CN101501498A - 根据rantes代表物水平检测il-16活性和对il-16活性的调节的方法 - Google Patents

根据rantes代表物水平检测il-16活性和对il-16活性的调节的方法 Download PDF

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Abstract

用于检测IL－16生物活性、检测对IL－16生物活性的调节以及诊断IL－16相关疾病存在情况和/或易感性的方法，包括测量和比较真核细胞所产生的RANTES代表物水平，其中所述真核细胞例如为CD4+和CD9+细胞系、外周血单核细胞、HuT－78细胞和/或THP－1细胞。

Description

根据RANTES代表物水平检测IL-16活性和对IL-16活性的调节的方法
发明领域
本发明涉及用于检测IL-16的生物活性及检测对IL-16生物活性的调节的方法。此外，本发明涉及直接诊断IL-16相关疾病存在和/或易感性的方法。
发明背景
白介素-16(IL-16；SEQ ID NO：3)是一种诱导T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和树突状细胞的正趋化作用的促炎性细胞因子(67J.Leukocyte Biol.757(2000))。在应答IL-16的真核细胞中，IL-16刺激物还增加IL-1b表达、增加IL-6表达和增加IL-15表达(67J.Leukocyte Biol.757(2000))。
IL-16肽链单体是通过胱天蛋白酶(caspase)-3介导的对一种更大的14kDa前体分子的蛋白水解加工而形成(273 J.Biol.Chem.1144(1998))。IL-16单体形成四聚体肽链复合物。这些四聚体IL-16复合物被认为是IL-16的生物活性形式(67 J.Leukocyte Biol.757(2000))。产生IL-16的真核细胞包括表达CD4或CD8的细胞，如T细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞、上皮细胞、成纤维细胞以及小脑的细胞(67J.Leukocyte Biol.757(2000))。应答IL-16的真核细胞表达CD4和CD9肽链，但对IL-16的应答也可能不依赖这些肽链(参见例如164J.Immunol.4429(2000))。
有报告指出，IL-16在如下疾病中发挥重要作用，如哮喘、特应性皮炎、类风湿性关节炎等等(参见例如162 Am.J.Respir.Crit.CareMed.105(2000)；109 J.Allergy Clin.Immunol.681(2002)；31 J.Rheumatol.35(2004))。例如，在人类患者中，IL-16已被证明负责诱集哮喘诱导细胞至肺部，并在触发患者的哮喘应答中发挥关键作用(162Am.J.Respir.Crit.Care Med.105(2000))。显然，对激活或抑制IL-16的分子的检测和鉴定的能力，是开发有效地治疗IL-16介导疾病的方法的关键。
因此，需要开发用于检测IL-16的生物活性、IL-16生物活性的激活物和IL-16生物活性的抑制物的新方法。
附图简述
图1图示，与对照比较，IL-16生物活性降低外周血单核细胞(PBMC)的RANTES细胞因子分泌。
图2图示，与对照比较，IL-16生物活性降低HuT-78细胞的RANTES细胞因子分泌。
图3显示，与对照比较，IL-16生物活性的抑制物增加PBMC的RANTES细胞因子分泌。
发明概述
本发明的一方面是检测样本中IL-16生物活性的方法，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供阴性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物(proxy)的量；且比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对于第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量减少则表明在测试样本中检测到IL-16生物活性。
