CN101433608A

CN101433608A - 固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法

Info

Publication number: CN101433608A
Application number: CNA2008101539841A
Authority: CN
Inventors: 刘岱琳; 朱珊; 马荣; 陈虹; 张静泽; 白淑芳; 高颍; 曹波
Original assignee: MEDICAL COLLEGE CHINESE PEOPLE'S ARMED POLICE FORCES
Current assignee: MEDICAL COLLEGE CHINESE PEOPLE'S ARMED POLICE FORCES
Priority date: 2008-12-11
Filing date: 2008-12-11
Publication date: 2009-05-20

Abstract

本发明一种固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法，固公果根中治疗腹泻的有效部位用下述方法制成：(1)固公果根加水提取，得提取液；(2)将步骤(1)获得的产物经大孔树脂吸附，用水及体积百分比浓度为10％～95％的乙醇水溶液梯度洗脱，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，减压浓缩，得糖度为10～40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位。实验获知：固公果根的有效部位具有较好的涩肠止泻、治疗腹泻的作用。本发明一种固公果根中治疗腹泻的有效部位比传统的水提直接入药，其有效成分更加富集，成分清楚，含量稳定，药效更加确切。在治疗腹泻疾病方面的优势明显。因此在临床治疗腹泻方面具有广阔的应用前景。

Description

固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法

技术领域

本发明涉及一种药用植物的有效部位及制备方法及用途，特别是涉及一种固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法及用途。

背景技术

固公果根是彝族民间用药，为蔷薇科植物固公果(Rose odorata Sweet var.gigantea(Coll.etHemsl.)Rehd.etWils)的根入药。固公果根性平、味酸，具有涩肠止泻的功效，常用于治疗腹泻、菌痢等疾病^[1]。到目前为止尚没有关于固公果根化学成分研究的详尽文献报道，只是通过分析1974年云南地方药品标准(滇Q/WS269-1974)中关于固公果根药材的资料^[2]和目前国家药品监督管理局制定的肠舒片试行标准中关于固公果根药材的定性定量鉴别方法^[3]确定固公果根中含有鞣质和生物碱类化学成分。

参考文献：

[1]任洁，何广新.苗药-固公果阿江制剂-“肠康胶囊”的质量标准研究[J]，中国民族民间医药杂志，1998，31：41～42.

[2]固公果根的质量标准，云南地方药品标准1974版.

[3]肠舒片的质量标准，国家药品监督管理局2002-2004年试行标准

发明内容

本发明的目的是提供一种固公果根中治疗腹泻的有效部位。

本发明的第二个目的是提供一种固公果根中治疗腹泻的有效部位的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种固公果根中治疗腹泻的有效部位在制备治疗腹泻药物中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

一种固公果根中治疗腹泻的有效部位，用下述方法制成：

(1)采用下述步骤之一种进行提取：

①以质量比为1：3—12的比例，以固公果根为原料加水，在50—100℃浸泡提取1-8小时，提取1-6次，过80-120目筛，得提取液；

②以质量比为1：3—12的比例，以固公果根为原料加体积百分比浓度为10％～95％的乙醇水溶液或体积百分比浓度为10％～95％的甲醇水溶液在50—100℃浸泡提取1-8小时，提取1-6次，过80-120目筛，在温度30-60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度2-40，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:1～10的比例分散至水中；

(2)将所述步骤(1)获得的产物经大孔树脂吸附，用水及体积百分比浓度为10％～95％的乙醇水溶液或水及体积百分比浓度为10％～95％的甲醇水溶液梯度洗脱，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度30-60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10～40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位。

所述大孔树脂的型号为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。

一种固公果根中治疗腹泻的有效部位的制备方法，由如下步骤组成：

(1)采用下述步骤之一种进行提取：

一种固公果根中治疗腹泻的有效部位在制备治疗腹泻药物中的应用。

固公果根的原料为蔷薇科植物固公果，又名大花香水月季(Rose odorata Sweetvar.gigantea(Coll.et Hemsl.)Rehd.etWils)的根。

