CN101302170B

CN101302170B - 光学活性(+)或(-)-棉酚衍生物、制备方法及其用途

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Publication number: CN101302170B
Application number: CN2008100392962A
Authority: CN
Inventors: 姜海霞; 曹星欣; 姜标
Original assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Priority date: 2008-06-20
Filing date: 2008-06-20
Publication date: 2012-11-14
Anticipated expiration: 2028-06-20
Also published as: CN101302170A

Abstract

本发明提供了一种光学活性棉酚衍生物、特别是具有如下结构式的光学活性(-)-棉酚的席夫碱衍生物、合成方法及其用途：或

Description

光学活性(+)或(-)-棉酚衍生物、制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及一种光学活性(+)或(-)-棉酚衍生物、制备方法及其用途，进一步说是一种，胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚的化合物，本发明还提供一种简便水解制备高纯度光学活性(-)-棉酚的方法，特别是光活(-)-棉酚的席夫碱衍生物合成和制备抗癌药物的用途。

背景技术

近几十年来，世界各国对棉酚及其衍生物的应用展开了广泛的研究，逐渐发现除了抗生育作用外，棉酚及其衍生物还具有更为广泛的药理作用，如抗炎症、抗病毒、抗寄生虫等作用。另外，棉酚及其衍生物还具有杀伤某些肿瘤细胞的作用，如对宫颈癌、子宫肌瘤、卵巢癌、肾上腺皮质癌、前列腺癌、睾丸癌、消化道癌症尤其是胃癌等。最近我国学者还发现棉酚能有效杀伤具有抗药性的白血病/骨髓瘤癌症细胞，而对正常细胞没有杀伤作用，特别适用于耐常规化疗的癌症病人和癌症复发病例。不仅如此，棉酚及其衍生物在化工、遗传工程、火箭燃料、石油钻探、橡胶塑料工业等领域也显示良好的应用前景，其良好的抗氧化性能和稳定剂作用预示着棉酚及其衍生物蕴藏着巨大的商业开发价值。在医药、农药、化工、遗传工程等领域均有着广阔的应用前景。

总结前人试验经验，本小组曾发明摸索了一套操作简便，用材简单，具有很大实用价值的制备光活棉酚方法[CN101020626A 22Aug 2007，14pp]，为棉酚拆分研究迈出一大步。上述实验将胺缩棉酚水解得到光活棉酚时，以常规方法，乙醚为溶剂，加入酸的量不固定，酸的种类也不固定，有时加冰醋酸和浓盐酸，有时只加浓盐酸等，反应时间，温度等条件上都不统一。本发明摸索出一种简便易行，适用于工业化水解得到高纯度光学活性(+)或(-)-棉酚的方法，尤其是高纯度光学活性(-)-棉酚的工业化生产方法。并将该光活棉酚合成制备席夫碱衍生物，表现出很好的抗癌活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种光学活性(+)或(-)-棉酚衍生物、制备方法及其用途，进一步说是一种缩胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚的化合物。本发明还提供一种简便水解制备高纯度光学活性(-)-棉酚的方法，特别是光活(-)-棉酚的席夫碱衍生物合成和制备抗癌药物的用途。

光学活性(+)或(-)-棉酚的简便水解制备方法，尤其是适用于工业化生产的水解缩胺棉酚以得到光学活性(-)-棉酚的方法，及其衍生物的合成，特别是光活(-)-棉酚的席夫碱衍生物合成和抗癌活性。该方法具有原料价廉，溶剂安全，得率高、操作简便、产品质量好的优点。

