CN101329350A - 检测鼻咽癌特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测鼻咽癌特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法，属于质谱检测技术领域。本发明从血清中筛选出6个上调蛋白和5个下调蛋白作为特征蛋白，选取所述11个蛋白中任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了鼻咽癌患者与正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴结转移、鼻咽癌远端转移患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型；本发明为进一步发现新的鼻咽癌生物标志提供了基础。本发明对于鼻咽癌的检测优于目前所采用的任何单一检测方法，为鼻咽癌的早期发现、早期治疗提供了一种非侵入性技术，从而为降低鼻咽癌的病死率、提高鼻咽癌的治愈率，并进一步为高危人群筛查鼻咽癌提供了一种新方法。

Description

检测鼻咽癌特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于质谱检测技术领域，特别涉及对鼻咽癌血液优化的质谱检测方法。一种通过能与蛋白质结合的磁珠基质去捕获生物标志，并用有定量控制的质谱分析来检测鼻咽癌生物标志。在此提及的此项发明涉及蛋白质检测领域，为一种新的非侵入性的体外质谱检测方法。本发明可以应用到已经脱离人体的体液中的鼻咽癌生物标志组合的检测方法或试剂盒。

背景技术

鼻咽癌的发生是一个多基因突变导致抑癌基因失活、癌基因活化的过程。肿瘤的发生、发展是一个十分复杂和漫长的过程，伴随多基因和蛋白的分子改变。基因组学研究由于自身的限制难以完全阐明基因与蛋白质参与过程及其具体作用。蛋白质组学高灵敏度的分析技术有助于捕获那些在肿瘤演变过程中细微的分子变化，使之成为诊断和监测肿瘤演变的重要线索。目前临床上对恶性肿瘤预后评估主要依赖于临床表现、病理学及传统肿瘤标志(tumor marker)，但肿瘤早期复发或转移时常常无明显临床表现，而病理学证据很难得到且重复性差。鼻咽癌的发病率以中国的南方较高，如广东、广西、湖南等省，特别是广东的中部和西部的肇庆、佛山和广州地区更高。据报道，居住在广东省中部以及操广东地方语的男性，其发病率为30/10万～50/10万。就全国而言，鼻咽癌的发病率由南到北逐渐降低，如最北方的发病率不高于2/10万～3/10万。鼻咽癌容易发生颈部淋巴结转移，约为60％～86％，鼻咽癌的远处转移率约在5％～27％之间。远处转移是鼻咽癌治疗失败的主要原因之一。常见的转移部位是骨、肺、肝等，多器官同时转移多见。EB病毒血清学检测目前普遍应用的是以免疫酶法检测EB病毒的IgA/VCA和IgA/EA抗体滴度。前者敏感度较高，准确性较低；而后者恰与之相反。故对疑及鼻咽癌者宜同时进行两种抗体的检测，这对早期诊断有一定帮助。近年来随着临床蛋白质组学的开展，使得鼻咽癌的早期发现成为可能。

蛋白质的分离技术在蛋白质组学中应用分离技术有两个目的。第一、通过将蛋白质的混合物分离成单一蛋白质或蛋白质小组以简化复杂的蛋白质混合物；第二、通过标记的方法可以比较两个蛋白质的混合物样品中蛋白质的不同表现。其中主要的技术有双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)、高效液相层析(high-performanceliquid chromatography，HPLC)、毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)、亲和层析(affinity choromatography)、蛋白芯片(protein microarray)、磁性微球(magneticbeads，简称磁珠)和免疫组等。特别是蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术克服了以往技术的缺点，具有高灵敏度、高通量、结果重复性好、可机械化操作和方法灵活等特点。待测样品来源广泛，不需作特殊前处理，可以直接点样检测，如血清、尿液及组织液等；检测快速，一般一例标本的检测时间仅需约5分钟，从标本制备到出结果全过程仅约1小时。蛋白芯片和磁珠两项新的蛋白指纹图谱技术有可能在体液中潜在生物标志(biomarker)检测方面创造革命性突破(许洋，蛋白质指纹图谱技术在实验诊断与临床医学中的研究进展，基础医学与临床，2007，27：134-142)。基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of fight massspectrometry，MALDI-TOF-MS)与蛋白芯片分离技术联合应用即为表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of fight massspectrometry，SELDI-TOF-MS)。2-DE最先被用于临床蛋白组学研究，但其对疏水性、强酸性和强硷性蛋白的分辩率不够，而且不能检测低丰度蛋白，故实用价值受限。近来，蛋白芯片与质谱技术(SELDI-TOF-MS)的结合，已被成功地用于肿瘤研究；但由于磁珠表面的结合面积远远大于蛋白芯片，从而磁珠的灵敏性比蛋白芯片更高(刘建栋等，血液蛋白质组与质谱仪检测流程标准化初探。基础医学与临床，2007，27：193-197)。磁珠具有优于二维电泳、蛋白芯片和其他质谱方法的特点，已被广泛地用于肿瘤生物标志的筛查等研究(屠世良等，癌胚抗原阴性结直肠癌的检测和结直肠癌预后相关生物标志，基础医学与临床，2007)。该技术具有操作简便、无需离心样品、可直接分析原始生物样本(如血清、尿液等)、样本用量小等特点，同时适合多样品平行检测和直接进行蛋白质全景式的搜索和分析，特别是对小分子量蛋白和低丰度蛋白具有较高的捕获效果，可以与其他蛋白质组学方法互补，目前已被广泛地用于肿瘤标志的筛查和临床检测，并均已获得很好的结果。但国内迄今尚无采用磁珠与质谱技术获得检测正常及鼻咽癌血清特征蛋白的报道。

