CN101525586A - 暗蓝色链霉菌及其应用 - Google Patents

暗蓝色链霉菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN101525586A
CN101525586A CN200910036920A CN200910036920A CN101525586A CN 101525586 A CN101525586 A CN 101525586A CN 200910036920 A CN200910036920 A CN 200910036920A CN 200910036920 A CN200910036920 A CN 200910036920A CN 101525586 A CN101525586 A CN 101525586A
Authority
CN
China
Prior art keywords
streptomyces
streptomycete
faint blue
caeruleatus
pigment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200910036920A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101525586B (zh
Inventor
朱红惠
王燕
郭俊
姚青
邓名荣
黎志坤
孙晓棠
羊宋贞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Microbiology of Guangdong Academy of Sciences
Original Assignee
Guangdong Institute of Microbiology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Institute of Microbiology filed Critical Guangdong Institute of Microbiology
Priority to CN2009100369208A priority Critical patent/CN101525586B/zh
Publication of CN101525586A publication Critical patent/CN101525586A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101525586B publication Critical patent/CN101525586B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002及其应用,该链霉菌已在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏日期为2008年11月10日,保藏编号为CCTCC No.M208213。本发明暗蓝色链霉菌具有产生暗蓝色色素的能力,其产色素能力强,色素色价高,丰富了天然色素;该链霉菌培养成本低廉,培养方法简单,增殖快,满足了蓝色色素的大量需求。

