CN101336983A - 白花蛇舌草及含白花蛇舌草的制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种白花蛇舌草及含有白花蛇舌草的制剂的质量控制方法，该方法以去乙酰车叶草酸甲酯作为指标成分，通过对其定性或定量测定来对白花蛇舌草及含有白花蛇舌草的制剂进行质量控制。本发明采用薄层色谱法对去乙酰车叶草酸甲酯进行定性测定，用高效液相色谱法对去乙酰车叶草酸甲酯进行定量测定，并且可以将这两种方法结合起来使用。本发明方法简单方便、重现性好、专属性强、准确性高，有利于产品的质量控制，适合工业推广。

Description

白花蛇舌草及含白花蛇舌草的制剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中草药及含有该中草药制剂的分析方法，特别涉及白花蛇舌草药材及含白花蛇舌草的制剂的质量分析方法，具体地说是以白花蛇舌草中的特有成分去乙酰车叶草酸甲酯作为指标成分，对白花蛇舌草药材和含有白花蛇舌草的制剂进行质量控制的方法。

背景技术

白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草，是一种常用中草药，主要含有齐墩果酸(oleanolic acid)、对-香豆酸(p-coumaric acid)、豆甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖甙、三十一烷等化学成分。白花蛇舌草清热解毒，活血利尿。用于扁桃体炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、阑尾炎、肝炎、菌痢、毒蛇咬伤、肿瘤等疾病。现已有多种含有白花蛇舌草的制剂，如主要成分为白花蛇舌草的花红胶囊、花红片、花红颗粒，主要用于盆腔炎、附件炎、子宫内膜炎等妇科疾病，疗效显著，应用十分广泛；白花蛇舌草注射剂用于湿热蕴毒所致的呼吸道感染，扁桃体炎，肺炎，胆囊炎，阑尾炎，痈疖脓肿及手术后感染，亦可用于癌症辅助治疗，应用也十分的广泛。白花蛇舌草在广西、湖南、内蒙、广东等多个地区的药材标准中都有收载，标准中鉴别项为显微鉴别和薄层鉴别，薄层鉴别以齐墩果酸作为对照品，这些标准虽然起到了较好的控制质量的作用，但含齐墩果酸的中药材较多，如女贞子、连翘、槲寄生、凌霄花、车前草、青叶胆、黄花败酱、东方沙枣、冬凌草、藏菌陈等以及牛膝和五加科属植物根均含有齐墩果酸，所以该项鉴别的专属性不强；在白花蛇舌草注射液的质量控制过程中，采用芦丁作为对照品来测定总黄酮的量(见中药部颁标准17册白花蛇舌草注射液质量标准)，而芦丁作为一种黄酮类成份，主要存在于芸香科植物芸香Ruta graveolens L全草，豆科植物槐Sophora japonica L的花蕾(槐米)和果实(槐角)，金丝桃科植物红呈莲Hypericum ascyron L.全草及蓼科植物荞麦Fagopyrum esculentum Moench籽苗中，即在多种植物中都存在，作为药物的质量控制方法，缺乏专属性。在花红胶囊产品的质量控制过程中(见标准号为WS-10179(ZD-0179)-2002的花红胶囊质量标准)，采用槲皮素作为含测指标，槲皮素作为一种黄酮类成份，是芦丁的降解产物，因此在同时也含有芦丁成份的制剂中，也缺乏专属性；花红片及花红颗粒现在的质量控制标准中没有列出针对白花蛇舌草的含量测定项目，所以对其制定相应的专属性强的质量控制指标就显得十分重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白花蛇舌草和含有白花蛇舌草的制剂的新的质量控制方法，以解决现有技术中对白花蛇舌草和含有白花蛇舌草的制剂缺乏专属性强的质量控制方法的问题。

本发明的质量控制方法是以白花蛇舌草中的特有成分去乙酰车叶草酸甲酯作为指标成分，对白花蛇舌草药材和含白花蛇舌草的制剂进行质量控制。

去乙酰车叶草酸甲酯为从白花蛇舌草药材中分离提纯出的一个化合物，是一个环烯醚萜类的成份，在其他药材中很少含有，现有文献报道只在大黄及栀子的果实中含有。该成份在白花蛇舌草中的含量较高，因此将其用于控制白花蛇舌草药材及其制剂的质量专属性强。

