CN108434779A - 一种五倍子提取物的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种五倍子提取物的制备方法及应用。具体的，将五倍子粉碎成粉末，分散在盐酸溶液中，利用超声波的空化作用加速植物有效成分溶出；以盐酸浓度、溶剂倍量、提取时间和提取频率为单因子水平开展提取实验，并采用正交表进行优选。随后进行五倍子提取物的浓度梯度的制备，形成不同浓度的五倍子抗菌剂。采用K‑B纸片琼脂扩散法观察不同浓度的五倍子抗菌剂对副溶血弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌等弧菌的抑制效果。本发明抑菌效果最佳的五倍子抗菌剂，可最大限度地抑制副溶血弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌等水产致病菌的生长，从而大幅度提高南美白对虾及一些其他水生产物的产量，为养殖者带来更大的经济效益，并进一步促进我国的经济发展。

Description

一种五倍子提取物的制备方法及应用

技术领域

本发明涉及植物提取物、微生物培养和水产养殖等技术领域，具体涉及一种五倍子提取物的制备方法及应用。

背景技术

五倍子主要成分单宁酸(Tannin Acid)，又称丹宁、鞣酸或鞣质。体外实验表明，五倍子提取物对金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌以及伤寒杆菌、副伤寒杆菌、痢疾杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、绿脓杆菌等均有明显的抑菌或杀菌作用。临床研究表明五倍子提取物佐以庆大霉素、甲硝哇能增强杀菌效果，特别对铜绿假单抱菌、厌氧菌的作用尤为显著，五倍子提取物对羊毛样抱子菌等真菌也有较强的抑制作用。由于五倍子提取物在抑菌方面的重要作用，五倍子提取物的制备方法成为研究的热点。

现有的五倍子提取物的制备方法都是采用加水浸泡、加热回流提取，这样直接加热水提的操作会导致部分有效成分无法提取出来，或有效成分被破坏。

凡纳滨对虾，又名南美白对虾，自从其被引进以来就深受广大对虾养殖业者的喜爱，从南到北、从海水到淡水均可以养殖，养殖规模就迅速扩大，短短几年时间就发展成我国养殖面积最广的对虾。然而，近年来随着养殖规模的不断扩大和放养密度的增加，由细菌和病毒性疾病引发的病害也日趋严重，特别是弧菌的影响，给养殖者造成了严重的经济损失，已成为当前限制凡纳滨对虾养殖业持续发展的瓶颈问题。目前对于凡纳滨对虾传染性疾病的防治主要采用抗生素、擴胺类、喹诺酮类等化学合成类药物，这些药物在长期的使用过程中带来了抗药性、药物残留和环境污染等一系列问题，许多国家和地区先后用立法的形式做出禁止或限制在水产养殖饲料中添加化学合成药物的决定。

植物药具有天然、环保、无药物残留、对病原微生物不易产生抗药性、毒副作用较小等优点，许多植物药不仅可以直接抑制杀灭水产病原微生物，还对水产动物的免疫能力具有正向调节作用，也能提高水产动物的抗应激能力，植物药的开发和利用受到国内外学者的广泛关注，对饲料工业、水产养殖业以及环境保护与人类健康都具有重大的现实意义。

因此，研究新的控制水产动物病害的植物药或饲料添加剂成为当务之急。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种五倍子提取物的制备方法及应用。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种五倍子提取物的制备方法，包括如下步骤：

将五倍子洗净、干燥、粉碎后，得到五倍子粉末；将五倍子粉末和0.1-6mol/L盐酸溶液混匀，然后在3-5℃下超声浸提，离心、抽滤得五倍子提取液，将五倍子提取液浓缩、干燥得固态五倍子提取物。

