CN101428020B - 一种苦参素冻干粉制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种苦参素冻干粉制剂及其制备方法，该方法通过将含有恰当配比的苦参素、甘露醇、依地酸二钠或依地酸钙钠3种成分的溶液过滤、冷冻干燥，制得冻干粉制剂。该制剂相对于现有产品，稳定性得到了显著提高，有效期可以长达24个月，且在有效期内产品的性状没有出现明显变化；而且制备方法相对于现有技术更为简化，节约了生产成本。本发明还提供了检测苦参素冻干粉制剂产品中氧化苦参碱含量的方法，通过对流动相、检测条件进行优选，建立了一种区分性更好、专属性更强的高效液相色谱检测方法。

Description

一种苦参素冻干粉制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种苦参素冻干粉制剂及其制备和检测方法。 

背景技术

苦参为多年生草本或灌木，别名苦骨、川参、凤凰爪、牛参。苦以味名，参以功名，故名苦参，春、秋二季采挖。苦参的药用部位主要为根部，其中含有的生物碱主要为苦参碱、氧化苦参碱，其药用价值早在中国第一部药物学著作《神农本草经》中就有记载。据《本草纲目》记载：苦参，苦，寒，无毒，具有清热解毒、祛风燥湿、补中明目、养肝胆气等功效。苦豆子始载于《神农本草经》，别名苦豆根、苦甘草、苦豆草等，属豆科植物槐属，以全草、根、种子入药。全草夏季采，根春秋采，种子秋季采，晒干或鲜用，含苦参碱、槐果碱、槐定碱、苦豆碱等生物碱。苦参素是一类含有苦参次碱15酮基本结构的化合物，主要从苦参根及苦豆子中提取，包括氧化苦参碱与少量氧化槐果碱两种成分，其中98％以上为氧化苦参碱。 

研究发现，苦参素能抑制乙型肝炎病毒的复制，具有一定的HBeAg阴转率。同时可以抑制胶原活动度，防止肝纤维化，还具有阻断肝细胞凋亡、稳定细胞膜、清除自由基及免疫调控等作用。在治疗慢性乙型肝炎的众多药物中，苦参素作为一种纯天然生物碱类药物，由于不良反应少，价格低廉而深受欢迎。市场上现有苦参素药品的制剂形式有胶囊剂、片剂、注射液、粉针剂等。其中苦参素粉针剂相对注射液来说，质量较为稳定可靠，且易于运输、储存，因此更具市场吸引力。 

国内市场上已经有多家企业推出了苦参素冻干粉制剂，虽然其稳 定性较注射液有所改善，但还未达到理想状态。目前市场上的产品有效期一般为12～18个月，且在有效期内制剂即发生显著变化，颜色变深，有关物质的含量显著增加，达不到标准要求，给制剂安全性带来隐患。因此，需要对现有苦参素冻干粉制剂的制备工艺进行改进，以提高制剂的稳定性，延长保质期，保障用药安全。 

另外，为了获得性能良好的苦参素冻干粉产品，制备过程中需采用可靠稳定的测试方法对其有效成分的含量进行精确检测。国家标准中苦参素注射剂的含量测定方法为化学滴定法测定总生物碱含量，但该法操作费时、繁琐、专属性不强。目前可以采用的相对精确、快速的方法是高效液相色谱法。但由于苦参素为氧化苦参碱与极少量氧化槐果碱的混合碱，在检测过程中该方法容易遇到的问题是，谱图的峰形不好，分离度达不到要求，主成分峰与杂质峰分离不开，拖尾严重，从而影响含量测定的准确性。为了强化苦参素冻干粉制剂产品的质量控制，需要对检测条件进行优化，建立一种专属性更强且更为简便可靠的高效液相色谱方法。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种稳定性更高的苦参素冻干粉制剂，其中的主要成分为苦参素、甘露醇和依地酸二钠，它们之间的重量比为：苦参素∶甘露醇∶依地酸二钠＝100∶100∶0.05～0.5；优选的比例为100∶100∶0.1～0.3。其中，所述依地酸二钠也可以用依地酸钙钠代替。本发明的苦参素冻干粉制剂有效期可增至24个月，且在效期范围内，制剂溶液颜色浅，氧化苦参碱含量稳定，有关物质含量无明显增加。 