本发明运用薄层色谱法鉴别或高效液相色谱法进行含量测定，或同时运用这两种方法，用以鉴别药材的真伪、控制药材及其制成品的质量。

本发明的质量控制方法是将白花蛇舌草或含白花蛇舌草的制剂用适宜方法进行处理，制成供试品溶液，与去乙酰车叶草酸甲酯制成的对照品溶液进行对照，从而定性或定量地对样品中去乙酰车叶草酸甲酯进行测定。

其中，高效液相色谱含量测定方法是将供试品提取并纯化后，制备成含去乙酰车叶草酸甲酯的供试品溶液，同时制备对照品溶液，将供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，外标法定量，计算出供试品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。具体地说，其测定方法为：

1、对照品溶液的制备

精密称取去乙酰车叶草酸甲酯对照品适量，用流动相配制成对照品溶液。

该对照品溶液浓度为20μg/ml～200μg/ml，优选60μg/ml。

2、供试品溶液的制备

取供试品适量，精密称定，置100ml烧瓶中，加提取溶剂适量，提取2～3次得提取液，滤过，合并滤液，经大孔树脂纯化，收集洗脱液，蒸干。残渣加溶剂定容至刻度，摇匀，即得。

(1)样品提取溶剂为水或5％～95％乙醇，提取方式为加热提取或超声波提取，提取次数为2～3次，每次15～60分钟。

(2)选用水作为提取溶剂时，提取加热的最佳温度为60～80度。

(3)优选的提取过程为：

取含白花蛇舌草的固体制剂适量，研细，精密称取适量，置烧瓶中，加水适量，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水适量，再在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液；

取白花蛇舌草药材，粉碎，精密称取适量，置烧瓶中，加10％乙醇适量，加热回流提取30分钟，滤过，残渣加10％乙醇适量，继续加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加10％乙醇适量，加热回流提取30分钟，滤过，合并滤液；

当制剂为含白花蛇舌草的液体制剂时，提取过程可简化，优选的制备过程为：精密量取相当于去乙酰车叶草酸甲酯的量为0.5mg～1mg的制剂，加适量水稀释。

(4)大孔树脂为非极性树脂，可选D-101及ADS-8树脂柱，上样后，用水洗涤，然后用10～90％乙醇或10％～90％甲醇洗脱，收集洗脱液。

优选的纯化过程：将提取的滤液通过ADS-8树脂柱，上样后，用水洗涤，弃去洗涤液，再用80％甲醇洗脱，收集洗脱液。

当滤液为含乙醇的溶液时，上样前应挥干乙醇。

3、测定方法照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版附录VI

D)的方法进行测定。

色谱条件：十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-水(3～10∶90～97)或甲醇-水(3～10∶90～97)为流动相。流速1ml/分钟，紫外检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液适量，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

其中流动相优选为乙腈∶水＝4∶96溶液。

去乙酰车叶草酸甲酯易溶于甲醇、乙醇，并溶于水，采用水或稀乙醇进行提取可充分提取出该物质，用加热提取或超声波提取的方式，并提取两至三次，可基本提取完全。试验证明两种提取方法结果相似。为充分保留制剂中的有效成份，如果采用水作为提取溶剂，按加热方式提取，温度应控制在60℃～80℃。

采用大孔树脂纯化时，上样后，先用水洗去杂质，经薄层法检测，该杂质中不含去乙酰车叶草酸甲酯。然后用10％～90％乙醇或10％～90％甲醇进行洗脱，洗脱完全后，将洗脱液蒸干，残渣用水或甲醇分次溶解，定容，摇匀，即得。

以花红胶囊作为实验对象，对含白花蛇舌草的固体制剂进行含量测定的优选过程如下：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水(4∶96)为流动相；检测波长236nm。理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取本品20粒内容物，研细，取1g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，并转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

采用上述方法，并对其中部分条件进行改变，进行测定，结果见下表：

条件	(1)上述方法	(2)	(3)	(4)
					提取溶剂	水	水	10％乙醇	70％乙醇
提取方式	70℃水浴加热浸渍	70℃水浴加热浸渍	加热回流提取	加热回流提取
					提取次数	2次，每次30min	2次，每次30min	2次，每次30min	2次，每次30min
树脂柱型号	ADS-8	D-101	ADS-8	ADS-8
					洗脱液	80％甲醇	90％甲醇	90％乙醇	50％甲醇

