CN101481663A - 一次性选择性xv琼脂培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种一次性选择性XV琼脂培养基，其特征在于由以下配比的组份组成：牛肉浸出粉3g～5g，胰酪蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂15g，酵母粉5g，血红素15mg～20mg，辅酶I 15mg～20mg，万古霉素9mg，蒸馏水或去离子水1000ml。本发明的培养基省却了无菌脱纤羊血的采集过程，在制备过程中进行倾倒前直接加入配制好的X因子、V因子，避免了血球破裂过程中人工摇动的繁琐工作，并大大节省了制备时间，提高了生产效率。

Description

一次性选择性XV琼脂培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种微生物培养基，特别是涉及一种一次性选择性XV琼脂培养基及其制备方法。

背景技术

以往常用的用于嗜血杆菌的分离培养的培养基为巧克力琼脂培养基，其配制方法为：在基础培养基上于80-90℃左右无菌加入脱纤维羊血，使血球破裂释放出X因子(氯化血红素)和V因子(辅酶1)，以供嗜血杆菌的生长。此种培养基中的嗜血杆菌生长良好，但是，在其配制过程中存在着下列不足：

1.无菌脱纤维羊血的采集费时费力；2.血球的破坏过程中不同羊血的破坏程度不一样，很容易出现批间差；3.在配制过程中，血液稍有摇动不及时的地方，就会造成较大的颗粒，且摇动也容易出现大量的气泡，给倾倒造成很大麻烦。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种易于制备且性质稳定的一次性选择性XV琼脂培养基及其制备方法。

本发明的目的在通过以下技术方案实现的：

一种一次性选择性XV琼脂培养基，其由以下重量配比的组份制成：

牛肉浸出粉                 3～5

胰酪蛋白胨                 10

氯化钠                     5

琼脂                       15

酵母粉                     5

血红素                     0.015～0.020

辅酶I                      0.015～0.020

万古霉素                   0.009

蒸馏水或去离子水             1000

上述各组份的重量配比为：

牛肉浸出粉                  3

胰酪蛋白胨                  10

氯化钠                      5

琼脂                        15

酵母粉                      5

血红素                      0.015

辅酶I                       0.015

万古霉素                    0.009

蒸馏水或去离子水            1000

一种一次性选择性XV琼脂培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)培养基基础液的配制：按照配比将牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化钠和酵母粉放入蒸馏水或去离子水中，摇匀，使其完全溶解，并用1mol/L的NaOH调节溶液的pH值至7.2±0.2，然后加入琼脂粉，煮沸溶解，分装制成培养基基础液；

2)高压灭菌：将分装后的培养基基础液放入灭菌器内，在121±1℃灭菌15分钟；

3)培养基基础液降温：将灭菌后的培养基基础液取出，放至50～55℃的恒温水浴锅内摇匀，使培养基基础液的温度降至50～55℃；

4)加入营养物质和抑菌剂：按照组份配比趁热加入氯化血红素(X因子)；当降温至50～55℃时加入辅酶1(V因子)和万古霉素；摇匀。

5)倾注平板：在无菌条件下，将培养基基础液倾注到平皿内并使其凝固后的边缘厚度达5±1mm，倾注完毕后将平皿盖迅速盖好，并轻轻旋转平皿内的液体，以使平皿充盈均匀、减少气泡；然后将倾注有培养基基础液的平皿放在冷却桌上使其完全冷凝。

上述的制备方法中，所述的灭菌器为外加热高压蒸汽灭菌器或电力高压蒸汽灭菌器。

本发明的一次性选择性XV琼脂培养基省却了无菌脱纤羊血的采集过程，在倾倒前直接加入配制好的X因子、V因子，避免了血球破裂过程中人工摇动的繁琐工作，为整个培养基的制备过程节省了大量时间，提高了生产效率。另外，操作人员更易于掌握其配制方法。

木发明的一次性选择性XV琼脂培养基除涵盖了嗜血杆菌所需要的营养成分外，还加入万古霉素来抑制其他杂菌的生长，从而排除了干扰，更加有利于目的菌的生长。

此外，本发明的一次性选择性XV琼脂培养基还可以用于细菌学基因重组中用万古霉素抗性基因标记的细菌的选择、分离纯化。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明的一次性选择性XV琼脂培养基的制备方法进行说明。

实施例1

按照表1中的配比将牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化钠和酵母粉放入蒸馏水中，摇匀，使其完全溶解。溶解完全后先用pH试纸粗测一下溶液的pH值，然后用1mol/L的NaOH调节溶液的pH值为7.2。然后加入琼脂粉，煮沸溶解后，分装在在两个三角烧瓶中(500ml/瓶)，制成培养基基础液。

