CN101475935A - cyp7lav1基因启动子 - Google Patents

Abstract

一种基因工程技术领域的cyp71av1基因启动子，该启动子序列具有序列表中SEQ ID NO.1的2100bp的核苷酸序列；该启动子能引导基因在植物腺毛中特异表达，能在利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中应用。本发明得到的cyp71av1基因启动子能引导基因在植物腺毛中特异表达，对利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种具有重要意义。

Description

cyp71av1基因启动子

技术领域

本发明涉及的是一种基因工程技术领域的基因启动子，具体是一种cyp71av1基因启动子。

背景技术

青蒿(Artemisia annua L.)是菊科蒿属的一年生草本植物。青蒿素是从其地上部分分离出的一种含有过氧桥结构的倍半萜内酯化合物，是目前世界上公认的最有效的治疗疟疾药物，特别是对脑型疟疾和抗氯喹疟疾更加有效。目前，世界卫生组织推荐的最有效的治疗疟疾的方法就是青蒿素联合疗法(ACTs)。另外，随着对青蒿素药理研究的逐步深入，科学家发现青蒿素及其衍生物还具有抗炎、抗血吸虫、抗肿瘤以及免疫调节的功能，可见青蒿素是一种极具潜力的天然药物。

目前青蒿素的主要来源是从青蒿植株的地上部分提取，然而青蒿中青蒿素的含量非常低，为0.01％-1％，低含量使得青蒿素的大规模商业化生产受到了限制。由于青蒿素结构复杂，人工合成难度大、产量低、成本高，因此人工生产缺乏可行性。也有人尝试用组织培养和细胞工程的方法来生产青蒿素，然而青蒿素在愈伤组织中的含量低于干重的0.1％，在芽中含量最高也只有干重的0.16％，大多数研究没有检测到青蒿素。因此，利用组织培养及细胞工程来生产青蒿素的也不具备可行性。DahuaChen等在《Plant Science》(植物科学)2000年155期179-185页发表了题为“Expression of a chimeric farnesyl diphosphate synthase gene in ArtemisiaannuaL.transgenic plants via Agrobacterium tumefaciens-mediatedtransformation”(通过农杆菌介导转化在青蒿植株中表达法尼基焦磷酸合酶基因)的论文，文中评述，通过过量表达法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphatesynthase，FPS)可在原有基础上提高青蒿素含量2倍-3倍，达到1％左右。

cyp71av1是从青蒿腺毛特异cDNA文库中分离出的一个编码细胞色素P450单加氧酶的基因。研究表明CYP71AV1催化从紫穗槐二烯到青蒿酸的三步氧化反应，在青蒿素生物合成途径中起到重要作用。随着青蒿素生物合成途径的逐渐清晰，采用基因工程手段提高青蒿中青蒿素含量具有非常大的潜力，例如过量表达代谢途径中的青蒿素合成途径关键酶编码基因被证实是一种提高青蒿素含量的有效方法。在青蒿基因工程研究中，目前所采用的启动子大多数是组成性的启动子，例如烟草花叶病毒35S启动子(CaMV35)。这种启动子能够驱动外源基因在所有的组织和器官中表达，可能会对植物的正常生长造成一定的负担和危害。由于腺毛不是植物生长所必需的，利用腺毛特异表达的启动子对植物的腺毛系统进行遗传操作不会对植物的生长发育造成危害。先前的研究表明cyp71av1基因在青蒿腺毛中大量表达，而在其它组织中表达量很低，这暗示cyp71av1的启动子很可能是腺毛特异表达的启动子。因此，克隆cyp71av1基因的启动子对利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种具有重要意义。另外，cyp71av1基因的表达极大地受ABA诱导。克隆其启动子将为研究cyp71av1基因的表达调控、分析启动子上的顺式作用元件以及寻找ABA应答相关的转录因子奠定基础。

经对现有技术文献的检索发现，尚未发现有与本发明的cyp71av1基因启动子序列相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种cyp71av1基因启动子。本发明的基因启动子能引导基因在转基因植物腺毛中特异表达。

