CN101312719A

CN101312719A - 具有选择素配体活性的新型间苯三酚衍生物

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Publication number: CN101312719A
Application number: CNA2006800431839A
Authority: CN
Inventors: 埃瓦尔德·艾德特; 雷莫·克拉尼奇
Original assignee: Revotar Biopharmaceuticals AG
Current assignee: Revotar Biopharmaceuticals AG
Priority date: 2005-09-20
Filing date: 2006-09-20
Publication date: 2008-11-26
Also published as: US7919532B2; EP1764096A1; AU2006299182A1; IL190085A0; WO2007039112A1; AU2006299182B2; US8461207B2; RU2418584C2; BRPI0616388A2; JP2009508900A; CA2622467A1; US20110142765A1; IL190085A; US20080207741A1; EP1937237A1; WO2007039112A8; JP5122463B2; RU2008115434A

Abstract

可以应用于调节受E－、P－或L－选择素结合所介导的体内和体外结合过程的药物组合物，该药物组合物包含至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐、酯或酰胺及前药，和可用于药品的药学上可接受的载体，其中符号和取代基具有以下含义：－X－为例如式(II)，Y为例如式(III)。

Description

具有选择素配体活性的新型间苯三酚衍生物

本发明涉及调控细胞粘着分子介导的体外和体内过程的化合物、组合物及方法。公开的小分子包含2，4，6-三羟基苯基亚单元并有力调控细胞粘着分子介导功能。

细胞粘着分子介导功能是复杂级联反应的一部分，其导致循环的白细胞(白血球)从血流迁移到周围组织(游出)。生理上，白细胞游出对于包括人在内的生物体的稳自身态和免疫监视极为重要。例如淋巴细胞构成性地离开血流进入淋巴组织以侦察有害抗原。然而，在病理条件下，如脉管系统的局部或全身性感染和/或损伤的条件下，这种基础过程是调节异常的，至少部分是由于E-和P-选择素(selectin)的表面表达增加导致的。结果，过度白细胞游出导致病理性细胞浸润，随后导致在若干临床相关环境下的组织损害。疾病状态如急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、支气管哮喘(哮喘)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、牛皮癣、类风湿性关节炎和脓毒症都与浸润各组织的病理活化的白细胞所诱导并迁延不愈的组织炎性疾病有关。另外，过度白细胞浸润造成与器官移植、心肺分流手术或经皮腔内血管成形术有关的缺血-再灌注损伤(IRJ)的发病。

为了游出，白细胞必须结合血管内皮的壁以经毛细血管细胞壁弥散到周围组织。因此，白细胞必须滚动到内皮细胞壁上，然后粘着到内皮细胞壁上(最初滚动或″栓系″)。游出中的这一主要事件是由细胞粘着分子的选择素家族介导的。除了直接结合内皮，白细胞也可以粘着其它已经附着到内皮上的白细胞、白细胞颗粒、血小板或血小板衍生的颗粒。

粘着分子的选择素家族包括三种结构相关的钙依赖性的结合糖的细胞表面蛋白E-、P-和L-选择素。E-选择素仅在发炎的内皮上表达，P-选择素表达在发炎的内皮和血小板上，而L-选择素表达在白细胞上。选择素由氨基末端凝集素结构域、表皮生长因子(EGF)-样结构域、数量不定的补体受体相关的重复序列、疏水性跨膜结构域和C-末端胞质结构域组成。导致白细胞粘着的结合相互作用设想是通过在白细胞表面上选择素的凝集素结构域和多种糖配体的接触来介导。所有三种选择素均能以低亲和力结合糖唾液酸化的Lewis^x(sialylLewis^x)(sLe^x)，它是在大多数白细胞表面上存在的糖基部分。与结构相关的糖基部分，唾液酸化的Lewis^a(sLe^a)，主要发现在癌细胞表面[K.Okazaki et al.，J Surg.Res.，1998，78(1).78-84；R.P.McEver et al.，Glycoconjugate Journal，1997，14(5)，585-591]。针对P-选择素，已经描述了独特的高亲和力糖蛋白配体[R.P.McEver，R.D.Cummings，J.Clin.Invest.，1997，100，485-492，即，所谓的P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)，其sLe^x部分以及其部分肽组分，特别是硫酸化的酪氨酸残基，使得其能与选择素以高亲和力结合[R.P.McEver，Ernst Schering Res.Found.Workshop，2004，44，137-147]。PSGL-1是最重要的选择素配体之一，它与P-选择素结合的亲和力最高，但也结合E-和L-选择素[G.Constantin；Drug News Perspect；2004；17(9)；579-586]。它是主要表达在白细胞上的同型二聚体唾液粘蛋白。

在炎性疾病中，调控异常的游出至少部分是犹豫E-和P-选择素的细胞表面表达增加而介导的。与它们的低基础表达相比，E-和P-选择素表达在炎性疾病时被上调，致使白细胞大量补充到发炎组织。尽管选择素-介导的细胞粘着是抗感染所需的，但是存在细胞粘着不理想或过度的各种情况，从而导致严重的组织损伤而不是修复。对于很多急性以及慢性炎性疾病，[如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、牛皮癣等等]而言，已经证明了活化的白细胞同时浸润到组织与相应的粘着分子，特别是E-和P-选择素的组织表达显著上升有联系[Muller et al.，J Pathol.，2002，198(2)，270-275；Di Stefano et al.，Am.J.Respir.Crit.Care.Med.，1994，149(3)803-810；Terajima et al.，Arch.Dermatol.Res.，1998，290，246-252]。

白细胞浸润也可能会在移植物排斥和嫁接物排斥病程的炎性症状中起作用。凝血过程也会被白细胞-白细胞和白细胞-血小板结合进一步地促进，其出现是因为白细胞具有L-选择素及其对应配体PSGL-1，并能通过PSGL-1与它们自身相互作用，并且它们也能结合携带P-选择素的血小板。

因此，调控选择素-介导的细胞粘着及其它选择素介导的功能，如白细胞活化，提供在很早阶段干扰并终止炎性疾病级联反应的有希望的可能性。小分子选择素拮抗剂应作为全(pan)-选择素-拮抗剂同时调控所有三种选择素，来防止选择素之间可能会过剩[M.Sperandio et al.，Vascular DiseasePrevention，2004，1，185-195]。

除了sLe^x/sLe^a，天然高亲和力配体PSGL-1是另一个用于设计小分子选择素拮抗剂的模板结构。与sLe^x/sLe^a相比，PSGL-1对所有三种选择素都显示高亲和力。为发现并检测与PSGL-1和PSGL-1-样配体竞争结合选择素的新型小分子药物，由此开发一类新的有效治疗炎性疾病的全-选择素拮抗剂是有希望的策略。可用选择素以及用配体如PSGL-1作为模板结构设计选择素拮抗剂，因为这些拮抗剂意图调控选择素与PSGL-1或其它具有类似结合基元的配体之间的结合。

新型小分子选择素拮抗剂能够符合类似药物的并具有潜在的口服生物利用度的某些需要。术语药物类似性描述于文献[Lipinski；Adv.Drug Dev.Rev.，1997，23，3-25]中。除其他分子特性外，被动转运的分子应具有平均不足500的相对分子量从而类似于药物。根据这些规则，通常定义相对分子量不足500或刚刚超过500的化合物为小分子。相对分子量超过500的化合物不可能具有口服生物利用度。同样，存在高极性的糖部分或肽成分也不符合药物类似性的概念[H.Ulbrich et al.，Trends Pharmacol.Sci，2003，24(12)，640-647；D.Slee et al.，J Med.Chem.，2001，44，2094-2107]。对于开发基于抗体的药物是同样的，因为它们是多肽，所以口服施用是个问题。另外，需要的化合物必须在通过胃肠道时是稳定的，从而它们最迟能够被小肠细胞消化/吸收。对于多数糖苷分子和肽结构没有这种情况。

已经做了多项研究来开发低分子量的对选择素介导的过程有调节作用的化合物。这些化合物包括二水杨酸盐(酯)(disalicylate)和基于二水杨酸盐(酯)的C-糖苷[WO 99/29706]，苯甲基氨基磺酸[WO 03/097658]，二糖基化1，2-二醇[WO 97/01569]，取代的5-元杂环[WO 00/33836]，吡喃甘露糖基氧基-苯基-苯甲酸(mannopyranosyloxy-phenyl-benzoic acid)[EP0758243B 1]，基于哌嗪的化合物[US6432957B1]，肽的没食子酸衍生物[WO 2004/018502]，没食子酸[C.C.M.Appeldoorn et al.，Circulation 2005，111，106-112；EP1481669A1]，和奎尼酸衍生物[N.Kaila et al.，J.Med.Chem.2005，48，4346-4357]。然而，这些拮抗选择素的化合物至今无一成功通过临床试验[S.J.Romano，Treat.Respir Med 2005，4(2)，85-94；M.P.