将分装后的培养基基础液放入外加热高压蒸汽灭菌器内，在121℃灭菌15分钟。灭菌结束后，关闭外加热高压蒸汽灭菌器的煤气开关，待灭菌器压力表指针降至零点时，打开盖上的固定旋扭并将盖打开，待热气完全散尽，工作人员戴上工作手套，将瓶装培养基基础液取出，放至52℃的恒温水浴锅内摇匀，使培养基基础液的温度降至52℃。

趁热向上述的培养基基础液中加入氯化血红素(X因子)；当降温至52℃时加入辅酶I(V因子)和万古霉素，摇匀。

在无菌条件下，将三角烧瓶内的培养基倒入平皿中，并使其凝固后的边缘厚度为4mm，倾注完毕后将平皿盖迅速盖好，并轻轻旋转平皿内液体，以使平皿充盈均匀、减少气泡。然后将盛有培养基的平皿放置冷却桌上，使其完全冷凝，制成本发明的XV琼脂培养基。

实施例2

按照表1中的配比将牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化钠和酵母粉放入去离子水中，摇匀，使其完全溶解。溶解完全后先用pH试纸粗测一下溶液的pH值，然后用1mol/LNaOH调节溶液的pH值为7.3。然后加入琼脂粉，煮沸溶解后，分装在三角烧瓶中，制成培养基基础液。

将分装后的培养基基础液放入电力高压蒸汽灭菌器内，在121℃灭菌15分钟。灭菌结束后，关闭电力高压蒸汽灭菌器的电源开关，待灭菌器压力表指针降至零点时，打开盖上的固定旋扭并将盖打开，待热气完全散尽，工作人员戴上工作手套，将瓶装培养基基础液取出，放至54℃的恒温水浴锅内摇匀，使培养基基础液的温度降至54℃。

趁热向上述的培养基基础液中加入氯化血红素(X因子)；当降温至54℃时加入辅酶I(V因子)和万古霉素，摇匀。

在无菌条件下，将三角烧瓶内的培养基倒入平皿中，并使其凝固后的边缘厚度达5mm，倾注完毕后将平皿盖迅速盖好，并轻轻旋转平皿内液体，以使平皿充盈均匀、减少气泡。然后将盛有培养基的平皿放置冷却桌上，使其完全冷凝，制成本发明的XV琼脂培养基。

在本发明的实施例中，使用的辅酶I(V因子)为50mg/10ml；使用的氯化血红素(X因子)为50mg/10ml；使用的万古霉素为90mg/10ml。

表1

 

各组份含量	牛肉浸出粉	胰酪蛋白胨	氯化钠	琼脂	酵母粉	血红素	辅酶I	万古霉素	蒸馏水/去离子水
										实施例1	3g	10g	5g	15g	5g	15mg	15mg	9mg	1000ml
实施例2	4g	10g	5g	15g	5g	17mg	17mg	9mg	1000ml

Claims (4)

1.一种一次性选择性XV琼脂培养基，其特征在于由以下重量配比的组份制成：

牛肉浸出粉              3～5

胰酪蛋白胨              10

氯化钠                  5

琼脂                    15

酵母粉                  5

血红素                  0.015～0.020

辅酶I                   0.015～0.020

万古霉素                0.009

蒸馏水或去离子水        1000。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于各组份的重量配比为：

牛肉浸出粉              3

胰酪蛋白胨              10

氯化钠                  5

琼脂                    15

酵母粉                  5

血红素                  0.015

辅酶I                   0.015

万古霉素                0.009

蒸馏水或去离子水        1000。

3.一种一次性选择性XV琼脂培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)培养基基础液的配制：按照配比将牛肉浸出粉、胰酪蛋白胨、氯化钠和酵母粉放入蒸馏水或去离子水中，摇匀，使其完全溶解，并用1mol/L的NaOH调节溶液的pH值至7.2±0.2，然后加入琼脂粉，煮沸溶解，分装制成培养基基础液；

2)高压灭菌：将分装后的培养基基础液放入灭菌器内，在121±1℃灭菌15分钟；

3)培养基基础液降温：将灭菌后的培养基基础液取出，放至50～55℃的恒温水浴锅内摇匀，使培养基基础液的温度降至50～55℃；

4)加入营养物质和抑菌剂：按照组份配比趁热加入氯化血红素(X因子)；当降温至50～55℃时加入辅酶I(V因子)和万古霉素；摇匀；

5)倾注平板：在无菌条件下，将培养基基础液倾注到平皿内并使其凝固后的边缘厚度达5±1mm，倾注完毕后将平皿盖迅速盖好，并轻轻旋转平皿内的液体，以使平皿充盈均匀、减少气泡；然后将倾注有培养基基础液的平皿放在冷却桌上使其完全冷凝。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的灭菌器为外加热高压蒸汽灭菌器或电力高压蒸汽灭菌器。