CN101584753A - 肾石通制剂的药物新用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了下述重量配比的原料制备而成的肾石通制剂在制备治疗泌尿系感染的药物中的用途：金钱草300－800份、炒王不留行300－800份、萹蓄200－500份、醋制延胡索100－250份、烫鸡内金100－350份、丹参100－350份、木香50－200份、瞿麦150－400份、牛膝100－250份、海金沙100－350份。通过临床试验及动物药效试验证明，本发明药物能够治疗各种类型的泌尿系感染(上尿路感染：肾盂肾炎，下尿路感染：膀胱炎和尿道炎)，有效率高，本发明药物的使用为临床提供了一种新的用药选择。

Description

肾石通制剂的药物新用途

技术领域

本发明涉及肾石通制剂的新用途，具体地，是涉及制备治疗泌尿系感染的药物中的用途，属药物领域。

背景技术

泌尿系感染简称尿感，是由细菌直接侵入尿路而引起的炎症。感染可累及上、下泌尿道，因定位困难统称为尿感。

泌尿系感染是一种常见病，在女性人群中发病率约2％，若治疗不当会导致不良后果，在尿毒症的病因中，肾盂肾炎已列居第二位。虽然治疗尿路感染的抗生素和新疗法日新月异，但尿路感染的发病率和复发率均无明显下降，因此，不断提高对泌尿系感染的诊治水平，加强防治工作，仍是广大人医务人员的重要课题。泌尿系感染按其病变发生部位，分为下尿路感染(膀胱炎和尿道炎)和上尿路感染(主要是肾盂肾炎)，肾盂肾炎又分为急性和慢性。

泌尿系感染病因：任何致病菌均可引起尿路感染，绝大多数革兰阴性杆菌，如大肠杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、产气杆菌等。急性与无并发症的尿路感染，约85％为大肠杆菌引起。其感染途径有四个方面：尿道上行感染、血行感染、经淋巴通道感染或邻近组织感染的直接蔓延，主要为血行感染。泌尿系感染机制：目前对此尚不十分清楚，有人认为细菌进入膀胱后，大肠杆菌、变形杆菌可借助其菌伞与膀胱粘膜上的受体相结合，粘附于膀胱壁上滋长繁殖，引起膀胱炎，这种细菌粘附现象是引起尿路感染的一个重要环节。膀胱炎后可影响膀胱壁段输尿管及其管口功能，导致膀胱输尿管回流，使感染尿液逆流而上。细菌的内毒素可显著地降低输尿管蠕动，使输尿管内尿液郁滞，压力增高，形成生理性梗阻，这都有助于肾盂肾炎的发生。例如大肠杆菌具有O、H、K三种抗原，具有大量K抗原的大肠杆菌，特别是K1抗原者易引起肾盂肾炎，因K抗原具有抵制细胞吞噬的作用。目前治疗方法有：1.一般治疗：急性期应卧床休息，多饮水，维持营养；呕吐、高热者对症处理。2、药物治疗：(1)磺胺药：是初次感染首选药；(2)呋喃坦啶：对大肠杆菌效果显著；(3)根据尿培养细菌种类选用敏感药，慢性者联合治疗或轮换治疗；(4)中医药治疗。

肾石通是由金钱草、王不留行、

蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝、海金沙组成的纯中药复方制剂，目前剂型有颗粒剂、丸剂，具有清热利湿，活血止痛，化石，排石功能，临床广泛用于肾结石，肾盂结石，膀胱结石，输尿管结石治疗。肾石通治疗的结石为泌尿系结石(尿石症)，是泌尿外科的常见病。尿中形成结石晶体的盐类呈超饱和状态，尿中抑制晶体形成物质不足和核基质的存在，是形成结石的主要因素。泌尿系结石的治疗分手术与非手术两类。其中非手术疗法主要包括药物溶石、排石，腔镜取石，体外震波碎石等几大类。

目前尚无将肾石通用于治疗泌尿系感染的相关报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了肾石通制剂的新用途。

本发明提供了下述重量配比的原料制备而成的肾石通制剂在制备治疗泌尿系感的药物中的用途：

金钱草300-800份、炒王不留行300-800份、

蓄200-500份、醋制延胡索100-250份、烫鸡内金100-350份、丹参100-350份、木香50-200份、瞿麦150-400份、牛膝100-250份、海金沙100-350份。

进一步优选地，所述的原料重量配比为：金钱草375份、王不留行(炒)375份、

蓄225份、延胡索(醋制)112.5份、鸡内金(烫)150份、丹参150份、木香75份、瞿麦187.5份、牛膝112.5份、海金沙150份。

其中，所述的药物是治疗各种类型的泌尿系感染(上尿路感染：肾盂肾炎，下尿路感染：膀胱炎和尿道炎)的药物。

本发明药物组合物是由海金沙、王不留行装入布袋内，金钱草、蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝水提取物为活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是片剂、胶囊剂、丸剂或口服液。所述的片剂每片含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.10毫克；胶囊剂每粒胶囊含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.10毫克；丸剂每1g含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克；口服液每10ml含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克。

所述的制剂的制备方法包括如下步骤：

a、称取下述重量配比的原料：金钱草300-800份、炒王不留行300-800份、

蓄200-500份、醋制延胡索100-250份、烫鸡内金100-350份、丹参100-350份、木香50-200份、瞿麦150-400份、牛膝100-250份、海金沙100-350份；

b、取海金沙、王不留行装入布袋内；

c、将b步骤布袋内药味与金钱草、

蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏；

d、混匀加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

通过临床试验及动物药效试验证明，本发明药物能够治疗各种类型的泌尿系感染(上尿路感染：肾盂肾炎，下尿路感染：膀胱炎和尿道炎)，药效明确，有效率高，为临床提供了一种新的用药选择。

