CN101564475A

CN101564475A - 克感利咽口服液在制备防治禽流行性感冒中药中的应用

Info

Publication number: CN101564475A
Application number: CNA2009100393495A
Authority: CN
Inventors: 赖小平; 苏子仁; 李耿
Original assignee: Guangzhou University of Chinese Medicine
Current assignee: Guangzhou University of Chinese Medicine
Priority date: 2009-05-08
Filing date: 2009-05-08
Publication date: 2009-10-28
Anticipated expiration: 2029-05-08
Also published as: CN101564475B

Abstract

本发明涉及克感利咽口服液在制备防治禽流行性感冒中药中的应用；所述的克感利咽口服液为国家正式批准生产和上市的中成药，其国药准字号为Z10970100，它由以下原料药制成的有效成分与适量的聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸钠混合加水至去离子水至1000ml制得：金银花72g、黄芩72g、荆芥72g、栀子72g、连翘72g、玄参72g、僵蚕43g、地黄108g、射干22g、桔梗43g、薄荷43g、蝉蜕43g、防风43g和甘草22g。本发明所涉及的克感利咽口服液可抗禽流感病毒，抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎症，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率并延长其存活时间，具有显著的防治禽流行性感冒的作用。

Description

克感利咽口服液在制备防治禽流行性感冒中药中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及防治禽流行性感冒的药物。

背景技术

禽流感是禽流行性感冒的简称，它是由甲型流感病毒的其中一种亚型(也称禽流感病毒)引起的传染性疾病，被国际兽疫局定为甲类传染病。禽流感主要在鸟类中间传播，偶可感染至人，其临床表现与人类流行性感冒相似，但人禽流感症状重、并发症多、病死率高，疫苗接种无效，与普通流感有一定区别。

目前防治流感的最有效手段是接种流感疫苗，但至今仍为开发出供临床应用的的禽流感病毒疫苗，从而加大了防治的难度。由于目前尚无确切的抗病毒药物，所以西药对流感病毒的治疗主要是抑制病毒复制。临床应用的抗流感药已有20余种，它们对于禽流行性感冒所引起的各种症状具有缓解或消除作用，但最终还需靠人的自身免疫力治愈，且大多数的西药都可能导致严重的副作用。

中医药从整体观入手，辨证论治，认为流感是在机体内火伏里的基础上外邪入里引发的。通过复方治疗流感，既可清除内热，又可疏散外表风寒之邪，表里同治，还可整体调节人体的免疫机能，达到扶正驱邪的目的，使流感得到彻底有效的治疗。临床上已有数十种治疗流感的中成药问世，如板蓝根颗粒、抗病毒口服液、荆防败毒散等。研究人员对中药防治禽流行性感冒进行了大量的研究，李艳华等报道贯众、板蓝根、黄芪、柴胡、连翘、黄连、金银花、黄芩及甘草配制的复方中药在体内和体外对禽流感病毒均有一定抑制作用，具有延长感染鸡的存活时间和增强机体免疫力的作用(李艳华等，复方中药防治禽流感试验，中国兽医杂志，2005年第6期14页)。

克感利咽口服液(国药准字Z10970100)是一种治疗感冒的中药制剂，其有效成分由以下重量份的原料药制成：金银花72份、黄芩72份、荆芥72份、栀子(炒制)72份、连翘72份、玄参72份、僵蚕(姜制)43份、地黄108份、射干22份、桔梗43份、薄荷43份、蝉蜕43份、防风43份和甘草22份。该口服剂具有疏风清热，解毒利咽的作用，用于风热外侵、邪热内扰证者，对于治疗流行性感冒有显著效果，但目前尚未有该克感利咽口服液有防治禽流行性感冒的报道。虽然王国霞等人报道金银花提取物体外在3.9mg/ml(即每毫升相当于3.9mg生药)时具有抑制禽流感病毒复制的作用(王国霞等，黄芪、金银花提取物体外抗禽流感病毒的试验研究，中兽医学杂志，2005年第3期4～6页)，但本发明人的研究显示金银花单方对于体内防治禽流行性感冒并无显效。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供克感利咽口服液在制药中的新用途。

克感利咽口服液在制药中的新用途是：

克感利咽口服液在制备防治禽流行性感冒中药中的应用；所述的克感利咽口服液为国家正式批准生产和上市的中成药，国药准字号为Z10970100，其每1000ml中所含的有效成分由以下原料制得：

金银花72g、黄芩72g、荆芥72g、栀子72g、连翘72g、玄参72g、僵蚕43g、地黄108g、射干22g、桔梗43g、薄荷43g、蝉蜕43g、防风43g和甘草22g；其中，所述的栀子为经炒制的栀子，所述僵蚕为经姜制的僵蚕。