本发明的方法是应用光学活性棉酚与氨基酸酯的缩合物水解，将得到的高纯度的光学活性棉酚与胺类化合物缩合，制备光活棉酚的席夫碱衍生物，部分化合物表现出很好的抗癌活性。

所述的(+)或(-)棉酚及其席夫碱衍生物的结构式如下：

S-(+)-棉酚 R-(-)-棉酚

缩胺-(+)-棉酚a 或缩胺-(-)-棉酚b

其中，R可以是三元环基、卤素取代的苯基，羟基取代C₁～C₄的烷基、苯基取代的C₁～C₃烷基、R₁、R₂或R₃取代的C₁～C₃的烷基。

所述的R₁、R₂或R₃为H、OH、羟基取代C₁～C₄的烷基、苯基或硝基取代的苯基；

上述的R典型的例子是：

当R为

对应化合物1，即1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺缩(+)或(-)-棉酚；

当R为

对应化合物2，即1-羟基-3-苯基丙胺缩(+)或(-)-棉酚；

当R为

对应化合物3，即苯乙胺缩(+)或(-)-棉酚；

当R为对应化合物4，即3-羟基丙胺缩(+)或(-)-棉酚；

当R为

对应化合物5，即环丙胺缩(+)或(-)-棉酚；

当R为

对应化合物6，即对溴苯胺缩(+)或(-)-棉酚。

(+)或(-)棉酚席夫碱衍生物的合成路线：

具体地说，本发明的方法采用如下的步骤：

(1)(+)或(-)的光活棉酚色氨酸酯缩合物经水解获得(+)和(-)棉酚。

具体地说，将L-色氨酸甲酯缩(-)棉酚溶于一定量含酸有机溶剂中，控温35～40℃下进行水解，待反应完全后，抽滤，洗涤，回收不溶物，母液反复水洗，无水硫酸钠干燥，加入乙醚/石油醚重结晶，得到光学纯棉酚产物，其光学纯度由手性HPLC测试确定。

所述的含酸有机溶剂是含酸的酯类溶剂，如乙酸乙酯等。

所含酸可以是有机酸，如甲酸、乙酸或对甲苯磺酸等；也可以是无机酸，如盐酸、磷酸或硫酸等。可以采用单一的酸，也可以用以上酸的混合物。优选的酸有盐酸和盐酸-乙酸混合酸。

所述的含酸有机溶剂的配比可以是含0.45-1％盐酸的乙酸乙酯液，也可以是含0.45-1％盐酸和0.45-1％乙酸的乙酸乙酯液，优选的是含0.45-1％盐酸和0.45-1％乙酸的乙酸乙酯液，更优选含0.65％盐酸和0.65％乙酸的乙酸乙酯液(即盐酸∶乙酸∶乙酸乙酯＝0.65∶0.65∶100)。

所述的含酸有机溶剂的加入量可以是每投料量1mmol溶剂25-45ml，优选酸液加入量28-32ml。

水解时加热温度推荐为室温～50℃，更优选35～40℃。所述反应完全是可以根据TLC跟踪确定，通常反应0.5-2小时。

所述的抽滤，洗涤的不溶物是反应回收的不溶物L-色氨基酸甲酯盐酸盐，该氨基酸酯盐酸盐可以回收利用。

所述的母液反复水洗是为了洗去催化剂酸。所述光活棉酚进一步重结晶溶剂为石油醚(30-60℃)和乙醚混合溶剂；推荐溶剂比例石油醚(30-60℃)∶乙醚为1∶1～2，更优选1∶2。

(2)将得到的(+)和(-)棉酚分别与伯胺类化合物在室温下进行缩合反应0.5-2小时，得到缩胺-(+)-棉酚a和缩胺-(-)-棉酚b。所述的伯胺类化合物具有RNH₂分子式，其中，R如前所述。光活棉酚与伯胺类化合物摩尔比为1∶2～3，推荐1∶2～2.1，室温下反应，TLC检测，反应完全后，重结晶或柱层析，得到目标化合物(1a，1b～6a，6b)。