本发明制备的五倍子提取物标准品的高效液相色谱图如图1所示。

上述的方法，所述盐酸溶液的浓度为0.1-6mol/L。

准确称取五倍子粉末1.00g，一共称取7份，将称好的7份五倍子粉末分别置于0.1mol/L HCL、0.2mol/L HCL、0.5mol/L HCL、1mol/L HCL、2mol/L HCL、4mol/L HCL、6mol/L HCL溶液中，取相同的溶剂倍量(40倍体积)，混合搅拌均匀，放入超声波破碎仪中，烧杯外需用冰块冷却降温，因超声波提取过程会释放热量，为避免五倍子提取物的分解，在使用超声波仪器时，需用冰块对混合溶液进行降温处理。超声波提取时间设置为20分钟，超声波提取功率设置为280W，将五倍子粉末与盐酸的混合溶液置于超声波仪器中提取，然后将提取液在12000rpm、5min条件下离心后，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，再吸取1mL滤液于EP管中并加入适量甲醇溶液(50％)定容至10mL，摇匀，再用锡箔纸包裹后，最后用高效液相色谱法测定单宁酸含量，重复多次，如图2所示。经反复实验，确定最佳溶剂浓度为1mol/L。

上述的方法，优选的，所述五倍子粉末与盐酸溶液的固液比为(1g：10mL)-(1g：50mL)。

准确称取五倍子粉末1.00g，一共称取5份，再从1mol/L HCL溶液中取出五倍子粉末10倍量的、20倍量的、30倍量的、40倍量的、50倍量的HCL溶液于烧杯中。将称好的5份五倍子粉末分别置于所取的不同倍量所盛装1mol/L HCL溶液的烧杯中，混合后搅拌均匀，放入超声波破碎仪中，烧杯外需用冰块冷却降温，因超声波提取过程会释放热量，为避免五倍子提取物的分解，在使用超声波仪器时，需用冰块对混合溶液进行降温处理。超声波提取时间设置为20分钟，超声波提取功率设置为280W，将五倍子粉末与盐酸的混合溶液置于超声波仪器中提取，然后将提取液在12000rpm、5min条件下离心后，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，再吸取1mL滤液于EP管中并加入适量甲醇溶液(50％)定容至10mL，摇匀，再用锡箔纸包裹后，最后用高效液相色谱法测定其单宁酸含量，重复多次，如图3所示。经反复实验，确定最佳溶剂倍量为20倍。

上述的方法，优选的，所述超声浸提在超声波破碎仪中进行，利用超声对细胞的空化效应和机械效应，使得细胞的破碎效率更高，有效成分的得率也更高。

上述的方法，优选的，所述超声波破碎仪的提取时间为1-40min。

准确称取五倍子粉末1.00g，一共称取7份，再取五倍子粉末20倍量的1mol/L HCL溶液7份。将称好的7份五倍子粉末分别置于7份量取好的1mol/L HCL溶液中，混合搅拌均匀，放入超声波破碎仪中，烧杯外需用冰块冷却降温，因超声波提取过程会释放热量，为避免五倍子提取物的分解，在使用超声波仪器时，需用冰块对混合溶液进行降温处理。超声波提取功率设置为280W，7份五倍子粉末与1mol/L HCL溶液混合液的超声波提取时间分别设置为10min、20min、30min、40min、5min、2min、1min，将五倍子粉末与盐酸的混合溶液置于超声波仪器中提取，然后将提取液在12000rpm、5min条件下离心后，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，再吸取1mL滤液于EP管中并加入适量甲醇溶液(50％)定容至10mL，摇匀，再用锡箔纸包裹后，最后用高效液相色谱法测定其单宁酸含量，重复多次，如图4所示。经反复实验，确定最佳超声波提取时间为5分钟。