流动相	4％乙腈溶液	3％乙腈溶液	10％乙腈溶液	3％甲醇溶液
					含量测定结果	0.21mg/粒	0.17mg/粒	0.19mg/粒	0.11mg/g

由上表可以看出，(1)为其中的优选方案。

按优选的方案(1)，进行加样回收率试验，取白花蛇舌草的固体制剂内容物，研细，取5份，分别精密称定，每份中加入去乙酰车叶草酸甲酯对照品溶液40μl(1.056mg/ml)，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定其中去乙酰车叶草酸甲酯的含量，计算回收率，其平均回收率为98.84％，RSD为0.90％。

对白花蛇舌草药材的测定方法优选过程如下：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水(4∶96)为流动相；检测波长236nm。理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取药材适量，粉碎，精密称取4g，置100ml烧瓶中，加水60ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水60ml，再在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，滤液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，然后用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

采用上述方法，并对其中部分条件进行改变，进行测定，结果见下表：

条件

A(上述方法)

B

C

D

E

F

G

I

提取溶剂	水	50％乙醇	10％乙醇	10％乙醇	95％乙醇	10％乙醇	5％乙醇	50％乙醇
									提取方式	70℃水浴加热浸渍	加热回流提取	加热回流提取	加热回流提取	加热回流提取	加热回流提取	加热回流提取	超声波提取
提取次数	2次，每次30min	2次，每次30min	2次，每次30min	2次，每次30min	2次，每次30min	3次，每次30min	2次，每次15min	2次，每次60min
									树脂柱型号	ADS-8	ADS-8	D-101	ADS-8	ADS-8	ADS-8	ADS-8	D-101
洗脱液	80％甲醇	80％甲醇	80％甲醇	80％甲醇	80％甲醇	80％甲醇	10％乙醇	10％甲醇
									流动相	4％乙腈溶液	4％乙腈溶液	4％乙腈溶液	4％乙腈溶液	4％乙腈溶液	4％乙腈溶液	4％甲醇溶液	10％甲醇溶液
含量测定结果	0.035mg/g	0.174mg/g	0.170mg/g	0.303mg/g	0.179mg/g	0.318mg/g	0.216mg/g	0.180mg/g

由上述结果可以看出，白花蛇舌草药材以去乙酰车叶草酸甲酯作为指标的含量测定方法优选F方案。

以优选的方案F，进行加样回收率试验，取白花蛇舌草药材，粉碎，取5份，精密称定，每份中加入去乙酰车叶草酸甲酯对照品溶液40μl(1.056mg/ml)，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定去乙酰车叶草酸甲酯的含量，计算回收率，其平均回收率为98.32％，RSD为0.92％。

在对含白花蛇舌草的液体制剂进行含量测定的优选时，直接采用将精密量取的白花蛇舌草注射液加适量水稀释，过ADS-8型大孔吸附树脂柱，并参照含白花蛇舌草的固体制剂优选的测定方法进行测定，结果良好。进行的加样回收率试验表明，其加样回收率在98％以上。

所说的薄层鉴别方法为：

1、对照品溶液的制备

取去乙酰车叶草酸甲酯加甲醇适量制成浓度范围为0.1～5mg/ml的溶液，在这个浓度范围内，对照品斑点都能非常清晰的观察。

2、供试品溶液的制备

取白花蛇舌草药材粉碎或取含白花蛇舌草的固体制剂研细，加甲醇或乙醇提取二次，滤过，合并滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇定容，作为供试品溶液；

当含白花蛇舌草的制剂为溶液剂时，可量取溶液剂适量，蒸干，残渣加甲醇定容，作为供试品溶液。

3、展开剂

以氯仿-甲醇-水或氯仿-乙醇-氨水为展开剂。优选比例为：氯仿-甲醇-水为5∶1.5∶0.1；氯仿-乙醇-氨水为7.5∶7.5∶1，这个优选的比例能保证薄层鉴别时效果良好。

4、显色剂

显色剂为盐酸-乙醇溶液或硫酸乙醇溶液，对其浓度要求不高，一般盐酸-乙醇溶液为按体积比1∶3～5；硫酸乙醇的浓度为0.5％即可达到较好的显色效果。

5、按薄层色谱法(中国药典附录)进行试验

吸取供试品溶液及对照品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，喷以显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，检查是否有相同的蓝色斑点对应。

本发明采用的质量控制方法以白花蛇舌草中的特有成分去乙酰车叶草酸甲酯作为指标成分，对白花蛇舌草药材和含白花蛇舌草的制剂进行质量控制。可运用薄层色谱法或高效液相色谱法或同时运用这两种方法对去乙酰车叶草酸甲酯进行鉴别或含量测定，其专属性强、重现性好，克服了原白花蛇舌草药材及含白花蛇舌草的制剂质量标准不完善、产品质量控制指标专属性差的缺点，也为鉴别白花蛇舌草药材真伪提供了好的质量控制方法。