本发明的另一目的是提供一种检测苦参素冻干粉制剂产品中苦参素含量的方法。其中使用高效液相色谱法作为检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(0.025mol/LNa₂HPO₄-0.025mol/L NaH₂PO₄，pH值3.5)-乙腈(90∶10)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为220nm，柱温为室温。本发明的检测 方法与传统检测方法相比，能够较好地分离主成分峰与杂质峰，含量测定更加准确。 

具体实施方式

以下实施例用于详细说明而不是限制本发明。在下面的描述中，乙醇溶液的浓度为体积百分数，除另有说明外，其他份数和百分数均按重量计算。 

实施例1 

称取苦参粗粉100g，用10倍量60％乙醇溶液浸泡24h后，以5ml/min的流速进行渗漉。渗漉液减压浓缩后用适量纯化水溶解，过滤，上AB-8大孔吸附树脂，用70％乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加双氧水进行氧化，至氧化完全，加入还原剂还原过量的双氧水，蒸干溶液，用丙酮结晶，重结晶，得白色苦参素结晶。 

经检测，苦参素中含氧化苦参碱(C₁₅H₂₄N₂O₂)99.6％。 

实施例2 

处方组成筛选试验 

针对现有苦参素冻干粉制剂稳定性差的问题，考虑添加抗氧剂。分别选择亚硫酸氢钠、依地酸二钠和L-半胱氨酸盐酸盐进行试验。结果亚硫酸氢钠和L-半胱氨酸盐酸盐的添加影响制剂有关物质检查，依地酸二钠能改善制剂溶液的颜色，且对有关物质检查无干扰，可以应用于本制剂。同时对依地酸二钠的系列品种依地酸钙钠进行试验，结果表明依地酸钙钠同样适用。 

进一步对抗氧剂的用量进行筛选。固定苦参素与甘露醇的量，依地酸二钠或依地酸钙钠的用量分别为苦参素用量的0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.6％，依法制备冻干粉制剂。结果，上述各组冻干粉制剂中，0.6％组冻干粉较粘，冻型不好。其他各组不仅外观好，各项指标也符合规定。进而对用量在0.05～0.5％的五组冻干粉制剂进行破坏性试验，结果，在高温及强光作用下，各组冻干粉制剂含量、 有关物质、pH值、溶液颜色等指标变化较小，尤其是0.1％、0.2％和0.3％组几乎无变化。上述研究结果表明，依地酸二钠或依地酸钙钠的用量为苦参素用量的0.05～0.5％时，制剂的外观、性状、含量、有关物质等指标符合要求，尤以用量在0.1～0.3％时最佳。 

实施例3 

苦参素冻干粉制剂的制备 

称取甘露醇，加入配制量40％的注射用水，加热搅拌至完全溶解，加入药用炭煮沸15分钟，定容至配制量的50％，降温至80℃过滤除炭。取苦参素加入配制量30％的注射用水，搅拌使溶解，加入2mol/L盐酸调节pH值后，加入依地酸二钠或依地酸钙钠溶液，加注射用水至配制量的40％，加热至70～80℃，加入药用炭，搅拌吸附15分钟，过滤除炭。将除炭后的甘露醇溶液降温至50℃以下，将其与除炭后苦参素溶液合并，加水至全量，搅拌均匀，用2mol/L盐酸调pH值至4.8～6.5。待药液温度降至室温，用0.22μm滤器过滤，灌装，冷冻干燥，即得。其中药用炭的总用量为组合物重量的1％。 

按照上述方法制备出以下苦参素冻干粉制剂： 

1号样品：苦参素200g，甘露醇200g，依地酸二钠0.4g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.2g。 

2号样品：苦参素400g，甘露醇400g，依地酸二钠1.2g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.4g。 

3号样品：苦参素600g，甘露醇600g，依地酸钙钠0.6g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.6g。 

4号样品：苦参素200g，甘露醇200g，依地酸二钠0.1g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.2g。 

5号样品：苦参素300g，甘露醇300g，依地酸钙钠1.5g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.3g。 

