CN101505594A

CN101505594A - 代谢紊乱的组合治疗

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Publication number: CN101505594A
Application number: CNA2007800303623A
Authority: CN
Inventors: 史蒂芬·D·沃帕; 拉马钱德兰·阿鲁德钱德兰; 里德·W·冯博斯特尔
Original assignee: Wellstat Therapeutics Corp
Current assignee: Wellstat Therapeutics Corp
Priority date: 2006-08-17
Filing date: 2007-08-16
Publication date: 2009-08-12
Also published as: KR20090038908A; AU2007285827A1; CA2661293A1; WO2008022267A3; US20100227809A1; ZA200900734B; JP2010501010A; US20130137629A1; EP2056673A2; MX2009001763A; JP2013091662A; WO2008022267A2; NZ574664A; EP2056673A4; IL197001A0

Abstract

诸如胰岛素抵抗综合征、糖尿病、多囊卵巢综合征、高脂血症、脂肪肝疾病、恶病质、肥胖症、动脉粥样硬化和动脉硬化等各种代谢紊乱可以用选自肠降血糖素模拟物和二肽基肽酶IV抑制剂的化合物与式I的化合物或其药用盐相组合进行治疗，在式(I)中，R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、羟基、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组；m是0、2或4。R⁶是氢、O或羟基，X是－OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基；或者R⁶是氢，X是－NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基。当X是－NR⁸R⁹、羟基时，R¹、R²、R³、R⁴和R⁵均不是羟基。

Description

代谢紊乱的组合治疗

背景技术

糖尿病是一个重要的且日益严重的公众健康问题。糖尿病的晚期并发症消耗很大比例的国家卫生保健资源。

WO 02/100341、WO/073611、WO 04/091486、WO 2006/127133和国际专利申请PCT/US07/60833号(均属于维尔斯达医疗公司)披露了式I的化合物组合某些其他药物来治疗糖尿病或胰岛素抵抗综合征的用途。

已经测试了Exendin-4(醋酸艾塞那肽)与二甲双胍、抗糖尿病磺酰脲和噻唑烷二酮的组合。

发明内容

本发明涉及选自由肠降血糖素模拟物和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂组成的组的化合物与式I的化合物或其药用盐相组合的治疗用途。

式I中，m是0、2或4。X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基；R⁶是氢、O或羟基；并且R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、羟基、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组。作为选择，X是-NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基；R⁶是氢；并且R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组。

本发明提供一种治疗患有选自由胰岛素抵抗综合征、糖尿病(包括I型糖尿病和II型糖尿病)、多囊卵巢综合征、高脂血症、脂肪肝疾病、恶病质、肥胖症、动脉粥样硬化和动脉硬化组成的组中的疾病的哺乳动物对象的方法，所述方法包括以能够有效治疗所述代谢疾病的组合量向所述对象施用式I的化合物或其药用盐和肠降血糖素模拟物。

本发明提供一种生物活性剂在药物制备中的用途，所述药物用于治疗选自由胰岛素抵抗综合征、糖尿病(包括I型糖尿病和II型糖尿病)和多囊卵巢综合征组成的组中的疾病；或用于治疗与糖尿病相关的动脉粥样硬化、动脉硬化、肥胖症、高血压、高脂血症、脂肪肝疾病、肾病、神经病、视网膜病、足部溃烂或白内障或者减少这些疾病的发展机会；或用于治疗选自由高脂血症、恶病质和肥胖症组成的组中的疾病；其中，所述活性剂是式I的化合物或其药用盐，并且所述活性剂配制为以能够有效治疗所述代谢疾病的组合量与肠降血糖素模拟物组合使用。

一种试剂盒，所述试剂盒包括一个或多个单位口服剂量的式I的化合物或其药用盐、一个或多个单位可注射剂量的肠降血糖素模拟物和用于将式I的化合物或其药用盐与肠降血糖素模拟物组合施用的说明书。

本发明基于下述发现：诸如Exendin-4酰胺(也是胰高血糖素样肽-1类似物(GLP-类似物))等肠降血糖素模拟物与诸如化合物BI等式I的化合物的组合提供了比单独任一种化合物更好的抗糖尿病活性，如实施例1所示。GLP-1类似物和DPPIV抑制剂均主要通过GLP-1受体的活化起作用。GLP-1类似物通过直接结合所述受体发挥作用。DPPIV抑制剂通过增大GLP-1的内源水平发挥作用。因此，化合物BI增强并且激活Exendin-4酰胺的抗糖尿病活性的这一发现支持了化合物BI与全部范围的GLP-1类似物和DPPIV抑制剂的组合应用。化合物BI的其他抗糖尿病类似物在该情况中也是有用的。

基于GLP-1(胰高血糖素样肽-1)的抗糖尿病药物正作为临床用试剂而出现。GLP-1本身是半衰期较短的肽，并不适合用作治疗剂。已经发现、设计并开发了更为持久的GLP-1类似物。在这些类似物中最突出的是Exendin-4，这是一种来自希拉毒蜥(这种动物每年仅进食三次，并且在每次进食时利用Exendin(艾塞那肽类)来产生功能性胰腺)的肽，其与GLP-1同源，不过具有更长的体内半衰期。另一种新兴策略涉及分解GLP-1的酶(二肽基肽酶IV(DPPIV))的抑制剂。GLP-1类似物或调节物主要作用于胰岛，增大高血糖情况下的胰岛素的输出，此外减少胰高血糖素的生成。净效应是在血糖升高时降低血糖，不过在葡萄糖接近正常时仅为比较小的程度。

