CN101338293A - 蛭弧菌微生态制剂的生产方法 - Google Patents
蛭弧菌微生态制剂的生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101338293A CN101338293A CNA2008101457095A CN200810145709A CN101338293A CN 101338293 A CN101338293 A CN 101338293A CN A2008101457095 A CNA2008101457095 A CN A2008101457095A CN 200810145709 A CN200810145709 A CN 200810145709A CN 101338293 A CN101338293 A CN 101338293A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bdellovibrio
- ecological preparation
- host bacterium
- production method
- bacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
本发明公开了一种蛭弧菌微生态制剂的生产方法。该生产方法包含以下步骤：A.制备冻干宿主菌粉；B.制备蛭弧菌培养基；C.以2～5％的蛭弧菌种子接种于装有蛭弧菌培养基的发酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，即得蛭弧菌微生态制剂。本发明蛭弧菌微生态制剂的宿主菌生产工艺独特，采用了冷冻干燥工艺确保宿主菌保存质量，为蛭弧菌生长繁殖提供了稳定可靠的增殖营养源。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物制剂的制备方法，具体地说，本发明是一种蛭弧菌微生态制剂的生产方法。
背景技术
蛭弧菌是一类专门捕食大肠杆菌、沙门杆菌、副溶血弧菌等致病菌为主的寄生性细菌。蛭弧菌作为有效的生物防治病害的生物制剂，很受到动物病害防治及环境改善行业人士青睐。目前，蛭弧菌生产培养采用活宿主菌培养法，一方面宿主菌获取困难不利于大规模生产，另一方面活宿主菌本身会破坏环境不利于蛭弧菌微生态制剂大规模使用。因而，现有技术存在不利于大规模工业生产及蛭弧菌微生态制剂安全使用缺点，本工艺通过巧妙的设计使上述问题得到很好的解决，同时所生产制备的蛭弧菌具有批次间菌数稳定、临床使用效果好之特点。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛭弧菌微生态制剂的生产方法。本工艺提供了有效宿主菌发酵制备方式，采用冷冻干燥技术确保宿主菌的保存质量，为蛭弧菌大规模生产提供可能；采用100～105℃宿主菌灭活技术保存形态完整宿主菌菌体为蛭弧菌寄生增殖创造条件，同时有效解决了活宿主菌给环境造成的污染，为蛭弧菌微生态制剂大规模使用提供可能。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明通过以下技术方案获得：
该生产方法包含以下步骤：A.制备冻干宿主菌粉；B.制备蛭弧菌培养基；C.以2～5％的蛭弧菌种子接种于装有蛭弧菌培养基的发酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，即得蛭弧菌微生态制剂。
所述的宿主菌是大肠杆菌。
在蛭弧菌种子中，蛭弧菌种子的蛭弧菌菌数为1.0×107cfu/ml。
所述的蛭弧菌培养基由以下成分组成：0.004wt％～0.006wt％的冻干宿主菌粉，20mg/L～50mg/L的氯化钙，20mg/L～50mg/L的氯化镁，加入磷酸缓冲液使培养基的pH值保持在7.0～7.8。
所述的蛭弧菌培养基各成分在混合均匀后，在100～105℃灭菌10～15min。
本发明具体可以采用以下步骤：
1、宿主菌大肠杆菌的培养制备：
以2～3％接种量接种宿主菌种子液(菌数大于1.0×108cfu/ml)于含有2～3％蛋白胨、0.6～1.0％酵母粉、0.8～1.0％氯化钠灭菌后的培养基的发酵罐中，通过发酵罐转数及通气量使发酵液中溶氧维持在70～90％水平，通过盐酸及氢氧化钠溶液使发酵罐内pH保持在7.0～7.8之间，经20～24小时发酵得到宿主菌发酵液；离心发酵液获取宿主菌泥，灭菌自来水清洗3次得宿主菌泥，于冷冻干燥机器中-20～-15℃条件下冷冻干燥得到冻干宿主菌粉，保存备用。
2、蛭弧菌微生态制剂的制备：
蛭弧菌培养基成分：0.004％～0.006％的冷冻干燥宿主菌粉，20mg/L～50mg/L氯化钙，20mg/L～50mg/L氯化镁，通过加入磷酸缓冲液使培养基pH保持在7.0～7.8，100～105℃灭菌10～15min。
以2～5％的蛭弧菌种子(蛭弧菌菌数1.0×107cfu/ml)接种于装有上述培养基发酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，蛭弧菌数可达1.0×109cfu/ml以上，即为蛭弧菌微生态制剂。
除非另有说明，本发明所述的百分比均为重量比。
本发明具有如下的优点：
1、蛭弧菌微生态制剂宿主菌生产工艺独特，采用了冷冻干燥工艺确保宿主菌保存质量，为蛭弧菌生长繁殖提供了稳定可靠的增殖营养源。
2、本工艺采用100～105℃进行灭活有害宿主菌，可有效保持宿主菌的完整形态利于蛭弧菌的生长繁殖。
3、本发明蛭弧菌发酵罐中生产时间为24小时，具有生产周期短节约能源的特点。
4、本工艺采用了冷冻干燥工艺制备保存保存宿主菌，确保蛭弧菌保存质量又可保持蛭弧菌批次生产间菌数稳定。
