CN101444476A

CN101444476A - 新微球和其生产方法

Info

Publication number: CN101444476A
Application number: CNA2008101818318A
Authority: CN
Inventors: 布藤智康; 山本一路; 荒井次一
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-12-26
Filing date: 2002-12-25
Publication date: 2009-06-03
Anticipated expiration: 2022-12-25
Also published as: CA2471521A1; CA2471521C; KR20040066191A; EP1466596B1; EP1466596B8; AU2002367105A1; US20050064039A1; WO2003055470A1; EP1466596A1; CN101444476B; EP1466596A4; CN1620285A; KR100994658B1

Abstract

提供一种生产具有改进的分散性能的微球的方法，其特征在于在通过水中干燥法生产微球时将渗透压调节剂加入乳液的外水相中。

Description

新微球和其生产方法

本申请是申请日为2002年12月25日的申请号为02828319.8的中国发明专利申请“新微球和其生产方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及具有改进的分散性能的微球、其生产方法、含该微球的缓释组合物等。

背景技术

例如，日本专利申请特开(JP-A)57-118512、57-150609和6-145046公开了一种使用生物降解的聚合物生产缓释W/O型乳液的方法。

缓释生物降解聚合物可用作生理活性物质包覆微球的基料等。该可生物降解聚合物的已知例子包括聚乳酸和乳酸与乙醇酸共聚物(例如JP-A11-269094)。

通过任何常规合成方法生产后，此类可生物降解的聚合物本身已使用。然而，已发现，这种合成后的未改性产品具有低含量的末端羧基，因此不太可能用作缓释基料。因此，已提出了包括如下步骤的一种方法：将具有高分子量的这种未改性可生物降解聚合物水解形成具有合适重均分子量的产品，然后将该产品用作缓释制剂的基料。

然而，水解并用水洗涤后获得的产品可容易造成初始破裂，并因此不适合用作缓释基料，尽管它具有合适的重均分子量和合适量的末端羧基。因此，目前需要对其进行改进。

JP-A7-97334公开了一种缓释制剂和其生产方法，其中该制剂包括生理活性肽或其盐和在其末端具有自由羧基的可生物降解聚合物。

然而，这些文献未提及改进微球分散性能的任何方法。

因此，本发明的一个目的是提供一种具有改进的分散性能的微球，其生产方法等等。

发明内容

本发明人已针对上述目的进行了积极研究，最终发现，在生产微球的水中(in-water)干燥法中，将渗透压调节剂加入外水相中可令人吃惊地改进微球产品的分散性能。基于此发现，本发明人进一步进行了研究，最终完成了本发明。

因此，本发明提供：

(1)一种生产具有改进的分散性能的微球的方法，该方法包括在通过水中干燥法生产微球时将渗透压调节剂加入外水相中；

(2)按照上述(1)的方法，其中分散性能改进到这样的程度：约400至约700mg微球可在低于两分钟内分散在1.5ml分散介质中；

(3)按照上述(1)的方法，其中将W/O/W型乳液用于水中干燥法中；

(4)按照上述(3)的方法，还包括将药物载体加入内水相中；

(5)按照上述(1)的方法，其中将O/W型乳液用于水中干燥法中；

(6)按照上述(1)的方法，其中将S/O/W型乳液用于水中干燥法中；

(7)一种生产微球的方法，包括将W/O型乳液分散在含渗透压调节剂的外水相中，其中W/O型乳液由含生理活性物质或其盐的内水相和含重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的溶液的油相组成；将该分散体进行水中干燥法干燥；

(8)按照上述(7)的方法，其中具有重均分子量5000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为约10％重量或更低；

(9)按照上述(7)的方法，其中具有重均分子量5000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为约5％重量或更低；

(10)按照上述(7)的方法，其中具有重均分子量3000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为约1.5％重量或更低；

(11)按照上述(7)的方法，其中具有重均分子量1000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为约0.1％重量或更低；

(12)按照上述(7)的方法，其中乳酸聚合物或其盐的重均分子量为15000至40000；

(13)按照上述(7)的方法，其中乳酸聚合物或其盐的重均分子量为17000至26000；

(14)按照上述(1)或(7)的方法，其中渗透压调节剂为醇、糖、氨基酸、肽、蛋白质、水溶性氨基酸的盐、或其衍生物或其混合物；

(15)按照上述(1)或(7)的方法，其中渗透压调节剂为甘露糖醇；

(16)按照上述(1)或(7)的方法，其中渗透压调节剂在外水相中的浓度是外水相渗透压为等渗氯化钠溶液渗透压的约1/50至约5倍时的浓度；

(17)按照上述(7)的方法，其中生理活性物质为水溶性生理活性物质；

(18)按照上述(7)的方法，其中生理活性物质为生理活性肽；

(19)按照上述(7)的方法，其中生理活性物质为LH-RH衍生物；

(20)按照上述(7)的方法，其中LH-RH衍生物为如下通式表示的肽：

5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y表示DLeu，DAla，DTrp，DSer(tBu)，D2Nal或DHis(ImBzl)，Z表示NH-C₂H₅或Gly-NH₂，或其盐；

(21)由按照上述(1)或(7)的方法生产的微球；

(22)一种缓释组合物，包括按照上述(21)的微球；

(23)按照上述(22)的缓释组合物，其用于预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌，或用于避孕；

(24)按照上述(22)的缓释组合物，其用于注射；

(25)按照上述(22)的缓释组合物，其进一步包括甘露糖醇；

(26)按照上述(22)的缓释组合物，其在总组合物中包括约70％重量或更多的微球；

(27)一种预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌的或避孕的方法，包括对哺乳动物服用有效量的按照上述(22)的缓释组合物；

(28)一种方法，包括将乳液在用于生产具有改进的分散性能的微球的外水相中在渗透压调节剂存在下进行水中干燥，其中乳液包含生理活性物质或其盐和聚合物；和

(29)一种渗透压调节剂在外水相中的用途，在该外水相中对含生理活性物质或其盐和聚合物的乳液进行水中干燥以生产具有改进的分散性能的微球。

本发明还提供：

(30)一种具有改进分散性能的微球，它包括生理活性物质或其盐和具有重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐，在该乳酸聚合物中，具有重均分子量500或更低的聚合物的含量低于约5％重量或更低；

(31)按照上述(30)的微球，其中约400至约700mg的含按照上述(30)的微球的缓释组合物可在低于2分钟中内分散于1.5ml分散体中；

(32)按照上述(30)的微球，其可在外水相中在渗透压调节剂存在下通过水中干燥生产；

(33)按照上述(32)的缓释组合物，其中水中干燥法为W/O/W型；

(34)按照上述(32)的缓释组合物，其中水中干燥法为O/W型；

(35)按照上述(32)的缓释组合物，其中水中干燥法为S/O/W型；

(36)按照上述(30)的方法，其通过将W/O型乳液分散在含渗透压的水相中，其中W/O型乳液包括含生理活性物质或其盐的内水相和含重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的油相，在该乳酸聚合物中具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量低于约5％重量或更低，并对该分散体施加水中干燥法；

(37)按照上述(30)的微球，其中具有重均分子量3000或更低的聚合物在乳酸聚合物中的含量为约1.5％重量或更低；

(38)按照上述(30)的微球，其中具有重均分子量1000或更低的聚合物在乳酸聚合物中的含量为约0.1％重量或更低；

(39)按照上述(30)的微球，其中乳酸聚合物具有重均分子量约15000至40000；

(40)按照上述(30)的微球，其中乳酸聚合物具有重均分子量约17000至26000；

(41)按照上述(30)的微球，其中生理活性物质为水溶性生理活性物质；

(42)按照上述(41)的微球，其中生理活性物质为生理活性肽；

(43)按照上述(41)的微球，其中生理活性物质为LH-RH衍生物；

(44)按照上述(43)的微球，其中LH-RH衍生物为由如下通式表示的肽：

5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y表示DLeu，DAla，DTrp，DSer(tBu)，D2Nal或DHis(ImBzl)，Z表示NH-C₂H₅或Gly-NH₂；

(45)按照上述(32)至(36)任何一项的微球，其中渗透压调节剂在外水相中的浓度是外水相渗透压为等渗氯化钠溶液渗透压的约1/50至约5倍时的浓度；

(46)按照上述(32)至(36)任何一项的微球，其中渗透压调节剂is醇、糖、氨基酸、肽、蛋白质、水溶性氨基酸的盐、或其衍生物或其混合物；

(47)按照上述(43)的微球，其中的微球，其中醇为多元醇或一元醇；

(48)按照上述(47)的微球，其中多元醇为甘油、阿糖醇、木糖醇、福寿糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、卫矛醇或其混合物；