附图说明

图1：用化合物BI、exendin-4酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的血清葡萄糖。

图2：用化合物BI、exendin-4酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的胰岛中胰岛素。

图3：用化合物BI、exendin-4酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的血清胰岛素。

图4：用化合物BI、exendin酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的血清葡萄糖。

图5：用化合物BI、exendin酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的胰腺胰岛素。

图6：用化合物BI、exendin酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的血清葡萄糖。

图7：用化合物BI、exendin酰胺或两种化合物治疗的db/db小鼠的胰腺胰岛素。

图8：用化合物BI和exendin酰胺的组合治疗的经链脲佐菌素治疗的C57B1/6J小鼠的血清葡萄糖。

图9：用化合物BI和exendin酰胺的组合治疗的经链脲佐菌素治疗的C57B1/6J小鼠的血清C肽。

图10：用化合物BI和exendin酰胺的组合治疗的经链脲佐菌素治疗的C57B1/6J小鼠的胰腺胰岛素。

图11：用P32/98、化合物BI或两种化合物治疗的db/db小鼠的血清葡萄糖。

图12：用P32/98、化合物BI或两种化合物治疗的db/db小鼠的胰腺胰岛素。

具体实施方式

定义

此处所用的术语“烷基”是指直链或支链的烷基基团。被称为具有一定数目的碳原子的烷基基团是指具有该指定数目的碳的任何烷基基团。例如，具有三个碳原子的烷基可以是丙基或异丙基；具有四个碳原子的烷基可以是正丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基或叔丁基。

此处所用的术语“卤素”指氟、氯、溴和碘中的一种或多种。

此处所用的例如在全氟甲基或全氟甲氧基中的术语“全氟”是指所述基团的所有的氢原子均被氟原子代替。

此处所用的“Ac”指基团CH₃C(O)-。

R⁶和与其直接键合的碳原子之间的键在上式I中用实线和虚线共同描述。该描述表明所述键在R⁶是氢或羟基时可以是单键，或者当R6是O时可以是双键。

上述式I的描述中的星号表示可能的手性中心，并且当R⁶是羟基时该碳为手性的。在这样的情况中，本发明提供式I的化合物的外消旋体、(R)对映体和(S)对映体，据信它们都具有活性。例如，如Chirality11：420-425(1999)中所述，可用HPLC分离这些对映体的混合物。

本文中用其化学名或如下所示的双字母代码来表示某些化学化合物。化合物BI、CF、CR和CT包含在以上所示的式I的范围内。

BI 4-(3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基)-4-氧代丁酸

CF 3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基乙酸

CR 4-(3-(2，6-二甲基苄氧基)-苯基)-4(R)-羟基丁酸

CT N-羟基-2-[3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基]乙酰胺

此处使用的术语“肠降血糖素模拟物”是指模拟被称为肠降血糖素的天然存在的激素的抗糖尿病作用的化合物。“Exendin”是一类来自希拉毒蜥的毒液的肽，包括此类肽的截短版本。“Exendin激动剂”是基于exendin的氨基酸结构并具有exendin的部分或全部活性的肽以及肽模拟物。除非通过上下文而具体排除，此处使用的术语“exendin-4”同时包括exendin-4和exendin-4酰胺。术语“exendin-4酰胺”和“exendin酰胺”可互换使用。

二肽基肽酶IV(DPPIV)是一种酶，也称为CD26，其分解GLP-1(胰高血糖素样肽-1)。术语“二肽基肽酶IV抑制剂”或“DPPIV抑制剂”是指抑制DPPIV活性的化合物。

此处使用的缩写词“p.o.”是指经口(口服)。缩写词“ip”或“i.p.”是指腹膜内。

此处所用的过渡术语“包含”是开放式的。使用该术语的权利要求可含有除该权利要求中所述的那些要素以外的要素。

本发明的化合物

在上述“发明内容”中所述的本发明的实施方式中，R¹是甲基，R⁵是甲基。在另一个实施方式中，X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基。在另一个实施方式中，X是-NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基。

在上述“发明内容”中所述的本发明的其他实施方式中，肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂与式IA的化合物或其药用盐组合。

式IA中，各变量具有与以上在式I中所述相同的值。优选R¹是甲基，R⁵是甲基。所述化合物的实例包括化合物BI、CF、CR和CT。

式I的化合物可以根据WO 02/100341、WO/073611、WO 04/091486、2005年4月1日提交的U.S.临时专利申请60/667,457号和2006年1月25日提交的临时专利申请60/762,068号中描述的方法制得，各文献的内容以引用的方式在此并入。

