CN101300013B

CN101300013B - [4-(6-卤代-7-取代的-2,4-二氧代-1,4-二氢-2h-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基磺酰脲类及与其相关的形式和方法

Info

Publication number: CN101300013B
Application number: CN2006800410635A
Authority: CN
Inventors: 罗伯特·M·史卡伯洛夫; 黄沃林; 穆库德·梅洛崔; 张晓明; 希拉利·坎侬; 克莱·M·葛兰特
Original assignee: Portola Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Portola Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2005-11-03
Filing date: 2006-11-03
Publication date: 2012-11-28
Anticipated expiration: 2026-11-03
Also published as: ES2380814T3; US20070208045A1; EP1951254B1; JP5509406B2; CY1112826T1; EA200801245A1; TWI397529B; BRPI0618210A2; EP2428514A1; ATE540034T1; EP1951254A4; CA2627719A1; US8058284B2; NZ567747A; HK1121051A1; AU2006311795A1; TW200728260A; TW200804356A; KR101423483B1; PT1951254E

Abstract

本发明提供了新型的式(I)所示的磺酰脲类化合物及其可药用的衍生物和多晶型物和非晶形。各种形式的化合物是有效的血小板ADP受体抑制剂，并且可用于各种药物组合物中，并且特别有效用于预防和/或治疗心血管疾病，特别是那些血栓形成相关疾病。本发明还提供了制备这种化合物和各种形式的方法，以及预防或治疗哺乳动物的血栓形成和血栓形成相关病况的方法，包括给用治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐或各种形式的步骤。

Description

[4-(6-卤代-7-取代的-2,4-二氧代-1,4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基磺酰脲类及与其相关的形式和方法

相关申请的交叉参考

本申请要求2005年11月3日提交的美国专利申请60/733,650的优先权，该申请作为参考并入本文。

发明背景

血栓形成并发症是工业化国家死亡的主要原因。这些并发症的例子包括急性心肌梗塞、不稳定型心绞痛、慢性稳定型心绞痛、短暂性脑缺血发作、中风、周围血管病、先兆子痫/惊厥、深部静脉血栓形成、栓塞、弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜(thromboticcytopenic purpura)。血栓形成和再狭窄并发症还发生在介入过程之后，所述介入过程为例如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置和假体的插入，血栓形成和再狭窄并发症还发生在与遗传倾向性或癌有关的凝固性过高状态后。通常认为血小板聚集在这些事件中起决定性作用。血小板，其一般在脉管系统内自由循环，由于破裂的动脉粥样硬化病灶所引起的被干扰血流或由于介入治疗如血管成形术，血小板被活化并聚集形成血栓，导致血管闭塞。血小板活化可由各种试剂引发，所述试剂例如为暴露的内皮下基质分子如胶原蛋白，或者可由在凝固级联中形成的凝血酶引发。

血小板活化和聚集的重要递质是ADP(腺苷-5′-二磷酸)，其通过各种试剂如胶原蛋白和凝血酶活化，从脉管系统内的血小板中释放，并且从损伤的血细胞、内皮或组织中释放。由ADP引发的活化导致更多的血小板募集和现有血小板聚集物的稳定化。介导聚集的血小板ADP受体被ADP及其一些衍生物活化，并且被ATP(腺苷-5′-三磷酸)及其一些衍生物拮抗。(Mlls，D.C.B.(1996)Thrornb.Hemost.76：835-856)。因此，血小板ADP受体是由嘌呤和/或嘧啶核苷酸活化的P2受体家族的成员(King，B.F.，Townsend-Nicholson，A.&Burnstock，G.(1998)TrendsPharmacol.ScL 19：506-514)。

新近的使用选择性拮抗剂的药理学数据显示了ADP依赖性血小板聚集需要活化至少两种ADP受体(Kunapuli，S.P.(1998)，TrendsPharmacol Sci 19：391-394；Kunapuli，S.P.&Daniel，J.L.(1998)Biochem.J.336：513-523；Jantzen，H.M.et al.(1999)Thromb.Hemost.57：111-117)。一种受体似乎与克隆分P2Y₁受体相同，介导磷脂酶C活化和胞内钙移动并且是血小板形状改变所需要的。对于聚集具有重要作用的第二种血小板ADP受体介导腺苷酸环化酶的抑制。基于其药理学性质和信号转导性质，该受体已被暂时称作P2Y_ADP(Fredholm，B.B.et al.(1997)TIPS 18：79-82)、P2T_AC(Kunapuli，S.P.(1998)，TrendsPharmacol.Sci 19：391-394)或P2Y_cyc(Hechier，B.et al(1998)Blood 92，152-159)。最近，该受体的分子克隆(Hollopeter，G.et al.(2001)Nature409：202-207)已经揭示了其是G蛋白偶联家族的新成员并且是噻吩并吡啶类药物噻氯匹定和氯吡格雷的靶标。给予该受体的命名是P2Y₁₂。

已经报道了各种对ADP依赖性血小板聚集具有抗血栓形成活性的直接或间接起作用的合成抑制剂。口服活性的抗血栓形成药噻吩并吡啶类药物噻氯匹定和氯吡格雷，可能是通过形成不稳定的和不可逆的作用代谢物，间接地抑制ADP诱导的血小板聚集，放射性标记的ADP受体激动剂2-甲硫腺苷-5′-二磷酸与血小板的结合，和其它ADP依赖性事件(Quinn，M.J.&Fitzgerald，D.J.(1999)Circulation 100：1667-1667)。内源性拮抗剂ATP的一些嘌呤衍生物如AR-C(以前是FPL或ARL)、67085MX和AR-C69931Mx，是选择性的血小板ADP受体拮抗剂，其抑制ADP依赖性血小板聚集并且在动物血栓形成模型中是有效的(Humphries et al.(1995)，Trends Pharmacol.Sci.16，179；Ingall，A.H.etal.(1999)J.Med.Chem.42，213-230)。已经公开了新型的三唑并[4，5-d] 嘧啶化合物作为P_2T-拮抗剂(WO 99/05144)。已经在WO 99/36425中公开了三环化合物作为血小板ADP受体抑制剂。这些抗血栓形成化合物的靶标似乎是P₂Y₁₂，即，一种介导腺苷酸环化酶受抑制的血小板ADP受体。

尽管存在这些化合物，仍然需要更有效的血小板ADP受体抑制剂。特别是，需要具有抗血栓形成活性的血小板ADP受体抑制剂，其可用于预防和/或治疗心血管疾病，特别是血栓形成相关疾病。

另外，尽管生物活性是有效药物的必要条件，但是化合物必须能够被大规模制备并且化合物的物理性质可以显著影响配制的活性成分的有效性和成本。酸性和碱性化合物的盐可以改变或改善母体化合物的物理性质。然而，这些用于形成盐的试剂必须由药物化学家凭经验进行确定，因为没有可靠的方法预测盐物质对剂型中母体化合物行为的影响。令人遗憾的是缺乏可简化筛选过程的有效筛选技术(G.W.Radebaugh和L.J.Ravin Preformulation.In，Remington：The Science andPractice of Pharmacy；A.R.Gennaro Ed.；Mack Publishing Co.Easton，Pa.，1995；pp 1456-1457)。

在一些药学可用的化合物中经常遇到非晶形和不同的结晶固体/多晶型物形式的盐。多晶型性是任何元素或化合物能够结晶形成超过一种独特结晶物质的能力。对于相同化合物的不同形式来说，包括溶解度、熔点/最大吸热、密度、硬度、结晶形状和稳定性的物理性质差别很大。

结晶固体和非晶形可通过散射技术如X射线衍射粉末图案，光谱法如红外光谱法、固体¹³C和¹⁹F核磁共振谱法，以及热分析技术如差示扫描量热法或差示热分析法进行表征。尽管不同批次化合物的X射线粉末衍射图案中的峰强度可以略微改变，但是峰和峰位置对于具体的结晶固体或非晶形而言是特征性的。另外，红外光谱法、拉曼光谱法和热分析法已经用于分析和表征结晶和固体非晶形。固体和非晶形可用得自X射线粉末衍射图案的数据进行表征，所述数据根据本领域已知过程进行测定(参见J.Haleblian，J.Pharm.Sci.1975 64：1269-1288，J.Haleblain和W.McCrone，J.Pharm.Sci.1969 58：911-929)。尽管不同批次化合物的X射线粉末衍射图案中的峰强度可以略微改变，但是峰和峰位置对于具体结晶固体形式而言是特征性的。

必须解决的问题是确定适当的盐和形式，其(i)在生产过程中具有足够的化学稳定性，(ii)可有效地进行制备、纯化和回收，(ii)在可药用溶剂中提供可接受的溶解度，(iii)经得起操作(如流动性和粒径)和配制过程，只发生很少的分解或化合物物理和化学特性的改变，(iv)在制剂中表现出可接受的化学稳定性。另外，含有高摩尔百分比的活性成分的盐和各种形式是非常希望的，因为它们使得进行配制和给予以得到治疗有效剂量的物质所必须的量最小化。这些通常是相互冲突的要求使得鉴定适当的盐成为药物科学家在药物开发可真正进行之前必须要解决的具挑战性和重要性的问题。

因此，需要本发明的化合物，和这些化合物的盐、非晶形和结晶固体形式，和用于制备所述化合物、所述化合物的盐和结晶固体形式的有效方法。在化合物能够有效用于常规性治疗血栓形成之前需要解决这些难题和缺陷。

