CN101554382B - 三萜类物质的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种三萜类物质的用途，所述三萜类物质是如式I所示的一个或多个化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，R1选自葡萄糖基，葡萄糖(1→2)葡萄糖，葡萄糖(1→4)葡萄糖，或(2’-OSO3H)葡萄糖；R2选自羟基，醇基，或氢原子；R3选自烷基，羧基，醇基，或COOGlu；R4选自烷基，或羟基；R5选自烷基；R6选自羟基，或氢原子；所述的三萜类物质可被用于制备预防或治疗白细胞减少的组合物。
Description
技术领域
本发明属于药物学领域，更具体地，涉及一种三萜类物质的新用途。
背景技术
墨旱莲是一味传统的中药材，为菊科植物鳢肠(Eclipta prostrate Linn.)的全草，始载于《唐本草》。中医认为墨旱莲性甘酸、凉，入肝、肾经，具有滋肝补血、凉血止血之功效，主治吐血、咳血、须发早白、淋浊、带下等症。据报道，墨旱莲全草含皂甙、黄酮、鳢肠素、鞣质、维生素、烟碱以及多种噻吩化合物等；叶含香豆草醚类化合物，如蟛蜞菊内酯、去甲基蟛蜞菊内酯和去甲基蟛蜞菊内酯-7-葡萄糖甙。张梅等人从墨旱莲全草中分得4个三萜化合物，经理化常数测定和光谱解析，2个已知的化合物分别为刺囊酸和齐墩果酸，另2个为新化合物，分别命名为旱莲甙A(ecliptasaponin A)和旱莲甙B(ecliptasaponin B)(张梅，陈雅妍.旱莲草化学成分旱莲甙A和旱莲甙B的分离和鉴定.药学学报，1996，31(3)：196-199)。现代药理学研究表明，墨旱莲具有止血、免疫调节、扩血管、抗诱变、抗炎等方面的作用。有报道认为墨旱莲的免疫增强活性成分为木樨草素和槲皮素(张梅，邸晓辉，刘梅.旱莲草中黄酮类成分的免疫调节作用.中草药，1997，28(10)：615)。刘雪英等人研究发现，墨旱莲乙酸乙酯提取物(主要为皂甙类成分)对于免疫功能低下小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫具有明显的促进作用(刘雪英，蒋永培，赵越平，汤海峰.墨旱莲乙酸乙酯总提取物对小鼠免疫功能的调节作用.中药材，2000，23(7)：407-409)。
然而，目前关于从墨旱莲中提取的三萜类化合物的药理作用鲜有报道，至今为止，无文献报道过该类化合物在调节免疫、升高白细胞方面的作用。
发明内容
本发明旨在提供一种三萜类物质的新用途。
在本发明的第一方面，提供了一种三萜类物质的用途，所述的三萜类物质被用于制备预防或治疗白细胞减少的组合物，所述三萜类物质是如式I所示的一个或多个化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
R1选自葡萄糖基，葡萄糖(1→2)葡萄糖，葡萄糖(1→4)葡萄糖，或(2’-OSO3H)葡萄糖；
R2选自羟基，醇基，或氢原子；
R3选自烷基，羧基，醇基，或COOGlu；
R4选自烷基，或羟基；
R5选自烷基；
R6选自羟基，或氢原子；
在另一优选例中，所述的三萜类物质中含有重量百分比为10-100％的如式II所示的化合物：
；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基。
在另一优选例中，所述的药学上可接受的酯是式I化合物与选自下组的化 合物所形成的酯：氨基酸、C1-35的脂肪酸、C1-35的脂肪醇、半乳糖、氨基半乳糖、木糖、夫糖、葡萄糖、葡萄糖胺、葡萄糖醛酸、甘露糖、或唾液酸；所述的药学上可接受的盐是式I化合物与碱金属或碱土金属所形成的盐，所述的碱金属或碱土金属选自钠、钾、钙或镁。
在另一优选例中，所述的白细胞减少选自白细胞减少症、粒细胞减少症、或粒细胞缺乏症。
在另一优选例中，所述的粒细胞减少症选自慢性粒细胞减少症或周期性粒细胞减少症。
在另一优选例中，所述三萜类物质是从菊科植物中提取的；优选所述的菊科植物选自鳢肠(Eclipta prostrate Linn.)、或蟛蜞菊(Wedelia chinensisMerr.)。
在另一优选例中，所述的三萜类物质中含有重量百分比为60-100％的如式II所示的化合物；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基。
在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物、保健食品组合物或化妆品组合物。
在本发明的第二方面，提供了一种三萜类物质的用途，所述的三萜类物质被用于制备预防或治疗白细胞减少引起的免疫抑制的组合物，所述三萜类物质是如式I所示的一个或多个化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中，