对照品：苦参素200g，甘露醇200g，加入注射用水后的总体积为2000ml，分装成1000支。每支含苦参素0.2g。 

实施例4 

苦参素含量的检测 

原苦参素注射剂的含量检测方法载于国家标准YBH00782005，以0.3％三乙胺溶液(用冰醋酸调pH酸值至5.0)∶甲醇(70∶30)为流动相。该方法的缺点为：峰形不好，分离度达不到要求，主成分峰与杂质峰分离不开，影响含量测定的准确性。通过对流动相的组成与配比进行系统研究，最终确定以磷酸盐缓冲液(0.025mol/LNa₂HPO₄-0.025mol/L NaH₂PO₄，pH值3.5)-乙腈(90∶10)为流动相时，分离效果最佳。具体检测方法如下： 

高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(0.025mol/L Na₂HPO₄-0.025mol/L NaH₂PO₄，pH值3.5)-乙腈(90∶10)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为220nm，柱温为室温。取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氧化苦参碱对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 

其中，关于上述检测方法的方法学考察内容如下： 

1)仪器与试药 

仪器：高效液相色谱仪Agilent 1200，色谱柱：Agilent ZORBAXEclipse XDB-C184.6×150mm 5μ。 

对照品：氧化苦参碱，批号：110780-200004，购自中国药品生物制品检定所。 

样品：1号样品、2号样品、3号样品 

试剂：乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 

2)色谱条件 

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(0.025mol/LNa₂HPO₄-0.025mol/L NaH₂PO₄，pH值3.5)-乙腈(90∶10)为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为220nm，柱温为室温。 

3)线性关系考察 

精密称取氧化苦参碱对照品0.102g，用流动相溶解并稀释至 50.0ml作为对照品母液，精密吸取母液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别加流动相稀释至25.0ml；按上述色谱条件进行测定。以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝85350+8370452X，r＝0.9998，结果表明在0.816～4.080μg范围内呈良好的线性关系。 

4)精密度试验 

精密吸取氧化苦参碱对照品溶液注入液相色谱仪，连续进样6次，每次10μl。RSD＝0.39％，结果表明，所选方法精密度良好。 

5)稳定性试验 

精密吸取同一样品，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样，测定样品中氧化苦参碱的峰面积。RSD＝0.50％，结果表明样品溶液在12h内稳定。 

6)重复性试验 

取同一样品，分别制备5份每1ml含0.2mg的样品溶液，按含量测定方法分别测定，记录峰面积。RSD＝0.51％，结果表明方法重现性良好。 

7)专属性试验 

按制剂处方精密称取空白辅料，按供试品制备方法制成空白辅料溶液。在本色谱条件下，测得氧化苦参碱对照品溶液、供试品溶液及空白辅料溶液的色谱图。空白辅料溶液在氧化苦参碱出峰位置无干扰，说明本方法专属性好，测定准确有效。 

8)准确度试验 

精密称取同一样品0.5mg各6份，于50ml容量瓶中，分别加入等量的氧化苦参碱对照品，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤。按含量测定方法进行测定，结果得：平均回收率为100.4％，RSD为0.45％。 

9)含量测定 

取1、2和3号样品，分别加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg样品的供试品溶液；另取氧化苦参碱对照品适量，同法制成 对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按色谱条件进行检测，用外标法以峰面积计算，结果得各样品中氧化苦参碱的含量为：1号样品为99.8％；2号样品为98.6％；3号样品为99.3％。 

实施例5 

特殊安全性试验 

1)体外溶血试验 

动物新西兰种白兔，雄性，体重2.2kg。 

药物注射用苦参素(1号样品)，临用前配制成含量为1.6mg/ml的溶液。0.9％氯化钠注射液。 

方法 

自兔耳缘静脉采血约10ml，以玻璃棒(顶端缠有脱脂棉)搅拌10min除去纤维蛋白后，离心(1500rpm×15min)，除掉上清液，再加10倍量生理盐水洗涤三次(均离心后弃去上清液)，至上清液无红色。之后，再用生理盐水配制成2％红细胞混悬液备用。 