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备

1、处方：

金钱草375g、王不留行(炒)375g、蓄225g、延胡索(醋制)112.5g、鸡内金(烫)150g、丹参150g、木香75g、瞿麦187.5g、牛膝112.5g、海金沙150g

辅料：淀粉315g  硬脂酸镁2.5g  羧甲基淀粉钠10g

以上原辅料共制成本发明药物1000片。

2.工艺与操作

(1)取海金沙、王不留行装入布袋内备用。

(2)取布袋内海金沙、王不留行，金钱草、

蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝，置多功能提取罐中，加8倍量的水浸泡1h，按《多功能提取罐标准操作程序》规定的方法、参数进行煎煮，从沸腾开始计时，煎煮2.5h，放出药液滤过(80目筛)，泵入同一粗滤液贮罐。

(2)再向提取罐加入6倍量水，通蒸汽煮沸1.5h，放出药液，滤过(80目筛)，泵入同一粗滤液罐，备用。

(3)将粗滤液贮罐中的药液滤过(200目筛)，泵入精滤液贮罐。

(4)将精滤液贮罐中的药液(经检验合格)泵入各自的三效浓缩器中，按《三效浓缩器标准操作程序(SOP)》规定的温度压力和方法进行减压浓缩。

(5)当药液浓缩到相对密度为1.25-1.30(75～80℃测)时，放入洁净容器备用。药液的提取率应为8.0-11.5％

(6)按处方量计算所需淀粉重量，置一步制粒机中作底料，加热，使底料预热至65-70℃。用上工序的清膏作粘合剂，分次注入喷液小车喷液。按《制粒岗位技术安全操作法》和《FL-120型沸腾式制粒机标准操作程序》规定的方法、程序和设定的参数进行制粒。

(7)药液喷雾完毕，继续加热，升温至75-80℃的温度下，待颗粒水份含量在2.5-3.5％时停止干燥，出锅装入洁净容器中送整粒间整粒(颗粒收得率应为95-98％)。置旋涡式整粒机中，用1号筛和4号筛整粒。取整粒后合格的颗粒置洁净的桶式混合机中，加入0.5％的硬脂酸镁、2％的羧甲基淀粉钠，混匀；分装于洁净桶(袋)中，送压片室压片。

(8)按片重0.5g的规格配好上下冲，调节好充填量，并从40-60KN的压力下试压药片；试压药片经作硬度、重量差异、崩解时限检验均符合要求后，正式压制药片；在压制药片的过程中，要随时(一般8-10min)测定片重，并对填充量作相应调整，使片重始终处于合格范围。取压制好并经检验合格的药片装入洁净桶中，贴上写有品名、规格、批号、数量等内容的标签，送中间站等待包薄膜衣。

(9)按欧巴代(85660813)∶水＝1∶5的比例配制包衣液；将合格素片置包衣锅中加热，将片床控制在35-41℃之间，进风温度控制在80℃，雾化压力控制在2.5bar，包衣锅转速控制在10-15rpm，进料流速控制在3-5g/min；包衣后增重3％，包衣片后进行低温(40-50℃)干燥，30分钟后出锅，放入洁净容器中，贴上写有品名，批号、规格、数量、包衣日期和包衣人姓名的标签，送入中间站。收得率为96-98％。

(10)领取包装材料，并作好使用记录；凭质量部出具的半成品检验合格报告进行包装，包装前应仔细检查待包装药品与包装材料的品名、规格、批号、数量等是否相符，无误后方可包装；按每板12片的规格进行泡罩，在泡罩过程中注意设备运行速度和PVC、PTP热合的温度，泡罩板上的片粒数量，是否准确，批号是否清晰；在装盒、装箱的包装过程中，要随时检查包装质量，每件200盒装的，抽20个包装单位，不得有误差；12片1板装的抽检20个包装单位，任何一板不得有空穴(泡罩孔内无药片)盒上批号、生产日期、有效期清楚无漏打，错打现象。

实施例2本发明药物的制备

a、称取下述重量配比的原料：金钱草750g、王不留行(炒)750g、

蓄450g、延胡索(醋制)225g、鸡内金(烫)300g、丹参300g、木香150g、瞿麦375g、牛膝225g、海金沙300g。

b、取海金沙、王不留行装入布袋内；

c、将b步骤布袋内药味与金钱草、蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏1.20～1.25(75～80℃)；

d、加入淀粉，混匀，减压干燥(70℃，-0.07MPa)，粉碎成细粉，用水泛丸制成，即得本发明丸剂。

实施例3本发明药物的制备

a、称取下述重量配比的原料：金钱草300g、炒王不留行300g、蓄200g、醋制延胡索100g、烫鸡内金100g、丹参100g、木香50g、瞿麦150g、牛膝100g、海金沙100g；

b、取海金沙、王不留行装入布袋内；

c、将b步骤布袋内药味与金钱草、

蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠清膏；

d、混匀加入矫味剂，定溶，制备成口服液。

实施例4本发明药物的制备

a、称取下述重量配比的原料：金钱草800g、炒王不留行800g、

蓄500g、醋制延胡索250g、烫鸡内金350g、丹参350g、木香200g、瞿麦400g、牛膝250g、海金沙350g；

b、取海金沙、王不留行装入布袋内；

c、将b步骤布袋内药味与金钱草、

蓄、延胡索(醋制)、鸡内金(烫)、丹参、木香、瞿麦、牛膝加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏1.20～1.25(75～80℃)；