本发明方法简单方便、重复性好、专属性强、准确性高，有利于产品的质量控制，适合工业推广。

具体实施方式

下面实施例用于对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1白花蛇舌草的薄层色谱鉴别

取白花蛇舌草药材4g，粉碎，加甲醇30ml，回流30分钟，滤过，残渣加甲醇30ml再回流30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯1mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(5∶1.5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸-乙醇溶液(按体积比1∶5)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例2白花蛇舌草的薄层色谱鉴别

取白花蛇舌草药材4g，粉碎，加乙醇30ml，回流30分钟，滤过，残渣加乙醇30ml再回流30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯0.5mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醇-氨水(7.5∶7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸-乙醇溶液(按体积比1∶3)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例3白花蛇舌草的薄层色谱鉴别

取白花蛇舌草药材4g，粉碎，加甲醇30ml，回流30分钟，滤过，残渣加甲醇30ml再回流30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯2mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醇-氨水(7.5∶7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例4白花蛇舌草的含量测定

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-水(4∶96)为流动相，流速1mL/min，紫外检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取白花蛇舌草药材，粉碎。精密称取4g，置100ml锥形瓶中，加入60ml 10％乙醇，加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加10％乙醇60ml，加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加10％乙醇60ml，加热回流提取30分钟，滤过，合并滤液，滤液挥干乙醇，通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，然后用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每克含去乙酰车叶草酸甲酯为0.318mg。

实施例5花红胶囊的薄层色谱鉴别

花红胶囊为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

取本品3粒内容物，研细，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，残渣加甲醇30ml再加热回流30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯1mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(5∶1.5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸-乙醇溶液(按体积比1∶5)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例6花红胶囊的含量测定

花红胶囊为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水(4∶96)为流动相；检测波长236nm。理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取本品20粒内容物，研细，取1g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，并转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每粒含白花蛇舌草以去乙酰车叶草酸甲酯计为0.21mg。

实施例7花红片的薄层色谱鉴别

花红片为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

取本品4片，除去外部包衣，研细，内容物加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，残渣加甲醇30ml再加热回流30分钟，过滤，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯1mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醇-氨水(7.5∶7.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸--乙醇溶液(按体积比1∶3)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例8花红片的含量测定

花红片为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-水(4∶96)为流动相，检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重的去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取花红片20片，去除外部包衣，研细。精密称取内容物1.2g，置100ml锥形瓶中，加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，滤液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每片含白花蛇舌草以去乙酰车叶草酸甲酯计为0.13mg。

实施例9花红片的含量测定

花红片为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂，甲醇-水(10∶90)为流动相，检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取花红片20片，去除外部包衣，研细。精密称取内容物1.2g，置100ml圆底烧瓶中，加入40ml 10％乙醇，加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加10％乙醇40ml，加热回流提取30分钟，滤过，合并滤液，滤液挥干乙醇，通过大孔吸附D-101树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用90％的乙醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液液，即得。

测定法  精密吸取对照品溶液10μl和供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，外标法定量，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每片含白花蛇舌草以去乙酰车叶草酸甲酯计为0.11mg。

实施例10花红颗粒的含量测定

花红颗粒为广西壮族自治区花红药业股份有限公司提供。

【含量测定】去乙酰车叶草酸甲酯  照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-水(4∶96)为流动相，流速1mL/min，紫外检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  取花红颗粒2袋(10g/袋)，研细。精密称取内容物13.3g，置100ml锥形瓶中，加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加40ml水，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，滤液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用80％的乙醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每袋含白花蛇舌草以去乙酰车叶草酸甲酯计为0.64mg。

实施例11白花蛇舌草注射液的薄层色谱鉴别

白花蛇舌草注射液购自江西天狮中药集团。

量取白花蛇舌草注射液10ml，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取去乙酰车叶草酸甲酯1mg，加甲醇1ml制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(5∶1.5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸-乙醇溶液(按体积比1∶5)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一个相同的蓝色斑点对应。

实施例12白花蛇舌草注射液的含量测定

白花蛇舌草注射液购自江西天狮中药集团。

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈-水(3∶97)为流动相，检测波长236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备  精密称取干燥至恒重去乙酰车叶草酸甲酯适量，用流动相配制成每1ml含60μg的溶液。

