CN101497638B - 一种nad+类似物及其合成和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种NAD+类似物及其合成和应用，其结构式如下的
是由烟酰胺单核苷酸与相应的醇反应生成的磷酸二酯化合物。其中R为C4-C15饱和或不饱和的烷基，或含有杂原子的C2-C10饱和或不饱和烷基A；或R为
或R为
或R为
该NAD+类似物可以促进微生物如大肠杆菌和酿酒酵母的生长；也可作为脱氢酶辅因子用于催化氧化还原反应。
Description
技术领域
本发明涉及一类NAD+类似物，具体地说是具有各种取代基的饱和及不饱和烷烃、芳香烃为腺苷一磷酸(adenosine monophosphate，AMP)类似物的磷酸二酯化合物以及以一系列缩合试剂合成NAD+类似物——具有磷酸二酯结构NAD+类似物的方法，以及该化合物作为微生物(如大肠杆菌和酿酒酵母)生长的促进剂；也可作为脱氢酶辅因子用于催化氧化还原反应。
背景技术
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)以及它相应的还原态(NADH)，就是通常所说的辅酶I，是生物体不可缺少的小分子化合物，参与生命体中的氧化还原代谢及其它一系列重要生物化学过程，其结构式如下：
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的化学结构
在细胞内，NAD+主要起传递氢和电子的作用，许多重要氧化还原酶都依赖于NAD+。
除了氧化还原功能外，在细胞的许多非氧化还原生命过程中，NAD+同样起到非常重要的作用。NAD+在细胞的繁殖、生长、分化、凋亡等生命活动中都是不可缺少的小分子化合物。NAD+同样可以作为组蛋白去乙酰化酶(sirtuins)的底物，在酶催化下，将组蛋白上的乙酰基移去(G.Blander et al.Annu Rev Biochem 2004，73，417-435.)，使组蛋白能够顺利完成DNA复制、转录和修复等重要功能(H.N.Lin Org.Biomol.Chem.2007，5，2541-2554.)。有文献报道，NAD+浓度的提高有助于延长酵母的寿命(Haigis，M.C.；Guarente，L.P.Genes DeV.2006，20，2913-21.)。
基于NAD+结构复杂，性质不稳定等特点，人们对其进行了许多化学改造。目前，对NAD+的改造工作很多，最近的一些工作有对腺苷一磷酸(AMP)部分(C.J.W.Mort et al.Bioorg.Med.Chem.2004，12，475-487.)改造、核糖环(G.-C.Zhou et al.J.Am.Chem.Soc.2004，126，5690-5698.)改造以及烟酰胺部分(N.E.Batoux et al.Tetrahedron 2004，60，6609-6617.)改造，对焦磷酸的改造也有报道(L.Chen et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.2007，17，3152-3155.)。上述工作都是建立在对NAD+原有结构进行化学修饰基础上，难以克服其化学性质上不稳定性，化学合成、分离困难等缺点。
H.C.Lo et al.(Inorg.Chem.2001，40，6705-6716.)曾经采用甲醇为腺苷一磷酸(AMP)部分的替代物与烟酰胺单核苷酸在DCC/DMAP下，合成了NAD+类似物
但是这种方法产率低、副产物多、分离困难，并且产物在分离过程中容易分解。另外，如果采用其他的醇为腺苷一磷酸(AMP)部分的替代物，则找不到合适的溶剂溶解烟酰胺单核苷酸，同时糖环上2’，3’羟基也会参加反应，所以此种方法不适合合成本发明的NAD+类似物。
H.C.Lo et al.(Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，478-481.)报道了用上述类似物作为马肝脱氢酶(HLADH)的辅因子还原酮为手性醇的例子，但所用的还原试剂为稀有金属Rh，价格昂贵，操作繁琐，对空气敏感，辅因子结构过于简单，与酶的结合不够紧密。
发明内容
本发明的目的在于避免技术背景中困难，对NAD+结构进行了分析，保留了烟酰胺单核苷催化功能区，对腺苷和焦磷酸部分进行改造-以结构简单的醇和磷酸二酯结构替代，合成了一种磷酸二酯类NAD+类似物，这种类似物具有结构相对简单，化学性质相对稳定的特点。
本发明另一目的是提供了合成具有磷酸二酯骨架NAD+类似物的方法。
本发明的目的还在于提供这种NAD+类似物可以作为微生物(如大肠杆菌和酿酒酵母)生长的促进剂；也可用NaBH4或玻碳电极将NAD+类似物还原后，作为脱氢酶辅因子用于催化氧化还原反应，具有更易于与HLADH结合，更经济，操作简便，酶的催化活性更高等特点。
本发明的NAD+类似物具有如下结构式：
结构式中烟酰胺单核苷酸为β-构型；核糖为D-构型；
与烟酰胺单核苷酸相连的R为C4-C15饱和或不饱和的烷基，或含有氧、氮、氯、溴或硫杂原子的C2-C10饱和或不饱和烷基，以下称之为A；
或R为
以下称之为B，其中Ar1为芳香烃
或
与烟酰胺单核苷酸磷酸相连的链中X＝CH2、O或S，n＝0-3；R1为卤素、C1-C5烷氧基、C1-C5烷巯基、C1-C5烷基氨基、芳基酰胺基、烷基酰胺基或C1-C5卤代烃基；
或R为
以下称之为C，其中Ar2为苯环或萘环，1＝0-2；
或R为
以下称之为D，其中Ar3为芳香环
或
R2为C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷硫基、C1-C5烷基酰氨基、C1-C5卤代烃基或卤素，各连接链中n＝0-10，m＝0-10或1＝0-2，卤(素)为F、Cl或Br。