(49)按照上述(47)的微球，其中一元醇为甲醇、乙醇、异丙醇、或其混合物；

(50)按照上述(46)的微球，糖为单糖、二糖、寡糖、或其衍生物或其混合物；

(51)按照上述(50)的微球，其中单糖为树胶醛糖、木糖、核糖、2-脱氧核糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖或海藻糖；

(52)按照上述(50)的微球，其中二糖为麦芽糖、纤维二糖、α，α-海藻糖、乳糖或蔗糖；

(53)按照上述(50)的微球，其中寡糖为麦芽三糖、蜜三糖或水苏糖；

(54)按照上述(50)的微球，其中单糖、二糖或寡糖的衍生物为葡萄糖胺、半乳糖胺、葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸；

(55)按照上述(46)的微球，其中氨基酸为氨基乙酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸；

(56)按照上述(46)的微球，其中水溶性氨基酸的盐为氨基乙酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸的酸或碱金属盐；

(57)按照上述(32)至(36)任何一项的微球，其中渗透压调节剂为甘露糖醇；

(58)按照上述(30)的微球，还包括药物载体；

(59)按照上述(48)的微球，其中药物载体为清蛋白、明胶、水杨酸、柠檬酸或乙二胺四乙酸钠；

(60)按照上述(31的微球，其中分散介质为分散剂、防腐剂、等渗剂或植物油；

(61)一种生产具有改进的分散性能的微球的方法，包括在外水相中在渗透压调节剂存在下实施水中干燥法，由此改进所得微球的分散性能；

(62)一种生产含生理活性物质或其盐和具有重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的微球的方法，在所述聚合物中具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量为约5％重量或更低，该方法包括在外水相中在渗透压调节剂存在下实施水中干燥法；

(63)按照上述(62)的方法，其中水中干燥法为W/O/W型；

(64)按照上述(62)的方法，其中水中干燥法为O/W型；

(65)按照上述(62)的方法，其中水中干燥法为S/O/W型；

(66)一种生产含生理活性物质或其盐和具有重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的微球的方法，在所述聚合物中具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量为约5％重量或更低，该方法包括将含渗透压调节剂的W/O型乳液分散在水相中，其中W/O型乳液包括含生理活性物质或其盐的内水相和含重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的油相，在该乳酸聚合物中具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量低于约5％重量或更低；并对该分散体施加水中干燥法；

(67)按照(66)上述的方法，其中渗透压调节剂在外水相中的浓度是外水相渗透压为等渗氯化钠溶液渗透压的约1/50至约5倍时的浓度；

(68)按照(66)上述的方法，其中内水相进一步包含药物载体；

(69)一种缓释组合物，包括按照上述(30)的微球；

(70)一种用于预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌的或用于避孕的缓释组合物，包括按照上述(43)的微球；

(71)按照上述(69)或(70)的缓释组合物，用于注射；

(72)按照上述(69)至(71)任何一项的缓释组合物，还包括甘露糖醇；

(73)按照上述(69)至(72)任何一项的缓释组合物，包含约70％重量或更多的微球，按总组合物计；

(74)一种预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌的或避孕的方法，包括对哺乳动物服用有效量的按照上述(43)的微球或包括微球的缓释组合物；

(75)一种长效缓释微球，包括生理活性物质或其盐和聚合物或其盐，且其中包括微球的约400至700mg缓释组合物可在低于2分钟内分散在1.5ml分散介质中；

(76)按照上述(75)的微球，其中聚合物或其盐为重均分子量10000至50000的乳酸聚合物或其盐；

(77)一种缓释组合物，包括按照上述(75)或(76)的微球；

(78)一种改进含生理活性物质或其盐和聚合物的微球的分散性的方法，包括在生产微球的外水相中在渗透压调节剂存在下进行水中干燥法；

(79)一种改进含生理活性物质或其盐和聚合物的微球在用于注射的包括微球的组合物中的分散性的方法，包括在外水相中在渗透压调节剂存在下进行水中干燥法由此生产微胶囊；

(80)一种在生产微球的水中干燥法中将渗透压调节剂用于外水相中的方法，所述微球包括生理活性物质或其盐和聚合物，并且该微球在用于注射的包括微球的组合物中具有改进的分散性能；

(81)渗透压调节剂在生产微球的水中干燥法中用于外水相中的用途，所述微球包括生理活性物质或其盐和聚合物，并且该微球在用于注射的包括微球的组合物中具有改进的分散性能；和

(82)一种用于水中干燥法中的外水相中改进微胶囊的分散性的试剂，包括渗透压调节剂。

附图说明

图1为显示比较例1的微球的电子显微照片。

图2为显示实施例1的微球的电子显微照片。

具体实施方式

用于本发明的生理活性物质具有高亲水性和低正辛醇/水(油/水)分配比例。这种低油/水分配比例是指正辛醇/水溶解度比例优选为1或更低，更优选0.1或更低。

油/水分配比例可通过描述于如下文献的方法测定“Butsuri KagakuJikkenho(Physicochemical Experimental Method)”，SHOKABOPUBLISHING Co.，Ltd.出版，1961年。具体地，该方法按如下进行。首先，将正辛醇和缓冲剂，pH5.5(1:1混合物)投入试管中。例如，该缓冲剂为Sφerensen缓冲剂[Ergeb.Physiol.，12，393(1912)]、Clark-Lubs缓冲剂[J.Bact.，2(1)，109，191(1917)]、Macllvaine缓冲剂[J.Biol.Chem.，49，183(1921)]、Michaelis缓冲剂[Die Wasser-stoffionenkonzentration，p.186(1914)]、Kolthoff缓冲剂[Biochem.Z.，179，410(1926)]等等。将合适量的药物投入该试管中。然后将该试管封盖，并在不断剧烈振摇下浸入恒温浴(25℃中)。当该药物显示溶于两层液体层而达到平衡时，将该液体混合物静置或离心。然后用移液管将一定量的液体从各上下层中取出，并分析，如此测定药物在正辛醇层和水层中的浓度比。

生理活性物质的例子包括但不限于抗肿瘤试剂、抗生素、退热剂、止痛剂、抗炎剂、镇咳剂、镇静剂、骨骼肌松弛药、镇癫痫剂、治疗溃疡病药、抗抑郁剂、抗变态反应药(anti-allergic agents)、强心剂、抗心律失常药、血管舒张药、降压利尿剂、治疗糖尿病药、抗凝血剂、止血剂、抗结核药、激素、麻醉拮抗药(narcotic antagonists)、骨吸收抑制剂和血管生成抑制剂。

药物上可用物质可在本发明中用作生理活性物质，其可为非肽化合物或肽化合物。非肽化合物可为兴奋剂、拮抗药、具有酶抑制效果的化合物等等。例如肽化合物优选为生理活性肽，该肽可具有分子量约300至40,000，优选约400至30,000，更优选约500至20,000。

生理活性肽的例子包括黄体化激素-释放激素(LH-RH)、胰岛素、促生长素抑制素、生长激素、生长激素-释放激素(GH-RH)、催乳激素、红细胞生成素、肾上腺皮质激素、促黑素细胞激素、甲状腺激素-释放激素(TRH)、促甲状腺激素、黄体化激素、促ollicl激素、后叶加压素、催产素、降钙素、促胃液素、肠促胰液素、促胰酶素、缩胆囊素、血管紧张素、人胎盘催乳激素、人绒毛膜促性腺激素、脑啡肽、内啡肽、kyotorphin、他福新、胸腺生成素、胸腺素、促胸腺素(thymostimulin)、胸腺体液因子(thymic humoralfactor)、血液胸腺因子(blood thymic factor)、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、胃动素、强啡肽、铃蟾肽、神经降压素、caerulein、缓激肽、心钠素、神经生长因子、细胞生产因子、神经营养因子、具有endothelin拮抗作用的肽和其衍生物、和其片段以及这些片断的衍生物。

优选的生理肽的例子包括抗激素依赖疾病，特别是性激素依赖癌(如前列腺癌、子宫癌、乳腺癌和脑垂体肿瘤)或性激素依赖疾病如前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、青春期早熟、痛经、经闭、月经前综合征和多房卵巢综合征有效，或避孕(或不育症，若在停药期间后使用回弹效应)的LH-RH衍生物，或其盐。另外的例子包括抗非性激素依赖但对LH-RH敏感的良性或恶性肿瘤的LH-RH衍生物或其盐。