肠降血糖素的实例包括GLP-1。根据上述的本发明，可以利用任何肠降血糖素模拟物。所述肠降血糖素模拟物的实例包括exendin、exendin激动剂、GLP-1类似物、非肽类小分子GLP-1受体激动剂、它们的聚合物改性和酰化形式及药用盐，以及所述化合物和所述盐的水合物和溶剂化物。所述化合物的实例可以具体在U.S.专利6,989,366号、6,506,724号和6,924,264号，以及欧洲专利公报EP01688148A1号中找到，所有文献的内容以引用的方式在此并入。Exendin-4酰胺(艾塞那肽(exenatide)；BYETTA)目前以商品名BYETTA(Amylin Pharmaceuticals，Inc.和Eli Lillyand Co.)销售。GLP-1类似物的实例包括持久型GLP-1类似物(例如利拉鲁肽(Novo Nordisk)，由脂肪酸链酰化的GLP-1)、耐降解的GLP-1类似物(例如具有氨基酸取代的GLP-1类似物，从而改善对于蛋白质分解降解的耐性)、与诸如白蛋白等血清蛋白共轭的GLP-1类似物(例如CJC-1131和CJC-1134，Conjuchem)和源自GLP-1的与GLP-1受体结合的肽。

Exendin-4是具有下列氨基酸序列的39氨基酸肽：

His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser。Exendin-4酰胺是通过在C端加入-NH₂基团而酰胺化的exendin-4：His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂。

根据本发明，可以使用任何DPPIV抑制剂。所述化合物的实例包括维达列汀(GALVUS，Novartis)(2S)-{[(3-羟基金刚烷-1-基)氨基]乙酰基}-吡咯烷-2-腈；西他列汀(JANUVIA，Merck)(2R)-4-氧代-4-(3-[三氟甲基]-5，6-二氢[1，2，4]三唑[4，3-a]吡嗪-7[8H]-基)-1-(2，4，5-三氟苯基)丁烷-2-胺；萨格列汀(saxagliptin)(BMS477118，Bristol-Myers Squibb)(1S，3S，5S)-2-[(2S)-2-氨基-2-(3-羟基金刚烷-1-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-腈；2，2，2-三氟乙酸；阿格列汀(Takeda)2-({6-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-3-甲基-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基}甲基)苄腈；NN701(Novo-Nordisk)；ABT-279(Abbott)2-(4-(2-((2S，5R)-2-氰基-5-乙炔基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-4-甲基哌啶-1-基)异烟酸(CA注册号676559-83-4)；BI 1356(Boehringer Ingleheim)；SK-0403(Sanwa KagakuKenkyusho)；ALS 2-0426(Amgen/Alantos)(S)-1-((S)-2-氨基-3-((1S，4S)-5-(3-氟苯基磺酰基)-3-氧代-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-2-腈；和PT630(Point Therapeutics)4-氨基-5-((R)-2-二羟硼基吡咯烷-1-基)-5-氧代戊酸。DPPIV抑制剂的剂量典型地为每天一次或两次共1毫克～400毫克，优选为每天一次或两次共25毫克～100毫克。在维达列汀的临床试验中，剂量的范围是每天一次25毫克～每天两次共100毫克。西他列汀的常用剂量的范围是每天一次25毫克～每天一次100毫克，这取决于患者是否具有肾功能不全以及肾功能不全的程度。

在治疗方法中的应用

本发明提供了一种对患有下述疾病的哺乳动物对象进行治疗的方法，所述疾病选自由胰岛素抵抗综合征、糖尿病(包括I型糖尿病和II型糖尿病)、继发的非原发性糖尿病和多囊卵巢综合征组成的组，所述方法包括以能够有效治疗所述疾病的组合量向所述对象施用式I的化合物或其药用盐和选自肠降血糖素模拟物和DPPIV抑制剂的化合物。根据本发明的方法，可以减轻糖尿病的症状或减少糖尿病症状的发展机会，所述糖尿病症状是均与糖尿病相关的以下症状：例如动脉粥样硬化、肥胖症、高血压、高脂血症、脂肪肝疾病、肾病、神经病、视网膜病、足部溃疡和白内障。本发明还提供了一种治疗高脂血症的方法，所述方法包括给所述对象施用可有效治疗该疾病的量的如本文所述的生物活性剂。化合物降低了高脂血症动物体内的血清甘油三酯和游离脂肪酸。本发明还提供了一种治疗恶病质的方法，所述方法包括给所述对象施用可有效治疗恶病质的量的如本文所述的生物活性剂。本发明还提供了一种治疗肥胖症的方法，所述方法包括给所述对象施用可有效治疗该疾病的量的如本文所述的生物活性剂。本发明还提供了一种对选自动脉粥样硬化或动脉硬化的疾病进行治疗的方法，所述方法包括给所述对象施用可有效治疗所述疾病的量的如本文所述的生物活性剂。无论对象是否患有糖尿病或胰岛素抵抗综合征，本发明的活性剂都可以有效地治疗高脂血症、脂肪肝疾病、恶病质、肥胖症、动脉粥样硬化或动脉硬化。可以通过全身给药的任何常规途径来施用式I的化合物或其盐和肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂。式I的化合物优选以口服给药。根据本发明可以使用的其他的给药途径包括直肠给药、通过注射(例如静脉内注射、皮下注射、肌内或腹腔内注射)的肠外给药或鼻腔给药。Exendin优选通过注射给药，最优选通过皮下注射给药。