本发明中NAD+类似物合成方法如下：
1)参照文献(S.M.Graham，D.J.Macaya，R.N.Sengupta et al.Org.Lett.2004，6，233-236.)合成2’，3’-二乙酰基烟酰胺单核苷酸吡啶盐；
2)在有机溶剂中，加入步骤1)合成的吡啶盐、醇和缩合试剂，在-10～35℃搅拌反应16-72小时，再经脱乙酰化，得到含有R为A或B取代基的目标NAD+类似物；
其中2’，3’-二乙酰基烟酰胺单核苷酸吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶1～5∶1～20；有机溶剂为DMF和吡啶的混合溶剂，混合体积比例为1∶1～15；所用缩合试剂为碳酰亚胺衍生物、酰氯、磷酰氯、双(2-氧代-3-恶唑烷基)磷酰氯(BOP-Cl)、2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(TPS-Cl)或1-对硝基苯磺酸基-1，2，4-三唑(TPS-N)；所用醇为A-OH或B-OH；
3)采用步骤2)的方法，当其选用的醇为时，获取其中间产物
将此中间产物和叠氮化合物
或
溶解于混合溶剂中，加入催化剂，10～40℃搅拌反应12-48小时，经脱乙酰化，得到含有C或D取代基的目标NAD+类似物；
其中
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶1～10∶0.1～20，混合溶剂为甲醇，乙醇，丙醇，叔丁醇，正丁醇，二氯甲烷，氯仿，1，2-二氯乙烷，N，N-二甲基甲酰胺，甲酰胺，吡啶，乙腈，丙酮或二甲基亚砜和水(其中水的体积占30～50％)的混合溶剂，催化剂为Cu/CuSO4(摩尔比为1～10∶1)或抗坏血酸钠/CuSO4(摩尔比为1～10∶1)，叠氮化合物中Ar2和Ar3依上所述。
所述碳酰亚胺衍生物为N，N’-二环己基碳酰二亚胺(DCC)、N，N’-二异丙基碳酰二亚胺(DIC)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC)；所述酰氯为新戊酰氯(PV-Cl)或1-金刚烷甲酰氯(AC-Cl)；所述磷酰氯为氯磷酸二苯酯(DPCP)。
本发明所得NAD+类似物可以作为微生物促进剂，用于促进微生物(如大肠杆菌和酿酒酵母)的生长；也可作为脱氢酶辅因子用于催化氧化还原反应
本发明所得NAD+类似物的应用方法如下：
将NAD+类似物加入到微生物培养液中，促进大肠杆菌和酿酒酵母生长，在生物化工领域具有重要价值；或将NAD+类似物作为马肝脱氢酶辅因子，用于催化合成手性醇，在精细化工领域具有重要价值。
本发明合成了一种含有烟酰胺单核苷酸的磷酸二酯化合物，而且反应条件温和，原料易得，分离纯化简单易行，操作简便，产率较高。
本发明的NAD+类似物能明显促进大肠杆菌和酿酒酵母生长，在生物化工领域具有应用价值；而且，本发明的NAD+类似物还能作为马肝脱氢酶的辅因子，用于催化合成手性醇，在生物催化和精细化工领域具有应用前景。
具体实施方式
以下实施例有助于了解本专利，但不局限于本发明的内容。
实施例中所用的原料分别参照文献(S.M.Graham，D.J.Macaya，R.N.Sengupta et al.Org.Lett.2004，6，233-236.)合成2’，3’-二乙酰基烟酰胺单核苷酸吡啶盐；参照文献(R.Fiammengo，K.Musílek and A.J
schke J.Am.Chem.Soc.2005，127，9271-9276.)合成醇A-OH或B-OH；参照文献(P.van der Peet，C.T.Gannon，I.Walker et al.ChemBioChem 2006，7，1384-1391.)合成叠氮化物。
实施例1
将0.63mmol Ac2NMN
溶解于7ml吡啶和7ml DMF混合溶剂中，加入2-苯乙醇(200μl，1.67mmol)，加入2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(TPS-Cl)(757mg，2.5mmol)，10℃搅拌反应10h，减压除掉溶剂，滴入10ml水，二氯甲烷洗涤，水相浓缩，反相硅胶柱层析，收集产物，浓缩得到黄色糖浆状固体。
将上述产物溶解于0.7ml甲醇中，降温到-5℃，加入7M的NH3的甲醇溶液115μl，混合物在-5℃下搅拌过夜，TLC检测直至反应进行完全，除去溶剂，残渣加水1ml，经过反向硅胶柱层析，收集产物，浓缩后，再经过阴离子交换树脂(201×4，HCO2 -型)，浓缩，冷冻干燥产物，产率：60％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ2.78(t，J＝6.04Hz，2H)，3.65(dd，J＝1.96，9.64Hz，1H)，3.94(m，3H)，4.11(t，J＝2.2，1H)，4.35(s，1H)，6.01(d，J＝5.36，1H)，7.14(m，5H)，8.02(t，J＝7.48，1H)，8.77(d，J＝8，1H)，9.01(d，J＝6.04，1H)，9.19(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.0，148.4，144.7，141.9，141.2，136.2，131.6，131.0，130.8，128.9，102.2，89.7，89.6，80.1，73.4，69.2，66.7，38.5，38.5.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.31.