上述的方法，优选的，所述超声波破碎仪的提取频率为40-280W。

准确称取五倍子粉末1.00g，一共称取7份，再取五倍子粉末20倍量的1mol/L HCL溶液7份。将称好的7份五倍子粉末分别置于7份量取好的1mol/L HCL溶液中，混合搅拌均匀，放入超声波破碎仪中，烧杯外需用冰块冷却降温，因超声波提取过程会释放热量，为避免五倍子提取物的分解，在使用超声波仪器时，需用冰块对混合溶液进行降温处理。超声波提取时间设置为5分钟，7份五倍子粉末与1mol/L HCL溶液混合液的超声波提取功率分别设置为280W、240W、200W、160W、120W、80W、40W。将五倍子粉末与盐酸的混合溶液置于超声波仪器中提取，然后将提取液在12000rpm、5min条件下离心后，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，再吸取1mL滤液于EP管中并加入适量甲醇溶液(50％)定容至10mL，摇匀，再用锡箔纸包裹后，最后用高效液相色谱法测定其单宁酸含量，重复多次。如图5所示，经反复实验，确定最佳超声波提取功率为240W。

经单因子实验确定出五倍子提取物的最佳提取溶剂(HCL)浓度为1mol/L，最佳提取溶剂倍量为20倍，最佳超声波提取时间为5分钟，最佳超声波提取功率为240W。在单因素试验的基础上，对五倍子提取物提取率影响最大的四个因素盐酸浓度、溶剂倍量、提取时间和提取频率进行了正交优化。正交实验设计：试验采用正交表进行五倍子提取物的最佳提取工艺条件的优选，选用盐酸浓度、溶剂倍量、提取时间和提取频率4个因素，在3个水平进行正交实验设计，如表1所示。正交实验结果，如表2所示。

表1正交实验设计表

表2正交实验结果

由表2可以看出，实验二条件为：溶剂倍量为10倍，溶剂浓度为1mol/L，超声波提取时间为5min，超声波功率为240W时对应的峰面积数值最大，为2382737.50。实验一和实验三测出的峰面积大小与实验二接近，实验一溶剂倍量为10倍，溶剂浓度为0.5mol/L，超声波提取时间为1min，超声波功率为40W，测出的峰面积大小为2313000.83。实验三溶剂倍量为10倍，溶剂浓度为2mol/L，超声波提取时间为10min，超声波功率为280W，测出的峰面积大小为2246633.73。正交实验结果各组对照如图6所示。

因此，由正交实验结果所得：最佳正交数据如下盐酸浓度为1mol/L，10倍HCL溶解，超声波时间5min，超声波频率240W。

上述的方法，优选的，所述浓缩在旋转蒸发仪中进行，旋转蒸发仪在抽负压的同时水浴恒温加热，液体样品的旋转在蒸发瓶内表面形成一层液体薄膜，受热面积大，加快蒸发速率；蒸发温度为55～60℃，避免温度过高五倍子有效成分受热分解，温度过低蒸发浓缩速度过慢。

上述的方法，优选的，所述五倍子提取液浓缩至浓度为1-2g/mL，便于以后使用不同五倍子提取物浓度的计算。

上述的方法，优选的，所述干燥为冷冻干燥，冷冻干燥的时间为12h～24h。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述制备方法制备得到的五倍子提取物在防治南美白对虾弧菌病害中的应用。

优选的，所述弧菌为副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌中的至少一种。

优选的，所述五倍子提取物在防治南美白对虾副溶血弧菌和创伤弧菌中应用时，将五倍子提取物配制成浓度范围为0.125g/mL～0.5g/mL的水溶液；所述五倍子提取物在防治南美白对虾溶藻弧菌中应用时，将五倍子提取物配制成浓度范围为0.25g/mL～1g/mL的水溶液。

菌种的活化、培养：

将副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的活化菌种分别加入制备好的适合各个菌生长的液体培养基中制成菌悬液，将所制成的菌悬液进行平板涂布培养，为下一步体外抑菌试验做准备；

体外抑制弧菌实验：

进行五倍子提取物的浓度梯度的制备，形成浓度为1g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL、0.125g/mL、0.0625g/mL、0.03125g/mL的水溶液。选择目前水产养殖中最常见的三种弧菌进行抑菌圈试验，三种弧菌分别是副溶血弧菌、溶澡弧菌、创伤弧菌。使用上述浓度的五倍子提取物水溶液做三种菌的抑菌试验，30℃的恒温培养箱中培养24h-48h后，测定抑菌圈直径，结果见表3-5。