5、和现有蛭弧菌生产工艺(菌数一般为1.0×107cfu/ml)相比，本发明蛭弧菌工艺具有蛭弧菌菌数高(菌数可达1.0×109cfu/ml以上)，在防治由大肠杆菌、沙门氏菌病原菌引起疾病使用剂量只需现有微生态制剂含量的百分之一到十分之一，因而具有防治病使用剂量小成本低廉特点。
具体实施方式
实施例1
a.宿主菌制备：以2％接种量接种大肠杆菌(菌数1.3×108cfu/ml)于含有3％蛋白胨、1％酵母粉、1％氯化钠灭菌后的120L培养基的发酵罐中，200rpm、0.05MPa、2.0m3/h条件下培养4小时培养后开始连续流加50％葡萄糖溶液(每15分钟加入20ml，总共加入1000ml)，通过调整发酵罐转数及通气量使发酵液中溶氧维持在70％，通过流加1M盐酸及5M氢氧化钠溶液使发酵罐内pH维持在7.0～7.3之间，经18小时发酵得到宿主菌发酵液；离心发酵(8000rpm，15min)液获取宿主菌拘泥，灭菌自来水清洗3次得宿主菌泥，于冷冻干燥机器中于-20～-15℃条件下冷冻干燥得到冻干宿主菌粉520g，保存备用。
b.蛭弧菌微生态制剂的培养制备：
蛭弧菌培养基成分：0.005％的冷冻干燥宿主菌粉，20mg/L氯化钙，20mg/L氯化镁，培养基pH保持在7.0～7.2，100～105℃灭菌10～15min，降温至32℃。
以3％的蛭弧菌种子(蛭弧菌菌数1.0×107)接种于装有上述培养基发酵罐中，33℃培养24小时(通过转速及通气量维持溶氧70％)，蛭弧菌数可达1.3×109cfu/ml，包装得到蛭弧菌微生态制剂。
实施例2
a.宿主菌制备：以3％接种量接种大肠杆菌(菌数1.2×108cfu/ml)于含有2％蛋白胨、0.6％酵母粉、0.8％氯化钠灭菌后的120L培养基的发酵罐中，200rpm、0.05MPa、2.0m3/h条件下培养5小时培养后开始连续流加50％葡萄糖溶液(每15分钟加入20ml，总共加入1200ml)，通过调整发酵罐转数及通气量使发酵液中溶氧维持在80％，通过流加1M盐酸及5M氢氧化钠溶液使发酵罐内pH维持持在7.0～7.3之间，经20小时发酵得到宿主菌发酵液；离心发酵(8000rpm，15min)液获取宿主菌拘泥，灭菌自来水清洗3次得宿主菌泥，于冷冻干燥机器中于-20～-15℃条件下冷冻干燥得到冻干宿主菌粉506g，保存备用。
b.蛭弧菌微生态制剂的培养制备：
蛭弧菌培养基成分：0.006％的冷冻干燥宿主菌粉，40mg/L氯化钙，40mg/L氯化镁，培养基pH保持在7.0～7.2，100～105℃灭菌13min，降温至33℃。
以3％的蛭弧菌种子(蛭弧菌菌数1.0×107)接种于装有上述培养基发酵罐中，33℃培养22小时(通过转速及通气量维持溶氧90％)，蛭弧菌数可达1.5×109 cfu/ml，包装得到蛭弧菌微生态制剂。
本工艺采用灭活宿主菌培养制备蛭弧菌微生态制剂，有效的避免有害宿主菌对养殖业浅在危害，制备得到的蛭弧溶液具有蛭弧菌含量高稳定，防治病害使用剂量小，效果显著之特点。如诸城外贸集团公司使用本工艺生产的蛭弧菌溶液防治肉鸡饲养中的大肠杆菌病害，试验组别大肠杆菌得病率为0，而未使用蛭弧菌溶液的对照组大肠杆菌得病率为6％，同时发现本发明工艺制备得到蛭弧菌溶液可有效降低肉鸡饲养成本。
本发明制备得到的蛭弧菌溶液经大量养殖使用实验，可有效地防治鱼虾蟹等水产经济动物的病害的发生，使用后养殖水体改善明显。例如将本发明专利制备得到蛭弧菌溶液用于豆蟹饲养，经由10ppm浸泡15min，豆蟹苗成活率达99％；发明人以本发明制备得到的蛭弧菌进行裂解嗜水气单胞菌实验，得到蛭弧菌数与嗜水气单胞菌的动态变化，菌数变化情况如表1所示。
表1数据显示了实验组中嗜水气单胞菌与蛭弧菌数呈消长变化趋势，蛭弧菌菌数不断增长，嗜水气单胞菌菌数不断下降，而对照组别嗜水气单胞菌菌数略微增长，由此可反映本发明蛭弧菌可有效的裂解抑制水体中嗜水气单胞菌有害菌，起到有效改善养殖水体环境，达到防止养殖生物病害发生目的。
表1 菌数变化表
| 检测时间(/d) | 实验组蛭弧菌菌数(cfu/ML) | 实验组嗜水气单胞菌数(cfu/ML) | 对照组嗜水气单胞菌数(cfu/ML) |
| 0 | 2.3×103 | 6.7×109 | 6.7×109 |
| 1 | 4.9×105 | 5.2×108 | 7.0×109 |
| 2 | 5.2×106 | 4.9×107 | 8.2×109 |
| 3 | 3.2×107 | 7.9×106 | 7.9×109 |
| 4 | 4.8×107 | 5.2×105 | 7.8×109 |
| 5 | 8.5×107 | 4.3×104 | 8.3×109 |
以上对本发明所提供的蛭弧菌微生态制剂的生产方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (7)
1.一种蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于，包含以下步骤：A.制备冻干宿主菌粉；B.制备蛭弧菌培养基；C.以2～5％的蛭弧菌种子接种于装有蛭弧菌培养基的发酵罐中，30～33℃通气培养20～24小时，即得蛭弧菌微生态制剂。
2.如权利要求1所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于：所述的宿主菌是大肠杆菌。
3.如权利要求1所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于：所述的蛭弧菌种子的蛭弧菌菌数为1.0×107cfu/ml。
