CN101555517A - 一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒，包括试剂盒和药敏板，试剂盒包括盒体，盒体内放置有超纯水试剂、石蜡油试剂、生理盐水试剂和肺炎支原体快速鉴定培养基，药敏板包括板体和板盖，板体上设置有阴性检测孔和阳性检测孔，对应于阴性检测孔和阳性检测孔设置有若干个药性对比孔，和阳性检测孔对应的药性对比孔内装有检测药物。本发明还公开了一种检测方法，首先制备培养液，将培养液加入阴性检测孔中，提取病变溶液加入到培养液中制得混合溶液，将混合溶液加入到阳性检测孔和药性对比孔中进行培养，后读取结果。本发明肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒及检测方法，操作简单且检测周期短。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒，本发明还涉及利用该试剂盒进行检测的方法。
背景技术
肺炎支原体(M.Pneumonia)是一种特殊的微生物，是人类支原体肺炎的病原体。肺炎支原体既不是病毒，也不是细菌，而是介于病毒与细菌之间的一种微生物。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。一年四季均可发生，多在秋冬时节。除呼吸道感染外，MP还可引起脑炎、肾炎、心肌炎、免疫性溶血性贫血等多种肺外疾病，对儿童健康有很大危害性。由于肺炎支原体对一般药物耐药，所以及时确诊可特效治疗，缩短疗程，减少并发症。
目前，国内支原体肺炎的诊断主要依靠血清学检测。血清学检测特异性高，但在发病7～14天后才可检测到特异性抗体，故对早期诊断价值不大。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。比较常见的传统诊断方法是，通过平板培养大约7天后，观察菌落形态，通过镜鉴和生化反应确定是否为肺炎支原体，再用纸片法分析其耐药性，前后完成诊断大约需要30天的时间。对操作人员有较高要求，而且费时费力，不适合临床快速诊断的要求，对临床诊断的意义不大。
发明内容
本发明的目的是提供一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒，解决了现有的诊断方法存在的费时费力问题。
本发明的另一目的是提供利用该药敏试剂盒进行检测的方法。
本发明所采用的技术方案是，一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒，包括试剂盒和药敏板，试剂盒包括盒体，盒体内放置有超纯水试剂、石蜡油试剂、生理盐水试剂和肺炎支原体快速鉴定培养基，药敏板包括板体和板盖，板体上设置有阴性检测孔和阳性检测孔，对应于阴性检测孔和阳性检测孔设置有若干个药性对比孔，和阳性检测孔对应的药性对比孔内装有检测药物。
本发明所采用的另一技术方案是，利用该药敏试剂盒进行检测的方法，按以下步骤进行，
步骤1：取超纯水试剂和肺炎支原体快速鉴定培养基，把超纯水试剂加入到肺炎支原体快速鉴定培养基中，完全溶解后，得到培养液；
步骤2：取上步得到的培养液50～100μl，加入到板体上的阴性检测孔中；
步骤3：取一支生理盐水试剂，用棉拭子吸附生理盐水，在病变部位捻转数次，取出棉拭子，立即置于步骤1得到的培养液内，搅动棉拭子提取其中液体，用加样器吹打或用震荡器震荡混合得到混合后的培养液；
步骤4：取上步得到的混合后的培养液，分别加入到板体上的阳性检测孔和药性对比孔中，每个孔中加50～100μl；
步骤5：取石蜡油试剂，在板体上的每个孔内滴加50μl石蜡油，盖上板盖，把药敏板置于35～37℃孵箱培养；
步骤6：6～24小时内观察读取结果，检测标准如下：
若阴性检测孔不变色，阳性检测孔不变色，则表明无肺炎支原体生长，余下孔不做判断；
若阴性检测孔变色，则表明污染，试验无效；
若阴性检测孔不变色，阳性检测孔变色，表明样品中有肺炎支原体，判断余下各孔结果；
a：和阴性检测孔对应的药性对比孔不变色，和阳性检测孔对应的药性对比孔不变色，表示对该药性对比孔对应的药物敏感；
b：和阴性检测孔对应的药性对比孔不变色，和阳性检测孔对应的药性对比孔变色，表示对该药性对比孔对应的药物中等敏感；
c：和阴性检测孔对应的药性对比孔变色，和阳性检测孔对应的药性对比孔变色，表示对该药性对比孔对应的药物不敏感。
本发明的有益效果是，
(1)改进肺炎支原体培养基，在其中添加快速增长因子，使得肺炎支原体的培养突破了传统培养法的大约7天的时间限制，在6～24小时内即可完成肺炎支原体的培养，其成分主要包括蛋白胨、葡萄糖、酵母抽提物、指示剂、快速增长因子等。另外，将培养基加工为干粉状态，有利于产品的长期保存，用配套的超纯水溶解后即可使用。同时配套有超纯水，既为了方便使用，也为了避免不同地区水质的不同而导致的不可预期的结果，在最大限度上保证了本实用新型的产品稳定性。还配备有无菌生理盐水，用于在采集样本时湿润棉拭子，可保证采集到的样本短时间内的不会因为环境的改变而死亡，保证样本培养结果的准确性。