d、加入淀粉，混匀，制粒，加入硬脂酸镁，充填胶囊，即得本发明胶囊剂。

实施例5本发明药物的质量控制

取实施例1的制备的片剂进行质量控制：

1、定性鉴别：(1)取本品10片，除去薄膜衣后，研细，加乙醇30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用三氯甲烷提取2次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取鸡内金对照药材2g，加乙醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取本品6片，除去薄膜衣后，研细，加甲醇50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，分取乙醚层，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-甲醇(10∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取本品6片，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水25ml使溶解，用稀盐酸调pH至2，用乙醚提取2次，每次25ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(10∶4∶1.6)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、定量鉴别：照高效液相色谱法(中国药典2005年一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液(3∶2)为流动相；检测波长为370nm。理论板数以槲皮素峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含0.02mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约3g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加甲醇溶液30ml和盐酸1ml，置85℃水浴上回流1小时，冷却至室温，转入50ml量瓶中，用甲醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含金钱草、蓄以槲皮素(C₁₅O₁₀H₇)计，不得少于0.10mg。

按上述方法测定的胶囊剂每粒每粒胶囊含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.10毫克；丸剂每1g含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克；口服液每10ml含金钱草、

蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克。

以下通过临床试验及药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物临床试验

经郫县中医药研究所自2004年以来收集140例泌尿系感染患者服用本发明药物(实施例1制备的药物)。

一、诊断标准

1、西医诊断标准：参照《中药新药治疗泌尿系感染的临床研究指导原则》制定。

(1)、尿路感染的诊断

①正规清洁中段尿(要求尿停留在膀胱中4～6小时以上)细菌定量培养，菌落数≥10⁵/ml，2天内应重复培养1次。

②参考清洁离心中段尿沉渣检查，白细胞＞10/HP，或有尿路感染症状者。

具备上述①、②可以确诊。如无②则应再作尿菌计数复查，如仍≥10⁵/ml，且两次的细菌相同者，可以确诊。

③或作膀胱穿刺尿培养，如细菌阳性(不论菌数多少)，亦可确诊。

④作尿菌培养计数有困难者，可用治疗前清晨清洁中段尿(尿停留于膀胱4～6小时以上)，正规方法的离心尿沉渣革兰氏染色找细菌，如细菌＞1/油镜视野，结合临床泌尿系感染症状，亦可确诊。

⑤尿细菌数在10⁴～10⁵/ml之间者，应复查，如仍为10⁴～10⁵/ml，需结合临床表现来诊断或作膀胱穿刺尿培养来确诊。

(2)、上、下尿路感染的鉴别

符合上述尿路感染标准兼有下列情况者：

①尿抗体包裹细菌检查阳性者，多为肾盂肾炎，阴性者多为膀胱炎。

②膀胱灭菌后的尿标本细菌培养结果阳性者为肾盂肾炎，阴性者多为膀胱炎。

③参考临床症状，有发热(＞38℃)，或腰痛、肾区叩压痛或尿中有白细胞管型者，多为肾孟肾炎。

④经治疗后症状已消失。但又复发者多为肾孟肾炎(多在停药后6周内)；用单剂量抗菌药治疗无效或复发者多为肾孟肾炎。

⑤经治疗后仍留有肾功能不全表现，能排除其它原因所致者；或X线肾孟造影有异常改变者为肾盂肾炎。

(3)、急、慢性肾盂肾炎的鉴别

①尿路感染病史在1年以上，经抗菌治疗效果不佳，多次尿细菌定量培养均阳性或频繁复发者，多为慢性肾盂肾炎。

②经治疗症状消失后，仍有肾小管功能(尿浓缩功能等)减退，能排除其他原因所致者为慢性肾盂肾炎。

③X线造影证实有肾盂、肾盏变形，肾影不规则甚至缩小者多为慢性肾盂肾炎。

2、中医证候诊断标准：《中药新药治疗泌尿系感染的临床研究指导原则》制定。

下焦湿热证：突然尿频尿急，尿道灼热刺痛，尿色黄赤，少腹胀痛，或伴有寒热腰痛，恶心呕吐，舌质红，苔黄腻或白腻，脉弦数或滑数。

二、试验病例标准

1、纳入标准

凡符合本病诊断和中医辩证标准者，可纳入试验病例。

2、排除病例标准(包括不适应症或剔除标准)

(1)、尿道综合征(尿频-排尿困难综合征)：女性患者有明显的排尿困难、尿频，但无发热、白细胞增高等全身症状，多次尿细菌培养菌落数＜10⁵/ml，尿中、红白细胞数增加不明显(＜10/HP)。