本发明的另一方面是检测样本中增强IL-16生物活性的分子的方法，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；并且比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量较少则表明测试样本中存在增强IL-16生物活性的分子。
检测样本中降低IL-16生物活性的分子的方法，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；并且比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量增加则表明测试样本中存在降低IL-16生物活性的分子。
本发明的另一方面是诊断受试者中IL-16相关疾病存在或易感性的方法，其包括下述步骤：提供源自受试者的真核细胞样本；测量由该真核细胞样本产生的RANTES代表物的量；将该样本产生的RANTES代表物的量与参考标准(即来自无IL-16相关疾病或不易感IL-16相关疾病的受试者的细胞)作比较，其中，相对于标准品产生的RANTES代表物水平而言，由受试者样本产生的RANTES代表物的量增加则表明存在或易感IL-16相关疾病。
发明详述
在本说明书中引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请，在此引入作为参考，如同全文叙述一样。
除非另有明确规定，否则本文和权利要求书中所用的单数形式“一”、“和”以及“该”或“所述”包括了其复数形式。例如，提到的“一个细胞”是指一个或一个以上的细胞，且包括本领域技术人员熟知的等同物。
除非另有规定，否则用于本文的所有科技术语具有本发明所属领域的一般技术人员通常理解的相同涵义。虽然，在实施或检验本发明时，可以使用与本文所述类似或等同的任何组合物和方法，但本文所述是示范性的组合物和方法。
术语“抗体”是指免疫球蛋白或抗体分子，包括：多克隆抗体、单克隆抗体(包括鼠、人、人源化和嵌合性单克隆抗体)和抗体的片段、部分或变体。抗体是由浆细胞组成性表达和分泌的分泌蛋白。抗体还可以由永生化的浆细胞产生，其中浆细胞通过诸如产生杂交瘤的标准方法或将抗体重链和/或轻链基因转染入永生化B细胞(如骨髓瘤细胞)或其他细胞类型(诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、植物细胞和昆虫细胞)而永生化。
术语“生物活性”是指生物系统对分子的反应。这类生物系统可以是例如细胞、可复制的核酸(如病毒或质粒)、细胞或可复制核酸的分离成分、或掺入一种或多种这些成分的体外系统。
术语“CD4”是指一种肽链，其与SEQ ID NO：1的1至433位残基至少有50％的同一性，并且对IL-16有应答。两种肽链间的同一性可利用Vector NTI v.9.0.0(Invitrogen Corp.，Carslbad，CA)的AlignX模块的默认设置进行氨基酸序列比对而确定。AlignX使用CLUSTALW算法进行成对的氨基酸序列比对。“CD4”是“抗原决定簇4(Cluster ofDeterminant antigen 4)”的首字母缩略词。
术语“CD9”是指一种肽链，其与SEQ ID NO：2的1至228位残基至少有90％的同一性，并且对IL-16有应答。“CD9”是“抗原决定簇9”的首字母缩略词。
术语“真核细胞”是指其中其遗传物质被组织入至少一个膜包围核中的细胞。
术语“表达”是指可检出的由核酸编码的肽链的产生。
术语“IL-16”是指一种肽链，其与SEQ ID NO：3的1至121位氨基酸残基至少有80％的同一性，可以结合CD4并降低RANTES代表物的产生。“IL-16”是“白介素16“的首字母缩略词。
术语“IL-16相关疾病”是指传染性或免疫介导的炎性疾病，如肺结核、肺炎、呼吸道合胞体病毒、哮喘、特应性皮炎、克罗恩病、炎性肠病、类风湿性关节炎、中枢神经系统的相关疾病如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Graves病、丙型肝炎病毒、腮腺炎、柯萨奇病毒、埃可病毒、流感、大肠杆菌感染、李斯特菌、脑膜炎、EB病毒以及具有相关机制和/或以IL-16上调或IL-16活性增强为特征的疾病。