R1选自葡萄糖基，葡萄糖(1→2)葡萄糖，葡萄糖(1→4)葡萄糖，或(2’-OSO3H)葡萄糖；
R2选自羟基，醇基，或氢原子；
R3选自烷基，羧基，醇基，或COOGlu；
R4选自烷基，或羟基；
R5选自烷基；
R6选自羟基，或氢原子；
在另一优选例中，所述的三萜类物质中含有重量百分比为10-100％的如式II所示的化合物；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基。
在另一优选例中，所述三萜类物质是从菊科植物中提取的；优选所述的菊科植物选自鳢肠(Eclipta prostrate Linn.)、或蟛蜞菊(Wedelia chinensisMerr.)。
在另一优选例中，所述的三萜类物质中含有重量百分比为60-100％的如式II所示的化合物；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基。
在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物、保健食品组合物或化妆品组合物。
据此，本发明提供了从墨旱莲中提取的三萜类化合物在调节免疫、升高白细胞方面的作用。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，发现三萜类物质，尤其是从菊科植物中提取得到的该类物质具有明显地升高白细胞的作用，因而可用于治疗各种原因引起的白细胞减少，特别是有效改善放疗、化疗后病人白细胞减少的症状，有效对抗化疗药物引起的免疫抑制，提高机体的免疫反应。
如本文所用，“三萜类物质”、“三萜类化合物”和“三萜类成分”可互换使用，都是指单个的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯，或是指2个或2个以上的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的混合物：
其中，
R1选自葡萄糖基，葡萄糖(1→2)葡萄糖，葡萄糖(1→4)葡萄糖，或(2’-OSO3H)葡萄糖；
R2选自羟基，醇基，或氢原子；
R3选自烷基，羧基，醇基，或COOGlu；
R4选自烷基，或羟基；
R5选自烷基；
R6选自羟基，或氢原子。
在另一优选例中，所述的三萜类化合物包括旱莲苷A和选自下组中的一种或多种：eclalbasaponin I、eclalbasaponin II、eclalbasaponin III、eclalbasaponin IV、eclalbasaponin V、eclalbasaponin VI、eclalbasaponinVII、eclalbasaponin VIII、eclalbasaponin IX、eclalbasaponin X、eclalbasaponin XI、eclalbasaponin XII、eclalbatin、旱莲苷B、旱莲苷C、旱莲苷D。
在另一优选例中，所述的三萜类化合物为选自具有如下结构的一种或多种化合物：
在另一优选例中，所述的三萜类化合物是如式II的旱莲苷A。
所述的烷基选自具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。优选具有1-4个碳原子的直链或支链的烷基，特别优选甲基或乙基，最优选甲基。
所述的醇基选自具有1-6个碳原子的直链或支链的醇基，例如甲醇基、乙醇基、丙醇基、异丙醇基、丁醇基、异丁醇基等。优选甲醇基或乙醇基。
在本发明的一个优选例中，R1代表葡萄糖基、葡萄糖(1→2)葡萄糖、或葡萄糖(1→4)葡萄糖，最优选葡萄糖基；R2代表羟基、乙醇基或氢原子，最优选羟基；R3代表烷基、羧基、醇基或COOGlu，更优选羧基、甲醇基、COOGlu或C1-4烷基，最优选羧基；R4代表烷基或羟基，更优选C1-4烷基或羟基，最优选甲基或羟基；R5代表C1-4烷基，最优选甲基；R6代表羟基或氢原子，最优选氢原子。
在本发明的另一优选例中，R1代表葡萄糖基、葡萄糖(1→2)葡萄糖、或葡萄糖(1→4)葡萄糖，R2代表羟基、乙醇基或氢原子，R3代表羧基、甲醇基、COOGlu或甲基，R4代表甲基或羟基，R5代表甲基，R6代表氢原子或羟基。
如本文所用，“葡萄糖(1→2)葡萄糖”是指一个葡萄糖的1位与母核连接，同时该葡萄糖的2位与另一个葡萄糖相连接。
如本文所用，“葡萄糖(1→4)葡萄糖”是指一个葡萄糖的1位与母核连接，同时该葡萄糖的4位与另一个葡萄糖相连接。
