CN101497926B

CN101497926B - 快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒

Info

Publication number: CN101497926B
Application number: CN2008102369890A
Authority: CN
Inventors: 王业富; 吕振兴; 周立; 唐景峰; 张长明
Original assignee: Wuhan University WHU
Current assignee: Hubei Zhen Fu Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2008-12-23
Filing date: 2008-12-23
Publication date: 2012-02-29
Anticipated expiration: 2028-12-23
Also published as: CN101497926A

Abstract

本发明公开了一种快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒，涉及一种性传播疾病病原体基因检测试剂盒。本发明主要包括：1)DNA核酸提取液；2)含有三种病原体检测序列的阳性质粒，三种病原体包括沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体；3)一步法单管单酶多项联合检测的TaqManPCR扩增体系。本发明特异性好，灵敏度高，定量准确；检测速度快；使用步骤简单，可重复性高；可同时进行高通量的样品检测；不仅可对沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体进行同步定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断方法。

Description

快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒

技术领域

本发明涉及一种性传播疾病病原体基因检测试剂盒，具体涉及一种同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒，具有灵敏度高、特异性强、快速的特点。

背景技术

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，简称UU)和沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，简称CT)是常见的性传播疾病病原体，在临床非淋菌性尿道炎(简称NGU)病人中，二者常常呈共同感染状态；在性传播疾病中解脲脲原体与非淋菌性尿道炎、附睾炎有关；与前列腺炎、女性尿道症状、肾盂肾炎、盆腔炎有明显相关性或提示有病原学作用。

近年来解脲支原体的致病机理和流行病学研究得到了充分的重视。最近的研究表明，解脲支原体应该分为两个独立的种，即细小脲原体(Ureaplasma parvum，原解脲支原体生物一群)和解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，原解脲支原体生物二群，保留其原来的名称)，生殖道分离到的解脲支原体以细小脲原体为主，解脲支原体某些血清型跟致病密切相关，但是由于传统分群和分型方法的缺陷，提供的数据有限而不能确定这些观点。用分子生物学方法对解脲支原体进行更快速、更特异性地分群分型和定量对解脲支原体感染的致病机理和流行病学研究至关重要。

沙眼衣原体是一种致病微生物，既不是细菌，也不是病毒。它可以引起尿道感染，是淋病菌以外，较为常见的性传播疾病。这种尿道炎的典型表现是尿道刺痒、尿痛和排尿困难。在女性，还可同时有阴道炎、宫颈炎，甚至引起盆腔炎。女性感染此病还会导致不孕、宫外孕。孕妇患病，其新生儿经产道感染也可诱发眼结膜炎，或发生肺炎。沙眼衣原体感染可持续较长时间，需要及时而充分的治疗，否则容易迁延及复发。

近年来各种报道显示，淋菌性尿道炎发病率下降，而非淋菌性尿道炎却不断上升，居性传播疾病的首位。非淋菌性尿道炎可有症状或无症状，亚临床感染可持续存在多年。无论有症状还是无症状，其后果同样严重：除尿道炎、眼结膜炎外，可引起其他生殖器官炎症，如附睾炎、前列腺炎、输精管炎、宫颈炎、阴道炎、输卵管炎及盆腔炎等，最后导致不育症和异位妊娠，也可感染婴儿引起结膜炎和肺炎。男性同性恋者，可患直肠炎及咽炎。非淋菌性尿道炎常与淋病同时感染。前者先出现淋病症状，经抗淋病治疗后，淋球菌被青霉素杀死，而衣原体、支原体依然存在。在感染1-3周后发病。临床上很易被误认为淋病未治愈或复发。由此可见，非淋菌性尿道炎给人们的身心健康造成了极大的伤害，必须找到正确有效的诊断方法。

近年来发展起来的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescence QuantitativePCR，FQ-PCR)技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点在基因表达水平分析和定量检测等方面得到了广泛的应用，并且已经成为当前病毒核酸定量的主要方法。国内目前已有关于丙肝、乙肝、支原体、艾滋病、结核定量检测的试剂盒上市。

实时TaqMan荧光定量PCR能够避免这些问题。实时TaqMan荧光定量PCR通过序列特异性TaqMan探针以闭管模式在扩增的同时检测目标基因，从而可以增加特异性和降低交叉污染的可能性。另外，不需要进一步的下游分析，节约了凝胶电泳观察结果的时间。在实时TaqMan荧光定量PCR中，PCR产物累积的每个循环都被实时监控和分析，分析达到荧光阈值的循环数(Ct值)就可以直接报告出DNA起始拷贝数。通过序列特异性引物和TaqMan探针，实时TaqMan荧光PCR能够有效地鉴别解脲支原体不同的生物群和基因型。

