅酶Q10 10-75，
鹅肝提取物 75-150，
小麦胚芽提取物 75-150，
红花提取物 75-150，
苦荞提取物 200-500；
每百克所述的复合胶囊中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，该超氧化物歧化酶是蝌蚪提取物。
I、超氧化物歧化酶的制备：
A、按需要量取新鲜蝌蚪进行洁净处理然后进行灭菌处理；
B、将灭菌处理后的蝌蚪混入海藻糖、维生素E后于-20℃冷冻处理；所述蝌蚪、海藻糖、维生素E的重量比是：1∶0.025∶0.0001；
C、将冷冻处理的蝌蚪破碎，加入磷酸钾缓冲液中进行匀浆处理，生成蝌蚪匀浆物，所述蝌蚪与磷酸钾缓冲液的重量比是1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是0.1mol/L、pH值7.6；
D、将所述的蝌蚪匀浆物用氢氧化钠溶液调节pH值到7.0，进行超声破碎处理，生成蝌蚪超声破碎物；在0℃-4℃静置6-24小时；
E、向所述蝌蚪超声破碎物中加入鲜鸡蛋、无水乙醇，用氢氧化钠溶液调节pH值到7.6；在20℃-30℃条件下搅拌20-40分钟，静置30-60分钟，得到蝌蚪酶解液；所述蝌蚪超声破碎物、鲜鸡蛋、无水乙醇的体积比是9-12∶1.5-2.5∶4.5-7.0；无水乙醇温度是-10℃--20℃；
F、对所述的蝌蚪酶解液进行多级沉淀分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；第一级处理包括：在所述的蝌蚪酶解液中加入该液体重量30％的硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解一级上清液；第二级处理包括：在蝌蚪酶解一级上清液中加入该液体重量40％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解二级上清液；第三级处理包括：在蝌蚪酶解二级上清液中加入该液体重量50％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解三级上清液；第四级处理包括：在蝌蚪酶解三级上清液中加入该液体重量60％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解四级上清液；第五级处理包括：在蝌蚪酶解四级上清液中加入该液体重量70％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；
G、将所述的蝌蚪粗酶上清液在95℃-100℃的水浴锅内快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置降温到56℃-58℃，再移入水浴锅快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置保温5-15分钟，快速冷却到15℃，然后进行离心分离处理，获得蝌蚪去杂蛋白上清液；
H、将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；
I、将所述的蝌蚪一级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪二级SOD浓缩液；所述蝌蚪一级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶4.5-5.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是2.5mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
J、将所述的蝌蚪二级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪三级SOD浓缩液；所述蝌蚪二级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
K、将所述的蝌蚪三级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪四级SOD浓缩液；所述蝌蚪三级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
L、将所述的蝌蚪四级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪五级SOD浓缩液；所述蝌蚪四级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶0.8-1.2，所述磷酸钾缓冲液的浓度是75mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
M、将所述的蝌蚪五级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪六级SOD浓缩液；所述蝌蚪五级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
N、将所述的蝌蚪六级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪七级SOD浓缩液；所述六级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
O、向所述的蝌蚪七级SOD浓缩液中，加入2.5-3.5倍体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，初次离心处理得上清液；然后将该上清液中加入0.8-1.2倍体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，第二次离心处理得上清液；然后将第二次离心处理得到的上清液进行超滤浓缩处理，进行第三次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪除盐SOD浓缩液；
P、将所述的蝌蚪除盐SOD浓缩液进行真空浓缩；
Q、将真空浓缩处理的蝌蚪除盐SOD浓缩液在-20℃进行冻结；冷冻干燥，得到蝌蚪SOD初级冻干粉；
R、向所述的蝌蚪SOD初级冻干粉中加入预冷到0-4℃的重蒸水，在-4℃的操作环境中离心分离处理，收集上清液；将该上清液真空浓缩后放入-20℃进行冻结，再进行真空冷冻干燥、粉碎处理，得到SOD复合酶蝌蚪冻干粉；
II、SOD复合酶蝌蚪冻干粉的修饰
a.采用高碘酸钠活化，得到活化的右旋糖苷；
b.将所述的活化的右旋糖苷溶解于无水碳酸钠缓冲液，加入所述的SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸、丙酮，在4℃的条件下静置30分钟，得到沉淀物；
将所述的沉淀物进行冷冻真空干燥处理，得到修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉；
所述的右旋糖苷、无水碳酸钠缓冲液、SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸的重量比为：0.4-0.8∶4800-5200∶18-22∶4-7∶23-26∶48-52；
III.鹅肝提取物制备
a.取鹅的肝脏进行洁净处理并磨成肝浆；
b.向所述的肝浆中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到鹅肝超声破碎物；所述的肝浆与磷酸缓冲液的体积比为0.8-1.2∶1.8-2.5；所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6；
c.将所述的鹅肝超声破碎物进行粗滤，得到鹅肝滤液；
d.向所述的鹅肝滤液中加入硅藻土，搅拌均匀后，离心分离处理，收集鹅肝初级上清液和鹅肝初级沉淀物；
e.将所述的鹅肝初级上清液过滤，得到鹅肝精滤液；鹅肝精滤液喷雾干燥，得到鹅肝粉末A；
f.将所述的鹅肝初级沉淀物中加入盐酸溶液，搅拌加热处理，得到鹅肝水解液；所述的鹅肝沉淀物与盐酸溶液的重量比为0.8-1.2∶3.5-4.5；所述的盐酸溶液的浓度为6mmol/L；
g.将所述的鹅肝水解液减压蒸馏浓缩处理到原来体积的1/4，得到鹅肝一级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝一级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝二级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝二级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝三级浓缩液；再将鹅肝三级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝三级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝四级浓缩液；
h.将所述的鹅肝四级蒸馏液进行脱色、过滤处理，得到鹅肝脱色过滤液；
i.将所述的鹅肝脱色过滤液减压蒸馏、喷雾干燥，得到鹅肝粉末B；
j.合并所述的鹅肝粉末A和鹅肝粉末B，混合后粉碎，得到鹅肝提取物备用；
IV.小麦胚芽提取物制备
a.将小麦胚芽进行洁净处理并磨浆，得到小麦胚芽浆；
b.向所述的小麦胚芽浆中加入碱液进行提取处理，得到小麦胚芽提取液；所述的小麦胚芽浆与碱液的体积比为0.8-1.2∶6.5-7.5；所述的碱液的pH值为8.0；
c.将所述的小麦胚芽提取液进行离心处理，分别收集小麦胚芽一次沉淀物和小麦胚芽一次上清液；
d.将所述的小麦胚芽一次上清液过滤、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末A；
e.将所述的小麦胚芽一次沉淀物烘干、粉碎，得到小麦胚芽粉碎物；
f.向所述的小麦胚芽粉碎物中加入乙醇水溶液，微波萃取处理，得到小麦胚芽萃取液；所述的小麦胚芽粉碎物与乙醇水溶液的重量比为5.5-6.5∶0.8-1.2；所述的乙醇水溶液的浓度为50％；
g.将所述的小麦胚芽萃取液进行离心处理，收集小麦胚芽二次上清液；
h.将所述的小麦胚芽二次上清液过滤，得到小麦胚芽滤液；；
i.将所述的小麦胚芽滤液进行浓缩、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末B；
j.将所述的小麦胚芽粉末A和小麦胚芽粉末B混合、过筛，得到小麦胚芽提取物，备用；
V.红花提取物的制备
a.将红花冰冻、粉碎、过筛，得到红花粉末；
b.向所述的红花粉末中加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，分别收集红花一次沉淀物和红花一次上清液；所述的红花粉末与蒸馏水的重量比为0.8-1.2∶12.5-13.5；
c.向所述的红花一次沉淀物加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，得到红花二次上清液；
d.合并所述的红花一次上清液和红花二次上清液，过滤后得到红花滤液；
e.将所述的红花滤液浓缩为原来体积的1/4，然后喷雾干燥，得到红花提取物备用；
VI.苦荞提取物制备
a.将苦乔麸皮粉碎，过筛，得到麸皮粉；
b.向所述的麸皮粉中加入乙醇溶液，进行浸泡，得到苦荞浸泡液；所述的麸皮粉与乙醇水溶液的重量比为0.8-1.2∶45-55；所述的乙醇水溶液的浓度为85％；
c.将所述的苦荞浸泡液进行微波萃取处理，得到苦荞萃取液；
d.将所述的苦荞萃取液离心处理，收集苦荞上清液；
e.将所述的苦荞上清液过滤，得到苦荞滤液；
f.将所述的苦荞滤液浓缩处理，得到苦荞浸膏；将所述的苦荞浸膏干燥、粉碎、过筛，得到苦荞提取物，备用；
VII.辅酶Q10制备
a.取猪的心脏洁净处理并绞成心浆液；
b.向所述的心浆液中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到猪心超声破碎液；所述的心浆液与磷酸钾盐缓冲液的重量比为1.5-2.5∶0.8-1.2，所述的磷酸钾盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6，温度为4℃；
c.向所述的猪心超声破碎液中加入氢氧化钠-乙醇溶液，进行皂化处理，得猪心皂化液；所述的猪心超声破碎液与氢氧化钠-乙醇溶液的体积比为0.8-1.2∶1.5-2.5；所述的氢氧化钠-乙醇溶液中，氢氧化钠与无水乙醇的重量比为0.8-1.2∶8-12；
