CN101559224B - 脊髓灰质炎疫苗 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种脊髓灰质炎疫苗，其包含灭活的脊髓灰质炎病毒作为抗原和第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，该寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸。本发明中用于增强灭活脊髓灰质炎疫苗免疫效果的佐剂是一种具有良好潜在应用前景的新型人用疫苗佐剂，其化学本质为人工合成的含有CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸。这种佐剂通过免疫细胞上的受体TLR9激活免疫系统，从而增强针对疫苗抗原的特异性免疫应答。通过向疫苗中加入本发明所述的疫苗佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，从而降低疫苗抗原的用量，最终降低疫苗成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域，具体地说，本发明涉及一种脊髓灰质炎疫苗。
背景技术
接种脊髓灰质炎疫苗是预防脊髓灰质炎病毒感染的最主要途径。通过使用口服减毒脊髓灰质炎疫苗，我国已经完全消灭了野生型病毒导致的脊髓灰质炎，但是仍存在疫苗株变异引起的疫苗相关病例。灭活脊髓灰质炎疫苗是一个包括脊髓灰质炎病毒血清型I型、II型和III型的三价疫苗。由于我国已经没有野毒株流行，所以只能使用免疫原性较弱的Sabin减毒株来研制灭活脊髓灰质炎疫苗。这种灭活疫苗的免疫效果差，产量低，价格昂贵，因此不可能作为计划免疫疫苗在全国范围内大规模使用。
目前发达国家均使用以野毒株为毒种生产的灭活脊髓灰质炎疫苗。通过这一疫苗已消灭了野生型病毒导致的脊髓灰质炎，而且也不存在减毒疫苗引起的疫苗相关病例。但是这一疫苗价格更为昂贵，无法在我国以及其它发展中国家和不发达国家大规模使用。因此，为了在全球范围内彻底消灭脊髓灰质炎病毒，有必要研制一种高效低价的新型灭活脊髓灰质炎疫苗。
专利文献1 WO2006063152A2公开了一种提高TLR8介导的生物活性的免疫刺激组合物，该免疫刺激组合物包含胺类化合物和寡核苷酸，并且该组合物可以作为佐剂联合活性病毒、细菌、灭活病毒等材料用于预防肝炎、脊髓灰质炎等疾病。该专利文献并未给出仅仅使用寡核苷酸作为佐剂可以联合活性病毒、细菌、灭活病毒等材料用于预防肝炎、脊髓灰质炎等疾病的技术启示，而且其中的免疫刺激组合物是提高TLR8介导的生物活性，对于TLR9介导或其它途径介导的生物活性是否有影响在该专利文献中并未提及。专利文献2CN1637013A公开了一种具有改善的免疫调节功能的经修饰的CpG寡聚脱氧核苷酸，其是在ODN的3’-末端偶联连续的胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(dT)序列。专利文献3 CN1781930A公开了一种佐剂，该佐剂至少包含一个含CpG二核苷酸的单链脱氧核苷酸，该佐剂与乙型肝炎病毒疫苗联合应用时，能够显著增强乙型肝炎病毒疫苗的免疫效果。文献《中华医学杂志》第82卷第8期中综述了CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究。但是这些文献均未涉及灭活的脊髓灰质炎病毒作为抗原单独与含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(所述寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸)的第一佐剂的联合作用。
发明内容
本发明的目的是要提供一种新型灭活脊髓灰质炎疫苗，具体地说，本发明提供一种提高疫苗的免疫效果、降低疫苗抗原的用量并降低疫苗成本的灭活脊髓灰质炎疫苗。
为了实现本发明的目的，本发明提供一种脊髓灰质炎疫苗，其包含灭活的脊髓灰质炎病毒和第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，其化学本质为人工合成的含有CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(简称CpG-ODN)，该寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸，优选为20-30个核苷酸，更优选为20-25个核苷酸。
在本发明的一个实施方案中，每剂疫苗中优选包含灭活的脊髓灰质炎病毒0.1μg～1mg，并包含第一佐剂10μg～10mg。根据本发明，更优选的是，每剂疫苗中包含第一佐剂100μg～1mg。
根据本发明，所述寡聚脱氧核苷酸其序列中优选具有两个或两个以上拷贝的5’-NTCGTT-3’基元，且其长度为15～35个核苷酸，其中所述CpG是非甲基化的，并且所述N不代表A或G。更优选的是，所述寡聚脱氧核苷酸序列中5’-末端为T，其后为3～8个，优选5～7个CGTT串联重复的寡聚脱氧核苷酸。本发明的另一个实施方案为TCGTT串联重复3～8次，优选5～7次的寡聚脱氧核苷酸。
在本发明的另一个实施方案中，所述CpG-ODN的核苷酸序列优选为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
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5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’。
