CN101559225B - 脑膜炎球菌疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种脑膜炎球菌疫苗，其包含：脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物和第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，长度为15-35个核苷酸。本发明中用于增强脑膜炎球菌疫苗免疫效果的佐剂是一种具有良好潜在应用前景的新型人用疫苗佐剂，其化学本质为人工合成的含有CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸。这种佐剂通过免疫细胞上的受体TLR9激活免疫系统，从而增强针对疫苗抗原的特异性免疫应答。通过向疫苗中加入本发明所述的疫苗佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，从而降低疫苗抗原的用量并减少免疫针次，降低疫苗成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，具体地说，本发明涉及一种脑膜炎球菌疫苗。
背景技术
流行性脑脊髓膜炎(简称“流脑”)由脑膜炎球菌引起，是人类主要急性呼吸道传染病之一。根据荚膜多糖的化学结构，脑膜炎球菌可分为十几个血清群，其中A、B、C、Y和W135是最主要的流行菌群。接种疫苗是预防流脑的主要途径。用脑膜炎球菌荚膜多糖制备的疫苗具有一定的预防效果，但它是一种T细胞非依赖性抗原，对2岁以下的婴幼儿免疫效果很差，而且不能诱生免疫记忆。与载体蛋白偶联可以将多糖抗原转变为T细胞依赖性抗原，不但对婴幼儿有效，而且能诱生免疫记忆。但是这种多糖蛋白结合疫苗的生产工艺比较复杂，产量较低，价格较贵，远远不能满足计划免疫的大规模需求。因此，有必要研制一种新型的脑膜炎球菌疫苗。
专利文献1 WO2006063152A2公开了一种提高TLR8介导的生物活性的免疫刺激组合物，该免疫刺激组合物包含胺类化合物和寡核苷酸，并且该组合物可以作为佐剂联合活性病毒、细菌、灭活病毒等材料用于预防肝炎、流脑等疾病。该专利文献并未给出仅仅使用寡核苷酸作为佐剂可以联合活性病毒、细菌、灭活病毒等材料用于预防肝炎、流脑等疾病的技术启示，而且其中的免疫刺激组合物是提高TLR8介导的生物活性，对于TLR9介导或其它途径介导的生物活性是否有影响在该专利文献中并未提及。专利文献2 WO 2004098491A公开了一种使用K、D两型CpG寡脱氧核苷酸治疗和预防生物恐怖剂(bioterrorism agent)所引起的感染的方法。专利文献3 WO2004087203A2公开了一种局部施加水包油型免疫刺激性核苷酸来引起免疫反应的方法。文献《中华医学杂志》第82卷第8期中综述了CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究。但是这些文献均未涉及脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物单独与含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(所述寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸)的第一佐剂的联合作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种脑膜炎球菌疫苗，具体地说，本发明提供一种提高疫苗的免疫效果、降低疫苗抗原的用量、减少免疫针次和降低疫苗成本的脑膜炎球菌疫苗。
为了实现本发明的目的，本发明提供一种脑膜炎球菌疫苗，其包含：脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物和第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，其化学本质为人工合成的含有CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(简称CpG-ODN)，所述寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸，
优选为20-30个核苷酸，更优选为20-25个核苷酸。
在本发明的一个实施方案中，每剂疫苗中包含脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物优选为0.1μg～1mg，并包含第一佐剂10μg～10mg。根据本发明，更优选的是，每剂疫苗中包含第一佐剂100μg～1mg。
根据本发明，所述寡聚脱氧核苷酸其序列中优选具有两个或两个以上拷贝的5’-NTCGTT-3’基元，且其长度为15～35个核苷酸，其中所述CpG是非甲基化的，并且所述N不代表A或G。更优选的是，所述寡聚脱氧核苷酸序列中5’-末端为T，其后为3～8个，优选5～7个CGTT串联重复的寡聚脱氧核苷酸。本发明的另一个实施方案为TCGTT串联重复3～8次，优选5～7次的寡聚脱氧核苷酸。
在本发明的另一个实施方案中，所述CpG-ODN的核苷酸序列优选为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’。
更优选为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’。
在本发明的另一个实施方案中，所述寡聚脱氧核苷酸优选是硫代修饰的。其中所述硫代寡聚脱氧核苷酸的制备方法是本领域技术人员所熟知的，例如可以采用固相亚磷酰胺三酯法化学合成。
在本发明的另一个实施方案中，该疫苗优选还包含第二佐剂，该第二佐剂为氢氧化铝、磷酸铝、无定型铝或其它任何适用于人用疫苗的佐剂。此处示例性的佐剂仅仅是为了示例性地说明本发明，并不构成对本发明的限制，任何适用于人用疫苗的佐剂都适用于本发明。
在本发明的另一个实施方案中，所述脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物优选是脑膜炎球菌血清群A群、C群、Y群和W135群中的一种或多种荚膜多糖与破伤风类毒素或白喉类毒素或其它任何适用于人用疫苗的载体蛋白的化学偶联物。此处的破伤风类毒素或白喉类毒素均是示意性地说明本发明的，并不构成对本发明的任何限制，任何适用于人用疫苗的载体蛋白都适用于本发明。