LH-RH衍生物或其盐的具体例子包括例如如下文献中公开的那些：“Treatment with GnRH analogs：Controversies and perspectives”，TheParthenon Publishing Group Ltd.，1996、JP-A3-503165、JP-A3-101695、JP-A7-97334和JP-A8-259460。

LH-RH衍生物可为LH-RH兴奋剂或LH-RH拮抗药，LH-RH拮抗药的例子包括如下通式[I]表示的生理活性肽：

X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH₂

其中X表示N(4H₂-呋喃甲酰基)Gly或Nac，A表示选自NMeTyr，Tyr，Aph(Atz)和NMeAph(Atz)的残基，B表示选自DLys(Nic)、DCit、DLys(AzaglyNic)、DLys(AzaglyFur)、DhArg(Et₂)、DAph(Atz)和DhCi的残基，C表示Lys(Nisp)，Arg或hArg(Et₂)，和其盐。

LH-RH兴奋剂的例子包括如下通式[II]表示的生理活性肽：

5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y表示选自Dleu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的残基，Z表示NH-C₂H₅或Gly-NH₂，和其盐。特别优选的是其中Y为Dleu和Z为NH-C₂H₅的肽(即，如下通式表示的肽A：5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅，leuprorelin)或其盐(如乙酸盐)。

这些肽可通过或基于上面的文献或公开出版物中公开的方法生产。

本文使用的简写分别具有如下含义：

简写：名称

N(4H₂-呋喃甲酰基)Gly：N-四氢呋喃甲酰甘氨酸残基

NAc：N-乙酰基

D2Nal：D-3-(2-萘基)丙氨酸残基

D4ClPhe：D-3-(4-氯)苯丙氨酸残基

D3Pal：D-3-(3-吡啶基)丙氨酸残基

NMeTyr：N-甲基thyrosine残基

Aph(Atz)：N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基

NMeAph(Atz)：N-甲基-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基

DLys(Nic)：D-(e-N-烟酰基)赖氨酸残基

Dcit：D-瓜氨酸残基

DLys(AzaglyNic)：D-(azaglycylnicotinoyl)赖氨酸残基

DLys(AzaglyFur)：D-(氮杂甘氨酰基呋喃基)赖氨酸残基

DhArg(Et₂)：D-(N，N’-二乙基)高精氨酸残基

DAph(Atz)：D-N-[5’-(3’-氨基-1’H-1’，2’，4’-三唑基)]苯丙氨酸残基

DhCi：D-高瓜氨酸残基

Lys(Nisp)：(e-N-异丙基)赖氨酸残基

hArg(Et₂)：(N，N’-二乙基)高精氨酸残基

其它氨基酸的简写为按照由IUPAC-IUB Commission on BiochemicalNomenclature定义的或由European Journal of Biochemistry Vol.138，pp.9-37，1984中定义的或按照本领域惯用简写的那些。除非另有说明，氨基酸为L-构型，尽管它们可具有光学异构体。

生理活性肽的例子还包括LH-RH拮抗药(参见US4,086,219、4,124,577、4,253,997和4,317,815)。

生理活性肽的另外的例子包括胰岛素、促生长素抑制素、促生长素抑制素衍生物(参见US4,087,390、4,093,574、4,100,117和4,253,998)，生长激素、催乳激素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促黑素细胞激素(MSH)、甲状腺激素-释放激素(由如下结构通式表示：(Pyr)Glu-His-ProNH2，以下又称为TRH)、其盐或衍生物(参见JP-A50-121273和JP-A52-116465)，除甲状腺激素(TSH)、黄体化激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、后叶加压素、后叶加压素衍生物[去氨加压素，参见由The Japan Endocrine Society出版的Endocrine Journal，Vol.54，No.5，pp.676-691(1978)]、催产素、降钙素、甲状旁腺激素、高血糖素、促胃液素、肠促胰液素、促胰酶素、缩胆囊素、血管紧张素、人胎盘催乳物、人绒毛膜促性腺激素(HCG)、脑啡肽、脑啡肽衍生物(参见US 4,277,394和欧洲专利申请特开No.1567)、内啡肽、kyotorphin、干扰素(如α-，β-和γ-干扰素)、白介素(如I，II和III)、他福新、胸腺生成素、胸腺素、thymostimulin、胸腺体液因子(THF)、血液胸腺因子(FTS)和其衍生物(参见US4,229,438)、其它胸腺因子[Igaku no Ayumi，Vol.125，No.10，pp.835-843(1983)]、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、胃动素、强啡肽、铃蟾肽、神经降压素、caerulein、缓激肽、尿激酶、天门冬酰胺酶、血管舒缓素、物质P、神经生长因子、细胞生长因子、神经营养因子VIII和IX、溶菌酶氯化物、多粘菌素B、粘菌素、短杆菌肽、短杆菌肽、杆菌肽、红细胞生成素(EPO)和endothelin-拮抗肽(参见欧洲专利申请特开436189、457195和496452，以及JP-A Nos.3-94692和3-130299)。

抗肿瘤剂的例子包括争光霉素、甲氨蝶呤、放线菌素D、丝裂霉素C、binblastin硫酸盐、bincrystin硫酸盐、柔红霉素、阿霉素、neocartinostatin、胞嘧啶arabinoside、氟尿嘧啶、四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶、krestin、picibanil、香菇多糖、左旋咪唑、左旋咪唑、azimexon、甘草酸、聚肌胞苷酸(polyI:C)、聚腺苷酸(polyA:U)和polyICLC。

抗生素的例子包括庆大霉素、地贝卡星、kanendomycin、利维霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、弗氏霉素、sisomycin、四环素盐酸盐、土霉素盐酸盐、rolitetracycline、多西环素盐酸盐、氨苄西林、哌拉西林、羟基噻吩青霉素、头孢噻吩(cefalothin)、头孢噻啶、头孢替安、头孢磺啶、头孢甲肟、头孢美唑、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢唑肟、拉氧头孢、阿霉素、磺胺泽辛和氨曲南。

退热剂、镇痛剂和抗炎剂的例子包括得自水杨酸、sulpyrine、氟芬那酸、双氯芬酸、消炎痛、吗啡、哌替啶盐酸盐、酒石酸左吗啡和羟吗啡酮。

镇咳祛痰药的例子包括麻黄硷盐酸盐、甲基麻黄碱盐酸盐、那可丁盐酸盐、可待因磷酸盐、双氢可待因磷酸盐、阿洛拉胺盐酸盐、clofedanol盐酸盐、picoperidamine盐酸盐、氯哌斯汀、普罗托醇盐酸盐、异丙肾上腺素盐酸盐、sulbutamol硫酸盐、和特布他林盐酸盐。

镇静剂的例子包括氯丙嗪、普鲁氯嗪、三氟吡啦嗪、阿托品盐酸盐、和溴化甲基东茛菪硷。

骨骼肌松弛药的例子包括普立地诺甲磺酸盐、氯化筒箭毒硷和泮库溴铵。

镇癫痫剂的例子包括苯妥英、乙琥胺、乙酰唑胺钠和利眠宁。

治疗溃疡病药的例子包括甲氧氯普胺和组氨酸盐酸盐。

抗抑郁剂的例子包括丙咪嗪、氯米帕明、诺昔替林和苯乙肼硫酸盐。

抗过敏剂的例子包括苯海拉明盐酸盐、氯苯那敏马来酸盐、特赖皮伦胺盐酸盐、甲地嗪盐酸盐、克立咪唑盐酸盐、二苯拉林盐酸盐和喘咳宁。

强心剂的例子包括反-π氧化樟脑、theophyllol、氨茶硷和etilefrine盐酸盐。

抗心律失常药药的例子包括propranol、阿普洛尔、布非洛尔和氧烯洛尔。

血管舒张药的例子包括奥昔非君盐酸盐、diltiazem、托拉佐林盐酸盐、海索苯定和硫酸巴美生。

降压利尿剂的例子包括溴化六羟季铵、酒石酸五吡咯烷、美加明盐酸盐、ecarazine盐酸盐和可乐定。

治疗糖尿病药的例子包括格列嘧啶钠、格列吡嗪、苯乙双胍盐酸盐和二甲基团双胍。

抗凝血剂的例子包括肝素钠和柠檬酸钠。

止血剂的例子包括凝血致活酶、凝血酶、甲萘醌亚硫酸氢钠、乙酰甲萘醌、ε-亮氨酸、凝血酸、卡络磺钠和肾上腺色素单氨基胍甲磺酸盐。

抗结核药的例子包括异烟肼、乙胺丁醇和对氨基水杨酸。

激素药的例子包括predonisolone、predonisolone磷酸钠、地塞米松硫酸钠、倍他米松磷酸钠、己烯雌酚磷酸盐、己烯雌酚乙酸盐和甲巯咪唑。

麻醉拮抗药的例子包括左洛啡烷酒石酸盐、纳洛芬盐酸盐和纳洛酮盐酸盐。

骨吸收抑制剂的例子包括(含硫烷基)氨亚甲基双膦酸。

血管生成抑制剂的例子包括血管生成抑制甾族化合物[参见Science，Vol.221，p.719(1983)]、烟曲霉素(参见欧洲专利申请公开325199)和fumagillol衍生物(参见欧洲专利申请公开357061、359036、386667和415294)。

