CN101430333B - 活体相关物质的非特异性吸附抑制剂及涂覆制品的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，所述抑制剂抑制活体相关物质如在临床诊断试剂、临床诊断设备、生物芯片等中使用的各种蛋白质的非特异性吸附，本发明还涉及用所述非特异性吸附抑制剂涂覆制品的方法。

Description

活体相关物质的非特异性吸附抑制剂及涂覆制品的方法

发明领域

本发明涉及一种活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，所述抑制剂抑制活体相关物质如在临床诊断试剂、临床诊断设备、生物芯片等中使用的各种蛋白质的非特异性吸附，本发明也涉及用所述非特异性吸附抑制剂涂覆制品的方法。

背景技术

近年来，高灵敏度试验已为疾病的早期检测等目的所需要，诊断试剂灵敏度的提高是一个重要的问题。此外，在使用固相如聚苯乙烯板和磁性粒子的诊断试剂情况下，为提高灵敏度的目的，检测方法正从使用酶显色的方法向使用可获得更高灵敏度的荧光或化学发光的方法转变。但实际上尚未获得足够的灵敏度。一个原因是，在活体分子如血清共存下检测特定物质的诊断情况下，共存的活体分子、第二抗体、发射基质等会非特异性地附着到固相、工具、容器等上。因此，噪声增大，阻碍灵敏度的提高。相应地，在诊断免疫检测情况下，为了减少由除特异性结合物质之外的物质向免疫反应中所用的固相的表面以及工具和容器上的非特异性吸附所引起的灵敏度降低，通常通过使用源自生物体的物质如白蛋白、酪蛋白和明胶作为非特异性吸附抑制剂来抑制非特异性吸附，从而降低噪声。

但即便加入常规方法得到的非特异性吸附抑制剂，非特异性吸附仍然存在。此外，当使用源自活体的非特异性吸附抑制剂时，存在以BSE为代表的生物体污染的问题。因此通过化学合成开发高性能的非特异性吸附抑制剂是需要的。

作为化学合成的非特异性吸附抑制剂，JP-A-10-153599和JP-A-11-352127中提出了含聚氧乙烯的聚合物，日本专利第3443891号中提出了特定的甲基丙烯酸类共聚物。但它们的非特异性吸附抑制效果不足。

发明内容

本发明提供一种活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，其可抑制活体相关物质如蛋白质向诊断化学发光免疫检测等中所用的固相表面和工具及容器上的非特异性吸附，本发明也提供用所述非特异性吸附抑制剂涂覆制品的方法。

根据本发明的一个实施方案的用于活体相关物质的非特异性吸附抑制剂包含共聚物，所述共聚物包含下式(1)所代表的重复单元(A)：

其中，R⁰代表氢原子或甲基，Z代表下式(1a)或(1b)所代表的基团：

其中，R¹和R²独立地代表氢原子、含1-8个碳原子的烷基或被至少一种选自羟基、羧基、烷氧基、酰氧基和烷氧基羰基的基团所取代的含1-8个碳原子的烷基；

其中，R³和R⁴独立地代表单键、亚甲基、被羟基或羧基取代的亚甲基、含2-7个碳原子的亚烷基或被羟基或羧基所取代的含2-7个碳原子的亚烷基，其中R³和R⁴的碳原子的总数为4-10；其中R³和R⁴中的至少一个可具有醚键，Y代表单键、O和S中的任意一个，和