本发明的各种用途和治疗方法的进一步的实施方式均包括施用如上所述的式I的化合物或其药用盐的实施方式的任何一种和肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂的任何一种。为了避免不必要的冗余，对各活性剂和活性剂组不进行重复，但如同对其进行重复一样，它们都包含对用途和治疗方法的此描述中。

通过本发明的化合物治疗的许多疾病或紊乱都属于两大类：胰岛素抵抗综合征和慢性高血糖症的后果。在糖尿病(持续的高血糖症)本身不存在时也可能出现养料代谢的调节异常，特别是胰岛素抵抗，这与多种症状有关，包括高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖症、原发性高血压、脂肪肝疾病(NASH；非酒精性脂肪性肝炎)，特别是在癌症或全身性炎性疾病、恶病质情况下。恶病质也会出现在I型糖尿病情况下或晚期II型糖尿病中。通过改善组织养料代谢，本发明的活性剂可用于预防或改善与胰岛素抵抗有关的疾病或症状。虽然一系列与胰岛素抵抗相关的征兆和症状可能共存于一个患者，但在大多情况下都只会有一种症状处于主导地位，这是由于受胰岛素抵抗侵袭的许多生理系统在易感性方面存在个体差异。虽然如此，由于胰岛素抵抗是多种病症的主要原因，因此消除该细胞缺陷和分子缺陷的药物可用于预防或改善实际上可能由胰岛素抵抗所导致或加剧的任何器官系统中的任何症状。

当胰岛素抵抗和并发的胰岛的胰岛素生成不足十分严重时，出现慢性高血糖症，这表明II型糖尿病(NIDDM)的发作。除了上述与胰岛素抵抗相关的代谢紊乱外，在患有NIDDM的患者中也出现继发于高血糖症的疾病症状。这些疾病症状包括肾病、外周神经病变、视网膜病、微血管病变、四肢溃烂和蛋白质的非酶促糖基化的后果，例如胶原质和其他结缔组织的损伤。高血糖症衰减可降低糖尿病的这些后果的发作率和严重性。由于本发明的活性剂和组合物有助于减少糖尿病中的高血糖症，所以它们可用于预防和改善慢性高血糖症的并发症。本发明的活性剂和组合物可用于预防或减缓前期糖尿病(胰岛素抵抗和/或葡萄糖耐量低减)发展为II型糖尿病的进展。

人类和非人类哺乳动物对象都可根据本发明的治疗方法进行治疗。用于特定对象的本发明的特定活性剂的最佳剂量可由熟练的临床医师在临床设定中确定。在对人类口服给药以治疗与胰岛素抵抗相关的紊乱、糖尿病、高脂血症、脂肪肝疾病、恶病质或肥胖症的情况下，通常以1mg～400mg，更优选200mg～400mg的日剂量施用式I的化合物或其药用盐，每天给药一次或两次。在对小鼠口服给药的情况下，通常以1mg～300mg制剂/千克体重的日剂量施用式I的化合物或其药用盐。可根据标准临床实践施用肠降血糖素模拟物和DPPIV抑制剂。在一些情况下，与式I的化合物或其药用盐的共施用将提高其他种类药物的效能，使得可向患者施用更低剂量(因此毒性更小)的这些制剂，并获得令人满意的治疗结果。Exendin-4通常通过皮下注射施用，剂量为5微克或10微克，一天两次。

在本发明的一个实施方式中，肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂的剂量小于这些药物单独使用时的治疗剂量。通常，所述剂量可以减少至常用剂量的25％～75％。在本发明的一个实施方式中，式I的化合物和肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂中的任一种或两种的剂量被选择为以产生重量减轻和/或食欲减退。

当所述活性成分不混合在一起以形成单一混合物或组合物时，它们可以以试剂盒的形式提供，所述试剂盒包括一个或多个单位口服剂量的式I的化合物或其药用盐、一个或多个单位剂量的肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂，和用于组合施用它们的说明书。优选的是，将试剂盒的成分包装在一起，例如装入盒中或透明塑料罩中。

I型糖尿病：患有I型糖尿病的患者主要通过每天自已施用单剂量到多剂量的胰岛素来控制他们的疾病，同时经常监测血糖以对胰岛素施用的剂量和时机进行适当的调节。慢性高血糖症导致诸如肾病、神经病、视网膜病、足部溃烂和早死等并发症；胰岛素施用过量导致的低血糖症可引起认知功能障碍或意识丧失。患有I型糖尿病的患者用肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂和1mg/天～400mg/天的式I的化合物或其盐治疗，在肠降血糖素模拟物或DPPIV抑制剂与式I的化合物组合使用的情况中每种药物单独是单次或分次的日剂量，或者在DPPIV抑制剂与式I的化合物组合使用的情况中，两种药物组合为单次或分次的日剂量。预期效果是将血糖维持在令人满意的范围内所需的胰岛素的施用剂量或施用频率降低，并减少低血糖症的发生率和严重性。通过测定血糖和糖基化血红蛋白(数月期间血糖控制的合适性的综合指标)以及糖尿病的典型并发症的发生率和严重性的降低来监控临床结果。本发明的治疗可结合胰岛移植来施用，以帮助维持胰岛移植体的抗糖尿病功效。尽管单独的艾塞那肽并不被推荐用于I型糖尿病，不过由式I的化合物所提供的胰腺保护使得此组合可用于治疗I型糖尿病。