表1体外溶血试验加样表 

取10ml试管7支，按表1加入各种溶液，其中，第6管为生理盐水空白对照，第7管为阳性对照(蒸馏水)。各管轻轻摇匀后，置于37℃恒温水浴中温孵3小时，观察0.5～3小时内各管的溶血程度， 按表2的标准判断。 

结果注射用苦参素在0.5小时、1小时和3小时均未出现溶血或部分溶血现象，表现为溶液中红细胞全部下沉，上层液无色透明，摇匀后红细胞分散；生理盐水组0.5～3小时内也均无溶血及凝集现象，蒸馏水组在各时间点全部溶血。试验结果详见表3。 

2)全身过敏试验 

表2溶血结果判断 

程度	标识	现象
			无溶血	-	红细胞全部下沉，上层液无色透明
部分溶血	±	溶液澄明红色或红棕色，管底有少量红细胞
			全溶血	+	溶液澄明红色，管底无红细胞残留
凝集		红细胞聚集成块，摇匀后不分散

动物健康豚鼠，全白色毛，18只，体重270～320g，雌雄兼用。饲养于清洁明亮，温度18～20℃，相对湿度50～60％，自然光照，通风的动物实验室内。喂食机制料块，饮自来水。 

受试物注射用苦参素(1号样品)，临用时用生理盐水配制成含量为1.6mg/ml溶液备用。鸡蛋清静脉注射液(阳性对照药)，浅黄色透明溶液，临用前用0.9％氯化钠注射液配制成2％的溶液。 

表3注射用苦参素体外溶血及细胞凝集试验结果 

剂量分组实验组：注射用苦参素，致敏剂量2ml(3.2mg)/次，共三次(ip)；攻击剂量2ml(3.2mg)/次，共一次(iv)。阳性对照 组：鸡蛋清静脉注射液，致敏剂量2ml/次，共三次(ip)；攻击剂量2ml/次，共一次(iv)。阴性对照组：给相同容积的0.9％氯化钠注射液。 

方法取健康无伤全白色豚鼠18只，随机分成三组，即注射用苦参素、鸡蛋清静脉注射液和生理盐水对照组，每组6只，雌雄兼用。每只豚鼠分别隔日腹腔注射注射用苦参素，鸡蛋清静脉注射液和0.9％氯化钠注射液2ml，共连续三次，每次注射后观察豚鼠的反应情况。腹腔注射结束，每组再分成两小组，每小组三只。一组于首次注射受试物后的14天，另一组于首次注射后的第21天，每鼠分别静脉注射以上相应的受试物2ml进行攻击，观察记录动物注射后有无抓鼻、耸毛、呼吸困难、痉挛、休克直至死亡等过敏症状，连续观察三天。以过敏反应程度、出现率、死亡情况及豚鼠过敏反应来综合评价试验结果。 

结果取健康白色豚鼠分别隔日腹腔注射(ip)注射用苦参素，鸡蛋清静脉注射液，0.9％氯化钠注射液2ml/次/鼠，连续三次。每次给药后三组豚鼠均未出现任何异常反应，活动、摄食、饮水均正常，与阴性对照(生理盐水)组相同。首次给药后14天和21天分别单次静脉注射(iv)注射用苦参素，鸡蛋清静脉注射液和氯化钠注射液2ml/鼠。注射后，注射用苦参素2ml/次/鼠剂量组豚鼠无明显反应出现，过敏反应级数为0。而鸡蛋清组豚鼠出现严重而明显的过敏反应症状，主要表现为竖毛、呼吸困难、痉挛、抽搐、尿失禁、继而出现休克死亡，死亡时间均在2分钟内，死亡率达100％，过敏反应级数为4级。氯化钠注射液对照组无异常反应出现。 

3)血管刺激试验 

动物新西兰白兔，雌雄兼用，体重2.0～2.5kg。 

供试品注射用苦参素(1号样品)，0.9％氯化钠注射液。 

剂量分组第一组：注射用苦参素，16mg(10ml)/kg/次×1次×7d；第二组：0.9％氯化钠注射液，10ml/kg/次×1次×7d。 

方法取家兔6只，随机分成二组，第一组右耳给药16mg(10ml) /kg/次；第二组右耳给等容积氯化钠注射液作对照，连续给药7天，每天一次，末次给药后24小时处死动物，在进针部位下1cm和8cm处，剪取兔耳，肉眼可见有无红肿、丘斑形成等。并以10％甲醛溶液固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察血管内皮，皮下组织及血栓形成情况。 