术语“肽链”是指包含至少两个氨基酸的分子，其中所述至少两个氨基酸残基由肽键相连而形成一条链。超过50个氨基酸的大型肽链可称为“多肽”或“蛋白质”。不到50个氨基酸的小肽链可称为“肽”。
术语“HuT-78细胞”是指ATCC
Figure A200780029864D0009104739QIETU
编号为TIB-161TM的细胞，其来自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Manassas，VA)；或由其衍生的细胞。
术语“THP-1细胞”是指ATCC
Figure A200780029864D0009104739QIETU
编号为TIB-202TM的细胞，其来自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Manassas，VA)；或由其衍生的细胞。
术语“群”是指至少有两个项目，如两个细胞。
术语“RANTES代表物”也称为CCL5，是指与SEQ ID NO：4的1至68位氨基酸残基至少有75％同一性的肽链、所编码的肽链与SEQID NO：4的1至68位残基至少有75％同一性的核酸、通过激活编码SEQ ID NO：4的天然基因的调控区而表达的肽链、或通过激活编码SEQ ID NO：4的天然基因的调控区而转录出的核酸。RANTES代表物可以用作RANTES基因激活的指示。两种肽链间的同一性可利用Vector NTI v.9.0.0(Invitrogen Corp.，Carslbad，CA)的AlignX模块的默认设置进行氨基酸序列比对而确定。AlignX使用CLUSTALW算法进行成对的氨基酸序列比对。“RANTES”是“激活时被调节的、正常T细胞所表达的和推测为分泌的(regulated upon activation，normal T-cell expressed，and presumably screted)”的首字母缩略词。
术语“应答”是指能够在对刺激的反应中产生可检测信号。
本发明的一方面是检测样本中IL-16生物活性的方法，这可以指示IL-16相关疾病的存在情况或对该病的易感性)，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供阴性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；并且比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对于第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量减少则表明在测试样本中检测到IL-16生物活性。
指示IL-16生物活性变化的RANTES代表物的改变的量值是具统计学意义的量值，例如，至少约1.5倍，如2倍、3倍及以上的量。
可用于本发明方法中的真核细胞可以是附着或悬浮的。这些真核细胞可以是被适合细胞生长或维持的培养基(包含血清或无血清)所包围着。可用于本发明方法中的真核细胞能应答IL-16。IL-16应答细胞通过向IL-16源的趋化、增加IL-1b的表达、增加IL-6、增加IL-15的表达、或降低RANTES产物来应答IL-16刺激，并基于这些指标而被鉴定。应答IL-16的细胞通常表达CD4、CD9或CD4和CD9两者中任一种，也可根据这一点来鉴定。测试样本和阴性对照样本可以包含与维持样本中IL-16生物活性相容并与本发明方法中所用的真核细胞相容的载体。磷酸缓冲盐溶液(PBS)就是这种载体的一个例子，本领域的技术人员还将认识到其它载体。理想的情况下，已知阴性对照样本中不含可检出的IL-16生物活性。