Therapeutics andClinical Risk Management，2005，1(3)，201-208]。这是由于这些结构中很多是基于低潜力(potency)模板sLe^x进行设计。因此，模拟sLe^x的结构可能显示低潜力。其它化合物对选择素家族的不同成员显示特异性，但仅对选定选择素的拮抗能够被其它选择素回避[M.P.

Therapeutics and Clinical RiskManagement，2005，1(3)，201-208]。另外，至今被开发的化合物大多数具有高分子量，并通常携带糖和/或肽，使它们倾向于被肽酶和/或糖苷酶降解和修饰。携带糖的结构还有其它不利，如高度手性、端基异构性(anomericity)、和通过脂质双层转运的低可能性。已知携带肽的化合物具有类似不利。被开发用来拮抗选择素介导过程的其它一些化合物含有连苯三酚-和儿茶酚-亚结构。这些基元易于发生氧化过程[Kumamoto M.et al.，Biosci.Biotechnol.Biochem.，2001，65(1)，126-132]，从而使这些化合物的药物开发有困难。另外，具有连苯三酚亚结构的化合物如没食子酸，已知是细胞毒性的[E.Sergedieneet al.，FEBS Letters，1999，462，392-396]并诱导细胞凋亡[K.Satoh et al.，Anticancer Research，1997，17，2487-2490；N.Sakaguchi et al.，BiochemicalPharmacology，1998，55，1973-1981]。

选择素拮抗剂领域的主要化合物是bimosiamose[S.J.Romano，Treat.Respir Med 2005，4(2)，85-94]。现在bimosiamose[D.Bock et al.，New Drugs，2003，D04，28，p.28；EP 0 840 606 B1]是临床研究的最先进的化合物。最近的研究调查支持一种假设，bimosiamose可以被认为是PSGL-1模拟物[E.Aydt，G.Wolff；Pathobiology；2002-2003；70；297-301]。这使bimosiamose区别于其他选择素拮抗剂。然而，它是一种具有糖结构的高分子量化合物。全-选择素拮抗剂bimosiamose似乎无口服生物利用度。一些观察指出bimosiamose对P-选择素显示高亲和力并对E-和L-选择素显示中等亲和力。

医学上很需要新型的强有力的全-选择素拮抗剂，其调控选择素-介导功能，如选择素-依赖性细胞粘着，医学上还需要开发使用这些化合物调控与选择素-配体的相互作用有关的状况的方法。大多数现在市面上可得到的可用抗炎药物疗法，大部分包含有多种严重缺点/副作用的皮质类固醇或NSAID(非甾体抗炎药物)，并且靶向炎性级联反应的不同步骤。与此不同，调控选择素功能是在很早阶段干扰炎性级联反应的治疗理念。差不多所有现在有希望的选择素拮抗剂都不能成为市场化的药物，大多是因为它们的潜力低和/或分子量高，使它们的吸收-分布-代谢-分泌(ADME)行为出现问题，以致治疗大多炎性疾病，如类风湿性关节炎、脓毒性休克、动脉粥样硬化、再灌注损伤及其它所需的口服生物利用度出现问题。

本发明目的是提供新型小分子，特别是非糖基化的/非糖苷和非肽的化合物，它们能够强有力地拮抗选择素-介导过程并且在应用它们的过程中具有比现有化合物更少的不良副作用。

与本领域开发的大多sLe^x-模拟化合物不同，本发明的化合物不易于受糖苷酶或肽酶影响。大多目前开发的选择素拮抗剂在结构和生物方面基于sLe^x或sLe^a的特性。因此，这些所得的化合物象它们的模板结构一样显示低生物活性。然而，本发明提供了新型强力小型和类似药物的全-选择素拮抗剂，它们是在模拟PSGL-1和PSGL-1-样配体或携带sLe^x或sLe^a和酪氨酸硫酸盐基元的任何配体的生物体外实验基础上被发明的[N.V.Bovin；BiochemSoc Symp.；2002；(69)：143-60.N.V.Bovin；Glycoconj.J；1998；15(5)；431-46.T.V.Pochechueva et al.；Bioorg Med Chem Lett；2003；13(10)；1709-12.G.Weitz-Schmidt et al.；Anal.Biochem.；1996；238；184-190]。

本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种具有结构通式(I)的化合物及可用于药品的药学上可接受的载体，或者式(I)化合物的药学上可接受的盐、酯或酰胺及前药。

其中符号和取代基具有以下含义

-X-＝

(a)

其中m＝0、1；n＝1～3的整数

(b)

其中”环”为

以及R¹为H、NO₂、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、CH₃、NH₂、NH烷基、NH芳基、NH酰基，且k＝0、1

(c)

T为O、S或[H，H]；p＝0、1、2，

(d)

双键为E-或Z-构型

(e)

(f)

其中-E-为-(CH₂-)_qNH-且q＝0、1、2、3

-Y＝

(a)

s为0或1，

R²为CO₂H、CO₂烷基、CO₂芳基、CO₂NH₂、CO₂芳烷基、SO₃H、SO₂NH₂、PO(OH)₂、1-H-四唑基-、CHO、COCH₃、CH₂OH、NH₂、NH烷基、N(烷基)烷基′、OCH₃、CH₂OCH₃、SH、F、Cl、Br、I、CH₃、CH₂CH₃、CN、CF₃

R³独立于R²为H、CH₃、CH₂CH₃、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、NO₂和

R⁴独立于R²和R³为H、CH₃、CH₂CH₃、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、NO₂、R²

R⁵为H、NO₂、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、CH₃、OCH₃、SH、NH₂和-W-＝-(CH₂-)_v，顺式-CH＝CH-or反式-CH＝CH-，且v为0、1、2；

当-W-为顺式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-时，R²不得为NH₂或SH；

(b)

R⁶独立于R²为H、F、Cl、Me、叔-Bu、CN、NH₂

(c)

(d)

(e)

其中t为0、1、2

(f)

(g)

-Z＝

(i)

R⁷独立于R²为H、NO₂、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、CH₃、OCH₃、SH、NH₂，

(ii)

R⁸独立于R²为H、F、Cl、Me、叔-Bu、CN、NH₂

(iii)

(iv)

式中K＝NH、NMe、O、S

(v)

(vi)

(vii)

-W-R²。

在另一实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其包括至少一种式(I)化合物和可用于药品的药学上可接受的载体，或者上述定义的式(I)化合物的药学上可接受的盐、酯或酰胺及前药，

其中符号和取代基具有以下含义

-X-＝

(a)

其中m＝0、1；n＝1～3的整数

(b)

其中″环″为

(c)

T为O、S或[H，H]；p＝0、1、2，

-Y＝

(a)

式中s为0或1，

R⁵为H、NO₂、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、CH₃、OCH₃、SH、NH₂和

-W-＝-(CH₂-)_v，顺式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-，且v为0、1、2；

当-W-为顺式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-时，R²不得为NH₂或SH；

(b)

R⁶独立于R²为H、F、Cl、Me、叔-Bu、CN、NH₂

(c)

(e)

其中t为0、1、2

-Z＝

(i)

(iv)

其中K＝NH、NMe、O、S

(v)

优选的药物组合物包含式(II)化合物

其中-Y如上述定义，且其中-X′-为如上述定义的X(a)、X(b)、X(c)和X(d)。优选式(II)化合物，其中-X′-为X(a)或X(b)。

进一步优选的药物组合物包含式(A)或(B)的化合物

其中-X′-和-Y如上述定义，且其中-X″-为

且其中-Y′为

其中所有的标记、符号和取代基如上述定义。

在另一实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其中化合物由式(A)或(B)定义

其中-X′-和-Y如上述定义，且其中-X″-为

且其中-Y′为

其中所有其他标记，符号和取代基如上述定义。

特别优选的药物组合物包含式(C)化合物

其中-X″-和-Y′如上述定义。

极其特别优选的药物组合物包括式(D)的化合物

其中-X″-如上述定义且-Y″为

其中R⁹为CO₂H、CO₂烷基、CO₂芳基、CO₂NH₂、CO₂芳烷基、CH₂SO₃H、CH₂SO₂NH₂、CH₂PO(OH)₂、1-H-四唑基、CHO、COCH₃、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NH烷基、CH₂N(烷基)烷基′、CH₂OCH₃、CH₂SH。

在另一实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其中化合物由式(D)定义

其中-X″-如上述定义且-Y″为

其中R⁹为CO₂H、CO₂烷基、CO₂芳基、CO₂NH₂、CO₂芳烷基、CH₂SO₃H、CH₂SO₂NH₂、CH₂PO(OH)₂、1-H-四唑基、CHO、COCH₃、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NH烷基、CH₂N(烷基)烷基’、CH₂OCH₃、CH₂SH，

其中所有其他标记、符号和取代基如上述定义。

这些化合物(C)和(D)本身也是新化合物。

前面所述的所有化合物均呈现出调节细胞附着的能力和调节选择素-介导的以及PSGL-1-样介导的结合。这些化合物具有调节选择素和sLe^x/sLe^a之间相互作用的能力，还有调节选择素和酪氨酸硫酸盐残基之间相互作用的能力。因此，它们对于治疗选择素介导过程起作用的急性和慢性炎性疾病及其它疾病状态是有用的。