任何生理活性物质本身或其任何药物可接受的盐可用于本发明中。

若生理活性物质具有碱性基团如氨基，则其盐可为无机酸(或游离无机酸)(如碳酸、碳氢酸、盐酸、硫酸、硝酸和硼酸)盐或有机酸(或游离有机酸)(如丁二酸、乙酸、丙酸和三氟乙酸)盐。

若生理活性物质具有酸基如羧基，则其盐可为无机碱(或游离无机碱)(如碱金属如钠和钾，碱土金属如钙和镁)的盐，或有机碱(或游离有机碱)(如有机胺如三乙基胺和碱性氨基酸如精氨酸)的盐。生理活性肽也可形成金属配位化合物(如铜配合物和锌配合物)。

用于本发明的聚合物是低水溶性或水不溶性和生物相容的(可生物降解)。术语“低水溶性”是指在水中的溶解度不低于0且不超过约3％(w/w)，优选不低于0且不超过约1％(w/w)。

使用的可生物降解聚合物可具有重均分子量约10000至50000，优选约15000至50000，更优选约15000至40000，特别优选约17000至26000。可生物降解聚合物可具有分散性能约1.2至4.0，特别优选约1.5至3.5。

这里使用的重均分子量和分散性能各自指通过凝胶渗透色谱(GPC)测定的值。

使用的聚合物的量取决于药物的活性，以及生理活性物质或其盐等的释放速率和时间。例如，用作微球基料的聚合物的量可为生理活性物质或其盐的量的约0.5至10,000倍(按重量计)，优选约1至100倍(按重量计)。

聚合物优选为可生物降解的聚合物，该聚合物的例子包括脂族聚酯[如均聚物如乳酸聚合物)，或两种或多种α-羟基酸(如乙醇酸、乳酸、2-羟基丁酸、2-羟基戊酸、2-羟基-3-甲基丁酸、2-羟基己酸、2-羟基异己酸和2-羟基辛酸)、α-羟基酸的二聚体(如乙交酯和丙交酯)、羟基二羧酸(如苹果酸)或羟基三羧酸(如柠檬酸)的共聚物(如乳酸/乙醇酸共聚物和2-羟基丁酸/乙醇酸共聚物，或均聚物和/或共聚物的任何混合物(如乳酸聚合物与2-羟基丁酸/乙醇酸共聚物的混合物)]；聚-α-氰基丙烯酸酯、聚氨基酸(如聚-γ-苄基-L-谷氨酸、聚-L-丙氨酸和聚-γ-甲基-L-谷氨酸)、和马来酸酐共聚物(如苯乙烯/马来酸共聚物)。优选脂族聚酯和聚-α-氰基丙烯酸酯。特别优选脂族聚酯。

脂族聚酯的优选例子是α-羟基酸或α-羟基酸环二聚体的均聚物、其两种或多种的共聚物、以及均聚物和/或共聚物的混合物。特别优选α-羟基酸的均聚物或共聚物或均聚物和/或共聚物的混合物。

若α-羟基酸、α-羟基酸的环二聚体、羟基二羧酸或羟基三羧酸在其分子中具有光学活性中心，则其可以为D-，L-和DL-构型中的任何一种。

脂族聚酯可毫无困难地通过任何已知方法生产(例如参见JP-A61-28521)。聚合可为无规、嵌段和接枝型聚合中的任何一种。

该脂族聚酯可具有重均分子量约10000至50000，优选约15000至50000，更优选约15000至40000，特别优选约17000至26000。该脂族聚酯优选具有分散性能约1.2至4.0，特别优选约1.5至3.5。

若脂族聚酯为乳酸/乙醇酸共聚物，则其组成比优选为约100/0至约50/50(按重量计)。若脂族聚酯为2-羟基丁酸/乙醇酸共聚物，则其组成比优选为约100/0至约25/75(按重量计)。

乳酸聚合物、乳酸/乙醇酸共聚物或2-羟基丁酸/乙醇酸共聚物优选具有重均分子量约15000至50000，特别优选约15000至40000。

若脂族聚合物例如为乳酸聚合物(A)和乙醇酸/2-羟基丁酸共聚物(B)的混合物，则(A)/(B)表示的混合物比为约10/90至约90/10(按重量计)，优选约25/75至约75/25(按重量计)。

乳酸聚合物优选具有重均分子量约15000至50000，特别优选约15000至40000。

乙醇酸/2-羟基丁酸共聚物优选由40至70mol乙醇酸和剩余量(60至30mol)2-羟基丁酸组成。乙醇酸/2-羟基丁酸共聚物优选具有重均分子量约15000至50000，特别优选约15000至40000。

本发明中使用的聚合物特别优选为乳酸聚合物(以下将这种乳酸聚合物又简称为本发明的乳酸聚合物)。该乳酸聚合物的例子包括仅由乳酸组成的聚合物，和由乳酸和任一其它单体(如乙醇酸)组成的共聚物。在该聚合物中，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量通常为约10％重量或更低，优选，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量通常为约5％重量或更低；更优选，具有重均分子量3000或更低的聚合物的含量为约1.5％重量或更低；更优选，具有重均分子量1000或更低的聚合物的含量为约0.1％重量或更低；更优选，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量为约5％重量或更低，更优选具有重均分子量3000或更低的聚合物的含量为约1.5％重量或更低；最优选，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量通常为约5％重量或更低，具有重均分子量3000或更低的聚合物的含量为约1.5％重量或更低，具有重均分子量1000或更低的聚合物的含量为约0.1％重量或更低。

本发明乳酸聚合物通常具有重均分子量15000至50000，优选15000至40000，更优选17000至26000，特别优选17500至25500。

用作本发明乳酸聚合物的高分子量乳酸聚合物可市购或可通过任何已知聚合方法生产，并且通常具有重均分子量15000至500000，优选20000至100000。已知聚合方法的例子包括将乳酸和非必要的乙醇酸缩聚，例如丙交酯和非必要的乙交酯用路易酸如二乙基锌、三乙基铝和辛酸锡或催化剂如金属盐进行的开环聚合，丙交酯在具有保护羧基的羟基羧酸存在下的开环聚合，除了上述开环聚合条件(例如，国际专利公开WO00/35990)，丙交酯用催化剂在加热下的开环聚合(例如，J.Med.Chem.，16，897(1973))，和丙交酯和乙交酯共聚。

聚合的类型可为本体聚合，其中将丙交酯或其类似物熔化并施加聚合反应，或溶液聚合，其中将丙交酯或其类似物溶于合适的溶剂中并进行聚合反应。通过溶液聚合生产的聚合物在工业上优选用作本发明乳液聚合物的材料。

在溶液聚合期间用于溶解丙交酯的例子包括芳烃如苯、甲苯和二甲苯、十氢萘和二甲基甲酰胺。

所得具有高分子量的乳酸聚合物可通过任何已知的水解方法水解，例如，将具有高分子量的乳酸聚合物溶于合适的溶剂中，然后将水和非必要的酸加入其中使其水解。

用于溶解高分子量的溶剂可为任何溶剂，只要乳酸聚合物可溶解于不多于10倍(按重量计)量的该溶剂中即可。该溶剂的具体例子包括卤代烃如氯仿和二氯甲烷；芳烃如甲苯、邻-二甲苯、间-二甲苯和对-二甲苯；环醚如四氢呋喃；丙酮；和N，N-二甲基甲酰胺。若用于制备高分子量乳酸聚合物的溶剂也可用于聚合物水解，则聚合和水解可在不分离高分子量乳酸聚合物下同时进行。