RANTES代表物的产生可以各种不同的方式来测量。例如，如果RANTES代表物是肽链，则可以通过特异性检测RANTES代表物肽链的RANTES代表物表达分析法来测量其产生。这样的分析方法可以包括：SDS-PAGE、蛋白质印迹分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、RANTES代表物特异性酶分析(如荧光素酶测定)、或RANTES代表物特异性抗体缀合珠分析。这些RANTES代表物肽链可以是SEQ ID NO：4的RANTES肽链，或在编码SEQ ID NO：4的天然基因的调控区控制下由核酸序列编码的肽链。在编码SEQ IDNO：4的天然基因的调控区控制下由核酸序列编码的肽链可以是容易检测到的肽，例如荧光素酶或绿色荧光蛋白。本领域的技术人员将认识到其它的适用于本发明方法的易于检测的肽链。或者，如果RANTES代表物是RNA，则可以通过RT-PCR、RNA印迹法、或本领域技术人员众所周知的检测特定RNA转录的其它技术来测量其产生。
通过将编码SEQ ID NO：4的天然基因的调控区与核酸序列操作性连接(operably linking)，该核酸序列可被置于该调控区控制下。这种操作性连接可以在可用作编码肽链或RNA的染色体外报告构建体(诸如质粒)的染色体外核酸背景下产生。这种染色体外构建体也可采用本领域技术人员众所周知的转染技术，通过随机重组事件被引入染色体DNA中。或者，这种操作性连接可以在诸如染色体DNA的染色体核酸背景下产生。编码SEQ ID NO：4的天然基因就是染色体核酸背景下的操作性连接的例子。然而，正如本领域技术人员将认识到的，位点特异性重组技术可以用来将外源基因操作性连接至染色体DNA中天然基因的调控区。由这种染色体核酸编码的所得肽链或RNA可以充当RANTES代表物。
在本方法的一个实施方案中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。CD4或CD9肽链可以被组成性表达或诱导性表达，可以是由天然基因或诸如cDNA的外源核酸编码。例如，该cDNA可以编码SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的肽链。
在本方法的另一实施方案中，真核细胞选自外周血单核细胞、HuT-78细胞和THP-1细胞。这些真核细胞可以被含血清或无血清的适合细胞生长或维持的培养基所包围着。
在本方法的另一实施方案中，提供第一测试样本，在包围着第一真核细胞群的培养基中产生的IL-16终浓度为100ng/ml至1000ng/ml。此处描述的IL-16测定方法能够检测出包围着真核细胞的培养基中IL-16浓度至少为100ng/ml至1000ng/ml时的IL-16生物活性。然而，本发明的方法也适用于检测样本中此范围外的更高和更低终浓度的IL-16。
在本方法的另一实施方案中，RANTES代表物被分泌到培养基中。包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的肽链是分泌到培养基中的RANTES代表物的例子。此类RANTES代表物也可通过表达融合多肽而产生，该融合多肽包含与RANTES代表物肽链融合的分泌信号序列。一个这样的分泌信号序列就是人生长激素(HGH)分泌信号序列(SEQ ID NO：5)。本领域技术人员会认识到其它适合的分泌信号序列。
本发明的另一方面是检测样本中增强IL-16生物活性的分子的方法，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对于第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量减少则表明在测试样本中存在增强IL-16生物活性的分子。本发明的这种方法可以用来检测或鉴别激活IL-16生物活性的分子，诸如药物。这些分子可通过任一机制激活IL-16生物活性。
阳性对照样本可包含与维持样本中IL-16生物活性相容并与在本发明方法中使用的真核细胞相容的载体。磷酸缓冲盐溶液(PBS)就是这种载体的一个例子，本领域的技术人员会认识到其它的载体。已知阳性对照样本中不含可检出的IL-16生物活性。
在本方法的一个实施方案中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。
在本方法的另一实施方案中，真核细胞选自外周血单核细胞、HuT-78细胞和THP-1细胞。