表3不同浓度的五倍子提取物水溶液对副溶血弧菌的抑菌作用

由上表3可知，五倍子提取物的水溶液对副溶血弧菌的抑菌作用最适浓度范围是0.125g/mL～0.5g/mL。

表4不同浓度的五倍子提取物水溶液对创伤弧菌的抑菌作用

由上表4可知，五倍子提取物的水溶液对创伤弧菌的抑菌作用最适浓度范围是0.125g/mL～0.5g/mL。

表5不同浓度的五倍子提取物水溶液对溶藻性弧菌的抑菌作用

由上表5可知，五倍子提取物的水溶液对溶藻性弧菌的抑菌作用最适浓度范围是0.25g/mL～1g/mL。

养殖应用效果研究：

用五倍子提取物分别配制成五倍子提取物含量为0.5％、1％、2％的水溶液，分别将等量上述配置好的溶液喷洒在南美白对虾饲料上，并用此饲料分别喂养不同鱼缸中的南美白对虾。然后用浓度为10^8cfu/mL的副溶血弧菌去感染南美白对虾，观察并记录实验虾的死亡时间和死亡数量。

五倍子提取物含量为0.5％、1％、2％的水溶液配制成的饲料投喂5天的效果：

南美白对虾连续喂食5天的五倍子提取物饲料所产生的抑菌效果如下表6所示。

表6不同浓度对副溶血弧菌的抑制试验表(投喂5天)

注：“+”代表对虾活动活跃，随着“+”的增多表示活动越活跃

五倍子提取物含量为0.5％、1％、2％的水溶液配制成的饲料投喂10天的效果：

连续喂食10天的五倍子提取物饲料所产生的抑菌效果如下表7所示。

表7不同浓度对副溶血弧菌的抑制试验表(投喂10天)

注：“+”代表对虾活动活跃，随着“+”的增多表示活动越活跃

本发明利用酸提法制备五倍子提取物，冻干成粉末，使用时再将其配制成水溶液，而且通过实验，我们得到的结论如下：各种浓度的五倍子提取物水溶液中，浓度为1％的五倍子提取物的弧菌抑制效果明显；五倍子提取物的抑菌效果与其浓度呈正比关系(在浓度0.03125g/mL-1.0000g/mL范围内)：随着五倍子提取物浓度越高，对弧菌的抑制作用越大。

本发明的有益效果：

本发明采用盐酸溶剂作为浸提剂、低温提取，即能高效提取五倍子的有效成分，又能保护其成分的最大活性，避免因加热对有效成分的破坏。五倍子提取物对弧菌有明显的抑菌或杀菌作用。由单因子实验和正交试验所提取的最佳条件下的五倍子提取物，可最大限度地抑制副溶血弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌等水产致病菌的生长，从而大幅度提高南美白对虾及一些其他水生产物的产量，为养殖者带来更大的经济效益，并进一步促进我国的经济发展。

相比于现有技术，本发明具有以下优点：

(1)本发明超声波提取过程在低温下进行，避免因加热对有效成分的破坏；

(2)本发明选择盐酸作为浸提剂，盐酸溶液能很好的溶解五倍子的有效成分，并且不破坏其结构。本发明采用0.1-6mol/L低浓度的盐酸提取，其原理为“相似相溶”，五倍子有效成分呈酸性，可以更大限度的溶解于低浓度盐酸中，具有很好的提取效果；

(3)本发明超声波功率适当，既能提取充分，又能够保证五倍子中有效成分的生理活性；

(4)本发明盐酸用量少，降低能耗，同时具有良好的提取效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明制备的五倍子提取物标准品的高效液相色谱图。