用于溶解高分子量乳酸聚合物的溶剂的量通常为要溶解的乳酸聚合物量的0.1至100倍，优选乳酸聚合物的1-10倍。

加入的水的量通常为高分子量乳酸聚合物量的0.001至1倍(按重量计)，优选0.01至0.1倍(按重量计)。

非必要加入的酸的例子包括无机酸如盐酸、硫酸和硝酸；和有机酸如乳酸、乙酸和三氟乙酸，优选乳酸。

加入的酸的量通常为高分子量乳酸聚合物量的0至10倍(按重量计)，优选0.1至1倍(按重量计)。

水解的反应温度通常为0至150℃，优选20 to 80℃。

水解的反应时间可根据高分子量乳酸聚合物和反应温度而变化，通常为10分钟至100小时，优选1至20小时。

停止水解过程的时间可基于水解产品的重均分子量确定。具体地，在水解过程中在合适时间取出样品，通过凝胶渗透色谱(GPC)测定样品中的水解产品的重均分子量，若测定分子量约15000至50000，优选约15000至30000，更优选约17000至26000，特别优选约17500至25500，则停止水解过程

在高分子量乳酸聚合物的上述水解后，将所需的乳酸聚合物从含水解产品的所得溶液中沉淀。例如，将含水解产品的溶液与可诱导所需乳酸聚合物沉淀的溶剂接触。

在一个优选的方面，含水解产品的溶液为具有重均分子量15000至50000、优选15000至30000、更优选17000至26000、特别优选17500至25500的乳酸聚合物在能够溶解该高分子量乳酸聚合物的溶剂中的10至50wt％溶液，所述溶剂的例子为卤代烃如氯仿和二氯甲烷；芳烃如甲苯、邻-二甲苯、间-二甲苯和对-二甲苯；环醚如四氢呋喃；丙酮；N，N-二甲基甲酰胺；二氯甲烷；或二甲苯。

可用于从含水解产品的溶液中沉淀所需乳酸聚合物的溶剂的例子包括醇如甲醇和乙醇，链醚如异丙基醚，脂族烃如己烷，和水。

为沉淀所需乳酸聚合物使用的溶剂的量通常为含水解产品的溶液的量的0.1至100倍(按重量计)，优选1至10倍(按重量计)

各溶剂的类型和量的优选组合可为含水解产品的溶液(其中使用其量为溶质量1至5倍(按重量计)的二氯甲烷)和其量为二氯甲烷2至10倍(按重量计)的异丙醇作为降低溶解度的溶剂的组合。

当含水解产品的溶液与用于制备所需乳酸聚合物的溶剂接触时，溶剂的温度通常设定为-20至60℃，优选0至40℃，含水解产品的溶液的温度通常设定为0至40°，优选10至30℃。

溶剂与含水解产品溶液接触的方法的例子包括将含水解产品溶液一次加入溶剂的方法，将含水解产品溶液滴加入溶剂中的方法，和将溶剂滴加入含水解产品溶液中的方法。

将按如上所述获得本发明乳酸聚合物优选用作缓释制剂的基料，因为对于该基料其末端羧基的量在优选范围内。

此外，生物相容聚合物的例子包括聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸、丙烯酸与甲基丙烯酸的共聚物、聚氨基酸、葡萄糖硬脂酸酯、乙酸纤维素、乙酰纤维素、硝基纤维素、马来酸酐基共聚物、乙烯乙酸乙烯酯基共聚物、聚乙酸乙烯酯和聚丙烯酰胺。

这些聚合物中的一种可单独使用，或其两种或多种可以共聚物形式或简单混合物形式使用，或可用其任何盐。

聚合物在油相中的浓度可为约0.5至约90％(w/w)，优选约2至约60％(w/w)。

用于本发明的药物载体的例子包括白蛋白、明胶、柠檬酸、水杨酸、乙二胺四乙酸钠、糊精、亚硫酸氢钠、多醇化合物如乙二醇、琼脂、海藻酸、聚乙烯醇和碱性氨基酸。

本发明的微球可通过水中干燥法、优选通过(W/O)/W型、O/W型或S/O/W型水中干燥法生产。

(W/O)/W型水中干燥法可包括：制备由含生理活性物质或其盐的内水相和含聚合物的溶液的油相组成的W/O型乳液；将乳液分散到含渗透压调节剂的水相中制备(W/O)/W型乳液；和该乳液进行水中干燥法以从油相中除去溶剂，由此生产含生理活性物质或其盐和聚合物的微球。

O/W型水中干燥法可包括：将油相分散到含渗透压调节剂的水相中制备O)W型乳液，其中油相包括生理活性物质或其盐和聚合物；和该乳液进行水中干燥法以从油相中除去溶剂，由此生产含生理活性物质或其盐和聚合物的微球。

S/O/W水中干燥法可包括：将生理活性物质或其盐I分散到含聚合物的溶液的油相中；将该分散体分散到含渗透压调节剂的水相中制备S/O/W型乳液；和该乳液进行水中干燥法以从油相中除去溶剂，由此生产含生理活性物质或其盐和聚合物的微球。

用于本发明的渗透压调节剂可为能够在水溶液中产生渗透压的任何物质。

渗透压调节剂的例子包括醇如多元醇和一元醇；糖如单糖、二糖和寡糖；水溶性氨基酸；肽或蛋白质；水溶性氨酸的盐；和其衍生物。

多元醇的例子包括三元醇如甘油；五元醇如阿糖醇、木糖醇和福寿糖醇；以及六元醇如甘露糖醇、山梨糖醇和卫矛醇。优选六元醇，特别优选甘露糖醇。

一元醇的例子包括甲醇、乙醇和异丙醇，优选乙醇。

单糖的例子包括戊糖如树胶醛糖、木糖、核糖和2-脱氧核糖；己糖如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖和海藻糖。特别优选己糖。

二糖的例子包括麦芽糖、纤维二糖、α，α-海藻糖、乳糖和蔗糖。特别优选乳糖和蔗糖。

寡糖的例子包括三糖类如麦芽三糖和蜜三糖；和四糖类如水苏糖。特别优选三糖类。

单糖、二糖或寡糖的例子包括葡萄糖胺、半乳糖胺、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸。

上述氨基酸可为L-形氨基酸。这种氨基酸的例子包括中心氨基酸如氨基乙酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸；酸性氨基酸如天冬氨酸和谷氨酸；和碱性氨基酸如赖氨酸、精氨酸和组氨酸。优选使用氨基乙酸、亮氨酸或精氨酸，特别优选L-精氨酸。水溶性氨基酸的盐如水溶性氨基酸的酸盐(如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)，和水溶性氨基酸的碱盐(如碱金属如钠和钾盐)。

水溶性肽、蛋白质或其衍生物的例子包括酪蛋白、球蛋白。醇溶谷蛋白、白蛋白和凝胶。

这些渗透压调节剂中的一种或多种可单独或组合使用。

生理活性物质或其盐的用量可根据药的类型、所需药效、所需药效期间等而变化。例如，生理活性物质或其盐在内水相中的浓度为约0.001％至约90％(w/w)，更优选约0.01％至约80％(w/w)，特别优选约0.01％至约70％(w/w)。

渗透压调节剂可以外水相具有的压力为等渗氯化钠溶液的渗透压的约1/50至约5倍，优选约1/25至约3倍，更优选约1/12至约2倍时的浓度使用。

具体地，若渗透压调节剂为非离子物质，在其在外水相中的浓度为约0.01％至约60％(w/w)，优选约0.01％至约40％(w/w)，更优选约0.05％至约30％(w/w)，特别优选约0.5％至约1.5％(w/w)。若渗透压调节剂为离子物质，则其浓度可用上述浓度除以总离子价态来计算。加入的渗透压调节剂的浓度不必等于或低于其溶解度，它可部分以分散状态存在。

根据本发明，渗透压调节剂加入外水相中可提供微球产品的改进的分散性。改进的程度无特别限制，但优选为这样的程度：约400至700mg微球可在低于2分钟内分散于1.5ml用于注射的分散介质中。

下面解释通过按照本发明的(W/O)/W型水中干燥法生产微球的方法。

在下面的方法中，可将如下组分按需要加入内水相中：

(1)药物载体：白蛋白、明胶、柠檬酸、水杨酸、乙二胺四乙酸钠、糊精、亚硫酸氢钠，多元醇化合物如聚乙二醇、琼脂、海藻酸、聚乙烯醇、碱性氨基酸等等；

(2)用于保持生理活性物质或其盐稳定性和溶解性的pH调节剂：碳酸、乙酸、草酸、柠檬酸、磷酸、盐酸、氢氧化钠、精氨酸、赖氨酸、它们的其盐等等；

(3)生理活性物质或其盐的稳定剂：白蛋白、明胶、柠檬酸、乙二胺四乙酸钠、糊精、亚硫酸氢钠，多元醇化合物如聚乙二醇等等；

(4)防腐剂：对羟基苯甲酸酯(如对羟基苯甲酸甲酯(methyl paraben)和对羟基苯甲酸丙酯(propyl paraben))、苄基醇、氯丁醇、硫汞撒等等。