在本方法的另一实施方案中，第一测试样本包含抗体分子。
在本方法的另一实施方案中，RANTES代表物被分泌到培养基中。
本发明的另一方面是检测样本中降低IL-16生物活性的分子的方法，其包括下述步骤：向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量增加则表明测试样本中存在降低IL-16生物活性的分子。本发明的这种方法可以用来检测或鉴别抑制IL-16生物活性的分子，诸如药物。这些分子可以任一机制抑制IL-16生物活性。
参考下面的实施例对本发明作进一步说明。这些实施例只是为了说明本发明的多个方面，而不是限制本发明。
实施例1
根据RANTES水平的降低检出IL-16活性及对IL-16活性的正或负调节的测定方法
相对未暴露于含生物活性IL-16样本的阴性对照细胞，在测试样本中存在IL-16生物活性则会降低由应答IL-16的外周血单核细胞(PBMC)或真核细胞系分泌的RANTES趋化性细胞因子的水平(图1和2)。对接受了含不明分子的测试样本的PBMC(图1)或IL-16应答性真核HuT-78细胞(图2)所分泌的RANTES细胞因子分泌水平降低的检测，可用于测定在测试样本中是否存在生物活性IL-16。该测定方法还可以用来检测在两个不同的测试样本中IL-16生物活性的增加或降低(图1和2)。
使用标准方法[参见例如74(4)Blood.1348(1989)]分离人PBMC并将其维持于无血清AIM-V
Figure A200780029864D0009104739QIETU
细胞培养基(Invitrogen Inc.，Carlsbad，CA)中。用标准真核细胞培养技术将表达CD4(抗原决定簇4)并应答IL-16活性的永生化真核HuT-78人淋巴母细胞[ATCC
Figure A200780029864D0009104739QIETU
编号：TIB-161TM；美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Manassas，VA]维持于Dulbecco改良Eagle培养基(D-MEM；Invitrogen Inc.，Carlsbad，CA)，细胞培养液中含20％v/v胎牛血清(FBS；Invitrogen Inc.，Carlsbad，CA)。
用分离的PBMC(图1)或HuT-78细胞(图2)分析测试样本的IL-16生物活性。首先，将约500,000个PBMC或HuT-78细胞置于96孔组织培养板的孔内，孔内含有适合维持PBMC(图1)或HuT-78细胞(图2)的细胞培养基(AIM-V或D-MEM)。第二，将含有具生物活性的重组人(Homo sapiens)IL-16(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)[在磷酸缓冲盐溶液(PBS)载体中]的测试样本，添加到各组织培养孔中，使生物活性IL-16在包围所述细胞的培养基中的终浓度在100ng/mL和1000ng/ml间(图1和图2)。在阴性对照PBMC或阴性对照HuT-78细胞的培养孔中不添加含IL-16的样本，而是添加仅有磷酸缓冲盐溶液载体的阴性对照样本到包围着这些细胞的培养基中(图1和2)。第三，将接受了含有生物活性IL-16之测试样本的细胞和阴性对照细胞，分别在标准真核细胞培养条件下，于37℃孵育6个小时。第四，用RANTES特异Luminex
Figure A200780029864D0009104739QIETU
测定法，依据制造商的指示，测定包围着接受了测试样本的细胞或阴性对照细胞的培养基中的RANTES细胞因子分泌水平。第五，将包围着接受了测试样本的细胞的培养基中的RANTES细胞因子分泌水平，与包围着阴性对照细胞的培养基中的RANTES细胞因子水平进行比较。相对于包围着接受了阴性对照细胞的培养基中的RANTES分泌水平而言，包围着接受了测试样本的细胞的培养基中的RANTES分泌水平的降低，则指示测试样本含有生物活性IL-16(图1和2)。最后，将包围着接受了含生物活性IL-16的第一测试样本的细胞培养基中的RANTES细胞因子分泌水平，与包围着接受了含不同量生物活性IL-16的第二测试样本的细胞培养基中的RANTES细胞因子分泌水平进行比较。通过这样的比较，可以鉴别出含最高量IL-16生物活性的测试样本，因为这种样样本在包围着所述细胞的培养基中含有最低水平的分泌RANTES(图1和2)。通过这样的比较，可以鉴别出含最低量IL-16生物活性的测试样本，因为这种样样本在包围着所述细胞的培养基中含有最高水平的分泌RANTES(图1和2)。