制造和检定脑膜炎球菌荚膜多糖的方法和标准是本领域技术人员所公知的技术，技术人员可参考世界卫生组织正式颁布并进行过数次修订的脑膜炎球菌荚膜多糖制造及检定规程(WHO TechnicalReport Series，No.594，1975，WHO Technical Report Series，No.658，1980，WHO Technical Report Series，No.904，2002)制备脑膜炎球菌多糖。其中荚膜多糖是从不同血清群脑膜炎球菌分别提取和纯化的。例如，从A群脑膜炎球菌菌株中制备A群荚膜多糖，从C群脑膜炎球菌菌株中制备C群荚膜多糖，从W135群脑膜炎球菌菌株中制备W135群荚膜多糖，从Y群脑膜炎球菌菌株中制备Y群荚膜多糖。此外，专利文献CN101007167A(参见说明书第9页实施例1)更详细地描述了A、C、W135、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖的制备方法。
另外，脑膜炎球菌荚膜多糖和载体蛋白的偶联方法是本领域技术人员所公知的技术，技术人员可根据本发明所述和参考世界卫生组织正式颁布的并进行过数次修订的C群脑膜炎球菌结合疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗(Hib)制造及检定规程(WHO TechnicalReport Series，No.924，2004，WHO Technical Report Series，No.897，2000)制备脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物。另外，文献《中华微生物学和免疫学杂志2006年26卷11期第1042-1047页“三种不同载体的C群脑膜炎球菌荚膜多糖-蛋白质结合疫苗比较研究”中就公开了C群脑膜炎球菌荚膜多糖与3种不同载体即破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)结合形成化学偶联物的方法。文献《西南国防医药2006年16卷6期第583-585页“A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗衍化工艺的研究”中就公开了制备A群脑膜炎球菌荚膜多糖与破伤风类毒素(TT)的结合物的工艺。文献《中国生化药物杂志2006年27卷5期第267-270页“C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的研制”公开了C群脑膜炎球菌多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备方法。文献《微生物学免疫学进展2005年33卷2期第14-20页“A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性研究”公开了A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备方法。此外，专利文献CN101007167A(参见说明书第12页实施例4)更详细地描述了脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的制备方法，在该方法中，先用溴化氰(CNBr)对多糖进行活化处理，再将己二酰肼(ADH)加入活化后的多糖中，形成多糖-ADH衍生物，再经过碳二亚胺(EDAC)介导的缩合作用与破伤风类毒素共价结合，获得多糖-破伤风类毒素的化学偶联物，通过柱层析法分离纯化获得脑膜炎球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的化学偶联物。脑膜炎球菌荚膜多糖和载体蛋白的偶联有多种已知的方法，在此所述的偶联方法仅仅是用于说明本发明。可以采用各种等同的方法实现本发明所述的偶联过程，因此任何用于荚膜多糖与蛋白载体偶联的方法和工艺或者过程都有可能用于实施本发明。
另外，所述脑膜炎球菌疫苗的制备方法是本领域技术人员所熟知的，例如其制备方法在《医学生物制品学》(第2版，第511-539页，人民卫生出版社，2007年10月)中有所描述。在实际使用中，一种简便的方法为直接将脑膜炎球菌荚膜多糖和载体蛋白的化学偶联物与本发明所述的第一佐剂混合，制得脑膜炎球菌疫苗。
本发明所述的脑膜炎球菌疫苗的剂型和配伍按照药学领域一般技术人员所公知的技术标准来确定。例如本发明所述的脑膜炎球菌疫苗可以制成注射液、冻干粉针等。
另外，本发明所述的脑膜炎球菌疫苗可以是无防腐剂疫苗。可任选地，所述脑膜炎球菌疫苗也可以包含防腐剂，例如硫柳汞、2-苯氧乙醇、苯甲醇等。这些示例性的防腐剂仅仅是为了说明本发明，并不构成对本发明的任何限制，任何适用于人用疫苗的防腐剂都适用于本发明。
另外，本发明所述的脑膜炎球菌疫苗可通过皮内注射、皮下注射、肌肉注射接种或者通过粘膜途径接种。在进行免疫接种时，需要考虑接种者的年龄、给药途径等多种因素。在本发明的优选实施方案中，每剂疫苗中包含所述脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物0.1μg～1mg，所述第一佐剂10μg～10mg，更优选包含所述第一佐剂100μg～1mg。通常接种一至三针。
本发明中用于增强脑膜炎球菌疫苗免疫效果的佐剂是一种具有良好潜在应用前景的新型人用疫苗佐剂，这种佐剂通过免疫细胞上的受体TLR9激活免疫系统，从而增强针对疫苗抗原的特异性免疫应答。通过向疫苗中加入本发明所述的疫苗佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，从而降低疫苗抗原的用量并减少免疫针次，最终降低疫苗成本。
附图说明
图1a为示出CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的免疫应答(初次免疫后第4周)的图。
图1b为示出CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的免疫应答(加强免疫后第2周)的图。