本发明是通过以下技术方案实现的，

本发明涉及一种cyp71av1基因启动子，该启动子具有序列表中SEQ ID NO.1的2100bp的核苷酸序列。

所述cyp71av1基因启动子能引导基因在植物腺毛中特异表达。

所述cyp71av1基因启动子能在利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中应用。

本发明涉及的cyp71av1基因启动子得到的步骤具体如下：

步骤一，培养青蒿无菌苗；

步骤二，采用CTAB法提取青蒿总DNA；

步骤三，TAIL-PCR法克隆启动子基因组序列；

步骤四，Genomic DNA Walking法克隆启动子基因组序列；

步骤五，用RACE法确定转录起始位点；

步骤六，分析启动子上的顺式作用元件，确定cyp71av1基因启动子的类型；

步骤七，cyp71av1基因启动子5’系列缺失启动子的载体构建；

步骤八，根癌农杆菌介导cyp71av1基因启动子不同缺失的片段转化青蒿；

步骤九，cyp71av1基因启动子5’系列缺失启动子在青蒿中的GUS活性测定；

步骤十，启动子所引导的gus报告基因在植株中的表达部位的确定。

本发明的有益效果：

本发明克隆得到的cyp71av1基因启动子，可以特异性地在腺毛组织启动并高效表达外源基因，能应用于利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中。

本发明涉及的根癌农杆菌EHA105已在《黄亚丽，蒋细良，田云龙，郭萍，朱昌雄；根癌农杆菌介导的哈茨木霉菌遗传转化的研究，中国生物工程杂志，2008，28(3)：38-43》文献中公开。根癌农杆菌EHA105可通过公开市售的商业渠道取得，如可以从澳大利亚CAMBIA公司购得，菌株编号为Gambarl。

附图说明

图1为TAIL-PCR分离cyp71av1基因的5’侧翼区域；

图2为Genomic DNA Walking的电泳结果；

图3为通过5’-RACE确定转录起始位点；

图4为cyp71av1基因启动子区域可能的顺式作用元件；

图5为PCR扩增不同长度的启动子片段；

图6为5’端缺失启动子与gus基因融合的表达载体；

图7为利用cyp71av1基因启动子DEL0片段同gus基因融合的载体转化青蒿后，所获得的转基因青蒿中的GUS组织染色。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册见New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press的1989年版中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例

步骤一，培养青蒿无菌苗

青蒿种子用体积分数为75％的乙醇浸泡1min，再用20％(w/v)的NaClO浸泡20min后，无菌水冲洗3次-4次，用无菌吸水纸吸干表面水分，接种于无激素的MS固体培养基上，25℃、16h/8h(light/dark)光照培养，14天后即可获得青蒿无菌苗。

步骤二，CTAB法小量抽提青蒿叶片总DNA

取约100mg叶片于1.5mL EP管中，加入预热的CTAB buffer 600μL，buffer中含体积分数为2％的β-巯基乙醇，用研磨棒将叶片研磨至无明显颗粒；将EP管置于65℃水浴45min，使细胞充分裂解。待溶液冷却后，加入600μL的氯仿异戊醇混合溶液，混合溶液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1，然后混匀，静置5min，25℃、13000rpm离心10min；吸取上清液约500μL于新的干净的离心管中，加入等体积24:1(v/v)的氯仿异戊醇，混匀，静置5min，25℃、13000rpm离心10min；吸取上清液约400μL于新的干净的离心管中，加入一滴3M醋酸钠溶液，然后加入等体积预冷的异丙醇混匀，-20℃静置约30min后，25℃、13000rpm离心10min；弃上清液，用体积分数为75％的乙醇冲洗沉淀所得DNA一次，离心后，吸干上清，通风橱中晾干。将DNA溶解在40μL水中，-20℃保存。