d.向所述的猪心皂化液中加乙醚、水，过滤处理，得到猪心一级滤液和猪心一级沉淀物；向所述的猪心一级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心二级滤液和猪心二级沉淀物；向所述的猪心二级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心三级滤液和猪心三级沉淀物；所述的猪心皂化液、乙醚、水的体积比为8-12∶0.8-1.2∶0.8-1.2；所述的猪心一级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；所述的猪心二级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；所述的猪心三级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；
e.合并所述的猪心一级滤液、猪心二级滤液，和猪心三级滤液，得到猪心总滤液；向所述的猪心总滤液中加入蒸馏水，萃取处理，得到猪心水洗萃取液；
f.将所述的猪心水洗萃取液过滤，再浓缩处理，得到猪心浓缩液；所述的猪心水洗萃取液与猪心浓缩液的体积比为0.8-1.2∶8-12；
g.将所述的猪心浓缩液进行层析处理，得到猪心辅酶Q10洗脱液；
i.将所述的猪心辅酶Q10洗脱液进行浓缩、溶解、过滤、结晶，得到辅酶Q10，备用；
VIII.白藜芦醇制备
a.将葡萄皮粉碎、过筛，得到葡萄皮粉末；
b.向所述的葡萄皮粉末加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮一次萃取液；所述的葡萄皮粉末与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45；
c.将所述的葡萄皮一次萃取液离心处理，收集葡萄皮一次上清液和葡萄皮一次沉淀物；
d.向所述的葡萄皮一次沉淀物中加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮二次萃取液；所述的葡萄皮一次沉淀物与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45；
e.将所述的葡萄皮二次萃取液离心处理，得到葡萄皮二次上清液；
f.合并所述的葡萄皮一次上清液和葡萄皮二次上清液，过滤后得到葡萄皮滤液；
g.将所述的葡萄皮滤液，浓缩处理，得到葡萄皮浓缩固体；
h.将所述的葡萄皮浓缩固体溶解后，进行层析处理，得到白藜芦醇洗脱液；
i.将所述的白藜芦醇洗脱液浓缩、喷雾干燥，得到白藜芦醇，备用；
将所述的修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、辅酶Q10、苦荞提取物、白藜芦醇按照上述重量配比进行混合，混合后均匀分装胶囊，即得SOD复合胶囊成品。
本发明与已有技术相比具有如下优点：
1.本发明在制备超氧化物歧化酶的过程中，使用无毒的有机溶剂，从而避免了外源有毒物质的引入及对超氧化物歧化酶活性的影响。
2.本发明在制备超氧化物歧化酶的原料，选用抗氧化能力很强的健康蝌蚪作为原料，避免了血液制品的交叉感染，也克服了植物来源的超氧化物歧化酶活性低、和人的同源性少，生理有效性差的弊端。
4、本发明提取出的超氧化物歧化酶经过修饰、微粒吸附、分子包埋延长了超氧化物歧化酶复合酶的半衰期。
5、本发明胶囊制备的整个工艺过程全部采用低温、中性多孔微粒载体吸附、低温喷雾涂膜包衣、真空冷冻干燥法制备。在没有用对超氧化物歧化酶活性有损失的粘合剂、增溶剂、有机溶剂的情况下，保持酶活性。
6、为了保证不怕酸碱的稳定配伍药物在人体内快而好的在胃肠吸收，同时又不破坏怕酸碱的超氧化物歧化酶不稳定酶的活性让其在直肠吸收，本发明胶囊制备的整个工艺过程采用对超氧化物歧化酶进行分子修饰、低温气流粉碎，流化床中性多孔微粒载体吸附、低温喷雾涂膜包衣、真空冷冻干燥法制备成超氧化物歧化酶酶颗粒，对其他配伍料单独制粒，然后与其它配伍料按处方量快速混合，采用胃溶胶囊壳填装；工艺条件稳定，适于工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
一种SOD复合胶囊，其特征在于：所述复合胶囊中含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 10-50，
辅酶Q10 10-75，
鹅肝提取物 75-150，
小麦胚芽提取物 75-150，
红花提取物 75-150，
苦荞提取物 200-500；
每百克所述的复合胶囊中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，该超氧化物歧化酶是蝌蚪提取物。
本实施例所用的单位可以是克、千克。
所述的白藜芦醇、辅酶Q10可以在市场上购买得到，也可以参照实施例4的方法制备；
本实施例中，所述的SOD复合胶囊的各组分可以在给出的配比范围内灵活组合，在此不一一枚举。该各个组分的制备也可以参照实施例5公开的方法实施；
实施例2：
本实施例是在实施例1基础上的优选方案，所用原料(组分)的质量与实施例1相同，所述的复合胶囊中个组分的重量份数配比为：
白藜芦醇 20，
辅酶Q10 50，
鹅肝提取物 100，
小麦胚芽提取物 100，
红花提取物 100，
苦荞提取物 310；
每百克所述的复合胶囊中含有2000000活力单位的超氧化物歧化酶。
本实施例的检测结果如下：
一、修饰SOD复合酶冻干粉活性测定：
1.取修饰SOD复合酶冻干粉1g溶解于10ml的62.5mmol/L pH7.8磷酸缓冲液(PBS)中，再从中取1ml用62.5mmol/L pH7.8磷酸缓冲液(PBS)定容到100ml，摇匀后在冰冻离心机6000转/分钟，4℃高速离心15分钟，制备为含SOD复合酶1mg/ml的上清液进行下列测定。
(1)超氧化物歧化酶SOD活性测定
方法：采用黄嘌呤氧化酶法，操作步骤按南京建成生物工程研究所试剂盒推荐程序测定，于波长550nm处测定测定管、对照管吸光度，借助反应体系得稀释倍数，通过公式计算可求出被测液的SOD活力。被测液SOD活性定义为：每毫升反应中SOD抑制率达50％时所对应的SOD量为一个活力单位
测定：
混匀10分钟后倒入1cm光径比色杯中，蒸馏水调零，波长550nm.
计算：
SOD比活力U/mg蛋白＝(对照管吸光度-测定管的吸光度)÷对照管吸光度÷50％×稀释倍数÷蛋白含量
结果：
SOD比活力U/mg为4000-8000U/mg
Folin-酚法或双缩脲法测样品蛋白质含量。
(2).过氧化氢酶CAT活性测定
试剂：A：25℃的ph 7.0 50mM磷酸钾缓冲液B：0.036％(w/w)H2O2溶液C：CAT溶液(用预冷的试剂A配置成浓度为50-100u/ml溶液)
过氧化氢酶CAT活性定义为：每毫克蛋白在37℃每分钟转化1umol的底物所需的酶量为一个酶活力单位
方法：移取取2.9ml B溶液放入到比色皿，恒温测定波长240nm处的吸光值，加入0.1ml的溶液C，立即混合记下A240nm吸光单位从0.45降到0.40所需的时间，以3.0ml的溶液A为空白
计算：样品活性比U/mg＝过氧化氢酶CAT活性U/ml＝(测定管OD-空白管OD)÷呈色物摩尔消光系数×(反应液总体积÷取样量)÷(光径×反应时间)÷匀浆蛋白含量mg/ml
Folin-酚法测样品蛋白质含量
结果：
过氧化氢酶CAT比活力为1000-3000U/mg蛋白
(3).谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px的活性
方法：谷胱甘肽过氧化物酶：用二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)法测定。
测定：
计算：GSH-Px比活力单位：规定每毫克蛋白质，每分钟，扣除非酶反应后使GSH浓度降低1μmol/L为一个酶活力单位。
*Folin-酚法测样品蛋白质含量
结果：GSH-Px的活性＝800-1500U/mg蛋白
二、修饰SOD复合酶冻干粉的稳定性试验
(一)、修饰SOD复合酶冻干粉的耐热、耐酸、耐碱试验
1、采用南京建成SOD试剂盒分别检测天然SOD和修饰SOD的活性
2、分别配制1mg的天然SOD和1mg的修饰SOD溶解于10ml蒸馏水、10ml25℃PH5.2磷酸盐缓冲液、10ml 25℃PH10.5磷酸盐缓冲液中制备溶液。
3、如下处理后采用南京建成SOD试剂盒分别检测其活性。
结果如下：处理前天然SOD活性5210SOD U/mg，修饰SOD3012U/mg
实验结果表明：该修饰酶不仅保留了天然酶的活性，而且在耐热性，耐酸性和胃蛋白酶水解能力等方面都优于天然酶。修饰酶较天然酶稳定，具有较高的实用意义。
(二)口腹修饰SOD复合酶冻干粉的半衰期试验
1、方法：取150-180g健康成年SD大鼠，全雌性，随意分为2组，每组20只。分别按1ml/100g.bw空腹灌胃(其中SOD＝1000U/ml)，分别于1小时、2小时、4小时、7小时分批处死大鼠，收集血液，进行Cu-ZnSOD测试.
2、测试：采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定蝌蚪SOD的活力，试剂采用由南京建成生物工程研究所生产的SOD试剂盒，均按试剂盒说明书进行操作。
3、实验结果：
4、结论：从测试结果中可以看出，两组血液中的SOD活力在2小时后逐渐开始升高，其中A组在7小时后开始下降，而B组在7小时后比较稳定。
三、SOD复合胶囊SOD含量测定
取SOD复合胶囊3批次各一粒，研细，用50mlpH7.8磷酸盐缓冲液分数次研磨，并移人100ml量瓶中，用缓冲液洗涤研钵数次，洗液合并于50ml量瓶中，用缓冲液稀释至刻度并摇匀，用0.45μm滤膜过滤，得透明清液，取透明液按照国标(GB/T 5009.171——2003)测定，定义25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50％时所需的SOD量为一个活力单位。
表1：
结果：三批抗氧化胶囊的含量测定结果表示：标示量在90-110％之间，符合规定。平均SOD含量为9000U/粒。
四、SOD复合胶囊体外释放溶出度为测定
1方法：
波长选择：选择处方比例称取适量辅料，置于100ml的容量瓶中，用pH 6.8磷酸盐缓冲液定量至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液，于紫外分光光度计2.00-400nn波长范围扫描，辅料在325nn处没有吸收，对检测无影响，故选用测定波长为325nm。
释放度测定：SOD在2～15μ/ml范围内线性关系良好，取本品1粒，照中国药典二00五年版中国药典二部附录释放度测定法[附录XD第二法]测定。采用溶出度测定法第一法装置，以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经120分钟时，取溶液5ml滤过，作为供试品溶液(1)，然后加人37℃的pH6.8磷酸钠缓冲液900ml，继续溶出，分别于1，2，6小时取溶液5ml滤过，作为供试品溶液(2)，同时补充相同体积缓冲液。取供试品溶液(1)，以0.Im ol/L盐酸溶液为空白，在325nm波长处测定吸收度，吸收值不得大于0.25。另取SOD原料药(1000U/mg)对照品0.5mg，置100ml量瓶中，加pH6.8磷酸钠缓冲液适量使溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品溶液(2)和对照品溶液，以磷酸钠缓冲液(0.05mol/L)为空白，在325nm波长处比色测定吸收度，计算出每粒的释放量。
SOD复合胶囊体外释放溶出度为测定
2结果和讨论
从三批SOD复合胶囊的体外释放溶出度测定结果可以得出结果：SOD抗氧化胶囊在0.1mOl/L盐酸溶液中2h稳定，在磷酸盐缓冲液(pH6.8)6h的溶出度情况良好。释放度分别为85.7％，82.5％和81.8％，均符规定
五、SOD复合胶囊的生物利用度
参比SOD复合胶囊：按处方量采用未修饰的SOD粉末配制胶囊的填充料，以肠溶胶囊空壳制作肠溶胶囊。
体内分析方法评价：取10位健康人空白血样，分别精确加入SOD复合胶囊的标准对照品，配制成25，50，100，200，300，400，500，600，700，800ng·ml-1，SOD复合胶囊的标准血浆样品。血浆样品预处理和HPLC方法测定相同。按照标准曲线制作方法，以血浆中测得的蝌蚪SOD抗氧化胶囊的峰高A为纵轴，以相应的浓度C为横轴，得到回归方程为A＝18.16C+87.92，相关系数r＝0.9991。SOD血浆浓度在2.5～415.3ng/mL范围内线性关系良好，最低检测浓度为2.5ng/mL.采用低浓度25ng/mL、中浓度100ng/mL、高浓度400ng/mL三个浓度，评价本法测定血浆中SOD含量的方法回收率及萃取回收率分别(88.1±2.7)％、(87.3±2.4)％、(86.1±2.1)％。方法回收率分别为：(96.2±2.5)％、(97.1±2.2)％、(98.1±2.3)％。日内、日间RSD均小于7％。符合生物等效性研究方法学。
