CN101339134A - 一种快速检测蔬菜综合毒性的方法 - Google Patents

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周德平
姜震方
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Abstract

本发明涉及一种快速检测蔬菜综合毒性的方法，属于食品安全检测技术领域，所述的发光细菌检测法，包括如下步骤：1)发光细菌的准备，2)制备测试用菌液，3)选取蔬菜样品，4)进行发光检测，5)发光强度的计算，6)蔬菜食用安全性结果评价。经过发光细菌的准备和样品的预处理，随后进行发光检测，由此判断样品是否存在生物毒性。发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株，菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20－22℃培养12－14h，此时细菌发光明亮，然后进行发光检测，相对发光强度的计算，蔬菜食用安全性结果评价。

Description

一种快速检测蔬菜综合毒性的方法
技术领域
本发明涉及一种快速检测蔬菜综合毒性的方法，属于食品安全检测技术领域。
背景技术
“民以食为天，食以安为先”。当前，蔬菜时常受农药、重金属和未知毒物的污染，因此，蔬菜食用安全性问题尤为引人关注。
通过互联网搜索，与“食用蔬菜农药中毒”有关的信息有近97万多项。由于中国农业的特殊性，蔬菜生产与流通的安全性控制问题呈现基础薄弱，面大点多的特点。
目前，安全控制监测方法的关键技术，以气相、液相色谱以及分光光度计仪器分析为主，可检出样品中的痕量污染物，但是存在着操作复杂、时间长、成本较高等问题，不适于蔬菜生产和流通过程中的现场监测，也无法对污染物质进行生物危害性评估。
一些具有遗传毒性的污染物质逐渐被人们认识；同时，对由多个污染因子引起的食物综合生物毒性也引起了人们的关注。还有类似“苏丹红一号”食品安全危机的出现，对现有蔬菜食用安全监测手段提出挑战，当前只检测蔬菜中已知有毒有害物质，而对未知有毒有害物质就无能为力，尤其对于由多种有毒有害物质共存时产生的综合生物毒性缺乏有效的快速检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测蔬菜综合毒性的发光细菌检测法，本方法用于蔬菜生产和流通过程中进行安全性快速检测，从样品取样处理直到检测结果出来，不超过1小时。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：采用发光细菌检测法，来判定所测样品是否含有毒性物质及其综合毒性的程度，给出可否安全食用的结论。所述的发光细菌检测法，包括如下步骤：1)发光细菌的准备，2制备测试用菌液，3)选取蔬菜样品，4)进行发光检测，5)发光强度的计算，6)蔬菜食用安全性结果评价。经过发光细菌的准备和样品的预处理，随后进行发光检测，由此判断样品是否存在生物毒性。
采用发光细菌检测法，适用于蔬菜上市之前的安全性检测，对所检样品做出生物毒性的综合判断(有毒、无毒或者可疑等)。
以下对如下步骤进行说明：
1)发光细菌的准备，发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株(Vibrioqinghaiensis Q67)，其培养基成分，包括MgSO4 2.47g，MgCO30.79g，MgBr2 0.09g，MgCl2 0.109g，CaCO3 0.103g，KCl 0.122g，NaCl8.29g，Mg(HCO3)2 0.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，于121℃灭菌20min，制成斜面，贮于4℃冰箱备用。
2)用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水(0.85％Nacl溶液)将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。
3)蔬菜样品的准备：取有代表性蔬菜样品50g，叶菜类蔬菜取叶片部位，瓜果类蔬菜用削皮刀取表皮部位，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，，取上清液备用，对照选用同类无污染蔬菜50g，用上述样品处理方法同样处理备用。
4)发光检测。准备好三个测试杯，每个小杯各平行样，对照也取三个测量杯，各加入2ml上清夜同样设置三个平行样。依次加入0.2ml测试用菌液每个测量杯加菌液的时间间隔为15s，放置30min后，发光检测仪依次相隔15s测定各测量杯的发光强度，计算相对发光强度。
5)发光强度的计算：
6)蔬菜食用安全性结果评价
  评价等级   安全   可疑   不安全
  相对发光强度(％)   90～100   80～90   小于80
本发明的有益效果：本方法的优点：1)运用发光细菌法检测技术，对蔬菜食用安全性进行快速检测与评价，与现有方法比较，极大地缩短了检测时间，并降低了成本；2)可以应用于蔬菜食用安全性评价的现场实时检测，进行污染蔬菜的初筛，填补当前在农产品安全综合生物毒性快速评价方法的空白；3)可对因多种污染物(多种农药和重金属残留)引起的蔬菜进行食用安全性综合评估；4)可对农产品中潜在的危险因素进行生物毒性的分析(可以防止类似“苏丹红一号”食品安全危机)。
附图说明
图1为本发明快速检测蔬菜综合毒性方法的步骤流程图。
以下结合附图和实施例对本发明快速检测方法作比较详细说明。
具体实施方式
参照图1，这是本发明快速检测蔬菜综合毒性方法的步骤流程图。
所述的发光细菌检测法，包括如下步骤：发光细菌的准备，测试用菌液的制备，蔬菜样品的准备，发光检测，相对发光强度的计算，蔬菜食用安全性结果评价。经过发光细菌的准备和样品的预处理，随后进行发光检测，由此判断样品是否存在生物毒性。
快速检测蔬菜综合毒性方法在实际样品中的应用。
实施例1：青菜的检测
1)发光细菌Q67的准备
发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株(Vibrio qinghaiensis Q67)，其培养基成分，包括MgSO4 2.47g，MgCO3 0.79g，MgBr2 0.09g，MgCl20.109g，CaCO3 0.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)2 0.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，于121℃灭菌20min，制成斜面，贮于4℃冰箱备用。
2)测试用菌液的制备
用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12h-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水(0.85％Nacl溶液)将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。
3)青菜样品的准备
取有代表性青菜样品50g，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，，取上清液备用，对照选用无污染青菜50g，用上述样品处理方法同样处理备用。
4)发光检测
准备好三个测试小管，每个小管各加入待测青菜样品上清液(5.1.3)2ml，制成三个平行样。对照也取三个测量管，分别加入2ml对照样品上清液，同样也设置三个平行样。依次加入0.2ml测试用(5.1.2)菌液，每个测量管加菌液的时间间隔为15s，放置30min后用发光检测仪依次(相隔15s)检测各测试小管的发光强度，计算相对发光强度。
5)相对发光强度的计算
Figure A20081004169900081
6)青菜食用安全性结果评价
  评价等级   安全   可疑   不安全
  相对发光强度(％)   90～100   80～90   小于80
实施例2：空心菜的检测
1)发光细菌Q67的准备
发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株(Vibrio qinghaiensis Q67)，其培养基成分，包括MgSO4 2.47g，MgCO3 0.79g，MgBr2 0.09g，MgCl20.109g，CaCO3 0.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)2 0.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中。制成斜面，于121℃灭菌20min。贮于4℃冰箱备用。
2)测试用菌液的制备
用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水(0.85％Nacl溶液)将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。
3)空心菜样品的准备
取有代表性空心菜样品50g，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，，取上清液备用，对照选用无污染空心菜50g，用上述样品处理方法同样处理备用。
4)发光检测
准备好三个测试小管，每个小管各加入待测空心菜样品上清液(5.1.3)2ml，制成三个平行样。对照也取三个测量管，分别加入2ml对照样品上清液，同样也设置三个平行样。依次加入0.2ml测试用(5.1.2)菌液，每个测量管加菌液的时间间隔为15s，放置30min后用发光检测仪依次(相隔15s)检测各测试小管的发光强度，计算相对发光强度。
5)相对发光强度的计算
Figure A20081004169900091
6)空心菜食用安全性结果评价
  评价等级   安全   可疑   不安全
  相对发光强度(％)   90～100   80～90   小于80
实施例3：黄瓜的检测
1)发光细菌Q67的准备
发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株(Vibrio qinghaiensis Q67)，其培养基成分，包括MgSO4 2.47g，MgCO3 0.79g，MgBr2 0.09g，MgCl20.109g，CaCO30.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中。制成斜面，于121℃灭菌20min。贮于4℃冰箱备用。
2)测试用菌液的制备
用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水(0.85％Nacl溶液)将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。
3)黄瓜样品的准备
用削皮刀取表黄瓜皮部位，取有代表性的表皮样品50g，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，，取上清液备用，对照选用无污染黄瓜，用上述样品处理方法同样处理备用。
4)发光检测
准备好三个测试杯，每个小杯各平行样，对照也取三个测量杯，各加入2ml上清液同样设置三个平行样。依次加入0.2ml测试用菌液(5.3.2)每个测量杯加菌液的时间间隔为15s，放置30min后，发光检测仪依次相隔15s测定各测量杯的发光强度，计算相对发光强度。
5)相对发光强度的计算
Figure A20081004169900111
6)黄瓜食用安全性结果评价
  评价等级   安全   可疑   不安全
  相对发光强度(％)   90～100   80～90   小于80