(2)、血肌酐≥442μmol/L的慢性肾炎病例。

(3)、因尿路解剖畸形而发病的病例。

(4)、年龄在18周岁以下或65周岁以上，妊娠或哺乳期妇女，对本药过敏者。

(5)、合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病，精神病患者。

(6)、不符合纳入标准，未按规定用药，无法判断疗效或资料不全等影响疗效或安全判断者。

三、试验方法

本发明药物片剂，每次4片，每日口服2次，14天为一疗程。

四、观测指标

1、安全性观测

(1)、一般体检项目。

(2)、血、尿、便常规检查。

(3)、心电图、肝功、(ALT、AST、A/G)、肾(BUN、Cr)功能检查。

(4)、可能出现的不良反应，包括不良反应的临床表现、检测指标异常、严重程度、处理方法，以客观评价其安全性。

治疗前、治疗后各检查记录一次。

2、疗效性观测

(1)、症状：小便频急短数、灼热刺痛；尿液黄赤；发热恶寒、高热；口渴喜冷饮；少腹胀痛、腰痛；口苦、呕恶；舌质红、苔黄腻或白腻、脉弦数或滑数。

(2)、体征：体温、腰痛拒按、肾区叩痛、肾脏大小、膀胱、输尿管压痛。

舌色(红)；舌形(裂纹、芒刺)；苔(白腻、黄腻)，津液(多、少、干)；唇色(淡、红)；唇干、唇焦等。

脉象：滑、数。

症状与体征程度以0、1、2、3表示。

(3)、尿细菌学检查：用药前观察记录1次。治疗期间每周观察记录1次，6周观察记录1次。

(4)、尿常规、血常规：用药前观察记录1次，治疗期间每周观察记录1次，6周观察记录1次。

三、疗效判定标准

1、疾病疗效判定标准

(1)、临床治愈：用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥95％。尿常规检查2次恢复正常，尿菌阴性，并于第2、6周复查尿菌1次，均为阴性，

(2)、显效：用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥70％。尿常规正常或接近正常，尿菌阴性。

(3)、有效：用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥30％。尿常规显著改善，尿培养偶有阳性。

(4)、无效：用药1个疗程后，症状、体征积分减少＜30％。尿常规改善不明显，尿菌定量检查仍阳性，或于第2、6周复查时尿菌为阳性，且为同一菌种。

2、中医证候疗效判定

根据积分法判定中医证候疗效(采用尼莫地平法)：

临床痊愈：n≥95％

显效：n≥70％

有效：n≥30％

无效：n＜30％

四、临床结果(见下表：)

泌尿系感染患者服用本发明药物临床结果观察表

本发明药物对泌尿系感染总有效率达95.00％；对肾盂肾炎总有效率达96.67％；对膀胱炎总有效率达92.50％；对尿道炎总有效率达95.00％。证明本发明药物治疗泌尿系感染有效率高，药效明确。

试验例2本发明药物对急性肾盂肾炎大鼠模型治疗作用的实验

1、实验材料

1.1动物健康雄性SD系大鼠50只，体重200～250g，平均(227±20)g，成都中医药大学实验动物研究中心，合格证号：SCXK(川)2004-11。

1.2菌种大肠杆菌O₁₁₁B₄标准菌株，购自北京生物制品检定所。试验用O₁₁₁B₄菌液，将标准菌株，经传种后制备成浓度为3～5×10⁴/ml细菌悬液备用。

1.3药物本发明药物(实施例1制备)，药物含量：3.825g生药/g浸膏粉，由实施例1制备。三金片为市售片剂，批号：040901为桂林三金集团产品。

2、实验方法

2.1动物分组

将检疫合格的50只大鼠以计算机完全随机为5组，即正常对照组、模型组、本发明药物I组、本发明药物II组及三金片组。

2.2造模方法

禁水18h，乙醚麻醉后固定在解剖板上，无菌条件下切开下腹正中，暴露左侧后腹壁，辨认清左侧输尿管，用穿4号丝线的角针由输尿管中段两侧分别向后腹壁外侧穿针。暴露膀胱，除正常对照组外，其他4组动物分别用TB针抽取已配制的大肠杆菌O₁₁₁B₄菌液0.75ml缓慢注入膀胱，正常对照组以同样方法注入生理盐水，然后拉紧腹壁外侧的丝线两端，以适当松紧度结扎输尿管。清理腹腔，缝合切口，恢复饮水和喂饲。术后20h，拆去腹壁外侧的输尿管结扎线。

3、给药方法

各组动物手术后次日开始给药，本发明药物I组、II组分别灌服本发明药物0.533g/kg，1.067g/kg；三金片组灌服三金片混悬液0.5g/kg；正常对照组及模型组给与等容量蒸馏水。每日1次，连续14d。

4、观察指标

手术后第14d，给药6h后处死动物。处死动物前用小夹子夹住尿道外口，防止尿液流出，处死动物后剖开腹部取出左右肾脏。

4.1肾脏大体观察肉眼观察双肾大小及表面，并称重，然后沿最大切面纵行切开肾脏，观察纵切面。

4.2细菌学检查无菌操作下直接抽取膀胱尿液，接种于平板培养基上。取1/2左肾组织制成匀浆作倾注培养。以上均于37℃24h培养后，观察细菌生长情况。

4.3病理学检查将纵切的另1/2左肾置10％甲醛中固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，进行光学显微镜检查。

5、统计学方法

数据以(x±s)表示，采用t检验，P＜0.05示有统计学意义。

6、结果

6.1肾脏大体观察治疗各组动物的肾脏无明显差异，每组皆有少数动物左肾表面不光滑，切面苍白，肾盂轻度扩张，左右肾平均重量无明显差异。正常对照组肾脏外观和切面未见明显病理改变。模型组动物左肾明显大于右肾，肾表面苍白，包膜紧张，后肾实质有粘连，部分动物肾表面不光滑，纵切面见有大小不等的脓肿，肾盂扩张，有的有少量脓性分泌物。各种动物同体左右肾重量比见下表。

大鼠双侧肾脏平均重量和平均重量比(n＝10，x±s)