Description

暗蓝色链霉菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域,特别是涉及一种能产生暗蓝色色素的新的链霉菌及其应用。
背景技术
近年来,无毒、无致畸病、稳定性强的微生物产天然色素的开发研究越来越受到人们的重视。微生物来源的色素种类多,数量大,成本低廉,生产工艺简单,具有植物色素和动物色素所不可比拟的优势。利用自然界中微生物发酵生产的色素种类较为丰富,但是国内外生产的天然蓝色色素种类却较少,而用微生物发酵生产的蓝色色素更是罕见。蓝色色素作为3个基本色素之一,具有很高的附加值,可与红、黄品系的天然色素调配成多种色调,使天然色素更加丰富。因此,通过微生物发酵途径来获得天然蓝色色素一直是研究热点。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够产生暗蓝色素的新种链霉菌——暗蓝色链霉菌。
本发明所述的暗蓝色链霉菌命名为暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002。保藏编号为CCTCC No.M208213。
本发明所述的暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002是从广州白云山采集的土壤,经分离培养获得。该菌培养条件为:
1)培养基:采用高氏合成1号琼脂培养基。
具体配方为:可溶性淀粉20.0g,硝酸钾(KNO3)1.0g,磷酸氢二钾(K2HPO4)0.5g,硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g,氯化钠(NaCl)0.5g,硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)0.01g,琼脂20.0g,水1000ml,pH7.2~7.4;
2)培养温度:28℃。
本发明暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002的分子分类地位的确定。该菌株的16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
测序结果与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较,从数据库获得相关种属的16S rDNA序列,构建系统发育树。
本发明所述的暗蓝色链霉菌其形态特征与其他的链霉菌有显著差异,与基因序列同源性达99%的链霉菌相比,也完全不同。珊瑚链霉菌(Streptomyces coralus)与本发明所述的暗蓝色链霉菌16SrDNA序列同源性达99.4%,但形态特征完全不同,珊瑚链霉菌孢子柱形,表面光滑,在ISP培养基上可溶性色素黄色或黄绿色;林肯链霉菌(Streptomyces lincolnensis)与本发明所述的暗蓝色链霉菌16SrDNA序列同源性达99.4%,但林肯链霉菌孢子椭圆,短杆状,表面光滑。绿产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)与本发明所述的暗蓝色链霉菌16SrDNA序列同源性达99.2%,但绿产色链霉菌孢子丝成长而窄的螺旋,孢子卵圆形,表面带长刺,在ISP产生绿色可溶性色素;暗灰链霉菌(Streptomyces canus)与发明所述的暗蓝色链霉菌16SrDNA序列同源性达99.1%,但暗灰链霉菌不产生可溶性色素;本发明的暗蓝色链霉菌与同源性最高的珊瑚链霉菌和林肯链霉菌的生物学特性比较见表1。
本发明的暗蓝色链霉菌与其序列同源性最高的珊瑚链霉菌的DNA-DNA杂交率为33.42%。
表1暗蓝色链霉菌与其同源性最高的链霉菌菌株微生物学特性比较
Figure A20091003692000051
注:+:阳性;-:阴性;ND:没有测定;W:弱阳性
综合16SrDNA序列分析和DNA-DNA杂交结果(1987年国际系统细菌学委员会ICSB规定,DNA同源性小于70%或杂交分子的热解链温度差小于或等于2℃为细菌种的界线,Wayneet al,1987),本发明的暗蓝色链霉菌是一种新的链霉菌,命名为暗蓝色链霉菌Streptomycescaeruleatus GIMN4.002。
本发明暗蓝色链霉菌具有以下有益效果:
本发明暗蓝色链霉菌具有产生暗蓝色色素的能力,其产色素能力强,色素色价高,丰富了天然色素;
该暗蓝色链霉菌培养成本低廉,培养方法简单,增殖快,满足了蓝色色素的大量需求。
本发明菌株暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002已于2008年11月10日保藏于国家知识产权局指定的保藏单位中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为No.M208213。
附图说明
图1是本发明所述的暗蓝色链霉菌孢子链的扫描电子显微镜照片(A,5μm)和光学显微镜照片(B,100倍);
图2是本发明所述的暗蓝色链霉菌孢子的扫描电子显微镜照片(2μm);
图3是本发明所述的暗蓝色链霉菌产生色素的照片;
图4是本发明所述的暗蓝色链霉菌及部分相关菌株依据16SrDNA序列构建的系统发育树。
具体实施方式
以下通过具体实施例来详细说明本发明。
实施例1:本发明暗蓝色链霉菌的分离
从广州白云山森林中采集植物根际0-30cm土样,取10g土壤放入装有90mL无菌水的三角瓶中(带玻珠),180rpm振荡30分钟,静置10分钟后取上层液稀释10倍,取0.1mL均匀涂布在高氏合成1号琼脂培养基板上,翻转平板置于28℃培养箱中培养3天,即可获得本发明所述的暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002CCTCC No.M208213。
高氏合成1号琼脂培养基:
可溶性淀粉20.0g,硝酸钾(KNO3)1.0g,磷酸氢二钾(K2HPO4)0.5g,硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.5g,氯化钠(NaCl)0.5g,硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)0.01g,琼脂20.0g水1000ml,pH7.2~7.4。
本发明的暗蓝色链霉菌Streptomyces caeruleatus GIMN4.002具有下述微生物学特征:
A.形态特征
在扫描电镜下观察,该菌株孢子多,孢子链1-2圈松散螺旋,孢子长柱形,表面粗糙,有刺状突起。
B.培养学上的特征
在酵母精麦芽精琼脂(ISP2)、燕麦粉琼脂(ISP3)和高氏合成一号琼脂培养基等不同的培养基上的培养特征见表2。
表2本发明菌株在不同培养基上的培养特征
Figure A20091003692000071
C.生理生化特征
该菌株兼性厌氧,革兰氏阳性,接触酶阳性,产生类黑色素和H2S,牛奶凝固,明胶不液化,能水解淀粉,能还原硝酸盐;碳源利用情况如表3。
表3本发明菌株碳源利用情况
Figure A20091003692000072
+:利用     -:不利用
D.其它性质
该菌株最适生长温度为28℃;pH 5.5-pH 9.5下生长良好,5%以上NaCl浓度不能生长;细胞壁含有LL二氨庚二酸,属细胞壁I型;细胞水解物中含有葡萄糖。细胞壁脂肪酸种类和含量如表4:
表4细胞壁脂肪酸种类和含量
Figure A20091003692000081
实施例2:本发明暗蓝色链霉菌菌株16SrDNA的序列测定
具体按照下述操作进行:
1.所用试剂
(1)5MNaCl
(2)TE1(10mM Tris,25mM EDTA)pH8.0
(3)TE2(10mM Tris,1mM EDTA)pH8.0
(4)10%SDS
(5)氯仿∶异戊醇(24∶1)
(6)异丙醇
(7)CTAB/NaCl
(8)蛋白酶K(上海宝生物公司)母液20mg/ml
2.DNA提取方法