更优选为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’。
在本发明的另一个实施方案中，所述寡聚脱氧核苷酸优选是硫代修饰的。其中所述硫代寡聚脱氧核苷酸的制备方法是本领域技术人员所熟知的，例如可以采用固相亚磷酰胺三酯法化学合成。
在本发明的另一个实施方案中，该疫苗优选还包含第二佐剂，该第二佐剂为氢氧化铝、磷酸铝、无定型铝或其它任何适用于人用疫苗的佐剂。此处示例性的佐剂仅仅是为了说明本发明，并不构成对本发明的限制，任何适用于人用疫苗的佐剂都适用于本发明。
在本发明的另一个实施方案中，所述脊髓灰质炎病毒优选为血清型I型(Sabin I型)、II型(Sabin II型)、III型(Sabin III型)毒株或其组合。这些病毒是现有技术中所公知的，目前世界上的脊髓灰质炎病毒主要由WHO负责制备并发放给各个国家和各卫生组织。例如WHO就负责提供Sabin I型、Sabin II型、Sabin III型脊髓灰质炎病毒。中国使用的Sabin I型、Sabin II型、Sabin III型脊髓灰质炎病毒基本上是由WHO提供的。本申请人申请的另一篇专利CN1647822A中就公开了一种使用由WHO提供的Sabin I型、SabinII型、Sabin III型脊髓灰质炎病毒制备的脊髓灰质炎灭活疫苗及其制备方法。在本发明的实施方案中所使用的Sabin I型、Sabin II型、Sabin III型脊髓灰质炎病毒也是由WHO提供的。
在本发明中，灭活脊髓灰质炎病毒的方法是本领域技术人员所熟知的，例如可以通过下述步骤灭活脊髓灰质炎病毒：将脊髓灰质炎病毒接种于Vero细胞(例如非洲绿猴肾细胞)培养体系中以收获病毒原液，将病毒原液超滤浓缩并通过超速离心法或者柱层析法进行纯化，最后使用灭活剂(例如福尔马林)灭活。此处该方法仅仅是为了示例性地说明本发明，如果需要，也可采用其它合适的细胞、灭活剂等进行代替。可选择地，其它任何可以灭活脊髓灰质炎病毒的方法也适用于本发明。
灭活的脊髓灰质炎疫苗的制备方法是本领域技术人员已知的。在实际使用中，一种简便的方法为直接将上述灭活脊髓灰质炎疫苗抗原与本发明所述的第一佐剂混合，制得本发明所述灭活的脊髓灰质炎疫苗。
本发明所述的灭活脊髓灰质炎疫苗的剂型和配伍按照药学领域一般技术人员所公知的技术标准来确定。例如本发明所述的灭活脊髓灰质炎疫苗可以制成注射液、冻干粉针等。
另外，本发明所述的灭活脊髓灰质炎疫苗可以是无防腐剂疫苗。可任选地，所述灭活脊髓灰质炎疫苗也可以包含防腐剂，例如硫柳汞、2-苯氧乙醇、苯甲醇等。这些示例性的防腐剂仅仅是为了说明本发明，并不构成对本发明的任何限制，任何适用于人用疫苗的防腐剂都适用于本发明。
另外，本发明所述的灭活脊髓灰质炎疫苗可通过皮内注射、皮下注射、肌肉注射接种或者通过粘膜途径接种。在进行免疫接种时，需要考虑接种者的年龄、给药途径等多种因素。在本发明的优选实施方案中，每剂疫苗中包含所述灭活的脊髓灰质炎病毒0.1μg～1mg，所述第一佐剂10μg～10mg，更优选包含所述第一佐剂100μg～1mg。通常接种一至三针。
本发明中用于增强灭活脊髓灰质炎疫苗免疫效果的佐剂是一种具有良好潜在应用前景的新型人用疫苗佐剂，这种佐剂通过免疫细胞上的受体TLR9激活免疫系统，从而增强针对疫苗抗原的特异性免疫应答。通过向疫苗中加入本发明所述的疫苗佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，从而降低疫苗抗原的用量，最终降低疫苗成本。
附图说明
图1a为示出CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的图，该图示出的是Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度。
图1b为示出CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的图，该图示出的是Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。
图2a为示出CpG-ODN能够降低Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的抗原用量的图，该图示出的是Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度。
图2b为示出CpG-ODN能够降低Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的抗原用量的图，该图示出的是Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。
图3为示出不同CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的图，该图示出的是Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度。
图4为示出CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin I型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的图，该图示出的是Sabin I型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。