传统的解脲支原体检测方法主要是选择培养法，常规的沙眼衣原体检测方法是免疫学方法，如：免疫荧光法，酶联免疫吸附试验等，这些方法劳动量大，耗时，而且灵敏度低或特异性差。聚合酶链反应法(PCR)近年来在解脲支原体和沙眼衣原体的临床样品检测和解脲支原体分群分型中显示了它的有效性而被广泛使用，但是PCR法需要对PCR产物进行后处理，不仅费时而且交叉污染容易导致假阳性结果，并且对环境造成污染、对实验人员造成潜在的危害。因此焏待开发精确、灵敏、快速、无污染的临床检验方法。

发明内容

本发明的目的就在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种快速同步检测沙眼衣原体(CT)、细小脲原体(UP)和解脲脲原体(UU)的试剂盒(简称本试剂盒)。

本发明的目的是这样实现的：

一、本试剂盒的结构

本试剂盒是一种多重荧光定量PCR检测试剂盒，包括：

a)DNA裂解液，b)荧光定量PCR反应液，c)CT标准阳性模板pU-CT，d)UP标准阳性模板pU-UP，e)UU标准阳性模板pU-UU，f)阴性质控标准品；

荧光定量PCR反应液含有CT、UP和UU的特异性引物对和荧光探针；

①沙眼衣原体

正向引物为5′-CATTGATGTTGCACAAGGAGAAA-3′，

反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；

荧光探针序列为5′-TTGACCACCCTTACGAG-3′；

荧光探针5′端标记报告荧光基团VIC，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团，可以大大提高探针的退火温度，标准阳性模板pU-UP是含有细小脲原体高度保守基因-脲酶基因的111个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；

②细小脲原体

正向引物为5′-TTCAGTTGGGCCAGATCATG-3′，

反向引物为5′-CTCTTCATCGGTGGCTAATGTATAAA-3′；

荧光探针序列为5′-AGGCTCGTCCTGACTCATGCATTTCG-3′；

荧光探针5′端标记FAM，3′端标记非荧光淬灭基团Eclipse，标准阳性模板pU-CT是含有沙眼衣原体高度保守基因trp基因73个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；

③解脲脲原体

正向引物为5′-ATCGACGTTGCCCAAGGGGA-3′

反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；

荧光探针序列为5′-TTGTCCGCCTTTACGAG-3′；

荧光探针5′端标记报告荧光基团TAMRA，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团。标准阳性模板pU-UU是含有解脲脲原体高度保守基因mba基因的110个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。

具体地说：

a)DNA裂解液

DNA裂解液包含：50mmol/L NaOH，10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，体积分数为1％Triton X-100，体积分数为1％NP-40，0.5mmol/L EDTA pH 8.0。

b)荧光定量PCR反应液

荧光定量PCR反应液包含：PCR 10×buffer 5.0μl，10μmol/L UP正向引物和反向引物各2.5μl，10μmol/L UU正向引物和反向引物各2.5μl，10μmol/LCT正向引物和反向引物各2.0μl，UP 5μmol/L荧光探针2.5μl，UU 5μmol/L荧光探针2.5μl，CT 5μmol/L荧光探针2.0μl，25mmol/L MgCl₂ 3μl，10mmol/L dNTPs 1.0μl，5U/μl HOTSTART Taq DNA聚合酶1.0μl，然后用双蒸水补充体积使反应液总体积为50μl。其中荧光探针为所示的核苷酸序列，UP荧光探针5′端标记VIC，3′端标记MGB，CT荧光探针5′端标记FAM，3′端标记Eclipse，UU荧光探针5′端标记TAMRA，3′端标记MGB基团。

c)CT标准阳性模板pU-CT

CT标准阳性模板pU-CT是含有沙眼衣原体trp基因73个核苷酸片段构成的pUCm-T重组质粒，该重组质粒转化大肠杆菌DH5α增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释至10⁹拷贝/μl，-20℃保存。贮存浓度为10⁹拷贝/μl，使用前进行10倍梯度的系列稀释。

d)UP标准阳性模板pU-UP

UP标准阳性模板pU-UP是含有细小脲原体高度保守基因ureE基因111个核苷酸片段构成的pUCm-T重组质粒，该重组质粒转化大肠杆菌DH5α增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释至10⁹拷贝/μl，-20℃保存。贮存浓度为10⁹拷贝/μl，使用前进行10倍梯度的系列稀释。