如本文所用，“白细胞减少”是指外周血白细胞计数持续低于正常值(4×109/L)。电离辐射、化学毒物(例如苯等)及细胞毒药物可直接损伤造血干 细胞或干扰粒细胞增殖周期，造成如前所述的白细胞减少。营养缺乏、恶性肿瘤骨转移、白血病、病毒性肝炎、系统性红斑狼疮、Felty综合症、类风湿性关节炎、脾功能亢进、败血症、惰性白细胞综合征、内毒血症、新生儿同种免疫性粒细胞减少症、血液透析等均可导致如前所述的白细胞减少。
如本文所用，“活性成分”和“活性部分”可互换使用，都是指本发明提供的三萜类物质，它具有升高生物体内白细胞数量的作用，并能预防或治疗生物体由于白细胞减少所引起的免疫抑制。所述的生物体优选哺乳动物，更佳的是人。
在本发明中，三萜类物质可由植物中提取获得，或者可通过化学合成、半合成、生物转化的方式获得，例如从菊科植物鳢肠(Eclipta prostrata Linn.)、或蟛蜞菊(Wedelia chinensis Merr.)等植物中提取。该物质在菊科植物中的提取部位为植物的枝、叶、花或果实部位。通常，在提取物中三萜类物质的纯度按重量计应在0.01％-99.9％，更佳地为20-98％。
在本发明的一个优选例中，所述的三萜类物质可以通过以下方法获得：
(1)鳢肠干燥全草，加入乙醇，浸泡，加热回流提取，冷藏放置过夜，抽滤，得到澄清液体；
(2)减压浓缩回收乙醇，浓缩，加入100℃的蒸馏水，搅拌混匀，抽滤得到溶液；
(3)将上述步骤得到的溶液，倾入预处理好的D101大孔吸附树脂层析柱上，首先加入蒸馏水，然后分别采用不同浓度的乙醇作为流动相，收集洗涤液，减压回收，低温干燥。
在本发明中，三萜类化合物可以以药学或生理学上可接受的盐或酯的形式使用。这些盐或酯包括(但不限于)与如下化合物形成的盐或酯：氨基酸、脂肪酸、脂肪醇、杂环化合物、肼、肟、生物碱、半乳糖、氨基半乳糖、木糖、夫糖、葡萄糖、葡萄糖胺、葡萄糖醛酸、甘露糖、唾液酸、酰类化合物、酐类化合物或醛类化合物。卤化物的盐同样适用。其他盐包括：与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以及以其他常规的“前体药物”形式存在的盐(当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分)。
“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。
用途
本发明的三萜类化合物或含有该化合物的提取物可用于治疗白细胞减少。
可将含有式I化合物的植物提取物直接给药；或者可将式I化合物的植物提取物进行提纯和加工，制成纯净形式的式I化合物、或各种形式的式I化合物的制剂后，用于给药。
所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约0.5-500mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以2-4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-100mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体混合的约0.5-500mg的活性化合物。可调节此治疗方案以达到最佳治疗效果。例如，可根据治疗状况的需要，每天若干次分开给药，或将剂量按比例减少。通常，成人口服临床剂量的范围为1-1000mg/日，优选为10-200mg/日，成人非口服的剂量为0.1-100mg/日，优选1-100mg/日。
在使用本发明三萜类物质或含有该物质的提取物治疗白细胞减少时，还可与其他治疗剂联用。例如与选自下组的一种或多种辅助活性成分联用：维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸、鲨肝醇、集落刺激因子、重组人类粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。本发明人研究发现，三萜类化合物或其药学上可接受的盐或酯与这些辅助性活性成分联用可显著提高疗效。
通常，当本发明三萜类物质用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、栓剂等。
上述剂型中可经口服给药的剂型为：片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。
上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括：注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括：无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。