II型糖尿病：患有II型糖尿病(NIDDM)的典型患者通过饮食和锻炼规划，以及通过服用诸如二甲双胍、格列本脲、瑞格列奈、罗格列酮或阿卡波糖等药物来控制他们的疾病，所有这些药物都能在一定程度上改善某些患者的血糖控制，但所有药物都具有副作用或由于疾病的发展而导致最终治疗失败。随着时间推移，在患有NIDDM的患者中会出现胰岛衰竭，使得大部分患者必须进行胰岛素注射。预期根据本发明的日常治疗(有或没有其他类型的抗糖尿病药物)将改善血糖控制、降低胰岛衰竭速率并减低糖尿病的典型症状的发生率和严重性。此外，升高的血清甘油三酯和脂肪酸将被降低，因而降低心血管疾病的风险，心血管疾病是糖尿病患者死亡的一个重要原因。同所有其他糖尿病治疗药剂的情况一样，可根据需要、临床效果和对副作用的易感性在个体患者中进行剂量优化。

在胰岛的量和功能基本上并未减少时，例如在II型糖尿病的早期，GLP-1类似物和调节物是更为有效的。在设定为胰岛衰竭的晚期糖尿病阶段，此时患者变得依赖于外源性的胰岛素，这些药剂仍然是具有活性的，但是低于在早期阶段的活性。根据先前的研究可知化合物BI在db/db小鼠中保持了胰岛中胰岛素含量，这是同时表征胰岛素抵抗和胰岛衰竭的糖尿病的模型。

高脂血症：血液中升高的甘油三酯和游离脂肪酸水平影响相当大的一部分人群，是动脉粥样硬化和心肌梗塞的重要危险因素。本发明的治疗可用于降低高脂血症患者中的循环甘油三酯和游离脂肪酸。高脂血症患者通常还具有升高的血胆固醇水平，它也增加了心血管疾病的风险。除了施用本发明的制剂外，还可给高脂血症患者施用诸如HMG-CoA还原酶抑制剂(“他汀类”)等降胆固醇用药物，作为选择，可混合到同一药物组合物中。

脂肪肝疾病：相当大一部分人群患有脂肪肝疾病，也称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；NASH通常与肥胖症和糖尿病有关。肝脂肪变性(即甘油三酯液滴与肝细胞共存)使肝易于得慢性炎症(在活组织切片样品中检测为炎症白细胞的浸润)，该慢性炎症可导致肝纤维化和肝硬化。通常，通过观测诸如转氨酶ALT和AST等作为肝细胞损伤指标的肝特定酶的血清水平的升高，以及通过包括疲劳和肝区疼痛在内的症状的表现，可检测脂肪肝疾病，虽然确诊通常需要进行活组织切片检查。预期的益处是肝部炎症的缓解和脂肪含量的减少，导致NASH向肝纤维化和肝硬化发展的衰减、停止或逆转。

药物组合物

本发明提供一种药物组合物，所述组合物包含式I的化合物和药用载体。本发明的药物组合物的进一步的实施方式包含上述生物活性剂的实施方式的任何一种。为了避免不必要的冗余，对各活性剂和活性剂组不进行重复，但如同对其进行重复一样，它们都包含在对药物组合物的此描述中。

优选的是所述组合物经改造适于口服，例如是片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬胶囊或软胶囊、溶液、乳液或悬浮液形式。所述口服组合物通常包含1mg～400mg、优选为200mg～400mg的式I的化合物或其盐。这样便于患者每天吞服一个或两个片剂、包衣片剂、糖衣丸或胶囊。然而，也可使所述组合物适合于通过全身用药的任何其他常规方式进行给药，包括直肠给药(例如栓剂形式)、肠外给药(例如注射溶液的形式)或鼻腔给药。

可利用药学上无活性的无机或有机载体对所述活性成分进行加工以制备药物组合物。例如，乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等可用作片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬胶囊用的所述载体。合适的软胶囊用载体是，例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而，取决于活性成分的性质，在软胶囊的情况下除了软明胶本身之外通常不需要载体。合适的溶液剂和糖浆剂制备用载体是，例如水、多元醇、甘油、植物油等。合适的栓剂用载体是，例如天然油或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。

此外，所述药物组合物可包含防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、芳香剂、用于改变渗透压的盐、缓冲物、包衣剂或抗氧化剂。所述药物组合物还可包含其他有治疗价值的物质，特别是通过其他机理起作用的那些抗糖尿病药物或降血脂药剂。

Exendin-4酰胺(艾塞那肽)以商品名BYETTA由AmylinPharmaceuticals，Inc.和Eli Lilly and Company销售，其是包含exendin-4酰胺、间甲酚，甘露醇、冰醋酸、三水合乙酸钠和水的药物制剂。

