CN101406513A - 补骨脂提取物、含有它的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及补骨脂提取物、含有它的药物组合物及其制备方法和用途。本发明的补骨脂提取物包含40～90％的补骨脂酚和2～10％的补骨脂黄酮类成分，并且不包含补骨脂素和异补骨脂素。实验表明，本发明的补骨脂提取物及含有它的药物组合物对雌激素β受体的结合作用更强，显示出较好的协同效应，因此预期它可用于治疗更年期综合征、乳腺癌和/或心脑血管疾病。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物提取物、含有它的药物组合物及其制备方法和用途。具体地说，本发明涉及补骨脂提取物、含有它的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术
补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoralea corylifolia L.)的干燥成熟果实，性温，味辛，具补肾助阳、固精缩尿、温脾止泻、纳气平喘之功效。主治肾虚阳痿、腰膝冷痛，滑精、遗尿、尿频，五更泄泻，虚寒咳嗽；外用治白癜风。现代研究表明，补骨脂具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、升压、诱导黑素细胞迁移、雌性激素样作用等生理活性。中国专利申请200610027643.0《补骨脂酚类化合物的应用》还介绍了补骨质酚类化合物在制备治疗精神性疾病或神经性疾病药物中的应用。
因为其广泛的药理活性，药物学家积极开发补骨脂新型制剂，中国专利申请200510051550.7《包含补骨脂酚的用于治疗妇女骨质疏松症的医药组合物》和中国专利申请200510051551.1《包含补骨脂酚的用于治疗妇女乳癌的医药组合物》，验证了补骨脂酚具有治疗骨质疏松和乳癌作用，要求保护含有5％-95％补骨脂酚，且实质上不含补骨脂素和异补骨脂素的药物组合物，并提供了制备方法，其工艺采取有机溶剂萃取纯化补骨脂酚的方法，不适合工业化生产。中国专利申请200680024989.3《补骨脂酚的组合物及其制备方法》提供了使用聚苯乙烯系大孔吸附树脂纯化补骨脂酚的方法，通过其比较发现CG-161cd树脂可以达到纯化补骨脂酚的效果，但是仍存在很多问题，如需要用石油醚提取药材成本高且安全和污染问题严重，另一方面树脂需使用甲醇作为洗脱溶剂，不能在药厂推广使用，有机溶剂污染严重。
雌激素在不同疾病中或同一疾病不同的组织和细胞中发挥着不同的生物学效应。这是由于雌激素及其受体效应分子机制的复杂性，决定了不同的组织/细胞对雌激素应答的特异性。雌激素的效应主要由两种受体-ERα和ERβ介导，而这两种受体在配体结合结构域和转录激活结构域序列上的不同使它们在与配体结合的性质、转录活性等方面存在着很大的差异。研究表明激活ERα可促进乳腺癌细胞增殖，而ERβ的激活则对肿瘤细胞生长起抑制作用，因此对ERβ选择性激活的药物被认为是长期使用雌激素的更安全的替代品，也是药物学家努力的方向。
发明内容
本发明的发明人令人意外地发现，含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的组合物对ERβ的选择性激活作用增强，这使得该组合物在发挥拟雌激素作用的同时，降低了促进乳腺癌细胞增殖的风险，适合于长期使用。基于上述发现，完成了本发明。
本发明的目的是提供一种同时含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的补骨脂提取物、含有它的药物组合物及其制备方法和在医药领域中的用途。
一方面，本发明涉及一种补骨脂提取物，该补骨脂提取物包含40～90％的补骨脂酚和2～10％的补骨脂黄酮类成分，并且不包含补骨脂素和异补骨脂素。
在一个实施方案中，本发明的补骨脂提取物包含60～75％的补骨脂酚和3～5％的补骨脂黄酮类成分，并且不包含补骨脂素和异补骨脂素。
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，它包含本发明的补骨脂提取物，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在该方面的一个可替代方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含40～90％的补骨脂酚和2～10％的补骨脂黄酮类成分，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含60～75％的补骨脂酚和3～5％的补骨脂黄酮类成分，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本文中所述的补骨脂黄酮类成分是指异补骨脂查耳酮、补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、Corylifol A和异补骨脂查耳酮中的一种、多种或全部。