结果肉眼所见：给药组和对照组的给药局部未见明显静脉充血、水肿、变性、硬结及组织坏死等现象出现。 

镜下所见：对照组在距进针部位下1cm和8cm处血管内皮细胞、血管腔及周围组织均未见明显异常；给药组1cm和8cm处血管内皮连续、完整，未见增生、肿胀，血管周围组织未见明显炎性细胞浸润及坏死，管腔内无血栓形成。 

实施例6 

稳定性的考察 

稳定性考察的留样条件为T＝25±2℃、RH＝60±10％。对不同储存时间的1、2、3号样品及对照品的热原、异常毒性、有关物质、水分、酸度、溶液澄清度和颜色等指标进行测定，以确定上述样品的稳定性。 

其中各项指标的具体检测方法如下： 

性状：取样品及对照品适量，目视观察，应为白色或类白色的块状物或粉末。 

酸度：取样品及对照品适量，分别用水溶解，制成每1ml中含100mg样品或对照品的溶液，依照中国药典2005年版二部附录VI H测定，pH值应为4.5～6.5。 

溶液澄清度：取样品及对照品适量，分别用水溶解，制成每1ml中含100mg样品或对照品的溶液，依照中国药典2005年版二部附录IX B测定，溶液应澄清无色，如显混浊与1号浊度标准液比较，均不得更浓。 

颜色：取样品及对照品适量，分别用水溶解，制成每1ml中含100mg样品或对照品的溶液，依照中国药典2005年版二部附录IX A 测定，如显色，与黄色2号标准比色液比较，均不得更深。 

水分：取样品及对照品适量，依照中国药典2005年版二部附录VIII M第一法A测定，含水量不得过5.0％。 

有关物质含量：取样品及对照品适量，依照国家标准YBH00782005有关物质检查项测定，有关物质含量不得大于1.0％。 

不溶性微粒：取样品及对照品适量，分别精密加入适量微粒检查用水溶解，按中国药典2005年版二部附录IX C测定。 

热原：取样品及对照品适量，分别用生理盐水稀释成浓度为每1ml中含10mg样品或对照品的溶液，依照中国药典2005年版二部附录XID测定，剂量按家兔体重每1kg注射2ml，3只家兔体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃，为合格。 

异常毒性：取样品及对照品适量，分别用生理盐水稀释成浓度为每1ml中含2mg样品或对照品的溶液，依照中国药典2005年版二部附录XI C测定，5只小鼠在给药后48小时内不得有死亡，为合格。 

上述各指标的测定结果见表4。从测定结果看，1～3号样品的稳定性明显优于对照品。 

Claims (5)

1.一种苦参素冻干粉制剂，其由100重量份苦参素、100重量份甘露醇和0.1-0.3重量份依地酸二钠组成，其由以下方法制备：

a)称取苦参粗粉，用10倍量60%乙醇溶液浸泡24h后，以5ml/min的流速进行渗漉，渗漉液减压浓缩后用适量纯化水溶解，过滤，上AB-8大孔吸附树脂，用70%乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加双氧水进行氧化，至氧化完全，加入还原剂还原过量的双氧水，蒸干溶液，用丙酮结晶，重结晶，得白色苦参素结晶；

b)称取a)步骤得到的苦参素，用配制量30%的注射用水将其溶解，用2mol/L盐酸调pH值后，加入依地酸二钠溶液，加注射用水至配制量的40%，加热至70～80℃，加入药用炭，搅拌吸附15分钟，过滤除炭；