HRMS：calcd for C19H23N2O8P(M+H+)439.1270，found(M+H+)439.1284.
该化合物分子量438.12，在264nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为5100L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
将LB培养基(蛋白胨2g·L-1，酵母粉1g·L-1，氯化钠2g·L-1，pH 7.0)10ml中加入上述化合物至终浓度为100μM，以1∶100接种大肠杆菌DH5α(北京鼎国生物技术公司)种子液(OD600＝2)，在37℃，200rpm条件下培养；与对照组(无NAD+类似物)相比，培养4h后添加类似物的大肠杆菌的OD600值比对照组高0.8，说明NAD+类似物对大肠杆菌DH5α生长具有促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
将YEPD培养基(葡萄糖2g·L-1，酵母粉1g·L-1，蛋白胨2g·L-1，pH 6.5)10ml中加入上述化合物至终浓度为100μM，以1∶200接种酿酒酵母菌S288c(购自Invitrogen公司)种子液(OD600＝7.9)，在30℃，200rpm条件下培养；与对照组(无NAD+类似物)相比，培养12h后添加类似物的酵母菌的OD600值比对照组高3.5，说明NAD+类似物对酿酒酵母S288c生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶辅因子催化合成手性醇的实验
将上述类似物配成5mM溶液，用等体积5mM NaBH4水溶液处理，得到类似物还原态，备用；或将类似物在5mM Tris-10mM NaCl缓冲液中，以Pt电极为对电极，饱和甘汞电极为参比电极，用玻碳电极为工作电极将其还原，然后加入到磷酸钾缓冲液(5ml，100mM，pH＝7)中，再依次加入苯乙酮0.005mmol，马肝脱氢酶10U，室温反应24h，用GC(β-环糊精手性柱)检测反应，积分产率为24％，S构型的e.e.值为97％。
实施例2
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为反应温度为30℃，反应时间为38h，所用缩合试剂为1-对硝基苯磺酸基-1，2，4-三唑，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶1∶5，产率：59％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ0.75(t，2H)，1.23(q，2H)，1.44(t，2H)，3.75(q，2H)，4.03(d，J＝5.32Hz，1H)，4.20(d，J＝10.28Hz，1H)，4.42(t，J＝5.08Hz，1H)，4.51(s，1H)，6.11(d，J＝5.12Hz，1H)，9.01(d，J＝6.04，1H)，8.88(d，J＝7.56Hz，1H)，8.18(t，J＝7.44Hz，1H)，9.34(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ168.2，148.4，144.9，142.2，136.4，130.9，102.3，89.7，80.2，73.5，68.7，66.8，34.4，20.8，15.4.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.57.
HRMS：calcd for C15H23N2O8P(M+H+)391.1230，found(M+H+)391.1244．
该化合物分子量390.12，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为5600L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于，培养5h后，添加类似物的大肠杆菌HB101(北京鼎国生物技术公司)的OD600值比对照组高0.6，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，培养10h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741(购自ATCC，基因型：Mat a；his3Δ1；leu2Δ0；met15Δ0；ura3Δ0)的OD600比对照组高2.5，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于，积分产率为29％，S构型的e.e.值为95％。
实施例3
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为35℃，反应时间为38h，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶3∶8，体积比DMF∶Py＝1∶8，产率：12％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.20(t，2H)，1.28(d，6H)，1.42(d，3H)，1.51(d，3H)，1.69(s，3H)，3.74(q，2H)，4.01(dd，J＝4.92，10.4Hz，1H)，4.17(dd，J＝3.96，9.92Hz，1H)，4.28(s，1H)，4.43(s，1H)，4.48(s，1H)，6.09(d，J＝5.04，1H)，8.16(t，J＝7.04，1H)，8.87(d，J＝8.04，1H)，9.14(d，J＝6.2，1H)，9.32(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.5，148.4，144.7，141.9，141.2，136.2，131.6，131.0，130.8，128.9，65.3，45.7，42.6，38.2，，31.6，29.3，19.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.63.
HRMS：calcd for C23H33N2O8P(M+H+)497.2210，found(M+H+)497.2254.
该化合物分子量496.22，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为4600L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于，培养3h后，添加类似物的大肠杆菌BL21(北京鼎国生物技术公司)的OD600值比对照组高0.4，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于，培养11h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高2.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，加入苯丙酮0.005mmol，积分产率为21％，S构型的e.e.值为93％。
实施例4
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶4∶3，产率：13％。
1H NMR(400 MHz，D2O)：δ1.87(s，1H)，2.41(s，2H)，3.83(m，2H)，4.14(d，J＝15.8Hz，1H)，4.26(d，J＝14.48Hz，1H)，4.35(s，1H)，4.43(s，1H)，4.53(s，1H)，5.35(d，J＝5.04Hz，1H)，8.21(t，J＝6.4Hz，1H)，8.91(t，J＝7.88Hz，1H)，9.15(t，J＝7.92Hz，1H)，9.35(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ168.4，148.4，144.8，141.3，136.4，133.7，102.3，89.7，86.2，80.1，73.5，68.2，66.8，34.3，23.4.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.31.