实验设计：10位健康男性受试平均年龄(22.34±0.91)岁，平均体重(65.98±0.87)kg.身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患.连续3个月未服用同类产品。禁烟、酒、咖啡。10位健康男性受试者按随机交叉试验分两组。受试者禁食12h后，于早上8:00分别单剂量、空腹、用30℃-40℃200mL水服用蝌蚪SOD抗氧化胶囊、或参比胶囊。服药前1h及服药后2h禁止饮水，服药后4h及10h统一进食标准餐。受试者服药前及服药后0.5h，0.75h，1.0h，1.5h，2.0h，3.0h，5.0h，8.0h，12.0h，17.0h，23.0h，30h，38h，取静脉血3mL。间隔2周后，交叉单剂量服用SOD复合胶囊或参比胶囊，并于相同时间点采集血样。血样置肝素管中，立即离心，分离出血浆，于-20℃冰箱中贮藏。采用HPLC方法测定人血浆中的药物浓度，并比较其生物利用度。
数据处理：SOD复合胶囊血药浓度、时间曲线下面积值由梯形计算AUC，其中AUC0-38由SOD复合胶囊血药浓度实际测算值计算，AUC38-∞根据消除相尾部，lnc-t直线斜率K值和38h点SOD复合胶囊血药浓度计算。以SOD参比胶囊AUC0-∞。
为参照计算SOD复合胶囊相对生物利用度。选择NDST 5.0统计分析程序，对主要药代动力学参数cmax和AUC0～∞进行三因素方差分析和双单侧t检验(显著性水平α＝0.05)。
试验结果：对10位受试者交叉试验因素方差分析，SOD复合胶囊的体内动态过程呈一级吸收的二房室开放模型。并经双-单侧t检验SOD复合胶囊具有高的相对生物利用度。口服后SOD复合胶囊平均生物利用度为77％，对两种胶囊进行临床对照研究表明在Cmax、Tmax和AUC存在显著的差异。SOD复合胶囊吸收快、完全。平均最大血药浓度增加30％，AUC增加21％。SOD复合胶囊比参比胶囊口服后平均生物利用度提高了10％以上的相对生物利用度为121.03％±12.8％(x±s，n＝10)。
cmax分别为(414.51±284.35)ng/ml、(318.85±218.73)ng/ml；
tmax分别为(2.08±0.19)h、(3.12±0.22)h；
t1/2β分别为(9.08±0.37)h、(10.73±0.46)h；
AUC0～∞分别为(3403.94±364.22)ng*h/ml、(2813.17±301.01)ng*h/ml。，
六、SOD复合胶囊抗氧化功能动物实验
1材料和方法
1.1样品：
SOD复合胶囊每粒胶囊内容物重300mg。人体推荐剂量：2.4g/d/60kg.BW.。
1.2实验动物：
选13月龄清洁级健康雌性Wistar大鼠40只，根据大鼠体重和血浆中脂质过氧化物(MDA)水平，随机分为四组，每组10只，分别是对照组体重317±20.3g，低剂量实验组体重316±20.4g，中剂量实验组体重316±21.6g和高剂量实验组体重317±23.6g。
1.3剂量选择与受试物给予方式：
人推荐量为2.4g/d，即0.04g/kg.BW.(以60kg体重计)，按相当于人体推荐量的5倍、10倍和30倍确定低、中、高三组剂量，分别为0.2g/kg.BW.、0.4g/kg.BW.、1.2g/kg.BW.。用蒸馏水溶解胶囊内容物，以灌胃方式给予受试物。对照组灌服同等量的蒸馏水。
1.4主要仪器与试剂：
仪器：紫外分光光度法、冷冻高速离心机、恒温及煮沸水浴锅、组织匀浆器。试剂：硫代巴比妥酸、四乙氧基丙烷、谷胱甘肽(还原型)、正丁醇、盐酸羟胺、黄嘌呤、甲萘胺、对氨基苯磺酸、迭氮钠磷酸盐等。
1.5实验方法
1.5.1连续灌胃30天，实验结束处死动物。制备血液和肝组织匀浆样本：乙醚麻醉，腹腔动脉取血，加入5％EDTA-Na抗凝，待测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)脂质过氧化物(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)。取肝脏用冰冷生理盐水洗两次，在冰浴上用滤纸吸干后用病理刀切下0.5克左右(三分)，称重后分别放入冷冻管中立即投入液氮中速冻后，存低温冰箱保存待测GSH-Px和MDA。
1.5.2脂质过氧化物(MDA)的测定：
用TBA法，由南京建成生物工程研究所提供试剂盒，将抗凝血样本3000r/min离心10min。取血浆100μl加入各种反应试剂，混匀后避光沸水浴60min，流水冷却至室温，3000r/min离心10min，取上清液，532nm处比色测定各管吸光度。通过与标准管相比较，计算出血样本中MDA含量组织中MDA含量测定：根据组织重量加入10倍的冷生理盐水，超速匀浆器20000r/min匀浆10秒，间歇30秒，重复3次。匀浆于4℃3000r/min离心15min，取上清0.1ml，其它步骤同血浆中MDA测定。
1.5.3谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)的测定：
DTNB法，处死动物当日测血中GSH-Px活力。取10μl上述抗凝血加入到990μl双蒸水中，充分震荡，使之全部溶血，取0.4ml，加入所需试剂，37℃水浴中进行酶促反应3min，终止反应。3000r/min离心10min，加入所需试剂显色，于423nm波长读0D值，按照公式计算出酶活力单位，组织中GSH-Px活力测定：当日从低温冰箱取出肝组织，根据肝组织重量加入20倍的冷生理盐水，超速匀浆器20000r/min匀浆10秒，间歇30秒。匀浆以10000r/min离心10min，取上清液测定(步骤同血测定)。
1.5.4超氧化物歧化酶(SOD)的测定：
羟胺法(由南京建成生物工程研究所提供试剂盒)。动物处死后当日测SOD活性，将前述抗凝血3000r/min，离心10min。取血浆30μl，加所需试剂，混匀，于37℃水浴30min，加试剂终止反应，显色15min后，于550nm处测定OD值，根据OD值计算出SOD活力单位数。
1.6实验资料统计：
实验用SAS软件进行方差分析，如方差齐性或正态性不能满足分析要求，在数据进行转换后进行。
1.7结果判定
过氧化脂质含量中任意指标和抗氧化酶活性任一指针均为阳性，可判定该受试抗氧化物实验结果阳性。
2.结果
SOD复合胶囊对大鼠体重的影响
表1 SOD复合胶囊对大鼠体重的影响(
±SD)
从表1结果可见，各剂量组大鼠体重与老龄对照组相比无差异(P＞0.05)。
sOD复合胶囊对大鼠血中MDA含量影响
表2 SOD复合胶囊对大鼠血中MDA含量影(±SD)
与老龄对照组相比＊P＜0.05
由表2可见，实验前各剂量组大鼠血中脂质过氧化物(MDA)水平与老龄对照组相比无统计学差异(P＞0.05)。经口给予所述的胶囊30天，与与老龄对照组相比，高、中计量组能明显降低大鼠血中脂质过氧化物(MDA)水平(P＜0.05)。
SOD复合胶囊对大鼠血中SOD、GSH-Px活力影响
表3 SOD复合胶囊对大鼠血中SOD、GSH-Px活力影响(±SD)
与老龄对照组相比＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01
由表3可见，与老龄对照组相比，经口给予SOD复合胶囊30天，高剂量能明显升高大鼠血中谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)活力(P＜0.05)，高、中剂量均能明显升高大鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活力(P＜0.01，P＜0.05)。
2.4SOD复合胶囊对大鼠肝组织中MDA含量及GSH-Px活力的影响
表4 SOD复合胶囊对大鼠肝组织中MDA含量及GSH-Px活力的影响(±SD)
与老龄对照组相比＊P＜0.05
由表4可见，经口给予SOD复合胶囊30天，与老龄对照相比高剂量组能明显升高大鼠肝组织中谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)活力(P＜0.05)，并明显降低大鼠肝组织中脂质过氧化物(MDA)水平(P＜0.05)。
小结：
经口给予SOD复合胶囊30天，与老龄对照组相比，高、中剂量能明显升高大鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活力(P＜0.01，P＜0.05)，并能明显降低大鼠血中脂质过氧化物(MDA)水平(P＜0.05)；高剂量能明显升高大鼠血中和肝组织中谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)活力(P＜0.05)，并明显降低大鼠肝组织中脂质过氧化物(MDA)水平(P＜0.05)。按《保健食品检验与评价技术规范-2003》结果判定，蝌蚪SOD胶囊抗氧化功能动物实验结果阳性。
七、SOD复合胶囊抗氧化功能人体试食试验
1材料与方法
1.1样品：
SOD复合胶囊：每粒胶囊内容物300mg。人体推荐剂量：2.4g/d/60kg.BW.。
1.2受试人群：
按自愿原则选择符合下述标准者。
1.2.1受试者的选择标准：
年龄在45-65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，自愿受试并保证配合的中老年人。
1.2.2受试者排除标准：
孕期或哺乳期妇女；合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重疾病患者；近30天服用过与受试功能有关的物品者；未按规定服用受试样品者；数据不全无法判定功效或安全性者。
1.3试验设计及分组：
采用自身和组间两种对照设计。受试者按照MDA、SOD、GSH-Px水平随机分为试食组(50人)和对照组(50人)，对可能影响结果的主要因素如年龄、性别、生活饮食习惯等进行均衡性检验，以保证组间的可比性。
1.4服用剂量及时间：
试食组每人每日服用2.4g(300mg/粒，每次4粒，每日2次)，连续服用3个月。阴性对照组不作任何处理。试验期间受试者不改变原来的生活和饮食习惯，正常饮食。
1.5观察指标
1.5.1一般状况：包括受试者的精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。
1.5.2安全性指标：血常规、尿常规、大便常规、X线胸部透视、腹部B超、心电图、肝功能、肾功能。
1.5.3功效性指标测定：在实验前和终止实验时，采集对照组和实验组受试者空腹12小时血液，测定MDA、SOD及GSH-Px。
1.5.3.1过氧化脂质含量：用TBA法，观察试验前后MDA的变化情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐程序进行血浆含量测定。
1.5.3.2超氧化物歧化酶：用羟胺法，观察试验前后SOD变化的情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐程序进行血浆SOD活力测定。
1.5.3.3谷胱甘肽过氧化物酶：用DTNB法，观察试验前后GSH-Px的变化情况。使用南京建成生物工程研究所试剂盒及推荐程序测定全血GSH-Px活力。
1.6实验资料统计分析：
数据使用SAS软件进行统计处理。各指标试验前后差异的自身比较采用配
对t检验。试验前、后试食组和对照组间差异的比较用两样本均数t检验，方差不齐时采用t’检验。
1.7结果判定：
丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)三项实验中任一项实验结果阳性可判定受试样品具有抗氧化功能的作用。
2结果
2.1一般状况：试验期间受试者的精神、饮食、睡眠、大小便均未见异常。
2.2安全性指标观察结果：
试验前后受试者心率、血压、心电图、X线胸部透视、腹部B超、尿常规、大便常规、血常规、血液生化指针及肝肾功能指针均在正常范围。血常规、尿常规、便常规及生化指标检测结果见表1。试食组和对照组试验前后各项指标均在正常值范围内，并且试食前后无显著性差异。表明本样品对血常规及生化指标无明显影响。
表1实验前后血液学检测指标(±SD)
2.3功效性指标测定结果：
试验前后过氧化脂质(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性见表2。
表2实验前后MDA含量、SOD和GSH-Px活性(±SD)
表2实验前后MDA含量、SOD和GSH-Px活性(±SD)
自身前后比较：*p＜0.05；组间比较#p＜0.05
从表2可见，实验前试食组与对照组比较MDA含量、SOD和GSH-Px活性均无显著差异(p＜0.05)，实验后试食组MDA含量与试验前比较显著降低(p＜0.05)，与对照组比较，试食组实验后MDA含量显著降低(p＜0.05)。试食组实验后与实验前比较SOD活力显著增高(p＜0.05)，与对照组比较亦有显著增高(p＜0.05)，试食组实验前后GSH-Px活力无显著差别(p＜0.05)，与对照组比较亦无显著性差别(p＜0.05)。
3小结
SOD复合胶囊抗氧化功能人体试食试验结果表明，试验期间受试者的精神、饮食、睡眠、大小便未见异常，血常规、尿常规、血液学和生化指针、肝肾功能及胸透、心电图、腹部B超均未见异常，未发现本样品对人体的不良影响。试食组实验后MDA含量与实验前比较显著降低(p＜0.05)。与对照组比较，试食组实验后MDA含量降低(p＜0.05)。试食组实验后与实验前及对照组比较SOD活力均显著增高(p＜0.05，p＜0.05)，试食组实验前后GSH-Px活力无显著差别(p＜0.05)，与对照组比较亦无显著性差别(p＜0.05)，按《保健食品检验与评价技术规范-2003》有关标准判定，蝌蚪SOD胶囊有抗氧化功能作用。