下式(2)所代表的重复单元(B)：

其中，R⁵代表氢原子或甲基，和

R⁶代表苯基或-CO₂R⁷所代表的基团，其中R⁷代表含1-12个碳原子的取代或未取代烷基、脂环烃或芳香烃。

具体实施方式

为了解决上述问题，本发明的发明人已发现特定组成的共聚聚合物对活体相关物质具有高的非特异性吸附抑制效果，从而完成本发明。

根据本发明，所述活体相关物质是指脂类、蛋白质、糖类或核酸。

根据活体相关物质的上述非特异性吸附抑制剂的上述式(1)，R¹可代表氢原子或甲基，R²可代表选自氢原子、甲基和羟乙基中的至少一种。

根据活体相关物质的上述非特异性吸附抑制剂，上述重复单元(B)可为衍生自至少一种水中溶解度低于20％的单体的结构。

根据活体相关物质的上述非特异性吸附抑制剂的上述式(2)，R⁵可代表氢原子或甲基，R⁶可代表-CO₂R⁷基团，R⁷可代表选自甲基、乙基和甲氧基乙基中的至少一种。

根据活体相关物质的上述非特异性吸附抑制剂，前述共聚物可进一步包含下式(3)所代表的重复单元(C)：

其中，R⁸代表氢原子或甲基，R⁹代表包含至少一个醛基或酮基的有机基团。

根据活体相关物质的上述非特异性吸附抑制剂，其还可包含酰肼化合物(H)，每一分子所述酰肼化合物(H)包含至少两个肼基。

根据本发明的一个实施方案的用于涂覆制品的方法包括使制品与包含上述活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的溶液接触的步骤。

下面将示例性地描述根据本发明的一个实施方案的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂和用所述非特异性吸附抑制剂涂覆制品的方法。

1. 活体相关物质的非特异性吸附抑制剂

1.1 活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的构成

1. 本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂包含共聚物，所述共聚物包含下式(1)所代表的重复单元(A)：

其中，R⁰代表氢原子或甲基，Z代表下式(1a)或(1b)所代表的基团：

其中，R¹和R²独立地代表氢原子、含1-8个碳原子的烷基或被至少一种选自羟基、羧基、烷氧基、酰氧基和烷氧基羰基的基团所取代的含1-8个碳原子的烷基；

其中，R³和R⁴独立地代表单键、亚甲基、被羟基或羧基取代的亚甲基、含2-7个碳原子的亚烷基或被羟基或羧基所取代的含2-7个碳原子的亚烷基，其中R³和R⁴的碳原子的总数为4-10；其中R³和R⁴中的至少一个可具有醚键，Y代表单键、O和S中的任意一个，和

下式(2)所代表的重复单元(B)：

其中，R⁵代表氢原子或甲基，和

R⁶代表苯基或-CO₂R⁷所代表的基团，其中R⁷代表含1-12个碳原子的取代或未取代烷基、脂环烃或芳香烃。

本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂可含上述共聚物作为其一部分或者可单独由上述共聚物构成。

1.2 活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的物理性质和应用

关于本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，上述共聚物的数均分子量通常为1,000到1,000,000，优选2,000到100,000，更优选3,000到50,000。此外，上述共聚物的分子量分布通常为1.5到3(重均分子量/数均分子量)。这是因为当上述共聚物的数均分子量低于上述范围时，存在非特异性吸附抑制效果不足的情况。另一方面，当上述共聚物的数均分子量高于上述范围时，存在因溶液粘度的增加而变得难以进行涂覆和操作的情况。

本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂中所含的共聚物是水溶性的。根据本发明，“水溶性的”是指当将共聚物加到25℃的水中并与水混合至聚合物固含量为1％时，肉眼观察到所述共聚物透明地或半透明地溶解于水中。

本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂具有高的非特异性吸附抑制效果。本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂可示例性地以如下方式起作用。

根据本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，所述非特异性吸附抑制剂可通过上述共聚物的重复单元(B)的疏水键附着到容器壁表面、工具等上，并且蛋白质、脂类等的非特异性吸附也可因壁表面通过重复单元(A)变得亲水而得到抑制。

由于本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂因拥有其中重复单元(A)和重复单元(B)相平衡的共聚物而表现出高吸附速率，故其尤其可有效地抑制蛋白质等引起非特异性吸附的物质吸附至容器壁表面、工具等。

此外，根据本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，上述共聚物的重复单元(B)与蛋白质相互作用，并且重复单元(A)具有水分散活性。因此，其可通过阻止蛋白质通过构象变化而变为疏水性，从而实现蛋白质在含水溶剂中的增溶。

例如通过将本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂涂覆到容器、工具等上的方法或加入到诊断试剂的稀释剂、反应溶剂或防腐剂中的方法，其表现出强烈抑制蛋白质等的非特异性吸附的效果。也就是说，根据本发明一个实施方案的用于涂覆制品的方法包括使所述制品与包含本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的溶液接触的步骤。