术语“药物的”也包括诊断应用。

术语“药物的”还包括预防应用，以防止选择素介导过程起作用的疾病状态。

术语“药物的”还包括可使用本发明的化合物作为用于诊断剂或治疗剂的药物寻靶的载体的应用。

本发明提供包含式(I)化合物的药物组合物，且在一优选变体中，本发明的药物组合物包含式(II)化合物。

在另一优选变体中，本发明提供包含式(A)或(B)中的至少一种化合物的药物组合物。

在特别优选的变体中，本发明提供至少一种式(C)化合物的药物组合物。

在极其特别优选的变体中，本发明提供包含至少一种式(D)化合物的药物组合物。

本发明还提供调节P-选择素、L-选择素或E-选择素和sLe^x或sLe^a及酪氨酸硫酸盐残基结合的方法，包括给予患者有效量的至少一种结构式(I)的化合物，以调节P-选择素、E-选择素或L-选择素和sLe^x或sLe^a及酪氨酸硫酸盐的结合。已经发现，上面所示的式(I)化合物起了调节E-、P-或L-选择素结合的作用。

本文使用的术语“烷基”应指1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12个碳原子的一价直链或支链基团，包括但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。“烷基”彼此独立，且可以不同或相同。

术语“芳基”应指碳环芳族基团和杂环芳族基团，包括但不限于苯基、1-萘基、2-萘基、芴基、(1，2)-二氢萘基、茚基、茚满基、噻吩基、苯并噻吩基、噻吩并吡啶基等。

术语“芳烷基”(也称为芳基烷基)是指附着于烷基的芳基，包括但不限于苯甲基、1-萘基甲基、2-萘基甲基、氟苄基、氯苄基、溴苄基、碘苄基、烷氧基苄基(其中“烷氧基”指甲氧基，乙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基，叔丁氧基等)、羟基苄基、氨基苄基、硝基苄基、胍基苄基、芴基甲基、苯基甲基(苄基)、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-萘基乙基等。

术语“酰基”应当指-(CHO)或-(C＝O)-烷基或-(C＝O)-芳基或-(C＝O)-芳烷基，包括但不限于甲酰基，乙酰基、n-丙酰基、异丙酰基、n-丁酰基、异丁酰基、新戊酰基、苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基等。

本文使用的术语“药学上可接受的盐、酯、酰胺和前药”是指本发明化合物的羧酸盐、氨基酸加成盐、酯、酰胺和前药，它们在合理的医学判断范围内、适合用于与患者的组织接触而没有过多的毒性、刺激、过敏反应等，具有同样合理的收益/风险比和对其预计用途的有效性，在可行时，还包括本发明化合物的两性离子形式。术语“盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机酸和有机酸加成盐。这些盐可以在化合物的最后分离和纯化时或者通过游离形式的纯化化合物与适当的无机或有机的酸或碱反应，然后分离如此形成的盐而原位制备。本发明化合物的代表性盐包括氢溴化物，盐酸化物、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐(lactiobionate)、月桂基磺酸盐等等。这些盐可以包括基于碱金属和碱土金属(例如钠、锂、钾、钙、镁等)的阳离子，以及无毒的铵、季铵和胺的阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺，等等。

本发明化合物的药学上可接受的无毒酯的实例包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆烷基酯，其中烷基为直链或支链。可接受的酯还包括C₅、C₆和C₇环烷基酯及芳烷基酯，例如，但不限于苯甲酯。优选C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆烷基酯。本发明化合物的酯可以根据常规方法制备。

本发明化合物的药学上可接受的无毒酰胺的实例包括衍生自氨、C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆烷基伯胺和C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆二烷基仲胺的酰胺，其中烷基为直链或支链。在仲胺的情况中，胺还可以为含有氮原子的5或6元杂环形式。优选的酰胺衍生自氨、C₁、C₂和C₃烷基伯酰胺和C₁-C₂二烷基仲酰胺。本发明化合物的酰胺可以根据常规方法制备。

术语“前药”是指在体外迅速转换且在体内从非活性状态转化为活性状态，例如通过在血液中的水解或体内新陈代谢而转化，从而产生上面式(I)母体化合物的一种或多种化合物。

还预计药学活性的组合物可以含有调节或对抗E-选择素或P-选择素或L-选择素结合的本发明化合物或其它化合物。

本发明的药学活性的组合物包含药学上可接受的载体和式(I)化合物，由此药学上可接受的载体还可以是医学上合适的纳米粒子、树枝状高分子、脂质体、微气泡或聚乙二醇(PEG)。本发明的药物组合物可包括一种或多种具有上述结构式(I)的化合物，与一种或多种生理学可接受的载体、辅剂或载剂(其通称为载体)配制在一起，用于非肠道注射、用于固体或液体形式的口服给药、用于直肠给药或局部给药等等。

组合物可以以口服、直肠、非肠道(经静脉、肌内、真皮内或皮下)、池内、叶鞘内(intravaginally)、腹膜间、局部(粉剂、药膏或滴剂)给药，或者作为含剂或通过吸入给药(雾化的、或作为鼻用喷雾剂)至人和动物。

适合非肠道注射用的组合物可以包括生理上可接受的无菌水溶液或非水溶液、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗坏血酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、苯甲醇、EDTA)、分散液、悬浮液或乳液，及可复原城无菌注射溶液或分散液的无菌粉剂。合适的含水和无水载体、稀释剂、溶剂或载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等)，其适当的混合物，植物油(如橄榄油或芥花油(canola oil))和可注射的有机酯如油酸乙酯。可以通过以下方法保持适当的流动性，例如，通过使用诸如卵磷脂的包覆物，在悬浮液的情况下通过保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂。

这些组合物还可以含有辅剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯代叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可以确保预防微生物的作用。包含等渗剂(例如糖、氯化钠等)也可能是期望的。延长吸收可注射药用形式可以通过使用延期吸收剂如单硬脂酸铝和明胶来实现。

在需要时，以及为了更有效的分配，可以将化合物加入缓慢或定时释放或定向递药系统，如聚合物基质、脂质体和微球。例如，它们可以通过防细菌过滤器过滤，或者通过使用前立即加入无菌水的形式灭菌剂，或一些其它的无菌可注射介质来消毒。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这些固体剂型中，将活性化合物或前药与以下至少一种惯用的惰性赋形剂(或载体)混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，或(i)填料或增补剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，(ii)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，(iii)保湿剂，例如，丙三醇，(iv)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、土豆淀粉或木薯淀粉、藻胶酸(aliginic acid)、特定的复合硅酸盐和碳酸钠，(v)溶液阻滞剂(solution retarder)，例如，石蜡，(vi)吸收加速剂，例如，季铵化合物，(vii)润湿剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，(viii)吸附剂，例如高岭土和膨润土，和(ix)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠，及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况中，剂型还可以包括缓冲剂。

也可以使用相同类型的固体组分作为软和硬填充的明胶胶囊中的填料，该明胶胶囊使用赋形剂如乳糖或奶糖及高分子聚乙二醇等。可以制备具有包衣和壳(如肠衣和本领域熟知的其它类型)的固体剂型如片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒。它们可以含有遮光剂，且还可以具有以下组成：即，在肠道的某些部位以延缓的方式释放一种或多种活性化合物。可以使用的包埋组分的实例为聚合物和石蜡。活性化合物还可以为微囊形式，在适当时，含有一种或多种上述的赋形剂。

口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂如水或其它溶剂；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、芥花油(cannola oil)、蓖麻油和芝麻籽油)、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇、失水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物，等等。除了这些惰性稀释剂，组合物还可以包括辅剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

除了活性化合物之外，悬浮液还可以包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminium metahydroxide)、膨润土、琼脂、西黄蓍胶或这些物质的混合物等。

用于直肠给药的组合物优选为栓剂，其可以通过将本发明的化合物和适当的无刺激性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡(suppository wax)混合而制备，该赋形剂或载体在常温下为固体，但在体温下为液体，从而在直肠或鞘膜腔内熔化并释放活性成分。用于局部给药本发明化合物的剂型包括药膏、粉剂、喷雾剂和吸入剂。

将活性成分和生理上可接受的载体及任何需要的防腐剂、可能要求的缓冲剂或推进剂一起在无菌条件下混合。眼药制剂(ophthalmic formulation)、眼膏、悬浮液、粉剂和溶液也在本发明的范围内。

还可以将本发明的化合物加入或连接至脂质体或以脂质体的形式给药。如本领域已知的，脂质体通常得自磷脂或其它脂质物质。脂质体由分散在含水介质中的单层或多层水合液晶形成。可以使用任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受的代谢的脂质。除了本发明的结合选择素的拮抗剂之外，本发明脂质体形式的组合物可包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质为磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，包括天然的和合成的。形成脂质体的方法是本领域众所周知的。