本发明还提供包含式I的化合物、DPPIV抑制剂和药用载体的药物组合物。DPPIV抑制剂具有口服活性，因而可组合在与式I的化合物相同的制剂中，或者作为选择，两种药物可以以单独的片剂或胶囊施用。

通过参照下述实施例将更好地理解本发明，此处所述的实施例对本发明进行描述而不限制本发明。

实施例

实施例1

在晚期的db/db小鼠中，比较化合物BI与Exendin-4酰胺(从Bachem获得)对于降低血糖和保持胰岛中胰岛素含量的功效。此外，测试两种药物的组合。

组

●载体

●化合物BI(100mg/kg/天，口服)

●Exendin-4酰胺(10微克/天，腹膜内)

以41/2周大的db/db小鼠开始，每天腹膜内10微克Exendin-4酰胺持续多至12周减轻高血糖症(Greig等，1999Diabetologia 42：45-50)

●化合物BI(100mg/kg/天+Exendin-4酰胺10微克/天，腹膜内)

对小鼠每日进行治疗，持续4周。测定血清葡萄糖和胰岛素以及胰腺胰岛素。

经载体治疗的db/db小鼠在治疗4周后患有严重的高血糖。化合物BI基本上降低了血清葡萄糖，不过单独的Exendin-4酰胺几乎无效果。然而，化合物BI和Exendin-4酰胺的组合对于血清血糖具有很强的效果(图1)。

在用载体或Exendin-4酰胺单独治疗的动物中的胰岛中胰岛素较低。用化合物BI治疗的小鼠具有比上述两组中任一组都要高的胰岛素，用化合物BI加上Exendin-4酰胺治疗的小鼠在其胰岛内具有更高的胰岛素。这与下述观念是一致的：即Exendin-4酰胺作用于胰岛，并且化合物BI通过充分保持胰岛以使Exendin-4酰胺具有实现其药学活性的功能目标从而能够使Exendin-4酰胺具有更高的活性(图2)。

同时还测定血清胰岛素。相对于载体或Exendin-4酰胺，用化合物BI实现了葡萄糖降低，而血清胰岛素没有明显增加，这表明化合物BI在该模型中降低了胰岛素抵抗。用化合物BI和Exendin-4酰胺治疗的小鼠中的血清胰岛素的轻微升高与Exendin-4促使胰岛素分泌的已知效果相一致(图3)。

实施例2

监控db/db小鼠的外周血糖水平。当葡萄糖水平超过400mg/dL时，将小鼠分组，每组6只。如下所示，各组中的小鼠被施用载体或化合物BI(100mg/kg，通过灌喂)+/-腹膜内注射exendin-酰胺(Bachem，King ofPrussia，PA)，持续4周。

1)载体

2)载体+Exendin(3μg/kg)

3)载体+Exendin(10μg/kg)

4)化合物BI

5)化合物BI+Exendin(3μg/kg)

6)化合物BI+Exendin(10μg/kg)

治疗4周后，经眶后静脉窦采集小鼠的血样，并将血清送至Anilytics，Inc.(Gaithersburg，MD)以进行循环葡萄糖水平的分析。收集胰腺、称重、闪冻，然后处理以进行胰腺胰岛素分析。简而言之，将胰腺放在胰腺提取液(75％乙醇和25％ 0.15N HCl)中，并将体积调整为1mL/100mg胰腺。然后对胰腺进行超声波处理，并在-20℃存储过夜。第二天，于4℃以2500rpm将样品离心5分钟以使不溶物成球粒状。将1.5mL的上清液置于Eppendorf管中，并于4℃以1300rpm在微型离心机中旋转20分钟，从而使任何残留的不溶物成球粒状。使用开发用于小鼠胰岛素的电化学发光(ECL)检测随后对得到的上清液检测胰岛素的存在。该检测使用大鼠胰岛素(Lincon Research Inc.，St.Charles，MO)作为标准，但同样也显示出与小鼠胰岛素的线性。该检测使用生物素化抗小鼠胰岛素单克隆抗体(克隆5E4/3，来自Biogenesis，AbDSerotec，Raleigh，NC的部门)作为捕获抗体和钌标记的抗小鼠胰岛素抗体(克隆5B6/6，来自Biogenesis)。这些抗体针对胰岛素分子上不同的表位，并根据ECL分析试剂(BioVeris Corp.，Gaithersburg，MD)的制造商的指导进行标记。标准物或样品与两个抗体混合，并在摇动的条件下于室温培养2小时。随后，加入被覆有抗生蛋白链菌素的Dynabead(磁珠)(BioVeris Corp.，Gaithersburg，MD)，并在摇动的条件下于室温再培养30分钟。然后在M384仪器(BioVeris Corp，Gaithersburg，MD)上读取样品。样品中的胰岛素的量与发出的光量成比例。