本发明的一种固公果根中治疗腹泻的有效部位利用高校液相色谱仪分析并与标准品相对照，其主要成分有鞣质类的单体儿茶素、没食子酸、二聚体原花青素B3等，以及三萜类成分野蔷薇苷和刺藜苷等。且有效部位中鞣质含量大于50％，三萜含量大于10％。在此分析基础上，我们通过实验获知：固公果根的有效部位具有较好的涩肠止泻，治疗腹泻的作用。本发明的一种固公果根中治疗腹泻的有效部位来自于彝族民间用药，本有效部位比传统的水提直接入药，其有效成分更加富集，成分清楚，含量稳定，药效更加确切。在治疗腹泻疾病方面的优势明显。因此在临床治疗腹泻方面具有广阔的应用前景。

本发明的制备方法，为进一步综合开发利用彝族药材固公果根奠定良好的产业化工作基础。

具体实施方式

我们课题组在对固公果根化学成分进行系统研究过程中也已确认鞣质和三萜类成分为固公果根的主要化学成分。研究表明该有效部位(鞣质含量大于50％，三萜含量大于8％)能够对胃肠道蠕动具有抑制作用，阻碍胃内容物向肠道移行，达到收敛涩肠的药理作用。因此确定该有效部位为固公果根中治疗腹泻，菌痢的有效部位。

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1 鞣质含量测定方法

仪器：岛津1601分光光度计；HZQ-QX型电动振荡机(东联电子技术开发有限公司)

标准品与试剂：没食子酸对照品(含量98％)；干酪素(化学纯)；碳酸钠；钨酸钠；钼酸钠；

硫酸锂(以上试剂均为分析纯)。

磷钼钨酸试剂的配制：取钨酸钠100g，钼酸钠25g，加水700mL使溶解，加盐酸100mL，磷酸50mL，加热回流10h，放冷，再加硫酸锂150g，水50mL和溴0.2mL，煮沸除去残留的溴(约15min)，冷却，加水稀释至1000mL，滤过，即得。

干酪素法标准曲线的绘制

对照品溶液的配制

精密称取没食子酸标准品0.050g，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解，定容，混匀后，精密吸取5.0mL置于100mL棕色容量瓶中，定容，混匀，备用(每mL含没食子酸0.025mg)。标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于25mL棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加入水11.5mL、11mL、10mL、9mL、8mL、7mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min，以相应试剂为空白，按照紫外—可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录IVA)，在760nm的波长处测定吸光度，以浓度(mg/mL)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

线性回归方程为Y＝4.0662X—0.0434(R＝0.9997)

鞣质含量的测定

总酚的测定：取固公果根提取液1.0mL，稀释400倍后，精密量取2.0mL置于25mL棕色容量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，再分别加入水10mL，依法测定吸光度，代入线形回归方程，计算，即得。

不被吸附的多酚的测定：精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的100mL具塞锥形瓶中，密塞，置于30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL，置于25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，再分别加入水10mL，依法测定吸光度，代入线形回归方程，计算，即得。

按下式计算鞣质的含量：鞣质含量＝总酚量—不被吸附的多酚量

实施例2

固公果根中总三萜含量测定方法

试验材料：无水乙醇、95％乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛、浓硫酸等均为分析纯试剂；熊果酸标准对照品(中国药品生物制品检定所)；UV-1601紫外可见分光光度计(日本岛津公司)。

试验方法：(1)熊果酸对照品最佳检测波长的确定及标准曲线的绘制。精确称取烘至恒重的熊果酸对照品4.0mg，加无水乙醇溶解后定容至50mL，质量浓度为0.08mg/mL。取一定量的熊果酸对照品溶液于10mL的试管中，加入新配置的香草醛-5％冰醋酸0.2ml及高氯酸0.8ml60C时水浴加热15min，冰水冷却，加冰醋酸5ml，静置，UV-1601型紫外分光光度计在200～700nm波长范围内扫描，显示熊果酸在550nm处有最大的吸光度。然后分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL按相同方法处理，在550nm处测定其吸光度，以吸光度(A)与熊果酸质量求得回归方程并绘制出熊果酸对照品的标准曲线。通过线性回归计算，得出回归方程为：y＝0.1015x+0.0065，线性相关系数r＝0.9992，熊果酸质量在0.016～0.096mg范围内与吸光度呈现良好的线性关系