上述剂型中可经胃肠道外途径给药的有：气雾剂、粉雾剂、栓剂。粉雾剂中适合的载体实例包括：乳糖、葡聚糖、阿拉伯胶、甘露、葡萄糖和十二烷基硫酸钠。气雾剂中适合的溶剂为无菌水、乙醇、植物油、油酸。适合的抛射剂为三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、丙烷、异丁烷、二氧化碳、氮气。栓剂的制备可将药物与一种适合的无刺激性赋形剂混合而成，赋形剂包括：可可脂、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羟苯乙酯、甘油。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物制剂是固态制剂，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。优选口服给药。
本发明所说的“保健食品”是指具有特定保健功能的食品，即适用于特定人群食用、具有调节机体功能、不直接以治疗为目的的食品。该保健食品通常含有1-50％(重量)的本发明所述提取物。
组合物
本发明提供了一种组合物，所述的组合物含有：
(a)如式I所示的作为主要活性成分的0.05-99wt％的三萜类物质或其药学上可接受的盐或酯，或者含三萜类物质的提取物
其中，
R1选自葡萄糖基，葡萄糖(1→2)葡萄糖，葡萄糖(1→4)葡萄糖，或(2’-OSO3H)葡萄糖；
R2选自羟基，醇基，或氢原子；
R3选自烷基，羧基，醇基，或COOGlu；
R4选自烷基，或羟基；
R5选自烷基；
R6选自羟基，或氢原子；
(b)有效量的选自下组的一种或多种辅助活性成分：维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸、鲨肝醇、集落刺激因子、重组人类粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；和
(c)药学上可接受的载体。
所述的烷基选自具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基等。优选具有1-4个碳原子的直链或支链的烷基，特别优选甲基或乙基，最优选甲基。
所述的醇基选自具有1-6个碳原子的直链或支链的醇基，例如甲醇基、乙醇基、丙醇基、异丙醇基、丁醇基、异丁醇基等。优选甲醇基或乙醇基。
在本发明的一个优选例中，R1代表葡萄糖基、葡萄糖(1→2)葡萄糖、或葡萄糖(1→4)葡萄糖，最优选葡萄糖基；R2代表羟基、乙醇基或氢原子，最优选羟基；R3代表烷基、羧基、醇基或COOGlu，更优选羧基、甲醇基、COOGlu或C1-4烷基，最优选羧基；R4代表烷基或羟基，更优选C1-4烷基或羟基，最优选甲基或羟基；R5代表C1-4烷基，最优选甲基；R6代表羟基或氢原子，最优选氢原子。
在本发明的另一优选例中，R1代表葡萄糖基、葡萄糖(1→2)葡萄糖、或葡萄糖(1→4)葡萄糖，R2代表羟基、乙醇基或氢原子，R3代表羧基、甲醇基、COOGlu或甲基，R4代表甲基或羟基，R5代表甲基，R6代表氢原子或羟基。
在另一优选例中，所述的组合物中，辅助活性成分的含量是0.0001-20wt％。
在另一优选例中，所述组合物的剂型选自：注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、栓剂。
在另一优选例中，所述的组合物包括药物组合物、保健食品组合物或化妆品组合物。
“药学上可接受的载体”是用于将本发明的三萜类化合物或其生理上可接受的盐传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。
治疗方法
本发明提供了一种能有效升高白细胞的方法，所述方法包括，给予需要的患者有效量的三萜类物质，或者含三萜类物质的提取物。
本发明还包括治疗白细胞减少的方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的本发明三萜类物质。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：
1、首次揭示从墨旱莲中提取的三萜类化合物具有明显的升高白细胞的作用，因而可用于治疗各种原因引起的白细胞减少，特别是有效改善放疗、化疗后病人白细胞减少的症状，有效对抗化疗药物引起的免疫抑制，提高机体的免疫反应；
2、所述的三萜类化合物可以从天然植物中获得，对人体没有毒副作用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
鳢肠(Eclipta prostra te Linn.)中提取化合物旱莲甙A
(1)浸泡及提取