实施例3：
本实施例是在实施例1基础上的优选方案，所用原料(组分)的质量与实施例1相同，所述的复合胶囊中个组分的重量份数配比为：
白藜芦醇 15，
辅酶Q10 15，
鹅肝提取物 18，
小麦胚芽提取物 80，
红花提取物 80，
苦荞提取物 95；
每百克所述的复合胶囊中含有2000000活力单位的超氧化物歧化酶。
实施例4：
本实施例是在实施例1基础上的优选方案，所用原料(组分)的质量与实施例1相同，所述的复合胶囊中个组分的重量份数配比为：
白藜芦醇 70，
辅酶Q10 75，
鹅肝提取物 150，
小麦胚芽提取物 150，
红花提取物 150，
苦荞提取物 150；
每百克所述的复合胶囊中含有1000000活力单位的超氧化物歧化酶。
实施例5：
一种SOD复合胶囊的制备方法，其特征在于：所述复合胶囊中含有白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量比为，10-50∶10-75∶75-150∶75-150∶75-150∶200-500，每百克所述组合物中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，制备步骤如下：
I、超氧化物歧化酶的制备：
A、按需要量取新鲜蝌蚪进行洁净处理然后进行灭菌处理；具体的操作为：先进行清洗：取活的蝌蚪洗净，浸泡24小时后过滤水分；再进行消毒：称消毒处理的蝌蚪新鲜湿重30-160重量份，优选为90重量份，在预冷的4℃用0.1mol/L pH7.6的磷酸钾盐缓超声波洗涤灭菌10分钟；过滤水分；
B、将灭菌处理后的蝌蚪混入海藻糖、维生素E后于-20℃冷冻处理；所述蝌蚪、海藻糖、维生素E的重量比是：1∶0.025∶0.0001；
C、将冷冻处理的蝌蚪破碎，加入磷酸钾缓冲液中进行匀浆处理，生成蝌蚪匀浆物，所述蝌蚪与磷酸钾缓冲液的重量比是1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是0.1mol/L、pH值7.6所述的匀浆处理温度4℃；处理时间1分钟；
D、将所述的蝌蚪匀浆物用氢氧化钠溶液调节pH值到7.0，进行超声破碎处理，生成蝌蚪超声破碎物，将其在0℃-4℃静置6-24小时，优选为15小时；所述的超声破碎的时间为45分钟，温度为4℃；
E、向所述蝌蚪超声破碎物中加入鲜鸡蛋、无水乙醇，用氢氧化钠溶液调节pH值到7.6；在20℃-30℃条件下搅拌20-40分钟，静置30-60分钟，得到蝌蚪酶解液，最佳温度为25℃，最佳搅拌时间为30分钟，最佳静置时间为45分钟；再用4mol/L的氢氧化钠溶液调节蝌蚪酶解液的pH值为7.6；所述蝌蚪超声破碎物、鲜鸡蛋、无水乙醇的体积比是9-12∶1.5-2.5∶4.5-7.0，优选为10∶2∶5；无水乙醇温度是-10℃--20℃；所述的搅拌转速为150-200rpm；
F、对所述的蝌蚪酶解液进行多级沉淀分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；第一级处理包括：在所述的蝌蚪酶解液中加入该液体重量30％的硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解一级上清液；第二级处理包括：在蝌蚪酶解一级上清液中加入该液体重量40％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解二级上清液；第三级处理包括：在蝌蚪酶解二级上清液中加入该液体重量50％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解三级上清液；第四级处理包括：在蝌蚪酶解三级上清液中加入该液体重量60％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解四级上清液；第五级处理包括：在蝌蚪酶解四级上清液中加入该液体重量70％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；所述的离心处理中，离心机的转速为3000rpm，时间为20分钟，温度为25℃；
G、将所述的蝌蚪粗酶上清液在95℃-100℃的水浴锅内快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置降温到56℃-58℃，再移入水浴锅快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置保温5-15分钟，优选为10分钟，快速冷却到15℃，然后进行离心分离处理，获得蝌蚪去杂蛋白上清液；所述的离心处理中，离心机的转速为3000rpm，时间为20分钟，温度为15℃；
H、将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；具体的操作方法为：将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液冷却到4℃，然后在-5℃以下的操作温度下，以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，浓缩液为原液体积的10％～20％；浓缩液进行离心分离处理，收集上清液，迅速冷却到4℃，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；所述的离心处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
I、将蝌蚪一级SOD浓缩液；加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪二级SOD浓缩液；所述蝌蚪一级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶4.5-5.5，优选为1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是2.5mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
J、将蝌蚪二级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪三级SOD浓缩液；所述蝌蚪二级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，优选为1∶3；所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
K、将蝌蚪三级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪四级SOD浓缩液；所述蝌蚪三级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，优选为1∶2；所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
L、将蝌蚪四级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪五级SOD浓缩液；所述蝌蚪四级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶0.8-1.2，优选为1∶1，所述磷酸钾缓冲液的浓度是75mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
M、将蝌蚪五级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪六级SOD浓缩液；所述蝌蚪五级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，优选为1∶2，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
N、将蝌蚪六级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪七级SOD浓缩液；所述蝌蚪六级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，优选为1∶3，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
O、向所述的蝌蚪七级SOD浓缩液中，加入2.5-3.5倍体积的，优选为3倍体积比的、在0-4℃下预冷过的去离子水，初次离心处理得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃；然后将该上清液中加入0.8-1.2倍体积，优选为等体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，第二次离心处理得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃；然后将第二次离心处理得到的上清液进行超滤浓缩处理，进行第三次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪除盐SOD浓缩液；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理和第二次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的第三次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
P、分子蒸馏：将所述的蝌蚪除盐SOD浓缩液用真空旋转薄膜蒸发器进行真空浓缩；
Q、将真空浓缩处理的蝌蚪除盐SOD浓缩液在-20℃进行冻结；冷冻干燥得到蝌蚪SOD初级冻干粉；
R、将所述的蝌蚪SOD初级冻干粉中加入预冷到0-4℃重蒸水，搅拌均匀后，-4℃的操作环境中离心处理，除去不溶物，收集上清液，将该上清液减压浓缩后放入-20℃进行冻结；再进行真空冷冻干燥，得到蝌蚪SOD复合酶冻干块；所述的蝌蚪SOD初级冻干粉与重蒸水的重量比为1∶3；所述的离心分离处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为20-30分钟，优选为25分钟；
S、将所述的蝌蚪SOD复合酶冻干块进行低温气流粉碎后，得到SOD复合酶蝌蚪冻干粉，即为超氧化物歧化酶-20℃储藏备用；
II、SOD复合酶冻干粉的修饰
a.采用高碘酸钠活化，得到活化的右旋糖苷：
具体的操作方法为：向右旋糖苷溶液中加入高碘酸钠溶液，得到混合溶液A，4℃避光保存18-24小时，优选为22小时；然后向所述的混合溶液A中加入亚硫酸氢钠溶液，还原过量的高碘酸钠，得到混合溶液B；所述的右旋糖苷溶液的由0.5重量份的右旋糖苷溶解于5重量份的蒸馏水配制而成，所述的蒸馏水的温度为4℃；所述的高碘酸钠溶液的重量百分比浓度为12％；所述的右旋糖苷溶液与高碘酸钠溶液的体积比为10∶1；，所述的亚硫酸氢钠溶液的重量百分比浓度为5％，温度为4℃；
再将混合溶液B进行透析处理18-22小时，得到透析液B；
再向透析液B中加入丙酮，进行离心处理，得到沉淀物B；所述的透析液B与所述的丙酮的体积比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再向所述的沉淀物B中加入丙酮，进行离心处理，得到二次沉淀物B；所述的沉淀物B与所述的丙酮的重量比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再向所述的二次沉淀物B中加入丙酮，进行离心处理，得到三次沉淀物B；所述二次的沉淀物B与所述的丙酮的重量比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再将所述的三次沉淀物B进行冷冻干燥处理，即得到活化的右旋糖苷；
b.将所述的活化的右旋糖苷溶解于无水碳酸钠缓冲液，得到混合溶液C；向所述的混合溶液C中加入所述的SOD复合酶蝌蚪冻干粉，在4℃的条件下避光保存17小时，得到混合溶液D，再用硼酸调节pH值为7.6；再向所述的混合溶液D中加入牛血清白蛋白、戊二醛水溶液，得到混合溶液E，静置保存3小时；所述的戊二醛水溶液的浓度为25％；
向所述的混合溶液E中加入甘氨酸，得到混合溶液F，在4℃的条件下放置4小时，用硼氢化钠调节其pH值为7.6；
向调节pH值后的混合溶液F中加入丙酮，在4℃的条件下静置30分钟，得到沉淀物F；所述的调节pH值后的混合溶液F与丙酮的体积比为1∶2；所述的丙酮的温度为-20℃。
将所述的沉淀物F进行冷冻干燥处理，得到修饰过的SOD复合酶冻干粉；
所述的右旋糖苷、无水碳酸钠缓冲液、SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸的重量比为：0.4-0.8∶4800-5200∶18-22∶4-7∶23-26∶48-52，优选为0.5∶5000∶20∶5∶25∶51；