(1)将菌丝转移至灭过菌的研钵中,充分研磨。
(2)加567μlTE1悬浮,并加入30μL10%SDS,3μL20mg/ml蛋白酶K,混匀,37℃温育1小时。
(3)加100μl 5mol/L NaCl,混匀。
(4)加80μl CTAB/NaCl溶液,混匀,65℃温育20分钟。
(5)用等体积酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提,10,000rpm离心10分钟,将上清液移至干净离心管。
6)用等体积氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提,取上清液移至干净管中。
(7)加0.6倍体积异丙醇,颠倒混合,室温下静止1小时,沉淀DNA。
(8)14,000rpm离心20分钟,收集DNA沉淀。
(9)DNA沉淀加500μL 70%乙醇漂洗,自然风干。
(10)加50μl TE2溶解DNA,-20℃保存。
3.PCR扩增方法
利用通用引物:正向引物F27(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3)和反向引物1522R(5’-AAGGAGGTGAT CCAGCCGCA),引物序列的设计参照Edwards&Rogall(1989)的文章(Edwards U,Rogall T,Blocker HE.1989.Isolation and direct complete determination of entiregenes.Nucleic Acids Res,17:7843~7853),引物由上海英骏公司合成。扩增所用的试剂盒购买于大连宝生物公司。
PCR扩增体系为:
成分            终浓度
浓缩反应缓冲液1×工作浓度(50mM/L KCL,10mM/L Tris-HCl,1.5mM/L MgCl2)
dNTP混合物        每种碱基0.2mmol/L
Taq DNA聚合酶     0.5~1.0U/50uL
正向引物          1μmol/L
反向引物          1μmol/L
模板        102~105ng/50μl
无菌水      将反应体积补足至50μl
PCR反应程序
Figure A20091003692000101
16SrDNA的序列测定委托上海英俊生物科技有限公司进行。
实施例3:本发明暗蓝色链霉菌菌株产色素能力测定
将本发明暗蓝色链霉菌菌株接种于高氏合成1号液体培养基中发酵14天后,发酵液7000rpm离心5min,取上清,用双蒸水稀释10倍,测量其pH值,并进行200~800n波段扫描,测定光吸收值。
测量结果表明,发酵上清液的pH值为7.844;发酵上清液经波段扫描,在可见光范围存在两个光吸收峰值,即595nm、638nm,其中595nm峰值最大。
以水为溶剂,在pH8.0、室温条件下,595nm处光吸收值(OD595)0.1为一个单位(U)色价。本发明菌株发酵14d的色价可达118U。
本发明暗蓝色链霉菌产生的暗蓝色色素溶于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等溶剂,在水中的溶解度随着pH的提高而增大,不溶于石油醚、乙醚、氯仿等低极性溶剂;色素的色调随着pH的变化而变化,pH7.0呈暗蓝色,pH8.0以上呈天蓝色,pH6.0为紫红色,pH4.0、pH5.0为红色。
序列表
<110>广东省微生物研究所
<120>暗蓝色链霉菌
<160>1
<170>Patent In version 3.1
<210>1
<211>1397bp
<212>rDNA
<213>Streptomyces caeruleatus
<400>1
catgcaagtc gaacgatgaa ccacttcggt ggggattagt ggcgaacggg   50
tgagtaacac gtgggcaatc tgcccttcac tctgggacaa gccctggaaa  100
cggggtctaa taccggatac cactaccgca ggcatctgtg gtggttgaaa  150
gctccggcgg tgaaggatga gcccgcggcc tatcagcttg ttggtgaggt  200
aatggctcac caaggcgacg acgggtagcc ggcctgagag ggcgaccggc  250
cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg  300
gaatattgca caatgggcga aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgaggga  350
tgacggcctt cgggttgtaa acctctttca gcagggaaga agcgaaagtg  400
acggtacctg cagaagaagc gccggctaac tacgtgccag cagccgcggt  450
aatacgtagg gcgcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt aaagagctcg  500
taggcggctt gtcacgtcgg gtgtgaaagc ccggggctta accccgggtc  550
tgcattcgat acgggctagc tagagtgtgg taggggagat cggaattcct  600
ggtgtagcgg tgaaatgcgc agatatcagg aggaacaccg gtggcgaagg  650
cggatctctg ggccattact gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga  700
acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacggtg ggaactaggt  750
gttggcgaca ttccacgtcg tcggtgccgc agctaacgca ttaagttccc   800
cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg   850
cccgcacaag cagcggagca tgtggcttaa ttcgacgcaa cgcgaagaac   900
cttaccaagg cttgacatac atcggaaacg gccagagatg gtcgccccct   950
tgtggtcggt gtacaggtgg tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag  1000
atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgttct gtgttgccag  1050
catgcccttc ggggtgatgg ggactcacag gagaccgccg gggtcaactc  1100
ggaggaaggt ggggacgacg tcaagtcatc atgcccctta tgtcttgggc  1150
tgcacacgtg ctacaatggc cggtacaatg agctgcgata ccgtgaggtg  1200
gagcgaatct caaaaagccg gtctcagttc ggattggggt ctgcaactcg  1250
accccatgaa gtcggagttg ctagtaatcg cagatcagca ttgctgcggt  1300
gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgtc acgaaagtcg  1350
gtaacacccg aagccggtgg cccaacccct tgtgggaggg agcttcg     1397