鳢肠干燥全草，精选叶10公斤，加入8倍体积95％乙醇，浸泡4小时，加热回流提取1小时，趁热抽滤，残渣再加入8倍体积95％乙醇加热回流提取1小时，趁热抽滤；合并两次滤液，冷藏放置过夜，抽滤，得到澄清滤液。
(2)样品制备
减压浓缩回收乙醇，至浓缩稠膏为深墨绿色，倾出。取1.0公斤稠膏，加入7倍体积的100℃的蒸馏水，搅拌混匀后，抽滤；残渣再加入4倍体积的100℃的蒸馏水，搅拌混匀后，抽滤；合并两次水液，即得。
(3)大孔吸附树脂预处理
取D101型大孔吸附树脂5公斤，加入10倍体积95％乙醇浸泡48小时，流出乙醇洗涤液，再加入3倍体积95％乙醇，洗涤一次，然后加入蒸馏水按30毫升/分钟流速，洗涤大孔吸附树脂至流出液含醇量在5％以下即可。
(4)大孔吸附树脂分离
将(2)中得到的溶液，倾入(3)中处理好的D101大孔吸附树脂层析柱上，流速为10毫升/分钟，先加入蒸馏水洗涤至流出液无色；再用40％的乙醇，洗涤至流出液无色；最后用60％乙醇，洗涤至流出液无色，收集60％乙醇洗涤液，减压浓缩至稠膏为棕红色，倾出。
(5)硅胶柱层析分离
取(4)中稠膏5克，加入10克(200-300)目层析硅胶搅拌均匀后，60℃干燥至干，置200克硅胶层析柱上，用氯仿—甲醇梯度洗脱，流速2毫升/分钟，按100毫升为一个流份收集流出液，薄层检测(氯仿-甲醇8∶1)，合并相同流份，即得。
(6)MCI柱脱色
将(5)中的合并流份，减压浓缩至干，加入150毫升甲醇充分溶解，置处理好的100克MCI层析柱上，甲醇作为流动相，流速2毫升/分钟，50毫升为一个流份，薄层检测(氯仿-甲醇8∶1)，收集相同流份，即得。
(7)丙酮重结晶
取(6)中的合并流份，减压浓缩至干，加入150毫升丙酮和1.0克活性 炭粉末，加热回流1小时，趁热过滤，滤液冷藏放置过夜，抽滤，得到白色粉末。
(9)纯度检测
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.6％冰醋酸溶液(32∶68)为流动相，流速1.0ml/min，柱温40℃，蒸发光散射检测器检测。面积归一化法计算，纯度在98％以上。
样品的性状、分子式、结构式、ESIMS，1HNMR，13CNMR峰的归属如下：
白色粉末，分子式：C36H58O9，分子量：634
样品1HNMR测定数据
| H编号 | 样品化学位移 (δppm，CD3OD) | 文献值 (δppm，CD3OD) | 峰形 | 质子数 |
| 16 | 3.68 | 3.70 | m | 1 |
| 3 | 3.84 | 3.92 | t | 1 |
| 12 | 5.30 | 5.15 | m | 1 |
| 1’ | 4.40 | 4.35 | d | 1 |
样品13CNMR谱测定数据
| C编号 | 样品化学位移 (δppm) | 文献值(δppm) | DEPT | C原子数 |
| 28 | 181.661 | 179.1 | 季碳 | 1 |
| 13 | 145.555 | 145.9 | 季碳 | 1 |
| 12 | 123.940 | 123.9 | 叔碳 | 1 |
| 1’ | 107.244 | 107.0 | 叔碳 | 1 |
[0137]
| 3 | 91.313 | 91.4 | 叔碳 | 1 |
| 16 | 78.748 | 78.7 | 叔碳 | 1 |
样品质谱测定数据
参考文献：张梅，陈雅妍。旱莲草化学成分旱莲甙A和旱莲甙B的分离和鉴定。药学学报，1996，31(3)：196-199)表明得到的化合物为旱莲甙A。
实施例2
鳢肠(Eclipta prostrate Linn.)中提取三萜类化合物
(1)浸泡及提取
墨旱莲干燥全草，精选叶10公斤，加入80升95％乙醇，浸泡4小时，加热回流提取1小时，趁热抽滤，药渣再加入80升95％乙醇加热回流提取1小时，趁热抽滤，药渣弃掉；合并两次滤液，4摄氏度放置12小时，抽滤，得到绿色澄清滤液。
(2)乙醇回收
负0.1兆帕压力下，温度不超过60摄氏度，减压回收乙醇，至浓缩稠膏60摄氏度相对密度在1.3克/毫升左右，倾出，得到深墨绿色稠膏。
(3)热水溶解
取1.0公斤稠膏，加入100摄氏度的蒸馏水5升，搅拌混匀后，抽滤；残渣再加入100摄氏度的蒸馏水2升，搅拌混匀后，抽滤；合并两次水液，即得。
(4)大孔吸附树脂预处理
取D101型大孔吸附树脂5公斤，加入10升95％乙醇浸泡48小时，置直径15厘米，长度120厘米的玻璃层析柱中，按50毫升/分钟流速，流出乙醇洗涤液，再加入3升95％乙醇，洗涤一次，然后加入蒸馏水按30毫升/分钟流速，洗涤大孔吸附树脂至流出液含醇量在5％以下即可。
(5)大孔吸附树脂分离