注：与对照组比较，^△P＜0.05；与模型组比较，^*P＜0.05

6.2左肾组织病理学观察模型组多数动物肾盂粘膜充水肿，粘膜下大量中性白细胞浸润，肾内可见大小不等的脓肿，少数肾小管内可见脓细胞和管型。3个给药组动物的左肾病理改变明显轻于模型组，多数左肾内可见散在中性粒细胞浸润，髓质血管充血，少数肾脏内可见微小化脓灶，灶内中性粒细胞聚集。本发明药物II组动物的病理改变最轻，仅在少数患者肾脏内见到中性粒细胞浸润，多数肾脏结果正常。

6.3细菌培养

6.3.1尿液细菌培养尿液细菌培养结果见下表。3个给药组尿液细菌培养阳性动物数明显少于模型组。其中本发明药物II组阳性动物数最少，而本发明药物I组与三金片组阳性动物数相同。

尿液细菌培养结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

6.3.2左肾组织细菌培养左肾组织匀浆细菌培养结果见下表。本发明药物I、II组与三金片组相似，肾脏细菌培养阳性动物数明显少于模型组。

左肾组织匀浆细菌培养结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

本次动物实验研究，实验检测结果证明，模型组左/右肾比值显著高于3个治疗组，对照组与治疗组比无明显差异，说明本发明药物、三金片治疗实验性急性肾盂肾炎有效。尿路感染的确诊主要依靠尿液中培养出一定数量的细菌，3组药物均能有效地抑制患鼠尿液和左肾组织中细菌的生长，疗效以本发明药物II组为最优。病理切片亦显示，3个治疗组均能改善患肾的病理组织状态，其中本发明药物II组患肾结构基本正常，表明本发明药物是治疗实验性急性肾盂肾炎的有效药物。

试验例3本发明药物对慢性肾盂肾炎小鼠免疫功能调节作用的实验评价

1、实验材料

1.1动物选用昆明种雄性小鼠60只，体重为20±2g，鼠龄8周。成都中医药大学实验动物研究中心，合格证号：SCXK(川)2004-11。

1.2菌种大肠杆菌O₁₁₁B₄标准菌株，购自北京生物制品检定所。试验用O₁₁₁B₄菌液，将标准菌株，经传种后制备成浓度为3～5×10⁴/ml细菌悬液备用。

1.3药物本发明药物(实施例1制备)，药物含量：3.825g生药/g浸膏粉，由实施例1制备。氟哌酸，规格100mg/片，哈尔滨制药六厂，批号：040703。复方新诺明，含磺胺甲唑400mg/片，金甲氧苄啶80mg/片，广州白云山制药厂，批号：040705。先锋霉素IV，规格0125g/片，哈尔滨制药总厂，批号040808。呋喃坦啶，规格50mg/片，天津力生制药厂，批号040906。

1.4主要试剂致病性大肠杆菌O₁₁₁B₄诊断血清，购自卫生部兰州生物制品研究所；羊抗兔IgG血清、酶标抗体，购自中国军事医学科学院微生物流行病研究所；兔抗羊IgG酶标抗体，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；兔抗鼠IL-2、IL-6，购自美国PeproFec Ecltd公司；放线菌D，美国sigma产品；羊抗兔IgG辣根过氧化物酶标记、邻苯二胺，北京天象人公司；大鼠抗小鼠IgA、IgG、2YMED公司产品；大鼠抗小鼠CD4⁺、CD8⁺、CD3⁺单克隆抗体，购自北京邦定生物医学公司。

2、实验方法

2.1动物分组

将检疫合格的60只小鼠以计算机完全随机为4组，即正常对照组(10只)、模型组(30只)、本发明药物组(10只)及西药组(10只)。

2.2造模方法

术前禁水24小时，戊巴比妥腹腔麻醉，用橡皮筋牵拉固定于自制操作台上，腹部常规消毒，下腹部正中切口0.18cm，暴露右侧输尿管，用缝合线将其拉向右侧，并使输尿管被牵拉至约135°角时，以适宜的松紧度固定于右侧腹壁。挤出膀胱内残尿，用微量移液器向膀胱内注射大肠杆菌悬液，至膀胱充盈尿道口流出为止，约注入0.12ml，缝合切口，恢复饮水，24小时拆去右侧腹壁外输尿管的固定线，恢复正常饲养。

3、给药方法

各组动物手术后30天开始给药。本发明药物组：灌服本发明药物0.667g/kg；西药组：按氟哌酸、复方新诺明、呋喃旦啶、先锋IV的顺序各服15天，按20g小鼠每日服用成人剂量的0.0026倍计算药量，并将药品配成所需浓度的悬浊液，每日0.12ml/次灌胃；正常对照组及模型组给与等容量蒸馏水。每日1次，连续60天。

4、观察时间、指标

观察时间：实验模型动物分别于术后30天、60天、90天处死，观察不同时期的病理变化。正常组、治疗组90天处死，进行观察。每次处死10只动物。

观察指标：取部分肾组织做HE染色进行观察，部分肾组织用免疫酶标法做免疫组织化学检测。

5、统计学方法

数据以(x±s)表示，采用t检验，P＜0.05有统计学意义。

6、结果

6.1HE染色

(1)、模型组：30天：患肾体积开始缩小，表面色浅。镜下见化脓灶消失，炎细胞弥漫浸润，以浆细胞为主，淋巴细胞和巨噬细胞明显增多，且有淋巴滤泡样结构形成，此区域内肾组织结构消失。60天：患肾明显萎缩，表面凹凸不平。镜下见炎细胞转为灶性浸润，以处于不同活化状态的淋巴细胞为主，伴大量浆细胞和巨噬细胞。病变区域大部分肾组织结构消失，皮髓界线不清，间质及肾小管破坏，数目减少，肾小球受到破坏，残存的肾球囊扩张形成囊腔，囊间相互融合形成囊状结构。90天：患肾进一步萎缩，病变区域几乎没有正常组织，代之以大小不等的囊腔。炎细胞以活化的淋巴细胞为主，伴有浆细胞和逐渐增多的巨噬细胞。病变区域和正常区域界线清楚，但病变区域在逐渐扩大，邻近的正常肾组织受到溶解破坏。