所述的缩胺-(+)-棉酚a和缩胺-(-)-棉酚b用于抗癌药物实验。

对本发明所合成的化合物，采用MTT法测试了其对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤活性。

MTT法操作流程如下：配药，癌细胞的培养和增殖检测，以(-)gossypol为阳性对照，加入MTT溶液培养4h，洗涤，干燥，溶解，492nm处测定吸光度值。用t检验进行不同浓度的加药组与对照组之间均值的比较。测试结果如下：(-)-棉酚对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性均高于(+)-棉酚，阿朴棉酚对人胶质瘤U87细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性均高于(-)-棉酚；1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺缩(+)-棉酚(1a)对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性与(-)-棉酚相当；1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺缩(-)-棉酚(1b)对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性均优于(-)-棉酚，特别是1b对人胃癌M85细胞(IC₅₀＜2.5umol.dm^-3)远高于(-)-棉酚(IC₅₀＝18.4umol.dm^-3)；1-羟基-3-苯基丙胺缩(+)-棉酚(2a)和1-羟基-3-苯基丙胺缩(-)-棉酚(2b)对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性稍优于或相当与(-)-棉酚；苯乙胺缩(+)-棉酚(3a)和苯乙胺缩(-)-棉酚(3b)对人胶质瘤U87细胞和胃癌M85细胞不表现抗肿瘤活性，但是却有很好的抗宫颈癌HeLa细胞活性；3-羟基丙胺缩(+)-棉酚(4a)对人宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性优于(-)-棉酚，对人胶质瘤U87细胞和胃癌M85细胞的抗肿瘤活性相当与(-)-棉酚；3-羟基丙胺缩(-)-棉酚(4b)对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性均优于(-)-棉酚，特别是对人胃癌M85细胞(IC₅₀＝5.4umol.dm^-3)和对人胶质瘤U87细胞(IC₅₀＝12.1umol.dm^-3)抗肿瘤活性更佳；环丙胺缩(+)-棉酚(5a)对人胶质瘤U87细胞不表现抗肿瘤活性，但是有很好的抗人宫颈癌HeLa细胞和胃癌M85细胞活性，特别是对人胃癌M85细胞(IC₅₀＝17.4umol.dm^-3)优于(-)-棉酚(IC₅₀＝18.4umol.dm^-3)；环丙胺缩(-)-棉酚(5b)对人胶质瘤U87细胞，胃癌M85细胞和宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性稍优于或相当与(-)-棉酚；对溴苯胺缩(+)-棉酚(6a)对人胶质瘤U87细胞和胃癌M85细胞不表现抗肿瘤活性，但有一定抗人宫颈癌HeLa细胞活性(IC₅₀＝73.7umol.dm^-3)；对溴苯胺缩(-)-棉酚(6b)对人胶质瘤U87细胞不表现抗肿瘤活性，但有一定抗人宫颈癌HeLa细胞(IC₅₀＝49.2umol.dm^-3)和抗胃癌M85细胞活性(IC₅₀＝78.4umol.dm^-3)。具体数据如下表格。

本发明提供了一种操作简便，条件温和，原料价廉，反应得率高、产品质量好，适用于工业化的优点。部分棉酚衍生物表现出比(-)-棉酚更好的抗癌活性和对特定肿瘤细胞的专属杀伤性。

此外，本发明从光活棉酚缩氨基酸酯水解得到光学纯棉酚，大大减少了过去文献中酸的用量，和不统一性，同时提高了产率。并且可以完全回收氨基酸酯盐酸盐，几乎定量回收了拆分原料。

附图说明

图1是本发明的化合物的宫颈癌HeLa细胞的体外抗肿瘤活性直方图和抑制率曲线；

图2是本发明的化合物的胃癌M85细胞的体外抗肿瘤活性直方图和抑制率曲线；

图3是本发明的化合物的人胶质瘤U87细胞的体外抗肿瘤活性直方图和抑制率曲线。

具体实施方式

以下实施例将进一步说明本发明提供的方法，但本发明不受此限制。

实施例1：

水解制备(-)-棉酚

取L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚95mg(0.1mmol)溶于6ml乙酸乙酯中，加入1滴冰醋酸和1滴浓盐酸，35-40℃下，搅拌，析出大量白色固体，0.5-1小时后，TLC确定反应完全，抽滤，乙酸乙酯洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐50mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，加入少量石油醚，结晶得黄色粉末光学纯(-)-棉酚54mg(产率～100％，ee值＞99％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：11.13(br s，-OH)，7.78(s，2H)，6.43(s，2H)，5.87(s，2H)，3.89(m，2H)，2.15(s，6H)，1.55(d，J＝6.9Hz，12H)。