HRMS：calcd for C15H19N2O8P(M+H+)387.0970，found(M+H+)387.0964.
该化合物分子量386.09，在265nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为5900L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养6h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α的OD600值比对照组高0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高3.5，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，积分产率为21％，S构型的e.e.值为92％。
实施例5
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为10℃，反应时间为20h，所用缩合试剂为双(2-氧代-3-恶唑烷基)磷酰氯，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶5∶10，体积比DMF∶Py＝1∶10，产率：41％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.64(t，J＝4.28Hz，2H)，3.74(t，J＝4.16Hz，2H)，3.91(m，2H)，3.99(m，3H)，4.15(dd，J＝2.46，5.48，2H)，4.25(d，J＝5.28，1H)，4.29(d，J＝2.64，1H)，4.38(s，1H)，5.93(d，J＝5.40，1H)，6.73(d，J＝8.24，2H)，6.82(t，J＝7.36，1H)，7.13(t，J＝7.72，1H)，8.05(t，J＝6.68，1H)，8.69(d，J＝8.12，1H)，9.06(d，J＝6.24，1H)，9.16(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.9，160.2，148.3，144.8，142.1，136.2，132.3，131.0，124.0，117.0，102.3，89.6，80.2，73.2，72.7，71.7，69.6，67.6，66.9.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.36.
HRMS：calcd for C21H27N2O10P(M+H+)499.1440，found(M+H+)499.1484.
该化合物分子量498.14，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6600L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌JM109(北京鼎国生物技术公司)的OD600值比对照组高0.6，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养10h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高2.6，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶辅因子用于催化合成手性醇实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于加入2-苯丁酮0.005mmol，积分产率为29％，S构型的e.e.值为95％。
实施例6
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为反应温度为0℃，反应时间为60h，所用缩合试剂为1-金刚烷甲酰氯，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶4∶18，产率：34％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.61(t，J＝4.12，2H)，3.70(t，J＝4.16，2H)，3.86(m，2H)，3.99(m，3H)，4.13(ddd，J＝2.40，3.88，11.88，2H)，4.18(dd，J＝2.88，4.68，1H)，4.23(t，J＝5.12，1H)，4.32(t，J＝2.4，1H)，5.87(d，J＝5.20，1H)，6.70(t，J＝7.60，2H)，6.79(d，J＝8.28，1H)，7.03(m，2H)，8.00(t，J＝6.44，1H)，8.63(d，J＝8.08，1H)，8.99(d，J＝6.28，1H)，9.10(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.6，162.7，155.7，148.2，144.7，142.0，136.0，132.6，130.9，130.8，124.6，124.0，116.6，102.2，89.4，89.3，80.1，73.0，72.8，71.5，71.0，67.7，67.7，66.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.29.
HRMS：calcd for C21H26ClN2O10P(M+H+)533.1092，found(M+H+)533.1092.
该化合物分子量532.1，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6100L·mol-1·cm-1，微红色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养6h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α的OD600值比对照组高0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养16h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高3.0，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为30％，S构型的e.e.值为95％。
实施例7
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为24℃，反应时间为30h，所用缩合试剂为N，N’-二异丙基碳酰二亚胺，体积比DMF∶Py＝1∶2，产率：37％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ2.04(s，3H)，3.59(t，J＝4.16，2H)，3.67(t，J＝7.16，2H)，3.88(m，4H)，3.97(ddd，J＝1.96，4.8，12.12，1H)，4.15(ddd，J＝1.85，3.36，12.12，1H)，4.21(m，1H)，4.25(t，J＝5.08，1H)，4.34(s，1H)，5.86(d，J＝5.24，1H)，6.43(m，2H)，6.57(d，J＝7.52，1H)，6.93(t，J＝8.28，1H)，7.99(t，J＝7.52，1H)，8.63(d，J＝8.08，1H)，9.00(d，J＝6.24，1H)，9.08(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.6，162.8，160.1，148.1，144.6，142.6，141.9，136.0，132.0，130.9，129.2，124.6，117.5，113.6，102.2，89.5，89.4，80.1，73.0，72.7，72.7，71.6，69.4，67.7，67.6，66.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.32.
HRMS：calcd for C22H29N2O11P(M+H+)529.1521，found(M+H+)439.1562.
该化合物分子量528.15，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为7700L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α的OD600值比对照组高0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高3.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为28％，S构型的e.e.值为93％。
实施例8
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为20℃，反应时间为16h，所用缩合试剂为产率：26％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.65(s，2H)，3.75(t，J＝3.84，2H)，3.91(m，2H)，3.99(m，3H)，4.17(dd，J＝3.88，11.96，1H)，4.26(t，J＝2.32，1H)，4.33(m，1H)，4.40(d，J＝2.16，1H)，5.97(d，J＝5.24，1H)，6.56(m，3H)，7.12(m，1H)，8.10(t，J＝8.12，1H)，8.73(d，J＝8.71，1H)，9.08(d，J＝6.2，1H)，9.21(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.6，166.9，161.6，148.3，144.8，142.1，136.2，133.2，133.1，131.0，130.8，112.9，110.6，110.3，104.7，104.4，102.3，89.6，89.5，80.2，73.2，72.8，72.7，71.5，69.9，67.6，66.9.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.36.