(2)、西药组：服药后60天，四种药全部服完，患肾仍明显萎缩。镜下病变累及全部肾组织，肾小管数目减少，肾小球间距缩小，数目减少，球囊扩张，囊腔大小不等，间质内大量炎细胞浸润，成分与模型组90天相同，其中残存的肾组织仍继续受到破坏。

(3)、本发明药物组：服药60天后，多数病例可见陈旧性病灶，肾小管受到破坏，肾小球间距缩小，或有共壁现象，肾球囊及部分肾小管扩张，但无炎细胞浸润，与模型组及西药组相比，肾脏虽受到过破坏，但目前已稳定，无继续破坏现象。

6.2肾组织免疫组化检测结果

6.2.1T细胞及其亚群检测结果

服药60天后，西药组和模型组CD3⁺、CD4⁺阳性细胞数及CD4⁺/CD8⁺高于正常水平，与正常组相比有显著差异(P＜0.05)。CD8⁺阳性细胞数低于正常组，且与正常组间差异显著(P＜0.05)，中药组各项指标趋于正常水平，与正常组相比无显著差异(P＞0.05)，与西药组相比差异显著。

服药60天后，各组肾组织中T细胞及其亚群检测结果(x±S)

注：^※P＜0.05(与西药组及模型组相比)、^△P＞0.05(与正常组相比)、^×P＜0.05(与正常组相比)

6.2.2免疫球蛋白检测结果

模型组90天时肾组织局部IgA、IgG含量高于正常水平(P＜0.05)，服药60天后，西药组IgA、IgG含量与正常组相比差异显著，明显高于正常水平(P＜0.05)，中药组IgA、IgG含量趋于正常水平，与正常组相比差异不显著(P＞0.05)。

用药60天后，各组肾组织中免疫球蛋白IgA、IgG含量检测结果(x±S)

注：^※P＜0.05(与西药组及模型组相比)、^△P＞0.05(与正常组相比)、^×P＜0.05(与正常组相比)

6.2.3肿瘤坏死因子(TNF)检测结果

模型组肾组织TNF含量高于正常水平(P＜0.05)，服药后西药组TNF含量与正常组相比明显高于正常水平(P＜0.05)，中药组TNF含量趋于正常水平，与正常组相比差异不显著(P＞0.05)。

服药60天后，各组肾组织局部TNF含量检测结果(x±S)

注：^※P＜0.05(与西药组及模型组相比)、^△P＞0.05(与正常组相比)、^×P＜0.05(与正常组相比)

实验结果证实本发明药物可使异常的免疫指标基本恢复正常，这一作用可能是通过清除抗原、减少抗体沉积、调节细胞免疫而调整免疫应答，抑制变态反应，减轻免疫病理损伤实现的，从而使免疫调控系统和免疫细胞之间的网络关系趋于稳定，机体的免疫力得到增强，从而控制复发，充分地证实了本发明药物为治疗慢性肾盂肾炎的理想药物。

试验例4本发明药物对膀胱炎大鼠模型治疗作用的实验

1、实验材料

1.1动物健康雌性SD系大鼠80只，体重200～250g，平均(230±25)g，成都中医药大学实验动物研究中心，合格证号：SCXK(川)2004-11。

1.2菌种DH5α大肠埃希菌标准菌株，购自四川省食品药品检验所。试验用DH5α大肠埃希菌液，将标准菌株，经传种后制备成浓度为10⁸～10⁹CFU/100μL浓度细菌悬液备用。

1.3药物本发明药物(实施例1制备)，药物含量：3.825g生药/g浸膏粉，由实施例1制备。三金片为市售片剂，批号：050101为桂林三金集团产品。

2、实验方法

2.1动物分组

将检疫合格的80只大鼠以计算机完全随机为4组，即正常对照组、模型组、本发明药物组及三金片组。

2.2造模方法

1％的戊巴比妥钠按照30mg/kg剂量腹腔注射麻醉SD大鼠，仰卧固定大鼠，常规消毒会阴部。将无菌硬膜外导管用无菌液体石蜡润滑后，提起尿道外口的皮肤，沿尿道后壁插入尿道3cm以上。通过抽吸导管排除大鼠残余尿液，分别用1ml注射器向大鼠膀胱注入0.2ml大肠埃希菌溶液。然后退出导管，将大鼠放入鼠笼等待自然苏醒。除正常对照组外，其他3组动物分别每隔2天向膀胱内灌注DH5α大肠埃希菌的溶液，共15次。

3、给药方法

各组动物30天造模后开始给药(造模成功后)。本发明药物组灌服本发明药物0.533g/kg；三金片组灌服三金片混悬液0.5g/kg；正常对照组及模型组给与等容量蒸馏水。每日1次，连续14d。