非注射用的剂型还可以含有适合用于保护化合物免于降解的生物利用度增强剂(例如，酶调节剂、抗氧化剂)。在本发明组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，从而得到对于特定组合物和给药方法有效获得期望的治疗反应的活性成分量。因此，该选择的剂量水平取决于期望的治疗效果、给药途径、期望的治疗持续时间和其它因素。以单次剂量或分份剂量的形式给予宿主(host)的本发明化合物总的每日剂量的范围可以为至多50mg，以每千克体重计。剂量单位组合物可含有它的次倍量(submultiple)，这些次倍量可用于构成每日的剂量。然而，应该理解，对于任何特定患者(不论是人还是其它动物)，具体的剂量水平将取决于各种因素，包括体重、一般健康状态、性别、饮食、给药时间和方式、吸收和排泄速度、和其它药物的组合，以及正在治疗的具体疾病的严重性。

特别是，本发明的化合物可以用于治疗与炎性疾病和细胞-细胞识别及附着有关的大量疾病。例如，本发明的化合物可以给予患者以治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)；急性肺损伤(ALI)；心肺分流手术；急性呼吸窘迫综合征(ARDS)；节段性回肠炎(Crohn′s disease)；感染性休克(Septic shock)；脓毒症；慢性炎性疾病如牛皮癣、特应性皮炎和类风湿性关节炎；心脏病发作、中风、动脉粥样硬化和器官移植之后出现的再灌注损伤；创伤性休克；多器官衰竭；自身免疫疾病如多发性硬化症、经皮腔内血管成形术、哮喘和炎性肠病。在每种情况下，将有效量的本发明化合物单独或作为药学活性组合物的一部分给予需要此治疗的患者。还认识到，可以将这些化合物的组合给予需要服用的患者。还可以给药本发明化合物以治疗与细胞-细胞附着相关的其它疾病。当本发明化合物调节E-选择素或P-选择素或L-选择素的结合时，通过调节该结合相互作用可以潜在地治疗与这一相互作用有关的任何疾病。

除了在某些白细胞上发现了SLe^a，还在多种癌细胞(包括肺癌细胞和结肠癌细胞)上发现有SLe^a。已经提出，涉及SLe^a的细胞附着可能与某些癌症的转移有关，并且SLe^a结合的拮抗剂可用于治疗一些形式的癌症。

本发明活性成分的使用或具有有效含量的本发明活性成分的美容用或局部皮肤病用组合物的使用令人惊讶地能够有效治疗而且能够预防由外在因素和内在因素引起的皮肤老化。

本发明特别涉及式(I)化合物或其立体异构形式用于制备美容或皮肤病用组合物的用途。

活性化合物或其立体异构形式的用量对应于使用该美容或皮肤病用组合物得到期望的结果所需要的量。本领域技术人员能够估计此有效量，该有效量取决于所用的衍生物、其施用的个体，和施用时间。为了提供数量级，在本发明的美容或皮肤病用组合物中，式(I)化合物或其立体异构形式可以给予的量表示为0.001wt％至40wt％，优选为0.005wt％至30wt％，更优选为0.01wt％至20wt％。

其它方面包括美容用组合物，该组合物包含式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种美容上容许的组分，例如，美容上容许的用于皮肤施用的组分。

本发明美容用组合物的生理学介质中多种成分的含量是所考虑的技术领域中通常包括的那些。当该美容用组合物是乳液时，油相(fatty phase)的比例相对于美容用组合物的总重量可以为2wt％至80wt％，优选为5wt％至50wt％。

因此，美容用组合物应含有可以施用到人皮肤上的无毒且生理上可接受的介质。对于皮肤的局部施用，该美容用组合物可以为溶液、悬浮液、乳液或分散液的形式，或者可替代地为凝胶形式，所述分散液具有或多或少的流体稠度，特别是液体或半液体稠度，通过将油相分散在水相(O/W)中或者相反地(W/O)获得。还可以提供奶油冻形式的或者喷雾剂或气溶胶形式(包含加压推进剂)的美容用组合物。另外，该组合物可以为以下形式：护发剂、洗发水或毛发调理剂、液体或固体皂、处理面膜、或用于清洁头发的发泡乳剂或凝胶。它们还可以为染发剂或染毛发油的形式。

本发明的美容用组合物还可以包括所考虑的技术领域中通常使用的一种或多种其它成分，选自配制添加剂，例如水相或油相增稠剂或胶凝剂；可溶于美容用组合物介质中的染料；固态颗粒如微粒或纳米粒子形式的无机或有机填料或颜料；防腐剂；芳香剂；hydrotopes或电解质；中和剂(酸化剂或碱化剂)；推进剂；阴离子、阳离子或两性表面活性剂；聚合物，特别是水溶性或水可分散性阴离子、非离子、阳离子或两性成膜聚合物；无机或有机盐；螯合剂；及其混合物。

可以使用美容用组合物来抑制轻度炎症(micro-inflammatory)的周期。因此，本发明还涉及美容用组合物，其包括式(I)化合物或其立体异构形式，用于轻度炎症状态的美容处理或美容预防。

同样为本发明主题的是一种美容用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式，用于由内在因素引起的皮肤老化的美容处理或美容预防。造成皮肤老化的内在因素是基因设定的决定因素(genetically programmeddeterminant)，包括年龄、激素状态和心理因素。

除了美容用非活性成分外，本发明的美容用组合物还可以包括一种或多种对皮肤具有有益作用的美容活性成分。因此，本发明涉及美容用组合物，其包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种其它美容活性成分，例如UV-阻滞剂或蛋白质。

同样为本发明主题的是一种皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种皮肤病学上容许的组分，例如，用于皮肤施用的皮肤病学上容许的组分。

在此描述的可以用于皮肤病用组合物的皮肤病学上容许的组分和本发明定义的美容上容许的组分相同。

本发明的另一实施方案是皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式，用于轻微炎症状态的皮肤病处理、皮肤病诊断或皮肤病预防。

特别是，本发明涉及皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式，用于由外在因素引起的搔痒和皮肤老化的皮肤病治疗、皮肤病诊断或皮肤病预防。一般而言，外在因素包括环境因素，更具体地为，因暴露于太阳、光或任何其它辐射引起的光老化，空气污染，伤口，感染，外伤，缺氧，卷烟烟气，响应外在因素时的激素状态，神经肽，电磁场，重力，生活方式(例如，过度饮用酒精)，反复性面部表情，睡眠位置，和心理压力。

除了皮肤病非活性成分，该皮肤病用组合物还可以包括皮肤病学上或药学上的活性成分。因此，本发明还涉及皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种其它的皮肤病学上或药学上的活性成分。在此描述的可以用于该皮肤病用组合物的皮肤病学上或药学上的活性成分如上面所定义的美容活性成分中定义的。皮肤病学上或药学上的活性成分可以和本发明定义的美容上的活性成分相同。

本发明的另一主题是皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种其它的皮肤病学上或药学上的活性成分，其特征在于，用于轻微炎症状态的皮肤病处理、皮肤病诊断或皮肤病预防。

特别是，本发明涉及皮肤病用组合物，包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种其它的皮肤病学上或药学上的活性成分，其特征在于，它用于由外在因素引起的搔痒和皮肤老化的皮肤病治疗、皮肤病诊断或皮肤病预防。

皮肤的老化还可以由内在因素和外在因素的结合所引起。因此，本发明还涉及皮肤病用组合物，其包括式(I)化合物或其立体异构形式和至少一种其它的美容上或药学上的活性成分，其特征在于，它用于由内在因素和外在因素的结合所引起的皮肤老化的美容和皮肤病治疗及美容和皮肤病预防。

本发明的另一实施方案是通过以下方法制备美容用组合物的方法：混合式(I)化合物或其立体异构形式、至少一种美容上容许的组分，及最后是另外的美容活性成分。

特别是，本发明的主题是通过以下方法制备美容用组合物的方法：混合式(I)化合物或其立体异构形式、至少一种美容上容许的组分，及最后是另外的美容活性成分，其中该组合物包含基于组合物总重的0.01wt％至20wt％式(I)化合物或其立体异构形式。

另一方面涉及通过以下方法制备皮肤病用组合物的方法：混合式(I)化合物或其立体异构形式、至少一种皮肤病学上容许的组分，及最后是另外的药学活性成分。

本发明的许多化合物可以根据下面的通用合成方案合成。

方案1

在方案1中，类型(1)的苯胺在具有N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺(EDC)、三乙胺、4-二甲基氨基-吡啶(DMAP)的惰性气氛条件下和类型(2)的羧酸在二氯甲烷中反应，得到类型(3)的酰胺。类型(3)的酰胺进一步和三溴化硼在二氯甲烷中于-78℃下反应，得到相应的类型(4)的2，4，6-三羟基苯基化合物。方案1显示的合成顺序产生如(4)的化合物，不仅简化成如(1)的Y-H结构单元，而且通常可以应用至所有其他的Y-H型结构单元。