另一方面，本发明涉及一种制备同时含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入碱的水溶液使浓缩物溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
在一个实施方案中，本发明涉及一种制备同时含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入碱的水溶液至溶解；
将所得溶液过滤，并且用酸的水溶液将滤液的pH值调节至8～9；
将所得溶液过滤，并且用碱的水溶液将所得固体溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种制备同时含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入氢氧化钠水溶液，例如3％氢氧化钠水溶液至溶解；
将所得溶液过滤，并且用盐酸水溶液，例如10％盐酸水溶液将滤液的pH值调节至8～9；
将所得溶液过滤，并且用氢氧化钠水溶液，例如3％氢氧化钠水溶液将所得固体溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
本发明方法中可用的碱的水溶液可以选自任何适用于制药领域的中或强碱的水溶液，例如氨水、氢氧化钠水溶液和碳酸钠水溶液等。
本发明方法中可用的酸的水溶液可以选自任何适用于制药领域的酸的水溶液，只要它能实现所述目的即可。可以选择的酸例如盐酸、硫酸、磷酸和乙酸等。
本发明方法中所用的大孔吸附树脂可以选自D101、AB-8和HPD-400等本领域内常用的苯乙烯骨架树脂。为了增加选择性，可以将树脂增加一定的相应基团，这些变化方案都在本发明的范围之内。
可采用制剂领域中的常规技术，将补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分或者同时含有补骨脂酚和补骨脂黄酮类成分的本发明补骨脂提取物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合，并形成所需的剂型，来制备本发明的药物组合物。
本发明药物组合物中可用的“药学上可接受的赋形剂”可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂。特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学上可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。
本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂(注射用无菌粉针)等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
经研究表明，本发明的补骨脂提取物或含有它的药物组合物具有拟雌激素作用，对雌激素β受体的结合作用更强。因此，可以预期本发明的补骨脂提取物或含有它的药物组合物可以用于治疗更年期综合征、乳腺癌和/或心脑血管疾病。或者，本发明的补骨脂提取物或含有它的药物组合物可用于制备药物，该药物用于治疗更年期综合征、乳腺癌和/或心脑血管疾病。
具体实施方式
下述实施例中所用的实验材料和方法，如无特别说明，均为常规材料和方法。
实施例1、本发明补骨脂提取物的制备
将1千克补骨脂药材(购自河南信阳药材公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，加入10升95％乙醇浸泡过夜，回流提取2小时，倾出提取液，药渣再加入10升95％乙醇回流提取2小时，提取液合并后过滤，将滤液回收乙醇至尽，不断搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液至完全溶解，溶液过滤后搅拌下向滤液中加入10％的盐酸至pH值8-9，静置过夜后过滤，所得固体用3％氢氧化钠水溶液完全溶解后上预处理好的大孔吸附树脂(D101)(天津南开大学化工厂)，流速2h/BV(BV：树脂床体积＝1000毫升)，上柱完毕用3BV去离子水冲洗，然后用3BV 30％乙醇冲洗树脂，最后用4BV 95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇至尽得油状本发明补骨脂提取物82.7克，批号BGZ-1。
实施例2、本发明补骨脂提取物的制备