4、观察指标

30天造模后，给药第14d，给药8h后处死动物。处死动物前用小夹子夹住尿道外口，防止尿液流出。仰卧固定，剪开会阴部皮肤，提起大鼠膀胱底部，分离致尿道近端剪断，取出膀胱后，观察膀胱的大体形态，无菌操作下直接抽取膀胱尿液后，迅速将膀胱体部和膀胱三角固定在10％的甲醛溶液中。标本经10％甲醛溶液中固定、流水冲洗，再行酒精脱水，然后经过二甲苯透明两次。将透明后的标本浸蜡。浸蜡后，将标本用硬蜡包埋做好标签。把包埋后的蜡块修切，通过连续常规切片、展片、HE染色。

4.1膀胱病理观察观察各组大鼠膀胱大体形态，和膀胱三角区黏膜大体外观。做好切片，置于10倍放大镜下观察膀胱黏膜固有层是否有炎性细胞浸润、腺体样结构、囊腔和Brunn巢结构。

4.2细菌学检查无菌操作下直接抽取膀胱尿液，接种于平板培养基上。于37℃24h培养后，观察细菌生长情况。

5、统计学方法

数据以(x±s)表示，采用t检验，P＜0.05示有统计学意义。

6、结果

6.1膀胱大体病理观察取标本过程中，观察各组大鼠膀胱大体形态和膀胱三角区黏膜大体外观。发现正常组大鼠膀胱外观正常，膀胱三角黏膜光滑，颜色均一淡红；本发明药物组大鼠膀胱外观正常，18只膀胱三角区黏膜与正常组黏膜类似，2只膀胱三角区有充血表现；三金片组大鼠膀胱外观正常，16只膀胱三角区黏膜与正常组黏膜类似，4只膀胱三角区有充血表现；模型组5只大鼠膀胱增大，膀胱壁明显增厚，20只大鼠膀胱三角区黏膜全部明显充血，未见明显滤泡和绒毛。

6.2膀胱黏膜显微镜下病理改变正常组：膀胱黏膜正常，细胞大小一致，未见Bruun巢，腺体细胞和炎症细胞浸润。本发明药物组：2只可见膀胱三角区有少许炎性细胞浸润，未见Bruun巢，腺体细胞和炎症细胞浸润。三金片组：4只可见膀胱三角区有少许炎性细胞浸润，其中1只可见黏膜固有层出现Brunn巢及囊腔。模型组：所有大鼠膀胱黏膜均有炎性细胞浸润，15只膀胱三角区黏膜固有层出现Brunn巢及囊腔。其中5只同时出现腺体样结构。

6.3膀胱炎治疗结果膀胱炎治疗结果见下表。两个给药组能明显治疗膀胱炎。

膀胱炎治疗结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

6.4尿液细菌培养

尿液细菌培养结果见下表。2个给药组尿液细菌培养阳性动物数明显少于模型组。

尿液细菌培养结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

本次动物实验研究结果证明，本发明药物是治疗膀胱炎的有效药物。

试验例5本发明药物对非淋菌性尿道炎大鼠模型治疗作用的实验

1、实验材料

1.1动物健康SD系大鼠80只，雌雄各半，体重200～250g，平均(225±30)g，成都中医药大学实验动物研究中心，合格证号：SCXK(川)2004-11。

1.2菌种解脲支原体(Uu)标准菌株，购自北京生物制品检定所。将Uu4冻干菌株连续传代3次，取第三代对数生长期菌液(10⁶ccu/ml)，用其相应培养基稀释至1×10⁵ccu/ml作为工作液。

1.3药物本发明药物(实施例1制备)，药物含量：3.825g生药/g浸膏粉，由实施例1制备。三金片为市售片剂，批号：040901为桂林三金集团产品。

2、实验方法

2.1动物分组

将检疫合格的80只大鼠以计算机完全随机为4组，即正常对照组、模型组、本发明药物组及三金片组。

2.2造模方法

禁水18h，用2％戊巴比妥钠按2ml/kg麻醉，脱毛、消毒后打开腹腔，暴露膀胱，抽尽膀胱内尿液，然后再向膀胱内注射0.5ml解脲支原体悬液(10⁵ccu/ml)，缝合腹腔。

3、给药方法

各组动物手术后次日开始给药，本发明药物组灌服本发明药物0.533g/kg；三金片组灌服三金片混悬液0.5g/kg；正常对照组及模型组给与等容量蒸馏水。每日1次，连续14d。

4、观察指标

手术后第14d，给药8h后处死动物。处死动物前用小夹子夹住尿道外口，防止尿液流出。

4.1尿道组织光镜检查将大鼠处死后，取尿道组织，用10％福尔马林固定，常规脱水，浸蜡，切片，HE染色，光镜下进行病理组织学检查。

4.2黏膜细胞结构透射电镜检查取中段尿道组织立即浸入2.5％，pH7.2戊二醛溶液中固定，进行投射电镜相关检查。

4.3细菌学检查无菌操作下直接抽取膀胱尿液，接种于平板培养基上。于37℃24h培养后，观察细菌生长情况。

5、统计学方法

数据以(x±s)表示，采用t检验，P＜0.05示有统计学意义。

6、结果

6.1尿道组织光镜检查结果

尿道组织光镜检查结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

6.2黏膜细胞结构透射电镜检查结果

黏膜细胞结构透射电镜检查结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05。黏膜细胞存在病变为：细胞核形不规则、畸变明显，核膜下出现高度明显浓缩染色质，胞质内有大量线粒体出现嵴性肿胀或空泡变性，胞质内出现大量次级溶酶体颗粒。细胞间可见大量浆液性物质。固有层见大量粒细胞浸润。