此外，通过用作免疫诊断试剂的稀释剂，本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂可抑制非特异性分析物的信号。

此外，当被加到蛋白质溶液中例如作为用作临床诊断试剂的标记抗体、标记抗原、酶、第一抗体或第一抗原的稳定剂、血浆制剂中所含蛋白质的稳定剂、清洗隐形眼镜中使用的酶等的稳定剂等时，本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂具有长时间保持蛋白质活性的效果。

1.3 重复单元(A)

在上述共聚物中，上述式(1)所代表的重复单元(A)可有助于高的非特异性吸附抑制效果的表达。

由上述式(1a)中R¹和R²所代表的含1-8个碳原子的取代或未取代烷基的实例包括取代或未取代的直链或支化烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、和这些基团被官能团如羟基、烷氧基等所取代的基团。

更示例性地，优选在上述式(1)中，R¹代表氢原子或甲基，R²代表选自氢原子、甲基和羟乙基中的至少一种。

此外，与上述式(1b)对应的环结构的实例包括吡咯烷基、哌啶子基、吗啉代、硫代吗啉代等。

1.4 重复单元(B)

在上述共聚物中，通过使共聚物的亲水/疏水平衡移向疏水侧，上述式(2)所代表的重复单元(B)可有助于高的非特异性吸附抑制效果的表达。

由上述式(2)中R⁵所代表的含1-12个碳原子的取代或未取代烷基的实例包括取代或未取代的直链或支化烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、和这些基团被官能团如羟基、烷氧基所取代的基团。

此外，上述式(2)中R⁵所代表的脂环烃的实例包括异冰片基(isobonyl group)和环己基，R⁵所代表的芳香烃的实例包括苄基。

此外，优选在上述式(2)中R³代表氢原子或甲基，R⁴为-CO₂R⁵所代表的基团，R⁵代表选自甲基、乙基和甲氧基乙基中的至少一种。

此外，在上述共聚物中可分别含至少一种或多种重复单元(A)和重复单元(B)。就此而论，除重复单元(A)和重复单元(B)外，上述共聚物还可含重复单元(C)。

1.5 重复单元(C)

根据本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，上述共聚物还可含下式(3)所代表的重复单元(C)：

其中，R⁸代表氢原子或甲基，R⁹代表包含至少一个醛基或酮基的有机基团。在上述共聚物中，重复单元(C)可有助于提高所形成的涂覆膜(非特异性吸附抑制剂层)的耐久性。

根据本发明，醛基是指与一个碳原子相连的醛基，酮基是指与两个碳原子相连的羰基，不包括羧基和氨基。

在上述式(3)中，R⁸优选为氢原子。R⁹优选为具有醛基的有机基团，如甲酰基、甲酰基苯基、下式(4)所代表的含醛基的酯基：

其中，R¹⁰到R¹³独立地为氢原子、甲基或乙基；

下式(5)所代表的含醛基的酰胺基：

其中，R¹⁴到R¹⁷独立地为氢原子、甲基或乙基等；

或含有酮基的有机基团，如乙酰基、乙酰基苯基、下式(6)所代表的含酮基的酯基：

其中，R¹⁸到R²¹独立地为氢原子、甲基或乙基；

下式(7)所代表的含酮基的酰胺基：

其中，R²²到R²⁵独立地为氢原子、甲基或乙基等。

更优选作为R⁹的有机基团为甲酰基、乙酰基和下式(8)所代表的有机基团，最优选的有机基团为下式(8)所代表的有机基团。

1.6 酰肼化合物(H)