步骤三，TAIL-PCR法克隆启动子基因组序列

TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR)是一种用来分离DNA侧翼序列的快速高效方法。本试验采用TAIL-PCR法来分离cyp71av1基因的5’端侧翼序列。根据基因的编码序列设计三个基因特异序列，另外设计4个随机简并引物(arbitrary degenerate，AD)，见表1。表1中，W＝A or T，S＝G or C，N＝A or T or G or C。第一轮TAIL-PCR以青蒿基因组DNA为模版，CYPGSP1为反向引物，4个AD分别作为正向引物。第一轮TAIL-PCR的产物稀释50倍作为第二轮TAIL-PCR的模版。第二轮TAIL-PCR用CYPRSP2作为反向引物，用四个AD分别作为正向引物。TAIL-PCR第二轮的产物稀释20倍用作第三轮TAIL-PCR的模版，用CYPRSP3作为反向引物，用四个AD分别作为正向引物。所有TAIL-PCR的程序列于表2。用1％的琼脂糖凝胶分析三轮TAIL-PCR的产物，回收特异DNA片段，连接到pMD18-T载体，用于测序。

表1 不对称PCR的引物

 

引物名称	引物序列(5’-3’)
		CYPGSP1	GGAAGGCTTTTTTTGGTGGATTTG
CYPGSP2	CGAGTAGCGAACTTGTAAACGAAC
		CYPGSP3	CAAGAGCAATGGAAGTGGTCAGT
AD1	TGWGNAGSANCASAGA
		AD2	AGWGNAGWANCAWAGG
AD3	NTCGASTWTSGWGTT
		AD4	WGTGNAGWANCANAGA

表2  不对称PCR的反应程序

如图1所示，采用4个随机简并引物分别和3个基因特异引物进行3轮PCR扩增，只有引物AD1能够扩增出约650bp的特异条带。测序结果表明，该片段与cyp71av1的mRNA有8bp的重叠序列。图1中，M：DNA Marker DL2000；1、2、3：引物AD1的三轮TAIL-PCR产物；4、5、6：引物AD2的三轮TAIL-PCR产物；7、8、9：引物AD3的三轮TAIL-PCR产物；10、11、12：引物AD4的三轮TAIL-PCR产物。为了进一步证明该片段是特异产物，根据它的序列设计了一个正向引物，该引物与基因特异引物CYPGSP1能够扩增出预期大小的片段，从而证明TAIL-PCR扩增出来的片段确实位于cyp71av1基因的5’侧翼区域。

步骤四，Genomic DNA Walking法克隆启动子基因组序列

由于TAIL-PCR只扩增出较小片段，本研究采用Genomic DNA Walking进一步分离cyp71av1基因5’侧翼序列。Genomic DNA Walking的方法参照基因组WalkerTMUniversal Kit(Clontech，638904)的说明书。具体步骤如下：

①基因组酶切

采用3种平末端的限制性内切酶DraI、EcoRV和StuI分别对青蒿基因组DNA进行酶切。反应体系如表3：

表3 限制性内切酶体系

 

Genomic DNA(0.1μg/μL)	25μL
		限制性内切酶(10units/μL)	8μL
限制性内切酶buffer	10μL
		ddH2O	57μL
总体积	100μL

将反应体系轻轻地混匀，于37℃水浴中反应过夜。

②加接头

三种酶切产物分别进行纯化，用20μL水溶解；取4μL酶切并纯化的DNA于新的EP管中，分别加入如下反应物：25μM的基因组Walker Adaptor 1.9μL，1.6μL10×Ligation Buffer，6units/μL的T4DNA Ligase 0.5μL。混匀后于16℃PCR仪中反应过夜；70℃水浴5min终止反应；加入72μL水后可用于PCR扩增。

③PCR扩增

为了提高产物的特异性，采用两轮巢式PCR扩增，Genomic DNA Walking中使用的引物列于表4。其中AP1和AP2是试剂盒中附带的引物，CYPPR1和CYPPR2是根据cyp71av1基因一段启动子的序列设计的特异引物。首轮PCR反应体系见表5，PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃ 25s，72℃ 3min，7个循环；94℃ 25s，67℃ 3min，32个循环；67℃延伸7min。

表4  Genomic DNA Walking引物

 

引物名称	引物序列(5’→3’)
		AP1	GTAATACGACTCACTATAGGGC
AP2	ACTATAGGGCACGCGTGGT
		CYPPR1	CCATCTTCGTTGGTCTTCAGTCTTCACAG
CYPPR2	CAAGCCACGCAAAACACAGAGAAAAT