(2)提取物样品溶液的配制和含量测定。称取50mg固公果根提取物置于100mL容量瓶中，用95％乙醇溶解并定容至刻度。准确移取1.0mL于25mL容量瓶中，95％乙醇定容，即为样品待测液，然后准确移取0.5mL待测液按(1)方法测定其吸光度，通过回归方程求出吸光度对应的三萜质量，计算总三萜含量。

实施例3

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量3倍的水，在50℃提取6次，每次8小时，过80目筛，得提取液；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂吸附，大孔树脂的型号为AB-8型，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为20的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为52％，总三萜含量为10.2％。

实施例4

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量12倍的水，在100℃提取1次，每次4小时，过120目筛，得提取液；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂吸附，大孔树脂的型号为HP20型，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度30℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为54％，总三萜含量为11.4％。

实施例5

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量5倍的体积百分比浓度为95％的乙醇水溶液，在50℃提取3次，每次3小时，过80目筛，得提取液，在温度40℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度40，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:10的比例分散至水中；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂HPD100型吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度40℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为51％，总三萜含量为12.1％。

实施例6

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量3倍的体积百分比浓度的60％的乙醇水溶液，在100℃提取3次，每次1小时，过80目筛，得提取液，在温度60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度10，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:5的比例分散至水中；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂HPD100A型吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度50℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为30的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为55％，总三萜含量为10.9％。

实施例7

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量12倍的体积百分比浓度为10％的乙醇水溶液为提取溶剂，在100℃提取1次，每次8小时，过120目筛，得提取液，在温度30℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度2，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:1的比例分散至水中；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂HPD300型吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为30的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为51.7％，总三萜含量为11.2％。

实施例8

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量10倍的95％的甲醇水溶液为提取溶剂，在80℃提取2次，每次4小时，过100目筛，得提取液，在温度60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度40，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:8的比例分散至水中；；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂D101型吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为53.1％，总三萜含量为10.9％。

实施例9

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量10倍的体积百分比浓度10％的甲醇水溶液为提取溶剂，在100℃提取4次，每次2小时，过100目筛，得提取液，在温度30℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度5，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:2的比例分散至水中；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行大孔树脂D101型吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度30℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为56.1％，总三萜含量为10.2％。

实施例10

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量10倍的体积百分比浓度为10％的甲醇水溶液为提取溶剂，在100℃提取4次，每次2小时，过100目筛，得提取液，在温度40℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度5，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:2的比例分散至水中；；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行D101型大孔树脂吸附吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为52.7％，总三萜含量为9.8％。

实施例11

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量8倍的体积百分比浓度为60％的甲醇水溶液为提取溶剂，在50℃提取6次，每次7小时，过80目筛，得提取液，在温度50℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度12，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:4的比例分散至水中；；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行DA-201型大孔树脂吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为20的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为51.5％，总三萜含量为12.4％。

实施例12

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量10倍的水溶液，在50℃提取6次，每次8小时，过120目筛，得提取液；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行X-5型大孔树脂吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为40的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为57.2％，总三萜含量为8.9％。

实施例13

(1)以固公果根500g为原料，加入所述原料质量10倍的体积百分比浓度为60％的乙醇水溶液为提取溶剂，在80℃提取3次，每次4小时，过100目筛，得提取液，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩至糖度30，得到提取物，将所述提取物以质量比为1:7的比例分散至水中；；