(I)O/W方法

对于此方法，首先制备聚合物在有机溶剂中的溶液。用于生产本发明微球的有机溶剂优选具有沸点120℃或更低。

这些有机溶剂的例子包括卤代烃(如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷和四氯化碳)，醚(如乙醚和异丙醚)，脂肪酸酯(如乙酸乙酯和乙酸丁酯)，芳烃(如苯、甲苯和二甲苯)，醇(如乙醇和甲醇)和乙腈。优选卤代烃，更优选二氯甲烷。有机溶剂可为上述溶剂以合适比例的混合物。在此情况下，优选卤代烃和醇的混合物，更优选二氯甲烷和乙醇的混合物。

聚合物在有机溶剂溶液中的浓度取可根据聚合物的分子量或有机溶剂的类型而变化。例如，当使用二氯甲烷作为有机溶剂时，该浓度范围通常为约0.5至约70％重量，更优选约1至约60％重量，特别优选约2至约50％重量。

当二氯甲烷和乙醇的混合物用作有机溶剂时，乙醇在该混合物溶剂中的含量范围通常为约0.01至约50％(v/v)，更优选约0.05至约40％(v/v)，特别优选约0.1至约30％(v/v)。

向如此获得的聚合物在有机溶剂中的溶液中，加入生理活性物质或其盐，然后溶解或分散。在该方法中，生理活性物质或其盐的加入量应使生理活性物质或其盐与聚合物的重量比不超过约1:1，优选约1:2。

然后，将所得包括生理活性物质或其盐和聚合物的组合物在有机溶剂中的溶液加入水相中形成O(油相)/W(水相)-型乳液。然后，将溶剂从油相中蒸发出来，如此制备微球。在该方法中，水相体积范围通常为油相体积的约1倍至约10,000倍，更优选约5倍至约50,000倍，特别优选约10倍至约2,000倍。

除了渗透压调节剂外，还可以将乳液加入外水相中。该乳化剂可为能够形成稳定O/W-型乳液的乳化剂。该乳化剂的具体例子包括阴离子表面活性剂(如油酸钠、硬脂酸钠和月桂基硫酸钠)，非离子表面活性剂[如聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(如Tween 80和Tween 60，Atlas Powder Company)和聚氧乙烯蓖麻油衍生物(如HCO-60和HCO-50，Nikko Chemicals)]，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧甲基纤维素，卵磷脂，明胶和透明质酸。可单独或组合使用上述乳化剂中的一种或多种。使用的表面活性剂的浓度优选为约0.01至10％重量，更优选约0.05至约5％重量。

有机溶剂可通过已知方法或基于已知方法的改性方法除去。该方法的例子包括：在用桨叶搅拌器、磁搅拌器等搅拌下在常压或逐渐减压下蒸发有机溶剂的方法，和在控制真空下用旋转蒸发器等蒸发有机溶剂的方法。

将如此获得的微球通过离心或过滤收集，用蒸馏水洗涤数次以除去附在微球表面上的游离生理活性物质、药物载体、乳化剂等，再次分散在蒸馏水或其类似物中，然后冷冻干燥。

在生产微球的工艺期间，为防止颗粒絮凝可加入抗絮凝剂。这种抗絮凝剂的例子包括甘露糖醇、乳糖、葡萄糖、水溶性多糖如淀粉(例如玉米淀粉)、氨基酸如甘氨酸，和蛋白质如纤维蛋白和胶原。特别优选甘露糖醇。

抗絮凝剂如甘露糖醇的加入量通常为0至约24％，按微球的总重量计。

冷冻干燥后，若需要，可将水和有机溶剂在减压下在微球不相互熔凝的条件下加热从微球中除去。优选将微球在聚合物的约中间玻璃转化温度下，或在略高于中间玻璃转化温度下加热，该温度用差式扫描量热计在温度上升速率10℃至20℃每分钟下测得。更优选地，将微球在聚合物的约中间玻璃转化温度至高于玻璃转化温度约30℃的温度下加热。特别地，当聚合物为乳酸-乙醇酸聚合物时，该微球优选在约其中间玻璃转化温度至高于该中间玻璃转化温度约10℃、更优选在约其中间玻璃转化温度至高于该中间玻璃转化温度约5℃的温度下加热。

加热时间可根据微球的量等而变化，通常为在微球达到所需温度后约12小时至约168小时，优选约24小时至约120小时，特别优选约48小时至约96小时。

加热微球的方法可为能够均匀加热大量微球的任何方法，对该方法无特殊限制。

加热干燥方法的例子包括在恒温浴、硫化床浴、移动浴或干燥炉中加热干燥的方法，和用微波炉加热干燥的方法。优选在恒温浴中加热干燥的方法。

(II)W/O/W法

首先制备聚合物在有机溶剂中的溶液。

有机溶剂的例子包括卤代烃(如二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷和四氯化碳)，醚(如乙醚和异丙醚)，脂肪酸酯(如乙酸乙酯和乙酸丁酯)，芳烃(如苯、甲苯和二甲苯)，醇(如乙醇和甲醇)和乙腈。优选卤代烃，更优选二氯甲烷。有机溶剂可为上述溶剂以合适比例的混合物。在此情况下，优选卤代烃和醇的混合物，更优选二氯甲烷和乙醇的混合物。

向聚合物在有机溶剂的溶液(油相)中，加入生理活性物质、其盐或盐的溶液[其中溶剂为水或水与醇(如甲醇或乙醇)的混合物]。将所得混合物通过任何已知方法如用均化器或超声波乳化形成W/O-型乳液。

然后将所得包括生理活性物质或其盐和聚合物的W/O-型乳液加入水相中形成W(内水相)/O(油相)/W(外水相)-型乳液。然后将溶剂从油相中蒸发，如此获得微球。在该方法中，外水相的体积通常为油相体积的约1倍至约10,000倍，更优选约5倍至约50,000倍，特别优选约10倍至约2,000倍。

可将渗透压调节剂和乳化剂非必要地加入外水相中，后面的制备方法可与上述(I)节中的方法相同。

可将乳化剂加入外水相中。该乳化剂可为能够形成稳定的O/W-型乳液的任何乳化剂。该乳化剂的具体例子包括阴离子表面活性剂(如油酸钠、硬脂酸钠和月桂基硫酸钠)，非离子表面活性剂[如聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(如Tween 80和Tween 60，Atlas Powder Company)和聚氧乙烯蓖麻油衍生物(如HCO-60和HCO-50，Nikko Chemicals)]，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧甲基纤维素，卵磷脂，明胶和透明质酸。可单独或组合使用上述乳化剂中的一种或多种。使用的表面活性剂的浓度优选为约0.01至10％重量，更优选约0.05至约5％重量。

有机溶剂可通过已知方法或基于已知方法的改性方法除去。该方法的例子包括：在用桨叶搅拌器、磁搅拌器、超声波发生器等搅拌下在常压或逐渐减压下蒸发有机溶剂的方法，包括在控制真空下用旋转蒸发器等蒸发有机溶剂的方法，和包括用渗透膜逐步除去有机溶剂的方法。

用本发明方法生产的本发明的微球是指可分散在溶液中的能够注射的球形细颗粒。例如，其形状和形式可通过用扫描电镜观察确定。微球可为微胶囊或颗粒形式。优选微胶囊。

生理活性物质或其盐在本发明微球中的重量含量可根据生理活性物质或其盐的类型、所需的药理学效果、所需的效果期间等而变化。例如，当生理活性物质或其盐为生理活性肽或其盐时，其含量可为约0.001至约50％重量，优选约0.02至约40％重量，更优选约0.1至约30％重量，更优选约0.1至约24％重量，最优选约3至约24％重量，按微球的总重量计。当生理活性物质或其盐非生理活性肽或其盐时，其含量可为约0.01至约80％重量，优选约0.1至约50％重量。

聚合物在本发明微球中的含量可为约50至约100％重量，优选约70至约100％重量，更优选约85至约95％重量，按微球的总重量计。

药物载体在本发明微球中的含量可为约0.01至约50％重量，优选约0.1至约30％重量，更优选约5至约15％重量，按微球的总重量计。

本发明的微球在其表面上具有很少的小孔，并且在用于注射的悬浮液中具有良好的分散性能。

由于本发明的微球具有如此良好的分散性能，因此大量的微球可悬浮在用于注射的悬浮液中。因此，用于注射的悬浮液可最终包含大量的生理活性物质或其盐，即使微球不含药物载体如羟萘甲酸。