将1千克补骨脂药材(购自河南信阳药材公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，加入10升80％乙醇浸泡过夜，回流提取2小时，倾出提取液，药渣再加入10升80％乙醇回流提取2小时，提取液合并后过滤，将滤液回收乙醇至尽，不断搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液至完全溶解，溶液过滤后搅拌下向滤液中加入10％的盐酸至pH值8-9，静置过夜后过滤，所得固体用3％氢氧化钠水溶液完全溶解后上预处理好的大孔吸附树脂(D101)(天津南开大学化工厂)，流速2h/BV(BV：树脂床体积＝1000毫升)，上柱完毕用3BV去离子水冲洗，然后用3BV 30％乙醇冲洗树脂，最后用4BV 95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇至尽即得油状本发明补骨脂提取物92.4克，批号：BGZ-2。
实施例3、本发明补骨脂提取物的制备
将1千克补骨脂药材(购自河南信阳药材公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，加入10升80％乙醇浸泡过夜，回流提取2小时，倾出提取液，药渣再加入10升80％乙醇回流提取2小时，提取液合并后过滤，将滤液回收乙醇至尽，不断搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液至完全溶解，溶液过滤后搅拌下向滤液中加入10％的盐酸至pH值8-9，静置过夜后过滤，所得固体用3％氢氧化钠水溶液完全溶解后上预处理好的大孔吸附树脂(AB-8)(天津南开大学化工厂)，流速2h/BV(BV：树脂床体积＝1000毫升)，上柱完毕用3BV去离子水冲洗，然后用3BV 30％乙醇冲洗树脂，最后用4BV 95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇至尽即得油状本发明补骨脂提取物108.3克，批号：BGZ-3。
实施例4、本发明补骨脂提取物的制备
将1千克补骨脂药材(购自河南信阳药材公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，加入10升60％乙醇浸泡过夜，回流提取2小时，倾出提取液，药渣再加入10升60％乙醇回流提取2小时，提取液合并后过滤，将滤液回收乙醇至尽，不断搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液至完全溶解，溶液过滤后搅拌下向滤液中加入10％的盐酸至pH值8-9，静置过夜后过滤，所得固体用3％氢氧化钠水溶液完全溶解后上预处理好的大孔吸附树脂(D101)(天津南开大学化工厂)，流速2h/BV(BV：树脂床体积＝1000毫升)，上柱完毕用2BV去离子水冲洗，然后用4BV 30％乙醇冲洗树脂，最后用4BV 95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇至尽得油状本发明补骨脂提取物98.4克，批号：BGZ-4。
实施例5、本发明补骨脂提取物的制备
将1千克补骨脂药材(购自河南信阳药材公司)粉碎成粗粉(不加筛网)，加入10升95％乙醇浸泡过夜，回流提取2小时，倾出提取液，药渣再加入10升95％乙醇回流提取2小时，提取液合并后过滤，将滤液回收乙醇至尽，不断搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液至完全溶解，溶液过滤后搅拌下向滤液中加入10％的盐酸至pH值8-9，静置过夜后过滤，所得固体用3％氢氧化钠水溶液完全溶解后上预处理好的大孔吸附树脂(HPD-400)(沧州宝恩化工有限公司)，流速2h/BV(BV：树脂床体积＝1000毫升)，上柱完毕用3BV去离子水冲洗，然后用3BV 30％乙醇冲洗树脂，最后用4BV 95％乙醇洗脱，洗脱液浓缩回收乙醇至尽得油状本发明补骨脂提取物69.9克，批号BGZ-5。
实施例6、补骨脂酚的制备
将500克补骨脂药材加入5000毫升石油醚提取两次，回收石油醚至尽拌硅胶后上硅胶柱层析，以正己烷∶乙酸乙酯不同比例洗脱，用补骨脂酚对照品薄层鉴别跟踪，收集补骨脂酚含量高的部分再次上硅胶柱，最终得油状补骨脂酚纯品，批号：BGZF-1。
实施例7、有关成分的结构确证
发明人对补骨脂酚、异补骨脂查耳酮、补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、Corylifol A和异补骨脂查耳酮，以及对补骨脂素和异补骨脂素进行了结构确认(委托天津大学分析测试中心检测，500MHz核磁)。分析结果显示它们的结构与文献报道的结构一致。
补骨脂素，无色针晶。1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ6.38(1H，d，J＝9.6，H-3)，6.83(1H，d，J＝2.2，H-4’)，7.48(1H，s，H-5)，7.69(1H，S，H-8)，7.70(1H，d，J＝2.2，H-5’)，7.80(1H，d，J＝9.6，H-4)。