(2)将所述步骤(1)获得的产物进行NKA-II型大孔树脂吸附，用水、体积百分比浓度为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液梯度洗脱，每250ml作为一个接收体积，洗脱液通过薄层层析方法并结合分析型HPLC检测，收集富含鞣质和三萜的组分，将其合并，在温度≤60℃，真空度为0.06～0.08MPa减压浓缩，得糖度为10的浓缩物，干燥，得到固公果根中治疗腹泻的有效部位，其中鞣质含量为54.2％，总三萜含量为12.6％。

实施例14

固公果根中治疗腹泻的有效部位的药效学试验研究

实验动物昆明种小鼠18-22g(普通级)，雌雄各半，由北京试验动物研究中心提供。

试验试剂：固公果根中治疗腹泻的有效部位，思密达(天津博福-益普生制药有限公司)，使用时配成0.075g/mL的混悬液。蓖麻油(天津试剂厂)；新斯的明(上海第九制药厂)；印度墨汁(北京市有机化工厂)。

实验方法：

受试动物分组及给药剂量：动物随机分组；空白对照组：生理盐水，灌胃，0.2mL/10g，2次/d；模型对照组：生理盐水，灌胃，0.2mL/10g，2次/d；思密达对照组：思密达混悬液，灌胃，0.2mL/10g，2次/d；固公果根中治疗腹泻的有效部位高剂量组、中剂量组和低剂量组分别按照50g/kg、25g/kg、12.5g/kg，0.2mL/10g进行灌胃，2次/d。

对蓖麻油致鼠泄泻的影响：将小鼠50只随机分为5组，即模型对照组、思密达对照组、固公果根中治疗腹泻的有效部位高剂量组、中剂量组和低剂量组。按照上文中给药剂量进行给药，连续3天，末次给药后1h，按0.1mL/10g灌胃蓖麻油，每笼1只，笼下铺吸水纸作湿粪计数，以湿粪多少表示腹泻程度。给蓖麻油后1-6h，换吸水纸1次/h，计算各鼠6h湿粪数。试验结果见下表。

表1 固公果根中治疗腹泻的有效部位各剂量组对蓖麻油致鼠泄泻的试验影响(n＝10，x±s)

注：与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。

对小鼠小肠推进的影响将小鼠60只随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、思密达对照组、固公果根中治疗腹泻的有效部位高、中、低剂量组。每组分别按照给药剂量给药，连续3d，2次/d。后5组于末次给药(水)20min后皮下注射新斯的明(1mg/kg)，再过20min后灌胃墨汁(0.2mL/10g)，空白组给水40min后灌胃墨汁(0.2mL/10g)。灌墨汁后30min脱臼处死小鼠，迅速打开腹腔，分离肠系膜，剪幽门至回盲部的肠管置于平台上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为总长度，从幽门至墨汁前沿的距离作为“墨汁推进长度”，计算墨汁推进率。

墨汁推进百分率(％)＝墨汁在肠内推进距离(cm)/小肠全长(cm)×100％。

表2 固公果根中治疗腹泻的有效部位对新斯的明致小鼠小肠运动亢进的影响(n＝10，x±s)

注：与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01。

上述试验说明有本发明制备得到的产物能够抑制由蓖麻油诱发小鼠腹泻，同时对新斯的明致小鼠小肠运动亢进有明显的缓解作用。说明该提取物(鞣质含量大于50％，三萜含量大于8％)为固公果根中治疗腹泻的有效部位。

Claims

1.一种固公果根中治疗腹泻的有效部位，其特征是用下述方法制成：

(1)采用下述步骤之一种进行提取：

2.根据权利要求1所述的一种固公果根中治疗腹泻的有效部位，其特征是所述大孔树脂的型号为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。

3.一种固公果根中治疗腹泻的有效部位的制备方法，其特征是由如下步骤组成：

(1)采用下述步骤之一种进行提取：

4.根据权利要求3所述的一种固公果根中治疗腹泻的有效部位的制备方法，其特征是所述大孔树脂的型号为AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。

5.权利要求1或2所述一种固公果根中治疗腹泻的有效部位在制备治疗腹泻药物中的应用。