方案2

在方案2中，通用类型(5)的溴化的芳族酯或杂芳族酯在惰性条件、Suzuki-型碱性条件(Pd(PPh₃)₄和碳酸氢钠水溶液，在二甲氧基乙烷中)下和2，4，6-三甲氧基苯基硼酸(6)反应得到类型(7)的二芳基化合物(diaryl)，其进一步在乙腈中用氢氧化锂水溶液水解，得到相应的羧酸(8)，羧酸(8)通过和草酰氯在无水二氯甲烷中反应转化为类型(9)的结构单元。

方案3

在方案3中，如(9)的酰氯在碱性条件(吡啶，在二氯甲烷中)和通用类型(10)的苯胺反应，形成相应的N-酰苯胺(11)。或者，该反应步骤可以使用三乙胺。在MeCN或THF/MeOH中用LiOH水解酯(11)，得到如(12)的羧酸，该羧酸进一步和三溴化硼在二氯甲烷中在-78℃反应，然后进行水处理(aqueous workup)之后得到类型(13)的相应的脱甲基酸。方案3显示的合成顺序产生如(13)的化合物，不仅简化成如(10)的Y-H结构单元，而且通常可以应用至所有其他的Y-H型结构单元。

通过下面的代表性实施例进一步说明本发明。

实施例1

3-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸(18)

方案4

步骤1：(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将EDC盐酸化物(122mg，0.64mmol)和三乙胺(89μL，0.64mmol)溶于无水二氯甲烷(3.2mL)中并在室温搅拌5分钟。加入2-(2，4，6-三甲氧基苯基)乙酸(14)(101mg，0.45mmol)和DMAP(8mg、0.06mmol)并搅拌10分钟。加入乙酯(15)(70mg，0.42mmol)并在室温下搅拌反应溶液过夜。用饱和NH₄Cl水溶液，然后用水水解反应溶液，分层，用二氯甲烷萃取水层(3次)，用水和盐水洗涤合并的有机层，并用Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂。通过制备型环形色谱(preparative radialchromatography)(硅胶60PF，EtOAc/CyH 1+1)纯化粗产物，得到3-[2-(2，4，6-三甲氧基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸甲酯(16)，为白色固体(145mg，95％)。[K.C.Nicolaou；P.S.Baran；Y.-L.Zhong；K.Sugita；J Am.Chem.Soc；2002；124；10；2212-2220].¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.68(s，2H)；3.83(s，3H)；3.84(s，6H)；3.87(s，3H)；6.18(s，2H)；7.33(t，1H，J＝8.0Hz)；7.56(br.s，1H)；7.69(br.dd，1H，J＝7.8Hz)；7.78(t，1H，J＝1.8Hz)；7.90(dd，1H，J₁＝8.1Hz，J₂＝1.3Hz).

步骤2：在室温下将3-[2-(2，4，6-三甲氧基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸甲酯(16)(140mg，0.39mmol)溶于THF(25.0mL)并加入1M LiOH水溶液(2.0mL，2.0mmol)。在室温搅拌反应混合物40h。用2M HCl水溶液使反应混合物中止反应(冷却浴)。用EtOAc(3x)萃取混合物，用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥，得到3-[2-(2，4，6-三甲氧基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸(17)(134mg，99％)，为米色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：3.71(s，2H)；3.84(s，3H)；3.85(s，6H)；6.29(s，2H)；7.43(t，1H，J＝7.8Hz)；7.76(d，1H，J＝7.8Hz)；7.83(d，1H，J＝8.1Hz)；8.19(br.s，1H).

步骤3(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将3-[2-(2，4，6-三甲氧基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸(17)(134mg，0.39mmol)溶于无水DCM(5.3mL)中，将溶液冷却至-78℃并滴加BBr₃(240μL，2.55mmol)。在-78℃搅拌反应混合物30分钟，缓慢升温之后再在室温搅拌2h。滴加冰水、分层并用EtOAc萃取水层(3次)。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型RP HPLC(梯度，水/CH₃CN 95∶5至5∶95)纯化粗产物，得到3-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯甲酸(18)(29mg，22％)，为淡黄色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：3.69(s，2H)；5.97(s，2H)；7.43(t，1H，J＝8.0Hz)；7.76(br.dd，1H，J₁＝7.6Hz)；7.84(br.dd，1H，J₁＝8.1Hz)；8.17(t，1H，J＝1.8Hz).

实施例2

2-甲基-5-{4-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(19)

方案5

根据实施例1所述的程序获得2-甲基-5-{4-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(19)，为米色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：2.66(s，3H)；3.68(s，2H)；5.97(s，2H)；6.89(s，1H)；7.60(dd，2H，J₁＝9.1Hz，J₂＝2.3Hz)；7.64(dd，2H，J₁＝9.1Hz，J₂＝2.3Hz).

以下描述中间体的制备：

[5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(44)

方案7

步骤1：(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将噻吩-2-基-乙酸甲酯(42)(2.0g，12.8mmol)溶于无水氯仿(9.0mL)和冰醋酸(9.0mL)中，逐份加入N-溴代琥珀酰亚胺(2.3g，13.0mmol)并在室温搅拌混合物3天。将水加入反应混合物、分层并用二氯甲烷萃取水层。用1M NaOH水溶液和水洗涤合并的有机层数次，并用盐水洗涤一次，然后用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(CyH/EtOAc 5+1]纯化粗产物，得到(5-溴-噻吩-2-基)-乙酸甲酯(43)，为黄色油状物(2.46g，81％)，使用其没有再进行任何纯化。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.71(s，3H)；3.75(s，2H)；6.67(d，1H，J＝3.8Hz)；6.88(d，1H，J＝3.8Hz).

步骤2：(以下反应在N2气氛下进行。)将乙醇(3.7mL)、四(三苯基膦)-钯(0)(289mg，0.25mmol)和Na₂CO₃十水合物(4.0g，14.0mmol)溶于水(5.2mL)中，随后添加至2-氨基-苯硼酸盐酸化物(910mg，5.25mmol)的甲苯(52mL)溶液中。小心地将反应混合物除气(5次)并用N₂再次吹洗。加入(5-溴-噻吩-2-基)-乙酸甲酯(43)(1.17g，5.0mmol)的甲苯(4.5mL)溶液。再次将混合物除气(5次)并在100℃搅拌22h。将反应溶液在EtOAc和盐水之间进行分配并用EtOAc萃取分出的水层(3次)。用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(CyH/EtOAc 5+1]纯化粗产物，得到[5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(44)，为棕色油状物(634mg，51％)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：3.73(s，3H)；3.83(s，2H)；3.92-4.07(br.s，2H)；6.74(d，1H)；6.76(td，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.3Hz)；6.92(d，1H，J＝3.5Hz)；7.02(d，1H，J＝3.5Hz)；7.11(td、I H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.5Hz)；7.23(dd，14H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.5Hz).

5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-羧酸甲酯(47)

方案8

步骤1：LE23将5-溴-噻吩-2-羧酸(45)(1.50g，7.24mmol)溶于甲醇(10mL)中并添加浓硫酸(0.39mL，7.24mmol)。在75℃搅拌反应混合物20h。将混合物冷却至室温，减压除去溶剂并将残留物再溶于EtOAc。用5％Na₂CO₃水溶液洗涤有机层三次并用EtOAc萃取合并的水层。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥，在油泵中真空减压除去溶剂并干燥残留物，而未进一步纯化，得到酯(46)，为白色固体(1.48g，92％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.85(s，3H)；7.05(d，1H，J＝4.0Hz)；7.53(d、IH，J＝4.0Hz).

步骤2：LE29(以下反应在N₂气氛下进行。)将四(三苯基膦)-钯(0)(510mg，0.45mmol)和酯(46)(1.97g，8.91mmol)溶于DME(16mL)中，仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。加入2-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(2.15g，9.80mmol)和1M NaHCO₃水溶液(27.0mL，27.0mmol)，再次仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。在95℃搅拌混合物18h。将反应溶液在EtOAc和水之间分配并用EtOAc萃取分出的水层(3次)。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过急骤色谱(硅胶，CyH/EtOAc 5+1]纯化粗产物，得到5-(2-氨基-苯基)-噻吩-2-羧酸甲酯(47)，为黄色固体(1.41g，67％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.88(s，3H)；4.00(s，2H)；6.73-6.82(m，2H)；7.13-7.21(m，2H)；7.26(dd，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.0Hz)；7.78(d，1H，J＝3.8Hz).

2′，4′，6′-三甲氧基-联苯基-3-碳酰氯(51)

方案9

步骤1：KM03将1，3，5-三甲氧基苯(10.0g，59.46mmol)溶于无水二氯甲烷(100mL)中，将反应混合物冷却至-78℃，滴加溴(3.0mL，59.44mmol)，在-70℃至-40℃搅拌混合物1h。将溶液升温至0℃并加入水。分层并用EtOAc萃取水层(3次)。用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。除去溶剂并通过自热的EtOAc和环己烷中重结晶对粗产物进行纯化，得到2-溴-1，3，5-三甲氧基苯(48)为白色固体(8.84g，60％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.80(s，3H)；3.86(s，6H)；6.15(s，2H).