图4显示出化合物BI、Exendin或这两种药物的组合对于循环葡萄糖水平的效果。正常的小鼠循环葡萄糖水平是124mg/dL～262mg/dL(Anilytics，Inc.Gaithersburg，MD)。单独用盐水处理的小鼠显示出高水平的高血糖症(图4)和较低的胰腺胰岛素水平(图5)。较低的胰腺胰岛素水平是因为这些小鼠的胰岛素抵抗转化为明显的糖尿病所致。以3μg/kg或10μg/kg的exendin进行的4周治疗显示出循环葡萄糖水平的轻微降低，但是胰腺胰岛素没有明显变化。用化合物BI治疗四周的小鼠显示出明显降低的循环葡萄糖水平和相应的胰腺胰岛素的升高(图5)。用化合物BI和3μg/kg或10μg/kg的exendin的组合治疗四周的小鼠显示出与剂量相响应的、协同的循环葡萄糖水平的降低和胰腺胰岛素水平的升高。

实施例3

在单独的试验中，对db/db小鼠如实施例2中进行治疗。再次注意到采用化合物BI(100mg/kg，口服)和exendin酰胺(10μg/kg，腹膜内)的组合的治疗同时对于循环葡萄糖(图6)和胰腺胰岛素(图7)的协同效果。

实施例4

广泛采用的I型糖尿病的模型是经链脲佐菌素治疗的小鼠。链脲佐菌素(STZ)是由链霉菌属染色体基因制得的抗生素。STZ的结构是具有高反应性亚硝基脲侧链的葡萄糖分子；剂量适宜时，STZ对于胰腺β细胞具有选择性毒性。该模型用于检测化合物BI加上exendin酰胺的组合对于循环葡萄糖水平、循环C肽水平(胰腺胰岛素分泌进入血流的量度)和总胰腺胰岛素的效果。

在第1天的早晨不给C57B1/6J小鼠喂食，并在下午对这些小鼠进行STZ(160mg/kg)注射。在第4天通过尾部取血测定葡萄糖，并将葡萄糖读取值高于350mg/dL的小鼠分组，每组10只。在当天(即第4天)开始治疗(载体(盐水)，或化合物BI(100mg/kg，口服)和exendin酰胺(10μg/kg，腹膜内)的组合)。在第18天，通过尾部取血再次测定葡萄糖。在第30天杀死小鼠。如实施例2中测定循环葡萄糖和胰腺胰岛素；使用与胰腺胰岛素所用相同的ECL检测测定血清胰岛素水平。使用商品化ELISA(Babco，Richmond，CA)测定血清中的循环的C肽水平，并与正常(未治疗)的C57B1/6J小鼠的水平进行比较。

用化合物BI和exendin酰胺的组合治疗的小鼠显示出循环葡萄糖水平的降低(图8)和循环C肽的升高(相对于正常水平，图9)以及胰腺胰岛素的升高(图10)。

实施例5

P32/98是DPPIV抑制剂，其已经显示出在链脲佐菌素诱发的糖尿病中具有活性(Pospisilik等，Diabetes 52：741-750，2003)。10周大的db/db小鼠如所示的施用载体或化合物BI(100mg/kg，口服)+/-P32/98(10mg/kg，一天两次灌喂)四周。如实施例3中进行循环葡萄糖和胰腺胰岛素的分析。经P32/98治疗的小鼠显示出循环葡萄糖水平的轻微降低，但是胰腺胰岛素没有升高。化合物BI也降低了循环葡萄糖水平，并且当与P32/98组合时显示出进一步的降低(图11)。化合物BI单独使用时增大了胰腺胰岛素水平；在这些条件下当与P32/98组合时没有进一步升高胰腺胰岛素，很可能是因为在这些条件下化合物BI作为单一疗法所显示的强烈功效所致(图12)。

Claims

1.一种治疗患有选自由胰岛素抵抗综合征、糖尿病、多囊卵巢综合征、高脂血症、脂肪肝疾病、恶病质、肥胖症、动脉粥样硬化和动脉硬化组成的组中的疾病的哺乳动物对象的方法，所述方法包括以能够有效治疗所述代谢疾病的组合量向所述对象组合施用式I的化合物或其药用盐与肠降血糖素模拟物或二肽基肽酶IV抑制剂，

其中：

m是0、2或4；并且

X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基；

R⁶是氢、O或羟基；并且

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、羟基、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组；

或者X是-NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基；

R⁶是氢；并且

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组。

2.如权利要求1所述的方法，其中，R¹是甲基，R⁵是甲基。

3.如权利要求1所述的方法，其中，X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基。

4.如权利要求1所述的方法，其中，X是-NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述化合物由式IA表示

6.如权利要求5所述的方法，其中，R¹是甲基，R⁵是甲基。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述化合物是4-(3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基)-4-氧代丁酸。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述化合物是3-(2，6-二甲基苄氧基)-苯基乙酸。

9.如权利要求6所述的方法，其中，所述化合物是4-3-(2，6-二甲基苄氧基)-苯基)-4(R)-羟基丁酸。

10.如权利要求6所述的方法，其中，所述化合物是N-羟基-2-[3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基]乙酰胺。

11.如权利要求1所述的方法，其中，所述肠降血糖素模拟物选自由艾塞那肽类、艾塞那肽类激动剂、非肽类小分子GLP-1受体激动剂、它们的聚合物改性和酰化形式及药用盐、水合物和溶剂化物，以及这些盐的水合物和溶剂化物组成的组。