每一分子酰肼化合物(H)具有至少两个肼基。酰肼化合物(H)的实例包括总共含2-10个、特别是4-6个碳原子的二羧酸二酰肼，例如草酸二酰肼、丙二酸二酰肼、琥珀酸二酰肼、戊二酸二酰肼、己二酸二酰肼、癸二酸二酰肼、邻苯二甲酸二酰肼、间苯二甲酸二酰肼、对苯二甲酸二酰肼、马来酸二酰肼、富马酸二酰肼、衣康酸二酰肼等；含三个或更多官能团的酰肼如柠檬酸三酰肼、次氨基三乙酸(nitriloacetic acid)三酰肼、环己烷三羧酸三酰肼、乙二胺四乙酸四酰肼等；水溶性的二肼，例如含2-4个碳原子的脂肪族二肼等，如1，2-乙二肼、1，2-丙二肼、1，3-丙二肼、1，2-丁二肼、1，3-丁二肼、1，4-丁二肼、2，3-丁二肼等，和这类多官能度肼衍生物的至少部分肼基通过使其与羰基化合物(如乙醛、丙醛、丁醛、丙酮、甲基乙基酮、二乙基酮、甲基正丙基酮、甲基正丁基酮、双丙酮醇等)反应而被封端的化合物，例如己二酸二酰肼单丙酮腙、己二酸二酰肼双丙酮腙等。在这些酰肼化合物(H)中，优选的是，选自己二酸二酰肼、癸二酸二酰肼、间苯二甲酸二酰肼和己二酸二酰肼双丙酮腙中的至少一种。酰肼化合物(H)可单独使用或以两种或更多种物质的混合物使用。

优选酰肼化合物(H)的用量为使得上述共聚物中醛基和酮基的总量与酰肼化合物(H)的肼基的摩尔当量比在1:0.1-5、优选1:0.5-1.5、更优选1:0.7-1.2范围内。在这种情况下，当肼基少于1当量(基于1当量醛基和酮基总量)时，所形成的涂层(非特异性吸附抑制剂层)在某些情况下在耐久性方面会变差。另一方面，当肼基超过5当量时，非特异性吸附抑制效果在某些情况下会降低。

虽然酰肼化合物(H)可在制备本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的任选步骤中混入，但为了保持制备上述共聚物时的聚合稳定性，优选将全部量的酰肼化合物(H)在制备上述共聚物之后混入。

酰肼化合物(H)具有形成亲水网络结构的活性，从而在涂覆本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂后，在干燥步骤中通过所述酰肼化合物的肼基与上述共聚物的酮基和/或醛基的反应可实现非特异性吸附抑制剂层的交联。虽然该交联反应通常在常温且不使用催化剂下进行，但其可通过添加催化剂如水溶性的金属盐等例如硫酸锌、硫酸锰、硫酸钴等或通过加热进行干燥来加速。

2.活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的制备

接下来，描述制备上述共聚物所用的单体组合物。

2.1 单体(a)

重复单元(A)具有衍生自至少一种单体(a)的结构。优选单体(a)为至少一种选自丙烯酰胺和N-取代的丙烯酰胺单体的单体。

N-取代的丙烯酰胺单体的实例包括N，N-二甲基丙烯酰胺、N，N-二乙基丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-羟乙基丙烯酰胺、丙烯酰基吗啉、丙烯酰基吡咯烷、丙烯酰基哌啶等。

单体(a)更优选的实例包括选自丙烯酰胺、N-羟乙基丙烯酰胺和N，N-二甲基丙烯酰胺中的至少一种，还更优选的实例包括N，N-二甲基丙烯酰胺或N，N-二甲基丙烯酰胺与N，N-二乙基丙烯酰胺的组合。

2.2 单体(b)

重复单元(B)具有衍生自至少一种单体(b)的结构。单体(b)为至少一种水中溶解度低于20％的单体。

根据本发明，“水中溶解度低于20％的单体”是指这样的单体，即将该单体加到25℃的水中至20％的单体浓度并搅拌后肉眼可确定该单体与水相的分离。

由于单体(b)水中溶解度低于20％，故可表现出高的非特异性吸附抑制效果。

单体(b)的实例包括(甲基)丙烯酸甲氧基乙酯、(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸丁酯、(甲基)丙烯酸2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸环己酯、(甲基)丙烯酸异冰片酯、(甲基)丙烯酸苄酯、苯乙烯等。更优选的单体(b)为选自甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯和丙烯酸甲氧基乙酯中的至少一种。

2.3 单体组合物和聚合

根据本实施方案中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，除重复单元(A)和重复单元(B)外，其可含有重复单元(C)，并且还可含有重复单元(D)。

单体(c)为形成重复单元(C)的组分，单体(d)为形成重复单元(D)的组分。也就是说，重复单元(C)具有衍生自至少一种单体(c)的结构。重复单元(D)具有衍生自至少一种单体(d)的结构。