e)UU标准阳性模板pU-UU

UU标准阳性模板pU-UU是含有解脲脲原体高度保守mba基因的110个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖后用碱裂解法提取，经DNA纯化试剂盒纯化，用分光光度计测A260定量并稀释至10⁹拷贝/μl，-20℃保存。贮存浓度为10⁹拷贝/μl，使用前进行10倍梯度的系列稀释。

f)阴性质控标准品

阴性质控标准品为无菌双蒸水。

本试剂盒的工作原理：

在本发明提供的同步快速定量检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体荧光定量PCR试剂盒中，有标记了荧光基团的特异性荧光探针，在探针完整时，两基团在空间结构上距离相互靠近，5′端报告基团产生的荧光因为荧光共振能量转移(FRET)而被3′端淬灭基团淬灭，故体系中没有荧光信号的变化。在PCR退火和延伸过程中，探针与模板特异性结合，随着引物的延伸，Taq DNA聚合酶利用其5′→3′外切活性对探针进行切割释放出报告基团，这样破坏了两基团之间的荧光共振能量转移(FRET)，报告基团所释放的荧光可以被内置在定量检测仪内的荧光计检测，荧光量的增加与PCR产物的积累量呈比例关系。对沙眼衣原体和细小脲原体的定量可通过与标准品的循环域值(Ct，Threshold Cycle)相比较得出。Ct值是PCR过程中，荧光量的积累超过基底荧光量的循环个数，Ct值与起始模数呈一定比例关系，Ct值越小，起始模板数越多，相反，Ct值越大，起始模板数越少。利用阳性梯度标准模板的Ct值制成标准曲线，再根据待测样品的Ct值可准确测出该样品的起始拷贝数。

在本发明提供的同步沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体荧光定量PCR试剂盒中，针对沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体检测中的特殊性，对不同的靶片段进行反应体系，如引物和探针浓度、Mg2+浓度、退火温度等的优化，并将FQ-PCR技术(荧光定量PCR技术)和定量检测系统相结合，将其用于沙眼衣原体和细小脲原体同步定量检测。通过优化方案，反复实验，建立了同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量PCR方法，并研制出同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒的灵敏度可在每个反应体系中检出10拷贝，可以满足快速诊断沙眼衣原体和细小脲原体的要求。并且根据要求本试剂盒可快速对细小脲原体进行基因分型，设计的四对不同的MGB探针可以分别检测出四种不同的细小脲原体基因型。

二、本试剂盒的使用方法

本试剂盒的使用方法包括下列步骤：

a)对贮存浓度为10⁹拷贝/μl标准阳性模板pU-UP、pU-CT和pU-UU进行10倍的系列稀释，制备阳性标准品，用紫外分光光度计测定A₂₆₀对标准品定量；

b)用DNA裂解液从待测标本中提取UP、CT、UU和DNA；

c)分别提取b)中的DNA和同样量的a)中的三种阳性标准品加入到含HOTSTART(热启动)Taq DNA聚合酶和荧光定量反应液的PCR反应体系中用荧光定量检测仪进行PCR检测；

d)通过比较待测样品和相应标准品的循环域值Ct值，对待测样品的起始拷贝数进行定量。

本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

①特异性好，灵敏度高，定量准确；

②检测速度快，仅1.5小时，加上样品DNA的提取制备，共仅需2.5小时；

③使用步骤简单，封闭性检测，避免了可能的污染和人为误差，可重复性高；

④可同时进行高通量的样品检测。

⑤本试剂盒不仅可对沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体进行同步定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断方法。

具体实施方式

下面结合具体实施实例进一步说明：

应当理解，这些实施实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明要求保护的范围，下列实施例中未注明具体实验条件和方法，通常按照常规条件如：J.萨姆布鲁克等主编，科学出版社，1992，分子克隆实验指南(第二版)；D.L.斯佩克特等，科学出版社，2001，细胞实验指南；吕鸿声，科学出版社，1982，或接照制造厂商所建议的条件。

实施例1：试剂盒组成与配制

a、DNA提取试剂(裂解液)