(2)药敏检测板所采用的方法原理，是在国际标准的NCCLS的微量液体稀释法原理的基础上改进而成。常规的微量液体稀释法是将经过镜鉴筛选的菌落进行扩大培养，再将培养好的培养液加入到事先稀释好的抗生素的浓度梯度中，培养观察结果。由于该法操作步骤较多，完成一个病例的药敏试验大约需要7～8天左右的时间，并且培养成功率较低，且需要专门实验人员进行操作。本发明药敏板包括药敏板体和板盖，在药敏板的左侧第一列设有对照孔，包括阳性和阴性对照反应孔，从第二列开始的每列反应孔均对应于一种目前常用的抗生素药物，包括：罗红霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、交沙霉素、麦迪霉素、麦白霉素、泰利霉素、莫昔沙星。且每种抗生素在药敏板上都有对应的高低两个浓度反应孔，所有抗生素均采用热包被法预先包被进药敏板反应孔中。每个药敏板体都有一个药敏板盖对应，可以防止外界的灰尘或其它杂物落入药敏孔或者划伤药敏反应孔，影响药敏试验的准确性。同时配备了灭菌后的石蜡油，用于在药敏试验过程中，封闭药敏反应孔，最大限度防止液体的挥发，影响结果的判断。
附图说明
图1是本发明药敏试剂盒中试剂盒的结构示意图；
图2是本发明药敏试剂盒中药敏板的结构示意图；
图3是本发明药敏试剂盒中板盖的结构示意图。
图中，1.盒体，2.超纯水试剂，3.石蜡油试剂，4.生理盐水试剂，5.肺炎支原体快速鉴定干粉培养基，6.阴性检测孔，7.阳性检测孔，8.药性对比孔，9.板体，10.板盖。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒包括试剂盒部分和药敏板部分，试剂盒的结构如图1所示，包括盒体1，盒体1内放置有两个超纯水试剂2、一个石蜡油试剂3、一个生理盐水试剂4和一个肺炎支原体快速鉴定培养基5，药敏板的结构如图2及图3所示，包括板体9和板盖10，板体9上设置有阴性检测孔6和阳性检测孔7，对应于阴性检测孔6和阳性检测孔7设置有两行药性对比孔8，和阳性检测孔7对应的一行药性对比孔8内装有检测药物。
利用本发明药敏试剂盒进行检测的方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1：取一支超纯水试剂2和一支肺炎支原体快速鉴定培养基5，把超纯水加入到肺炎支原体快速鉴定培养基5中，完全溶解后，得到培养液；
步骤2：取上步得到的培养液50～100μl，加入到药敏板上的阴性检测孔6中；
步骤3：取一支生理盐水试剂4，用棉拭子吸附生理盐水，在病变部位捻转数次，取出棉拭子，立即置于步骤1得到的培养液内，搅动棉拭子数次，提取棉拭子，对着瓶壁尽量挤压出其中液体，取出棉拭子，用加样器吹打数次或用震荡器震荡混匀，得到混合后的培养液；
步骤4：取上步得到的混合后的培养液50～100μl，分别加入到药敏板上的阳性检测孔7和药性对比孔8中；
步骤5：取石蜡油试剂3，在药敏板上的每个孔内滴加50μl石蜡油，盖上板盖10，把药敏板置于35～37℃孵箱培养；
步骤6：6～24小时内观察读取结果，检测标准如下：
(1)若阴性检测孔6不变色，阳性检测孔7不变色，则表明无肺炎支原体生长，余下孔不做判断；
(2)若阴性检测孔6变色，则表明污染，试验无效；
(3)若阴性检测孔6不变色，阳性检测孔7变色，表明样品中有肺炎支原体，判断余下各孔结果；
a：和阴性检测孔6对应的药性对比孔8不变色，和阳性检测孔7对应的药性对比孔8不变色，表示对该列对应的药物敏感；
b：和阴性检测孔6对应的药性对比孔8不变色，和阳性检测孔7对应的药性对比孔8变色，表示对该列对应的药物中等敏感；
c：和阴性检测孔6对应的药性对比孔8变色，和阳性检测孔7对应的药性对比孔8变色，表示对该列对应的药物不敏感。
实施例
取一支超纯水试剂2和一支肺炎支原体快速鉴定培养基5，把1.5ml超纯水加入到肺炎支原体快速鉴定培养基5中，完全溶解后，得到培养液；取上步得到的培养液50μl，加入到药敏板上的阴性检测孔6中；取一支生理盐水试剂4，用棉拭子吸附生理盐水，在病变部位捻转数次，取出棉拭子，立即置于步骤1得到的培养液内，搅动棉拭子数次，提取棉拭子，对着瓶壁尽量挤压出其中液体，取出棉拭子，用加样器吹打数次或用震荡器震荡混匀，得到混合后的培养液；取上步得到的混合后的培养液50μl，分别加入到药敏板上的阳性检测孔7和药性对比孔8中；取石蜡油试剂3，在药敏板上的每个孔内滴加50μl石蜡油，盖上板盖10，把药敏板置于35～37℃孵箱培养；6～24小时内观察读取结果，
其中药敏板药物英文缩写及中文对照：
| 药物名称 | 红霉素 | 罗红霉素 | 克拉霉素 | 阿奇霉素 | 乙酰螺旋霉素 | 克林霉素 | 左氧氟沙星 | 司帕沙星 | 加替沙星 | 交沙霉素 | 麦迪霉素 | 麦白霉素 | 泰利霉素 | 莫昔沙星 |