Claims (4)

1.一种暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus GIMN4.002),其特征在于:其保藏编号为CCTCC No.M208213。
2.根据权利要求1所述的暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus GIMN4.002),其特征在于:该链霉菌16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求1或2所述的暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus GIMN4.002),其特征在于:具有以下微生物学特征:
A.形态特征
暗蓝色链霉菌在扫描电镜下观察,该菌株孢子多,孢子链1-2圈松散螺旋,孢子长柱形,表面粗糙,有刺状突起;
B.生理生化特征
暗蓝色链霉菌兼性厌氧,革兰氏阳性,接触酶阳性,产生类黑色素和H2S,牛奶凝固,明胶不液化,能水解淀粉,能还原硝酸盐;不能利用蔗糖;
C.其他特征
暗蓝色链霉菌细胞壁含有LL二氨庚二酸,属细胞壁I型;细胞水解物中含有葡萄糖。
4.权利要求1-3任一项所述的暗蓝色链霉菌(Streptomyces caeruleatus GIMN4.002)在产暗蓝色色素中的应用。
CN2009100369208A 2009-01-22 2009-01-22 暗蓝色链霉菌及其应用 Active CN101525586B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009100369208A CN101525586B (zh) 2009-01-22 2009-01-22 暗蓝色链霉菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009100369208A CN101525586B (zh) 2009-01-22 2009-01-22 暗蓝色链霉菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101525586A true CN101525586A (zh) 2009-09-09
CN101525586B CN101525586B (zh) 2010-12-01