这些结果表明，可以通过基于细胞的测定方法，检测样本中的IL-16活性，其中，相对未接受测试样本的阴性对照细胞而言，暴露于含生物活性IL-16的测试样本的IL-16应答细胞分泌的RANTES降低。
这些结果还表明，上文所述的IL-16生物活性测定方法可用于鉴别IL-16活性增加或降低的测试样本。因此，上文所述的测定方法适用于检测或鉴定增强或降低样本中IL-16活性的分子。这些分子可以是增强IL-16活性的药物，或仅仅是已添加到样本中的额外的生物活性IL-16分子。或者，这些分子可以是降低IL-16活性的药物。因此，本文所述的测定方法可以检测测试样本中IL-16活性的正调节或负调节，可用于检测或鉴别调节IL-16生物活性的分子，诸如药物。
星号指示在Student T检验法中，相对阴性对照的统计学显著差异，P<0.05(图1和2)。
实施例2
基于RANTES水平的降低检测调节IL-16活性之分子的测定方法
可对上述实施例1中所描述的测定方法加以修改后，以便检测或鉴定测试样本中调节IL-16活性的分子(如药物)。例如，这些分子可以是IL-16活性的抑制物。如图3所示，相对接受只含有IL-16之测试样本的阳性对照细胞，接受了含IL-16生物活性抑制剂的测试样本的PBMC的RANTES细胞因子分泌量增加。因此，此处描述的修改后测定方法可以用来检测或鉴别调节IL-16生物活性的分子。
检测或鉴别调节IL-16活性的分子的测定法如下进行。首先，将约500,000个PBMC细胞置于96孔组织培养板的孔内，孔内含有AIM-V细胞培养基。PBMC细胞的获得和维持按照上述实施例1的描述进行。第二，将测试样本添加到各组织培养孔中，该样本含有具生物活性的、重组人IL-16(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)[在磷酸缓冲盐溶液(PBS)载体中]和能体外抑制IL-16生物活性的抗体。如图3指示，加入IL-16，使得在包围着细胞的培养基中生物活性IL-16的终浓度为100ng/mL或1000ng/ml。抗人IL-16抗体是能抑制IL-16生物活性的鼠单克隆抗体。在阴性对照PBMC细胞的培养孔中不加入IL-16，而是在包围着这些细胞的培养基中加入仅含磷酸缓冲盐溶液载体或所述抑制性抗人IL-16mAb的阴性对照样本，浓度如图3中指示。阳性对照PBMC细胞仅接受生物活性IL-16，使得在包围着这些细胞的培养基中生物活性IL-16的终浓度为100ng/mL或1000ng/ml，如图3所示。第三，将接受了测试样本的PBMC细胞、阴性对照PBMC细胞和阳性PBMC对照细胞，分别在标准真核细胞培养条件下，于37℃孵育6个小时。第四，用RANTES特异性测定法，依据制造商的指示，测定包围着接受了测试样本的细胞、阴性对照细胞或阳性对照细胞的培养基中的RANTES细胞因子分泌水平。第五，将包围着接受了含生物活性IL-16和抑制性抗人IL-16mAb的测试样本的细胞的培养基中的RANTES细胞因子分泌水平，与包围着只接受生物活性IL-16的阳性对照细胞的培养基中的RANTES细胞因子水平进行比较。相对于包围着接受了阳性对照细胞培养基中的RANTES分泌水平而言，包围着接受了测试样本的细胞的培养基中的RANTES分泌水平增加，则指示测试样本含有生物活性IL-16的抑制物(图3)。
这些结果表明，上面描述的IL-16活性测定方法，可以用于检测或鉴别测试样本中调节IL-16活性的分子。这些分子可以是抑制IL-16活性的药物，或者是增强IL-16活性的药物。
误差条表示相对于平均值的标准偏差(见图3)。
现在已对本发明作了全面的描述，对本领域的普通技术人员显而易见的是，在不偏离所附权利要求书的精神或范畴下，可以对本发明作出许多调整和改变。
序列表
<110>CENTOCOR，INC.
