CN101579370A - 一种稳定的葫芦素液体制剂及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种稳定的葫芦素液体制剂，包含葫芦素和鸭胆子油。所述液体制剂还可以含有其它液体脂肪和/或抗氧化剂。本发明还涉及一种以所述稳定的葫芦素液体制剂为活性成分的药物，所述药物可以制成注射剂、口服剂、滴丸、乳剂、软胶囊、液体硬胶囊或混悬液。本发明所述的稳定的葫芦素液体制剂具有治疗慢性肝炎、肝硬化、肿瘤、癌症等疾病。鸭胆子油和葫芦素不仅具有协同增效作用，而且鸭胆子油对葫芦素还具有很好的溶解作用和抗氧化作用。

Description

一种稳定的葫芦素液体制剂及其生产方法

技术领域

本发明涉及一种稳定的葫芦素液体制剂，具体地说，涉及包含葫芦素与鸭胆子油的葫芦素液体制剂，本发明还涉及一种以所述液体制剂为活性成分的药物，以及它们用于慢性肝炎、肝硬化、肿瘤、癌症的医药用途。属于医药领域。

背景技术

葫芦素是一类四环三萜化合物，通常提取自葫芦科植物、十字花科、玄参科、秋海棠科、杜英科、四数木科以及一些大型真菌。葫芦素主要含有葫芦素B、葫芦素E、异葫芦素B、双氢葫芦素B等。我国古代就采用葫芦科植物甜瓜的瓜蒂治黄疸病，又能催吐、祛痰，用于痰涎宿食。上世纪60年代开始随着葫芦素化学结构的确立，国外有人研究其抗肿瘤作用。国内70年代初从中药甜瓜蒂中分离出葫芦素B、E等成分，并进行了抗肿瘤、免疫增强和抗肝炎等药理研究。报道的药理作用有：细胞毒与抗癌作用；抗化学致癌作用；保肝、抗肝炎作用；提高免疫功能；对心血管的作用；抗炎；抑制肝纤维增生的作用。

葫芦素难溶于水，如果制成固体制剂，体外溶出波动较大，且溶出速度慢，不利于临床治疗；同时葫芦素含有双键，因此易被氧化降解。因此目前葫芦素药物制剂普遍存在生物利用度差、有效期短的缺陷。

申请号为200710011513.2的发明专利申请提供了一种葫芦素液体制剂，由葫芦素、中链甘油三酯和维生素E组成。其中，中链甘油三酯能提高葫芦素的溶解度，维生素E为抗氧化剂，能提高葫芦素的稳定性。该公开的专利申请中，已经披露了中链甘油三酯对葫芦素具有增溶和溶解作用，可以制成稳定的液体制剂。但中链甘油三酯对葫芦素的溶解作用依然有限，难以满足制药和制剂的需要。

发明内容

本发明令人意外地发现，鸭胆子油和葫芦素组成的复方制剂时，不仅具有协同增效的作用，而且鸭胆子油对葫芦素具有令人惊讶的溶解作用，从而完成本发明。

本发明的目的在于提供一种稳定的葫芦素液体制剂，所述液体制剂包含鸭胆子油和葫芦素。

本发明上述所述的稳定的葫芦素液体制剂，包含鸭胆子油和葫芦素，按重量比计，鸭胆子油∶葫芦素为1-5000∶1-5000。鸭胆子油和葫芦素在上述比例范围内配置，所得液体制剂可以满足临床用药的要求。作为优选，按重量比计，鸭胆子油∶葫芦素为1-500∶1-500；进一步优选，按重量比计，鸭胆子油∶葫芦素为1-200∶1-200。

作为本发明的另一种实施方式，所述稳定的葫芦素液体制剂还可以包含其它液体脂肪，加入其它液体脂肪后，可以进一步提高葫芦素的溶解度。脂肪分为液体脂肪和固体脂肪，液体脂肪也称为油，固体脂肪也称为脂。液体脂肪按分子中碳链长度分为短链液体脂肪、中链液体脂肪和长链液体脂肪。短链液体脂肪的碳链中碳原子个数少于6个；中链液体脂肪的碳链中碳原子个数为6-12，常用的中链液体脂肪有中链甘油三酯或辛或葵酸甘油酯；长链液体脂肪的碳链中碳原子个数超过12个，常用的长链液体脂肪有长链甘油三酯、大豆油、花生油、玉米油、低芥酸菜籽油、葵花子油、棉籽油、芝麻油、棕榈油、橄榄油、椰子油。在本发明中，所述液体脂肪优选使用中链液体脂肪和/或长链液体脂肪中的一种或几种。其中中链甘油三酯或长链甘油三酯，特别是中链甘油三酯，对葫芦素的增溶作用要优于其它液体脂肪。本发明所述液体脂肪进一步优选中链甘油三酯和/或长链甘油三酯，最优选单独使用中链甘油三酯。