19F NMR(376MHz，D2O)：δ-111.5.
HRMS：calcd for C21H26FN2O10P(M+H+)517.1406，found(M+H+)517.1387.
该化合物分子量516.14，在265nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6700L·mol-1·cm-1，淡红色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌JM109的OD600值比对照组高0.5，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高2.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为26％，S构型的e.e.值为98％。
实施例9
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为32℃，反应时间为18h，所用缩合试剂为N，N’-二环己基碳酰二亚胺，产率：17％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.50(m，2H)，3.78(m，2H)，3.90(m，4H)，3.98(s，1H)，4.07(d，1H)，4.21(s，1H)，4.26(s，1H)，5.71(s，1H)，6.40(s，1H)，6.82(m，2H)，6.96(s，1H)，7.24(s，2H)，7.34(s，1H)，7.51(s，2H)，7.89(d，J＝6.36，1H)，8.52(m，1H)，8.89(d，J＝6.2Hz，1H)，8.94(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ172.5，168.3，167.7，166.3，161.5，147.4，144.7，142.2，136.2，135.5，134.9，132.1，130.9，124.5，117.7，114.0，102.3，89.6，80.1，73.1，70.5，68.7，66.8，33.4，31.9，30.4，24.4.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.21.
HRMS：calcd for C28H32N3O11P(M+H+)618.1857，found(M+H+)618.1897.
该化合物分子量617.18，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为16000L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α、HB101和BL21的OD600值分别比对照组高0.4、0.5和0.4，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高4.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于加入2-丁酮0.005mmol，积分产率为23％，S构型的e.e.值为93％。
实施例10
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为18℃，反应时间为18h，所用缩合试剂为新戊酰氯，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶3∶15，体积比DMF∶Py＝1∶1，产率：12％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.62(m，5H)，3.92(m，4H)，4.04(m，3H)，4.27(s，1H)，5.46(d，J＝5.08，1H)，6.31(t，J＝4.08，1H)，6.97(d，J＝3.96，2H)，7.16(m，2H)，7.34(d，J＝7.92Hz，1H)，7.56(t，J＝7.08Hz，1H)，7.68(d，J＝8.12，1H)，8.12(d，J＝7.96，1H)，8.65(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ168.6，165.8，161.1，151.1，145.6，141.6，133.0，131.0，130.4，128.2，122.4，116.6，114.6，102.3，89.6，89.3，79.1，71.0，70.7，69.4，68.5，67.7，67.6，66.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.34.
HRMS：calcd for C25H29N2O10P(M+H+)549.1631，found(M+H+)549.1594.
该化合物分子量548.16，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为7800L·mol-1·cm-1，微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养3h后，添加类似物的大肠杆菌HB101的OD600值比对照组高0.5，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高4.3，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为20％，S构型的e.e.值为94％。
实施例11
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为5℃，反应时间为50h，所用缩合试剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐，产率：35％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.42(q，2H)，1.56(t，2H)，1.66(t，2H)，3.80(q，2H)，3.93(t，2H)，4.00(ddd，J＝2.28，2.36，12.12，1H)，4.16(ddd，J＝2.00，2.08，12.04 1H)，4.29(t，1H)，4.36(t，1H)，4.46(d，J＝1.88，1H)，6.03(d，J＝5.12，1H)，6.81(t，J＝7.72，1H)，6.92(d，J＝8.28，1H)，7.13(t，J＝7.72，1H)，7.22(d，J＝9.96，1H)，8.11(t，J＝7.72，1H)，8.73(d，J＝8.08，1H)，9.11(d，J＝6.20，1H)，9.27(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ173.5，167.7，156.0，148.3，144.8，142.3，136.2，132.6，131.0，130.8，124.5，116.9，102.4，89.5，80.2，73.1，71.8，68.8，66.8，31.9，30.3.24.3.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.67.
HRMS：calcd for C22H28ClN2O9P(M+H+)531.1113，found(M+H+)531.1119.
该化合物分子量530.11，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6600L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养6h后，添加类似物的大肠杆菌JM109的OD600值比对照组高0.6，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养15h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高5.2，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为20％，S构型的e.e.值为90％。
实施例12
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为
反应温度为33℃，反应时间为51h，所用缩合试剂为N，N’-二异丙基碳酰二亚胺，产率：38％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.37(q，2H)，1.54(t，2H)，1.63(t，2H)，3.66(s，3H)，3.76(q，2H)，3.84(t，2H)，4.01(dd，J＝4.52，12.2，1H)，4.16(dd，J＝2.12，9.96，1H)，4.27(t，1H)，4.34(t，1H)，4.45(s，1H)，5.99(d，J＝5.16，1H)，6.81(m，4H)，8.08(t，J＝7.32，1H)，8.72(d，J＝8.00，1H)，9.06(d，J＝6.16，1H)，9.22(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.8，162.7，150.7，149.7，148.3，144.7，142.2，136.2，130.9，130.6，129.3，124.0，123.9，115.7，114.5，89.6，80.1，73.1，71.2，68.7，66.8，57.9，3 1.9，30.3，24.2.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.61.
HRMS：calcd for C23H31N2O10P(M+H+)527.1734，found(M+H+)527.1714.