图5为示出CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin III型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的图，该图示出的是Sabin III型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。
具体实施方式
以下结合附图通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
实施例1.灭活的脊髓灰质炎病毒的制备
细胞：采用非洲绿猴肾传代细胞系(Vero细胞系)。该细胞由日本学者于1963年从非洲绿猴肾中分离得到。第112代被送至美国典型培养物保藏中心(ATCC)，经过鉴定，该细胞无致肿瘤性，无细菌、霉菌和支原体污染，无病毒污染，适于用来生产生物制品。
北京生物制品研究所于1988年12月从美国ATCC获得117代Vero细胞(编号为CCL81)二方瓶，立即作为原始种子冻存于液态氮中。从一支原始种子传代扩增制备了主细胞库，一支主种子库细胞传代扩增又制备了工作细胞库。主细胞库和工作细胞库的检定都符合世界卫生组织(WHO)关于动物细胞制备生物制品规程《Recommendations for the use of animal cells as in vitro substrates forthe production of biologicals》的要求。
病毒：Sabin I型、Sabin II型、Sabin III型病毒均由WHO制备并提供。用以上病毒经Vero细胞培养扩增一代，建立了工作种子批的毒种。工作种子批的毒种通过了中国药品生物制品检定所的复核检定。
细胞培养：复苏工作库细胞，将一支安瓶的细胞复苏并扩增到一个15L的转瓶中，培养4至6天后，按照1∶6的分种比例传出6个转瓶，如此传代扩增至50至200个15L的转瓶。培养方式可在15升的转瓶中进行，培养液为含5％小牛血清的199培养基(可购自上海卓康生物科技有限公司)，培养温度为37℃。
病毒接种：细胞培养三至五天后，弃去细胞培养上清，接种I、II、III型病毒的工作种子批病毒。病毒接种量为0.1MOI，培养温度为33～36℃，培养时间为72～120小时。病毒维持液为含人血清白蛋白0.1％的MEM培养基(可购自上海麦莎生物科技有限公司)。
病毒收获：当细胞出现明显病变时，收获细胞培养上清。
澄清过滤：用1.2～0.22微米的滤器过滤全部收获的上清。
病毒液浓缩：用截留分子量为300KD的超滤膜超滤浓缩病毒液，浓缩倍数为20～50倍。
凝胶过滤纯化：用pH 6.5-7.5的PBS溶液平衡的Sepharose6 FFTM介质进行纯化病毒液，收集外水体积。通过凝胶过滤纯化，杂蛋白去除率可达95％以上。
离子交换层析：将凝胶过滤纯化后的病毒液进行离子交换层析。介质采用DEAE-Sepharose FFTM(弱阴离子交换介质)，平衡液为pH6.5-7.5、含有0.05-0.15M氯化钠的PBS溶液，洗脱液为pH 6.5-7.5、含有0.2-0.5M氯化钠的PBS溶液。
灭活：将层析后的病毒液用0.22微米滤膜过滤。加入1∶4000(甲醛：pH7.0的PBS溶液)的甲醛溶液，置于3～36℃下灭活12天。
实施例2 CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答
本实施例中使用的灭活的脊髓灰质炎病毒是按照实施例1所述的方法制备的，下文中简称为Ag。
本实施例中所使用的CpG-ODN由本发明人设计，序列如下：5′-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3′，委托上海生工生物技术公司人工合成，并进行全链硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，溶于生理盐水，-20℃冰箱中保存备用。
本实施例中所使用的小鼠为Balb/c小鼠，雌性，6～8周，购自中国医学科学院实验动物中心。
将Balb/c小鼠分为四组，分别为“Ag组”、“Ag+Al组”、“Ag+CpG组”和“Ag+Al+CpG组”，每组小鼠8只，每只小鼠经左后肢腓肠肌注射试液100μl进行免疫。各组所使用的试液如表1所示。其中，Al(OH)3溶液是通过下述方法制备的：取5％硫酸铝溶液250ml，在强烈搅拌下加入5％氢氧化钠溶液100ml，用生理盐水离心洗涤沉淀2次，然后使其悬浮于生理盐水中使体积达250ml。
表1
| 组别 | 试液 |
| Ag组 | 10μg的Ag，溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS溶液)(pH7.0) |
| Ag+Al组 | 10μg的、经1mg/ml的Al(OH)3吸附的Ag |
| Ag+CpG组 | 10μg的Ag和10μg的CpG-ODN混合而得的脊髓灰质炎疫苗，溶剂为PBS溶液(pH7.0) |
| Ag+Al+CpG组 | 10μg经1mg/ml的Al(OH)3吸附的Ag和10μg的CpG-ODN混合而得的脊髓灰质炎疫苗 |
免疫后第4周采血，分离出血清，并按照如下方法测定Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度和中和抗体滴度。