III.鹅肝提取物制备
a.取鹅的肝脏进行洁净处理并绞成肝浆；
将鹅宰杀后取出肝脏，并去除脂肪、结缔组织和血，用生理盐水清洗肝脏；清洗后立即将肝脏浸入磷酸钾盐缓冲液中保存；所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6，温度为4℃；所述的保存温度为0-4℃；取出保存的肝脏磨成肝浆；
b.向所述的肝浆中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到鹅肝超声破碎物；所述的肝浆与磷酸缓冲液的体积比为0.8-1.2∶1.8-2.5，优选为1∶2；所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6，温度为4℃；所述的处理温度为4℃；
c.将所述的鹅肝超声破碎物；粗滤，得到鹅肝滤液；粗滤的方法可以是：将所述的鹅肝超声破碎物用三层医用纱布过滤，得到鹅肝滤液；
d.向所述的鹅肝滤液中加入硅藻土，搅拌均匀后，离心分离处理，收集鹅肝初级上清液和鹅肝初级沉淀物；所述的滤液与硅藻土的重量比为100∶5；
e.将所述的鹅肝初级上清液过滤，得到鹅肝精滤液；鹅肝精滤液瞬间喷雾干燥，得到鹅肝粉末A；所述的过滤采用0.45μm的滤膜；
f.将所述的鹅肝初级沉淀物中加入盐酸溶液，搅拌加热处理，得到水解液；所述的沉淀物与盐酸溶液的重量比为0.8-1.2∶3.5-4.5，优选为1∶4；所述的盐酸溶液的浓度为6mmol/L；搅拌加热的温度为110℃-120℃，优选为115℃，处理时间为24小时；搅拌加热处理在水解罐中进行；
g.将所述的鹅肝水解液减压蒸馏浓缩处理到原来体积的1/4，得到鹅肝一级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝一级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝二级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝二级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝三级浓缩液；再将鹅肝三级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝三级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝四级浓缩液；
h.将所述的鹅肝四级蒸馏液进行脱色、过滤处理，得到鹅肝脱色过滤液；具体的操作为：将所述的鹅肝四级蒸馏液中加入蒸馏水，用氨水调整pH值为3.5-4.0，加入活性碳、硅土，进行脱色反应得到鹅肝脱色液；将鹅肝脱色液过滤后得到鹅肝脱色过滤液；所述的四级蒸馏液与蒸馏水的体积比为1∶2；所述的活性炭与调整pH值后的四级蒸馏液-蒸馏水混合液的重量比为1∶5，所述的硅土与调整pH值后的四级蒸馏液-蒸馏水混合液的重量比为1∶20；所述的脱色反应温度为90℃，反应时间为1小时；
i.将所述的鹅肝脱色过滤液减压蒸馏、喷雾干燥，得到鹅肝粉末B；
j.合并所述的鹅肝粉末A和鹅肝粉末B，混合后粉碎，得到鹅肝提取物备用；
IV.小麦胚芽提取物制备
a.将小麦胚芽进行洁净处理并磨浆，得到小麦胚芽浆；具体的操作为：将新鲜的小麦胚芽用盐水洗涤干净后，用纱布包裹，并甩干多余水分；向小麦胚芽中加入碱液磨浆，得到小麦胚芽浆；所述的小麦胚芽与碱液的重量比为2∶1；所述的碱液的pH值为8.0；
b.向所述的小麦胚芽浆中加入碱液进行提取处理，得到小麦胚芽提取液；所述的小麦胚芽浆与碱液的体积比为0.8-1.2∶6.5-7.5，优选为1∶7；所述的碱液的pH值为8.0；所述的提取处理的在温度25℃条件下进行，处理时间为8h；
c.将所述的小麦胚芽提取液进行离心处理，分别收集小麦胚芽一次沉淀物和小麦胚芽一次上清液；离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟；
d.将所述的小麦胚芽一次上清液过滤、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末A；所述的过滤采用0.45μm滤膜；
e.将所述的小麦胚芽一次沉淀物烘干、粉碎，得到小麦胚芽粉碎物；所述的烘干温度为115℃，时间为30分钟；所述沉淀物的在容器上铺成厚度为1cm的薄层进行烘干；
f.向所述的小麦胚芽粉碎物中加入乙醇水溶液，微波萃取处理，得到小麦胚芽萃取液；所述的小麦胚芽粉碎物与乙醇水溶液的重量比为5.5-6.5∶0.8-1.2，优选为6∶1；所述的乙醇水溶液的浓度为50％；所述的微波萃取处理的方式是：将所述的小麦胚芽粉碎物与乙醇水溶液的混合物微波萃取20秒后，取出微波萃取设备冷却至室温，再重新放入微波萃取设备萃取，直到累计微波萃取时间至2分钟，得到小麦胚芽萃取液；
g.将所述的小麦胚芽萃取液进行离心处理，收集小麦胚芽二次上清液；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟；
h.将所述的小麦胚芽二次上清液过滤，得到小麦胚芽滤液所述的过滤采用0.45μm滤膜；
i.将所述的小麦胚芽滤液进行浓缩、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末B；
j.将所述的小麦胚芽粉末A和小麦胚芽粉末B混合、过筛，得到小麦胚芽提取物，备用；所述的过筛采用20目筛子；
V.红花提取物的制备
a.将红花冰冻、粉碎、过筛，得到红花粉末；所述的红花为干燥的红花；所述的冰冻温度为-20℃，冰冻时间为12小时；所述的粉碎、过筛均在无菌条件下进行，操作温度为0℃-4℃；所述的过筛采用40目筛子；
b.向所述的红花粉末中加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，分别收集红花一次沉淀物和红花一次上清液；所述的红花粉末与蒸馏水的重量比为0.8-1.2∶12.5-13.5，优选为1∶13；所述的蒸馏水的温度为100℃；所述的蒸煮在密封容器中进行，蒸煮的时间为15分钟；所述的降温的方法为自然放凉；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟，温度为室温；
c.向所述的红花一次沉淀物加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，得到红花二次上清液；所述的红花一次沉淀物沉淀物与蒸馏水的重量比为1∶5；所述的蒸馏水的温度为100℃；所述的蒸煮在密封容器中进行，蒸煮的时间为10分钟；所述的降温的方法为自然放凉；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟，温度为室温；
d.合并所述的红花一次上清液和红花二次上清液，过滤后得到红花滤液；所述的过滤采用0.45μm微孔滤膜；
e.将所述的红花滤液浓缩为原来体积的1/4，然后喷雾干燥，得到红花提取物备用；
VI.苦荞提取物制备
a.将苦乔麸皮粉碎，过筛，得到麸皮粉；所述的过筛采用40目筛子；
b.向所述的麸皮粉中加入乙醇溶液，进行浸泡，得到苦荞浸泡液；所述的麸皮粉与乙醇水溶液的重量比为0.8-1.2∶45-55，优选为1∶50；所述的乙醇水溶液的浓度为85％；所述的浸泡时间为8小时；
c.将所述的苦荞浸泡液进行微波萃取处理，得到苦荞萃取液；所述的微波萃取处理的方式是：将所述的苦荞浸泡液微波萃取20秒后，取出微波萃取设备冷却至室温，再重新放入微波萃取设备萃取，直到累计微波萃取时间至2分钟，得到苦荞萃取液；所述的萃取液的温度为80℃-100℃，优选为90℃；
d.将所述的苦荞萃取液离心处理，收集苦荞上清液；所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟；
e.将所述的苦荞上清液过滤，得到苦荞滤液；所述的过滤采用0.45μm微孔滤膜；
f.将所述的苦荞滤液减压浓缩处理，得到苦荞浸膏；将所述的苦荞浸膏干燥、粉碎、过筛，得到苦荞提取物，备用；所述的干燥温度为70℃；所述的过滤采用20目筛子；
VII.辅酶Q10制备
a.取猪的心脏洁净处理并绞成心浆液；
取猪的心脏，清洗、冷冻、切成猪心切片；向所述的猪心切片中加入焦性没食子酸，绞成心浆液；所述的冷冻时间为12小时；所述的猪心切片与焦性没食子酸的重量比为100∶7；
b.向所述的心浆液中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到猪心超声破碎液；所述的心浆液与磷酸钾盐缓冲液的重量比为1.5-2.5∶0.8-1.2，优选为2∶1，所述的磷酸钾盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6，温度为4℃；超声破碎处理时间为45分钟；
c.向所述的猪心超声破碎液中加入氢氧化钠-乙醇溶液，进行皂化处理，得猪心皂化液；所述的猪心超声破碎液与氢氧化钠-乙醇溶液的体积比为0.8-1.2∶1.5-2.5，优选为1∶2；所述的氢氧化钠-乙醇溶液中，氢氧化钠与无水乙醇的重量比为0.8-1.2∶8-12，优选为1∶10；皂化处理的方式为：将所述的猪心超声破碎液、氢氧化钠-乙醇溶液混合液在温度为90℃的条件下加热回流25分钟，再冷却至室温，得到猪心皂化液；所述的冷却方法为：将装有加热回流处理的猪心超声破碎液、氢氧化钠-乙醇溶液混合液的容器放入0℃-4℃的氯化钠溶液中，直至冷却到室温；
d.向所述的猪心皂化液中加乙醚、水，过滤处理，得到猪心一级滤液和猪心一级沉淀物；向所述的猪心一级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心二级滤液和猪心二级沉淀物；向所述的猪心二级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心三级滤液和猪心三级沉淀物；所述的猪心皂化液、乙醚、水的体积比为8-12∶0.8-1.2∶0.8-1.2，优选为10∶1∶1；所述的猪心一级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5，优选为1∶1；所述的猪心二级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5，优选为1∶1；所述的猪心三级沉淀物与乙醚的重量比为1∶1；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟；所述的过滤采用纱布；
e.合并所述的猪心一级滤液、猪心二级滤液，和猪心三级滤液，得到猪心总滤液；向所述的猪心总滤液中加入蒸馏水，萃取处理，直到得到的猪心水洗萃取液为中性；
f.将所述的猪心水洗萃取液过滤，再浓缩处理，得到猪心浓缩液；所述的猪心水洗萃取液与猪心浓缩液的体积比为0.8-1.2∶8-12，优选为10∶1；所述的过滤采用0.45μm微孔滤膜；所述的浓缩处理在减压浓缩罐中进行，浓缩处理的温度为40℃-50℃，优选为45℃；
g.将所述的猪心浓缩液进行层析处理，得到猪心辅酶Q10洗脱液；
所述的层析方法为：将所述的猪心浓缩液引入硅胶柱中，待猪心浓缩液进入硅胶后，先用石油醚洗去杂质，再用乙醚-石油醚混合液洗脱，分段收集黄色部分的洗脱液，即为猪心辅酶Q10洗脱液；将猪心辅酶Q10洗脱液存于棕色瓶中；所述的乙醚-石油醚混合液中，乙醚和石油醚的体积比为1∶1；
i.将所述的猪心辅酶Q10洗脱液进行浓缩、溶解、过滤、结晶，得到辅酶Q10，备用；所述的操作方法为：将所述的猪心辅酶Q10洗脱液减压浓缩，得到猪心稠状物；向所述的猪心稠状物中加入无水乙醇，微热溶解，趁热过滤，得到猪心辅酶Q10滤液；将所述的猪心辅酶Q10滤液放置在4℃环境中15-18小时后，得到黄色晶体，即为辅酶Q10，备用；所述的猪心稠状物与无水乙醇的重量比为20∶1；
VIII.白藜芦醇制备
a.将葡萄皮粉碎、过筛，得到葡萄皮粉末；所述的过筛采用40目筛子；
b.向所述的葡萄皮粉末加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮一次萃取液；所述的葡萄皮粉末与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45，优选为1∶40；所述的萃取处理采用进行微波萃取；
c.将所述的葡萄皮一次萃取液离心处理，收集葡萄皮一次上清液和葡萄皮一次沉淀物；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟，温度为室温；
d.向所述的葡萄皮一次沉淀物中加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮二次萃取液；所述的葡萄皮一次沉淀物与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45，优选为1∶40；所述的萃取处理采用进行微波萃取；