异补骨脂素，无色针晶。1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.83(1H，d，J＝9.5)，7.71(1H，d，J＝2.2)，7.46(1H，dd，J＝8.6，0.9)，7.40(1H，d，J＝8.6)，7.15(1H，dd，J＝2.2，0.9)，6.40(1H，d，J＝9.5)。
异补骨脂查耳酮，黄色粉末。1HNMR(CD3OD，500MHz)：δ7.84(1H，d，J＝8.9)，7.79(1H，d，J＝15.3)，7.63(2H，dd，J＝6.8，1.9)，7.62(1H，d，J＝15.3)，6.84(2H，dd，J＝6.8，1.9)，6.43(1H，d，J＝8.9)，5.23(1H，m)，3.32(2H，m)，1.78，1.66(各3H，s)。
补骨脂二氢黄酮，无色结晶。1HNMR(CD3OD，500MHz)：δ7.55(1H，s，H-5)，7.32(2H，d，J＝11.2Hz，H-2’，H-6’)，6.81(2H，d，J＝11.2Hz，H-3’，H-5’)，6.35(1H，s，H-8)，5.36(1H，dd，J＝13.2，2.9Hz，H-2)，5.33(1H，m，H-2’)，3.22(2H，d，J＝7.4Hz，H-1’)，3.03(1H，dd，J＝16.9，13.2Hz，H-3)，2.67(1H，dd，J＝16.9，2.9Hz，H-3)，1.76(3H，s)，1.70(3H，s)。
新补骨脂异黄酮，白色粉末。1HNMR(CD3OD，500MHz)：δ8.11(1H，s)，8.07(1H，d，J＝8.8Hz)，7.23(1H，d，J＝2.1Hz)，7.17(1H，dd，J＝8.2，2.2Hz)，6.95(1H，dd，J＝8.8，2.2Hz)，6.86(1H，d，J＝2.2Hz)，6.83(1H，d，J＝8.2Hz)，5.3(1H，m)，3.33(1H，m)，1.75(6H，s)。
Corylifol A，白色粉末。1HNMR(CD3OD，500MHz)：δ8.08(1H，s)，8.03(1H，d，J＝8.7Hz)，6.96(2H，dd，J＝2.1，8.7Hz)，6.85(1H，d，J＝2.2)，7.32(1H，d，J＝1.8)，6.88(1H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，dd，J＝1.8，8.3Hz)，3.34(1H，d，J＝7.0Hz)，5.40(1H，t-like，J＝7.0Hz)，2.02(1H，m)，2.09(1H，m)，5.08(1H，t-like，J＝6.9Hz)，1.55(3H，s)，1.57(3H，s)，1.72(3H，s)。
补骨脂酚，淡黄色油状物。1HNMR(CDCl3，500MHz)：δ7.25(1H，d，J＝7.55Hz)，6.80(1H，d，J＝7.55Hz)，6.80(1H，d，J＝16.27Hz)，6.30(1H，d，J＝16.27Hz)，6.17(H，d，J＝16.27Hz)，5.90(1H，d，J＝10.85Hz)，5.82(1H，d，J＝10.85)，5.1(2H，dd，J1＝1.47J2＝19.20Hz)，1.92(2H，dd，J1＝19.20J2＝7.48Hz)，1.65(3H，s)，1.62(3H，s)，1.20(3H，s)。
补骨脂二氢黄酮甲醚购自上海融禾医药科技发展有限公司，批号：061010。
实施例8、本发明补骨脂提取物的成分分析及其含量测定
使用高效液相色谱法对本发明补骨脂提取物中的成分进行了分析和含量测定。所用的色谱条件如下：
色谱柱(ODS，5μm，4.6mm＊250mm)检测波长246nm
柱温20℃，流速1ml/min，液相Aglent1100
流动相乙腈：0.1％甲酸溶液
表1.梯度洗脱流动相比例
| 梯度 | 时间(分) | 乙腈(％) | 0.1％甲酸水溶液(％) |
| 1 | 0.01 | 11 | 89 |
| 2 | 30 | 50 | 50 |
| 3 | 45 | 60 | 40 |
| 4 | 55 | 70 | 30 |
| 5 | 60 | 80 | 20 |
| 6 | 62 | 80 | 20 |
混合对照品的制备：
精密称取补骨脂酚5.79毫克、新补骨脂异黄酮3.21毫克、补骨脂二氢黄酮甲醚4.78毫克、Corylifol A3.25毫克、补骨脂素16.35毫克和异补骨脂素10.30毫克，置5毫升容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解。取溶液1毫升至25毫升容量瓶中，加甲醇定容，摇匀得混合标准品溶液。
样品溶液的制备：