步骤2：FR542(在N₂气氛中进行以下反应。)将Pd(PPh₃)₄(342mg，0.30mmol)和2-溴-1，3，5-三甲氧基-苯(48)(2.44g，9.87mmol)溶于DME(20mL)并在室温搅拌15分钟。加入3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯甲酸乙基酯(3.16g，11.45mmol)，接着加入1M碳酸氢钠水溶液(29.6mL，29.6mmol)。仔细地使反应混合物除气，用N₂吹洗(5次)并在100℃搅拌20h(回流)。冷却反应混合物至室温，减压除去有机溶剂，并在水和EtOAc中分配残留物。用EtOAc萃取水层(3次)，用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(硅胶，EtOAc/CyH 1+3)纯化得到的粗产物，得到联苯基化合物(49)(2.41g，77％)，为棕色油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：1.35(t，3H，J＝7.1Hz)；3.70(s，6H)；3.85(s，3H)；4.35(q，2H，J＝7.8Hz)；6.21(s，2H)；7，42(t，1H，J＝7.6Hz)；7.95(br.d，1H，J＝7.8Hz)；7.99(b r.s，1H).

步骤3：FR543将联苯基化合物(49)(2.41g，7.62mmol)溶于MeCN(76mL)并加入1M LiOH水溶液(38.0mL，38.0mmol)。在回流下搅拌反应混合物4h。用1M HCl水溶液使冷却的反应混合物(冷却浴)中止反应(得到PH约3)。用EtOAc萃取混合物(3x)，用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。在油泵中真空减压除去溶剂并干燥残留物，而未进一步纯化，得到羧酸(50)，为黄色固体(2.25g，quant.)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.71(s，6H)；3.85(s，3H)；6.21(s，2H)；7.45(t，1H，J＝7.7Hz)；7.56(br.d，1H，J＝7.8Hz)；8.00(br.d，1H，J＝7.6Hz)；8.06(br.s，1H).

步骤4：DU011(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将羧酸(50)(1.00g，3.50mmol)溶于无水二氯甲烷(23mL)并加入无水DMF(5滴)。用水浴将温度保持在约20℃，缓慢加入草酰氯(460μL，5.25mmol)，并在室温下再搅拌2h。除去溶剂并真空干燥残留物，得到粗的2′，4′，6′-三甲氧基-联苯基-3-碳酰氯(51)(1.10g，quant.)，为黄色固体。没有进一步纯化。

5-(4-氨基-苯基)-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(54)

方案10

步骤1：DK001(下面的反应在无光条件下进行。)将2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(52)(3.60mL，28.5mmol)溶于氯仿(20mL)和冰醋酸(20mL)并在95分钟内逐份添加NBS(6.90g，38.8mmol)。在室温再搅拌反应悬浮液19h。将水加入反应混合物并用二氯甲烷萃取水层(2次)，用2M NaOH水溶液、水(三次)和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥，得到5-溴-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(53)(4.90g，78％)，为红棕色油状物。没有进一步纯化。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：2.54(s，3H)；3.80(s，3H)；6.53(s，1H).

步骤2：DK002+003(在N₂气氛中进行以下反应)将Pd(PPh₃)₄(1.26g，1.09mmol)和5-溴-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(53)(4.77g，21.77mmol)溶于DME(116mL)并在室温搅拌15min。加入4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯胺(5.25g，23.96mmol)，接着加入1M碳酸氢钠水溶液(65.4mL，65.3mmol)。仔细地使反应混合物除气，用N₂吹洗(5次)并在95℃(回流)搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温，减压除去有机溶剂并在水和EtOAc之间进行分配。用EtOAc萃取水层(3次)，用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过急骤色谱(硅胶，EtOAc/CyH 1+2)纯化获得的粗产物，得到5-(4-氨基-苯基)-2-甲基-呋喃-3-羧酸甲酯(54)(2.35g，46％)，为黄棕色固体。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：2.60(s，3H)；3.74(br.s，2H)；3.82(s，3H)；6.64(s，1H)；6.67(dt，1H，J₁＝8.6Hz，J₂＝2.3Hz)；7.42(dt，2H，J₁＝8.8Hz，J₂＝2.3Hz).

2-噻吩-2-基-苯胺(55)

方案11

步骤1：AB427(以下反应在N2气氛下进行。)将四(三苯基膦)-钯(0)(297mg，0.26mmol)和2-溴-噻吩(837mg，5.13mmol)溶于DME(42mL)中，仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。搅拌10分钟之后，加入2-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯胺(1.24g，5.64mmol)和1MNaHCO₃水溶液(15.4mL，15.4mmol)，再次仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。在95℃搅拌混合物3h。将混合物冷却至室温，减压除去溶剂并将残留物在EtOAc和水之间进行分配。用EtOAc萃取分出的水层(3次)。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过急骤色谱(硅胶60、CyH/EtOAc 15+1]纯化粗产物，得到2-噻吩-2-基-苯胺(55)，为棕色固体(825mg，92％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：4.40-6.00(m，2H)；6.88(td，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.0Hz)；6.93(dd，1H，J₁＝8.0Hz，J₂＝1.0Hz)；7.07(dd，1H，J₁＝5.3Hz，J₂＝3.5Hz)；7.17(td，1H，J₁＝8.0Hz，J₂＝1.5Hz)7.22(dd，1H，J₁＝3.5Hz，J₂＝1.3Hz)；7.30(dd，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.5Hz)；7.33(dd，1H，J₁＝5.3Hz，J₂＝1.3Hz)。

(5-(3-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(57)

方案12

步骤1：FR544(以下反应在N₂气氛下进行。)将四(三苯基膦)-钯(0)(1.12g，0.97mmol)和酯(43)(4.57g，19.44mmol)溶于甲苯(200mL)和EtOH(20.0mL)，仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。加入3-硝基苯基硼酸(3.57g，21.38mmol)和3M Na₂CO₃水溶液(18.1mL，54.3mmol)，再次仔细地使反应混合物除气(5次)并用氮气吹洗。在100℃搅拌混合物18h。将反应溶液在EtOAc和水之间分配并用EtOAc萃取分出的水层(3次)。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(硅胶，EtOAc/CyH1+5)纯化所得的粗产物，得到[5-(3-硝基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(56)，为黄色固体(3.15g，58％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.75(s，3H)；3.85(s，2H)；6.94(br.d，1H，J＝3.8Hz)；7.27(d，1H，J＝3.8Hz)；7.51(t，1H，J＝8.0Hz)；7.84(ddd，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.5Hz，J₃＝0.8Hz)；8.08(ddd，1H，J₁＝8.3Hz，J₂＝2.1Hz，J₃＝1.0Hz)；8.39(t，1H，J＝1.9Hz).

步骤2：(以下反应在N₂气氛下进行。)在室温将[5-(3-硝基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(56)(3.15mg，11.35mmol)溶于MeOH(225mL)中并加入Pd/C(10％(w/w)Pd含量，1.20g，1.13mmol)，然后加入NH₄CO₂H(7.15g，113.4mmol)。仔细地使反应混合物除气(用N₂吹洗)并在室温搅拌22h。通过硅藻土短垫过滤反应混合物并除去溶剂。通过制备型环形色谱(硅胶，EtOAc/CyH 1+3)纯化粗产物，得到[5-(3-氨基-苯基)-噻吩-2-基]-乙酸甲酯(57)(2.08g，74％)，为黄色固体。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：3.73(s，3H)；3.81(s，2H)；6.59(dd，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝2.0Hz)；6.86(br.d，1H，J＝3.5Hz)；6.88(t，1H，J＝1.9Hz)；6.97(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.09(d，1H，J＝3.5Hz)；7.13(t，1H，J＝7.7Hz).

实施例3

2-甲基-5-{4-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(60)REV968

方案13

步骤1：AB438(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)

将苯胺(54)(150mg，0.65mmol)溶于无水二氯甲烷(10.0mL)，加入无水吡啶(1.7mL)和羧酸氯化物(51)(218mg，0.71mmol)。在室温搅拌反应混合物20h。将反应混合物倒入冰冷的1M HCl水溶液中，用EtOAc萃取(3x)，用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(硅胶，EtOAc/CyH 1+5，然后1+3，然后1+1)纯化所得的粗产物得到酰胺(58)，为黄色固体(95mg，29％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：2.63(s，3H)；3.72(s，6H)；3.83(s，3H)；3.86(s，3H)；6.23(s，2H)；6.81(s，1H)；7.46-7.53(m，2H)；7.61(d，2H，J＝8.5Hz)；7.66(d，2H，J＝8.6Hz)；7.76-7.82(m，3H)。

步骤2：AB439将酯(58)(71mg，0.14mmol)溶于THF(2.4mL)和MeOH(0.6mL)中并添加1M LiOH水溶液(710μL，0.71mmol)。在室温搅拌反应混合物24h。减压除去溶剂并在EtOAc和1M HCl之间进行分配。分离出水层并用EtOAc萃取3次。用水和盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥，在油泵中真空减压除去溶剂并干燥残留物，而未进一步纯化，得到粗产物(59)，为米色固体(68mg，99％.)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：2.59(s，3H)；3.67(s，6H)；3.83(s，3H)；6.34(s，2H)；6.99(s，1H)；7.38(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.48(t，1H，7.7Hz)；7.67(d，2H，J＝8.8Hz)；7.77(br.s，1H)；7.81-7.87(m，3H)；10.29(s，1H)；12.60(br.s，1H)。