| 英文缩写 | ERY | ROX | CLA | AZI | ACE | CLI | LEV | SPA | GAT | JOS | MID | MEL | TEL | MOX |
检测结果如下：
阴性检测孔6为红色或草绿色，阳性检测孔为7黄色，表明样品中有肺炎支原体，判断余下各孔结果：
ERY药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对ERY药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ERY药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ERY药物不敏感；
ROX药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对ROX药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ROX药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ROX药物不敏感；
CLA药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对CLA药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对CLA药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对CLA药物不敏感；
AZI药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对AZI药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对AZI药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对AZI药物不敏感；
ACE药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对ACE药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ACE药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对ACE药物不敏感；
CLI药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对CLI药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对CLI药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对CLI药物不敏感；
LEV药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对LEV药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对LEV药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对LEV药物不敏感；
SPA药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对SPA药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对SPA药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对SPA药物不敏感；
GAT药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对GAT药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对GAT药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对GAT药物不敏感；
JOS药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对JOS药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对JOS药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对JOS药物不敏感；
MID药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对MID药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MID药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MID药物不敏感；
MEL药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对MEL药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MEL药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MEL药物不敏感；
TEL药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对TEL药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对TEL药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对TEL药物不敏感；
MOX药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为红色或草绿色，表明该肺炎支原体对MOX药物敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为红色或草绿色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MOX药物中等敏感；药物对比孔8对应于阴性检测孔6为黄色，对应于阳性检测孔7为黄色，表明该肺炎支原体对MOX药物不敏感。
本发明肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒及检测方法，操作简单且检测周期短。
Claims (2)
1.一种肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒，其特征在于，包括试剂盒和药敏板，所述试剂盒包括盒体(1)，盒体(1)内放置有超纯水试剂(2)、石蜡油试剂(3)、生理盐水试剂(4)和肺炎支原体快速鉴定培养基(5)，所述药敏板包括板体(9)和板盖(10)，板体(9)上设置有阴性检测孔(6)和阳性检测孔(7)，对应于阴性检测孔(6)和阳性检测孔(7)设置有若干个药性对比孔(8)，和阳性检测孔(7)对应的药性对比孔(8)内装有检测药物。
2.一种利用权利要求1所述的肺炎支原体快速鉴定培养药敏试剂盒进行检测的方法，其特征在于，包括试剂盒和药敏板，所述试剂盒包括盒体(1)，盒体(1)内放置有超纯水试剂(2)、石蜡油试剂(3)、生理盐水试剂(4)和肺炎支原体快速鉴定培养基(5)，所述药敏板包括板体(9)和板盖(10)，板体(9)上设置有阴性检测孔(6)和阳性检测孔(7)，对应于阴性检测孔(6)和阳性检测孔(7)设置有若干个药性对比孔(8)，和阳性检测孔(7)对应的药性对比孔(8)内装有检测药物，
具体按照以下步骤实施，
步骤1：取超纯水试剂(2)和肺炎支原体快速鉴定培养基(5)，把超纯水试剂(2)加入到肺炎支原体快速鉴定培养基(5)中，完全溶解后，得到培养液；
步骤2：取上步得到的培养液50～100μl，加入到板体(9)上的阴性检测孔(6)中；
步骤3：取一支生理盐水试剂(4)，用棉拭子吸附生理盐水，在病变部位捻转数次，取出棉拭子，立即置于步骤1得到的培养液内，搅动棉拭子提取其中液体，用加样器吹打或用震荡器震荡混合得到混合后的培养液；
步骤4：取上步得到的混合后的培养液，分别加入到板体(9)上的阳性检测孔(7)和药性对比孔(8)中，每个孔中加50～100μl；
步骤5：取石蜡油试剂(3)，在板体(9)上的每个孔内滴加50μl石蜡油，盖上板盖(10)，把药敏板置于35～37℃孵箱培养；
步骤6：6～24小时内观察读取结果，检测标准如下：
若阴性检测孔(6)不变色，阳性检测孔(7)不变色，则表明无肺炎支原体生长，余下孔不做判断；
若阴性检测孔(6)变色，则表明污染，试验无效；
若阴性检测孔(6)不变色，阳性检测孔(7)变色，表明样品中有肺炎支原体，判断余下各孔结果；
a：和阴性检测孔(6)对应的药性对比孔(8)不变色，和阳性检测孔(7)对应的药性对比孔(8)不变色，表示对该药性对比孔(8)对应的药物敏感；
b：和阴性检测孔(6)对应的药性对比孔(8)不变色，和阳性检测孔(7)对应的药性对比孔(8)变色，表示对该药性对比孔(8)对应的药物中等敏感；
c：和阴性检测孔(6)对应的药性对比孔(8)变色，和阳性检测孔(7)对应的药性对比孔(8)变色，表示对该药性对比孔(8)对应的药物不敏感。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20091014 |