图2为本发明制备五倍子提取物的单因子实验中的最佳盐酸溶剂浓度的确定关系图，根据高效液相图原理，峰面积越大所在的盐酸溶剂浓度提取效果越好。

图3为本发明制备五倍子提取物的单因子实验中的最佳盐酸溶剂倍量的确定关系图，根据高效液相图原理，峰面积越大所在的盐酸溶剂倍量提取效果越好。

图4为本发明制备五倍子提取物的单因子实验中的最佳超声波提取时间的确定关系图，根据高效液相图原理，峰面积越大所在的超声波提取时间效果越好。

图5为本发明制备五倍子提取物的单因子实验中的最佳超声波提取功率的确定关系图，根据高效液相图原理，峰面积越大所在的超声波提取功率效果越好。

图6为本发明制备五倍子提取物关于选用盐酸浓度、溶剂倍量、提取时间和提取频率4个因素，在3个水平进行正交实验的结果图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。

除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。

除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。

实施例1：

实验室试验

1.五倍子有效成分的提取

步骤1、将五倍子放在洁净的盆子里，用清水冲洗干净，放进恒温干燥箱中干燥30分钟，待五倍子里面的水分完全蒸发后再拿出。将干燥的五倍子放入中药粉碎机中，粉碎，取出五倍子粉末置于干燥洁净的烧杯中。

步骤2、称量25g五倍子粉末置于500mL的烧杯中，加入250mL的1mol/L的HCL，用玻璃棒搅拌混匀。放入超声波破碎仪中，在烧杯底部放入冰块置于烧杯壁外，关好超声波破碎仪门。调节频率为240W，时间5min，开始破碎。

步骤3、将滤纸平铺在过滤器上，沾上少量水，使其紧密贴合，安装在抽滤瓶上，连接好真空泵。将上述破碎后的液体离心后，取上清液缓慢倒入过滤器，打开真空泵，进行抽滤。弃滤渣，留五倍子提取液。

步骤4、将五倍子提取液倒入旋转蒸发仪的圆形烧瓶中，连接好真空泵，检查每个连接部位的紧密情况。在水浴锅中加入冷水，使冷水没过圆形烧瓶里五倍子提取液的最高面。调节温度为60℃，开启真空泵，浓缩至25mL，得到五倍子浓缩液(1g/mL)。

步骤5、将五倍子浓缩液收集到50mL的烧杯中，用保鲜膜把烧杯口密封，将其放入真空冷冻干燥器中，12h后，五倍子浓缩液里的水分蒸发完成取出，得固态五倍子提取物。将固态五倍子提取物用研钵研碎后，得到五倍子提取物粉末，将其倒入到干净的塑料封口袋中，置于干燥的环境的保存。

2.培养基的制作

2.1培养基的制作

2.2平板培养基制作：取灭菌的培养皿，将灭菌完成的固体培养基趁热倒入培养皿，待凝固后4℃冰箱保存备用。

3.弧菌的菌种活化及扩大培养

步骤1、弧菌的活化：超净台打开紫外杀菌30min后，将弧菌从冰箱中拿出，在超净工作台中在酒精灯上方用接种棒粘取少量菌液接种到液体培养基中，封口放入在37℃摇床培养箱中培养过夜。

步骤2、次日，将过夜培养的弧菌用平板划线法接种到培养皿中，重复三个平行。

步骤3、次日，弧菌扩大培养至液体培养基中备用。

4.制备浓度梯度的五倍子提取物水溶液

步骤1、取6支已灭菌好的10mL的EP管，编号为1、2、3、4、5、6。

步骤2、取不同重量的五倍子提取物。质量分别是1g、0.5g、0.25g、0.125g、0.0625g、0.03125g。

步骤3、将已称量好的不同质量的五倍子提取物倒入EP管中，用移液枪向每个EP管中加入1mL无菌水。颠倒摇匀，配成1g/mL、0.5g/mL、0.25g/mL、0.125g/mL、0.0625g/mL、0.03125g/mL水溶液。