本发明所述克感利咽口服液还可含有聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸钠等辅料。

上述克感利咽口服液的制备方法由以下步骤组成：

(1)取金银花、荆芥、防风和薄荷用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；

(2)取黄芩加65％乙醇提取2次，每次2小时，回收乙醇，加水适量煮沸，趁热滤过，滤液备用；

(3)将步骤(2)黄芩用乙醇提取后的药渣及步骤(1)金银花、荆芥、防风和薄荷提取挥发油后的药渣与栀子、连翘、玄参、僵蚕、地黄、射干、桔梗、蝉蜕和甘草加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与步骤(1)所得水溶液合并，浓缩至在70℃时相对密度为1.06～1.11，加入乙醇使醇含量达60％(v/v)，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在70℃时相对密度为1.16～1.20，加入步骤(2)所得滤液，浓缩，干燥，得药粉；

(4)将步骤(1)所得到的挥发油和步骤(3)所得到的药粉混合，加入去离子水至1000ml，分装，灭菌，即得。

上述方法中的步骤(4)中，还可以取适量聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸钠等辅料与步骤(1)所得到的挥发油和步骤(3)所得到的药粉一道混合。

本发明所涉及的克感利咽口服液除了具有治疗普通感冒的作用外，还可抗禽流感病毒，抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎症，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率并延长其存活时间，具有显著的防治禽流行性感冒的作用。当所述的克感利咽口服液用于防治禽流行性感冒时，其用法如下：每次20毫升，一日3次，7天一个疗程；儿童每次10毫升，一日3次，7天一个疗程。

为了更好地理解本发明，下面将通过实施例和动物实验进一步阐明所述克感利咽口服液在防治禽流感中的效果。

具体实施方式

1、受试药物

克感利咽口服液，由广州王老吉药业股份有限公司生产，生产批号为080404。具体制备方法由以下步骤组成：

(1)取金银花72g、荆芥72g、防风43g和薄荷43g用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；

(2)取黄芩72g加65％(v/v)乙醇提取2次，每次2小时，回收乙醇，加水适量煮沸，趁热滤过，滤液备用；

(3)将步骤(2)黄芩乙醇提取后的药渣及步骤(1)金银花、荆芥、防风和薄荷提取挥发油后的药渣与栀子72g、连翘72g、玄参72g、僵蚕43g、地黄108g、射干22g、桔梗43g、蝉蜕43g和甘草22g加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与金银花经蒸馏后的水溶液合并，浓缩至在70℃时相对密度为1.06-1.21，加入乙醇使醇含量达60％(v/v)，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在70℃时相对密度为1.06-1.21，加入步骤(2)黄芩乙醇提取液，浓缩，干燥，得药粉；

(4)将步骤(1)所得到的挥发油和步骤(3)所得到的药粉与聚山梨酯805g、甜菊苷0.5g和苯甲酸钠2g混合，加入去离子水至1000ml，分装成100支，每支10ml，灭菌，即得。

对照药物1：达菲(即磷酸奥司他韦胶囊)，由瑞士巴塞尔豪夫迈.罗氏有限公司生产，批号为B1212。

对照药物2：金银花提取物，由以下方法制备得到：取金银花72g用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；金银花提取挥发油后的药渣加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与金银花经蒸馏后的水溶液合并，浓缩至在70℃时相对密度为1.06-1.21，加入乙醇使醇含量达60％(v/v)，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至在70℃时相对密度为1.06-1.21浓缩，干燥，得药粉；将所得到的挥发油和所得到的药粉与聚山梨酯805g、甜菊苷1g和苯甲酸钠2g混合，加入去离子水至1000ml，分装成100支，每支10ml，灭菌即可。所得提取物每毫升含有由72mg金银花提取出来的有效成分。

2、实验材料

KM小鼠，单一性别，由广东省医学实验动物中心提供，SPF级别，实验动物质量合格证号：粤监证号：2007A004，体重13～15g。小鼠饲料为富含多种成分的配方。饲养环境：室温23±2℃，相对湿度75±10％。

H9N2 AIV由华南农业大学兽医科技中心惠赠。H9N2 AIV鼠肺适应株由本试验室经昆明(KM)鼠传代5次获得，经SPF鸡胚传代扩增(-80℃保存)，KM鼠测定其小鼠半数致死量(LD50)。试验前，取毒种用流水冲浸融化，放冰水中保存，使用时稀释。

3、实验方法和结果

(1)H9N2 AIV对小鼠的半数致死剂量测定

用灭菌肉汤将H9N2 AIV稀释成10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5等浓度的病毒液。KM种小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，乙醚轻度麻醉后，滴鼻感染各个稀释浓度的病毒，每鼠4滴，合约0.05mL，第3d开始记录死亡小鼠的数量。

根据Reed-Muench两氏法计算，得到该病毒对小鼠的半数致死量(LD50)为10^-2.896/0.05mL。

(2)克感利咽口服液对小鼠禽流感病毒性肺炎的影响

将体重13.0～15.0g的KM种小鼠随机分成正常对照组，病毒对照组(即模型组)，阳性药物组(达菲)，克感利咽口服液高、中、低剂量组，金银花提取物高、中、低剂量组，15只/组。