取L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚9.25g(10mmol)溶于300ml0.66％的乙酸乙酯酸溶液(冰醋酸∶浓盐酸∶乙酸乙酯＝0.66∶0.66∶100)中，35-40℃下，搅拌，0.5小时后，TLC确定反应完全，大量白色固体析出，抽滤，乙酸乙酯洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐4.953g(回收率96.2％)，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，乙醚/石油醚(30-60℃)重结晶，共得黄色粉末光学纯(-)-棉酚4.82g(产率92.4％，纯度98％，ee值～100％)。

取L-色氨酸甲酯缩(-)-棉酚54g溶于2L0.5％的乙酸乙酯酸溶液(冰醋酸∶浓盐酸∶乙酸乙酯＝0.5∶0.5∶100)中，35-40℃下，搅拌，大量白色固体析出，约1小时后，TLC确定反应完全，抽滤，乙酸乙酯洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐26.71g(回收率88.9％)，蒸除溶剂，加入丙酮/醋酸/水，静置结晶，共得(-)-醋酸棉酚30.93g(产率90.88％，ee值＞99％)。

实施例2：

水解制备(+)-棉酚

取L-色氨酸甲酯缩(+)-棉酚202mg(0.22mmol)溶于2.5ml乙酸乙酯中，加入1滴冰醋酸和1滴浓盐酸，40℃下，搅拌，1小时后，TLC确定反应完全，抽滤，乙酸乙酯洗涤，回收白色不溶物L-色氨酸甲酯盐酸盐89mg，反复水洗母液，至水相PH≈7，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，加入石油醚/乙醚结晶，得黄色粉末(+)-棉酚103mg(产率90.4％，ee值＞99％)。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ(ppm)：11.13(br s，-OH)，7.78(s，2H)，6.43(s，2H)，5.87(s，2H)，3.89(m，2H)，2.15(s，6H)，1.55(d，J＝6.9Hz，12H)。

实施例3

1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺缩(+)-棉酚(1a)的合成

0.1mmol(+)棉酚溶解在甲醇中，向其中加入略过2倍量的1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺(大约0.21m mol)，室温下搅拌，TLC检测，通常0.5-2小时反应完全后，减压蒸干溶剂，1ml乙酸乙酯溶解滴入10ml左右石油醚中重结晶，得到目标化合物1a(95％产率)。¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ1.41(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.86(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.55(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.58(2H，broad m，2x 8’-H)，3.66(4H，m，2x 9’-H)，3.77(2H，d，2x 7’-H)，5.08(2H，s，2x9-OH)，5.16(2H，s，2x 7-OH)，6.24(2H，s，2x 1-OH)，7.37(2H，s，2x 4-H)，7.66(4H，d，J＝8.5Hz，2x 2’，6’-H)，8.15(4H，d，J＝8.5Hz，2x 3’，5’-H)，8.47(2H，s，2x6-OH)，9.52(2H，d，J＝13.0Hz，2x CH-NH)，13.47(2H，dd，J＝13.0，8.0Hz，2xCH-NH).