表5 Genomic DNA Walking的反应体系

 

已加接头的DNA	0.5μL
		10×LA PCR Buffer II	2.5μL
dNTP(2.5mM each)	1.5μL
		MgCl2	1.5μL
AP1	0.5μL
		CYPPR1	0.5μL
LA Taq DNA聚合酶	0.2μL
		ddH2O	17.8μL
总体积	25μL

首轮PCR的产物稀释50用作第二轮PCR的模版，第二轮PCR的反应体系见表6，PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃ 25s，72℃ 3min，5个循环；94℃ 25s，67℃ 3min，20个循环；67℃延伸7min。PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，回收特异条带，连接到pMD18-T载体用于测序。结果表明，如图2所示，所有的第二轮PCR都有特异产物出现，长度从300bp到2kb以上。图2中，1和2：DraI酶切DNA的第一轮和第二轮PCR产物；3和4：StuI酶切DNA的第一轮和第二轮PCR产物；5和6：EcoRV酶切DNA的第一轮和第二轮PCR产物。由于没有必要分离非常大的DNA片段，因此选取图2中泳道2中的约1.6kb的片段进行回收，并测序。将该片段的序列与TAIL-PCR扩增片段的序列进行拼接，结果获得了cyp71av1基因上游约2kb的序列。

表6  Genomic DNA Walking的第二轮反应体系

步骤五，用RACE法确定转录起始位点

采用5’-RACE方法确定cyp71av1基因的转录起始位点。5’-RACE的具体步骤参照SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit的使用说明书。

第一链cDNA的合成按如下步骤进行：在微量离心管中加入下列试剂：1μg青蒿RNA，1μL5’-CDS primer A，1μL SMART II A oligo，加水至5μL，轻轻混匀；70℃水浴2min；在冰上冷却2min；轻微离心将反应物收集到管底，然后加入下列试剂：2μL5×First-Strand Buffer，1μL DTT20mM，1μL dNTP Mix10mM，1μL PowerScript Reverse Transcriptase，轻轻混匀；42℃反应1.5h；反应结束后加入100μL Tricine-EDTA Buffer；72℃加热7min，保存于-20℃备用。

合成cDNA第一链后，用10×Universal Primer A Mix，这种引物是由两种引物混合而成，分别是，

long primer：5’-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3’和

short primer：5’-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3’；

以及两个基因特异引物，分别是，

GSP1：5’-CTGGTCCTTGATCCCTTTCCCAAATG-3’和GSP2：5’-TCGGAGATGACACCACGATTGTTG-3’。

使用10×Universal Primer A Mix和GSP1进行PCR扩增，使用10×Universal PrimerA Mix和GSP2进行PCR扩增。

PCR反应体系为：

5μL10×exTaq Buffer，包括20mM Mg²⁺；浓度是2.5mM的3μL dNTP；5μLPrimer A Mix；1μL GSP1/GSP2；1μL cDNA；0.5μL浓度是5U/μL exTaq DNA聚合酶；加ddH2O到50μL。PCR反应条件为：94℃ 30s，72℃ 3min，5个循环；94℃ 30s，70℃ 30s，72℃ 3min，5个循环；94℃ 30s，68℃ 30s，72℃ 3min，25个循环。

PCR产物在1％的琼脂糖凝胶上电泳检测，回收目的片段，连接到pMD18-T载体上用于测序。

采用5’-RACE来确定cyp71av1基因的转录起始位点。合成第一链cDNA后，分别用GSP1和GSP2与Universal Primer A Mix进行PCR扩增，结果如图3所示。图3中，1：用GSP1对cDNA进行PCR扩增；2：用GSP2对cDNA进行PCR扩增；M：DNAMarker DL2000。用GSP1扩增出大约600bp的片段，用GSP2扩增出大约300bp的片段。由于GSP1和GSP2之间大约相距300bp，这两个PCR产物大小的差异正好证明它们特异扩增产物。回收600bp的片段，连接到pMD18-T载体。挑选4个独立的克隆进行测序。序列比对的结果的表明cyp71av1基因的转录起始位点位于起始密码子ATG上游18bp的地方，该碱基为A。该结果与普遍的观点一致，即认为A通常为转录起始位点的碱基。