图2为示出CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗免疫应答的持久性的图。
图3a为示出CpG-ODN能够降低A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的抗原用量(初次免疫后第4周)的图。
图3b为示出CpG-ODN能够降低A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的抗原用量(加强免疫后第2周)的图。
图4a为示出CpG-ODN能够增强小鼠对C群、Y群和W135群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的免疫应答(初次免疫后第4周)的图。
图4b为示出CpG-ODN能够增强小鼠对C群、Y群和W135群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的免疫应答(加强免疫后第2周)的图。
图5为示出不同CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的免疫应答(加强免疫后第2周)的图。
具体实施方式
以下结合附图通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
实施例1.CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答
按照专利文献CN101007167A(参见说明书第9～12页实施例1和实施例4)中所述的方法制备A群脑膜炎球菌荚膜多糖以及A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物(以下简称为“Ag”)。在所述化学偶联物中，多糖含量为106μg/ml，载体蛋白含量为269μg/ml。
本实施例中所使用的CpG-ODN由本发明人设计，序列如下：5′-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3′，委托上海生工生物技术公司人工合成，并进行全链硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化，溶于生理盐水，-20℃冰箱中保存备用。
本实施例中所使用的小鼠为Balb/c小鼠，雌性，6～8周，购自中国医学科学院实验动物中心。
将Balb/c小鼠分为四组，分别为“Ag组”、“Ag+Al组”、“Ag+CpG组”和“Ag+Al+CpG组”，每组小鼠8只，每只小鼠经左后肢腓肠肌注射试液100μl进行免疫。各组所使用的试液如表1所示。其中，Al(OH)3溶液是通过下述方法制备的：取5％硫酸铝溶液250ml，在强烈搅拌下加入5％氢氧化钠溶液100ml，用生理盐水离心洗涤沉淀2次，然后使其悬浮于生理盐水中使体积达250ml。Ag用量均按多糖含量计算。
表1
| 组别 | 试液 |
| Ag组 | 2.2μg的Ag，溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS溶液)(pH7.0) |
| Ag+Al组 | 2.2μg的、经1mg/ml的Al(OH)3吸附的Ag |
| Ag+CpG组 | 2.2μg的Ag和10μg的CpG-ODN混合而得的脑膜炎球菌疫苗，溶剂为PBS溶液(pH7.0) |
| Ag+Al+CpG组 | 2.2μg经1mg/ml的Al(OH)3吸附的Ag和10μg的CpG-ODN混合而得的脑膜炎球菌疫苗 |
初次免疫后第4周以同样方式加强免疫一次。在初次免疫后第4周和加强免疫后第2周分别采血并分离出血清，使用PBS溶液(pH7.0)对该血清进行2倍系列稀释，按照下述方法测定脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体滴度。
使用A群脑膜炎球菌荚膜多糖包被96孔酶标板，每孔500ng，4℃过夜；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后，在37℃下使用1％的牛血清白蛋白PBS溶液(pH7.0)封闭1小时；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后加入上述经2倍系列稀释的待检血清，37℃下作用1小时；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后加入1∶10000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(购自美国SIGMA公司)，每孔100μl，37℃作用1小时；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后使用邻苯二胺(OPD)显色，2M硫酸终止反应，用分光光度计测定490nm处吸光度值OD490并确定终点滴度(临界值设为0.10)。结果见图1a和图1b。
图1a和图1b所示结果分别为初次免疫后第4周和加强免疫后第2周的多糖特异性IgG抗体滴度。由此可见，虽然初次免疫后“Ag+CpG组”与“Ag组”特异性抗体滴度无显著性差异(P＞0.05)，但加强免疫后“Ag+CpG组”的特异性抗体滴度显著高于“Ag组”的特异性抗体滴度(P＜0.001)。Al(OH)3与CpG-ODN联合使用具有最强的疫苗佐剂活性，无论是初次免疫还是加强免疫，均可使特异性抗体滴度增加10倍左右。上述结果表明：(1)CpG-ODN能够增强小鼠对脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答；(2)CpG-ODN作为脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的佐剂，既可单独使用，也可与其它疫苗佐剂如Al(OH)3联合使用。
实施例2.CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物免疫应答的持久性