<120>根据RANTES代表物水平检测IL-16活性和对IL-16活性的调节的方法
<130>CEN5139PCT
<150>待定
<151>2007-06-06
<140>60/804468
<141>2006-06-12
<160>5
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>433
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>1
<210>2
<211>228
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>2
Figure A200780029864D00192
Figure A200780029864D00201
<210>3
<211>121
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>3
<210>4
<211>68
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>4
Figure A200780029864D00203
<210>5
<211>26
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>5
Figure A200780029864D00211

Claims (24)

1.检测样本中IL-16生物活性的方法，包括以下步骤：
a)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；
b)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供阴性对照样本；
c)测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；和
d)比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对于第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量减少则表明在测试样本中检测到IL-16生物活性。
2.权利要求1的方法，其中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。
3.权利要求2的方法，其中，真核细胞选自：外周血单核细胞、HuT-78细胞和THP-1细胞。
4.权利要求1的方法，其中，提供第一测试样本，使得在包围着的第一真核细胞群的培养基的IL-16终浓度为100ng/mL至1000ng/ml。
5.权利要求1的方法，其中，RANTES代表物被分泌到培养基中。
6.权利要求1的方法，其中，相对第二真核细胞群而言，第一真核细胞群所产生的RANTES代表物量的降低为降至至多约1/1.5。
7.检测样本中增强IL-16生物活性的分子的方法，包括以下步骤：
a)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；
b)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；
c)测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；和
d)比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量降低则表明测试样本中存在增强IL-16生物活性的分子。
8.权利要求7的方法，其中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。
9.权利要求8的方法，其中，真核细胞选自：外周血单核细胞、HuT-78细胞和THP-1细胞。
10.权利要求7的方法，其中，第一测试样本包含抗体分子。
11.权利要求7的方法，其中，RANTES代表物被分泌到培养基中。
12.权利要求7的方法，其中，相对第二细胞群而言，第一群体所产生的RANTES代表物量的降低为降至至多约1/1.5。
13.检测样本中降低IL-16生物活性的分子的方法，包括以下步骤：
a)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第一真核细胞群提供第一测试样本；
b)向被培养基包围着且应答IL-16生物活性的第二真核细胞群提供含有生物活性IL-16的阳性对照样本；
c)测量由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量；和
d)比较由第一和第二真核细胞群产生的RANTES代表物的量，其中，相对第二真核细胞群产生的RANTES代表物水平而言，由第一真核细胞群产生的RANTES代表物的量增加则表明测试样本中存在降低IL-16生物活性的分子。
14.权利要求13的方法，其中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。
15.权利要求14的方法，其中，真核细胞选自：外周血单核细胞、HuT-78细胞和THP-1细胞。
16.权利要求13的方法，其中，第一测试样本包含抗体分子。
17.权利要求13的方法，其中，RANTES代表物被分泌到培养基中。
18.权利要求13的方法，其中，相对第二细胞群而言，由第一群体产生的RANTES代表物量的增加为至少增至约1.5倍。
19.诊断受试者中IL-16相关疾病存在或易感性的方法，包括以下步骤：
a)提供源自受试者的真核细胞样本；
b)测量由该真核细胞样本产生的RANTES代表物的量；和
c)将该样本产生的RANTES代表物的量与参考标准作比较，其中，相对参考标准产生的RANTES代表物水平而言，由受试者样本产生的RANTES代表物的量降低则表明存在或易感IL-16相关疾病。
20.权利要求19的方法，其中，真核细胞表达CD4肽链或CD9肽链。
21.权利要求20的方法，其中，真核细胞是外周血单核细胞。
22.权利要求19的方法，其中，参考标准包含对IL-16相关疾病不易感的细胞、未患IL-16相关疾病的细胞、或不以上调IL-16或IL-16相关活性为特征的细胞。
23.权利要求19的方法，其中，相对第二细胞群而言，由第一群体产生的RANTES代表物量的降低为降至至多约1/1.5。
24.在此描述的任一发明。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2016225012B2 (en) * 2015-02-27 2020-09-03 Kevin Chen Chimeric antigen receptors (CARS) targeting hematologic malignancies, compositions and methods of use thereof
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Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6936423B1 (en) * 1999-04-27 2005-08-30 Binie V. Lipps Anti-LTNF for in vitro assay of biological toxins
US6936426B2 (en) * 2000-10-06 2005-08-30 Harbor-Ucla Research And Education Institute Detection of antibody mediated inflammatory auto-immune disorders
ATE328906T1 (de) * 2002-06-28 2006-06-15 Domantis Ltd Dual-specifische liganden mit erhöhter halbwertszeit
US7790463B2 (en) * 2006-02-02 2010-09-07 Yale University Methods of determining whether a pregnant woman is at risk of developing preeclampsia

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