H9N2AIV感染小鼠的方法：在乙醚轻度麻醉下，选用H₉N₂型禽流感病毒鼠肺适应株15个LD50病毒浓度，滴鼻感染小鼠，用1mL注射器每只滴4滴，约0.05ml。从感染前1d开始按拟定的剂量灌胃给药，每天1次，连续4d，病毒对照组以等容积蒸馏水灌胃。第6d称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，按式I计算肺指数值，按式II计算肺指数抑制率。

肺指数％＝肺重(g)/小鼠体重(g)×100％ (I)

结果见表1和表2。正常对照组小鼠健康，体重增加，行为敏捷，毛发有光泽，呼吸正常。病毒对照组出现不同的发病经过，一般在感染后第2d开始，小鼠食欲明显下降，随后逐渐出现甩头，呼吸短促现象，并伴随腹式呼吸，行动迟缓无力，弓背，消瘦，体重减轻，第3d开始出现死亡，部分小鼠死前出现明显的神经症状，如打转等。与病毒对照组相比较，药物组动物多数症状减轻，少数症状较重。小鼠感染H9N2AIV6d后被处死，解剖发现病毒对照组小鼠的肺部病变明显，其肺指数与正常对照组比较具有显著性差别(P＜0.01)，表明H9N2AIV模型成功。克感利咽口服液高、中剂量组对H9N2禽流感病毒所致小鼠肺炎病变均有明显的抑制作用，与病毒对照组相比，肺指数明显降低(P＜0.01)，低剂量组有降低肺指数的作用，但与病毒对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。金银花提取物在同样的给药剂量下未显示具有降低肺指数的作用，与病毒对照组无显著差异，未显示抗禽流感的效果。

表1克感利咽口服液对感染H9N2AIV小鼠肺指数的试验结果

注：*表示：与病毒对照组比较，P＜0.05；**表示：与病毒对照组比较，P＜0.01，***表示：P＜0.001，“-”表示没有该项。

表2金银花提取物对感染H9N2AIV小鼠肺指数的试验结果

(3)本发明所述克感利咽口服液对感染H9N2型禽流感病毒小鼠的死亡保护实验

将体重13.0～15.0g的KM种小鼠随机分成分成正常对照组，病毒对照组(即模型组)，阳性药物组(达菲)，克感利咽口服液高、中、低剂量组，金银花提取物高、中、低剂量组，15只/组。

H9N2感染小鼠的方法：在乙醚轻度麻醉下，选用H9N2型禽流感病毒鼠肺适应株2个LD50病毒浓度，滴鼻感染小鼠，用1mL注射器每只滴4滴，约0.05ml。感染前1d开始按拟定的剂量灌胃给药，每天1次，连续8d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。逐日观察动物发病和记录死亡数，共观察15d，然后按式III和IV计算死亡保护率和生命延长率。

死亡保护率％＝(病毒对照组死亡率-药物组死亡率)/病毒对照组死亡率×100％(III)

结果见表3和表4。

感染H9N2 AIV小鼠临床表现：小鼠感染禽流感病毒后，大多发病在4d以后，小鼠出现耸毛、活动减少、体重减轻、体温下降等症状，从第5日开始出现死亡。

与空白对照组相比较，病毒对照组小鼠死亡数明显增加，平均存活时间显著减少(P＜0.01)，表明模型H9N2 AIV成功。克感利咽口服液各剂量组均可减少小鼠死亡数，延长平均存活时间，提高死亡保护率和生命延长率的作用，高剂量组效果明显(P＜0.05)，中、低剂量组与病毒对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。金银花提取物在同样的给药剂量下未显示具有保护小鼠，降低死亡率的作用，与病毒对照组无显著差异，未显示抗禽流感的效果。

表3克感利咽口服液对感染H9N2AIV小鼠的死亡保护作用

注：*表示：与病毒对照组比较，P＜0.05；**表示：与病毒对照组比较，P＜0.01；“-”表示没有该项。

表4金银花提取物对感染H9N2AIV小鼠的死亡保护作用

结论：

由以上实验结果可看出，克感利咽口服液对H9N2禽流感病毒所致小鼠肺炎病变有明显的抑制作用，可减少H9N2感染的小鼠死亡数，延长平均存活时间，具有提高禽流感病毒感染小鼠的死亡保护率和生命延长率的作用，表明克感利咽口服液在体内具有明显抗禽流感病毒的作用。虽然有文献报道金银花提取物体外在3.9mg/ml时具有抑制禽流感病毒复制的作用，但上述对比试验显示，与克感利咽同等给药剂量(72mg/ml)的金银花提取物未显示防治禽流行性感冒的作用，这充分证明克感利咽方抗禽流感病毒的作用并非是由金银花单方提供的，而是由其十四味药共同作用的结果。

Claims

1、克感利咽口服液在制备防治禽流行性感冒中药中的应用；所述的克感利咽口服液，每1000ml中所含的有效成分由以下原料制得：

2、如权利要求1所述的应用，其中所述的克感利咽口服液的制备方法由以下步骤组成：

(4)将步骤(1)所得到的挥发油和步骤(3)所得到的药粉与适量的聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸钠混合，加入去离子水至1000ml，分装，灭菌，即得。