按照与实施例1相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测脑膜炎球菌荚膜多糖特异性IgG抗体滴度，以评价CpG-ODN在小鼠中对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物免疫应答持久性的影响，不同之处在于初次免疫后第4周和第39周以同样方式分别加强免疫一次，并在初次免疫后第4周、第6周、第10周、第14周、第21周、第39周和第41周分别采血并分离血清，按照实施例1所述的方法检测脑膜炎球菌多糖特异性IgG总抗体。结果见图2。
由图2可见，从初次免疫后第6周至第21周，“Ag+CpG组”和“Ag+Al+CpG组”的特异性抗体滴度均显著高于不加佐剂的“Ag组”(P＜0.05)。虽然在第39周上述三者之间特异性抗体滴度无显著性差异(P＞0.05)，但在第41周(即第二次加强免疫后两周)“Ag+CpG组”和“Ag+Al+CpG组”能够产生较好的回忆反应，特异性抗体滴度均为“Ag组”的四倍以上。上述结果表明：CpG-ODN单独或联合Al(OH)3作为脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的佐剂，能够诱生较好的免疫持久性和回忆反应。
实施例3.CpG-ODN能够降低A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的用量
按照与实施例1相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测脑膜炎球菌荚膜多糖特异性IgG抗体滴度，以测定CpG-ODN对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的用量的影响，不同之处在于脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的用量不同，其用量分别为原倍剂量(2.2μg的Ag/小鼠)、四分之一剂量(0.55μg的Ag/小鼠)和十六分之一剂量(0.14μg的Ag/小鼠)。结果见图3a和图3b。
图3a和图3b所示结果分别为初次免疫后第4周和加强免疫后第2周的多糖特异性IgG抗体滴度。由此可见，无论是初次免疫还是加强免疫，“Ag+CpG组”只需四分之一剂量的Ag即可达到“Ag组”原倍抗原剂量的免疫效果；“Ag+Al+CpG组”的免疫应答最强，只需十六分之一剂量的Ag即可达到“Ag组”原倍抗原剂量的免疫效果。
上述结果表明：CpG-ODN单独或联合Al(OH)3作为脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的佐剂，能够大大降低其用量。此外，由图3a中“Ag+Al+CpG组”中十六分之一的Ag剂量的抗体滴度和图3b中“Ag组”原倍抗原剂量的抗体滴度的比较可知，“Ag+Al+CpG组”十六分之一的Ag剂量免疫一次的抗体滴度不低于“Ag组”原倍抗原剂量免疫两次的抗体滴度，提示本发明所述的CpG-ODN与其它疫苗佐剂如Al(OH)3联合使用，可以减少免疫针次。
综合实施例1、2和3中的结果，CpG-ODN作为佐剂能够提高本发明所述的脑膜炎球菌疫苗的免疫效果，从而降低疫苗Ag的用量并减少免疫针次，最终降低疫苗成本。
实施例4.CpG-ODN能够增强小鼠对C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答
按照专利文献CN101007167A(参见说明书第9～12页实施例1和实施例4)中所述的方法制备C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖以及C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物，下文中简称为“Ag”。
按照与实施例1相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测脑膜炎球菌荚膜多糖特异性IgG抗体滴度，以评价CpG-ODN在小鼠中对C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答的影响，不同之处在于分别使用C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物来代替A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物。结果见图4a和图4b。
图4a和图4b所示结果分别为初次免疫后第4周和加强免疫后第2周的多糖特异性IgG抗体滴度。由此可见，虽然初次免疫后单独使用CpG-ODN不能增强免疫应答，表现为“Ag+CpG组”与“Ag组”的特异性抗体滴度无显著性差异(P＞0.05)，但加强免疫后前者的特异性抗体滴度明显高于后者的特异性抗体滴度(P＜0.001)。Al(OH)3与CpG-ODN联合使用具有最强的疫苗佐剂活性，无论是初次免疫还是加强免疫，均可使特异性抗体滴度增加10倍左右。上述结果表明CpG-ODN也能够增强针对C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答。
实施例5.不同CpG-ODN能够增强小鼠对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫应答
按照与实施例1相同的方法对Balb/c小鼠进行加强免疫，进而检测脑膜炎球菌荚膜多糖特异性IgG抗体滴度，以测定不同CpG-ODN序列在小鼠中对A群脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫效果的影响，不同之处在于CpG-ODN分别为表2所述的核苷酸序列T2～T6。图5所示为加强免疫后第2周血清中脑膜炎球菌多糖特异性IgG总抗体滴度，与不使用佐剂的对照组相比，上述任意一种CpG-ODN均可增强脑膜炎球菌荚膜多糖和破伤风类毒素的化学偶联物的免疫效果，使多糖特异性抗体滴度增加5倍左右。
表2
| 编号 | 序列 |
| T1 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T2 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T3 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T4 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