IgG抗体滴度的测定方法：使用Sabin II型灭活脊髓灰质炎病毒包被96孔酶标板，每孔200ng，4℃过夜；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后，在37℃下使用1％的牛血清白蛋白PBS溶液(pH7.0)封闭1小时；使用PBS溶液(pH7.0)对上述待检血清进行2倍系列稀释，在使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后加入稀释后的血清，37℃下作用1小时；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后加入1∶10000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(购自美国SIGMA公司)，每孔100μl，37℃作用1小时；使用PBS溶液(pH7.0)洗板3次后使用邻苯二胺(OPD)显色，2M硫酸终止反应，使用分光光度计测定490nm处吸光度值OD490并确定终点滴度(临界值设为0.10)。结果见图1a。
特异性中和抗体滴度的测定方法：将每组8只小鼠的血清等量量取出并混合均匀，使用0.22μm滤器除菌过滤；在96孔细胞板上用RPMI 1640细胞培养液(可购自美国Gibco公司)从1∶10开始将血清进行2倍系列稀释，每个稀释度做8个孔。稀释完成后，在每个孔中均加入100 TCID50的Sabin II型脊髓灰质炎病毒，室温放置1小时；每孔加入1×104个Hep2细胞；37℃培养8天后记录细胞病变孔数，并根据Reed-Muench法(参见文献Reed L & Muench H.Asimple method of estimating 50 percent end-points.Am.J.Hyg.，1938，27：第493页)计算特异性中和抗体滴度。结果见图1b。
图1a所示结果为免疫后第4周Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度。与不使用佐剂的“Ag组”相比，“Ag+CpG组”与“Ag+Al组”均能够使特异性抗体滴度增加3倍左右。Al(OH)3与CpG-ODN联合使用具有最强的疫苗佐剂活性，可使特异性抗体滴度增加10倍以上。
图1b所示结果为免疫后第4周Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。与不使用佐剂的“Ag组”相比，“Ag+CpG组”与“Ag+Al组”均能够使特异性中和抗体滴度增加2-3倍左右。Al(OH)3与CpG-ODN联合使用具有最强的疫苗佐剂活性，可使特异性中和抗体滴度增加6倍左右。
上述结果表明：(1)CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答；(2)CpG-ODN作为Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的佐剂，既可单独使用，也可与其它疫苗佐剂如Al(OH)3联合使用。
实施例3.CpG-ODN能够降低Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的抗原用量
按照与实施例2相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测特异性IgG抗体滴度和中和抗体滴度，以测定CpG-ODN对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的抗原用量的影响，不同之处在于灭活脊髓灰质炎疫苗的抗原用量分别为原倍剂量(10μg的Ag/小鼠)、四分之一剂量(2.5μg的Ag/小鼠)和十六分之一剂量(0.625μg的Ag/小鼠)。结果分别见图2a和2b。
图2a所示结果为免疫后第4周Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度。由图2a可见，“Ag+CpG组”只需四分之一剂量的Ag即可达到“Ag组”原倍抗原剂量的免疫效果。“Ag+Al+CpG组”的免疫应答最强，只需十六分之一剂量的Ag即可超过“Ag组”原倍抗原剂量的免疫效果。
图2b所示结果为免疫后第4周Sabin II型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。由图2b可见，“Ag+CpG组”四分之一剂量的Ag诱生的中和抗体滴度为“Ag组”原倍抗原剂量的2倍。“Ag+Al+CpG组”的免疫应答最强，十六分之一剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度高于“Ag组”原倍抗原剂量的特异性中和抗体滴度。
上述结果表明：CpG-ODN单独或联合Al(OH)3作为Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的佐剂，能够增强其免疫原性并大大降低其抗原用量。
实施例4.不同CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答
按照与实施例2相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测特异性IgG抗体滴度，以测定不同CpG-ODN序列在小鼠中对Sabin II型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫效果的影响，不同之处在于CpG-ODN分别为表2所述的核苷酸序列T2～T6。图3所示为免疫后第4周SabinII型脊髓灰质炎病毒特异性IgG抗体滴度，与不使用佐剂的对照组相比，上述任意一种CpG-ODN均可使特异性抗体滴度增加3-4倍。
表2
| 编号 | 序列 |
| T1 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T2 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T3 | 5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’ |