步骤3：AB440(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将羧酸(59)(65mg，0.13mmol)悬浮于无水二氯甲烷(2.7mL)和无水1，2-二氯乙烷(2.0mL)中，冷却溶液至-78℃并滴加1M BBr₃的二氯甲烷(800μL，0.80mmol)溶液。在-78℃搅拌反应混合物10分钟，并在缓慢升温之后在室温再搅拌4h。将反应混合物冷却至0℃，滴加水和二氯甲烷，然后是EtOAc。分离出水层并用EtOAc萃取3次。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂并通过制备型RP HPLC(梯度，水/CH₃CN 95∶5至5∶95)纯化粗产物，得到2-甲基-5-{4-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-呋喃-3-羧酸(60)(11mg，19％)，为黄色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：2.68(s，3H)；6.03(s，2H)；6.95(s，1H)；7.52(t，1H，J＝7.7Hz)；7.61(dt，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.3Hz)7.71(d，2H，J＝8.8Hz)；7.81(d，2H，J＝8.8Hz)；7.83(dt，1H，J₁＝8.1Hz，J₂＝1.4Hz)，7.95(t，1H，J＝1.5Hz).

实施例4

(5-{2-[(2’，4’，6’-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(63)REV974

方案14

步骤1：FR600(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将苯胺(44)(823mg，3.33mmol)溶于无水二氯甲烷(17.0mL)中，加入无水吡啶(680μL，8.33mmol)和羧酸氯化物(51)(1.67g，4.32mmol)。在室温搅拌反应混合物20h。将反应混合物倒入冰冷却的1M HCl水溶液中，用EtOAc萃取(3x)，用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。通过制备型环形色谱(硅胶60PF、CyH/EtOAc3+1)纯化粗产物得到酰胺(61)，为黄色固体(722mg，41％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：3.69(s，6H)；3.72(s，3H)；3.80(s，2H)；3.86(s，3H)；6.21(s，2H)；6.92(d，1H，J＝3.5Hz)；7.01(d，1H，J＝3.5Hz)；7.14(t，1H，J＝7.3Hz)；7.36-7.42(m，2H)；7.44(d，1H，J＝7.8Hz)；7.48(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.61(br.d，1H，7.3Hz)；7.78(br.s，1H)；8.35(br.s，1H)；8.50(d，1H，J＝8.3Hz).

步骤2：FR601将酯(61)(722mg，1.39mmol)溶于MeCN(14.0mL)，加入1M LiOH水溶液(7.0mL，7.00mmol)。在室温搅拌反应混合物20h。减压除去溶剂并在EtOAc和1M HCl(1+1)之间进行分配。分离出水层并用EtOAc萃取3次。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。在油泵中真空减压除去溶剂并干燥残留物，而未进一步纯化，得到粗产物(62)，为黄色固体(714mg，quant.)。¹H NMR(400MHz，CD3CN)：3.69(s，6H)；3.80(s，2H)；3.85(s，3H)；6.30(s，2H)；6.92(d，1H，J＝3.5Hz)；7.14(d，1H，J＝3.8Hz)；7.28(td，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.3Hz)；7.39(td，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.3Hz)；7.42-7.49(m，2H)；7.54(dd，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.3Hz)；7.69(br.s，1H)；7.73(dt，1H，J，＝7.3Hz，J2＝1.8Hz)；7.89(d，1H，J＝7.6Hz)；8.53(br.s，1H).

步骤3：FR602(以下反应在干燥N₂气氛下进行。)将羧酸(62)(700mg，1.39mmol)溶于无水二氯甲烷(28.0mL)，冷却溶液至-78℃并滴加1M BBr3的二氯甲烷(8.5mL，8.50mmol)溶液。在-78℃将反应混合物搅拌10分钟，在缓慢升温之后在室温继续搅拌4h。冷却反应混合物至0℃，滴加水和二氯甲烷，接着加入EtOAc。分离出水层并用EtOAc萃取3次。用盐水洗涤合并的有机层并用Na₂SO₄干燥。减压除去溶剂并通过制备型RP HPLC(梯度，水/CH₃CN 95∶5至5∶95)纯化粗产物，得到(5-{2-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(63)(146mg，22％)，为米色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)3.85(s，2H)；6.02(s，2H)；6.97(d，1H，J＝3.5Hz)；7.18(d，1H，J＝3.5Hz)；7.35(td，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.3Hz)；7.42(td，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.5Hz)；7.50(t，1H，J＝7.7Hz)；7.61(br.d，2H，J＝7.6Hz)；7.79(br.d，2H，J＝7.6Hz)；7.93(br.s，1H).

实施例5

(5-{2-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(25)REV989，DU27

方案15

根据实施例1的步骤1-3所述的程序从胺(44)和羧酸氯化物(14)出发制备(5-{2-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(25)，得到(5-{2-[2-(2，4，6-三羟基-苯基)-乙酰基氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(25)(25mg，3个步骤共计16％)，为棕色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：3.58(s，2H)；3.88(s，2H)；5.88(s，2H)；6.67(d，1H，J＝3.3Hz)；6.84(d，1H，J＝3.3Hz)；7.14(t，1H1，J＝7.3Hz)；7.31-7.37(m，2H)；8.26(d，1H1，J＝8.6Hz).

实施例6

5-{2-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(26)REV971，LE37

方案16

根据实施例4的步骤1-3所述的程序从胺(47)和羧酸氯化物(51)出发制备5-{2-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(26)，得到5-{2-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-羧酸(26)(44mg，3个步骤共计22％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：6.02(s，2H)；7.32-7.36(m，1H)；7.41(t，1H，J＝7.6Hz)；7.46-7.53(m，2H)；7.62(dt，1H，J₁＝7.6Hz，J2＝1.3Hz)；7.65-7.73(m，3H)；7.80(dt，1H，J1＝8.1Hz，J2＝1.4Hz)；7.96(br.s，1H).

实施例7

(5-{3-[(2’，4’，6’-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(64)REV996，KM7

方案17

根据上述实施例4的步骤1-3所述的程序从胺(57)和羧酸氯化物(51)出发制备(5-{3-[(2’，4’，6’-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(64)，从而获得(5-{3-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯基}-噻吩-2-基)-乙酸(64)(3mg，3个步骤共计4％)，为棕色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：3.88(s，2H)；6.03(s，2H)；6.97(d，1H，J＝3.5Hz)；7.29(d，1H，J＝3.8Hz)；7.36-7.44(m，2H)7.53(t，1H，J＝7.7Hz)；7.61(dt、1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.4Hz)；7.66(dt，1H，J₁＝7.3Hz，J₂＝1.8Hz)，7.85(dt，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.5Hz)；7.96(t，1H，J＝1.5Hz)；8.05(br.s，1H).

实施例8

2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羧酸(2-噻吩-2-基-苯基)-酰胺(65)REV965，AB437

方案18

根据上述实施例4的步骤1和3所述的程序从胺(55)和羧酸氯化物(51)出发制备2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羧酸(2-噻吩-2-基-苯基)-酰胺(65)，从而获得2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羧酸(2-噻吩-2-基-苯基)-酰胺(65)(12mg，2个步骤共计9％)，为米色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：6.02(s，2H)；7.13(dd，1H，J₁＝5.1Hz，J₂＝3.8Hz)；7.35(dd，1H，J₁＝3.5Hz，J₂＝1.0Hz)；7.38(dd，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.3Hz)；7.41-7.48(m，2H)；7.50(d，1H，J＝7.6Hz)；7.61(dt，1H，J₁1＝7.8Hz，J₂＝1.4Hz)；7.64(dd，1H，J₁＝7.6Hz，J₂＝1.5Hz)；7.73(dd，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.3Hz)；7.77(dt，1H，J₁＝8.1Hz，J₂＝1.4Hz)；7.92(t，1H，J＝1.5Hz).

实施例9

2’，4’，6’-三羟基-联苯基-3-羧酸(3-三氟甲基-苯基)-酰胺(66)REV961，DU15

方案19

根据上述实施例4的步骤1和3所述的程序从3-三氟甲基-苯胺和羧酸氯化物(51)出发制备2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羧酸(3-三氟甲基-苯基)-酰胺(66)，从而得到2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羧酸(3-三氟甲基-苯基)-酰胺(66)(54mg，2个步骤共计54％)，为米色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：6.02(s，2H)；7.45(br.d，1H，J＝7.6Hz)；7.53(t，1H，J＝7.7Hz)；7.58(t，1H，J＝8.0Hz)；7.62(dt，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.4Hz)；7.85(ddd，1H，J₁＝7.8Hz，J₂＝1.8Hz，J₃＝1.3Hz)；7.95-7.99(m，2H)；8.21(br.s、I H).