为自己配制，裂解液：50mmol/L NaOH，10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，体积分数为1％Triton X-100，体积分数为1％NP-40，0.5mmol/L EDTA pH 8.0。

b、荧光PCR 10×Buffer组成：

500mM KCl、l00mM Tris-HCl(PH9.025℃)、1.0％Triton X-100；

c、荧光定量PCR反应液：PCR 10×buffer 5.0μl，10μmol/L UP正向引物和反向引物各2.5μl，10μmol/L UU正向引物和反向引物各2.5μl，10μmol/LCT正向引物和反向引物各2.0μl，UP 5μmol/L荧光探针2.5μl，UU 5μmol/L荧光探针2.5μl，CT 5μmol/L荧光探针2.0μl，25mmol/L MgCl₂ 3μl，10mmol/L dNTPs 1.0μl，5U/μl HOTSTART Taq DNA聚合酶1.0μl，然后用双蒸水补充体积使反应液总体积为50μl。

d、标准阳性模板贮存液：浓度为10⁹拷贝/μl标准阳性模板pU-UP，浓度为10⁹拷贝/μl标准阳性模板pU-UU，浓度为10⁹拷贝/μl标准阳性模板pU-CT。

e、阴性质控标准品：为无菌双蒸水

实施实例2：使用试剂盒同步检测沙眼衣原体，细小脲原体和解脲脲原体

a、在标本试管中加入1ml无菌生理盐水，充分震荡摇匀，转至1.5ml离心管中，10000g离心5min，再重复洗涤1次。沉淀直接加50μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10min，10000g离心5min，取上清液2μl做PCR反应。

b、将阳性标准模板(试剂d)系列稀释为10⁸拷贝/μl、10⁷拷贝/μl、10⁶拷贝/μl、10⁵拷贝/μl、10⁴拷贝/μl、10³拷贝/μl、10²拷贝/μl、10¹拷贝/μl、10⁰拷贝/μl。

c、分别取荧光定量PCR反应液(试剂c)各18μl，取第a)步所得UP DNA和第b)步稀释的UP阳性标准模板各1μl，取第a)步所得UU DNA和第b)步稀释的UU阳性标准模板各1μl，取第a)步所得CT DNA和第b)步稀释的CT阳性标准模板各1μl，并设阴性对照，分别加入不同的PCR反应管，在荧光定量检测仪上平行做PCR检测。循环条件为：95℃预变性400s；95℃10s，58℃40s，扩增40个循环。把荧光检测的程序设置在每个循环的第二步结束时进行，同步检测UP-VIC，CT-FAM和UU-TAMRA。

循环结束后，运用仪器自带软件，读取待检样品拷贝数。结果为：UP标准阳性模板10⁸拷贝/μl、10⁷拷贝/μl、10⁶拷贝/μl、10⁵拷贝/μl、10⁴拷贝/μl、10³拷贝/μl、10²拷贝/μl、10¹拷贝/μl、10⁰拷贝/μl的Ct值分别为12.11，15.62，18.33，22.98，26.59，30.02，32.56，35.14，37.57；UU标准阳性模板10⁸拷贝/μl、10⁷拷贝/μl、10⁶拷贝/μl、10⁵拷贝/μl、10⁴拷贝/μl、10³拷贝/μl、10²拷贝/μl、10¹拷贝/μl、10⁰拷贝/μl的Ct值分别为12.15，15.70，18.36，23.05，26.71，30.43，33.09，35.71，38.27；CT标准阳性模板10⁸拷贝/μl、10⁷拷贝/μl、10⁶拷贝/μl、10⁵拷贝/μl、10⁴拷贝/μl、10³拷贝/μl、10²拷贝/μl、10¹拷贝/μl、10⁰拷贝/μl的Ct值分别为12.61，15.92，19.06，23.25，27.34，31.47，35.61，39.65，43.59；阴性对照为0；

反复重复试验3次，得到Ct值进行统计学分析P＞0.05，数据差异无显著意义，说明其不同批次之间的检测结果具有可比性，具有良好的重复性。

我们收集了64个临床标本来评估沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的三重实时TaqMan荧光定量PCR检测系统，在64个临床标本中，有11个标本呈沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体共同感染，有14个标本只含有细小脲原体，有8个标本只含有沙眼衣原体，有6个标本只含有解脲脲原体，有25个标本为双阴性。细小脲原体和沙眼衣原体阳性标本的原始DNA拷贝数可以根据相应的标准曲线自动计算得出，在31(11+20)个阳性细小脲原体标本中，有13个阳性标本拷贝数在10¹-10³拷贝/反应体系范围内，有18个阳性标本拷贝数在10³-10⁶拷贝/反应体系范围内；在19(11+8)个阳性沙眼衣原体标本中，有9个阳性标本拷贝数在10²-10³拷贝/反应体系范围内，有10个阳性标本拷贝数在10³-10⁶拷贝/反应体系范围内。