多芳基化合物通常是高度结晶的、水溶性差并且是疏水性的，导致很难制备药物制剂，并产生与生物利用度有关的问题。因此，进行了各种努力以发现本发明化合物的其它形式并对其各种性质进行了研究。发现了本发明化合物的盐的结晶固体形式。本发明通过提供多晶型物以及治疗和预防血栓形成的方法(同时表现更好的副作用特性)满足了上述需要。

发明概述

在一个方面，本发明提供了下式(I)所示的化合物：

其中：

R¹选自：H、卤素、-OH、-C_1-10-烷基和C_1-6-烷基氨基；和

X选自：F和I。

本发明还包括式(I)化合物的所有的可药用衍生物。

在另一方面，本发明提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的钾盐和钠盐的结晶固体和非晶形。

在另一方面，本发明提供了用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成和血栓形成相关病况的药物组合物。该组合物含有治疗有效量的一种或多种式(I)化合物或其可药用盐以及可药用的载体或赋形剂。本发明另外提供了通过给予治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成和血栓形成相关病况的方法。

在另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物、它们的结晶固体和非晶形以及用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成和血栓形成相关病况的药物组合物的方法。

附图说明

图1提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐和/或钠盐的结构式。

图2a表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的X射线粉末衍射(XRPD)。图2b表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的XRPD，显示有峰形成。

图3a表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶固体B形的XRPD。图3b表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶固体B形的XRPD，显示有峰形成。

图4表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的XRPD。

图5表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)。

图6表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体B形的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)。

图7表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的FT-IR。

图8表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的 ¹H-NMR。

图9表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶固体B形的¹H-NMR。

图10表示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的¹H-NMR。

图11提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的重量分析蒸气吸附(GVS)数据。

图12a提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体B形的重量分析蒸气吸附(GVS)数据。该样品在完成GVS实验后被回收并用XRPD再检测。结果(图12b)显示了在GVS实验过程中没有发生相变。在约5.4°2θ处的峰强度的改变是优选的取向作用。

图13提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的重量分析蒸气吸附(GVS)数据。

图14提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的差示扫描量热法(DSC)数据。

图15提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物的结晶固体A形的TGA数据。

图16提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶固体B形的DSC数据。

图17提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶固体B形的TGA数据。

图18提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的DSC数据。

图19提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐的非晶形的TGA数据。

发明详述

本发明包括磺酰脲类化合物及其衍生物，和它们的结晶固体和非晶形，以及它们的制备。[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的钾盐具有优异的结晶性、稳定性和纯度。本发明的化合物可用于治疗和预防哺乳动物的不希望的血栓形成和血栓形成相关病况。

定义

根据本发明并且如本文使用的以下术语具有以下定义的含义，除非明确指出不具有这些含义。

本文使用的术语“一”或“一种”实体是指一种或多种该实体；例如，一化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一”、“一种或多种”和“至少一种”在本文中可以互换使用。

本文使用的术语“约”是指从不同的仪器、样品和样品制剂得到的测量结果中可见的偏差。这些偏差可包括例如热测量法的依数性质。在用于结晶固体形式的不同X射线衍射仪和样品制剂中的典型偏差为约0.2°2θ。拉曼分光光度计和IR分光光度计的典型偏差是分光光度计分辨率的约两倍。使用的分光光度计的分辨率为约2cm^-1。

本文使用的术语“溶剂合物”是指当根据本发明制备时，本发明的化合物或其盐另外包括通过非共价的分子间力结合的化学计量的或非化学计量的、大于约0.3％量的溶剂。

本文使用的术语“水合物”是指本发明的化合物或其盐另外包括通过非共价的分子间力结合的化学计量的或非化学计量的量的水。通过一个或多个水分子与其中水以其分子状态H₂O保持的物质之一的组合形成水合物，这种组合能形成一种或多种水合物。

本文使用的“无水的”是指当根据本发明制备时，本发明的化合物或其盐含有低于约3wt％的水或溶剂。

本文使用的术语“干燥”是指，除非另作说明，从本发明的化合物除去溶剂和/或水的方法可在大气压力下或减压下并且在有或没有加热的条件下进行，直到溶剂和/或水的含量达到可接受的程度。

本文使用的术语“多晶型物”是指其中化合物可以以不同的结晶堆积排列方式结晶的晶体结构，所有这些都具有相同的元素组成。不同的结晶形式通常具有不同的X射线衍射图案、红外光谱、熔点/最大吸热、密度、硬度、晶形、光学性质和电性质、稳定性和溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度和其它因素可引起一种晶形占主导。

本文使用的术语“固体形式”是指其中化合物可以以不同的结晶堆积排列方式结晶的晶体结构。固体形式包括如本发明使用的术语中所述的多晶型物、水合物和溶剂合物。同一化合物的不同固体形式，包括不同的多晶型物，具有不同的X射线粉末衍射图案和不同的光谱，包括红外光谱、拉曼光谱、固体NMR光谱。它们的光学性质、电性质、稳定性和溶解度也可有差别。

本文使用的术语“表征”是指从诸如X射线粉末衍射、红外光谱、喇曼光谱、和/或固体NMR的分析测量数据中选择数据以使化合物的一种固体形式与化合物的其它固体形式区别开来。

术语“哺乳动物”包括但不限于人、家畜(例如狗或猫)、农畜(牛、马或猪)、猴子、兔、小鼠和实验动物。

术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子，或者如果没有指定数目，则含有最多约12个碳原子的直链和支链的饱和脂族基。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。

术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)以其常规含义被使用，并且是指所述烷基分别通过氧原子、氨基或硫原子与分子的其余部分连接。为了简便起见，术语C_1-6烷基氨基包括直链、支链或环状的烷基或其组合，如甲基、乙基、2-甲基丙基、环丁基和环丙基甲基。

本文使用的术语“C₁-C₆烷基氨基”或“C_1-6烷基氨基”是指氨基部分与分子的其余部分连接，从而氮被一个或两个如上定义的C_1-6烷基取代基取代。

术语“卤基”或“卤素”自身或者作为另一取代基的一部分，除非另有说明，否则是指氟、氯、溴或碘原子。另外，术语如“卤代烷基”包括一卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“C_1-4卤代烷基”包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。

术语“可药用的衍生物”包括，根据本文所述化合物上的特定取代基而定，与相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明的化合物含有相对酸性的官能度时，可通过使这些中性形式的化合物与足够量的所需碱在无溶剂或在适当的惰性溶剂中接触获得碱加成盐。可药用的碱加成盐的例子包括得自无机碱的盐，如钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。特别优选钾盐和钠盐。得自可药用的无毒有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代胺类的盐，包括天然存在的取代胺、环胺和阳离子交换树脂的盐，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、氨丁三醇(trimethamine)、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺、胆碱、甜菜碱、乙二胺、氨基葡萄糖、葡甲胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等的盐。特别优选的无毒有机碱是异丙胺、二乙胺、乙醇胺、氨丁三醇、二环己基胺、胆碱和咖啡因。当本发明的化合物含有相对碱性的官能度时，可通过使这些中性形式的化合物与足够量的所需酸在无溶剂或在适当的惰性溶剂中接触获得酸加成盐。可药用酸加成盐的例子包括得自无机酸的盐，所述无机酸为例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢盐(monohydrogen carbonic acid)、磷酸、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、硫酸、硫酸一氢盐、氢碘酸、或亚磷酸等，以及得自相对无毒的有机酸的盐，所述相对无毒的有机酸为例如醋酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、枸橼酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括氨基酸的盐如精氨酸盐等，有机酸的盐如葡醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric acid)等的盐(例如参见Berge，S.M.，et al，″Pharmaceutical Salts″，Journal of PharmaceuticalScience，1977，66，1-19；Bundgaard，H.，ed.，Design of Prodrugs(ElsevierScience Publishers，Amsterdam 1985))。本发明的某些特定化合物即含有碱性官能度又含有酸性官能度，使得该化合物可被转化为碱加成盐或酸加成盐。

可通过使盐接触碱或酸并以常规方式分离母体化合物使中性形式的化合物再生。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性方面不同，但是在别的方面，对于本发明的目的而言，所述盐与母体形式的化合物是等价的。

除了盐形式之外，术语“可药用的衍生物”包括前药形式的化合物。本文所述的化合物的“前药”是在生理条件下可容易地经历化学变化从而提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可通过在回体(exvivo)环境中的化学方法或生化方法变为本发明的化合物。例如，当将前药置于含适当的酶或者化学试剂的透皮贴片储库中时，前药可以慢慢地转化为本发明的化合物。(参见Bundgaard，H.，ed.，Design ofProdrugs(Elsevier Science Publishers，Amsterdam 1985))。

“可药用的酯”是指这样的酯，当酯键水解时这些酯保留羧酸或醇的生物有效性和性质并且在生物学上或其方面符合要求。对于作为前药的可药用酯的描述参见上述的Bundgaard H.。这些酯通常由相应的羧酸和醇形成。通常，可通过常规的合成技术形成酯。(参见例如，MarchAdvanced Organic Chemistry，3rd Ed.，p.1157(John Wiley&Sons，NewYork 1985)和其中所引用的参考文献，和Mark等人的Encyclopedia ofChemical Technology，(1980)John Wiley&Sons，New York)。酯中的醇组分通常会包括：(i)C₂-C₁₂脂族醇，其可含有或不含有一个或多个双键并且可含有或不含有支链碳；或者(ii)C₇-C₁₂芳族醇或杂芳族醇。本发明还考虑了使用那些即作为本文所述的酯同时还作为其可药用的酸加成盐的组合物。