Family

ID=41093657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009100369208A Active CN101525586B (zh) 2009-01-22 2009-01-22 暗蓝色链霉菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101525586B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102643764A (zh) * 2012-03-06 2012-08-22 南京工业大学 一种链霉菌及多抗菌素代谢调控发酵工艺
CN105176873A (zh) * 2015-09-30 2015-12-23 菏泽学院 产环保型蓝色色素的链霉菌菌株
CN105255210A (zh) * 2015-09-30 2016-01-20 菏泽学院 环保型蓝色色素的提取工艺

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102643764A (zh) * 2012-03-06 2012-08-22 南京工业大学 一种链霉菌及多抗菌素代谢调控发酵工艺
CN102643764B (zh) * 2012-03-06 2013-05-08 南京工业大学 一种链霉菌及多抗菌素代谢调控发酵工艺
CN105176873A (zh) * 2015-09-30 2015-12-23 菏泽学院 产环保型蓝色色素的链霉菌菌株
CN105255210A (zh) * 2015-09-30 2016-01-20 菏泽学院 环保型蓝色色素的提取工艺
CN105176873B (zh) * 2015-09-30 2018-07-24 菏泽学院 产环保型蓝色色素的链霉菌菌株

Also Published As

Publication number Publication date
CN101525586B (zh) 2010-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3196294B1 (en) Klebsiella and method for preparing microbial flocculant with same
Palmer et al. Identification of manganese‐oxidizing bacteria from desert varnish
Alazard et al. Desulfovibrio hydrothermalis sp. nov., a novel sulfate-reducing bacterium isolated from hydrothermal vents
CN103898016B (zh) 一株高产乳酸菌及其发酵蛋壳制备乳酸钙的方法
JP6467521B2 (ja) ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa4を製造する方法
CN110894470B (zh) 一种适合工厂化栽培的香菇菌种农香5号及其分子鉴定方法
CN105331552B (zh) 一株高效脱氮不动杆菌新种及其应用
CN101402929B (zh) 一株耐碱纤维堆囊菌及其在制备埃博霉素中的应用
CN106148480A (zh) 一种超耐硒细菌对亚硒酸盐的还原作用的研究方法
CN108220169A (zh) 一种降解聚苯乙烯菌种的分离筛选及其鉴定方法
CN105039171A (zh) 栓菌及其应用
CN106635904A (zh) 一种具有降解苯胺能力的鞘氨醇杆菌及其应用
CN101525586B (zh) 暗蓝色链霉菌及其应用
JP2018512845A (ja) ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa3を製造する方法
CN105331548B (zh) 一种紫丁香蘑菌株及其液体菌种与制备方法
CN102417890B (zh) 一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法
CN102807961B (zh) 一种猪链球菌7型高密度发酵培养基及专用菌株
Wafula et al. Isolation and characterization of bacillus species from soil in Ngere tea catchment area of Murang’a county, Kenya
Lin et al. Thermus rehai sp. nov., isolated from Rehai of Tengchong, Yunnan Province, China
CN109988728A (zh) 植物内生放线菌cr22及其应用
CN105420167B (zh) 一种蜡状芽孢杆菌及其应用
CN100448984C (zh) 粤蓝链霉菌
CN106834165A (zh) 可降解青霉素的副球菌、细胞级分及其组合物
Lee et al. Pseudonocardia spinosispora sp. nov., isolated from Korean soil.
CN110257295A (zh) 特基拉芽孢杆菌及其在荒漠化防治中的应用和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 510070 No. 100 martyrs Middle Road, Guangdong, Guangzhou

Patentee after: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY)

Address before: 510070 No. 100 martyrs Middle Road, Guangdong, Guangzhou

Patentee before: Guangdong Institute of Microbiology

CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: No. 56, courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Guangzhou, Guangdong 510070

Patentee after: Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences

Country or region after: China

Address before: 510070 No. 100 martyrs Middle Road, Guangdong, Guangzhou

Patentee before: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY)

Country or region before: China