该化合物分子量526.17，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为8000L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α和JM109的OD600值分别比对照组高0.6和0.5，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高3.5，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为27％，S构型的e.e.值为94％。
实施例13
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于，所用的醇为反应时间为38h，吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶2∶10，体积比DMF∶Py＝1∶5，产率：21％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.37(q，2H)，1.57(t，2H)，1.64(q，2H)，3.78(q，2H)，3.87(t，2H)，4.05(dd，J＝4.52，11.56，1H)，4.20(dd，J＝4.32，12，1H)，4.3 1(m，1H)，4.38(t，1H)，4.48(s，1H)，6.05(d，J＝5.32，1H)，6.60(m，3H)，7.15(m，1H)，8.14(t，J＝7.2，1H)，8.78(d，J＝8.00，1H)，9.12(d，J＝6.12，1H)，9.28(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ167.5，162.4，148.4，144.8，142.2，136.3，133.2，133.1，131.0，113.1，110.3，110.1，104.7，104.5，102.4，89.7，89.6，80.2，73.2，71.0，68.8，66.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.64.
19F NMR(376MHz，D2O)：δ-111.5.
HRMS：calcd for C22H28FN2O9P(M+H+)515.1516，found(M+H+)515.1578.
该化合物分子量514.15，在214nm和266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为10000 L·mol-1·cm-1和27000，微红色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养4h后，添加类似物的大肠杆菌HB101和DH5α的OD600值分别比对照组高0.8和0.6，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养10h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高3.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为25％，S构型的e.e.值为89％。
实施例14
在25ml尖底烧瓶中，将0.035mmol和0.035mmol溶解于0.8ml混合溶剂(H2O：350μl，EtOH：200μl，t-BuOH：250μl，DMF：100μl)中，加入0.7mol/l硫酸铜溶液3μl，Cu粉0.0035mmol，20℃搅拌24h，减压除去溶剂，加入4ml水，二氯甲烷洗涤，水相反相硅胶柱层析，阴离子交换树脂(201×4，HCO2 -型)，冷冻干燥得白色固体。
将上述产物溶解于0.06ml甲醇中，降温到-5℃，加入7M的NH3的甲醇溶液10μl，混合物在-5℃下搅拌过夜，TLC检测直至反应进行完全，除去溶剂，反向硅胶柱层析，浓缩后，再经过阴离子交换树脂(201×4，HCO2 -型)，冷冻干燥得白色固体，产率：95％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ2.84(t，J＝5.92Hz，2H)，3.52(ddd，J＝1.84，4.64，11.88，1H)，3.70(ddd，J＝2.24，4.40，12，1H)，3.91(dd，J＝5.92，JHP＝11.84，2H)，4.10(dd，J＝2.48，4.76，1H)，4.15(t，J＝2.16，1H)，4.25(t，J＝5.16，1H)，5.35(s，2H)，5.93(d，J＝5.48，1H)，7.2(m，5H)，7.76(s，1H)，7.98(dd，J＝6.48，7.76，1H)，8.73(d，J＝8.12，1H)，8.94(d，J＝7.88，1H)，9.16(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ168.0，148.4，147.5，144.7，142.2，142.2，137.5，136.4，131.6，131.2，130.9，130.7，126.6，102.2，89.5，80.1，73.3，67.2，66.7，56.3，28.8.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.01.
HRMS：calcd for C22H27N5O8P(M+H+)520.1597，found(M+H+)520.1617.
该化合物分子量519.15，在265nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为7200L·mol-1·cm-1，淡黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，培养5h后，添加类似物的大肠杆菌HB101和LB21的OD600值分别比对照组高0.6和0.4，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c的OD600比对照组高3.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，加入2-苯丁酮0.005mmol，积分产率为22％，S构型的e.e.值为80％。
实施例15
同实施例14方法；与实施例14不同之处在于，所用的叠氮化物为
反应温度为30℃，反应时间为38h，用摩尔比为1∶1的Cu/CuSO4催化剂，
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶10∶0.5，混和溶剂为二甲基亚砜∶二氯甲烷∶水＝2∶3∶5，产率：92％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.35(m，2H)，1.68(m，2H)，2.15(t，2H)，2.77(t，2H)，3.70(ddd，J＝2.08，5.08，11.96，1H)，3.78-3.86(m，3H)，4.13-4.18(m，3H)，4.26(t，1H)，5.87(d，J＝5.24，1H)，6.92(m，1H)，7.10(d，5H)，7.64(s，1H)，7.94(t，J＝6.6，1H)，8.67(d，J＝8.12，1H)，8.89(d，J＝6.24，1H)，9.08(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ177.1，173.4，168.1，167.8，162.9，148.2，147.1，144.6，142.0，139.2，136.2，131.5，130.8，127.8，126.4，124.0，102.1，89.3，80.0，73.1，67.2，66.6，52.3，37.9，31.2，28.7，24.5.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.01.
HRMS：calcd for C26H33N6O9P(M+H+)605.2122，found(M+H+)605.2180.