e.将所述的葡萄皮二次萃取液离心处理，得到葡萄皮二次上清液；在所述的离心处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为25分钟，温度为室温；
f.合并所述的葡萄皮一次上清液和葡萄皮二次上清液，过滤后得到葡萄皮滤液；所述的过滤采用0.45μm微孔滤膜；
g.将所述的葡萄皮滤液，浓缩处理，得到葡萄皮浓缩固体；将所述的葡萄皮浓缩固体用石油醚洗涤，得到洗涤后的葡萄皮浓缩固体；所述的葡萄皮浓缩固体与石油醚的重量比为1∶2；
h.将所述的葡萄皮浓缩固体溶解后，进行层析处理，得到白藜芦醇洗脱液；用于溶解所述的固体的液体可以是乙酸乙酯；所述的层析方法为：将溶于乙酸乙酯的固体引入硅胶柱，再用洗脱剂甲醇-水混合液洗脱，得到白藜芦醇洗脱液；所述的甲醇-水溶液中，甲醇与水的体积比为4∶1；所述的层析处理在中压下进行；
i.将所述的白藜芦醇洗脱液浓缩、喷雾干燥，得到白藜芦醇，备用；所述的浓缩采用旋转蒸发浓缩；
将所述的修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、辅酶Q10、苦荞提取物、白藜芦醇按照上述重量配比进行混合，混合后均匀分装胶囊，即得SOD复合胶囊成品。
本实施例中，提供一种优选的SOD复合胶囊的工艺制备方法，其特征在于：所述的胶囊中各个组分的重量比为：
修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉 10-50
白藜芦醇 10-50
辅酶Q10 10-75
α-硫辛酸 75-120
鹅肝提取物 75-150
小麦胚芽提取物 75-150
红花提取物 75-150
苦荞提取物 200-500
透明质酸钠 0.5-1.5
小麦面筋微粉 50-150
羧甲基纤维素 10-50
硬脂酸镁 10-50
微粉硅胶 10-50；
所述的胶囊的制备方法为：
A.SOD肠溶颗粒制备
a.初次包埋：
按上述配比将修饰SOD复合酶蝌蚪冻干粉、透明质酸钠、小麦面筋冻干粉混合后，粉碎处理，得到粉碎颗粒；所述的粉碎处理采用低温液氮制冷气流粉碎机，可以是QYF-100低温液氮制冷气流粉碎机；
b.制粒：将所述的粉碎颗粒进行制粒，得到颗粒；所述的造粒方法为干法造粒，可以选用GK80干式制粒机，制粒温度为40℃；
c.二次包埋：
先后用水溶性丝素蛋白的饱和溶液和壳聚糖溶液给所述的颗粒进行喷雾处理，在所述的颗粒外表面形成保护膜，得到带膜颗粒；所述的水溶性丝素蛋白的分子量为50000D；所述的水溶性丝素蛋白的饱和溶液中含有占溶液体积30％的乙醇，和占溶液重量40％的氯化钙；所述的壳聚糖溶液的浓度为1％，该溶液用0.6％乙酸配制；所述的喷雾处理的工艺条件为：温度为40℃，进风量1.4m3/分钟，空气压力0.4MPa，喷速为15ml/分钟；
d.包衣：
用聚丙烯酸树脂将所述的带膜颗粒喷雾处理，在其外表面形成包衣，得到SOD肠溶颗粒；所述的包衣液体的制造方法为：将聚丙烯酸树脂溶于中、加入邻苯二甲酸二乙酯和聚山梨酯-80；所述的聚丙烯酸树脂、无水乙醇、邻苯二甲酸二乙酯、聚山梨酯-80的重量比为9∶88∶1.5∶1.5；所述的聚丙烯酸树脂的型号为II号；所述的喷雾处理的工艺条件为：温度为40℃，喷速为30ml/min，空气压力为0.25MPa，喷浆速度15ml/min；将所述的SOD肠溶颗粒在-40℃真空冷冻干燥。
B.余料制粒：
按照上述配比将所述的鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、辅酶Q10、苦荞提取物、白藜芦醇、α-硫辛酸分别过筛、混合均匀、进行造粒、整粒，得到余料混合物；所述的过筛采用120目筛；所述的混合采用等量递加混合法，混合的设备可以是三维混料机；所述的制粒温度为40℃，制粒的设备可以是GK80干式制粒机；
C.胶囊填充物制备：
按上述配比将所述的SOD肠溶颗粒中分别加入微粉硅胶、羧甲基纤维素、硬脂酸镁、所述的余料混合物，混匀处理，得到胶囊填充物；所述的混匀方法为等量递加法；所述的混匀处理的设备可以是三维混料机；
D.成品：
将所述的胶囊填充物填充在胃溶胶囊壳中，每个胶囊装0.3g胶囊填充物；装瓶、密封后即得成品，低温干燥保存。
本实施例中所述的各种操作设备均为常规设备，可以在市场购买得到；
所述的匀浆机，可以是美国Pro Sciencetfic公司生产的ProSciencetfic 400D型匀浆器；所述的磨浆机，可以是青岛即墨市超微粉碎机厂生产的FMJ系列不锈钢双盘卧式磨浆机；所述的离心机可以是上海安亭科学医学仪器厂生产的GL-20B4000r/min高速冷冻离心机；所述的中空纤维超滤机可以是德国Sartorius公司生产的sartorius Vivaflow 200型切向流超滤器；所述的微波萃取处理，可以使用美国CEM公司生产的MARS2X微波炉(简称为MX炉)，温度可调；所述的真空冷冻干燥，可以使用北京四环科学仪器厂生产的LGJ-10C型冻干机；所述的减压蒸馏，可以使用环球(香港)科技有限公司生产的AD1160型自动减压蒸馏仪；所述的减压浓缩，可以使用温州市利宏轻工机械有限公司生产的ZN-50型减压浓缩罐；所述的真空旋转薄膜浓缩器，可以是沈阳靓马生物制药设备有限公司生产的XB系列真空旋转薄膜浓缩器；所述的低温气流粉碎，可以使用常州市百灵干燥设备有限公司生产的DFZ型低温粉碎机；所述的冷冻干燥，可以使用北京博医康试验仪器有限公司生产的FD-1A-50型冷冻干燥机；所述的水解罐，可以是宝鸡宝冶钛镍制造有限责任公司生产的钛制水解罐；所述的减压蒸馏，可以使用环球(香港)科技有限公司生产的AD1160型自动减压蒸馏仪；所述的喷雾干燥，可以使用上海世远生物设备工程有限公司生产的SY-6000小型喷雾干燥仪；所述超声波洗涤，可以使用宁波海曙科生超声设备有限公司生产的KS-80D超声波清洗机；所述的三维混料机，可以是武汉粉体设备制造厂生产的XH-1型三维混料机。
实施例6：
本实施例在实施例5基础上说明所述的SOD复合酶冻干粉的修饰，所用原料(组分)的配比和品质与实施例5相同，所用的设备与实施例5相同。
SOD复合酶冻干粉的修饰的步骤为：a.采用高碘酸钠活化，得到活化的右旋糖苷：
具体的操作方法为：向右旋糖苷溶液中加入高碘酸钠溶液，得到混合溶液A，4℃避光保存18-24小时，优选为22小时；然后向所述的混合溶液A中加入亚硫酸氢钠溶液，还原过量的高碘酸钠，得到混合溶液B；所述的右旋糖苷溶液的由0.5重量份的右旋糖苷溶解于5重量份的蒸馏水配制而成，所述的蒸馏水的温度为4℃；所述的高碘酸钠溶液的重量百分比浓度为12％；所述的右旋糖苷溶液与高碘酸钠溶液的体积比为10∶1；，所述的亚硫酸氢钠溶液的重量百分比浓度为5％，温度为4℃；
再将混合溶液B进行透析处理18-22小时，得到透析液B；
再向透析液B中加入丙酮，进行离心处理，得到沉淀物B；所述的透析液B与所述的丙酮的体积比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再向所述的沉淀物B中加入丙酮，进行离心处理，得到二次沉淀物B；所述的沉淀物B与所述的丙酮的重量比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再向所述的二次沉淀物B中加入丙酮，进行离心处理，得到三次沉淀物B；所述二次的沉淀物B与所述的丙酮的重量比为1∶2，所述的丙酮的温度为-20℃；
再将所述的三次沉淀物B进行冷冻干燥处理，即得到活化的右旋糖苷；
b.将所述的活化的右旋糖苷溶解于无水碳酸钠缓冲液，得到混合溶液C；向所述的混合溶液C中加入所述的SOD复合酶蝌蚪冻干粉，在4℃的条件下避光保存17小时，得到混合溶液D，再用硼酸调节pH值为7.6；再向所述的混合溶液D中加入牛血清白蛋白、戊二醛水溶液，得到混合溶液E，静置保存3小时；所述的戊二醛水溶液的浓度为25％；
向所述的混合溶液E中加入甘氨酸，得到混合溶液F，在4℃的条件下放置4小时，用硼氢化钠调节其pH值为7.6；
向调节pH值后的混合溶液F中加入丙酮，在4℃的条件下静置30分钟，得到沉淀物F；所述的调节pH值后的混合溶液F与丙酮的体积比为1∶2；所述的丙酮的温度为-20℃。
将所述的沉淀物F进行冷冻干燥处理，得到修饰过的SOD复合酶冻干粉；
所述的右旋糖苷、无水碳酸钠缓冲液、SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸的重量比为：0.4-0.8∶4800-5200∶18-22∶4-7∶23-26∶48-52，优选为0.5∶5000∶20∶5∶25∶51；
本实施例采用右旋糖苷修饰SOD复合酶冻干粉，可以延长其半衰期，增强其稳定性，利于长期保存。
实施例7：
本实施例在实施例5基础上说明所述的胶囊的制备方法，所用原料(组分)的配比和品质与实施例5相同，所用的设备与实施例5相同。
所述的胶囊中各个组分的重量比为：
修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉 10-50
白藜芦醇 10-50
辅酶Q10 10-75
α-硫辛酸 75-120
鹅肝提取物 75-150
小麦胚芽提取物 75-150
红花提取物 75-150
苦荞提取物 200-500
透明质酸钠 0.5-1.5
小麦面筋微粉 50-150
羧甲基纤维素 10-50
硬脂酸镁 10-50
微粉硅胶 10-50；
所述的胶囊的制备方法为：
A.SOD肠溶颗粒制备
a.初次包埋：
按上述配比将修饰SOD复合酶蝌蚪冻干粉、透明质酸钠、小麦面筋冻干粉混合后，粉碎处理，得到粉碎颗粒；所述的粉碎处理采用低温液氮制冷气流粉碎机，可以是QYF-100低温液氮制冷气流粉碎机；
b.制粒：将所述的粉碎颗粒进行制粒，得到颗粒；所述的造粒方法为干法造粒，可以选用GK80干式制粒机，制粒温度为40℃；
c.二次包埋：
先后用水溶性丝素蛋白的饱和溶液和壳聚糖溶液给所述的颗粒进行喷雾处理，在所述的颗粒外表面形成保护膜，得到带膜颗粒；所述的水溶性丝素蛋白的分子量为50000D；所述的水溶性丝素蛋白的饱和溶液中含有占溶液体积30％的乙醇，和占溶液重量40％的氯化钙；所述的壳聚糖溶液的浓度为1％，该溶液用0.6％乙酸配制；所述的喷雾处理的工艺条件为：温度为40℃，进风量1.4m3/分钟，空气压力0.4MPa，喷速为15ml/分钟；
d.包衣：
用聚丙烯酸树脂将所述的带膜颗粒喷雾处理，在其外表面形成包衣，得到SOD肠溶颗粒；所述的包衣液体的制造方法为：将聚丙烯酸树脂溶于中、加入邻苯二甲酸二乙酯和聚山梨酯-80；所述的聚丙烯酸树脂、无水乙醇、邻苯二甲酸二乙酯、聚山梨酯-80的重量比为9∶88∶1.5∶1.5；所述的聚丙烯酸树脂的型号为II号；所述的喷雾处理的工艺条件为：温度为40℃，喷速为30ml/min，空气压力为0.25MPa，喷浆速度15ml/min；将所述的SOD肠溶颗粒在-40℃真空冷冻干燥。
B.余料制粒：
按照上述配比将所述的鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、辅酶Q10、苦荞提取物、白藜芦醇、α-硫辛酸分别过筛、混合均匀、进行造粒、整粒，得到余料混合物；所述的过筛采用120目筛；所述的混合采用等量递加混合法，混合的设备可以是三维混料机；所述的制粒温度为40℃，制粒的设备可以是GK80干式制粒机；
C.胶囊填充物制备：
按上述配比将所述的SOD肠溶颗粒中分别加入微粉硅胶、羧甲基纤维素、硬脂酸镁、所述的余料混合物，混匀处理，得到胶囊填充物；所述的混匀方法为等量递加法；所述的混匀处理的设备可以是三维混料机；
D.成品：
将所述的胶囊填充物填充在胃溶胶囊壳中，每个胶囊装0.3g胶囊填充物；装瓶、密封后即得成品，低温干燥保存。
本实施例胶囊制备的整个工艺过程全部采用低温、中性多孔微粒载体吸附、低温喷雾涂膜包衣、真空冷冻干燥法制备。没有用对SOD复合酶酶活性有损失的粘合剂、增溶剂、有机溶剂，有利于保持其酶活性。
为了保证不怕酸碱的稳定配伍药物在人体的胃肠内迅速、充分吸收，同时又不破坏怕酸碱的SOD复合酶不稳定酶的活性让其在直肠吸收，本实施例胶囊制备的整个工艺过程采用对SOD复合酶进行分子修饰、低温气流粉碎，流化床中性多孔微粒载体吸附、低温喷雾涂膜包衣、真空冷冻干燥法制备成SOD复合酶颗粒，对其他配伍料单独制粒，然后与其他配伍料按处方量快速混合，采用胃溶胶囊壳填装；工艺条件稳定，适于工业化生产。
实施例8：
本实施例在实施例5基础上说明所述的超氧化物歧化酶的制备，所用原料(组分)的配比和品质与实施例4相同，所用的仪器设备与实施例5相同。
I、超氧化物歧化酶的制备：
A、按需要量取新鲜蝌蚪进行洁净处理然后进行灭菌处理；具体的操作为：先进行清洗：取活的蝌蚪洗净，浸泡24小时后过滤水分；再进行消毒：称消毒处理的蝌蚪新鲜湿重30-160重量份，优选为90重量份，在预冷的4℃用0.1mol/L pH7.6的磷酸钾盐缓超声波洗涤灭菌10分钟；过滤水分；
B、将灭菌处理后的蝌蚪混入海藻糖、维生素E后于-20℃冷冻处理所述蝌蚪、海藻糖、维生素E的重量比是：1∶0.025∶0.0001；