1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺缩(-)-棉酚(1b)的合成

0.1m mol(-)棉酚溶解在甲醇中，向其中加入略过2倍量的1，3-二羟基-1-对硝基苯基丙胺(大约0.21m mol)，室温下搅拌，TLC检测，通常0.5-2小时反应完全后，减压蒸干溶剂，1ml乙酸乙酯溶解滴入10ml左右石油醚中重结晶，得到目标化合物1b，产率98％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.41(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.78(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.55(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.58(2H，broad m，2x 8’-H)，3.65(4H，m，2x 9’-H)，3.76(2H，d，2x 7’-H)，5.06(2H，s，2x9-OH)，5.16(2H，s，2x 7-OH)，6.23(2H，s，2x 1-OH)，7.34(2H，s，2x 4-H)，7.64(4H，d，J＝8.5Hz，2x 2’，6’-H)，8.14(4H，d，J＝8.5Hz，2x 3’，5’-H)，8.45(2H，s，2x6-OH)，9.48(2H，d，J＝13.0Hz，2x CH-NH)，13.41(2H，dd，J＝13.0，8.0Hz，2xCH-NH).

以下实施例变更胺化合物

实施例4

1-羟基-3-苯基丙胺缩(+)-棉酚(2a)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，产率94％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.41(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.89(6H，s，2x Ar-CH₃)，2.92(2H，m，2x7’-H)，3.02(2H，broad m，2x 8’-H)，3.51(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.67(4H，m，2x 9’-H)，5.25(2H，s，2x 1-OH)，7.16～7.30(10H，m，2x Ar-H)，7.38(2H，s，2x 4-H)，8.35(2H，s，2x 6-OH)，9.87(2H，d，J＝13.0Hz，2x CH-NH)，13.40(2H，broad，2xCH-NH).

1-羟基-3-苯基丙胺缩(-)-棉酚(2b)的合成

制备方法与实施例3(1b)的合成相同，产率99％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.41(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.89(6H，s，2x Ar-CH₃)，2.89(2H，m，2x7’-H)，3.03(2H，broad m，2x 8’-H)，3.53(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.66(4H，m，2x 9’-H)，5.25(2H，s，2x 1-OH)，7.16～7.30(10H，m，2x Ar-H)，7.38(2H，s，2x 4-H)，8.35(2H，s，2x 6-OH)，9.95(2H，d，J＝13.0Hz，2x CH-NH)，13.39(2H，broad，2xCH-NH).

实施例5：

苯乙胺缩(+)-棉酚(3a)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，减压蒸干溶剂，8ml甲苯溶解滴入10ml左右石油醚中重结晶，得到目标化合物3a(67％产率)，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.42(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.93(6H，s，2x Ar-CH₃)，2.96(4H，broadm，2x 7’-H)，3.68(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.77(4H，broad，2x 8’-H)，7.18～7.36(10H，m，2x Ar-H)，7.40(2H，s，2x 4-H)，8.32(2H，s，2x 6-OH)，9.79(2H，d，J＝11.0Hz，2x CH-NH)，13.20(2H，broad，2x CH-NH).

苯乙胺缩(-)-棉酚(3b)的合成

制备方法与实施例5(3a)的合成相同，产率73％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.42(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.95(6H，s，2x Ar-CH₃)，2.96(4H，broadm，2x 7’-H)，3.54(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，3.77(4H，broad，2x 8’-H)，7.18～7.36(10H，m，2x Ar-H)，7.40(2H，s，2x 4-H)，8.32(2H，s，2x 6-OH)，9.95(2H，broad，2x CH-NH)，13.18(2H，broad，2x CH-NH).

实施例6：

3-羟基丙胺缩(+)-棉酚(4a)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，减压蒸干溶剂，直接氯仿中重结晶，得到目标化合物4a(91％产率)，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.43(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.77(4H，broad d，2x 2’-CH₂)，1.93(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.49(4H，broad m，2x 1’-CH₂)，3.57(2H，m，2x(CH₃)₂CH)，3.69(4H，m，2x 3’-CH₂)，4.65(2H，s，2x 1-OH)，7.41(2H，s，2x 4-H)，8.36(2H，s，2x 6-OH)，9.78(2H，d，J＝11.5Hz，2x CH-NH)，13.20(2H，broad d，J＝11.5，2x CH-NH).