分别精密称取样品BGZ-1、BGZ-2、BGZ-3、BGZ-4、BGZ-5、BGZF-1，置50ml容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度。
对照品和样品分别进样10μl，结果见下表2：
表2.本发明补骨脂提取物的成分的含量测定结果
| 名称 | BGZ-1 | BGZ-2 | BGZ-3 | BGZ-4 | BGZ-5 | BGZF-1 |
| 补骨脂素(％) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 异补骨脂素(％) | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 补骨脂酚(％) | 55.4 | 64.2 | 51.6 | 40.4 | 71.3 | 98 |
| 新补骨脂异黄酮(％) | 0.081 | 0.056 | 0.072 | 0.082 | 0.11 | 0 |
| 补骨脂二氢黄酮甲醚(％) | 2.47 | 2.18 | 2.29 | 2.04 | 5.67 | 0 |
| Corylifol A(％) | 2.02 | 1.93 | 1.71 | 1.65 | 4.02 | 0 |
上表2中的数据表明，本发明的补骨脂提取物含有补骨脂酚、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚和Corylifol A，不包含补骨脂素和异补骨脂素。
实施例9、补骨脂酚和本发明药物组合物对
雌激素受体的激活作用
采用细胞转染的方法观察补骨脂酚和补骨脂黄酮对雌激素受体的选择性激活。实际上，雌激素正是通过调节雌激素反应基因转录来显示其生物活性。
将带有报告基因的ERα或ERβDNA片段分别转染于无ER表达的Hela细胞，在细胞培养液中加入被测物后，通过对报告基因转录激活的检测观察被测物是否可通过ERα或ERβ发挥雌激素样作用。
补骨脂酚样品液的配制：
精密称取补骨脂酚1.28mg，用500μL的DMSO溶解。精密吸取50μL稀释至500μL得1mM补骨脂酚溶液；
精密吸取1mM补骨脂酚溶液50μL稀释至500μL得0.1mM补骨脂酚溶液；
精密吸取0.1mM补骨脂酚溶液50μL稀释至500μL得0.01mM补骨脂酚溶液；
分别取1mM、0.1mM和0.01mM补骨脂酚溶液用含1％CS-FBS的无酚红高糖DMEM稀释1000倍，对应得补骨脂酚样品液高剂量组(1μM)、中剂量组(0.1μM)和低剂量组(0.01μM)。
本发明补骨脂提取物(BGZ-1)样品的配制：
精密称取本发明补骨脂提取物(BGZ-1)样品2.31mg，用500μL的DMSO溶解。精密吸取50μL稀释至500μL得补骨脂提取物溶液(含补骨脂酚1mM)；
精密吸取补骨脂提取物溶液50μL稀释至500μL得补骨脂提取物溶液(含补骨脂酚0.1mM)；
精密吸取补骨脂提取物溶液(含补骨脂酚0.1mM)50μL稀释至500μL得0.01mM补骨脂提取物溶液(含补骨脂酚0.01mM)；
分别取上述三个浓度的补骨脂提取物溶液用含1％CS-FBS的无酚红高糖DMEM稀释1000倍，对应得补骨脂提取物样品高剂量组(含补骨脂酚1μM)、中剂量组(含补骨脂酚0.1μM)和低剂量组(含补骨脂酚0.01μM)。
在37℃，5％CO2的条件下，在细胞培养箱中使用含有10％小牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养Hela细胞，至细胞密度90％左右时将细胞按60％密度铺于96孔板中，每孔中加入含10％血清的无酚红DMEM培养液150ul，培养过夜。按96孔板每孔100ul无血清DMEM培养基，0.4μg质粒(ptk-ERE-luc 2μg，tk-Renila 1μg，ERα或ERβ1μg)进行转染。转染6个小时后，每孔加入150ul无血清无酚红DMEM培养液。选取每组三个孔，加入10-8M雌二醇E2，以及不同浓度的受试物15ul/孔(样品BGZ-1高、中、低三个浓度组)，37℃，5％CO2条件下继续培养24小时。24小时后每孔加入80μl细胞裂解液，并冻融细胞一次以使其充分裂解。对每孔的细胞裂解液分别测定其对萤火虫萤光素酶及Renila萤光素酶的活性。每孔均用萤火虫萤光素酶/Renila萤光素酶值作为结果，分别以各组中未加雌激素处理的孔作为对照，计算加雌激素或被测物组相对于对照组的比值，每组三个孔取平均值。结果见表3：
表3：补骨脂酚和本发明药物组合物对雌激素受体的激活作用
＊p＜0.05，＊＊p＜0.01
研究结果显示，本发明药物组合物(含补骨脂酚0.01，0.1，1μM)可浓度依赖性地激活ERβ，高浓度的本发明药物组合物(1μM)可激活ERα，且对ERβ的激活作用强于ERα；含相同浓度补骨脂酚(0.01，0.1，1μM)可达到相似的效果；结果提示更为有意义的是，与补骨脂酚相比本发明药物组合物ERβ/ERα比值增大，说明本发明药物组合物对ERβ的选择性激活作用增强，这就使本发明药物组合物在起到拟雌激素作用的同时，降低了促进乳腺癌细胞增殖的风险，适合于长期使用。
实施例10、本发明补骨脂提取物对骨质疏松大鼠的影响
1试验目的
采用去卵巢大鼠作为更年期综合征以及骨质疏松动物模型，研究补骨脂提取物对更年期综合征大鼠内分泌和骨质疏松的影响，探究其是否具有改善更年期综合征的作用。
2试验材料
2.1试验药物
补骨脂提取物BGZ-1(根据实施例1的方法制得)，每克提取物相当于补骨脂生药12克。用0.5％羧甲基纤维素钠配置成混悬液。
己烯雌酚片：天津力生制药股份有限公司，0.5mg/片，使用时研磨成细粉。
2.2试验试剂
戊巴比妥钠，上海化学试剂采购供应站分装厂；
雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)放免试剂盒由天津九鼎医学生物工程公司提供。
2.3试验动物
雌性SD大鼠，3月龄，未交配，体重180±10g。购于北京维通利华动物实验中心，动物许可证编号：SCXK(京)2002-0003，分笼饲养，每笼5只，食水自由摄取。
3试验方法
3.1去势大鼠模型的制作
采用双侧卵巢切除术，用40mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠，腹位固定，在最末肋骨下，腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处，剪毛，切开皮肤和背肌约1.5～2cm，在切口视野中可见一乳白色发亮的脂肪团，卵巢即包埋其中，以小镊子轻轻夹住脂肪团拉出切口外，分离脂肪团，便可见到粉红色的卵巢。先将卵巢下输卵管(包括脂肪)用丝线结扎，再摘除卵巢，术后将子宫角送回腹腔中，依次缝合肌肉和皮肤。同法摘除另一侧卵巢。假手术组同上法打开腹腔，暴露卵巢，但不摘除卵巢。术后连续三天腹腔注射青霉素钠4000IU·kg-1，预防感染。
3.2大鼠分组和给药
摘卵巢手术2周后将大鼠按体重随机分为5组，包括假手术组、模型组、本发明补骨脂提取物高、低剂量组(剂量分别是24mg/kg、12mg/kg)，并设己烯雌酚组0.05mg/kg作为阳性药对照组。每组10只。灌胃给药，每日一次，己烯雌酚组隔日给药一次。连续给药3个月。每周称体重一次并按新体重调整给药体积。
3.3观察指标
3.3.1对去卵巢大鼠内分泌激素及血脂水平的影响
给药3个月时，所有大鼠分别剪尾采血约1.5ml，分离血清，用放射免疫法测定血清内分泌激素雌二醇(E2)以及促卵泡激素(FSH)的含量。
3.3.2对去卵巢大鼠骨质疏松相关指标的骨密度的影响
取大鼠第二腰椎，去除表面附着的肌肉及软组织，分离右侧股骨，小心剔净肌肉，放置于湿润生理盐水的干净纱布上，置-4℃冰箱保存，用双能X线骨密度仪，小动物软件检测第二腰椎及右侧股骨的骨密度。单位为g/cm2，表示大鼠扫描所取区域每平方厘米所含的骨矿物质量。
3.4数据统计处理方法：
所有计量资料数据均用均数±平均数表示，用SPSS11.5软件进行方差分析和组间t检验。
4结果
4.1本发明补骨脂提取物对去势大鼠血清激素水平的影响
模型组血清E2较假手术组有显著降低(P＜0.01)，FSH升高更显著(P＜0.01)。本发明补骨脂提取物24mg/kg、12mg/kg剂量组E2较模型组有显著升高(P＜0.01)；本发明补骨脂提取物两剂量组的FSH与模型组比较显著降低(P＜0.01)。己烯雌酚组E2较模型组有显著升高，FSH较模型组显著下降。结果见表4。
表4.本发明补骨脂提取物对血清激素水平的影响
注：与假手术组比较##P＜0.01；与模型组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
4.2本发明补骨脂提取物对去势大鼠腰椎及股骨骨密度的影响
实验末期，去势大鼠腰椎体骨密度、股骨骨密度较假手术组有明显丢失(P＜0.05，P＜0.01)；本发明补骨脂提取物大剂量和己烯雌酚组大鼠腰椎体骨密度、股骨骨密度均较模型组有显著提高。结果见表5。
表5.本发明补骨脂提取物对去卵巢大鼠腰椎和股骨骨密度的影响
注：与假手术组比较##P＜0.01；与模型组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01
5.结论
本发明补骨脂提取物对去卵巢大鼠内分泌失调具有一定的改善作用，长期应用对去卵巢引起的E2水平降低有升高的作用，对FSH的升高具有显著的降低作用。
本发明补骨脂提取物对大鼠去卵巢引起的骨质疏松具有明显的改善作用，主要体现在它能增加腰椎体和股骨的骨密度，改善去卵巢引起的骨质疏松作用。
实施例11、含本发明补骨脂提取物的胶囊的制备
处方：本发明补骨脂提取物(BGZ-1) 285克
乳糖 105克
1000粒
按处方量准确称取样品BGZ-1，加入药用乙醇溶解，均匀喷洒到80℃烘干并过80目筛的处方量乳糖中，混匀，检测含量，合格后装入1号胶囊即得。