C、将冷冻处理的蝌蚪破碎，加入磷酸钾缓冲液中进行匀浆处理，生成蝌蚪匀浆物，所述蝌蚪与磷酸钾缓冲液的重量比是1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是0.1mol/L、pH值7.6所述的匀浆处理温度4℃；处理时间1分钟；
D、将所述的蝌蚪匀浆物用氢氧化钠溶液调节pH值到7.0，进行超声破碎处理，生成蝌蚪超声破碎物，将其在0℃-4℃静置6-24小时，优选为15小时；所述的超声破碎的时间为45分钟，温度为4℃；
E、向所述蝌蚪超声破碎物中加入鲜鸡蛋、无水乙醇，用氢氧化钠溶液调节pH值到7.6；在20℃-30℃条件下搅拌20-40分钟，静置30-60分钟，得到蝌蚪酶解液，最佳温度为25℃，最佳搅拌时间为30分钟，最佳静置时间为45分钟；再用4mol/L的氢氧化钠溶液调节蝌蚪酶解液的pH值为7.6；所述蝌蚪超声破碎物、鲜鸡蛋、无水乙醇的体积比是9-12∶1.5-2.5∶4.5-7.0，优选为10∶2∶5；无水乙醇温度是-10℃--20℃；所述的搅拌转速为150-200rpm；
F、对所述的蝌蚪酶解液进行多级沉淀分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；第一级处理包括：在所述的蝌蚪酶解液中加入该液体重量30％的硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解一级上清液；第二级处理包括：在蝌蚪酶解一级上清液中加入该液体重量40％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解二级上清液；第三级处理包括：在蝌蚪酶解二级上清液中加入该液体重量50％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解三级上清液；第四级处理包括：在蝌蚪酶解三级上清液中加入该液体重量60％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解四级上清液；第五级处理包括：在蝌蚪酶解四级上清液中加入该液体重量70％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；所述的离心处理中，离心机的转速为3000rpm，时间为20分钟，温度为25℃；
G、将所述的蝌蚪粗酶上清液在95℃-100℃的水浴锅内快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置降温到56℃-58℃，再移入水浴锅快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置保温5-15分钟，优选为10分钟，快速冷却到15℃，然后进行离心分离处理，获得蝌蚪去杂蛋白上清液；所述的离心处理中，离心机的转速为3000rpm，时间为20分钟，温度为15℃；
H、将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；具体的操作方法为：将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液冷却到4℃，然后在-5℃以下的操作温度下，以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，浓缩液为原液体积的10％～20％；浓缩液进行离心分离处理，收集上清液，迅速冷却到4℃，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；所述的离心处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
I、将蝌蚪一级SOD浓缩液；加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪二级SOD浓缩液；所述蝌蚪一级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶4.5-5.5，优选为1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是2.5mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
J、将蝌蚪二级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪三级SOD浓缩液；所述蝌蚪二级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，优选为1∶3；所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
K、将蝌蚪三级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪四级SOD浓缩液；所述蝌蚪三级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，优选为1∶2；所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
L、将蝌蚪四级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪五级SOD浓缩液；所述蝌蚪四级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶0.8-1.2，优选为1∶1，所述磷酸钾缓冲液的浓度是75mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
M、将蝌蚪五级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪六级SOD浓缩液；所述蝌蚪五级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，优选为1∶2，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
N、将蝌蚪六级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过初次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，然后该上清液进行超滤浓缩处理，进行再次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪七级SOD浓缩液；所述蝌蚪六级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，优选为1∶3，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度为4℃；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的再次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
O、向所述的蝌蚪七级SOD浓缩液中，加入2.5-3.5倍体积的，优选为3倍体积比的、在0-4℃下预冷过的去离子水，初次离心处理得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃；然后将该上清液中加入0.8-1.2倍体积，优选为等体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，第二次离心处理得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃；然后将第二次离心处理得到的上清液进行超滤浓缩处理，进行第三次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪除盐SOD浓缩液；所述的超滤浓缩处理的具体操作方法为：在-5℃以下的操作温度下，将初次离心分离得到的上清液以10L/h～30L/h的流速通过截留分子质量为10000的中空纤维超滤器，得浓缩液，所述的浓缩液为原液体积的10％～20％；所述的初次离心分离处理和第二次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为25分钟，温度为室温；所述的第三次离心分离处理中，离心机的转速为4000rpm，时间为20分钟，温度为室温；所述的冷却处理在冰箱或冰库中进行；
P、分子蒸馏：将所述的蝌蚪除盐SOD浓缩液用真空旋转薄膜蒸发器进行真空浓缩；
Q、将真空浓缩处理的蝌蚪除盐SOD浓缩液在-20℃进行冻结；冷冻干燥得到蝌蚪SOD初级冻干粉；
R、将所述的蝌蚪SOD初级冻干粉中加入预冷到0-4℃重蒸水，搅拌均匀后，-4℃的操作环境中离心处理，除去不溶物，收集上清液，将该上清液减压浓缩后放入-20℃进行冻结；再进行真空冷冻干燥，得到蝌蚪SOD复合酶冻干块；所述的蝌蚪SOD初级冻干粉与重蒸水的重量比为1∶3；所述的离心分离处理中，离心机的转速为6000rpm，时间为20-30分钟，优选为25分钟；
S、将所述的蝌蚪SOD复合酶冻干块进行低温气流粉碎后，得到SOD复合酶蝌蚪冻干粉，即为超氧化物歧化酶-20℃储藏备用；
本实施例选用抗氧化能力很强的健康蝌蚪作为原料，避免了血液制品的交叉感染，也克服了植物SOD活性低、和人的同源性少，生理有效性差的弊端。所述的七级浓缩提取方法，极大提高了所述SOD复合酶蝌蚪冻干粉的纯度。
Claims (5)
1、一种SOD复合胶囊，其特征在于：所述复合胶囊中含有超氧化物歧化酶制剂、白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 10-50，
辅酶Q10 10-75，
鹅肝提取物 75-150，
小麦胚芽提取物 75-150，
红花提取物 75-150，
苦荞提取物 200-500；
每百克所述的复合胶囊中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，该超氧化物歧化酶是蝌蚪提取物。
2、根据权利要求1所述的SOD复合胶囊，其特征在于：所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 20，
辅酶Q10 50，
鹅肝提取物 100，
小麦胚芽提取物 100，
红花提取物 100，
苦荞提取物 310；
每百克所述的复合胶囊中含有2000000活力单位的超氧化物歧化酶。
3、根据权利要求1所述的SOD复合胶囊，其特征在于：所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 15，
辅酶Q10 15，
鹅肝提取物 18，
小麦胚芽提取物 80，
红花提取物 80，
苦荞提取物 95；
每百克所述的复合胶囊中含有2000000活力单位的超氧化物歧化酶。
4、根据权利要求1所述的SOD复合胶囊，其特征在于：所述的胶囊中各个组分的重量比为：
白藜芦醇 70，
辅酶Q10 75，
鹅肝提取物 150，
小麦胚芽提取物 150，
红花提取物 150，
苦荞提取物 150；
每百克所述的复合胶囊中含有1000000活力单位的超氧化物歧化酶。
5、一种SOD复合胶囊的制备方法，其特征在于：所述复合胶囊中含有白藜芦醇、辅酶Q10、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、苦荞提取物，所述的胶囊中各个组分的重量比为，10-50∶10-75∶75-150∶75-150∶75-150∶200-500，每百克所述复合胶囊中含有40000-4000000活力单位的超氧化物歧化酶，制备步骤如下：
I、超氧化物歧化酶的制备：
A、按需要量取新鲜蝌蚪进行洁净处理然后进行灭菌处理；
B、将灭菌处理后的蝌蚪混入海藻糖、维生素E后于-20℃冷冻处理；所述蝌蚪、海藻糖、维生素E的重量比是：1∶0.025∶0.0001；
C、将冷冻处理的蝌蚪破碎，加入磷酸钾缓冲液中进行匀浆处理，生成蝌蚪匀浆物，所述蝌蚪与磷酸钾缓冲液的重量比是1∶5；所述磷酸钾缓冲液的浓度是0.1mol/L、pH值7.6；
D、将所述的蝌蚪匀浆物用氢氧化钠溶液调节pH值到7.0，进行超声破碎处理，生成蝌蚪超声破碎物；在0℃-4℃静置6-24小时；
E、向所述蝌蚪超声破碎物中加入鲜鸡蛋、无水乙醇，用氢氧化钠溶液调节pH值到7.6；在20℃-30℃条件下搅拌20-40分钟，静置30-60分钟，得到蝌蚪酶解液；所述蝌蚪超声破碎物、鲜鸡蛋、无水乙醇的体积比是9-12∶1.5-2.5∶4.5-7.0；无水乙醇温度是-10℃--20℃；