步骤六，分析启动子上的顺式作用元件，确定cyp71av1基因启动子的类型

本发明中得到的cyp71av1基因启动子序列长2100bp。为了寻找启动子上的顺式作用元件，用PlantCARE(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Dlantcare/html/)对cyp71av1基因的启动子进行分析。在-25到-30nt的位置(转录起始位点定为+1)发现了一个可能的TATA box(ATATAA)，如图4所示，符合真核生物启动子的特征。图4中，数字代表每行第一个碱基相对于转录起始位点的位置；转录起始位点用阴影表示；翻译起始密码子用粗体表示；预测的TATA box、CAATbox以及其它重要的顺式作用元件均用方框标出，并在其下标出名字。在TATA box上游23个碱基的地方，即-53到-57nt的位置发现了一个可能的CAAT box。分析结果进一步证明转录起始位点位于起始密码子AGT上游18bp的地方。除了TATA box和CAAT box，还发现了一些其它重要的顺式作用元件：G-box(-126 to -131：CACGTT；-223 to -228：CACGTA)，box E(-142 to -152：ACCGATCAAG)，ACE(-281 to -290：GCTACGTACC)，ABRE(-503 to -508：TACGTG；-1202 to -1211：AGTACGAGGC)，TGACG-motif(-604 to -608：TGACG)和TGA-element(-1123 to -1128：AACGAC)。G-box发现于很多植物基因的启动子中，它是很多刺激响应启动子行使功能所必需的元件。它在植物启动子对光、无氧环境和植物激素的响应过程中起到重要的作用。另外，cyp71av1基因启动子上的其它元件也可以对一些刺激做出响应，例如ABRE在ABA应答中起作用，TGACT motif在MeJA应答中起作用，ACE在光应答中起作用。以上的分析结果表明，cyp71av1基因的启动子是一个诱导型的启动子，能受几种刺激物的诱导。

步骤七，cyp71av1基因启动子5’端系列缺失启动子的载体构建

①5’端缺失启动子与gus报告基因的融合

为了分析cyp71av1基因启动子上的顺式作用元件，将不同长度的5’端缺失启动子与gus报告基因融合，研究不同长度启动子驱动gus基因表达的强度。根据cyp71av1基因启动子的序列设计了9个不同的正向引物：DEL0-DEL8，以及一个反向引物DPR，见表7。为了方便表达载体的构建，所有的正向引物中都引入了EcoRI的酶切位点，反向引物中引入了NcoI的酶切位点。9个反向引物分别与正向引物配对扩增出启动子上不同长度的片段，结果如图5所示。图5中，M：DNAMarker DL2000；0-8：引物DEL0-DEL8的扩增产物。不同长度的启动子片段回收后，用EcoRI和NcoI双酶切，分别替换pCAMBIA1301载体上的CaMV 35S启动子，即可构建成不同长度5’端缺失启动子与gus基因融合的表达载体，这一系列表达载体的示意图如图6所示。图6中，0-8：分别用DEL0-DEL8扩增出来的不同长度启动子片段；TSS：转录起始位点。

表7 缺失片段的PCR引物

 

引物名称	引物序列(5’→3’)
		DPR(+31)	CTAGCCATGGGAGCAATGGAAGTGGTCAGT
DEL0(-2048)	CGGAATTCTGACTCATTTTCCTAGTGCC
		DEL1(-1551)	CGGAATTCTTGGGTTTTGGTTACCGACA
DEL2(-1155)	CGGAATTCTCGTAAAAAGCAGAAGGTCA
		DEL3(-882)	CGGAATTCCTTTCCTCCAAGCTTTAGTC
DEL4(-727)	CGGAATTCAAAGTCAAGAGTGGACTGCG
		DEL5(-556)	CGGAATTCATGCATGACATCTGCTTATT
DEL6(-419)	CGGAATTCTTCAGCTTATGTGCGTCTAT
		DEL7(-278)	CGGAATTCTCTGTGAAGACTGAAGACCA
DEL8(-138)	CGGAATTCTGACCGATTATGACCAAGGT