优选单体(c)为选自丙烯醛、甲酰基苯乙烯、乙烯基甲基酮、乙烯基苯基酮、具有上述式(4)-(7)所代表的基团的(甲基)丙烯酰胺和(甲基)丙烯酸酯中的至少一种。从共聚能力角度来看，更优选单体(c)为选自丙烯醛、乙烯基甲基酮和双丙酮丙烯酰胺中的至少一种。从单体的安全性角度来看，最优选单体(c)为双丙酮丙烯酰胺。

当将1-10重量％的阴离子单体，特别是苯乙烯磺酸、异戊二烯磺酸、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸等，用作其他单体(d)并与单体(a)和单体(b)(必要时还有单体(c))共聚生产共聚物且将产物用作免疫诊断试剂的稀释剂时，在某些情况下可获得抑制非特异性分析物的信号的效果。

用于制备上述共聚物的单体组合物优选含30-99重量％的单体(a)、1-70重量％的单体(b)、0-49重量％的单体(c)和0-49重量％的其他单体(d)，更优选含40-95重量％的单体(a)、5-60重量％的单体(b)、0-30重量％的单体(c)和0-20重量％的其他单体(d)，基于100重量％的全部单体。在特别需要耐久性的情况下，所述单体组合物优选含30-97重量％的单体(a)、1-68重量％的单体(b)、2-49重量％的单体(c)和0-49重量％的其他单体(d)，基于100重量％的全部单体。

当单体(a)和(b)在上述范围之外时，非特异性吸附抑制效果在某些情况下会变差。另外，当单体(c)低于2重量％时，耐久性在某些情况下会变差，而当其超过49重量％时，非特异性吸附抑制效果在某些情况下会变差。

所用的单体可在对作为工业原料购得的那些进行纯化后用于共聚或不经纯化直接用于共聚。

单体的聚合可通过例如常规已知的聚合方法如自由基聚合、阴离子聚合、阳离子聚合等进行，其中，从易于生产的角度来看，优选自由基聚合。

此外，单体的聚合通过将其与常规已知的溶剂、引发剂、链转移剂等一起搅拌和加热进行。聚合时间通常为30分钟到24小时，聚合温度约为0到120℃。

优选聚合后的共聚物水溶液经渗析膜、渗析器(Dialyzer)、Acilyzer等纯化。

3. 实施例和对比例

虽然下面结合实施例对本发明进行了更详细的描述，但本发明不限于此。

在实施例中，重均分子量(Mw)和数均分子量(Mn)通过使用单分散系聚乙二醇作为标准物的凝胶渗透色谱法(GPC)测定，并使用Tosoh Corporation生产的TSK凝胶α-M柱，分析条件为：流量1mL/min，洗脱溶剂为0.1mM的氯化钠水溶液/丙烯腈混合溶剂，柱温为40℃。吸光度通过Nippon Bio-Rad Laboratories生产的680型微孔板读数仪测定。

3.1 实施例1

3.1.1 非特异性吸附抑制剂(N-1)的合成

混合900g水、作为单体(a)的60g二甲基丙烯酰胺和30g二乙基丙烯酰胺、作为单体(b)的10g甲基丙烯酸甲酯和作为链转移剂的1g半胱胺盐酸盐，并将其投入装配了搅拌器的可分离式烧瓶中。用氮气向其中鼓泡，将内容物的温度升至70℃，加入2g 2，2′-偶氮双(2-甲基丙脒)二盐酸盐作为引发剂，然后聚合2小时。再将温度升至80℃进行3小时的熟化，然后降至室温。所得共聚物溶液用渗析器纯化，然后冻干得到95g该实施例的非特异性吸附抑制剂(N-1)。

GPC测得该非特异性吸附抑制剂(N-1)的数均分子量为8,000，重均分子量为16,000。

3.1.2 非特异性吸附抑制效果的测定

向由聚苯乙烯制得的96孔板(下文称“96孔板”)中灌入0.5％的非特异性吸附抑制剂(N-1)水溶液，并于37℃孵育30分钟，然后用离子交换水洗涤5次。接着向96孔板中灌入辣根过氧化物酶标记的小鼠IgG抗体(Millipore生产的“AP124P”)水溶液，并在室温下孵育30分钟，然后用PBS缓冲液洗涤三次。然后用TMB(3，3′，5，5′-四甲基联苯胺)/过氧化氢水溶液/硫酸显色以测定450nm下的吸光度。