“可药用的酰胺”是指这样的酰胺，当酰胺键水解时这些酰胺保留羧酸或胺的生物有效性和性质并且在生物学上或其方面符合要求。对于作为前药的可药用酰胺的描述参见上述的Bundgaard H.。这些酰胺通常由相应的羧酸和胺形成。通常，通过常规的合成技术形成酰胺。例如参见，March et al.，Advanced Organic Chemistry，3rd Ed.，p.1152(John Wiley&Sons，New York 1985)，和Mark等人的Encyclopedia ofChemical Technology，(John Wiley&Sons，New York 1980)。本发明还考虑了使用那些即作为本文所述的酰胺同时还作为其可药用的酸加成盐的组合物。

术语“可药用的衍生物”还包括可以非溶剂合物形式以及溶剂合物形式(包括水合物形式)存在的本发明的化合物。通常，溶剂合物形式与非溶剂合物形式是等价的，并且意在被包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以多结晶形或非晶形存在。通常，所有的物理形式对于本发明所考虑的用途是等价的并且意在被包括在本发明的范围内。

本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；消旋物、非对映体、几何异构体和单独的异构体(例如单独的对映体)，其全部都被包括在本发明的范围内。

本发明的化合物还可在构成该化合物的一个或多个原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，化合物可用放射性同位素诸如例如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳14(¹⁴C)进行放射性标记。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，都意在被包括在本发明的范围内。

对于本文目的，“生物学性质”是指由本发明化合物直接或间接实现的体内效应器或抗原的功能或活性，其通常由体外试验显示。效应器功能包括受体或配体结合，任何酶活性或酶调节活性，任何载体结合活性，任何激素活性，在促进或抑制细胞与细胞外基质或细胞表面分子粘着中的任何活性，或任何的结构作用。抗原功能包括拥有能够与增加的针对性抗体反应的表位或抗原部位。

本文中使用的术语“预防”是指预防性治疗有需要的患者。预防性治疗可以通过对处在罹患疾病危险下的主体提供适当剂量的治疗剂来实现，从而实质上防止疾病的发作。

本文中使用的术语“治疗”是指对罹患疾病的主体提供适当剂量的治疗剂。

本文使用的术语“治疗有效量”是指治疗剂的足够实现对罹患疾病的主体进行治疗的量。

本文中使用的术语“病况”是指使用的本发明的化合物、组合物和方法所针对的疾病状态。

本文中使用的术语“ADP介导的疾病或病况”等是指以低于或高于标准的ADP活性为特征的疾病或者病况。ADP介导的疾病或病况是指其中ADP的调节对某些基础病况或疾病产生某些影响的疾病或病况(例如，ADP抑制剂或拮抗剂在至少一些患者中给患者保持良好状态带来改善)。

本文中使用的术语“血液样品”是指采自主体的全血，或包括血浆或血清的血液级份。

在本发明的化合物中，与四个不相同的取代基结合的碳原子是不对称的。因此，化合物可以其非对映体、对映体或混合物的形式存在。本文所述的合成可使用消旋物、对映体或非对映体作为起始原料或中间体。得自上述合成的非对映体产物可通过色谱法或结晶法分离，或通过本领域已知的其它方法分离。同样地，可使用相同的技术或通过本领域已知的其它方法分离对映体产物的混合物。每一个不对称碳原子，当其存在于本发明的化合物中时，可有一种或两种构型(R或S型)，二者都包括在本发明的范围内。

本发明的化合物方案

下面的式(I)化合物表示本发明的一个方案：

X选自：F和I；

R¹选自：H、卤素、-OH、-C_1-10-烷基和C_1-6-烷基氨基。

本发明还包括式I化合物的所有的可药用的衍生物。可使用至少一种无机碱或有机碱制备可药用盐，所述碱包括但不限于氢化钾、氢氧化钾、醇钾、氢化钠、氢氧化钠、醇钠等。

在上面的描述中存在许多优选的方案。在一组优选方案中，R¹是C_1-10-烷基或C_1-6-烷基氨基。

在另一组优选方案中，R¹是C_1-6-烷基氨基。在另一组优选方案中，X是F。

许多具体化合物是式I化合物的最优选方案，并且在图1中提供，其还在下面表示。

在本发明的一个优选方案中，式(I)化合物包括下式的化合物：

另一组本发明的特别优选的化合物具有下式：

和/或

本发明化合物的制备

路线1说明了制备其中Ar是亚苯基并且R¹和X¹的定义如上所述的某些式I化合物的方法。

路线1

式I化合物的制备可如下进行：通过本领域技术人员已知过程将2-硝基-苯甲酸甲酯化合物1还原得到苯胺2。(还参见公开的专利申请US 2002/077486)。例如，可通过氢化进行硝基还原方法。使用适当的催化剂(例如10％Pd/C或Pt(s)/C)，在氢气下，在适当的溶剂中(通常在醇中，优选在乙醇中)，在室温下进行氢化。使用适当取代的异氰酸芳基酯处理化合物2(方法A)得到中间体脲3a。或者，可通过使用三光气，在碱如三乙胺或二异丙基乙胺存在的条件下，在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和MeCN中，在适当的温度下，优选在20℃下，处理化合物2，随后用取代的苯胺处理，形成脲3a(方法B)。由方法A或方法B制备的脲3a通常不经历进一步纯化，可经历热或碱(例如N-甲基吗啉(NMM)或聚苯乙烯-NMM(PS-NMM)诱导的关环，得到喹唑啉二酮4a。化合物4a的硝基可通过本领域技术人员已知过程被还原，得到游离的氨基。例如，可通过氢化，使用适当的催化剂(例如10％的炭载钯)，在适当的溶剂中(通常在醇中)进行还原方法。可通过用取代的噻吩-2-磺酰胺、N，N′-二琥珀酰亚胺基碳酸酯和四甲基胍在二氯甲烷中的预混合溶液处理还原产物苯胺5a，然后用TFA在二氯甲烷中在室温下处理而形成磺酰脲连接，得到式I的磺酰脲。或者，可通过在适当的溶剂中使苯胺5a和5-氯-噻吩-2-磺酰基乙基氨基甲酸酯反应形成磺酰脲连接，所述溶剂包括但不限于甲苯、乙腈、1，4-二氧杂环己烷和DMSO。

路线2说明了另一种可供选择的制备其中R¹为例如烷基氨基且L¹为卤素、烷基磺酸酯、卤代烷基磺酸酯和芳基磺酸酯的式I化合物的方法。

路线2

可通过用三光气或对硝基苯基氯甲酸酯，在碱如三乙胺和/或二异丙基乙胺存在的条件下，在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和/或MeCN中，在适当的温度下，通常在约20℃，处理化合物2，然后用被适当保护的苯胺处理，制备脲3b(方法B)。脲3b，通常无需进一步纯化，可以经历碱诱导的关环，以提供中间体喹唑啉二酮4b。化合物4b的保护基可使用对于所用保护基是适合的标准技术被除去。例如，BOC保护基可通过用4N HCl在二氧杂环己烷中处理化合物4b而被除去。然后，化合物5b的C-7氟通过用甲胺在DMSO中在约120℃下处理被置换，得到苯胺6a。目标化合物磺酰脲7a的制备可通过用5-氯-噻吩-2-磺酰基-乙基氨基甲酸酯，在适当的溶剂如二甲亚砜、二氧杂环己烷和/或乙腈中，在加热下处理苯胺6a得以实现。

路线3说明另一种可供选择的制备其中R¹是例如烷基氨基且L¹ 是卤素、烷基磺酸酯、卤代烷基磺酸酯和芳基磺酸酯，且M是K的式I化合物的方法。

路线3

可通过用对硝基苯基氯甲酸酯，在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和/ 或MeCN中，在适当的温度下，通常在约20℃下，处理化合物2，然后使用被适当保护的苯胺处理，制备脲3a(方法B)。根据本发明，式(I)化合物可被进一步处理，以形成可药用盐，例如7a。使用酸或碱处理本发明的化合物可分别形成可药用的酸加成盐和可药用的碱加成盐，其各自的定义如上所述。可使用本领域已知的各种无机的和有机的酸和碱，包括本文定义的那些，来实现向盐的转化。

式(I)化合物可使用本领域已知的典型的分离和纯化技术包括例如色谱法和重结晶法进行分离。

在本发明的式(I)化合物中，R¹的与四个不相同的取代基结合的碳原子是不对称的。因此，式(I)的化合物可以其对映体、非对映体或混合物的形式存在。对映体和非对映体可通过色谱法或结晶法分离，或通过本领域已知的其它方法分离。当不对称碳原子存在于本发明的式(I)化合物中时，可有一种或两种构型(R或S型)，二者都包括在本发明的范围内。在最终的纯化产物中存在少量的相反对映体或非对映体对该化合物的治疗或诊断应用没有影响。