12.如权利要求1所述的方法，其中，所述艾塞那肽类是醋酸艾塞那肽或醋酸艾塞那肽酰胺。

13.如权利要求1所述的方法，其中，所述二肽基肽酶IV抑制剂选自由维达列汀、西他列汀、萨格列汀、阿格列汀、ABT-279、BI 1356、ALS 2-0426和PT630组成的组。

14.如权利要求1所述的方法，其中，所述对象是人。

15.如权利要求1所述的方法，其中，所述肠降血糖素模拟物或二肽基肽酶IV抑制剂以低于单独施用时的常规治疗剂量的量施用。

16.如权利要求1所述的方法，其中，选择所述组合量使得所述治疗导致所述对象的重量减轻和食欲减退中的一个或多个。

17.如权利要求1所述的方法，其中，所述式I的化合物口服施用，所述肠降血糖素模拟物通过皮下注射施用。

18.如权利要求1所述的方法，其中，所述疾病是前期糖尿病或II型糖尿病。

19.如权利要求18所述的方法，其中，所述前期糖尿病包括胰岛素抵抗和葡萄糖耐量低减中的一个或两个。

20.如权利要求1所述的方法，其中，所述治疗缓解II型糖尿病的症状或减少II型糖尿病症状的发展机会，其中所述症状选自由与II型糖尿病相关的动脉粥样硬化、肥胖症、高血压、高脂血症、脂肪肝疾病、肾病、神经病、视网膜病、足部溃烂和白内障组成的组。

21.一种生物活性剂在药物制备中的用途，所述药物用于治疗选自由胰岛素抵抗综合征、糖尿病和多囊卵巢综合征组成的组中的疾病；或用于治疗与II型糖尿病相关的动脉粥样硬化、动脉硬化、肥胖症、高血压、高脂血症、脂肪肝疾病、肾病、神经病、视网膜病、足部溃烂或白内障或者减少这些疾病的发展机会；或用于治疗选自由高脂血症、恶病质和肥胖症组成的组中的疾病；

其中，所述活性剂是式I的化合物或其药用盐：

其中：

m是0、2或4；并且

X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基；

R⁶是氢、O或羟基；并且

R⁶是氢；并且

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的三个是氢，其余的独立地选自由氢、卤素、甲基、乙基、全氟甲基、甲氧基、乙氧基和全氟甲氧基组成的组；

其中，所述活性剂被配制为以能够有效治疗所述代谢疾病的组合量与肠降血糖素模拟物或二肽基肽酶IV抑制剂组合施用。

22.如权利要求21所述的用途，其中，R¹是甲基，R⁵是甲基。

23.如权利要求21所述的用途，其中，X是-OR⁷，其中R⁷是氢或具有1～3个碳原子的烷基。

24.如权利要求21所述的用途，其中，X是-NR⁸R⁹，其中R⁸是氢或羟基，R⁹是氢、甲基或乙基。

25.如权利要求21所述的用途，其中，所述化合物由式IA表示

26.如权利要求25所述的用途，其中，R¹是甲基，R⁵是甲基。

27.如权利要求26所述的用途，其中，所述化合物是4-(3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基)-4-氧代丁酸。

28.如权利要求26所述的用途，其中，所述化合物是3-(2，6-二甲基苄氧基)-苯基乙酸。

29.如权利要求26所述的用途，其中，所述化合物是4-3-(2，6-二甲基苄氧基)-苯基)-4(R)-羟基丁酸。

30.如权利要求26所述的用途，其中，所述化合物是N-羟基-2-[3-(2，6-二甲基苄氧基)苯基]乙酰胺。

31.如权利要求21所述的用途，其中，所述肠降血糖素模拟物选自由艾塞那肽类、艾塞那肽类激动剂、非肽类小分子GLP-1受体激动剂、它们的聚合物改性和酰化形式及药用盐、水合物和溶剂化物，以及这些盐的水合物和溶剂化物组成的组。

32.如权利要求31所述的用途，其中，所述艾塞那肽类是醋酸艾塞那肽或醋酸艾塞那肽酰胺。

33.如权利要求21所述的用途，其中，所述二肽基肽酶IV抑制剂选自由维达列汀、西他列汀、萨格列汀、阿格列汀、ABT-279、BI 1356、ALS 2-0426和PT630组成的组。

34.如权利要求21～33中任一项所述的用途，其中，所述药物配制为用于口服施用。

35.如权利要求21所述的用途，其中，所述肠降血糖素模拟物或二肽基肽酶IV抑制剂以低于单独施用时的常规治疗剂量的量施用。

36.如权利要求21所述的用途，其中，选择所述组合量使得对哺乳动物对象施用所述药物导致所述对象的重量减轻和食欲减退中的一个或多个。

37.如权利要求21所述的用途，其中，所述疾病是前期糖尿病或II型糖尿病。

38.如权利要求37所述的用途，其中，所述前期糖尿病包括胰岛素抵抗和葡萄糖耐量低减中的一个或两个。