本发明的微球可以其本身的形式服用，或在配制成各种剂型后，以肌肉、皮下组织、器官等注射或植入形式，以用于鼻腔、直肠、子宫等的transmucosalagent形式，或口服药剂(如胶囊(如硬胶囊和软胶囊)、固体制剂如粒剂和粉末，和液体制剂如糖浆、乳液和悬浮液)形式等等服用。

例如，本发明的微球可与分散介质如分散剂(如表面活性剂如Tween 80和HCO-60；和多糖如透明质酸钠、羧甲基纤维素和海藻酸钠)，防腐剂(如对甲基苯甲酸甲酯(methyl paraben)和对甲基苯甲酸丙脂(propylparaben))，和等渗试剂(如氯化钠、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖和脯氨酸)混合由此制备含水悬浮液，或与分散介质如植物油例如芝麻油和玉米油混合制备油性悬浮液，如此可制备实际的缓释注射药。

用于悬浮注射剂的本发明微球的颗粒直径应在这样的范围内：即它们具有满意的分散性能和通过注射针的满意性能。例如该微球具有平均直径约0.1至300μm，优选约0.5至150μm，更优选约1至100μm。

本发明的微球可通过包括但不限于在所有制备步骤期间消毒处理，用γ照射和加入抗菌剂消毒的任何方法，配制为消毒制剂。

对于上述缓释微球注射制剂，可将附形剂(如甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖和葡萄糖)加入上述悬浮液组分中，并且可将该悬浮液再分散，然后冷冻干燥或喷雾干燥获得固体。在给药时，可将注射用蒸馏水或任何合适的分散介质加入该固体中，制备更稳定的缓释注射剂。

当将附形剂如甘露糖醇加入缓释微球注射剂中时，附形剂的含量可为约0-50％重量，优选约1至20％重量，按注射剂的总重量计。

当将缓释微球注射剂在给药时分散到注射用蒸馏水或任何合适的分散介质中时，微球的含量可为约1至80％重量，优选约10至60％重量，按分散介质和微球的总重量计。

本发明微球可按照已知方法配制为口服制剂。例如，可将本发明的微球与附形剂(如乳糖、白糖和淀粉)、崩解剂(如淀粉和碳酸钙)，粘结剂(如淀粉、阿拉伯树胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基纤维素)，润滑剂(如滑石粉、硬脂酸镁和聚乙烯6000)等混合，压模，然后若必要用旨在掩蔽味道或赋予肠溶或缓释性能的任何已知方法涂布，由此获得口服制剂。这些涂布剂的例子包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇、Tween 80、Pluronic F68、纤维素乙酸邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟甲基纤维素乙酸丁二酸酯、Eudragit(制造商为Rohm Company，Germany，甲基丙烯酸-丙烯酸共聚物)，和颜料如二氧化钛和铁丹。

根据本发明生产的微球可通过任何已知方法配制为固体、半固体或液体形式的鼻制剂。例如，固体鼻制剂可由微球本身制备，或通过加入并混合附形剂(如葡萄糖、甘露糖醇、淀粉和为晶体纤维素)，增稠剂(如天然树胶、纤维素衍生物和丙烯酸聚合物)等制备，由此形成粉末组合物。液体鼻制剂可按与上述注射制剂类似的方式制成油性或水性悬浮液。半固体制剂可以水性或油性凝胶或软膏形式生产。这些鼻制剂可包含pH调节剂(如碳酸、磷酸、柠檬酸、盐酸和氢氧化钠，抗菌剂(如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇和氯化苯甲烃铵)等等。

本发明的微球可按已知方式进一步配制为油性或水性固体或半固体形式的栓剂。用于上述栓剂的油性碱可为不使微球溶解的任何油性碱。该油性碱的例子包括高级脂肪酸的甘油酯[如可可脂和Witepsol-系列产品(Dynamite Nobel)]，介质脂肪酸[如Miglyol-系列产品(Dynamite Nobel)]，和植物油(如芝麻油、大豆油和棉籽油)。水性碱的例子包括聚乙烯醇和丙二醇。水性凝胶碱的例子包括天然树胶、纤维素衍生物、乙烯基聚合物和丙烯酸聚合物。

本发明的微球优选用作注射剂。

本发明微球在本发明缓释组合物中的含量优选为但不限于至少约70％重量。

本发明的微球为几乎没有毒性的，因此可用作用于哺乳动物(如动物、牛类、猪、狗、猫、老鼠、小鼠和兔子)的安全药剂等。

本发明微球或其缓释组合物的剂量可根据作为主要药的生理活性物质或其盐的类型和含量、剂型、生理活性物质或其盐的释放期、靶子疾病、靶子动物等而变。例如当缓释组合物为六个月制剂时，作为主要药物的生理活性物质或其盐的剂量范围可为约0.01mg至10mg/kg，更优选约0.05mg至5mg/kg成年人的体重。

微球的剂量范围可为约0.05mg至50mg/kg，更优选约0.1mg至30mg/kg成年人的体重。

给药的频率可为每数周一次，每一个月一次，每数月(如三月、四月或六月)一次，等等，并可根据作为主要药物的生理活性物质或其盐的类型和含量、剂型、生理活性物质或其盐的释放期、靶子疾病、靶子动物等合适地选取。

本发明的微球或其缓释组合物可根据其中所含的生理活性物质或其盐的类型用作预防或治疗各种疾病的药剂。例如，当生理活性物质或其盐为LH-RH衍生物时，本发明的微球或其缓释组合物可用作预防或治疗激素依赖疾病，特别是激素依赖癌症(如前列腺癌、子宫癌、乳腺癌和脑垂体肿瘤)；性激素依赖疾病如前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、青春期早熟、痛经、闭经、月经前综合症和多腔卵巢综合症；或诸如Alzheimer疾病和免疫缺陷的药剂；或可用作避孕的药剂(或用作预防或治疗不孕症的疾病，或若在停药期后使用回弹效果)。本发明的微球或其缓释组合物还可用作不依赖于性激素但对LH-RH敏感的良性或恶意肿瘤。

为根据本发明生产具有改进的分散性能的微球，当含生理活性物质或其盐和聚合物的乳液进行水中干燥时，可将该渗透压调节剂用于外水相中。

本发明将借助下面的参考例和实施例更详细描述，这些实施例不用于限制本发明的范围。

实施例

在下面的参考例和实施例中，重均分子量通过用单分散聚苯乙烯作为参照物的凝胶渗透色谱(GPC)测定(根据聚苯乙烯的分子量)，各聚合物的含量由各重均分子量计算。各测量在高效GPC系统(HLC-8120GPC，TosohCorporation制造)中进行，该系统使用SuperH4000x2和SuperH2000柱子(都由Tosoh Corporation制造)，和流速为0.6ml/min的四氢呋喃移动相。检测基于差式折光率。

参考例1：合成高分子量乳酸聚合物

向230ml脱水二甲苯中，加入4.1ml 1.0mol/l二乙基锌己烷溶液、1.35g乳酸叔丁基酯和230g DL-丙交酯，并在120至130℃下进行聚合反应约两小时。反应完成后，将120ml二氯甲烷倒入反应液体中，并加入230ml三氟乙酸以进行脱保护反应。反应完成后，将300ml二氯甲烷加入反应液体中，然后将其倒入2800ml异丙醚中，如此沉淀所需产品。用二氯甲烷/异丙基醚进行再沉淀，如此获得重均分子量约40000的乳酸聚合物。

参考例2

将参考例1中获得的聚合物溶于600ml二氯甲烷中。将所得溶液用水洗涤至中性后，加入70g 90％乳酸水溶液，并使其在40℃下反应。当溶于反应液体中的聚合物的重均分子量变为约20,000时，将反应液体冷却至室温，并倒入600ml二氯甲烷使反应停止。然后用水将反应液体洗涤至中性。用水洗涤后，将反应液体浓缩至干燥，得到乳酸聚合物。在所得乳酸聚合物中，末端羧基的量为约80μmol每克聚合物，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量为7.29％重量。

参考例3(1)