发明内容：

本发明的目的是为克服对目前鼻咽癌血清检测技术的不足之处，建立一种检测鼻咽癌特征蛋白的优化质谱模型及其制备方法和应用，该模型为早期检测提供了新的途径和方法，并为进一步发现新的肿瘤生物标志提供了基础。

本发明提出的检测鼻咽癌血清蛋白质的质谱模型，其特征在于：从血清中筛选出6个上调蛋白和5个下调蛋白作为特征蛋白；选取上述11个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了鼻咽癌患者与正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴结转移、鼻咽癌远端转移患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型(图3-5)，所说的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76；m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76；m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70；分子量(m/z)误差＜0.01％，临界峰值均值M的CV＜5～10％。

本发明提出上述的检测鼻咽癌血清蛋白质谱模型的制备方法，包括以下步骤：

1)4℃条件下2小时内收集经病理明确诊断的鼻咽癌患者血清及经体检确定为正常健康者的血清作为两组血清标本，进行-80℃低温冷冻备用；

2)采用WCX磁珠或C8及C18疏水基质磁珠对所述鼻咽癌患者及正常人的两组血清标本的蛋白进行吸附；

3)用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，用氮激光仪(337nm)和80cm或120cm飞行管分析阵列，或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用液相色谱质谱联用仪(LC-MS)对结合在磁珠上的两组血清蛋白进行读取，设定最高检测分子量为50kDa，优化分子量范围1000～15000Da，最佳聚集中心8000Da，数据采集参数范围20～80，激光强度150-180，检测敏感度为7-8，收集总数为130次，由此获得两组蛋白质谱图谱；

4)在每次实验数据收集前，用All-in-one标准蛋白及质谱的标准化质控O型血清校正仪器，用2746±1Da、5909±1Da、6634±1Da标准峰为质谱内标定性(分子量)质控标准，使分子量误差＜0.01％，从而获得的精确的蛋白质谱图谱；

5)定量性质谱调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清(浆)，将标准化质控血清中用于定量的标准峰6634.0Da等强度调至50％信号强度的最大值，使临界峰值均值M的CV＜5～10％，并收集精确的质谱图谱数据；

6)对所得数据进行Mann-Whitney U检验统计学处理，根据鼻咽癌患者和正常人血清之间蛋白峰值的差异(共得到253个蛋白峰，认定P值小于10^-5时具有统计学意义)，CV＜5～10％；初步分析筛选出鼻咽癌患者与正常人群有11个差异多肽蛋白，不同峰的分子量、临界峰值均值M及特征蛋白的表达变化见表一：

表一  鼻咽癌患者特征蛋白的表达变化

蛋白分子量(m/z)  鼻咽癌患者蛋白临界峰值均值  特征蛋白的表达变化

                 M±SD

8073             4.21±4.20                  ↑

11686            2.56±2.01                  ↑

15950            12.86±9.97                 ↑

16095            5.56±4.31                  ↑

11470            1.71±1.31                  ↑

25242            0.33±0.12                  ↑

1345             2.54±2.33                  ↓

3935             11.76±10.81                ↓

5065             5.70±5.23                  ↓

8604             2.76±1.09                  ↓

8932             5.87±4.45                  ↓

表一中：向上箭头“↑”为在鼻咽癌患者血清中高表达的上调特征蛋白；向下箭头“↓”为在鼻咽癌患者血清中低表达的下调特征蛋白；

图1、2为鼻咽癌及正常人血清中3个差异蛋白峰(8073、11470和11686 m/z)的原始质谱图谱；上1张图谱(CANCER)为鼻咽癌，下1张图谱(NORMAL)为正常健康人。