该化合物分子量604.21，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6000L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α、BL21的OD600值分别比对照组高0.8和0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高2.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，积分产率为32％，S构型的e.e.值为96％。
实施例16
同实施例14方法；与实施例14不同之处在于，所用的叠氮化物为
反应温度为20℃，反应时间为13h，用摩尔比为5∶1的抗坏血酸钠/CuSO4催化剂，
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶4∶5，产率：89％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.48(m，2H)，1.80(m，2H)，2.31(t，2H)，2.86(t，2H)，3.80(dd，J＝3.72，10.6Hz，1H)，3.91-3.96(m，3H)，4.13-4.18(m，3H)，4.20(s，1H)，4.26-4.32(m，3H)，4.38(s，1H)，6.02(d，J＝5.24Hz，1H)，6.84-6.91(m，2H)，7.28(dd，J＝2.72，8.76Hz，1H)，7.31(s，1H)，8.09(t，J＝6.72，1H)，8.81(d，J＝8.12，1H)，9.05(d，J＝6.28，1H)，9.24(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ178.1，168.0，148.4，144.8，142.1，136.4，130.9，130.0，126.5，114.0，113.7，107.0，106.8，106.5，102.3，89.5，80.1，73.3，67.2，66.8，52.3，37.4，31.2，28.7，24.6.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.08.
19F NMR(376MHz，D2O)：δ-111.8，-118.9.
HRMS：calcd for C26H31F2N6O9P(M+H+)641.1930，found(M+H+)641.1981.
该化合物分子量640.19，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为9100L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养4h后，添加类似物的大肠杆菌HB101的OD600值比对照组高0.4，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母S288c和BY4741的OD600分别比对照组高5.8和6.0，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于加入2-苯丁酮0.005mmol，积分产率为29％，S构型的e.e.值为94％。
实施例17
同实施例14方法；与实施例14不同之处在于，所用的叠氮化物为
反应温度为10℃，反应时间为28h，用摩尔比为1∶1的Cu/CuSO4催化剂，
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶6∶15，产率：92％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.57(m，2H)，1.77(m，2H)，2.18(t，2H)，2.92(t，2H)，3.65，3.73(ddd，J＝2.08，5.08，11.96，1H)，3.91，4.03-4.26(m，3H)，4.36(m，3H)，5.87(d，J＝5.24，1H)，7.10，7.19，7.29，7.31，7.51，7.64，7.64(s，1H)，7.77，7.94(t，J＝6.6，1H)，8.67(d，J＝8.12，1H)，8.89(d，J＝6.24，1H)，9.08(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ173.0，168.1，167.8，162.9，148.2，147.1，144.6，142.0，139.2，136.2，133.9，133.5，132.6，131.5，130.8，128.6，127.8，126.5，126.4，124.3，102.1，89.9，81.0，76.1，68.2，66.6，52.3，42.4，37.9，36.2，27.4，24.5，23.2.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.21.
HRMS：calcd for C31H37N6O9P(M+H+)669.2413，found(M+H+)669.2373.
该化合物分子量668.63，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为6200L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α、BL21的OD600值分别比对照组高0.8和0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高2.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为31％，S构型的e.e.值为86％。
实施例18
同实施例14方法；与实施例14不同之处在于，所用的叠氮化物为
反应温度为26℃，反应时间为20h，用摩尔比为8∶1的抗坏血酸钠/CuSO4催化剂，
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶9∶20，混和溶剂为二甲基亚砜∶二氯甲烷∶水＝3∶2∶4产率：92％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.57(m，2H)，1.77(m，2H)，2.18(t，2H)，2.92(t，2H)，3.73(ddd，J＝2.1，5.1，11.3，1H)，3.38-3.96(m，3H)，4.23-4.1(m，3H)，4.28(t，1H)，5.67(d，J＝5.24，1H)，6.16，6.92(m，1H)，7.06，7.07，7.14(d，5H)，7.26，7.64(s，1H)，7.64(t，J＝6.6，1H)，8.27(d，J＝8.12，1H)，8.8(d，J＝6.24，1H)，9.1(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ173.0，168.1，167.8，162.9，148.2，147.1，144.6，142.8，142.0，139.2，136.2，131.5，130.8，129.3，128.3，127.8，126.4，124.0，102.1，89.3，80.0，73.1，67.2，66.6，52.3，51.8，37.9，36.5，31.2，30.5，28.7，24.5，23.2.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.12.
HRMS：calcd for C33H39N6O9P(M+H+)695.2531，found(M+H+)695.2473.
该化合物分子量694.67，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为8800L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养6h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α、BL21的OD600值分别比对照组高0.8和0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高2.6，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为27％，S构型的e.e.值为97％。
实施例19
同实施例14方法；与实施例14不同之处在于，所用的叠氮化物为
反应温度为14℃，反应时间为23h，用摩尔比为6∶1的Cu/CuSO4催化剂，叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1：8∶5，混和溶剂为二甲基亚砜∶N，N-二甲基甲酰胺∶水＝3∶2∶4产率：90％。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ1.57(m，2H)，1.77(m，2H)，2.29，2.65(t，2H)，2.77(t，2H)，2.92，3.65(ddd，J＝2.0，5.0，11.6，1H)，3.28-3.46(m，3H)，4.03-4.08(m，3H)，4.36(t，1H)，4.46(t，2H)，5.37(d，J＝5.24，1H)，6.72(m，1H)，7.12(d，2H)，7.36(s，1H)，7.48(s，1H)，7.64(s，1H)，7.94(t，J＝6.6，1H)，8.67(d，J＝8.12，1H)，8.89(d，J＝6.24，1H)，9.08(s，1H).