根据本发明，式(I)化合物可被进一步处理，以形成可药用盐。使用酸或碱处理本发明的化合物可分别形成可药用的酸加成盐和可药用的碱加成盐，其各自的定义如上所述。可使用本领域已知的各种无机的和有机的酸和碱，包括本文定义的那些，来实现向盐的转化。

本发明还提供式(I)化合物的可药用的异构体、水合物和溶剂合物。式(I)化合物还可以各种异构体形式或互变异构体形式存在，包括这种异构体和互变异构体的可药用的盐、水合物和溶剂合物。例如，虽然本文提供的一些化合物是每分子式(I)化合物具有两个水分子的二水合物，本发明还提供了无水形式、一水合物、三水合物、倍半水合物等形式的化合物。

本发明还包括式(I)化合物的可药用的前药。术语“前药”是指母体药物分子的药理学非活性衍生物，其在生物体内需要生物转化，通过自发方式或酶促方式进行，从而释放活性药物。前药是本发明的式(I)化合物的变体或衍生物，其具有可在代谢条件下裂解的基团。前药当在生理条件下经历溶剂分解或者经历酶催降解时变成在体内具有可药用活性的本发明的化合物。本发明的前药化合物可被叫做单一、双、三前药化合物等，根据在生物体内释放活性药物所需的生物转化步骤数目而定，并且表明在前体类型形式中存在的官能度数目。前药形式通常提供在哺乳动物生物体内的溶解性、组织相容性或者延迟释放优点(Bundgard，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam(1985)；Silverman，The Organic Chemistry of Drug Design and DrugAction，pp.352-401，Academic Press，San Diego，Calif.(1992))。本领域通常已知的前药包括本领域技术人员熟知的酸衍生物，诸如例如由母体酸与适当的醇反应制备的酯，或由母体酸化合物与胺反应制备的酰胺，或反应形成酰化的碱衍生物的碱性基团。另外，本发明的前药衍生物可与本文教导的其它特点结合以提高生物利用率。

本发明的结晶固体和非晶形方案及其制备

本发明还提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的结晶固体和/或非晶形，及其制备方法，以及包含这些形式的药物组合物，钾盐由以下通式表示：

钠盐由以下通式表示：

在开发活性药物成分(API)的制备方法中，两个因素非常重要：化合物的杂质分布和晶体形态学。得自最初分离和结晶操作的结果显示了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的99.6％的特性。优选API的杂质含量低于0.2％，并且处在热力学最稳定的结晶固体形式。分离和结晶操作显示有至少两种结晶固体形式，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的钾盐(命名为A形和B形)和[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲的钠盐的非晶形。

本发明的固体形式可通过若干技术，包括X射线粉末衍射法、拉曼光谱法、红外光谱法和热分析法中的一种或多种进行描述。另外，可使用这些技术的组合来描述本发明。例如，可使用一个或多个X射线粉末衍射峰并结合一个或多个拉曼峰来描述本发明的一个或多个固体形式在某方面与其它固体形式的区别。

尽管整个衍射图案或光谱表征了形式，但是不必需仅仅依赖整个衍射图案或光谱来表征固体形式。药学领域的普通技术人员可理解可使用衍射图案或光谱的一部分来表征固体形式，条件是该一部分可使被表征的固体形式与其它形式区别开来。因此，可单独使用一个或多个X射线粉末衍射峰来表征固体形式。同样地，可单独使用一个或多个IR峰或单独使用一个或多个拉曼峰来表征固体形式。这些特征可通过比较各形式之间的X射线数据、拉曼数据和IR数据以确定特征峰来进行。

人们还可在这种表征中合并得自其它技术的数据。因此，可以依赖得自X射线粉末衍射的一个或多个峰和例如拉曼数据或IR数据来表征一种形式。例如，如果一个或多个X射线峰表征了一种形式，人们还可考虑用拉曼或者IR数据来表征该形式。有时，例如在药物制剂中，使用拉曼数据是有帮助的。

多晶型物通过使用两种不同的结晶条件进行识别：(1)在粗品湿饼从甲醇结晶并干燥粗品湿饼以除去溶剂后分离A晶形，和(2)从EtOH/H₂O结晶或与甲醇研磨形成结晶固体B形。

将钾盐悬浮在甲醇中，然后加热直到观察到透明溶液。之后冷却，得到的结晶固体被分离并在室温下减压干燥，得到形态学不同的结晶固体钾盐/A形。图14和2分别表示结晶固体的DSC扫描图和X射线粉末图案。[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的A形的差示扫描量热法(DSC)定义了去溶剂化物(desolvate)在238℃熔融。记录了较大的分解峰，开始温度为约300℃，在DSC扫描图中，在约246℃处迅速完成熔融是特征性的。

在X射线粉末衍射图案中，在约9.5°2θ和25.5°2θ处的峰是该图案的主要特征(对X射线粉末衍射图案理论的讨论参见″X-raydiffraction procedures″，H.P.Klug和L.E.Alexander，J.Wiley，NewYork(1974))。在约9.5°2θ和25.5°2θ处的峰表征了A形，因为B形在A形两个峰的0.2°2θ内没有峰，0.2°2θ是X射线粉末衍射峰的近似精确度的两倍。由于任何特定的X射线粉末衍射图案中的峰的典型偏差为约0.2°2θ，所以当选择峰来表征多晶型物时，必需选择至少两倍于得自另一多晶型物的峰的值(亦即0.4°θ)的峰。因此，在一个具体的多晶型物X射线图案中，与另一种多晶型物中的峰相差至少0.4°θ的峰可被认为单独或与另外的峰一起用于表征该多晶型物。表1和2确定了A形和B形的主要的峰。从列表可看出，在约25.5°2θ(在表中为25.478°2θ)处的峰，当取一个小数点时，与B形中的任何峰的距离大于0.2°2θ。因此，在约25.5°2θ处的峰可用于区分A形和B形。在约9.5°2θ(在表1中为9.522°2θ)的峰是图2的A形X射线粉末衍射图案中的最强峰，并且与B形中的任何峰相距大于0.2°2θ。因此，在约9.5°2θ和25.5°2θ处的A形的峰将A形与B形区分开。在该过程的这一阶段分离的固体形式含有相对于一分子盐为约2个水分子。

表1钾盐A形的XRPD峰(°2θ)和强度％列表数据，从图2b概括得出。

强度(％) 角(°2-θ) d值

100.0 9.522 9.28049

35.0 25.478 3.49317

24.2 28.764 3.10110

22.5 27.175 3.27877

20.1 19.090 4.64529

15.2 22.977 3.86744

14.4 24.630 3.61155

13.8 23.987 3.70680

12.3 15.530 5.70104

12.3 18.518 4.78751

12.1 18.146 4.88482

9.5 16.223 5.45912

8.9 13.219 6.69229

8.7 21.040 4.21883

6.8 16.929 5.23304

5.6 4.822 18.31110

表2钾盐B形的XRPD峰(°2θ)和强度％列表数据，从图3b概括得出。

强度(％) 角(°2-θ) d值

100.0 25.087 3.54667

70.4 20.328 4.36505

63.9 24.442 3.63878

52.9 5.339 16.53922

50.9 19.594 4.52687

34.7 26.155 3.40428

30.6 17.37 5.10115

28.6 21.373 4.15387

28.1 14.526 6.09284

27.6 22.53 3.94319

26.5 9.921 8.90794

26.5 21.729 4.08664

24.9 13.569 6.52011

23.6 15.346 5.76906

22.9 29.478 3.02760

优选取向可以影响XRPD图案中的峰强度，但是不影响峰位置。在钾盐的情况下，优选取向对较低角区域的影响最大。优选取向使该区域内的一些峰减弱(或增强)。晶体习性没有明显地与固体形式区分开；已经观察了各种形式，包括针状、刀片形、片形、和不规则形状粒子的各种习性。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了被称作A形和B形的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供以下的至少之一：

(i)实质上根据图5的红外光谱；

(ii)实质上根据图2的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图14的DSC扫描图；

该结晶固体形式在本文中被称作A形。

在另外的实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供以下的至少之一：

(i)包括在约3559、3389、3324、1698、1623、1563、1510、1448、1431、1403、1383、1308、1269、1206、1174、1123、1091、1072、1030、987、939、909、871、842、787、780、769、747、718、701、690和667cm^-1处的吸收峰的红外光谱；

(ii)包括在约9.5°2θ和约25.5°2θ处的峰的X射线粉末衍射图案；和

(iii)在约246℃处的DSC最大吸热峰；

该结晶固体形式在本文中被称作A形。

在另外的实施方案，本发明提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶多晶型物，其提供了包括在约3559、3389、3324、1698、1623、1563、1510、1448、1431、1403、1383、1308、1269、1206、1174、1123、1091、1072、1030、987、939、909、871、842、787、780、769、747、718、701、690和667cm^-1处的吸收峰的红外光谱；该结晶多晶型物在本文中被称作A形。

在另外的实施方案，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供了包括在约9.5°2θ和约25.5°2θ处的峰的X射线粉末衍射图案，该结晶固体形式在本文中被称作A形。

在另外的实施方案，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供了在约246℃处的DSC最大吸热峰；该结晶固体形式在本文中被称作A形。

在另外的实施方案，本发明提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶多晶型物，其提供了包含至少一个上表所列峰但是少于上表所列峰的光谱，该结晶多晶型物在本文中被称作A形。