4.如权利要求1所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于，所述的蛭弧菌培养基由以下成分组成：0.004wt％～0.006wt％的冻干宿主菌粉，20mg/L～50mg/L的氯化钙，20mg/L～50mg/L的氯化镁，加入磷酸缓冲液使培养基的pH值保持在7.0～7.8。
5.如权利要求4所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于：所述的蛭弧菌培养基各成分混合均匀后，在100～105℃灭菌10～15min。
6.如权利要求1所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于，步骤A采用以下步骤：以2～3％接种量接种宿主菌种子液于含有2～3％蛋白胨、0.6～1.0％酵母粉、0.8～1.0％氯化钠灭菌后的培养基的发酵罐中，通过发酵罐转数及通气量使发酵液中溶氧维持在70～90％水平，通过盐酸及氢氧化钠溶液使发酵罐内pH保持在7.0～7.8之间，经20～24小时发酵得到宿主菌发酵液；离心发酵液获取宿主菌泥，灭菌自来水清洗3次得宿主菌泥，于冷冻干燥机器中-20～-15℃条件下冷冻干燥得到冻干宿主菌粉，保存备用。
7.如权利要求6所述的蛭弧菌微生态制剂的生产方法，其特征在于：所述的宿主菌种子液的菌数大于1.0×107cfu/ml。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008101457095A CN101338293B (zh) | 2008-08-11 | 2008-08-11 | 蛭弧菌微生态制剂的生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2008101457095A CN101338293B (zh) | 2008-08-11 | 2008-08-11 | 蛭弧菌微生态制剂的生产方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101338293A true CN101338293A (zh) | 2009-01-07 |
| CN101338293B CN101338293B (zh) | 2012-03-21 |
Family
ID=40212463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2008101457095A Active CN101338293B (zh) | 2008-08-11 | 2008-08-11 | 蛭弧菌微生态制剂的生产方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101338293B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102674563A (zh) * | 2012-06-04 | 2012-09-19 | 广东金海润生物科技有限公司 | 新型环保高效微生物水质净化混合剂及其制备方法 |
| CN101637186B (zh) * | 2009-08-28 | 2013-02-20 | 华南理工大学 | 一种防治农作物细菌性病害的菌剂及其制备方法与应用 |
| CN111549003A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-18 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 副溶血弧菌噬菌体、蛭弧菌及其应用 |
-
2008
- 2008-08-11 CN CN2008101457095A patent/CN101338293B/zh active Active
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101637186B (zh) * | 2009-08-28 | 2013-02-20 | 华南理工大学 | 一种防治农作物细菌性病害的菌剂及其制备方法与应用 |
| CN102674563A (zh) * | 2012-06-04 | 2012-09-19 | 广东金海润生物科技有限公司 | 新型环保高效微生物水质净化混合剂及其制备方法 |
| CN102674563B (zh) * | 2012-06-04 | 2014-04-16 | 广东金海润生物科技有限公司 | 新型环保微生物水质净化混合剂 |
| CN111549003A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-18 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 副溶血弧菌噬菌体、蛭弧菌及其应用 |
| CN111549003B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-08-02 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 副溶血弧菌噬菌体、蛭弧菌及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101338293B (zh) | 2012-03-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109251874B (zh) | 一种益生菌制剂及其制备方法和应用 | |