本发明所述的液体制剂中，液体脂肪的用量没有特别限制。作为选择，按重量比计算，液体脂肪∶葫芦素为1-5000∶1-5000，其中优选地为1-500∶1-500，更优选1-200∶1-200。

作为本发明的另一种实施方式，所述稳定的葫芦素液体制剂还可以包含抗氧化剂，加入抗氧化剂后，可以进一步提高葫芦素液体制剂的稳定性。本发明所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、特丁基对苯二酚、没食子酸丙酯、异抗坏血酸钠、植酸、茶多酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸钙、甘草抗氧化物、维生素E、油酸、亚油酸中的一种或几种，优选使用维生素E。

本发明还提供了一种药物，所述药物以本发明所述的稳定的葫芦素液体制剂为活性成分，还包括其它药学上可以接受的辅料，例如乳化剂、填充剂、黏合剂、助流剂等等。相比现有技术中的含葫芦素的药物，本发明提供的药物具有有效成分含量高、有效期长的优点，可有效治疗肿瘤或癌症等疾病。由于提高了药物的有效期，更方便患者使用，减少了因失效而造成的浪费。为了便于临床应用，本发明所述药物可以制成各种剂型，如注射剂、口服剂、滴丸、乳剂、软胶囊、液体硬胶囊、混悬液，优选制成注射剂。本发明所述的具有抑制肿瘤作用的药物的各种剂型可以采用药剂学领域常规的生产方法制备。

为了保证本发明所述药物具有足够的治疗效果，由所述药物制备的各种制剂应含有足量的有效成分，即由所述药物制备的各种制剂中，每单位制剂含0.1mg-1000mg所述稳定的葫芦素液体制剂。

本发明所述的任意一种稳定的液体制剂以及以所述液体制剂作为活性成分的药物在制备治疗慢性肝炎、肝硬化、肿瘤、癌症的药物中的用途。葫芦素具有抗肝炎、抗癌抗肿瘤和增强免疫力的作用；鸭胆子油具有抗癌抗肿瘤的作用。这两种物质同时应用可发挥协同治疗的作用，对癌症和肿瘤的治疗作用大于单独使用葫芦素或鸭胆子油。因此本发明所述的稳定的液体制剂可用于制备治疗慢性肝炎、肝硬化、肿瘤、癌症的药物。

本发明所述的葫芦素是一类四环三萜化合物，可以从葫芦科、十字花科、玄参科、秋海棠科、杜英科、四数木科等植物以及一些大型真菌中提取，本发明优选使用从葫芦科植物甜瓜中提取的葫芦素，其中葫芦素B含量不低于60％。本发明所述的鸭胆子油是从中药鸭胆子中提取出来的油酸类成分，是一种黄棕色液体，具有鸭胆子特有的气味，具有抗癌抗肿瘤的作用。

因为葫芦素和鸭胆子油都具有抗癌抗肿瘤的作用，同时使用葫芦素和鸭胆子油，可以发挥二者的协同治疗作用，其对癌症和肿瘤的治疗作用大于单独使用葫芦素或鸭胆子油。更重要的是，本发明发现鸭胆子油对葫芦素具有出人意料的增溶作用，葫芦素在鸭胆子油中的溶解度大大优于现有技术；同时加入鸭胆子油后的葫芦素具有很强的抗氧化作用，从而不需要另加抗氧化剂即可得到稳定的葫芦素液体制剂。

下面通过实验说明本发明的有益效果。

一、溶解性试验

本试验考察在常温下，葫芦素在大豆油、中链甘油三酯、鸭胆子油、鸭胆子油和中链甘油三酯混合物中的溶解度，结果如表1所示：

表1葫芦素在不同配方中的溶解度

溶剂	大豆油	中链甘油三酯	鸭胆子油	鸭胆子油∶中链甘油三酯(1∶1)
					溶解度(mg/g)	1.69	3.36	6.01	7.31

与申请号为为200710011513.2的现有技术相比，本发明使用鸭胆子油溶解葫芦素，可以使葫芦素的溶解度提高78.87％。因此鸭胆子油对葫芦素具有出人意料的增溶作用。同时使用鸭胆子油和中链甘油三酯作为溶剂，可以进一步提高葫芦素的溶解度，与现有技术相比，可以使葫芦素的溶解度提高115.2％。