②含cyp71av1基因启动子不同缺失片段和gus基因融合的植物表达载体根癌农杆菌工程菌的获得。将含cyp71av1基因启动子不同缺失片段和gus基因融合的植物双元表达载体转入根癌农杆菌，并进行PCR验证。结果表明，含DEL0到DEL8基因植物双元表达载体已成功构建到根癌农杆菌菌株中。

步骤八，根癌农杆菌介导cyp71av1基因启动子不同缺失的片段转化青蒿

①外植体的预培养

青蒿种子用体积分数为75％的乙醇浸泡1min；再用20％(w/v)的NaClO浸泡20min；无菌水冲洗3-4次；用无菌吸水纸吸干表面水分；接种于无激素的MS，该MS培养基采用Murashige和Skoog在1962年发明的固体培养基，可以通过商业渠道获得；25℃、16小时的日光和8小时的黑夜培养，即可获得青蒿无菌苗。待苗长至5cm左右后，剪取无菌苗叶片外植体用于转化。

②农杆菌与外植体的共培养

将所述的叶片外植体，转到1/2MS和100μmol/L AS组成的共培养培养基中，滴加含活化好的所述含DEL0到DEL8基因植物双元表达载体的根癌农杆菌工程菌的1/2MS悬液，使外植体与菌液充分接触，28℃暗培养3d。以滴加在不带有目的基因的根癌农杆菌的1/2 MS液体培养基悬液的叶片外植体为对照。

③抗性再生植株的筛选

将所述的共培养3d的青蒿外植体转入到MS、0.5mg/L6-BA、0.05mg/L NAA、50mg/L Kan和500mg/L Cb组成的发芽筛选培养基上，于25℃、16小时的日光和8小时的黑暗中培养，每两周继代培养一次，经过2-3次继代后即可获得Kan抗性丛生芽。将生长良好的抗性丛生芽剪下转入1/2MS0和125mg/L Cb组成的生根培养基上培养至生根，从而获得Kan抗性再生青蒿植株。

④转基因青蒿植株的PCR检测

根据目的基因所在表达盒p35s-cyp71avl promoter-nos序列p35s和cyp71av1promoter分别设计正向引物设计和反向引物对gus基因进行检测。结果表明，利用所设计的PCR特异引物，能扩增出特异DNA片段，而以非转化青蒿基因组DNA为模板时，没有扩增出任何片段。

步骤九，cyp71av1基因启动子5’系列缺失启动子在青蒿中的GUS活性测定

测定GUS活性：100ul细胞提取液，在37℃水浴30-60分钟后，取100uL加入900uL的0.2M Na₂CO₃中，在Hoefer DyNA QuantTM仪器上测定GUS活性，以50nM的4-MU为标准。

转基因青蒿的gus报告基因表达分析的结果表明，cyp71av1的9个5’系列缺失启动子在双子叶植物青蒿中都有转录活性。其中，启动子片段DEL0的活性最高，约为35S启动子活性的两倍。从DEL0到DEL8活性逐渐降低。我们选定DEL0启动子片段为cyp71av1基本启动子，并作为主要研究对象做GUS组织染色分析。

步骤十，启动子所引导的gus报告基因在植株中的表达部位的确定

图7中，对PCR检测为阳性的青蒿植株，取其叶片进行GUS组织染色，结果表明，染色部位在青蒿的腺毛中，说明cyp71av1基因启动子在转基因青蒿中能够引导外源基因在腺毛中特异表达。由此可见，所克隆的cyp71av1基因启动子可用于利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种和产业化中。

序列表

SEQ ID NO.1

<110>上海交通大学

<120>cyp71av1基因启动子

<160>1

<170>PatentIn version 2.1

<210>1

<211>2100

<212>DNA

<213>青蒿(Artemisia annua L.)

<400>1

Claims (3)

1、一种cyp71avl基因启动子，其特征在于，具有序列表中SEQ ID NO.1的2100bp的核苷酸序列。

2、根据权利要求1所述的cyp71avl基因启动子，其特征是，该启动子能引导基因在植物腺毛中特异表达。

3、根据权利要求1所述的cyp71avl基因启动子的应用，其特征是，该启动子能在利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中应用。

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