实施例10

3-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯甲酸(67)REV1007，LE80

方案20

根据上述实施例3的步骤1-3所述的程序由3-氨基-苯甲酸甲酯和羧酸氯化物(51)出发制备3-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯甲酸(67)，从而获得3-[(2′，4′，6′-三羟基-联苯基-3-羰基)-氨基]-苯甲酸(67)(22mg，3个步骤共计14％)，为灰白色固体。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：6.02(s，2H)；7.48(t，1H，J＝8.0Hz)；7.52(t，1H，J＝7.8Hz)；7.61(br.d，1H，J＝7.8Hz)；7.84(t，2H，J＝7.2Hz)；7.96(b r.s，1H)；8.01(b r.d，1H，J＝8.3Hz)；8.34(br.s，1H).

在下面方案6中提到的化合物是称为本发明特别优选的化合物的那些。

方案6

唾液酸化的Lewis ^x 酪氨酸硫酸盐试验(sLe ^x TSA)：

在分子水平测试本发明化合物抑制P-、L-或E-选择素嵌合分子与作为PSGL-1取代物连接到聚合物母体的sLe^x和酪氨酸硫酸盐残基结合的能力。确定选定的IC₅₀-值。

在pH 9.6的碳酸盐缓冲液中用羊抗人Fc mAB(10μg/ml)涂覆微量滴定板过夜。在试验缓冲液(assay buffer)(25mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)，150mM NaCl，1mM CaCl₂ pH 7.4)中洗涤并封闭(在试验缓冲液中加3％胎牛血清白蛋白(BSA))后，将板在37℃与人P-选择素-IgG-嵌合物(0.61nM分别150ng/mL)或人L-选择素-IgG-嵌合物(0.61nM分别89ng/mL)或人E-选择素-IgG-嵌合物(0.61nM分别131ng/mL)温育2h。将含15％sLe^x，10％酪氨酸硫酸盐和5％生物素的5μl sLe^x-酪氨酸硫酸盐聚丙烯酰胺(1mg/ml)与20μl链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液(1mg/ml)和25μl无CaCl₂的试验缓冲液络合。在用于该试验时，将该配体络合物以1∶10000稀释于试验缓冲液中，并再以1∶1稀释于含有不同量的化合物及2％DMSO的试验缓冲液中。将此混合物加入预先涂覆有E-或P-选择素的滴定孔中。在37℃温育2h后，用含0.005％聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(TWEEN 20)的试验缓冲液洗涤滴定孔6次，用20μl 3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)/H₂O₂底物溶液显色10-15min，再用20μl 1M H₂SO₄终止。通过在Fusion alpha-FP读板仪(Packard Bioscience，Dreieich，Germany所售)中测量450nm vs.620nm两波长处的光密度来确定结合的sLe^x-酪氨酸硫酸盐配体络合物。

sLe ^x TSA的结果：E-/P-/L-选择素的IC ₅₀ 数据

化合物 E-选择素IC₅₀[μM] P-选择素IC₅₀[μM] L-选择素IC₅₀[μM]

Bimosiamose ＞500 95.0 ＞500

18 41.2 37.1 35.1

19 12.4 20.7 22.1

sLe ^x TSA的结果：E-/P-/L-选择素的IC ₅₀ 数据

25 105.4 87.9 95.9

26 33.3 27.8 28.2

60 7.8 5.2 6.1

63 21.9 17.4 17.4

64 5.7 6.0 6.3

65 28.1 8.2 15.5

67 27.3 23.3 25.2

在流动条件下的流动室试验(Flow Chamber Assay)/细胞粘着和滚动

为评估化合物在模拟血管中流动的动力学条件下抑制细胞结合的能力，进行针对(address)/测试HL-60细胞/多种细胞系与P-选择素、L-选择素和E-选择素嵌合分子结合的流动室试验。

用平行流动室体系(parallel flow chamber system)确定在流动条件的细胞附着。在室温用分别含浓度为2.5μg/ml或10μg/ml的人E-或P-选择素-IgG嵌合物的包覆缓冲液(50mM三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)(150mM NaCl，2mM CaCl₂；pH 7.4)包覆35mm聚苯乙烯培养皿1小时。弃除包覆溶液后，用含1％BSA的包覆缓冲液在室温另外封闭非特异性结合位点1小时。用试验缓冲液(″Roswell Park Memorial Institute 1640″(RPMI 1640)+10mM HEPES)洗涤后，将该皿装入平行板层流室(Glycotech，Rockville，MD所售)中并固定在装备了与PC连接的CCD相机(JVC)的倒置相对比显微镜(invertedphase-contrast microscope)(Olympus，Hamburg，Germany所售)上。使用蠕动泵(peristaltic pump)(Ismatec，Wertheim-Mondfeld，Germany所售)来用含125μM化合物或载体对照物(DMSO)的试验缓冲液平衡再循环体系。将细胞(10⁶/ml)加入室中，使其以高流速分配2分钟。然后降低流速使计算的流动剪应力为1dyne/cm²。在5分钟持续流动后数字记录10个低倍视野的视频序列(sequences)。抑制百分比用独立实验中化合物存在与不存在时每个视野中附着到包覆的皿表面的细胞均数来计算。

对于E-和P-选择素的流动室实验数据

得到的值为化合物x的抑制百分比(％-inhibition)除以bimosiamose的抑制百分比的正态化比率。

化合物 E-选择素[比率] P-选择素[比率]

18 0.80 1.07

19 0.75 1.27

化合物 E-选择素[比率] P-选择素[比率]

25 0.94 1.65

26 1.11 0.77

60 1.05 0.99

63 1.23 0.87

64 1.06 1.23

65 1.13 0.99

66 1.47 1.19

67 0.79 0.95

Claims

1.药物组合物，其包括至少一种式(I)化合物和可用于药品的药学上可接受的载体，或者式(I)化合物的药学上可接受的盐、酯或酰胺及前药，

其中符号和取代基具有以下含义

-X-＝

(a)

其中m＝0、1；n＝1～3的整数

(b)

其中″环″为

(c)

T为O、S或[H，H]；p＝0、1、2，

-Y＝

(a)

s为0或1，

R⁵为H、NO₂、CF₃、F、Cl、Br、I、CN、CH³、OCH₃、SH、NH₂

且-W-＝-(CH₂-)_v，顺式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-，且v为0、1、2；

当-W-为顺式-CH＝CH-或反式-CH＝CH-时，R²不得为NH₂或SH；

(b)

R⁶独立于R²为H、F、Cl、Me、叔-Bu、CN、NH₂

(c)

(e)

其中t为0、1、2

-Z＝

(i)

(iv)

其中K＝NH、NMe、O、S

(v)

2.权利要求1的药物组合物，其中所述化合物由式(II)定义

其中-X′-为X(a)或X(b)且-Y如权利要求1中所定义。

3.权利要求2的药物组合物，其中所述化合物由式(A)或(B)定义

其中-X′-和-Y如权利要求2中所定义且其中-X″-为

以及其中-Y′为

其中所有标记、符号和取代基如权利要求1中所定义。

4.权利要求3的药物组合物，其中所述化合物由式(C)定义

其中-X″-和-Y′如权利要求3中所定义。

5.权利要求4的药物组合物，其中所述化合物由式(D)定义

其中-X″-如权利要求3中所定义，且-Y″为

式中R⁹为CO₂H、CO₂烷基、CO₂芳基、CO₂NH₂、CO₂芳烷基、CH₂SO₃H、CH₂SO₂NH₂、CH₂PO(OH)₂、1-H-四唑基、CHO、COCH₃、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NH烷基、CH₂N(烷基)烷基′、CH₂OCH₃、CH₂SH，

其中所有标记、符号和取代基如权利要求1中所定义。

6.具有权利要求4或5的式(C)或(D)通式结构的化合物。

7.具有权利要求1的结构式(I)的化合物在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途：慢性阻塞性肺疾病(COPD)；急性肺损伤(ALI)；心肺分流手术；急性呼吸窘迫综合征(ARDS)；节段性回肠炎；感染性休克；脓毒症；慢性炎性疾病如牛皮癣、特应性皮炎，和类风湿性关节炎；心脏病发作、中风、动脉粥样硬化和器官移植之后出现的再灌注损伤；创伤性休克；多器官衰竭；自身免疫疾病如多发性硬化症、经皮腔内血管成形术、哮喘和炎性肠病。

8.具有权利要求1的结构式(I)的化合物在制备用于治疗、诊断或预防炎性疾病的药物中的用途。

9.具有权利要求1的结构式(I)的化合物在制备用于诊断剂或治疗剂的药物寻靶的载体中的用途。

10.具有权利要求1的结构式(I)的化合物在制备美容用组合物或皮肤病用组合物中的用途。

11.美容用组合物，其包含至少一种权利要求1的式(I)化合物和至少一种美容上容许的组分。

12.皮肤病用组合物，其包含至少一种权利要求1的式(I)化合物和至少一种皮肤病学上容许的组分。