| T5 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
| T6 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
序列表
Claims (9)
1.一种脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，包含：
脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；
第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，所述寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸；以及
第二佐剂，该第二佐剂为氢氧化铝、磷酸铝或无定型铝。
2.如权利要求1所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，每剂疫苗中包含所述脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物0.1μg～1mg，所述第一佐剂10μg～10mg。
3.如权利要求2所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，每剂疫苗中包含所述第一佐剂100μg～1mg。
4.如权利要求1所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸的长度为20-30个核苷酸。
5.如权利要求4所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸的长度为20-25个核苷酸。
6.如权利要求1所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸的核苷酸序列为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’。
7.如权利要求6所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸的核苷酸序列为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’。
8.如权利要求1-7中任一项所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸是硫代修饰的。
9.如权利要求1-7中任一项所述的脑膜炎球菌疫苗，其特征在于，所述脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物是脑膜炎球菌血清群A群、C群、Y群和W135群中的一种或多种荚膜多糖与破伤风类毒素、白喉类毒素或其它任何适用于人用疫苗的载体蛋白的化学偶联物。
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Owner name: BEIJING INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: BEIJING BIOLOGICAL PRODUCT INST. |
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| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. Address before: 100024 Beijing, Chaoyang District, the south of the three rooms in the hospital No. 4 Patentee before: Beijing Institute of Biological Products |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20121022 Address after: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. Patentee after: BEIJING WEIGU BIOLOGICAL MEDICAL Co.,Ltd. Address before: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee after: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. Address before: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee before: BEIJING WEIGU BIOLOGICAL MEDICAL Co.,Ltd. |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210304 Address after: 101111 No.38, Jinghai 2nd Road, Beijing Economic and Technological Development Zone, Daxing District, Beijing Patentee after: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. Address before: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee before: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120711 Termination date: 20210418 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |