CN101347425A

CN101347425A - 蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用

Info

Publication number: CN101347425A
Application number: CNA2008100716872A
Authority: CN
Inventors: 倪峰; 周金荣
Original assignee: FUJIAN INSTITUTE OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Current assignee: FUJIAN INSTITUTE OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Priority date: 2008-09-03
Filing date: 2008-09-03
Publication date: 2009-01-21
Anticipated expiration: 2028-09-03
Also published as: CN101347425B

Abstract

本发明提供一种蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，该应用针对前列腺癌治疗的困难，寻找出新的高效、低毒的天然药物资源，治疗效果显著，毒、副作用小。

Description

蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用

技术领域

本发明属于药物领域，更具体的是涉及一种蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用。

背景技术

前列腺癌是西方男性最常见的恶性肿瘤，居恶性肿瘤发病率第二位。美国前列腺癌发病率居男性肿瘤首位，死亡率仅次于肺癌。在2007年，将近220,000例美国男性被诊断出患有前列腺癌，而且死于前列腺癌的患者超过27,000例。在我国，前列腺癌也是一种常见的男性恶性肿瘤，虽然前列腺癌发病率低于西方国家，但随着人均寿命的延长及饮食结构的改变，国人前列腺癌的发病率呈显著上升趋势，已成为威胁我国老年男性生命的重要疾病。据上海调查，前列腺癌致死率在男性泌尿生殖系统疾病中居第五位。前列腺癌位置隐蔽，早期临床表现不典型，且缺乏特异性高敏感度的诊断手段，故大多数患者就诊时已失去进行根治性手术的时机。自Hodges和Huggins提出前列腺癌对雄激素存在依赖性后，内分泌治疗成为近50年来一种主要的治疗手段。但是，几乎所有的前列腺癌患者在接受内分泌治疗12～18个月后会转变为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independent prostate cancer，AIPC)，患者的预期生存时间仅约为9～12个月。因此寻找前列腺癌特别是对晚期雄激素非依赖性前列腺癌的有效治疗方法是目前的首要任务。

蛇葡萄素(Ampeloptin，AMP)，又名二氢扬梅(黄)素(dihydromyricetin)，化学名为3，5，7，3’，4’，5’-六羟基-2，3-二氢黄酮，其结构式为：

是葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄[Ampelopsis cantoniensis(Hook.et Am.)Planch.]或显齿蛇葡萄〔Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang〕的主要有效成分，具有广泛的抗肿瘤作用，文献报道它对体外肿瘤细胞HK-I、胃癌SGC一7901细胞和NCF一7细胞的增殖，及体内小鼠移植性B16黑色素瘤的生长均具有显著的抑制作用。蛇葡萄素在体外能有效抑制内皮细胞增殖及人肝癌Bel一7402细胞分泌VEGF和bFGF，具有抑制血管生成的作用；体内能有效抑制人肝癌Bel一7402裸鼠移植瘤及人肺癌GLC一82裸鼠移植瘤的生长。蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用，同时对白血病细胞HL一60、K562也有抑制作用。此外，AMP对体外H22细胞和体内肝癌H22实体瘤均有抑制作用。发明专利(00117225.5)公开了蛇葡萄素在制备抗白血病和抗鼻咽癌药物中的应用.发明专利(200410052153.7)公开了蛇葡萄素在制备VEGF和bFGF抑制剂的药物中的应用。

虽然蛇葡萄素抗肿瘤作用的文献已有许多，但未发现其抗前列腺癌作用及其机理的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，该应用针对前列腺癌治疗的困难，寻找出新的高效、低毒的天然药物资源，治疗效果显著，毒、副作用小。

本发明的蛇葡萄素和富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用。

本发明的优点是：本发明试验证明蛇葡萄素(AMP)及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位(FLA)对人前列腺癌细胞LNcap(雄激素依赖型)和PC3(雄激素非依赖型)有很好的抑制作用，IC₅₀约在25-60uM，但对正常的前列腺内皮细胞PrEC毒性不大，IC₅₀大于100uM。动物实验结果也表明，服用AMP与FLA的小鼠的PC3瘤重明显小于对照组(分别减小28％和38％)，抑制淋巴结转移为30％和20％。细胞周期与DNA片段化实验显示，经AMP与FLA处理后的癌细胞出现大量的凋亡现象，并呈剂量效应关系，同时细胞增殖阻滞在S或G₂/M时相。这些实验结果表明AMP与FLA具有治疗前列腺癌的效果，将蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位应用在制备防治前列腺癌的药物中，解决了前列腺癌治疗中无特效药的困难。该药物高效、低毒，治疗效果显著，毒、副作用小。

附图说明

图1是AMP与FLA对人前列腺正常细胞及癌细胞生长影响的曲线图，其中A部分是AMP与FLA对人前列腺癌细胞PC3生长的影响，横坐标表示处理癌细胞的药物浓度(微摩尔)，纵坐标表示细胞生长百分比(与空白对照组比较，即空白组为100％)；其中B部分是AMP与FLA对人前列腺癌细胞LNcap生长的影响，Myricetin为阳性对照药，横坐标与纵坐标的表示同A；其中C部分是AMP与FLA对人前列腺正常细胞PrEc生长的影响，横坐标与纵坐标的表示同A。

图2是AMP与FLA对人前列腺癌细胞PC3生长周期的影响图，横坐标表示处理癌细胞的药物浓度，纵坐标表示细胞生长在各个周期时相的百分比分布。其中A是G1相的分布百分比，B是G2/M相的分布百分比，C是S相的分布百分比，D是Sub-G0相(即调亡细胞)的分布百分比。

图3是AMP与FLA对人前列腺癌细胞LNcap生长周期的影响图，图中所表示的内容与图2相同。

图4是AMP与FLA对小鼠PC3肿瘤原位移植模型的瘤重及淋巴结转移的影响图，其中A是AMP与FLA对小鼠瘤重的影响，横坐标表示不同的处理方式，纵坐标表示瘤体重量；其中B是AMP与FLA对小鼠肿瘤淋巴结转移的影响，横坐标表示不同的处理方式，纵坐标表示小鼠体内淋巴结转移数目。

具体实施方式

本发明的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位主要从葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄、显齿蛇葡萄、小叶蛇葡萄以及光叶蛇葡萄等中提取的，总黄酮有效部位为含有≥10％的蛇葡萄素的总黄酮有效部位。

本发明的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位可以直接制备防治前列腺癌药物或者与其他防治前列腺癌的药物一起制备成防治前列腺癌的复方制剂。

本发明的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物时可以采用药剂学上允许的任何口服剂型、采用药剂学上允许的任何注射剂型或者采用药剂学上允许的利用现代技术(如纳米技术等)制成的剂型。

实施例1

取葡萄科蛇葡萄属植物粤蛇葡萄或显齿蛇葡萄，采用常规的方法提取并纯化，制得蛇葡萄素，直接分装成200mg/支的注射剂型，该注射剂型可以是液体型也可以是粉状。成人用量：200-800mg/天，一日一次。

实施例2

葡萄科蛇葡萄属植物藤茶(显齿蛇葡萄)，经常规提取纯化制得蛇葡萄素或富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位，添加常规的辅料，制粒，过筛，添加硫酸镁和滑石粉，按片剂常规生产工艺制备成片剂。每片含蛇葡萄素或总黄酮250mg。成人用量：每次1-2片，每日2-3次。

实施例3

取葡萄科蛇葡萄属植物藤茶(显齿蛇葡萄)经常规提取的蛇葡萄素或富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位，在按常规生产工艺制成片剂的过程中，添加其它防治前列腺癌的药物，如氟他胺原料粉，每片50-250mg，制备成复方制剂。所述复方制剂中蛇葡萄素或富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位的含量为10-90％。

效果试验

1.用CellTiter 96 Aqueous non-Radioactive Cell Proliferation Assay方法(MTT改良法)测定

AMP与FLA对前列腺癌细胞LNcap和PC3生长的影响：

将对数生长期的PC3或LNcap，以及PrEc细胞用含10％胎牛血清的DMEM液调成细胞浓度1×10⁴/孔，接种于96孔板，过夜培养。次日试验组加入不同浓度的AMP和FLA，以相似结构的杨梅素(Myricetin，Myr)作为阳性对照。阴性对照组只加等量的PBS液，每组设6平行孔，将培养板置于5％CO₂、37℃培养箱中，培养72h。吸去上清液，每孔加入MTS和PMS20μl，继续培养2h左右，在酶标仪上测定各孔490nm处的吸光度A值，计算细胞增殖抑制率(PC3实验未设Myricetin对照)。结果如图1。实验结果显示，AMP及FLA显著抑制前列腺癌细胞LNcap(IC₅₀＝25μM)和PC3(IC₅₀＝60μM)的生长，但对正常前列腺内皮细胞PrEc影响不大(IC₅₀＞100μM)。而Myricetin对两种癌细胞的作用均不如AMP及FLA，但对正常前列腺内皮细胞的抑制作用却大于二者。

2.流式细胞仪测定细胞周期和凋亡变化

将LNcap和PC3细胞接种于10cm的圆形培养皿，调浓度为2×10⁵左右，过夜培养。次日试验组加入不同浓度的AMP、FLA及Myricetin(阳性对照)，终浓度分别为25和50μM，对照组只加等量的PBS液，于5％CO₂、37℃培养箱中培养。收集培养72h的细胞，用80％酒精固定，加RN ase，1500P I碘化丙锭作用30min以后，于流式细胞仪上作DNA片段化的细胞周期及凋亡分析。结果如图2、图3。实验表明，三种药物均增加凋亡细胞的百分比(Sub-G0)，且随着剂量的增大而百分比加大。AMP对两种细胞都有很好的凋亡诱导作用，并且阻滞LNcap细胞周期于S时相，阻滞PC3细胞在G₂/M时相。FLA也有同样的促凋亡效果，同时阻滞PC3在S时相，但对LNcap细胞周期没有明显的阻滞现象。Myricetin阻滞PC3在G₂/M时相，对LNcap细胞周期没有明显的影响。

3.应用肿瘤原位移植(orthotopic implantation)动物模型观察AMP及FLA抑制前列腺癌肿瘤的生长

将PC3细胞接种在免疫缺陷型SCID小鼠的前列腺部位，接种细胞数为1×10⁶/只，造成与临床病理特征相近的肿瘤动物模型。试验组每日以AMP或FLA药液(100mg/kg)灌胃，对照组则每日以等体积的溶剂灌胃，连续10周。小鼠每组8只。实验结束时取瘤组织称重并计算抑瘤率，同时计数体内淋巴结数目。结果如图4。实验结果表明，服用AMP与FLA的小鼠的瘤重明显小于对照组(分别减小28％和38％)，抑制淋巴结转移分别为30％和20％。

Claims

1.蛇葡萄素在制备防治前列腺癌药物中的应用。

2.富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用。

3.根据权利要求1或2所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：所述的蛇葡萄素的化学名为3，5，7，3’，4’，5’-六羟基-2，3-二氢黄酮，其结构式为：

4.根据权利要求1或2所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：所述前列腺癌为激素依赖型和激素非依赖型前列腺癌。

5.根据权利要求2所述的富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：所述的总黄酮有效部位为含有≥10％的蛇葡萄素的总黄酮有效部位。

6.根据权利要求1或2所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：所述蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位直接制备防治前列腺癌药物或者与其他防治前列腺癌的药物一起制备成防治前列腺癌的复方制剂。

7.根据权利要求6所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：采用药剂学上允许的任何口服剂型。

8.根据权利要求6所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：采用药剂学上允许的任何注射剂型。

9.根据权利要求6所述的蛇葡萄素及富含蛇葡萄素的总黄酮有效部位在制备防治前列腺癌药物中的应用，其特征在于：采用药剂学上允许的利用现代技术制成的剂型。