Claims (13)
1.一种补骨脂提取物，它包含40～90％的补骨脂酚和2～10％的补骨脂黄酮类成分，并且不包含补骨脂素和异补骨脂素。
2.根据权利要求1的补骨脂提取物，它包含60～75％的补骨脂酚和3～5％的补骨脂黄酮类成分，并且不包含补骨脂素和异补骨脂素。
3.根据权利要求1或2的补骨脂提取物，其中所述补骨脂黄酮类成分是异补骨脂查耳酮、补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、Corylifol A和异补骨脂查耳酮中的一种、多种或全部。
4.一种药物组合物，它包含权利要求1至3任意一项的补骨脂提取物，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
5.一种药物组合物，它包含40～90％的补骨脂酚和2～10％的补骨脂黄酮类成分，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
6.根据权利要求5的药物组合物，其包含60～75％的补骨脂酚和3～5％的补骨脂黄酮类成分，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
7.根据权利要求5或6的药物组合物，其中所述补骨脂黄酮类成分是异补骨脂查耳酮、补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、Corylifol A和异补骨脂查耳酮中的一种、多种或全部。
8.制备权利要求1至3任意一项的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入中或强碱的水溶液使所得浓缩物溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
9.制备权利要求1至3任意一项的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入中或强碱的水溶液使所得浓缩物溶解；
将所得溶液过滤，并且用酸的水溶液将滤液的pH值调节至8～9；
将所得溶液过滤，并且用中或强碱的水溶液将所得固体溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
10.制备权利要求1至3任意一项的补骨脂提取物的方法，该方法包括如下步骤：
用60～95％的乙醇提取补骨脂药材；
将合并的提取液浓缩回收乙醇后，加入3％氢氧化钠水溶液使所得浓缩物溶解；
将所得溶液过滤，并且用10％盐酸水溶液将滤液的pH值调节至8～9；
将所得溶液过滤，并且加入3％氢氧化钠水溶液将所得固体溶解；以及
将所得碱性溶液装入大孔吸附树脂，先用去离子水，再依次用30％乙醇和95％乙醇洗脱进行纯化，得到本发明的补骨脂提取物。
11.根据权利要求8至10任意一项的方法，其中所述的大孔吸附树脂为苯乙烯骨架树脂。
12.根据权利要求8至10任意一项的方法，其中所述的大孔吸附树脂为D101、AB-8或HPD-400。
13.权利要求1至3任一项的补骨脂提取物或者权利要求4至7任一项的药物组合物在制备用于治疗更年期综合征、乳腺癌和/或心脑血管疾病的药物中的用途。
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Cited By (9)
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|---|---|---|---|---|
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| CN101554399B (zh) * | 2009-05-14 | 2011-12-07 | 浙江大学 | 一种具有免疫增强作用的补骨脂提取物及应用 |
| FR2981275A1 (fr) * | 2011-10-18 | 2013-04-19 | Jean Noel Thorel | Composition a base de meroterpene destinee aux peaux grasses, a tendance acneique ou atteintes d'acne |
| CN103626732A (zh) * | 2013-11-05 | 2014-03-12 | 黄河科技学院 | 一种促凝血补骨脂有效成分及其提取分离方法、应用 |
| CN105326897A (zh) * | 2015-12-07 | 2016-02-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种补骨脂提取物及其制备方法和用途 |