3.2 实施例2和3

根据与实施例1相同的操作进行，不同的是单体根据表1中所示的单体比率使用。

3.3 对比例1

通过与实施例1中“3.1.1非特异性吸附抑制剂(N-1)的合成”相同的方法获得共聚聚合物(X-1)，不同的是：单独使用100g二乙基丙烯酰胺作为单体而不是使用60g二甲基丙烯酰胺和30g二乙基丙烯酰胺作为单体(a)以及10g甲基丙烯酸甲酯作为单体(b)。

GPC测得共聚聚合物(X-1)的数均分子量为5,200，重均分子量为13,000。

此外采用与“3.1.2非特异性吸附抑制效果的测定”相同的方法测定使用共聚聚合物(X-1)时的吸光度。

3.4 对比例2

通过与实施例1中“3.1.1非特异性吸附抑制剂(N-1)的合成”相同的方法获得共聚聚合物(X-2)，不同的是：单独使用100g二甲基丙烯酰胺作为单体而不是使用60g二甲基丙烯酰胺和30g二乙基丙烯酰胺作为单体(a)以及10g甲基丙烯酸甲酯作为单体(b)。

GPC测得共聚聚合物(X-2)的数均分子量为9,800，重均分子量为20,000。

此外采用与“3.1.2非特异性吸附抑制效果的测定”相同的方法测定使用共聚聚合物(X-2)时的吸光度。

3.5 对比例3

用牛血清白蛋白(BSA)代替实施例1中的非特异性吸附抑制剂(N-1)，并用与“3.1.2非特异性吸附抑制效果的测定”相同的方法测定使用BSA时的吸光度。

3.6 对比例4

根据与实施例1中“3.1.1非特异性吸附抑制剂(N-1)的合成”相同的方法进行，不同的是：单独使用100g甲基丙烯酸甲酯作为单体而不是使用60g二甲基丙烯酰胺和30g二乙基丙烯酰胺作为单体(a)以及10g甲基丙烯酸甲酯作为单体(b)。但由于加入引发剂后数分钟内生成大量的白色凝固物，故终止聚合。

3.7 对比例5

用市售聚乙烯基吡咯烷酮代替实施例1中的非特异性吸附抑制剂(N-1)。用与“3.1.2非特异性吸附抑制效果的测定”相同的方法测定使用BSA时的吸光度。

3.8 测定结果

上述实施例和对比例的非特异性吸附抑制效果的测定结果在表1中示出。

表1

根据表1可以确认，与使用仅衍生自二乙基丙烯酰胺或二甲基丙烯酰胺(对应于单体(a))的高聚物或使用牛血清白蛋白的情况相比，通过使用实施例1-3中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，小鼠IgG抗体对96孔板的非特异性吸附量可显著降低。

3.9 实施例4

3.9.1 非特异性吸附抑制剂(N-4)的合成

通过与实施例1中“3.1.1非特异性吸附抑制剂(N-1)的合成”相同的方法获得作为共聚聚合物的非特异性吸附抑制剂(N-4)，不同的是：使用56g二甲基丙烯酰胺和16g二乙基丙烯酰胺作为单体(a)、8g甲基丙烯酸甲酯作为单体(b)以及20g双丙酮丙烯酰胺作为单体(c)，而不是使用60g二甲基丙烯酰胺和30g二乙基丙烯酰胺作为单体(a)以及10g甲基丙烯酸甲酯作为单体(b)。

GPC测得该非特异性吸附抑制剂(N-4)的数均分子量为9,000，重均分子量为25,000。

此外，采用与“3.1.2非特异性吸附抑制效果的测定”相同的方法测定使用该非特异性吸附抑制剂(N-4)时的吸光度。

3.9.2 用表面活性剂洗涤后的非特异性吸附抑制效果的测定

向96孔板中灌入0.5％的非特异性吸附抑制剂(N-4)水溶液，并于37℃孵育30分钟，然后用离子交换水洗涤。残留的水用气枪吹掉。于40℃干燥3小时。再用聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(其为表面活性剂)洗涤三次。接着向96孔板中灌入辣根过氧化酶标记的小鼠IgG抗体(Millipore生产的“AP124P”)水溶液，并在室温下孵育30分钟，然后用PBS缓冲液洗涤三次。然后用TMB(3，3′，5，5′-四甲基联苯胺)/过氧化氢水溶液/硫酸显色以测定450nm下的吸光度。