将(3)中得到的水液，放置到在40-50摄氏度，倾入(4)中处理好D101大孔吸附树脂层析柱上，流速为10毫升/分钟，首先加入蒸馏水洗涤至流出液无色；再用40％的乙醇作为流动相，洗涤至流出液无色；最后用60％乙醇作为 流动相，洗涤至流出液无色，收集60％乙醇洗涤液，减压回收，60℃低温干燥。
三萜类化合物定性试验(冰醋酸-乙酰氯反应)：样品溶于冰醋酸中，加乙酰氯数滴及氯化锌晶体数粒，稍加热，则呈现紫红色。
经HPLC检测(色谱条件：柱温40℃，流动相为乙腈-0.6％冰醋酸溶液，流速为1.0ml/min，色谱柱为Shimadzu shim-pack(VP-ODS 150L×4.6)，检测时间为30分钟)，上述方法提取得到的三萜类化合物中旱莲甙A的含量为19.5％。
实施例3
三萜类化合物对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的治疗作用
实验动物：
雄性SPF级C57BL/6小鼠60只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。
实验药品：
由实施例1制备得到的样品，编号APL-2；
由实施例2制备得到的样品，编号APL-3；
利可君，购自江苏吉贝尔药业有限公司；
注射用环磷酰胺，购自常州新力医药化工有限公司。
实验方法：
1、造模方法：
除正常对照组外，将其余的动物随机分为5组，腹腔注射环磷酰胺100mg/kg体重连续3天造成白细胞减少症模型；
2、给药情况：
(1)正常组，(2)模型组，(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g体重的生理盐水；(3)(4)组分别为利可君高、低剂量组：小鼠分别给予剂量为40mg/kg体重、10mg/kg体重的利可君；(5)组为APL-2组：给予剂量为30mg/kg体重的APL-2；(6)组为APL-3组：给予剂量为150mg/kg体重的APL-3。以上各组均为造模前提前3天灌胃给药，每日1次，连续10天。
本实验通过环磷酰胺造模前提前3天给药，从而使药物在血液中的浓度明显升高，达到治疗有效量。
末次给药24小时后，摘眼球取血，检测血中白细胞总数(WBC)，并计算： 升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％结果见表1。
表1三萜类化合物对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的影响(X±SD，n＝10)
| 组别 | 数量 (只) | 剂量(mg/kg体重) | WBC (×109/L) | 升白率 (％) |
| 正常组 | 10 | - | 4.27±0.33 | - |
| 模型组 | 10 | - | 1.42±0.46△ | - |
| 利可君高剂量组 | 10 | 40 | 2.13±0.53* | 50.00 |
| 利可君低剂量组 | 10 | 10 | 4.12±2.44** | 190.14 |
| APL-2组 | 10 | 30 | 5.12±1.66** | 260.56 |
| APL-3组 | 10 | 150 | 5.23±1.81** | 268.31 |
*表示p＜0.05，与模型组相比，有显著性差异；
**表示p＜0.01，与模型组相比，有极显著性差异；
△表示p＜0.01，与正常组相比，有极显著性差异。
结果表明，模型组小鼠的白细胞数(1.42±0.46)与正常组(4.27±0.33)相比具有极显著性差异(p＜0.01)，表明造模成功。
APL-2组、APL-3组小鼠的白细胞数(5.12±1.66，5.23±1.81)明显高于模型组(1.42±0.46)，有极显著性差异(p＜0.01)。
以上实验结果表明，旱莲甙A、三萜类化合物对环磷酰胺所致外周血白细胞数减少有明显的保护、治疗作用，且未发现任何毒副作用，安全性好。
此外，本发明人的实验还表明，在给予APL-2、APL-3的同时给予白细胞减少的小鼠维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸或鲨肝醇，可实现更好的升高白细胞效果。
实施例4
三萜类化合物对60Co-γ所致小鼠骨髓损伤的保护作用
实验动物：
雄性SPF级ICR小鼠60只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。
实验药品：
由实施例1制备得到的样品，编号APL-2；
由实施例2制备得到的样品，编号APL-3；
利可君，购自江苏吉贝尔药业有限公司。
实验方法：
1、造模方法：
除正常对照组动物外，将其余的动物随机分为5组，用60Co-γ射线照射一次，剂量为7.50Gy(剂量率为450伦/分)。
2、给药情况：