13C NMR(100MHz，D2O)：δ177.1，173.0，168.2，166.8，162.9，148.2，147.1，144.6，142.0，139.2，136.2，131.5，130.8，129.3，127.9，127.7，127.5，126.4，124.0，102.1，89.3，80.0，73.1，67.2，66.6，52.3，37.9，36.2，31.2，28.7，27.4，24.5，23.2.
31P NMR(160MHz，D2O)：δ0.04.
HRMS：calcd for C33H39N6O9P(M+H+)695.2522，found(M+H+)695.2580.
该化合物分子量694.67，在266nm处有紫外吸收，其摩尔消光系数为9000L·mol-1·cm-1，无色或微黄色糖浆状固体，极易吸收空气中的水分而变粘稠，且颜色变深，温度高于40℃半小时即分解，颜色逐渐变暗至黑色。
促进大肠杆菌生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养5h后，添加类似物的大肠杆菌DH5α、BL21的OD600值分别比对照组高0.8和0.7，表明类似物对大肠杆菌生长具有明显促进作用。
促进酿酒酵母生长实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于培养12h后，添加类似物的酿酒酵母BY4741的OD600比对照组高2.8，表明类似物对酿酒酵母生长具有促进作用。
作为马肝脱氢酶催化合成手性醇的辅因子实验
方法同实施例1，与实施例1不同之处在于积分产率为22％，S构型的e.e.值为86％。
其他含A或B结构的实施例见表一，其中R’＝-OH或
同实施例1方法；与实施例1不同之处在于如下表：
表一
其他含C或D结构的实施例见表二，其中R”＝-N3或同实施例14方法；与实施例14不同之处在于如下表：
表二
Claims (6)
1.一种NAD+类似物，其特征在于：其具有如下结构式：
结构式中烟酰胺单核苷酸为β-构型；核糖为D-构型；
与烟酰胺单核苷酸相连的R为C4-C15的烷基，或含有氧、氮、氯、溴或硫杂原子的C2-C10烷基，以下称之为A；
或R为以下称之为B，其中Ar1为芳香烃X＝CH2、O或S，n＝0-3；R1为卤素、C1-C5烷氧基、C1-C5烷巯基、C1-C5烷基氨基或C1-C5卤代烃基；
或R为
以下称之为C，其中Ar2为苯环或萘环，1＝0-2；
或R为
以下称之为D，其中Ar3为芳香环
R2为C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷硫基、C1-C5烷基酰氨基、C1-C5卤代烃基或卤素，各连接链中n＝0-10，m＝0-10，l＝0-2；卤素为F、Cl或Br。
2.一种NAD+类似物，其特征在于：其结构式如下，
3.一种NAD+类似物，其特征在于：其结构式如下，
4.按照权利要求1所述NAD+类似物，其特征在于：其结构式如下，
5.一种权利要求1所述NAD+类似物的合成方法，其特征在于：
1)按常规方法合成2’，3’-二乙酰基烟酰胺单核苷酸吡啶盐；
2)在有机溶剂中，加入步骤1)合成的吡啶盐、醇和缩合试剂，在-10～35℃搅拌反应16-72小时，再经脱乙酰化，得到含有R为A或B取代基的目标NAD+类似物；
其中2’，3’-二乙酰基烟酰胺单核苷酸吡啶盐、醇和缩合试剂的摩尔比例为1∶1～5∶1～20；有机溶剂为DMF和吡啶的混合溶剂，混合体积比例为1∶15；所用缩合试剂为N，N’-二环己基碳酰二亚胺(DCC)、N，N’-二异丙基碳酰二亚胺(DIC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDC)、新戊酰氯(PV-Cl)、1-金刚烷甲酰氯(AC-Cl)、氯磷酸二苯酯(DPCP)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)、2，4，6-三异丙基苯磺酰氯(TIPS-Cl)或1-对硝基苯磺酸基-1，2，4-三唑(TIPS-N)；所用醇为A-OH或B-OH；A和B为权利要求1所述A和B；
3)采用步骤2)的方法，当其选用的醇为
时，获取其中间产物
将此中间产物和叠氮化物溶解于混合溶剂中，加入催化剂，10～40℃搅拌反应12～48小时，经脱乙酰化，得到含有C或D取代基的目标NAD+类似物；
其中
叠氮化物和催化剂的摩尔比例为1∶1～10∶0.1～20，混合溶剂为甲醇，乙醇，丙醇，叔丁醇，正丁醇，二氯甲烷，氯仿，1，2-二氯乙烷，N，N-二甲基甲酰胺，甲酰胺，吡啶，乙腈，丙酮或二甲基亚砜和水的混合溶剂，其中水的体积占30～50％；催化剂为摩尔比为1～10∶1的Cu/CuSO4或摩尔比为1～10∶1的抗坏血酸钠/CuSO4，叠氮化合物中Ar2和Ar3依权利要求1所述。
6.一种权利要求1所述NAD+类似物的应用，其特征在于：权利要求1所述NAD+类似物作为微生物促进剂，用于促进微生物的生长；或者作为脱氢酶辅因子用于催化氧化还原反应。
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| WO2007012494A1 (de) * | 2005-07-28 | 2007-02-01 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Stabile nad/nadh-derivate |
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2008
- 2008-01-30 CN CN200810010285A patent/CN101497638B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2007012494A1 (de) * | 2005-07-28 | 2007-02-01 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Stabile nad/nadh-derivate |
Non-Patent Citations (3)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| CN101497638A (zh) | 2009-08-05 |
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