图16和3分别表示另一种结晶固体的DSC扫描图和X射线粉末图案。当除去残余的水后观察到这些结果。在DSC扫描图中，在约293℃处的跃迁是显著的，因为A形在246℃熔融。在X射线粉末衍射图案中的约20.3°2θ和25.1°2θ处的峰也使B形和A形区分开，因为A形没有峰在B形的这两个特征峰的0.2°2θ范围内，0.2°2θ是X射线粉末衍射峰的近似精确度(参见表1和2)。从列表可见，在约20.3°2θ和25.1°2θ处的峰(在表2中分别为20.328°2θ和25.087°2θ)，当取一个小数点时，与A形的任何峰相距大于0.2°2θ。

因此，在约20.3°2θ和25.1°2θ处的峰可用于将B形与A形区分开。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-噻吩-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供以下的至少之一：

(i)实质上根据图6的红外光谱；

(ii)实质上根据图3的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图16的DSC扫描图；该结晶固体形式在本文中被称作B形。

在另外的实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其提供了：(i)包括在约3584、3327、3189、2935、2257、2067、1979、1903、1703、1654、1630、1590、1557、1512、1444、1429、1406、1375、1317、1346、1317、1288、1276、1243、1217、1182、1133、1182、1133、1093、1072、1033、987、943、907、883、845、831、805、776、727、694和674cm^-1处的吸收峰的红外光谱；(ii)包括在约20.3°2θ和约25.1°2θ处的峰的X射线粉末衍射图案；和(iii)在约293℃处的DSC最大吸热峰；该结晶固体形式在本文中被称作B形。

在另外的实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，包括实质上纯的形式，其中该化合物提供了包括在约20.3°2θ和25.1°2θ处的峰的X射线粉末衍射图案；该结晶固体形式在本文中被称作B形。

在另外的实施方案中，本发明提供了非晶形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-磺酰脲钠盐。

在一个实施方案中，本发明提供了一种形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-磺酰脲钠盐，其提供了以下的至少之一：

(i)实质上根据图7的在矿物油分散液中进行的红外光谱；

(ii)实质上根据图4的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图18的DSC扫描图；该形式在本文中被称作非晶形。

在另外的实施方案中，本发明提供了一种形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐，其提供了包括在约3560、1711、1632、1556、1512、1445、1407、1375、1309、1280、1227、1133、1092、1032、987、905、781、770和691cm^-1处的吸收峰的红外光谱；该形式在本文中被称作非晶形。

在另外的实施方案，本发明提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲盐的结晶多晶型物，其提供了包含至少一个上述的用于指定形式的所列峰但是少于上述的用于指定形式的所列峰的光谱。

[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐的结晶A形是二水合物，其在25℃和15％相对湿度(RH)下是稳定的，但是在25℃和20％RH下再水合。已经发现钾盐的多晶型物A与钠盐的非晶形的稳定性相等。在高温(40℃)和高的相对湿度(75％RH)的加速稳定性试验中一周后，观察到任一种盐形式的化学纯度没有改变。钾盐结晶A形的优点是其比钠盐的非晶形具有较少的吸湿性，钠盐在40％RH下吸收15％w/w的水。A形和B形都是稳定的。钾盐的B形是无水的和不吸湿的(很难形成脱水合物形式)。钾盐的B形在较长时段后仍保持更好的物理外观和操作性质。药物剂型的物理外观的改善了医师和患者的接受性并且增加了治疗成功的可能性。

本发明的其它方案包括[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲及其盐的不同的结晶固体形式、及非晶形的混合物。这种混合物包括含选自A形、B形和非晶形的至少一种固体形式或至少两种固体形式的组合物。可使用上述分析技术中的任一种来检测在这种组合物中的固体形式的存在。检测可以定性、定量、或半定量进行，正如这些术语所使用的那样进行，并且如固体分析领域的技术人员可理解的那样进行。

对于这些分析，可使用包括比照标准的标准分析技术。另外，这种方法可包括使用诸如部分最小二乘法连同衍射或光谱学分析技术的技术。这些技术还可用于本发明的药物组合物中。

本发明的结晶固体和非晶形的制备。

此外，本发明涉及制备[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-磺酰脲的钾盐和钠盐的结晶固体和非晶形的方法。

本发明化合物的结晶固体和非晶形可通过下面所述的各种方法制备。可使用其它的公知结晶过程以及上述过程的改进过程。

在另外的实施方案中，本发明提供了结晶固体A形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，其通过以下的至少之一获得：

(i)从选自乙醇、甲醇、及其组合的至少一种溶剂中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐结晶，并干燥，使得晶体包含一些溶剂；和

(ii)在选自乙醇、甲醇、及其组合的至少一种溶剂中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐；在约50℃到-10℃的温度下结晶，并干燥，直到晶体包含至少约0.05％的溶剂。

在本发明的另一实施方案，提供了结晶固体B形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2JH[-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐，其通过以下的至少之一获得：

(i)在乙醇和水的溶剂组合中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代 -1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐；在约50℃到-10℃的温度下结晶，并干燥，直到晶体包含低于0.05％的溶剂；和

(ii)从乙醇和水的溶剂组合中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐结晶，并干燥，使得晶体包含低于0.05％的溶剂。

在本发明的另外的实施方案中，通过在异丙醇中研磨并干燥提供了非晶形结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐。

在本发明的另外的实施方案中，提供了非晶形结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐，其通过以下的至少之一获得：

(i)在选自异丙醇、乙腈、乙醇及其组合的至少一种溶剂中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐；在约50℃到-10℃的温度下结晶；

(ii)从选自异丙醇、乙腈、乙醇及其组合的至少一种溶剂中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐结晶；和

(iii)加热高湿度的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐。

此外，本发明涉及上述的用于制备[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-磺酰脲的钾盐和钠盐的结晶固体和非晶形的方法。

可通过以下实施例中进一步描述的多种方法制备结晶固体和非晶形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-磺酰脲。实施例说明但不限制本发明的范围。结晶固体或非晶形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲可使用本领域已知的典型的分离和纯化技术分离，所述技术包括例如色谱法、重结晶法和其它结晶法，以及上述方法的改进法。

药物组合物

本发明的式(I)化合物可被配制成药物组合物。因此，本发明还提供了用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成，特别是涉及血小板聚集的那些病理学状况的药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，各自如上所述，以及可药用的载体或试剂。优选地，本发明的药物组合物包含有效抑制哺乳动物特别是人的血小板聚集(更优选ADP依赖性聚集)的量的式(I)化合物或其盐。可药用的载体或试剂包括本领域已知的那些并且描述如下。

本发明的药物组合物可通过将式(I)化合物与生理学可接受的载体或试剂混合制得。本发明的药物组合物可另外包括赋形剂、稳定剂、稀释剂等等，并且可以持续释放制剂或延时释放制剂的形式被提供。用于治疗用途的可接受的载体、试剂、赋形剂、稳定剂、稀释剂等是药学领域中公知的，并且在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，ed.A.R.Gennaro(1985)中描述。这些物质在所用剂量和浓度下对于接受者是无毒的，并且包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其它有机酸盐，抗氧化剂，如抗坏血酸，低分子量(低于约十个残基)的肽如聚精氨酸，蛋白质，如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白，亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸，如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸，单糖、二糖或其它碳水化合物，包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精，螯合剂，如EDTA，糖醇，如甘露醇或山梨醇，抗衡离子如钠和/或非离子型表面活性剂，如吐温(TWEEN)或聚乙二醇。

本发明的另外的实施方案包括[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代 -1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲、其盐和各种形式，包括治疗有效量的A形、B性和非晶形的药物组合物。所述的至少一种形式的量可以是治疗有效量也可以不是治疗有效量。这种药物组合物可为固体口服组合物形式，如片剂、胶囊、和吸入用干粉剂。

治疗/给药方法

预防和治疗以不希望的血栓形成为特征的疾病

本发明的预防或治疗哺乳动物的血栓形成的方法包括对哺乳动物特别是人给用治疗有效量的单独的或作为如上所述的本发明药物组合物的一部分的式(I)化合物。本发明的式(I)化合物和包含式(I)化合物的药物组合物适于单独或作为多组分治疗方案的一部分用于预防或治疗心血管疾病，特别是那些血栓形成相关疾病。例如，本发明的化合物或药物组合物可用作用于任何血栓形成特别是血小板依赖性血栓形成性适应症的药物或治疗剂，所述病况包括但不限于急性心肌梗塞，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，周围血管病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，在介入过程如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植手术、支架放置以及血管内装置和假体的插入之后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，以及在与遗传倾向性或癌有关的凝固性过高状态后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症。在另一组实施方案中，适应症选自：经皮冠状动脉介入(PCI)，包括血管成形术和/或支架放置；急性心肌梗塞(AMI)；不稳定型心绞痛(USA)；冠状动脉病(CAD)；短暂性脑缺血发作(TIA)；中风；周围血管病(PVD)；冠状动脉旁路手术；颈动脉内膜切除术。