二、稳定性试验

本试验考察葫芦素在不同溶剂中形成液体制剂的稳定性。在80℃下加速破坏3天，检测溶液中葫芦素的剩余含量，试验结果如表2所示。

采用HPLC法检测葫芦素，所用试剂均为色谱纯。

HPLC条件：色谱柱：Diamonsil C₁₈(200×4.6mm，5μm，迪马公司)；流动相：乙腈-水-磷酸(45∶55∶0.1)；紫外检测波长：228nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量：20μl。

表280℃下加速破坏3天后葫芦素的剩余含量

溶剂

大豆油

中链甘油三酯

鸭胆子油

大豆油+5％维生素E

中链甘油三酯+5％维生素E

鸭胆子油+5％维生素E

葫芦素的剩余含量(％)

42.8

63.8

84.9

72.5

81.6

94.2

由试验结果可以看出，本发明使用鸭胆子油作为溶剂，在不加入抗氧化剂的情况下，葫芦素的稳定性依然优于申请号为200710011513.2的现有技术。特别是同时加入鸭胆子油和维生素E，与单独加入鸭胆子油相比，葫芦素的剩余含量提高了10.9％；与申请号为200710011513.2的现有技术相比，葫芦素的剩余含量提高了15.4％。

三、肿瘤抑制试验(重复三次实验)

1.荷瘤小鼠模型的建立

体外复苏肝癌H₂₂瘤株细胞，在细胞的指数生长期收集细胞，1000r/min离心，PBS洗涤2次，离心去上清，用无菌生理盐水稀释，调整到2×10⁷/ml。选取健康的小鼠，每只用上述细胞悬液0.2ml腹腔注射，注意观察接种小鼠的腹水生长情况，约一周后接种小鼠腹部明显涨大、凸出，抽取腹水，腹水呈乳白色，在无菌试管中用无菌生理盐水稀释瘤细胞数浓度为1×10⁷个/ml，每只皮下接种0.2ml，建立小鼠肝癌H₂₂右腋皮下接种模型。

2.实验分组和给药

将造模成功的小鼠随机分组，每组10只(对照组20只)，组内编号。分别为模型对照组(灌胃等体积的CMC-Na溶液)，鸭胆子油组(灌胃剂量按照总葫芦素计，0.2mg·kg^-1)，大豆油组(灌胃剂量按照总葫芦素计，0.2mg·kg^-1)，中链甘油三酯(MCT)组(灌胃剂量按照总葫芦素计，0.2mg·kg^-1)。自造模后第二天开始给药，连续给药10天，每天1次。

3.称瘤重并计算抑瘤率

停药24h，颈椎脱臼法处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，电子天平称瘤重。根据下面公式计算抑瘤率：

抑瘤率＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％

所有数据均采用均值用标准差表示(x±SD)，结果如表3所示。

表3肿瘤抑制试验结果(x±SD)

试验结果显示，大豆油组、中链甘油三酯组和鸭胆子油组的平均抑制肿瘤率分别为29.5％、39.8％和58.5％。这说明鸭胆子油与葫芦素配伍后协同增效作用明显，可以显著提高抑制肿瘤的效果。同时，鸭胆子油组的瘤重差异最小，这说明采用鸭胆子油溶解葫芦素，可使葫芦素的吸收利用得到改善，减少了个体差异，更具普适性。

与现有技术相比，本发明公开的稳定的葫芦素液体制剂具有以下优点：

1.鸭胆子油和葫芦素在抑制肿瘤方面具有明显的协同增效作用；其治疗效果优于单独使用鸭胆子油或葫芦素。

2.鸭胆子油对葫芦素具有预料不到的增溶作用，与现有技术相比，葫芦素的溶解度提高了78.87％，特别是同时使用鸭胆子油和中链甘油三酯，葫芦素的溶解度提高了115.2％。

3.鸭胆子油对葫芦素具有令人意外地稳定和抗氧化作用，其抗氧化作用甚至优于加入抗氧剂。

具体实施方式

以下实施例，是用来解释或者说明本发明内容，但不构成对发明主旨的限制。

实施例1

1.配方：葫芦素：1g    鸭胆子油：200g

2.制备方法：将处方量的葫芦素加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解。取所制得的葫芦素液体制剂，加入200g聚氧乙烯蓖麻油(乳化剂)，用超声波乳化器进行乳化，得葫芦素脂肪乳。