(1)正常对照组，(2)模型组，(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g体重的生理盐水；(3)(4)组分别为利可君高、低剂量组：小鼠分别给予剂量为40mg/kg体重、10mg/kg体重的利可君；(5)组为APL-2组：给予剂量为30mg/kg体重的APL-2；(6)组为APL-3组：给予剂量为150mg/kg体重的APL-3。以上各组均为照射前7天灌胃给药，每日1次，连续14天。末次给药24小时后，摘眼球取血，检测血中白细胞数(WBC)，并计算
升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％
结果见表2。
表2三萜类化合物对60Co-γ照射损伤小鼠血液学的影响(X±SD，n＝10)
| 组别 | 数量(只) | 剂量(mg/kg体重) | WBC(×109/L) | 升白率(％) |
| 正常组 | 10 | - | 6.31±1.26 | - |
| 模型组 | 10 | - | 1.78±0.26△ | - |
| 利可君高剂量组 | 10 | 40 | 2.19±0.49 | 23.03 |
| 利可君低剂量组 | 10 | 10 | 4.53±1.36** | 154.49 |
| APL-2组 | 10 | 30 | 5.33±1.16** | 199.44 |
| APL-3组 | 10 | 150 | 5.58±1.44** | 213.48 |
**表示p＜0.01，与模型组相比，有极显著性差异；
△表示p＜0.01，与正常组相比，有极显著性差异。
结果表明，APL-2组、APL-3组的白细胞数(5.33±1.16，5.58±1.44)与模型组(1.78±0.26)相比有极显著性差异(p＜0.01)，并且疗效和安全性明显优于阳性对照药-利可君。APL-2、APL-3对60Co-γ照射所致外周白细胞减少有明显的保护、治疗作用。
实施例5
三萜类化合物抵抗环磷酰胺对小鼠胸腺和脾脏指数的抑制作用
实验动物：
雄性SPF级KM小鼠60只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。
实验药品：
由实施例1制备得到的样品，编号APL-2；
由实施例2制备得到的样品，编号APL-3；
利可君，购自江苏吉贝尔药业有限公司；
注射用环磷酰胺，购自常州新力医药化工有限公司。
实验方法：
1、造模方法：
除正常对照组外，将其余的动物随机分为5组，腹腔注射环磷酰胺100mg/kg体重造成白细胞减少症模型；
2、给药情况：
(1)正常对照组，(2)模型组，(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g体重的生理盐水；(3)(4)组分别为利可君高、低剂量组：小鼠分别给予剂量为40mg/kg体重、10mg/kg体重的利可君；(5)组为APL-2组：给予剂量为30mg/kg体重的APL-2；(6)组为APL-3组：给予剂量为150mg/kg体重的APL-3。以上各组均为造模前提前3天灌胃给药，每日1次，连续10天。
本实验通过环磷酰胺造模前提前3天给药，从而使药物在血液中的浓度明显升高，达到治疗有效量。
末次给药24小时后，眼眶放血处死动物，称体重，解剖取胸腺和脾脏，并用电子天平精密称重，计算各组动物的胸腺指数(胸腺指数＝胸腺重量/体重)和脾指数(脾指数＝脾重量/体重)。结果见表3。
表3三萜类化合物对免疫功能低下小鼠的脾、胸腺指数的影响(X±SD，n＝10)
| 组别 | 数量 (只) | 剂量 (mg/kg体重) | 脾指数 (mg/g) | 胸腺指数 (mg/g) |
| 正常组 | 10 | - | 2.24±0.08 | 1.98±0.67 |
| 模型组 | 10 | - | 1.30±0.31△ | 0.67±0.25△ |
| 利可君高剂量组 | 10 | 40 | 1.18±0.53 | 0.61±0.22 |
[0218]
| 利可君低剂量组 | 10 | 10 | 1.94±0.92* | 0.63±0.22 |
| APL-2组 | 10 | 30 | 2.32±1.05* | 0.98±0.08 |
| APL-3组 | 10 | 150 | 2.45±0.56* | 0.93±0.06 |
*表示p＜0.05，与模型组相比，有显著性差异；
△表示p＜0.05，与正常组相比，有显著性差异。
结果表明，腹腔注射环磷酰胺后，与正常对照组相比，模型组小鼠的胸腺指数和脾指数显著降低，表明造模成功。APL-2、APL-3可显著增加免疫功能低下小鼠的脾指数，且差异具有显著性(p＜0.05)。因此，APL-2、APL-3能够显著对抗免疫抑制剂引起的免疫器官萎缩，对免疫器官具有保护作用，说明APL-2、APL-3可改善免疫抑制小鼠的非特异免疫功能。