c)称取甘露醇，用配制量40%的注射用水将其溶解，加入药用炭煮沸15分钟，定容至配制量的50%，降温至80℃，过滤除炭，进一步降温至50℃以下；

d)将b)、c)步骤得到的溶液合并，加水至全量，搅拌均匀后用2mol/L盐酸调pH至4.8～6.5；

e)将d)步骤得到的药液降至室温，用0.22μm滤器过滤，灌装，冷冻干燥，即得冻干粉制剂成品。

2.制备如权利要求1权利要求所述冻干粉制剂的方法，其中包括以下步骤：

a)称取苦参粗粉，用10倍量60%乙醇溶液浸泡24h后，以5ml/min的流速进行渗漉，渗漉液减压浓缩后用适量纯化水溶解，过滤，上AB-8大孔吸附树脂，用70%乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加双氧水进行氧化，至氧化完全，加入还原剂还原过量的双氧水，蒸干溶液，用丙酮结晶，重结晶，得白色苦参素结晶；

b)称取a)步骤得到的苦参素，用配制量30%的注射用水将其溶解，用2mol/L盐酸调pH值后，加入依地酸二钠溶液，加注射用水至配制量的40%，加热至70～80℃，加入药用炭，搅拌吸附15分钟，过滤除炭；

c)称取甘露醇，用配制量40%的注射用水将其溶解，加入药用炭煮沸15分钟，定容至配制量的50%，降温至80℃，过滤除炭，进一步降温至50℃以下；

d)将b)、c)步骤得到的溶液合并，加水至全量，搅拌均匀后用2mol/L盐酸调pH至4.8～6.5；

e)将d)步骤得到的药液降至室温，用0.22μm滤器过滤，灌装，冷冻干燥，即得冻干粉制剂成品。

3.一种苦参素冻干粉制剂，其由100重量份苦参素、100重量份甘露醇和0.1-0.3重量份依地酸钙钠组成，其由以下方法制备：

a)称取苦参粗粉，用10倍量60%乙醇溶液浸泡24h后，以5ml/min的流速进行渗漉，渗漉液减压浓缩后用适量纯化水溶解，过滤，上AB-8大孔吸附树脂，用70%乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加双氧水进行氧化，至氧化完全，加入还原剂还原过量的双氧水，蒸干溶液，用丙酮结晶，重结晶，得白色苦参素结晶；

b)称取a)步骤得到的苦参素，用配制量30%的注射用水将其溶解，用2mol/L盐酸调pH值后，加入依地酸钙钠溶液，加注射用水至配制量的40%，加热至70～80℃，加入药用炭，搅拌吸附15分钟，过滤除炭；

c)称取甘露醇，用配制量40%的注射用水将其溶解，加入药用炭煮沸15分钟，定容至配制量的50%，降温至80℃，过滤除炭，进一步降温至50℃以下；

d)将b)、c)步骤得到的溶液合并，加水至全量，搅拌均匀后用2mol/L盐酸调pH至4.8～6.5；

e)将d)步骤得到的药液降至室温，用0.22μm滤器过滤，灌装，冷冻干燥，即得冻干粉制剂成品。

4.制备如权利要求3权利要求所述冻干粉制剂的方法，其中包括以下步骤：

a)称取苦参粗粉，用10倍量60%乙醇溶液浸泡24h后，以5ml/min的流速进行渗漉，渗漉液减压浓缩后用适量纯化水溶解，过滤，上AB-8大孔吸附树脂，用70%乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加双氧水进行氧化，至氧化完全，加入还原剂还原过量的双氧水，蒸干溶液，用丙酮结晶，重结晶，得白色苦参素结晶；

b)称取a)步骤得到的苦参素，用配制量30%的注射用水将其溶解，用2mol/L盐酸调pH值后，加入依地酸钙钠溶液，加注射用水至配制量的40%，加热至70～80℃，加入药用炭，搅拌吸附15分钟，过滤除炭；

c)称取甘露醇，用配制量40%的注射用水将其溶解，加入药用炭煮沸15分钟，定容至配制量的50%，降温至80℃，过滤除炭，进一步降温至50℃以下；

d)将b)、c)步骤得到的溶液合并，加水至全量，搅拌均匀后用2mol/L盐酸调pH至4.8～6.5；

e)将d)步骤得到的药液降至室温，用0.22μm滤器过滤，灌装，冷冻干燥，即得冻干粉制剂成品。

5.如权利要求2或4所述的方法，其中d)步骤得到的药液中，苦参素的含量为95～105mg/ml。