本发明的化合物和药物组合物还可作为多组分治疗方案的一部分与其它治疗剂或诊断剂结合用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成。在某些优选方案中，本发明的化合物或药物组合物可与其它的通常根据公认的医疗实践被开处方用于这些病况的化合物共同给用，所述其它化合物为诸如抗凝血药，血栓溶解药，或其它抗血栓形成药，包括血小板聚集抑制剂、组织纤溶酶原活化剂、尿激酶、尿激酶原、链激酶、肝素、阿司匹林、或华法林、或抗炎药(非甾体抗炎药，环加氧酶II抑制剂)。共同给用还可允许抗血小板药和血栓溶解药二者的剂量以减少的剂量水平使用，并因此使潜在的出血副作用最小化。本发明的化合物和药物组合物还可以协同方式起作用，用于防止在成功的溶血栓疗法后的再闭塞和/或减少再灌注时间。

本发明的化合物和药物组合物还可用于体内，通常用于哺乳动物体内，如灵长类(例如人)、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠，还可用于体外。本发明的化合物或药物组合物的如上所述的生物学性质可容易地通过本领域公知的方法进行表征，诸如例如通过体内试验评价抗血栓形成效力，和对止血和血液学参数的影响。

本发明的化合物和药物组合物可为溶液或悬浮液的形式。在应对血栓性疾病中，本发明的化合物或药物组合物还可为诸如例如以下的形式：口服用片剂、胶囊、或酏剂，栓剂，无菌溶液剂或悬浮剂或可注射给药形式等，或被引入到成形制品内。需要使用本发明的化合物或药物组合物进行治疗的主体(一般是哺乳动物)可被给用将提供最佳功效的剂量。给药剂量和方法将根据主体与主体的不同而改变，并且根据以下的各种因素而定：治疗的哺乳动物的类型，其性别、重量、膳食，同时进行的药疗法，总体临床状况，使用的特定的式(I)化合物，所用化合物或药物组合物的具体应用，和其它的本领域技术人员可理解的因素。

治疗有效量

本发明的式(I)化合物的剂量制剂，或包含该化合物的药物组合物的剂量制剂，在将用于治疗性给药时必须是无菌的。无菌可通过过滤通过无菌膜如0.2微米膜容易地实现，或通过其它常规方法实现。制剂通常以固体形式，优选以冻干形式被储存。尽管优选的给药途径是经口，但是本发明的式(I)化合物或药物组合物的剂量制剂还可通过以下途径给药：注射、静脉内(浓注和/或输注)、皮下、肌内、结肠、直肠、经鼻、透皮或腹膜内途径。还可使用多种剂型，包括但不限于栓剂、植入小球或小圆筒剂、气雾剂、口服剂量给药制剂和局部制剂如膏剂、滴剂和皮肤贴片。本发明的式(I)化合物和药物组合物还可被引入到成形体和制品中，如植入物，其可使用惰性物质如可生物降解的聚合物或合成硅树脂，如硅化橡胶(SILASTIC)、硅橡胶、和或其它市售的聚合物。本发明的化合物和药物组合物还可以脂质体递送系统给药，诸如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体可由各种各种脂质如胆固醇、十八胺或磷脂酰胆碱形成。

治疗有效剂量可由体外或体内方法确定。对于每种具体的本发明的化合物或药物组合物，可进行单独测定以确定所需的最佳剂量。治疗有效剂量的范围将受给药途径、治疗目的和患者病况的影响。对于通过皮下针注射，可假定剂量被递送进入体液中。对于其它给药途径，必须根据药理学领域公知的方法单独测定每种化合物的吸收效率。因此，治疗学家有必要根据需要调整剂量和改变给药途径以获得最佳的治疗效果。有效剂量水平的测定，即，实现所需结果所必须的剂量水平的测定，可容易地由本领域技术人员容易地确定。通常，化合物的施用在较低剂量水平下开始，然后剂量水平逐渐增加，直到实现所需效果。

有效剂量水平的测定，即，实现所需结果(即血小板ADP受体抑制)所必须的剂量水平的测定，可容易地由本领域技术人员容易地确定。通常，本发明的化合物或药物组合物的施用在较低剂量水平下开始，然后剂量水平逐渐增加，直到实现所需效果。本发明的化合物和组合物可以在约0.01到1000mg/kg剂量范围内的有效量经口给用，每天给药一次或分几次给药。如果在本发明的药物组合物中使用可药用的载体，则通常约5到500mg的式(I)化合物与已有药学实践要求的可药用的载体配合(compounded)，所述可药用的载体包括但不限于生理学可接受的媒介物、载体、赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、染料、调味剂等。这些组合物中活性成分的量为使得获得在指明范围内的适当剂量。

给药

通常将治疗性化合物液体制剂置于带有无菌入口的容器中，例如静脉内给药用溶液袋或具有可由皮下注射针刺入的制动器的小瓶。

可被引入到片剂、胶囊、菱形片(lozenges)等中的典型的助剂为结合剂如阿拉伯胶，玉米淀粉或明胶，和赋形剂如微晶纤维素，崩解剂如玉米淀粉或海藻酸，润滑剂如硬脂酸镁，甜味剂如蔗糖或乳糖，或矫味剂。当剂型为胶囊时，除了上述材料外，其还可包含液体载体如水、盐水或脂油。其它的各种类型的材料可用作剂量单位外形的包衣或用作改良剂。注射用无菌组合物可根据常规的药学实践配制。例如，可能希望活性化合物在媒介物如油或合成脂肪介质如油酸乙酯中，或在脂质体中溶解或悬浮。可根据已有药学实践并入缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等。

组合治疗

本发明的化合物还可与其它治疗剂或诊断剂组合使用。在某些优选方案中，本发明的化合物可与其它的通常根据公认的医疗实践被开处方用于这些病况的化合物共同给用，所述其它化合物为诸如抗凝血药，血栓溶解药，或其它抗血栓形成药，包括血小板聚集抑制剂、组织纤溶酶原活化剂、尿激酶、尿激酶原、链激酶、肝素、阿司匹林、或华法林。本发明的化合物还可以协同方式起作用，用于防止在成功的溶血栓疗法后的再闭塞和/或减少再灌注时间。这些化合物还可允许使用较低剂量的血栓溶解药，因此使得与潜在的出血副作用最小化。本发明的化合物可以用于体内，通常用于哺乳动物体内，如灵长类(例如人)、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠，还可以用于体外。

可以理解的是，上文的讨论、实施方案和实施例仅仅代表某些优选方案的详细说明。本领域普通技术人员显而易见的是可进行各种改进并进行等价改变而不脱离本发明的精神和范围。所有的专利、期刊文章和其它文献在上面被讨论或引用并作为参考被并入本文。

以下制备方法和实施例使得本领域技术人员能更清楚地理解和实践本发明。它们不被认为限制本发明的范围，而仅仅是说明性的和代表性的。

实施例

一般方法

在制备这些化合物中使用的起始原料和试剂通常得自商业供应商，如Aldrich Chemical Co.，或通过本领域技术人员已知方法根据诸如以下的参考文献中所述的过程制备：Fieser and Fieser′s Reagents forOrganic Synthesis；Wiley&Sons.New York，1967-2004，Volumes 1-22；Rodd′s Chemistry of Carbon Compounds，Elsevier Science Publishers，1989，Volumes 1-5和Supplemental；和Organic Reactions，Wiley&Sons：New York，2005，Volumes 1-65。以下的合成反应路线仅仅是说明一些可合成本发明化合物的方法，并且可对这些合成反应路线进行各种改进并且是对阅读了本申请中的公开的本领域技术人员的暗示。

合成反应路线中的起始原料和中间体如果需要可使用常规方法被分离和纯化，所述方法包括但不限于过滤法、蒸馏法、结晶法、色谱分离法等。这些材料可使用常规手段包括物理常数和光谱数据进行表征。

除非有相反说明，否则本文所述的反应优选在惰性气氛中，在大气压力下，在约-78℃到约150℃的反应温度范围内进行，优选反应温度范围为约0℃到约125℃，最优选和方便地在约室温(或环境温度)下进行，如在约20℃到约75℃温度下进行。

关于下述的实施例，使用本文所述的方法、或本领域公知的其它方法合成得到本发明的化合物。

化合物和/或中间体通过采用带有2695分离模块(Milford Mass.)的Waters Alliance色谱分离系统的高效液相色谱法(HPLC)进行表征。分析柱是得自Merck KGaA(Darmstadt，Germany)的C-18 SpeedROD RP18E柱。或者，使用具有Waters Acquity UPLC BEH C-18 2.1mm×15mm柱的Waters Unity(UPLC)系统进行表征。使用梯度洗脱，通常从5％乙腈/95％水开始，并且对于Alliance系统在5分钟内逐步增加到95％的乙腈，对于Acquity系统在1分钟内逐步增加到95％乙腈。所有溶剂含有0.1％三氟乙酸(TFA)。通过检测在220或254纳米处的紫外线(UV)吸收检测化合物。HPLC溶剂得自EMD Chemicals，Inc.(Gibbstown，NJ)。在某些情况下，通过使用玻璃硅胶板诸如例如EMD硅胶602.5cm×7.5cm板的薄层色谱法(TLC)检测纯度。在紫外光下可容易地用肉眼观察到TLC结果，或者通过使用公知的碘蒸气和其它各种染色技术。

在使用乙腈/水作为流动相的一个或两个Agilent 1100 series LCMS仪器上进行质谱分析。一个系统使用TFA作为改性剂并且以阳离子方式检测[报道值以MH⁺、(M+1)或(M+H)⁺表示]，另一个系统使用甲酸或乙酸铵并且以阳离子方式测量[报道值以MH⁺、(M+1)或M+H)⁺表示]和阴离子方式测量[报道值以M^-、(M-1)或(M-H)^-表示]。