3.10 实施例5

通过向10g非特异性吸附抑制剂(N-4)中加入1g己二酸二酰肼并使用0.55％的含非特异性吸附抑制剂(N-4)和己二酸二酰肼的水溶液，进行非特异性吸附抑制效果的测定，以及用表面活性剂洗涤后的非特异性吸附抑制效果的测定。

3.11 对比例6

使用BSA进行非特异性吸附抑制效果的测定以及用表面活性剂洗涤后的非特异性吸附抑制效果的测定。

3.12 测定结果

上述实施例4和5及对比例6的测定结果在表2中示出。

表2

根据表2可以确认，与对比例6中使用BSA的情况相比，通过使用实施例4和5中涉及的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，可显著降低用表面活性剂洗涤后的非特异性吸附量。特别是，根据实施例5可以确认，通过使用含酰肼化合物(H)的非特异性吸附抑制剂，可显著降低用表面活性剂洗涤后的非特异性吸附量。

根据上述活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，其具有高的特异性吸附抑制效果，因为其包含含有上述式(1)所代表的重复单元(A)和上述式(2)所代表的重复单元(B)的共聚物。

虽然前面已结合具体的实施例对本发明进行了详细描述，但对于本领域技术人员而言显而易见可以增加各种改变和变体，只要所述改变和变体不偏离本发明的精神和范围即可。

本专利申请基于2007年11月9日提交的日本专利申请2007-291793和2008年3月11日提交的日本专利申请2008-61119，其内容通过引用并入本文。

Claims (6)

1.一种活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，其包含水溶性共聚物，所述水溶性共聚物包含下式(1)所代表的重复单元A：

其中，R⁰代表氢原子或甲基，Z代表下式(1a)或(1b)所代表的基团：

其中，R¹和R²独立地代表氢原子、含1-8个碳原子的烷基或被至少一种选自羟基、羧基、烷氧基、酰氧基和烷氧基羰基的基团所取代的含1-8个碳原子的烷基；

其中，R³和R⁴独立地代表单键、亚甲基、被羟基或羧基取代的亚甲基、含2-7个碳原子的亚烷基或被羟基或羧基所取代的含2-7个碳原子的亚烷基，其中R³和R⁴的碳原子的总数为4-10；其中R³和R⁴中的至少一个可具有醚键，Y代表单键、O和S中的任意一个，和

下式(2)所代表的重复单元B：

其中，R⁵代表氢原子或甲基，和

R⁶代表苯基或-CO₂R⁷所代表的基团，其中R⁷代表含1-12个碳原子的取代或未取代烷基、脂环烃或芳香烃，

其中上述重复单元B为衍生自至少一种水中溶解度低于20％的单体的结构，

其中上述水溶性共聚物还包含下式(3)所代表的重复单元C：

其中，R⁸代表氢原子或甲基，R⁹代表包含至少一个醛基或酮基的有机基团。

2.根据权利要求1的所述活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，其中在上述式(1)中，

R¹代表氢原子或甲基，和

R²代表选自氢原子、甲基和羟乙基中的至少一种。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，其中在上述式(2)中，

R⁵代表氢原子或甲基；

R⁶代表-CO₂R⁷；和

R⁷代表选自甲基、乙基和甲氧基乙基中的至少一种。

4.根据权利要求1-2中任一项所述的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，所述抑制剂还包含酰肼化合物H，每一分子所述酰肼化合物H包含至少两个肼基。

5.根据权利要求3所述的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂，所述抑制剂还包含酰肼化合物H，每一分子所述酰肼化合物H包含至少两个肼基。

6.一种涂覆制品的方法，所述方法包括使所述制品与包含根据权利要求1-5中任一项所述的活体相关物质的非特异性吸附抑制剂的溶液接触的步骤。