| CN101690545B (zh) | 一种菌剂与酶复合微生态制剂的生产方法 | |
| CN103981118B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法和应用 | |
| CN101869184B (zh) | 一种微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN106260540B (zh) | 一种用于教槽料的生物饲料及教槽料 | |
| CN102067941B (zh) | 一种饲用复合微生物制剂的生产方法 | |
| CN103583880B (zh) | 南美白对虾微生物发酵饲料 | |
| CN110982753B (zh) | 凝结芽孢杆菌mes847、菌剂、鸡饲料、制备方法及应用 | |
| CN104904994A (zh) | 三大类菌混合液体发酵、固体发酵物饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN109548962B (zh) | 一种包含植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其应用 | |
| CN103184174A (zh) | 培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产 | |
| CN114276946B (zh) | 植物乳杆菌、菌剂以及饲料及其应用 | |
| CN110982750A (zh) | 一种沼泽红假单胞菌高密度发酵方法及其应用 | |
| CN103283972A (zh) | 一种丁酸梭状芽孢杆菌活菌制剂的固体发酵生产方法 | |
| CN105199978A (zh) | 一种用于畜禽养殖的凝结芽孢杆菌制剂及其制备方法 | |
| CN101338293B (zh) | 蛭弧菌微生态制剂的生产方法 | |
| CN105211632A (zh) | 一种多效微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN111700155A (zh) | 含有低聚木糖的凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN111972564A (zh) | 一种缓解仔猪断奶应激的液态人工乳及其制备方法 | |
| CN104388327A (zh) | 一种微生态制剂、饲料添加剂及预混料 | |
| CN110295126A (zh) | 一种混合益生菌制剂及其制备工艺 | |
| CN104894028A (zh) | 一种渔用海洋微生态制剂及其制备方法 | |
| CN103289915A (zh) | 一种稳定安全的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法和用途 | |
| CN111728081B (zh) | 一种饲料添加剂用复合菌发酵液及其制备方法 | |
| CN103305435A (zh) | 一种植物乳酸杆菌培养物的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: SHANDONG SINDER TECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: CUI ZENGXUE Effective date: 20120724 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 266071 QINGDAO, SHANDONG PROVINCE TO: 262200 WEIFANG, SHANDONG PROVINCE |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20120724 Address after: 262200 Industrial Park, Shun Road, Zhucheng Development Zone, Shandong Patentee after: Shandong Sinder Technology Co., Ltd. Address before: 266071 Academy of life sciences, room 268, Hongkong East Road, Qingdao, Shandong Patentee before: Cui Zengxue |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20090107 Assignee: Beijing Xinde Weite Technology Co.,Ltd. Assignor: Shandong Sinder Technology Co., Ltd. Contract record no.: 2014990000225 Denomination of invention: Method for producing microecological preparation of bdellovibrio bacteriourus Granted publication date: 20120321 License type: Exclusive License Record date: 20140421 |
|
| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model |