将上述11个差异蛋白作为鼻咽癌质谱检验模型的特征蛋白；

6)由于多个特征蛋白组合起来才可将鼻咽癌与正常人等完全分开，故选取上述11个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了鼻咽癌患者与正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴结转移、鼻咽癌远端转移患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型(图3-5)，所说的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76；m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76；m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70；其中鼻咽癌患者与正常人鉴别的质谱模型A由m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽良性疾病鉴别的质谱模型B由m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌远端转移鉴别的质谱模型C由m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70绘制而成；分子量(m/z)误差＜0.01％，临界峰值均值M的CV＜5～10％。利用该质谱模型，只要将受检者血清中相应蛋白质的质荷比及该蛋白的临界峰值均值M与本发明质谱模型逐一进行对比分析，就可用于鼻咽癌检验。

利用该质谱模型A-C(图3-5)，将受检者血清中相应蛋白质的质荷比及该蛋白的临界峰值均值M与本发明的质谱模型逐一进行对比分析，经临床试用及双盲测试，其鉴别鼻咽癌患者与正常人的敏感性为97％，特异性为95％；鼻咽癌与鼻咽癌淋巴结转移患者敏感性90％，特异性97％，鼻咽癌患者与鼻咽癌远端转移敏感性83％，特异性95％。

利用C8及C18疏水基质磁珠的实验结果与上述WCX阴离子基质磁珠的实验结果一致。

本发明采用上述质谱模型可用于鼻咽癌早期检测、筛查和复发、转移的评估。

本发明的特点及效果：

本发明与其他鼻咽癌的检测方法比较，具有以下优点：

第一、本发明采用鼻咽癌患者与正常人具有差异的多个特征蛋白组合起来进行对鼻咽癌血清的检测，提供的质谱模型是鼻咽癌早期检测和筛查的新方法和新途径，并为进一步发现新的鼻咽癌生物标志提供了基础；

第二、与以往的血清学检测方法比较具有较高的敏感性和特异性，是一种在蛋白组学水平上的检测，对鼻咽癌的早期检测提供了新标准；

第三、本发明由于磁珠表面的结合面积远远大于蛋白芯片，从而磁珠的灵敏性比蛋白芯片更高而具有了更高的灵敏度，从而优化了质谱模型；

第四、本发明首创采用了定量性质谱调控，CV＜5～10％，使磁珠的临界峰值均值M比蛋白芯片更可靠及精确；

第五、本发明首创采用了用质谱的标准化质控血清(浆)，将标准化质控血清(浆)中用于质谱内标定性的2746±1Da、5909±1Da、6634±1Da标准峰(分子量)质控标准，使分子量误差＜0.01％，从而获得的精确的蛋白质谱图谱；

第六、本发明质谱模型的构建方法设计精确及合理可行，为降低我国鼻咽癌的病死率、提高鼻咽癌的临床治愈提供了一种新的筛查和复发、转移的评估方法；

第七、利用本发明用双盲法分析了180份血清标本，其鉴别鼻咽癌患者与正常人的敏感性为97％，特异性为95％；鼻咽癌与鼻咽癌淋巴结转移患者敏感性90％，特异性97％，鼻咽癌患者与鼻咽癌远端转移敏感性83％，特异性95％。

因此本发明可实现对鼻咽癌进行早期预警、早期发现。

说明书附图

图1鼻咽癌及正常人血清多肽质谱图谱

图2鼻咽癌及正常人血清蛋白质谱图谱

图3鼻咽癌患者与正常人鉴别的质谱模型

图4鼻咽癌患者与鼻咽良性疾病鉴别的质谱模型

图5鼻咽癌患者与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌远端转移鉴别的质谱模型图中m/z表示特异蛋白的质荷比，M代表该特异蛋白的临界峰值均值