| CN106083592A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-09 | 蚌埠医学院 | 补骨脂酚衍生物及其制备方法和应用 |
| CN107156842A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-09-15 | 辽宁大学 | 含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品 |
| CN108653379A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-10-16 | 上海中医药大学 | 一种补骨脂有效部位及其制备方法和应用 |
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|---|---|---|---|---|
| CN100479811C (zh) * | 2005-03-04 | 2009-04-22 | 杏辉药品工业股份有限公司 | 包含补骨脂酚的用于治疗妇女乳癌的医药组合物 |
| KR20130125411A (ko) * | 2005-05-09 | 2013-11-18 | 유니젠, 인크. | 바쿠치올의 조성물 및 그것의 제조방법 |
| CN101088498B (zh) * | 2006-06-13 | 2011-09-07 | 和泓生物技术（上海）有限公司 | 补骨脂酚类化合物的应用 |
| CN101249087A (zh) * | 2008-04-16 | 2008-08-27 | 北京珅奥基医药科技有限公司 | 异补骨脂黄酮在制备抗肿瘤，骨质疏松，老年痴呆药中的应用 |
-
2008
- 2008-12-03 CN CN 200810182713 patent/CN101406513B/zh active Active
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101554399B (zh) * | 2009-05-14 | 2011-12-07 | 浙江大学 | 一种具有免疫增强作用的补骨脂提取物及应用 |
| CN102228506A (zh) * | 2011-06-16 | 2011-11-02 | 天津中医药大学 | 补骨脂提取物的组合物及其制备方法和用途 |
| FR2981275A1 (fr) * | 2011-10-18 | 2013-04-19 | Jean Noel Thorel | Composition a base de meroterpene destinee aux peaux grasses, a tendance acneique ou atteintes d'acne |
| EP2583662A1 (fr) * | 2011-10-18 | 2013-04-24 | Thorel, Jean-Noël | Composition à base de meroterpene destinée aux peaux grasses, à tendance acneique ou atteintes d'acne |
| CN103626732A (zh) * | 2013-11-05 | 2014-03-12 | 黄河科技学院 | 一种促凝血补骨脂有效成分及其提取分离方法、应用 |
| CN103626732B (zh) * | 2013-11-05 | 2015-12-02 | 黄河科技学院 | 一种促凝血补骨脂有效成分及其提取分离方法、应用 |
| CN105326897A (zh) * | 2015-12-07 | 2016-02-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种补骨脂提取物及其制备方法和用途 |
| CN106083592A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-11-09 | 蚌埠医学院 | 补骨脂酚衍生物及其制备方法和应用 |
| CN107156842A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-09-15 | 辽宁大学 | 含有稻壳黄酮的抗乳腺癌保健品 |
| CN108653379A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-10-16 | 上海中医药大学 | 一种补骨脂有效部位及其制备方法和应用 |
| CN114340394A (zh) * | 2019-08-06 | 2022-04-12 | 代谢洞察有限公司 | 新补骨脂异黄酮及其组合物和它们作为杀虫剂的用途 |
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