6.3尿液细菌培养尿液细菌培养结果见下表。2个给药组尿液细菌培养阳性动物数明显少于模型组。

尿液细菌培养结果

注：与模型组比较，^*P＜0.05

本次动物实验研究表明本发明药物能有效治疗大鼠非淋菌性尿道炎，为本发明药物临床应用提供有力药效学支撑。

试验例6对大鼠排尿量的影响：

本发明药物低(0.267g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的4倍)、中(0.533g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的8倍)、高(1.067g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的16倍)剂量组和肾石通颗粒(4g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.5g/(kg·d)的8倍)组大鼠连续ig给7天，盐水负荷大鼠末次给药后累积尿量较生理盐水组均有所增多，给药两小时尿量具有统计学差异(P＜0.05～0.01)。

试验例7对发热家兔体温的影响：

本发明药物低中高三个剂量组与模型组比较，基础体温无显著性差异，低剂量组注射伤寒vi多糖菌苗后，各时间点体温与模型组比较无显著性差异，注射伤寒vi多糖菌苗后，中剂量组140、180分钟和高剂量组60、100、140、180、220、260分钟体温与模型组比较有显著性差异。

本发明药物低剂量组与模型组相比较，各时间点体温升高值无显著性差异，中、高剂量组各时间点体温升高值有极显著性差异。

本发明药物中、高剂量组对发热家兔体温有降低作用，其起效剂量为0.133g/kg。

试验例8镇痛作用：

本发明药物中(0.667g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的10倍)、高(1.333g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的20倍)剂量组和肾石通颗粒(5g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.5g/(kg·d)的10倍)组对热板致小鼠舔后足反应有明显影响(P＜0.05)；对醋酸致小鼠扭体反应有明显的抑制作用(P＜0.05～0.01)，也能明显延长扭体潜伏时间(P＜0.05)。表明本发明药物有一定的镇痛作用。

试验例9抗炎作用：

本发明药物中(0.667g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的10倍)、高(1.333g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的20倍)剂量组和肾石通颗粒(5g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.5g/(kg·d)的10倍)组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有明显的抑制作用(P＜0.05～0.01)，对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用(P＜0.05～0.01)，对小鼠棉球肉芽肿都有抑制作用(P＜0.05)；本发明药物中(0.533g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的8倍)、高(1.067g/(kg·d)相当于临床日公斤剂量(0.0667g/(kg·d)的16倍)剂量组和肾石通颗粒(4g/(kg·d)组还能明显抑制由角叉菜胶(注射后第3和4h)引起的大鼠足肿胀(P＜0.01)；结果表明本发明药物对急、慢性炎症有明显的抑制作用。

试验例10体外抗菌作用：

本发明药物对金黄色葡萄球菌、肠球菌、类白喉杆菌和溶血性链球菌有较强的抑制和杀灭作用，相应的MIC依次为7.813mg/ml、7.813mg/ml、7.813mg/ml和15.625mg/ml，MBC均为15.625mg/ml。本发明药物对大肠埃希菌、伤寒沙门菌及肺炎克雷伯菌有一定的抑制和杀灭作用，MIC均为125mg/ml，MBC均为250mg/ml。本发明药物对铜绿假单胞菌没有抑制作用。

上述药效学实验研究表明：本发明药物具有除湿利尿、解热镇痛、抗菌抗炎作用，能够有效治疗泌尿系感染疾病；动物模型实验证实进一步证实本发明药物能够有效治疗急、慢性肾盂肾炎，膀胱炎，尿道炎。

Claims (8)

1、下述重量配比的原料制备而成的药物组合物在制备治疗泌尿系感染的药物中的用途：

金钱草300-800份、炒王不留行300-800份、萹蓄200-500份、醋制延胡索100-250份、烫鸡内金100-350份、丹参100-350份、木香50-200份、瞿麦150-400份、牛膝100-250份、海金沙100-350份。

2、根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的原料重量配比为：金钱草375份、炒王不留行375份、萹蓄225份、醋制延胡索112.5份、烫鸡内金150份、丹参150份、木香75份、瞿麦187.5份、牛膝112.5份、海金沙150份。

3、根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗上尿路感染或下尿路感染的药物。

4、根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的治疗上尿路感染的药物是治疗急、慢性肾盂肾炎的药物；所述的治疗下尿路感染的药物是治疗膀胱炎，尿道炎的药物。

5、根据权利要求1-4任意一项所述的用途，其特征在于：它是海金沙、王不留行装入布袋内，金钱草、萹蓄、醋制延胡索、烫鸡内金、丹参、木香、瞿麦、牛膝水提取物为活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

6、根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的制剂是片剂、胶囊剂、丸剂或口服液。

7、根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于：所述的片剂每片含金钱草、萹蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.10毫克；胶囊剂每粒胶囊含金钱草、萹蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.10毫克；丸剂每1g含金钱草、萹蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克；口服液每10ml含金钱草、萹蓄以槲皮素C₁₅O₁₀H₇计，不得少于0.18毫克。

8、根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于：所述的制剂的制备方法包括如下步骤：

a、称取下述重量配比的原料：金钱草300-800份、炒王不留行300-800份、萹蓄200-500份、醋制延胡索100-250份、烫鸡内金100-350份、丹参100-350份、木香50-200份、瞿麦150-400份、牛膝100-250份、海金沙100-350份；

b、取海金沙、王不留行装入布袋内；

c、将b步骤布袋内药味与金钱草、萹蓄、醋制延胡索、烫鸡内金、丹参、木香、瞿麦、牛膝加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏；

d、混匀加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。