| T4 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
| T5 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
| T6 | 5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’ |
实施例5.CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin I型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答
按照与实施例2相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测特异性中和抗体滴度，以评价CpG-ODN在小鼠中对Sabin I型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的影响，不同之处在于用Sabin I型灭活脊髓灰质炎病毒来代替Sabin II型灭活脊髓灰质炎病毒，而且抗原用量分别为原倍剂量(2.5μg的Ag/小鼠)、四分之一剂量(0.625μg的Ag/小鼠)和十六分之一剂量(0.156μg的Ag/小鼠)。
图4为免疫后第4周Sabin I型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。由图4可见，“Ag+CpG组”原倍剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度为“Ag组”相同抗原剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度的2倍左右。“Ag+Al+CpG组”的免疫应答最强，四分之一剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度为“Ag组”原倍抗原剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度的2倍左右。
上述结果表明：CpG-ODN单独或联合Al(OH)3作为Sabin I型灭活脊髓灰质炎疫苗的佐剂，能够增强其免疫原性并大大降低其抗原用量。
实施例6.CpG-ODN能够增强小鼠对Sabin III型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答
按照与实施例2相同的方法对Balb/c小鼠进行免疫，进而检测特异性中和抗体滴度，以评价CpG-ODN在小鼠中对Sabin III型灭活脊髓灰质炎疫苗的免疫应答的影响，不同之处在于用Sabin III型灭活脊髓灰质炎病毒来代替Sabin II型灭活脊髓灰质炎病毒，而且抗原用量为原倍剂量(2.5μg的Ag/小鼠)、四分之一剂量(0.625μg的Ag/小鼠)和十六分之一剂量(0.156μg的Ag/小鼠)。
图5为免疫后第4周Sabin III型脊髓灰质炎病毒特异性中和抗体滴度。由图5可见，“Ag+CpG组”四分之一剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度高于“Ag组”原倍抗原剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度。“Ag+Al+CpG组”的免疫应答最强，十六分之一剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度为“Ag组”原倍抗原剂量的Ag诱生的特异性中和抗体滴度的13倍左右。
上述结果表明：CpG-ODN单独或联合Al(OH)3作为Sabin III型灭活脊髓灰质炎疫苗的佐剂，能够增强其免疫原性并大大降低其抗原用量。
序列表
Claims (6)
1.一种脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，包含：
灭活的萨宾(Sabin)株脊髓灰质炎病毒；
第一佐剂，该第一佐剂为含有至少一个非甲基化CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸，该寡聚脱氧核苷酸的长度为15-35个核苷酸；以及
第二佐剂，该第二佐剂为氢氧化铝、磷酸铝或无定型铝；
其中，所述寡聚脱氧核苷酸的核苷酸序列为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’
5’-TCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTTTCGTT-3’。
2.如权利要求1所述的脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，每剂疫苗中包含灭活的脊髓灰质炎病毒0.1μg～1mg，并包含第一佐剂10μg～10mg。
3.如权利要求2所述的脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，每剂疫苗中包含第一佐剂100μg～1mg。
4.如权利要求1所述的脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸的核苷酸序列为：
5’-TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT-3’。