步骤4、将已配置好的五倍子提取物水溶液做好标记，备用。

5.抑菌圈实验

选择目前水产养殖中最常见的三种弧菌进行抑菌圈试验，三种弧菌分别是副溶血弧菌、溶澡弧菌、创伤弧菌。

步骤1、取36个已灭菌的平板，在超净工作台上，将已经配置好的固体培养基倒入平板上。

步骤2、等平板上的培养基凝固后，从活化好的菌液锥形瓶中取50ul的弧菌菌液于10mL的EP管中加入5mL的无菌水，摇匀。

步骤3、用10ul的移液枪吸取稀释的菌液于平板上，用平板涂布器涂好平板。

步骤4、用镊子夹取抑菌圈放入平板中央，用10ul的移液枪吸取不同浓度的五倍子乙醇提取物水溶液滴加在抑菌圈上(每个浓度三个板)，用封口膜封好。

步骤5、同理用10ul的移液枪吸取不同浓度的五倍子水提取物水溶液滴加在抑菌圈上(每个浓度三个板)，用封口膜封好。

步骤6、将所有平板做好标记后放入30℃的恒温培养箱中培养24h-48h，测定抑菌圈直径，结果见表8-10。

表8不同浓度的五倍子提取物水溶液对副溶血弧菌的抑菌作用

表9不同浓度的五倍子提取物水溶液对创伤弧菌的抑菌作用

表10不同浓度的五倍子提取物水溶液对溶藻性弧菌的抑菌作用

养殖应用

用五倍子提取物制成五倍子提取物含量为1％的水溶液，将上述配置好的溶液喷洒在南美白对虾饲料上，并用此饲料分别喂养1、2、3、4号鱼缸中的南美白对虾。然后用浓度为10^8cfu/mL的副溶血弧菌去感染南美白对虾，观察并记录实验虾的死亡时间和死亡数量。

五倍子水提取物含量为1％溶液配制成的饲料投喂5天的效果：

南美白对虾连续喂食5天的五倍子提取物饲料所产生的抑菌效果如下表11所示。

表11不同浓度对副溶血弧菌的抑制试验表(投喂5天)

注：“+”代表对虾活动活跃，随着“+”的增多表示活动越活跃

由表11可得，在养殖5天后，用五倍子提取物粉末配置成含量为1％的溶液，再混入饲料中投喂南美白对虾的抑菌效果相对较好。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种五倍子提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将五倍子洗净、干燥、粉碎后，得到五倍子粉末；将五倍子粉末和0.1-6mol/L盐酸溶液混匀，然后在3-5℃下超声浸提，离心、抽滤得五倍子提取液，将五倍子提取液浓缩、干燥得固态五倍子提取物。

2.根据权利要求1所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述五倍子粉末与盐酸溶液的固液比为(1g：10mL)-(1g：50mL)。

3.根据权利要求1所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述超声浸提在超声波破碎仪中进行；所述超声波破碎仪的提取时间为1-40min；所述超声波破碎仪的提取频率为40-280W。

4.根据权利要求1所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述盐酸的浓度为1mol/L，所述五倍子粉末与盐酸溶液的固液比为1g：20mL，超声波提取时间为5分钟，超声波提取功率为240W。

5.根据权利要求1-4任一项所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述浓缩在旋转蒸发仪中进行，蒸发温度为55-60℃。

6.根据权利要求1-4任一项所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述五倍子提取液浓缩至浓度为1-2g/mL。

7.根据权利要求1-4任一项所述的五倍子提取物的制备方法，其特征在于：所述干燥为冷冻干燥，冷冻干燥的时间为12h-24h。

8.一种如权利要求1-4任一项所述制备方法制备得到的五倍子提取物在防治南美白对虾弧菌病害中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述弧菌为副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述五倍子提取物在防治南美白对虾副溶血弧菌和创伤弧菌中应用时，将五倍子提取物配制成浓度范围为0.125g/mL～0.5g/mL的水溶液；

所述五倍子提取物在防治南美白对虾溶藻弧菌中应用时，将五倍子提取物配制成浓度范围为0.25g/mL～1g/mL的水溶液。