Claims (7)

1、一种快速检测蔬菜综合毒性的方法，用于蔬菜生产和流通过程中进行安全性快速检测，其特征在于：所述的综合毒性快速检测的方法，包括如下步骤：1)发光细菌的准备，2)制备测试用菌液，3)选择蔬菜样品，4)发光检测，5)相对发光强度的计算，6)蔬菜食用安全性结果评价；
经过发光细菌的准备和样品的预处理，随后进行发光检测，由此判断样品是否存在生物毒性。
2、根据权利要求1所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于：所述的发光细菌的准备，其菌种采用青海弧菌Q67菌株，Q67菌株培养基成分，包括MgSO4 2.47g，MgCO3 0.79g，MgBr2 0.09g，MgCl20.109g，CaCO3 0.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)2 0.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，于121℃灭菌20min，制成斜面。贮于4℃冰箱备用。
3、根据权利要求1或2所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于.所述的青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水0.85％Nacl溶液，将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。
4、根据权利要求1所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于：所述的样品的检测程序，1)取有代表性蔬菜样品50g，叶菜类蔬菜取叶片部位，瓜果类蔬菜用削皮刀取表皮部位，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，取上清液备用，对照选用同类无污染蔬菜50g，用上述样品备用，2)发光检测，准备好三个测试杯，每个小杯各平行样，对照也取三个测量杯，各加入2ml上清夜同样设置三个平行样，依次加入0.2ml测试用菌液，每个测量杯加菌液的时间间隔为15s，放置30min后，发光检测仪依次相隔15s测定各测量杯的发光强度，计算相对发光强度，3)相对发光强度的计算。
5、根据权利要求1所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于：所述的发光检测，准备好三个测试杯，每个小杯各平行样，对照也取三个测量杯，各加入2ml上清夜同样设置三个平行样，依次加入0.2ml测试用菌液，每个测量杯加菌液的时间间隔为15s，放置30min后，发光检测仪依次相隔15s测定各测量杯的发光强度。
6、根据权利要求1所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于：所述的相对发光强度的计算，其公式为：相对发光强度等于样品三个平行的平均发光值除以对照三个平行样的平均发光值乘以100％。
7、根据权利要求1所述的快速检测蔬菜综合毒性的方法，其特征在于：所述的蔬菜食用安全性结果评价，经过评价结果分为安全、可疑和不安全。
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