3-羟基丙胺缩(-)-棉酚(4b)的合成

制备方法与实施例6(4a)的合成相同，产率98％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ1.42(12H，f，2x(CH₃)₂CH)，1.76(4H，broad d，2x 2’-CH₂)，1.92(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.49(4H，broad m，2x 1’-CH₂)，3.57(2H，m，2x(CH₃)₂CH)，3.69(4H，m，2x 3’-CH₂)，4.65(2H，s，2x 1-OH)，7.41(2H，s，2x 4-H)，8.38(2H，s，2x 6-OH)，9.77(2H，d，J＝11.5Hz，2x CH-NH)，13.20(2H，broad d，J＝11.5，2x CH-NH).

实施例7：

环丙胺缩(+)-棉酚(5a)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，减压蒸干溶剂，10ml甲苯溶解滴入10ml左右石油醚中重结晶，得到目标化合物5a(97％产率)，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)0.83，0.90(8H，broad m，2x 2’，3’-CH₂)，δ1.43(12H，f，J＝7.0Hz，2x(CH₃)₂CH)，1.93(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.33(2H，broad，2x 1’-CH)，3.71(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，7.45(2H，s，2x 4-H)，7.91(2H，s，2x 1-OH)，8.37(2H，s，2x 6-OH)，9.86(2H，d，J＝10.0Hz，2x CH-NH)，13.54(2H，broad d，J＝10.0，2x CH-NH).

环丙胺缩(-)-棉酚(5b)的合成

制备方法与实施例7(5a)的合成相同，产率99％，¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)0.81，0.89(8H，broad m，2x 2’，3’-CH₂)，δ1.43(12H，f，J＝7.0Hz，2x(CH₃)₂CH)，1.93(6H，s，2x Ar-CH₃)，3.31(2H，broad，2x 1’-CH)，3.70(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，7.45(2H，s，2x 4-H)，7.91(2H，s，2x 1-OH)，8.36(2H，s，2x 6-OH)，9.86(2H，d，J＝10.0Hz，2x CH-NH)，13.53(2H，broad d，J＝10.0，2x CH-NH).

实施例8：

对溴苯胺缩(+)-棉酚(6a)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，柱层析得到6a(28％产率)，¹H NMR(500MHz，CDCL₃)δ1.55(12H，f，J＝7.0Hz，2x(CH₃)₂CH)，2.15(6H，s，2xAr-CH₃)，3.74(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，5.75(2H，s，1-OH)，7.29(4H，d，J＝7.5Hz，2x 2’，6’-H)，7.36(4H，d，J＝7.5Hz，2x 3’，5’-H)，7.63(2H，s，2x 4-H)，7.89(2H，s，2x 6-OH)，10.17(2H，d，J＝10.0Hz，2x CH-NH)，14.91(2H，broad d，J＝10.0，2x CH-NH).

对溴苯胺缩(-)-棉酚(6b)的合成

制备方法与实施例3(1a)的合成相同，柱层析得到6b(57％产率)，¹H NMR(500MHz，CDCL₃)δ1.55(12H，f，J＝7.0Hz，2x(CH₃)₂CH)，2.16(6H，s，2xAr-CH₃)，3.74(2H，broad m，2x(CH₃)₂CH)，5.79(2H，s，1-OH)，7.30(4H，d，J＝7.5Hz，2x 2’，6’-H)，7.37(4H，d，J＝7.5Hz，2x 3’，5’-H)，7.63(2H，s，2x 4-H)，7.89(2H，s，2x 6-OH)，10.18(2H，d，J＝11.0Hz，2x CH-NH)，14.90(2H，broad d，J＝11.0，2x CH-NH).