5.如权利要求1-4中任意一项所述的脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，所述寡聚脱氧核苷酸是硫代修饰的。
6.如权利要求1-4中任意一项所述的脊髓灰质炎疫苗，其特征在于，所述脊髓灰质炎病毒为血清型I型、II型、III型毒株或其组合。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1271733A (zh) * | 2000-04-04 | 2000-11-01 | 中国预防医学科学院病毒学研究所 | 对人免疫细胞有特异免疫刺激活性的CpG寡核酸 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN1599623A (zh) * | 2001-09-14 | 2005-03-23 | 赛托斯生物技术公司 | 免疫刺激物向病毒样颗粒内的包装:制备方法与用途 |
| CN1671414A (zh) * | 2001-10-06 | 2005-09-21 | 梅瑞尔有限公司 | CpG制剂及相关方法 |
| CN1678188A (zh) * | 2002-07-03 | 2005-10-05 | 科勒制药集团有限公司 | 调节免疫反应的核酸成分 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING WEIGU BIOPHARMACEUTICAL CO., LTD. Effective date: 20121022 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: BEIJING INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: BEIJING BIOLOGICAL PRODUCT INST. |
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| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. Address before: 100024 Beijing, Chaoyang District, the south of the three rooms in the hospital No. 4 Patentee before: Beijing Institute of Biological Products |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20121022 Address after: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. Patentee after: BEIJING WEIGU BIOLOGICAL MEDICAL Co.,Ltd. Address before: 100024 Beijing Chaoyang District three room south 4 Beijing biological product research institute limited liability company scientific research management department Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE CO.,LTD. |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee after: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee after: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. Address before: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee before: BEIJING WEIGU BIOLOGICAL MEDICAL Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210304 Address after: 101111 No.38, Jinghai 2nd Road, Beijing Economic and Technological Development Zone, Daxing District, Beijing Patentee after: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. Address before: 100024 scientific research management department of Beijing Institute of Biological Products Co., Ltd., 4 Sanjianfang Nanli, Chaoyang District, Beijing Patentee before: NATIONAL VACCINE & SERUM INSTITUTE Co.,Ltd. Patentee before: CHINA NATIONAL BIOTEC RESEARCH INSTITUTE Co.,Ltd. |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120711 Termination date: 20210418 |