实施例6
制备片剂
利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如表4和表5。
表4
| 成分 | 处方量(g/1000片) |
| 实施例1制备得到的样品(APL-2) | 100 |
| 乳糖 | 50 |
| 微晶纤维素 | 40 |
| 玉米淀粉 | 6 |
| 羧甲基淀粉钠 | 3 |
| 硬脂酸镁 | 1 |
| 总量 | 200 |
表5
| 成分 | 处方量(g/1000片) |
| 实施例1制备得到的样品(APL-3) | 100 |
| 乳糖 | 50 |
| 微晶纤维素 | 40 |
[0229]
| 玉米淀粉 | 6 |
| 羧甲基淀粉钠 | 3 |
| 硬脂酸镁 | 1 |
| 总量 | 200 |
实施例6
制备注射剂
注射剂的配方如表6所示。
表6
| 成分 | 处方量(g/1000ml) |
| 实施例1制备得到的样品(APL-2) | 10 |
| 亚硫酸氢钠 | 0.2 |
| 羧甲基纤维素钠 | 5 |
| 吐温-80 | 1.5 |
| 注射用水 | 加至1000ml |
制备方法如下：
①将亚硫酸氢钠加于500ml注射用水中，加入羧甲基纤维素钠，混匀，浸泡过夜(24小时)，全溶后，用210目尼龙布过滤；
②将溶液①水浴加热，加入吐温-80，混匀；
③至水浴沸腾，加入旱莲甙A，混匀，继续加热30分钟，取出冷却至室温，G3垂熔玻璃漏斗过滤；
④加注射用水至1000ml，混匀，灌封，用100℃30分钟灭菌。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
Claims (6)
1.一种三萜类物质的用途，其特征在于，被用于制备预防或治疗白细胞减少的组合物，所述三萜类物质中含有重量百分比为10-100％的如式II所示的化合物：
；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基础；
所述的三萜类物质通过以下方法获得：
（1）鳢肠干燥全草，加入乙醇，浸泡，加热回流提取，冷藏放置过夜，抽滤，得到澄清液体；
（2）减压浓缩回收乙醇，浓缩，加入100℃的蒸馏水，搅拌混匀，抽滤得到溶液；
（3）将上述步骤得到的溶液，倾入预处理好的D101大孔吸附树脂层析柱上，首先加入蒸馏水，然后分别采用不同浓度的乙醇作为流动相，收集洗涤液，减压回收，低温干燥。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的白细胞减少选自白细胞减少症、粒细胞减少症、或粒细胞缺乏症。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的粒细胞减少症选自慢性粒细胞减少症或周期性粒细胞减少症。
4.一种三萜类物质的用途，其特征在于，被用于制备预防或治疗白细胞减少引起的免疫抑制的组合物，所述三萜类物质中含有重量百分比为10-100％的如式II所示的化合物:
；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基础；
所述的三萜类物质通过以下方法获得：
（1）鳢肠干燥全草，加入乙醇，浸泡，加热回流提取，冷藏放置过夜，抽滤，得到澄清液体；
（2）减压浓缩回收乙醇，浓缩，加入100℃的蒸馏水，搅拌混匀，抽滤得到溶液；
（3）将上述步骤得到的溶液，倾入预处理好的D101大孔吸附树脂层析柱上，首先加入蒸馏水，然后分别采用不同浓度的乙醇作为流动相，收集洗涤液，减压回收，低温干燥。
5.如权利要求1或4所述的用途，其特征在于，所述的三萜类物质中含有重量百分比为60-100％的如式II所示的化合物；所述的重量百分比以所述的三萜类物质的总重量为基础。
6.如权利要求1或4所述的用途，其特征在于，所述的组合物是药物组合物、保健食品组合物或化妆品组合物。
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| 张梅，等."旱莲草化学成分旱莲甙A和旱莲甙B的分离和鉴定".《药学学报》.1996,第31卷(第3期),第196-199页. |
| 张梅，等."旱莲草化学成分的研究".《中国中药杂志》.1996,第21卷(第8期),第480-481,510页. |
| 张梅,等."旱莲草化学成分旱莲甙A和旱莲甙B的分离和鉴定".《药学学报》.1996,第31卷(第3期),第196-199页. * |
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