对一些化合物进行Varian 400MHz NMR(Palo Alto，Calif.)的核磁共振(NMR)分析。光谱的参考标准是TMS或已知的溶剂化学位移。

本发明的一些化合物的纯度通过元素分析(Robertson Microlit，Madison NJ.)测定。

在Laboratory Devices Mel-Temp装置(Holliston，Mass.)上测定熔点。

使用购自Teledyne Isco，(Lincoln，NE)的Sq16x或Sg100c色谱分离系统和预装硅胶柱进行制备性分离。或者，化合物和中间体通过使用硅胶(230-400目)填料的急骤柱色谱分离法进行纯化，或通过使用C-18反相柱的HPLC进行纯化。Isco系统和急骤柱色谱分离法中使用的典型的溶剂是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、羟氨水溶液和三乙基胺。反相HPLC中使用的典型的溶剂是含有0.1％的三氟乙酸的不同浓度的乙腈和水。

用于固体形式的仪器

FT红外光谱(FTIR，傅里叶转换红外光谱)

在装有Universal ATR取样入口并运行Spectrum V5.0.1软件的Perkin-Elmer Spectrum One上研究样品。分辨率设定为4cm^-1，在4000cm^-1到400cm^-1范围内收集16次扫描。对照和分析软件：Spectrumv 5.0.1。

差示扫描量热法(DSC)

在装备有50位自动取样器的TA Instrument Q1000上收集DSC数据(差示热分析图)。能量和温度标定标准是铟。样品以10℃/分钟的速率从10℃被加热到250℃。以30ml/min保持氮气吹扫过样品。

除非另有说明，使用1到3毫克的样品，并且将所有样品密封在铝锅中，铝锅盖上有针孔。控制软件：Advantage for Q series v 2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1。分析软件：Universal Analysis 2000 v4.1D Build 4.1.0.16。

热重分析(TGA)

在具有16位自动取样器的TA Instrument Q500 TGA上收集TGA数据(差示热分析图)。以10℃/分钟速率加热样品。以100ml/min保持氮气吹扫过样品。

通常将5-20毫克的样品装载到称皮重的开口铝锅中。控制软件：Advantage for Q series v 2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1。分析软件：Universal Analysis 2000 v 4.1D Build 4.1.0.16。

XRPD(X-射线粉末衍射)

Bruker AXS C2 GADDS衍射仪

在Bruker AXS C2 GADDS衍射仪上获得样品的X射线粉末衍射图案，衍射仪使用Cu Kα辐射(40kV，40mA)，自动XYZ阶段，用于自动样品定位的激光视盘显微镜和HiStar二维区域检测器。X射线光学由单一的

多层镜结合0.3mm的针孔准直仪组成。

光束发散度，即样品上X射线束的有效大小为约4毫米。使用样品与检波器距离为20厘米的θ-θ连续扫描方式，得到3.2°-29.8°的有效2θ范围。样片的典型曝光时间是120秒。

使用无需研磨的原样粉末，将在环境条件下运行的样品制备成扁片试样。将约1-2毫克的样品轻轻地压到玻璃载玻片上以获得压扁面。控制软件：GADDS for WNT v 4.1.16。分析软件：Diffrac Plus Release 3EVA v 9.0.0.2。

重量分析蒸气吸附(GVS)研究

在运行CFRSorp软件的Hiden IGASorp水分吸附分析器上收集等温线。样品量通常为约10毫克。水分吸附/解吸等温线如下所述进行。在室内湿度和温度(约40％RH，25℃)下装载或卸载样品。标准等温线运行是从40％RH开始的单一循环。湿度步进如下：40、50、60、70、80、90、85、75、65、55、45、35、25、15、5、0、10、20、30、40。对照和分析软件：IGASorp Controller v 1.10，IGASorp Systems Softwarev 3.00.23。

¹H NMR

在装备有自动取样器的Bruker 400MHz上收集光谱数据。样品在d₆-DMSO中制备。

纯度分析

在装备有二极管阵列检测器的Agilent HP1 100系统上进行纯度分析。

方法：梯度

柱描述：Betabasic C18，5m，150×4.6mm

柱温：25℃

注射体积：51

流速ml/min：0.8ml/min

检测波长：325nm

A相：0.1％v/v甲酸水溶液

B相：90∶10的乙腈∶水，含0.1％v/v的甲酸

表3：流动相时间表

时间/分钟	A％	B％
			0	90	10
2	90	10
			17	10	90
21	10	90
			21.3	90	10
25	90	10

[0271] 表4：

	钾盐	钠盐
			纯度	99.4％(a/a)	99.4％(a/a)
杂质
			单独的峰≥0.1％(a/a)	％(a/a)	％(a/a)
RRT＝0.57	0.14	0.11
			RRT＝1.08	0.15	0.18
峰总计＜0.1％(a/a)	0.3	0.3

实施例1：中间体磺酰脲氨基甲酸酯(8)的合成

步骤1：5-氯噻吩-2-磺酰氯的制备

以下过程改编自C.A.Hunt，et al.J.Med.Chem.1994，37，240-247。在装备有机械搅拌器、空气冷凝器、滴液漏斗、和防水管的三颈圆底烧瓶内加入氯磺酸(240mL，3.594mol)。在搅拌下，在约45分钟内，分份添加PCl₅(300g，1.44mol，0.40当量)，添加过程中，剧烈产生大量的HCl气，但是混合物的温度没有显著增加(＜40℃)。等到所有的PCl₅加完后，得到几乎澄清的浅黄色溶液，在悬浮液中只有少量PCl₅的固体小片，搅拌直到停止气体放出(0.5小时)。

然后将反应容器在冰中冷却，在1.0小时内通过滴液漏斗添加2-氯-噻吩(66.0mL，0.715mol)。随着最初添加几滴2-氯-噻吩，混合物变成暗紫色，等到所有噻吩加完后，得到暗紫色溶液。在添加期间，以较慢速率继续放出HCl气，然后在室温搅拌反应混合物过夜。

然后在0.5小时内，将混合物，作为暗紫色的透明溶液，滴加到碎冰(3L)中。在添加到冰上时，紫色瞬时消失；无色的稀薄乳液在室温机械搅拌约15小时，然后用CH₂Cl₂提取混合物(3×300mL)，合并的CH₂Cl₂-提取液用水(1×200mL)、饱和NaHCO₃(1×250mL)、盐水(1×100mL)洗涤，经干燥(Na₂SO₄)，在旋转蒸发器上浓缩，得到粗产物，为浅黄色胶状物，其具有固化倾向，得到半固体物质。然后通过高真空蒸馏(沸点110-112℃/12mm)纯化，得到135.20g(88％)的标题化合物，为无色/浅黄色半固体。

步骤2：5-氯噻吩-2-磺酰胺：

以下过程改编自C.A.Hunt，et al J.Med Chem.1994，37，240-247。在装备有机械搅拌器的三颈圆底烧瓶中添加浓NH₄OH(500mL，148.50g NH₃，8.735mol NH₃，13.07当量的NH₃)，将烧瓶在冰中冷却，并在0.5小时内分份添加5-氯噻吩-2-磺酰氯(145.0g，0.668mol)(其是低熔点固体，其通过加热熔融，然后通过宽口径聚乙烯移液管方便地添加)。磺酰氯在反应烧瓶中立即固化。在所有磺酰氯已经加完后，将含有其的烧瓶用THF(25mL)漂洗，将其转移到反应容容器中，然后在室温搅拌浓稠悬浮液约20小时，此时，反应混合物仍然是悬浮液，但是具有不同的质地。

然后将混合物在冰中冷却，用H₂O(1.5L)稀释，用浓盐酸酸化至pH约3。使用布氏漏斗过滤收集固体产物，用冷水漂洗，并空气干燥，得到标题化合物，为无色固体，103.0克(78％)。MS(M-H)：196.0；198.0。

步骤3：5-氯噻吩-1-基磺酰基氨基甲酸乙酯

向装备有机械搅拌器和滴液漏斗的2升的三颈圆底烧瓶中添加磺酰胺(60.0g，303.79mmol)和在THF(900mL)中的Cs₂CO₃(200g，613.83mmol，2.02当量)，将透明溶液在冰中冷却，并在约30分钟内添加氯甲酸乙酯(70.0mL，734.70mmol，2.418当量)，然后将浓稠悬浮液在室温搅拌约36小时。

然后将混合物用水(200mL)稀释，得到澄清的无色溶液，将其在旋转蒸发器上浓缩到三分之一的体积，然后将其用EtOAc(250mL)稀释，在冰中冷却，用6N HCl酸化至pH约1。将双相混合物转移到分液漏斗中，分层，水层再次用2×75mL的EtOAc提取。合并的有机提取物用水/盐水(2×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，并浓缩，得到标题化合物，为浅色油状物。通过硅胶塞过滤将其纯化，将粗产物施用于在EtOAc中的烧结漏斗上的硅胶塞，然后用EtOAc(1升)洗脱，浓缩EtOAc滤液，得到标题化合物8，为无色固体。71.28g(87％).MS(M-H)：268.0；270.0。¹H NMR(DMSO)：δ7.62(d，1H)，7.25(d，1H)，4.10(q，2H)，1.16(t，3H)。