将参考例1中获得的聚合物溶于600ml二氯甲烷中。将所得溶液用水洗涤至中性后，加入70g 90％乳酸水溶液，并使其在40℃下反应。当溶于反应液体中的聚合物的重均分子量变为约20,000时，将反应液体冷却至室温，并倒入600ml二氯甲烷使反应停止。用水将反应液体洗涤至中性后，将反应液体滴加入2800g异丙基醚中。如此沉淀所需的乳酸聚合物。将通过滗析收集沉淀物溶于600ml二氯甲烷中。将所得溶液浓缩至干燥，得到160g乳酸聚合物。在所得乳酸聚合物中，末端羧基的量为约70μmol每克聚合物。表1给出使用的高分子量乳酸聚合物的重均分子量，通过水解生产的乳酸聚合物的重均分子量，获得的目标乳酸聚合物的重均分子量和分子量分布。

参考例3(2)至(6)

本发明的乳酸聚合物按照与参考例3(1)类似的方式获得。表1给出使用的高分子量乳酸聚合物的重均分子量、通过水解生产的乳酸聚合物的重均分子量，获得的目标乳酸聚合物的重均分子量和分子量分布。

[表1]

表1说明，在通过本发明方法生产的各乳酸聚合物中，具有重均分子量5000或更低的聚合物的含量为至多约5％重量；具有重均分子量3000或更低的聚合物的含量为至多约1.5％重量；和具有重均分子量1000或更低的聚合物的含量为至多约0.1％重量。

比较例1

在354.3g二氯甲烷中，溶解205.5g按与参考例3(1)类似方式获得的DL-乳酸聚合物(具有重均分子量21,400和羧基含76.1μmol/g，通过标签定量法测量)。将所得溶液在减压下用0.2μm过滤器(DFA4201FRP，EMFLOW)过滤并调节至28.8℃。称出380.4g所得有机溶剂溶液后，将其与预先加热至55.4℃的16.11g肽A乙酸酯在16.22g蒸馏水中的溶液混合。将该混合物搅拌1分钟使其粗略乳化，然后用微型混合器在10,150rpm下乳化2分钟，形成W/O乳液。冷却至18℃后，将该W/O乳液在3分10秒内倒入预先调节至18.7℃的2510.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由TheNippon Synthetic制造)水溶液中，然后用Homomic Line Flow(manufacturedby Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.)在7,001rpm下搅拌，形成W/O/W乳液。将该W/O/W乳液的温度在30分钟内调节至约18.5℃，然后在不调节温度下搅拌2小时30分钟，将二氯甲烷和乙醇挥发或扩散入外水相中，使油相固化。通过75μm筛目筛子后，将微球继续沉淀并用离心机在2,000rpm下收集(H-600S，Kokusan Corporation制造)。将收集的微球再次分散到少量蒸馏水中并通过90μm筛目筛子。向其中加入18.85g甘露糖醇并溶解。将该混合物冷冻干燥获得微球粉末。所得微球粉末的质量和收率分别为117.6g和68.54％。肽A的含量为7.76％。图1给出所得微球的电子照片。

实施例1

在354.3g二氯甲烷中，溶解205.4g按与参考例3(1)类似方式获得的DL-乳酸聚合物(具有重均分子量21,400和羧基含76.1μmol/g，通过标签定量法测量)。将所得溶液的温度调节至30℃。称出380.5g所得有机溶剂溶液后，将其与预先加热至55℃的16.1g leuprorelin乙酸酯在16.2g蒸馏水中的溶液混合。将该混合物用微型混合器(Tokushu Kika Kogyo Co.，Ltd.)(旋转速度约10,000rpm)乳化形成W/O乳液。冷却至约18℃后，将该W/O乳液倒入25升0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由The Nippon Synthetic制造)+1％甘露糖醇水溶液中，然后用Homomic Line Flow(Tokushu Kika KogyoCo.，Ltd.制造)(在涡轮机转速7,000rpm和循环泵旋转速度约2000下)二次乳化形成W/O/W乳液。将该W/O/W乳液进行水中干燥约3小时，通过标准75μm筛目筛子，然后离心(H-600S，Kokusan Corporation制造)，由此连续沉淀和收集微球(在转速约2000rpm和流速约600ml/min下)。将收集的微球再次分散到少量蒸馏水中并通过标准90μm筛目筛子。向其中加入18.9g甘露糖醇。将该混合物用冷冻干燥器(Triomaster，Kyowa VacuumEngineering制造)冷冻干燥获得粉末(微球粉末)。图2给出所得微球的电子照片。

实验实施例1

在一带外套的9P小瓶中称取约660mg比较例1或实施例1中生产的微球粉末，然后将该小瓶用橡胶塞塞住并用螺旋盖密封。向该小瓶中加入1.5ml用于leuprorelin乙酸酯的分散介质(5％甘露糖醇，1％carmellose钠和0.1％polysorbate 80的混合物)，并测量达到均匀分散所需的时间。

按照附在leuprorelin乙酸酯小瓶制剂上的规程将各微球粉末通过在约7cm振摇宽度下和振摇速度约30次/10秒下分散。结果在表2中给出。

[表2]

实验实施例2

将约660mg比较例1或实施例1中生产的微球C粉末倒入14φ型DPS(双室预填充注射器)，其中装有用于leuprorelin乙酸酯的分散介质(分散液体的量为：1.5ml)，，并悬浮。测量达到均匀分散所需的时间。

按照附在leuprorelin乙酸酯DPS制剂上的规程，将各微球粉末通过在约7cm振摇宽度下和振摇速度约50次/10秒下在手掌上轻敲注射器来分散。结果在表3中给出。

[表3]

工业实用性

本发明的微球具有改进的分散性，并可以高浓度分散在分散介质如注射用蒸馏水中。

Claims

1、一种生产具有改进的分散性能的微球的方法，该方法包括在通过水中干燥法生产微球时将渗透压调节剂加入外水相中。

2、按照权利要求1的方法，其中分散性能改进到这样的程度：400至700mg微球在少于两分钟内分散在1.5ml注射用分散介质中。

3、按照权利要求1的方法，其中将W/O/W型乳液用于水中干燥法中。

4、按照权利要求3的方法，还包括将药物载体加入内水相中。

5、按照权利要求1的方法，其中将O/W型乳液用于水中干燥法中。

6、按照权利要求1的方法，其中将S/O/W型乳液用于水中干燥法中。

7、一种生产微球的方法，包括将W/O型乳液分散在含渗透压调节剂的外水相中，其中W/O型乳液由含生理活性物质或其盐的内水相和含重均分子量15000至50000的乳酸聚合物或其盐的溶液的油相组成；将该分散体进行水中干燥法干燥。

8、按照权利要求7的方法，其中具有重均分子量5000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为10％重量或更低。

9、按照权利要求7的方法，其中具有重均分子量5000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为5％重量或更低。

10、按照权利要求7的方法，其中具有重均分子量3000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为1.5％重量或更低。

11、按照权利要求7的方法，其中具有重均分子量1000或更低的聚合物在乳酸聚合物或其盐中的含量为0.1％重量或更低。

12、按照权利要求7的方法，其中乳酸聚合物或其盐的重均分子量为15000至40000。

13、按照权利要求7的方法，其中乳酸聚合物或其盐的重均分子量为17000至26000。

14、按照权利要求1或7的方法，其中该渗透压调节剂为醇、糖、氨基酸、肽、蛋白质、水溶性氨基酸的盐、或其衍生物或其混合物。

15、按照权利要求1或7的方法，其中渗透压调节剂为甘露糖醇。

16、按照权利要求1或7的方法，其中渗透压调节剂在外水相中的浓度是外水相渗透压为等渗氯化钠溶液渗透压的1/50至5倍时的浓度。

17、按照权利要求7的方法，其中生理活性物质为水溶性生理活性物质。

18、按照权利要求7的方法，其中生理活性物质为生理活性肽。

19、按照权利要求7的方法，其中生理活性物质为LH-RH衍生物。

20、按照权利要求7的方法，其中LH-RH衍生物为如下通式表示的肽：

5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

其中Y表示DLeu，DAla，DTrp，DSer(tBu)，D2Nal或DHis(ImBzl)，Z表示NH-C₂H₅或Gly-NH₂，或其盐。

21、由按照权利要求1或7的方法生产的具有改进的分散性能的微球。

22、一种缓释组合物，包括权利要求21的微球。

23、按照权利要求22的用于预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌，或用于避孕的缓释组合物。

24、按照权利要求22的缓释组合物，其用于注射。

25、按照权利要求22的缓释组合物，其进一步包括甘露糖醇。

26、按照权利要求22的缓释组合物，其在总组合物中包括至少70％重量的微球。

27、权利要求22的缓释组合物在制备预防或治疗前列腺癌、前列腺肥大、子宫内膜异位、子宫肌瘤、子宫纤维瘤、青春期早熟、痛经、或乳腺癌或避孕的药物中的用途。