为了评估三重实时TaqMan荧光定量PCR系统中引物对和探针之间相互反应和干扰对检测效果的影响，我们同时使用广州达安基因生物科技有限公司的解脲支原体核酸扩增荧光检测试剂盒和沙眼衣原体核酸扩增荧光检测试剂盒对64个临床样品进行单个实时TaqMan荧光定量PCR检测。单个实时TaqMan荧光定量PCR试剂盒检测的灵敏度、标准曲线线性范围和相关系数等指标基本上跟多重实时定量PCR检测接近，只有沙眼衣原体的单个实时TaqMan荧光定量PCR试剂盒检测的灵敏度比双重实时TaqMan荧光定量PCR检测时高1个数量级，前者为10拷贝/反应体系，后者为100拷贝/反应体系。

从上述实例可以说明，荧光定量PCR方法定量重复性好，定量准确，而且，荧光定量PCR检测试剂盒对样品的检测仅需2个小时就能完成，而传统的细胞培养法约需1周左右才能完成，并且传统方法对于这两种病原体的检测只能分开进行，往往周期长，成本高。因此，使用该试剂盒可以大大缩短检测时间。

该试剂盒的操作只需1人即可完成整个定量操作过程，一次可检测32-384个(由定量检测仪的型号决定)样品，这样也减少了人力资源的浪费。

序列表

<110>武汉大学

<120>快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒

<140>

<141>

<160>3

<210>1

<211>111

<212>DNA

<213>细小脲原体(Ureaplasma parvum)

<400>

cattgatgtt gcacaaggag aaaaaattcc tcgtaagggt ggtcaaggra tgattaaatc 60

agayttattt attattaata aagttgattt agctccttat gttggtgcta a 111

r：g或者a；y：t或者c。

<210>2

<211>73

<212>DNA

<213>沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)

<400>

ttcagttggg ccagatcatg ccgaaatgca tgagtcagga cgagcctttt atacattagc 60

caccgatgaa gag 73

<210>3

<211>110

<212>DNA

<213>解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)

<400>

atcgacgttg cccaagggga aaaaattcct cgtaaaggcg gacaaggaat gattaaatca 60

gatttattca tcatcaataa agttgattta gctccttatg ttggtgctaa 110

Claims

1.一种快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒，其特征在于：

1)DNA核酸提取液；

2)含有三种病原体检测序列的标准阳性模板，三种病原体分别是沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体；

3)一步法单管单酶多项联合检测的TaqMan PCR扩增体系由含有PCR10×buffer，分别为10μmol/L的沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体正、反向引物，分别为5μmol/L的沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体的荧光探针，25mmol/L MgCl₂，10mmol/L dNTPs mix和无菌双蒸水组成，其中引物和标记探针如下：

①沙眼衣原体

正向引物为5′-TTCAGTTGGGCCAGATCATG-3′，

反向引物为5′-CTCTTCATCGGTGGCTAATGTATAAA-3′；

荧光探针序列为5′-AGGCTCGTCCTGACTCATGCATTTCG-3′；

②细小脲原体

正向引物为5′-CATTGATGTTGCACAAGGAGAAA-3′，

反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；

荧光探针序列为5′-TTGACCACCCTTACGAG-3′；

③解脲脲原体

正向引物为5′-ATCGACGTTGCCCAAGGGGA-3′

反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；

荧光探针序列为5′-TTGTCCGCCTTTACGAG-3′；

荧光探针5′端标记报告荧光基团TAMRA，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团，标准阳性模板pU-UU是含有解脲脲原体高度保守mba基因的110个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。

2.按权利要求1所述的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于标准阳性模板包括：

CT标准阳性模板pU-CT包含的trp基因的核苷酸序列为

TTCAGTTGGGCCAGATCATGCCGAAATGCATGAGTCAGGACGAGCCTTTTATACATTAGCCACCGATGAAGAG；

UP标准阳性模板pU-UP包含的ureE基因的核苷酸序列为

CATTGATGTTGCACAAGGAGAAAAAATTCCTCGTAAGGGTGGTCAAGGRATGATTAAATCAGAYTTATTTATTATTAATAAAGTTGATTTAGCTCCTTATGTTGGTGCTAA；

R：G或者A；Y：T或者C；

UU标准阳性模板pU-UU包含mba基因的核苷酸序列为

ATCGACGTTGCCCAAGGGGAAAAAATTCCTCGTAAAGGCGGACAAGGAATGATTAAATCAGATTTATTCATCATCAATAAAGTTGATTTAGCTCCTTATGTTGGTGCTAA；

所述的CT、UP和UU分别表示沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体。