具体实施方式

本发明将结合具体实施例作进一步说明，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。

实施例1正常与鼻咽癌患者的区分及质谱的试剂盒制备

(1)实验方法

66例鼻咽癌患者(其中I期17例、II期17例、III期17例、IV期15例，年龄43～55岁，中位年龄45岁)和24例鼻咽良性疾病患者(年龄42～50岁，中位年龄43岁)的术前血清。90名对照血清来自健康志愿者(年龄40～55岁，中位年龄44岁)，来源于肝功能、肾功能等检查均正常的体检人群。受检者空腹采集静脉血1mL，采集后立即于4℃冰箱静置2小时，4℃4000r/min离心10分钟分离血清，将血清于4℃12000r/min再次离心5分钟，去除所有残留细胞碎片和不溶物，在冰上将血清分装为100μL/管，共5管，保存于-80℃冰箱。避免反复冻融。

磁珠操作步骤

血清样品处理：从-80℃冰箱中取出血清，于4℃，10000rpm离心5min。取10μL血清样品，加20μL U9处理液(9mol/L尿素，2％CHAPS，1％DTT，50mmol/L Tris-CL，pH9.0)，充分混匀，冰浴振荡30min后取出，加入360μL结合缓冲液(100mmol/L NaAc，pH4.0)，立即混匀。

磁珠上样及洗脱：将处理好的样品100μL加至已装好WCX磁珠(弱阴离子表面，羧酸基团，捕获正电荷基团蛋白)的PCR管中，置磁性处理器上孵育30min，除去液体。加100μL磁珠结合缓冲液(50mmol/L NaAc，pH 4.0～4.3)至已装好WCX磁珠的PCR管，置磁性处理器上孵育2分钟，除去液体，重复上述操作2次。加10μL Elution Buffer 2min，洗脱标本至上清液。取5μL上清液移至另一个PCR管中，加入5μL SPA饱和溶液充分混匀，取1μL混合溶液加样到Au或Steel片上，晾干后上机测量。

数据收集

将处理好的Au或Steel片置入MALDI-TOF-MS进行蛋白质谱分析。在读取数据前，用加有all-in-one标准蛋白质的芯片校正质谱仪，使分子量误差＜0.1％。本研究中阅读仪的主要参数设定为，最高检测分子量为50kDa，优化分子量范围1000～15000Da，最佳聚集中心8000Da，数据采集参数范围20～80，收集总数为130次。软件中设定读片程序，以读取数据。定量性控制及质谱激光能量调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清(浆)，将标准化质控血清(浆)中用于定量的标准峰6634.0Da强度调至50％质谱信号强度的最大值。用2746±1Da、5909±1Da、6634±1Da标准峰为质谱内标定性(分子量)质控标准，使分子量误差＜0.01％，从而获得的精确的蛋白质谱图谱。

统计学分析

应用软件分析处理所有峰谱，形成蛋白质谱图谱。所有的图谱都进行了标准化，统一到它们自己全部的离子总数(峰面积的总和)。将标准化质控血清中用于定量的标准峰6634.0 Da强度调至40～50％信号强度的最大值，并且用最显著的峰进行了校正，而后又进行了“减少基线”，定义蛋白峰(s/n＞5，最小的峰强度＞1.6)。分析所有1～50 kDa之间的蛋白峰，并且仔细检查了每个相应的峰，计算出峰的平均值M，标准误差(SD)和变异系数(CV％)。用Mann-Whitney U检验比较配对样本的蛋白峰，计算P值。

鼻咽癌检测多肽蛋白筛选

用Mann-Whitney U检验比较配对样本的蛋白峰，CV＜5～10％；初步分析筛选出P＜0.00001的鼻咽癌患者与正常人群有11个差异多肽蛋白，不同峰的分子量、临界峰值均值M及特征蛋白的表达变化见表一：

表一  鼻咽癌患者特征蛋白的表达变化

蛋白分子量(m/z)  鼻咽癌患者蛋白临界峰值均值  特征蛋白的表达变化

                 M±SD

8073             4.21±4.20                  ↑

11686            2.56±2.01                  ↑

15950            12.86±9.97                 ↑

16095            5.56±4.31                  ↑

11470            1.71±1.31                  ↑

25242            0.33±0.12                  ↑

1345             2.54±2.33                  ↓

3935             11.76±10.81                ↓

5065             5.70±5.23                  ↓

8604             2.76±1.09                  ↓

8932             5.87±4.45                  ↓

表一中：向上箭头“↑”为在鼻咽癌患者血清中高表达的上调特征蛋白；向下箭头“↓”为在鼻咽癌患者血清中低表达的下调特征蛋白；

图1、2为鼻咽癌及正常人血清中3个差异蛋白峰(8073、11470和11686m/z)的原始质谱图谱；上1张图谱(CANCER)为鼻咽癌，下1张图谱(NORMAL)为正常健康人。