实施例9

配药：

精确称量样品(1mg左右)，按比例加入不同体积DMSO配成同摩尔浓度的溶液(12mmol/L)，各取10μl转移至EP管中，再向其中加入1490μl灭菌后的培养基摇匀配成储备液待用(为实验设计的最大浓度80μmol/L，其他浓度可以按取量不同稀释)。空白对照为含相同浓度DMSO的灭菌后的培养基，配制方法为10μl DMSO转移至EP管中再向其中加入1490μl灭菌后的培养基摇匀配成储备液。

癌细胞的培养和增殖检测：

a)癌细胞在含10％胎牛血清的培养液中，于5％CO₂、37℃的细胞恒温培养箱内贴壁培养，用0.02％EDTA、0.25％胰酶消化传代。

b)选择对数生长期的M85胃癌细胞，消化后用含血清的细胞培养液将细胞浓度调为5～7×10³个/ml左右，加入到96孔细胞培养板中，0.16ml/孔，培养24h。

c)去掉原培养液，然后加入不同浓度的含药血清培养液(每个浓度4个复孔)，以(-)gossypol为阳性对照继续培养48h。

d)弃去含药细胞培养液，加入5mg/mL的MTT溶液20μl培养4h后吸去上清液，加入100μl二甲基亚砜，待沉淀完全溶解后于492nm处测定吸光度值。用t检验进行不同浓度的加药组与对照组之间均值的比较。

结果如下表和附图1～3所示。

测试癌细胞种类：U87，M85，HeLa

dG-阿朴棉酚(-)

Claims

1.一种缩胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚的化合物，其特征在于具有如下的结构式：

缩胺-(+)-棉酚缩胺-(-)-棉酚

其中，R是环丙基、卤素取代的苯基，羟基取代的C₁～C₄烷基、苯基取代的C₁～C₃烷基、R₁取代的C₁～C₃烷基；

所述的R₁为苯基或硝基取代的苯基；但当R₁为苯基时，R不可为苯基取代的异丙基。

2.根据权利要求1所述的缩胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的缩胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚的制备方法，其特征在于在极性有机溶剂中和室温下，(+)或(-)光学活性棉酚分别与分子式为RNH2的伯胺类化合物进行缩合反应0.5～2小时，重结晶或柱层析；所述的R如权利要求1所述；所述的光活棉酚与伯胺类化合物的摩尔比为1∶2～3。

4.根据权利要求3所述的的方法，其特征是所述的极性有机溶剂是醇类溶剂、酮类溶剂或卤代烃类溶剂。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是所述的(+)和(-)棉酚是由(+)或(-)的光活棉酚色氨酸酯缩合物经水解获得：在极性有机溶剂中和室温～50℃，将(+)或(-)的光活棉酚色氨酸酯缩合物在含酸的有机溶剂、含酸的无机溶剂中的一种或它们的混合溶剂中水解0.5-2小时，所述的上述含酸溶剂的加入量是每毫摩尔光活棉酚色氨酸酯缩合物采用25-45ml溶剂；过滤，洗涤，母液反复水洗，无水硫酸钠干燥，重结晶，得到光学纯棉酚产物。

6.根据权利要求5所述的的方法，其特征是所述的光活棉酚色氨酸酯缩合物是L-色氨酸甲酯缩-(-)-棉酚或L-色氨酸甲酯缩-(+)-棉酚；所述的含酸有机溶剂是含酸的酯类溶剂；所述含酸是有机酸、无机溶剂或者以上酸的混合物。

7.根据权利要求6所述的的方法，其特征是所述的混合溶剂是含0.45-1％盐酸的乙酸乙酯液、含0.45-1％盐酸和0.45-1％乙酸的乙酸乙酯液。

8.根据权利要求5所述的的方法，其特征是所述的水解温度为35～40℃。

9.根据权利要求5所述的的方法，其特征是所述的过滤是抽滤，不溶物滤渣是反应回收的不溶物L-色氨基酸甲酯盐酸盐；所述光活棉酚重结晶溶剂为石油醚和乙醚为1∶1～2的混合溶剂。

10.一种根据权利要求1所述的缩胺(+)-棉酚或缩胺(-)-棉酚的化合物用于制备抗癌药物。