F、对所述的蝌蚪酶解液进行多级沉淀分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；第一级处理包括：在所述的蝌蚪酶解液中加入该液体重量30％的硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解一级上清液；第二级处理包括：在蝌蚪酶解一级上清液中加入该液体重量40％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解二级上清液；第三级处理包括：在蝌蚪酶解二级上清液中加入该液体重量50％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解三级上清液；第四级处理包括：在蝌蚪酶解三级上清液中加入该液体重量60％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，收集上清液，即为蝌蚪酶解四级上清液；第五级处理包括：在蝌蚪酶解四级上清液中加入该液体重量70％硫酸铵，沉淀处理，进行离心分离处理，获得蝌蚪粗酶上清液；
G、将所述的蝌蚪粗酶上清液在95℃-100℃的水浴锅内快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置降温到56℃-58℃，再移入水浴锅快速升温到65℃-68℃，移出水浴锅静置保温5-15分钟，快速冷却到15℃，然后进行离心分离处理，获得蝌蚪去杂蛋白上清液；
H、将所述的蝌蚪去杂蛋白上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪一级SOD浓缩液；
I、将所述的蝌蚪一级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪二级SOD浓缩液；所述蝌蚪一级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶4.5-5.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是2.5mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
J、将所述的蝌蚪二级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪三级SOD浓缩液；所述蝌蚪二级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
K、将所述的蝌蚪三级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪四级SOD浓缩液；所述蝌蚪三级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
L、将所述的蝌蚪四级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪五级SOD浓缩液；所述蝌蚪四级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶0.8-1.2，所述磷酸钾缓冲液的浓度是75mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
M、将所述的蝌蚪五级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪六级SOD浓缩液；所述蝌蚪五级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶1.5-2.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是50mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
N、将所述的蝌蚪六级SOD浓缩液加入磷酸钾缓冲液中，经过离心分离处理获得上清液，对该上清液进行超滤浓缩处理，获得蝌蚪七级SOD浓缩液；所述六级SOD浓缩液与磷酸钾缓冲液的体积比是0.8-1.2∶2.5-3.5，所述磷酸钾缓冲液的浓度是25mmol/L、pH值7.6；处理温度0℃-4℃；
O、向所述的蝌蚪七级SOD浓缩液中，加入2.5-3.5倍体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，初次离心处理得上清液；然后将该上清液中加入0.8-1.2倍体积的、在0-4℃下预冷过的去离子水，第二次离心处理得上清液；然后将第二次离心处理得到的上清液进行超滤浓缩处理，进行第三次离心分离处理获得上清液，将该上清液迅速冷却到4℃，获得蝌蚪除盐SOD浓缩液；
P、将所述的蝌蚪除盐SOD浓缩液进行真空浓缩；
Q、将真空浓缩处理的蝌蚪除盐SOD浓缩液在-20℃进行冻结；冷冻干燥，得到蝌蚪SOD初级冻干粉；
R、向所述的蝌蚪SOD初级冻干粉中加入预冷到0-4℃的重蒸水，在-4℃的操作环境中离心分离处理，收集上清液；将该上清液真空浓缩后放入-20℃进行冻结，再进行真空冷冻干燥、粉碎处理，得到SOD复合酶蝌蚪冻干粉；
II、SOD复合酶蝌蚪冻干粉的修饰
a.采用高碘酸钠活化，得到活化的右旋糖苷；
b.将所述的活化的右旋糖苷溶解于无水碳酸钠缓冲液，加入所述的SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸、丙酮，在4℃的条件下静置30分钟，得到沉淀物；
将所述的沉淀物进行冷冻真空干燥处理，得到修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉；
所述的右旋糖苷、无水碳酸钠缓冲液、SOD复合酶蝌蚪冻干粉、牛血清白蛋白、戊二醛水溶液、甘氨酸的重量比为：0.4-0.8∶4800-5200∶18-22∶4-7∶23-26∶48-52；
III.鹅肝提取物制备
a.取鹅的肝脏进行洁净处理并磨成肝浆；
b.向所述的肝浆中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到鹅肝超声破碎物；所述的肝浆与磷酸缓冲液的体积比为0.8-1.2∶1.8-2.5；所述的磷酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6；
c.将所述的鹅肝超声破碎物进行粗滤，得到鹅肝滤液；
d.向所述的鹅肝滤液中加入硅藻土，搅拌均匀后，离心分离处理，收集鹅肝初级上清液和鹅肝初级沉淀物；
e.将所述的鹅肝初级上清液过滤，得到鹅肝精滤液；鹅肝精滤液喷雾干燥，得到鹅肝粉末A；
f.将所述的鹅肝初级沉淀物中加入盐酸溶液，搅拌加热处理，得到鹅肝水解液；所述的鹅肝沉淀物与盐酸溶液的重量比为0.8-1.2∶3.5-4.5；所述的盐酸溶液的浓度为6mmol/L；
g.将所述的鹅肝水解液减压蒸馏浓缩处理到原来体积的1/4，得到鹅肝一级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝一级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝二级浓缩液；再将鹅肝一级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝二级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝三级浓缩液；再将鹅肝三级浓缩液中加入蒸馏水，减压蒸馏浓缩处理，直到鹅肝三级浓缩液与蒸馏水总体积变为原来的1/4，得到鹅肝四级浓缩液；
h.将所述的鹅肝四级蒸馏液进行脱色、过滤处理，得到鹅肝脱色过滤液；
i.将所述的鹅肝脱色过滤液减压蒸馏、喷雾干燥，得到鹅肝粉末B；
j.合并所述的鹅肝粉末A和鹅肝粉末B，混合后粉碎，得到鹅肝提取物备用；
IV.小麦胚芽提取物制备
a.将小麦胚芽进行洁净处理并磨浆，得到小麦胚芽浆；
b.向所述的小麦胚芽浆中加入碱液进行提取处理，得到小麦胚芽提取液；所述的小麦胚芽浆与碱液的体积比为0.8-1.2∶6.5-7.5；所述的碱液的pH值为8.0；
c.将所述的小麦胚芽提取液进行离心处理，分别收集小麦胚芽一次沉淀物和小麦胚芽一次上清液；
d.将所述的小麦胚芽一次上清液过滤、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末A；
e.将所述的小麦胚芽一次沉淀物烘干、粉碎，得到小麦胚芽粉碎物；
f.向所述的小麦胚芽粉碎物中加入乙醇水溶液，微波萃取处理，得到小麦胚芽萃取液；所述的小麦胚芽粉碎物与乙醇水溶液的重量比为5.5-6.5∶0.8-1.2；所述的乙醇水溶液的浓度为50％；
g.将所述的小麦胚芽萃取液进行离心处理，收集小麦胚芽二次上清液；
h.将所述的小麦胚芽二次上清液过滤，得到小麦胚芽滤液；
i.将所述的小麦胚芽滤液进行浓缩、喷雾干燥，得到小麦胚芽粉末B；
j.将所述的小麦胚芽粉末A和小麦胚芽粉末B混合、过筛，得到小麦胚芽提取物，备用；
V.红花提取物的制备
a.将红花冰冻、粉碎、过筛，得到红花粉末；
b.向所述的红花粉末中加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，分别收集红花一次沉淀物和红花一次上清液；所述的红花粉末与蒸馏水的重量比为0.8-1.2∶12.5-13.5；
c.向所述的红花一次沉淀物加入蒸馏水，蒸煮后降温，再进行离心处理，得到红花二次上清液；
d.合并所述的红花一次上清液和红花二次上清液，过滤后得到红花滤液；
e.将所述的红花滤液浓缩为原来体积的1/4，然后喷雾干燥，得到红花提取物备用；
VI.苦荞提取物制备
a.将苦乔麸皮粉碎，过筛，得到麸皮粉；
b.向所述的麸皮粉中加入乙醇溶液，进行浸泡，得到苦荞浸泡液；所述的麸皮粉与乙醇水溶液的重量比为0.8-1.2∶45-55；所述的乙醇水溶液的浓度为85％；
c.将所述的苦荞浸泡液进行微波萃取处理，得到苦荞萃取液；
d.将所述的苦荞萃取液离心处理，收集苦荞上清液；
e.将所述的苦荞上清液过滤，得到苦荞滤液；
f.将所述的苦荞滤液浓缩处理，得到苦荞浸膏；将所述的苦荞浸膏干燥、粉碎、过筛，得到苦荞提取物，备用；
VII.辅酶Q10制备
a.取猪的心脏洁净处理并绞成心浆液；
b.向所述的心浆液中加入磷酸钾盐缓冲液，超声破碎处理，得到猪心超声破碎液；所述的心浆液与磷酸钾盐缓冲液的重量比为1.5-2.5∶0.8-1.2，所述的磷酸钾盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为7.6，温度为4℃；
c.向所述的猪心超声破碎液中加入氢氧化钠-乙醇溶液，进行皂化处理，得猪心皂化液；所述的猪心超声破碎液与氢氧化钠-乙醇溶液的体积比为0.8-1.2∶1.5-2.5；所述的氢氧化钠-乙醇溶液中，氢氧化钠与无水乙醇的重量比为0.8-1.2∶8-12；
d.向所述的猪心皂化液中加乙醚、水，过滤处理，得到猪心一级滤液和猪心一级沉淀物；向所述的猪心一级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心二级滤液和猪心二级沉淀物；向所述的猪心二级沉淀物加入乙醚，过滤处理，得到猪心三级滤液和猪心三级沉淀物；所述的猪心皂化液、乙醚、水的体积比为8-12∶0.8-1.2∶0.8-1.2；所述的猪心一级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；所述的猪心二级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；所述的猪心三级沉淀物与乙醚的重量比为0.8-1.2∶0.5-1.5；
e.合并所述的猪心一级滤液、猪心二级滤液，和猪心三级滤液，得到猪心总滤液；向所述的猪心总滤液中加入蒸馏水，萃取处理，得到猪心水洗萃取液；
f.将所述的猪心水洗萃取液过滤，再浓缩处理，得到猪心浓缩液；所述的猪心水洗萃取液与猪心浓缩液的体积比为0.8-1.2∶8-12；
g.将所述的猪心浓缩液进行层析处理，得到猪心辅酶Q10洗脱液；
i.将所述的猪心辅酶Q10洗脱液进行浓缩、溶解、过滤、结晶，得到辅酶Q10，备用；
VIII.白藜芦醇制备
a.将葡萄皮粉碎、过筛，得到葡萄皮粉末；
b.向所述的葡萄皮粉末加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮一次萃取液；所述的葡萄皮粉末与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45；
c.将所述的葡萄皮一次萃取液离心处理，收集葡萄皮一次上清液和葡萄皮一次沉淀物；
d.向所述的葡萄皮一次沉淀物中加入甲醇，萃取处理，得到葡萄皮二次萃取液；所述的葡萄皮一次沉淀物与甲醇的重量比为0.8-1.2∶35-45；
e.将所述的葡萄皮二次萃取液离心处理，得到葡萄皮二次上清液；
f.合并所述的葡萄皮一次上清液和葡萄皮二次上清液，过滤后得到葡萄皮滤液；
g.将所述的葡萄皮滤液，浓缩处理，得到葡萄皮浓缩固体；
h.将所述的葡萄皮浓缩固体溶解后，进行层析处理，得到白藜芦醇洗脱液；
i.将所述的白藜芦醇洗脱液浓缩、喷雾干燥，得到白藜芦醇，备用；
将所述的修饰过的SOD复合酶蝌蚪冻干粉、鹅肝提取物、小麦胚芽提取物、红花提取物、辅酶Q10、苦荞提取物、白藜芦醇按照上述重量配比进行混合，混合后均匀分装胶囊，即得SOD复合胶囊成品。
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