实施例2

1.配方：葫芦素：2.5g    鸭胆子油：350g

2.制备方法：将处方量的葫芦素加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解。取所制得的葫芦素液体制剂，加入填充剂微晶纤维素200g和糊精200g混合均匀后制粒，加入适量硬脂酸镁润滑剂压片，即得葫芦素片剂.共制葫芦素片剂1000片。

实施例3

1.配方：葫芦素：100g    鸭胆子油：100g

2.制备方法：将处方量的葫芦素加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，加入羟丙基纤维素50g、糊精100g混合均匀后制颗粒，加入润滑剂滑石粉适量压片，共制葫芦素片剂1000片。

实施例4

1.配方：葫芦素：5g    鸭胆子油：1000g

2.制备方法：将处方量的葫芦素加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解，加入5g维生素E，10g磷脂和20g甘油，加纯化水至2000ml，即得葫芦素口服液。

实施例5

1.配方：葫芦素：1g    鸭胆子油：200g

2.制备方法：将处方量的葫芦素加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解。取10g葫芦素液体制剂和8.5g氯化钠，加注射用水至500000ml。在无菌室百级条件下，用0.22um微孔滤膜过滤除菌后分装即得葫芦素注射剂。每支注射剂含注射液5ml，也就是说含0.1mg葫芦素注射剂。

实施例6

1.配方：葫芦素：1g         鸭胆子油：150g

        中链甘油三酯50g    大豆油50g

2.制备方法：将处方量的鸭胆子油、中链甘油三酯和大豆油混合，搅拌均匀。加入处方量的葫芦素，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解。按实施例5所述方法制成注射剂。每支注射剂含1mg葫芦素。

实施例7

1.配方：葫芦素：1g    鸭胆子油：500g

        维生素E：5g

2.制备方法：将处方量的葫芦素和维生素E加入鸭胆子油中，边加入边搅拌，至葫芦素完全溶解。按实施例5所述方法制成注射剂。每支注射剂含0.5mg葫芦素。

已经根据优选实施例对本发明作了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅为了举例说明本发明而已。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种稳定的葫芦素液体制剂，其特征在于包含鸭胆子油和葫芦素，按重量比计算，鸭胆子油∶葫芦素为1-5000∶1-5000；优选为1-500∶1-500；更优选为1-200∶1-200。

2.按照权利要求1所述的葫芦素液体制剂，其特征在于：还包含其它液体脂肪，所述其它液体脂肪选自中链油和/或长链油中的一种或几种。

3.按照权利要求2所述的葫芦素液体制剂，其特征在于：所述中链油选自中链甘油三酯、辛酸甘油酯或葵酸甘油酯，所述长链油选自长链甘油三酯、大豆油、花生油、玉米油、低芥酸菜籽油、葵花子油、棉籽油、芝麻油、棕榈油、橄榄油、椰子油；优选所述的其它液体脂肪为中链甘油三酯。

4.按照权利要求1-3所述的葫芦素液体制剂，其特征在于：按重量比计算液体脂肪∶葫芦素为1-5000∶1-5000，优选为1-500∶1-500，更优选1-200∶1-200。

5.按照权利要求1-4所述的葫芦素液体制剂，其特征在于还包含抗氧剂；优选所述的抗氧剂选自丁基羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、特丁基对苯二酚、没食子酸丙酯、异抗坏血酸钠、植酸、茶多酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸钙、甘草抗氧化物、维生素E、油酸、亚油酸中的一种或几种；更优选抗氧剂为维生素E。

6.按照权利要求1-5所述的葫芦素液体制剂，其特征在于：所述葫芦素提取自葫芦科植物甜瓜，其中葫芦素B含量不低于60％。

7.一种药物，其特征在于：以权利要求1-6任一项所述液体制剂为活性成分。

8.按照权利要求7所述的药物，其特征在于：所述药物可以制成注射剂或者口服剂，例如注射液、输液剂、滴丸、乳剂、软胶囊、液体硬胶囊、混悬液；优选制成注射剂。

9.按照权利要求7-8所述的药物，其特征在于：每单位制剂含0.1mg-1000mg的所述液体制剂为活性成分。

10.权利要求1-6所述液体制剂或者权利要求7-9所述药物在制备治疗慢性肝炎、肝硬化、肿瘤、癌症的药物中的用途。