将上述11个差异蛋白作为鼻咽癌质谱检验模型的特征蛋白；

实施例2临床试用及双盲测试

由于多个特征蛋白组合起来才可将鼻咽癌与正常人等完全分开，故选取上述11个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了鼻咽癌患者与正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴结转移、鼻咽癌远端转移患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型(图3-5)，所说的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76；m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76；m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70；其中鼻咽癌患者与正常人鉴别的质谱模型A由m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽良性疾病鉴别的质谱模型B由m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌远端转移鉴别的质谱模型C由m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70绘制而成；分子量(m/z)误差＜0.01％，临界峰值均值M的CV＜5～10％。利用该质谱模型，只要将受检者血清中相应蛋白质的质荷比及该蛋白的临界峰值均值M与本发明质谱模型逐一进行对比分析，就可用于鼻咽癌检验。

利用该质谱模型A-C(图3-5)，将受检者血清中相应蛋白质的质荷比及该蛋白的临界峰值均值M与本发明的质谱模型逐一进行对比分析，经临床试用及双盲测试，其鉴别鼻咽癌患者与正常人的敏感性为97％，特异性为95％；鼻咽癌与鼻咽癌淋巴结转移患者敏感性90％，特异性97％，鼻咽癌患者与鼻咽癌远端转移敏感性83％，特异性95％。

利用C8及C18疏水基质磁珠的实验结果与上述WCX阴离子基质磁珠的实验结果一致。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (3)

1.一种检测鼻咽癌血清特征蛋白的质谱模型，其特征在于：从血清中筛选出6个上调蛋白和5个下调蛋白作为特征蛋白；选取上述11个特征蛋白中的任意两个或两个以上的蛋白，根据各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M，建立了鼻咽癌患者与正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴结转移、鼻咽癌远端转移患者两两鉴别的血清特征蛋白检测质谱模型；其中鼻咽癌患者与正常人鉴别的质谱模型A由m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽良性疾病鉴别的质谱模型B由m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76绘制而成，鼻咽癌患者与鼻咽癌淋巴结转移及鼻咽癌远端转移鉴别的质谱模型C由m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70绘制而成。

2、一种检测鼻咽癌血清蛋白质谱模型的制备方法，包括以下步骤：

1)4℃条件下2小时内收集经病理明确诊断的鼻咽癌患者血清及经体检确定为正常的健康者的血清作为两组血清标本，进行-80℃低温冷冻备用；

2)采用WCX或C8及C18疏水基质磁珠对所述鼻咽癌患者及正常人的两组血清标本的蛋白进行吸附；

3)用激光解吸/电离飞行时间质谱仪，用氮激光仪(337nm)和80cm或120cm飞行管分析阵列，或用电喷雾电离已洗脱的血清蛋白后用液相色谱质谱联用仪(LC-MS)对结合在弱阴离子表面的WCX磁珠或C8及C18疏水基质磁珠上的两组血清蛋白进行读取，由此获得两组蛋白质谱图谱；

4)在每次实验数据收集前，用标准蛋白及质谱的标准化质控O型血清校正仪器，使蛋白质分子量误差＜0.01％和临界峰值均值M的CV＜5～10％，并精确地、定量地收集鼻咽癌患者和正常人优化的血清质谱图谱数据；

5)对所得数据进行统计学处理，根据鼻咽癌患者和正常人血清之间蛋白峰的差异，检测出2组血清蛋白质谱图谱之间有11个稳定的差异蛋白及其临界峰值，6个上调蛋白和5个下调蛋白作为特征蛋白；将所述11个差异蛋白作为鼻咽癌蛋白质谱模型的特征蛋白；

6)选取所述11个特征蛋白中任意两个或两个以上的蛋白，以各蛋白质峰的质荷比m/z值及以该蛋白的临界峰值均值M构成用于检测鼻咽癌血清特征蛋白质谱模型；所述的特异蛋白质质荷比m/z和临界峰值均值M分别为m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76；m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76；m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56：m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70。

3、选取如权利要求1所述的血清11个蛋白中任意两个或两个以上的特征蛋白，利用该质谱模型，将受检者血清中相应蛋白质的质荷比及该蛋白的临界峰值均值M与本发明的质谱模型逐一进行对比分析，就可应用于鼻咽癌的早期检测、筛查和复发、转移的评估。

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