供试品溶液的制备  精密量取白花蛇舌草注射液2ml，加水40ml稀释，溶液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱(内径3cm，柱高10cm)，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，再用80％的乙醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，计算即得本品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

经测定，本品每ml含白花蛇舌草以去乙酰车叶草酸甲酯计为0.102mg。

Claims (11)

1、一种白花蛇舌草及含有白花蛇舌草的制剂的质量控制方法，其特征在于，该方法以去乙酰车叶草酸甲酯作为指标成分，通过对其定性和/或定量测定来对白花蛇舌草及含有白花蛇舌草的制剂进行质量控制。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，用薄层色谱法对去乙酰车叶草酸甲酯进行定性测定，用高效液相色谱法对去乙酰车叶草酸甲酯进行定量测定。

3、如权利要求2所述的方法，其中薄层色谱法定性测定的方法是：取白花蛇舌草药材粉碎或取含白花蛇舌草的固体制剂适量，加甲醇或乙醇提取二次，滤过，合并滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇定容，作为供试品溶液，或取白花蛇舌草液体制剂适量，蒸干，残渣加甲醇定容，作为供试品溶液；吸取供试品溶液及对照品溶液，分别点于同一硅胶薄层板上，以展开剂展开，晾干后，喷以显色剂，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，检查是否有相同的蓝色斑点对应。

4、如权利要求3所述的方法，其特征在于，展开剂是体积比为5∶1.5∶0.1的氯仿-甲醇-水溶液或体积比为7.5∶7.5∶1的氯仿-乙醇-氨水溶液；所述显色剂为按体积比1∶3～5的盐酸-乙醇或0.5％的硫酸乙醇溶液。

5、如权利要求2所述的方法，其中高效液相色谱定量测定方法包括如下步骤：

1)将供试品制备成含去乙酰车叶草酸甲酯的白花蛇舌草供试品溶液；

2)高效液相色谱法定量测定供试品中去乙酰车叶草酸甲酯的含量。

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述供试品为白花蛇舌草药材或含白花蛇舌草的固体制剂时，其供试品溶液的制备方法是：精确称取供试品适量，加入提取溶剂进行提取，提取液滤过，合并滤液，滤液经大孔树脂纯化，收集洗脱液，蒸干，残渣加溶剂定容至刻度，摇匀；所述提取溶剂为水或5％～95％的乙醇，用所述溶剂提取2～3次，每次15～60分钟；

所述供试品为含白花蛇舌草的液体制剂时，其供试品溶液的制备方法是：精密量取供试品溶液适量，加水稀释，溶液经大孔树脂纯化，收集洗脱液，蒸干，残渣加溶剂定容至刻度，摇匀；

所述大孔树脂为ADS-8型或D-101型树脂柱，上样后，先用水洗涤，再用10～90％的甲醇或乙醇洗脱。

7、如权利要求6所述的方法，其特征在于，含白花蛇舌草的固体制剂的供试品溶液的制备方法是：精密称取相当于去乙酰车叶草酸甲酯的量为0.5mg～1mg的制剂，置100ml烧瓶中，加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，残渣再加水40ml，在70℃水浴中加热浸渍30分钟，滤过，合并滤液，滤液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，然后用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

8、如权利要求6所述的方法，其特征在于，供试品为白花蛇舌草药材时，供试品溶液的制备方法是：取药材适量，粉碎，精密称取4g，置100ml烧瓶中，加入10％乙醇加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加入10％乙醇加热回流提取30分钟，滤过，残渣再加入10％乙醇加热回流提取30分钟，滤过，合并滤液，滤液挥干乙醇后通过ADS-8型大孔吸附树脂柱，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，然后用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度。

9、如权利要求6所述的方法，其特征在于，含白花蛇舌草的液体制剂的供试品溶液的制备方法是：精密量取相当于去乙酰车叶草酸甲酯的量为0.5mg～1mg的制剂，加适量水稀释，溶液通过ADS-8型大孔吸附树脂柱，用水200ml洗涤，弃去洗涤液，然后用80％的甲醇200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水适量使溶解，转移至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

10、如权利要求5所述的方法，其特征在于，色谱的条件是：填充剂为十八烷基键合硅胶；流动相是体积比为3～10∶90～97的乙腈-水溶液或体积比为3～10∶90～97的甲醇-水溶液；检测波长为236nm，理论塔板数按去乙酰车叶草酸甲酯峰计算，应不低于6000。

11、如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述流动相是体积比为4∶96的乙腈-水溶液。