实施例2：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-磺酰脲的合成

步骤1

将苯胺1(¹H NMR(DMSO)：δ7.58(dd，1H)，6.72(dd，1H)，3.77(s，3H)；6.0g，32.085mmol)置于500毫升的圆底烧瓶中，并添加20％在甲苯中的光气(175mL，332.50mmol，10.36当量)，然后在室温下将得到的有些粘稠的悬浮液进行磁力搅拌，得到澄清的无色溶液。取出小部分后，用氩气吹干，用甲醇淬灭，通过RP-HPLC/MS分析，显示没有未反应的苯胺1，只形成异氰酸酯2a和/或氨基甲酰氯2b，经分析为其甲基氨基甲酸酯。首先通过旋转蒸发在高真空下浓缩混合物，得到6.76g(99％收率)的异氰酸酯2a和/或氨基甲酰氯2b，为自由流动的无色固体。

步骤2

在500mL的圆底烧瓶中加入在DMF(100mL)中的N-Boc-1，4-苯二胺(6.22g，29.866mmol，1.20当量)，注射入三乙胺(5.30mL，38.025mmol，1.52当量)，然后在15分钟内将澄清的暗棕色溶液通过滴加异氰酸酯2a(5.30g，24.88mmol)和/或氨基甲酰氯2b的DMF(50mL)溶液处理。添加结束后，得到微混浊的混合物，其在室温搅拌过夜。对小部分进行分析，用MeOH淬灭后，显示没有未反应的异氰酸酯，只形成脲3a和喹唑啉-1，3-二酮4a，为约2.5∶1的比。MS(M-H)：388.0。

然后在5分钟内通过注射器滴加DBU(3.75mL，25.07mmol，约1.0当量)，得到澄清的暗褐色溶液。将其在室温下搅拌3.0小时，得到混浊的混合物。HPLC分析显示没有脲3a，只形成喹唑啉-1，3-二酮4a。在旋转蒸发器上浓缩反应混合物，得到粗产物，为固体。将其高真空干燥，然后与CH₂Cl₂/H₂O(5∶1)研磨，得到8.40g的4a，为几乎无色的固体(87％收率)。¹H NMR(DMSO)：δ9.39(s，1H)，7.68(dd，1H)，7.45(d，2H)，7.03(m，2H)，6.98(dd，1H)，1.48(s，9H)。

步骤3

将N-Boc-苯胺4a(4.0g，10.28mmol)置于圆底烧瓶中，并添加在二氧杂环己烷中的4N HCl(50.0mL，200mmol，19.40当量)，在室温下搅拌粘稠的微溶剂化的悬浮液达5.0小时，HPLC表示没有起始原料，只形成苯胺5a。然后在旋转蒸发器上浓缩混合物得到粗产物，将如此获得的固体与CH₂Cl₂研磨，得到3.22g纯的5a，为几乎无色的固体(96％收率)。MS(M-H)：290.3。¹H NMR(DMSO)：δ11.75(s，1H)，7.88(dd，1H)，7.32(m，4H)，7.21(dd，1H)。

步骤4

将二氟-化合物5a(1.0g，3.072mmol)置于螺旋帽密封管中，添加DMSO(20mL)，然后添加甲胺(2.0M，在THF中)(15.0mL，30mmol，9.76当量)，得到透明溶液，然后将其在油浴中加热到110℃达3小时，HPLC显示没有未反应的5a，只形成5b。然后将混合物冷却到室温，蒸发所有的MeNH₂和THF，将残余物用100mL水稀释使得5b沉淀出来，在室温搅拌约2小时后，通过布氏漏斗过滤收集无色固体，用H₂O(100mL)漂洗，并空气干燥。该固体的HPLC分析显示其是纯的并且没有任何的DBU。将该固体进一步通过与Et₂O研磨、然后如先前路线所述用CH₂Cl₂研磨进行纯化，得到875mg的标题化合物(95％收率)。MS(M+1)301.2。¹H NMR(DMSO)：δ11.10(s，1H)，7.36(d，1H)，6.78(d，2H)，6.75(m，1H)，6.56(d，2H)，6.20(d，1H)，5.18(d，2H)，2.76(d，3H)。

步骤5：1-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基)脲(7a)的合成：

将包括苯胺(16.0g，53.33mmol)和乙基-磺酰基-氨基甲酸酯(28.77g，106.66mmol，2.0当量)在CH₃CN(1300mL)中的反应混合物加热回流36小时，在此期间，反应混合物继续作为浓稠悬浮液。HPLC分析表明是纯反应，和＜1％的未反应的苯胺。将浓稠悬浮液冷却到室温并通过布氏漏斗过滤。将无色的固体产物进一步用CH₃CN漂洗(3×40mL)，滤液的HPLC表明仅存在痕量的所需产物，大部分是过量的氨基甲酸酯。然后将粗产物与CH₂Cl₂(400mL)研磨，通过布氏漏斗过滤收集几乎无色的固体产物：收率，25.69g(92％)。MS(M+1)：524.0；526.0。¹H NMR(DMSO)：δ11.20(s，1H)，9.15(s，1H)，7.68(d，1H)，7.42(d，2H)，7.36(d，1H)，7.26(m，1H)，7.16(d，2H)，6.78(m，1H)，6.24(d，1H)，2.78(d，3H)。

实施例3：[4-(6-氯-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲(6b)

如实施例2(步骤1-5)所述合成实施例3中的化合物，不同之处在于从甲基-2-氨基-5-氯-4-氟苯甲酸酯开始，其通过用Pt(S)C还原甲基-2-硝基-5-氯-4-氟苯甲酸酯得到。

实施例4：[4-(6-氯-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲(6a)和盐(7a)的合成。

步骤1：

将2-氨基-4，5-二氟苯甲酸甲酯[2](38Kg，1.0当量)和二氯甲烷(560Kg，8X，ACS＞99.5％)加入到PP1-R1000反应器(2000L GL反应器)中，将反应混合物搅拌5分钟，将4-硝基苯基氯甲酸酯(49.1Kg，1.2当量)加入到PP1-R2000反应器(200L)中，然后添加二氯甲烷(185Kg)，并搅拌内容物达5分钟。将200L反应器加压后，将4-硝基苯基氯甲酸酯溶液转移到包含[2]的二氯甲烷溶液的2000L反应器中，将反应混合物在氮气吹扫下加热到40±5℃(回流)达3小时，示例性的TLC分析证实了反应完成(过程中TLC，没有化合物2残留；99∶1的CHCl₃∶MeOH)。将溶液冷却到30℃并在真空下蒸馏出460Kg的二氯甲烷，向2000L反应器添加520Kg的己烷并将反应器的内容物冷却到0±5℃并搅拌4小时。获得的固体通过衬有一片T-515LF Typar过滤器和一片Mel-Tuf1149-12滤纸的GF Nutsche过滤器过滤。滤饼用20Kg的己烷洗涤，并在35℃真空干燥直到达到恒重，移出干燥产物(70.15Kg)，98％收率，产物通过¹H NMR和TLC分析被证实。

步骤2：3-(4-氨基苯基)-6，7-二氟喹唑啉-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，化合物5b的合成

向PP1-R1000(2000L GL反应器)反应器加入3a(64.4Kg，1.0当量)、无水四氢呋喃(557Kg)和三乙胺(2.2Kg，0.1当量)，将2000L GL反应器的装料管路用四氢呋喃(10Kg)漂洗，反应器的内容物搅拌25分钟，在该期间，获得完全的溶液，向PP1-R2000(200L HP反应器)反应器中添加N-Boc-对-亚苯基二胺(38Kg，1.0当量)、四氢呋喃(89Kg)，并搅拌30分钟，直到获得完全的溶液。将200L HP反应器的内容物转移到包含化合物3a的2000L GL反应器中，然后在65±5℃加热达2小时，通过HPLC监控，在确认起始原料3a消失后认为反应完成(过程中的检验规格＜1％)。2000L GL反应器的内容物被冷却到20±5℃，然后在20分钟内加入甲醇钠(25％的甲醇溶液，41.5Kg，1.05当量)，保持温度低于30℃，进料管路用四氢呋喃(10Kg)漂洗，内容物在25±5℃搅拌4小时，过程中HPLC分析证实了当保留在反应混合物中的化合物3b的量＜1％时反应完成。向该反应混合物中添加工艺过滤水(500Kg)并将2000L GL反应器内容物真空蒸馏到洁净的200L GL接收器中直到蒸馏出300Kg的溶剂。获得的固体使用GL Nutsche过滤器过滤，用工艺过滤水洗涤，直到化合物4b固体的颜色变为白色到微带灰色为止。向2000L GL反应器添加湿的化合物4b滤饼、二氧杂环己烷(340Kg)并搅拌内容物达1小时，通过含有一片T-515 LF Typar滤纸的GL Nutsche过滤器过滤获得可过滤固体。固体滤饼吹干达2小时，然后将二氧杂环己烷(200Kg)加入到2000L GL反应器中，搅拌内容物10分钟，然后在3小时内添加在二氧杂环己烷(914Kg)中的4N HCl，并保持内部温度低于30℃。将装料管路用另外的二氧杂环己烷(10Kg)漂洗，将反应器的内容物在25±5℃搅拌6小时，通过HPLC监测化合物4b转化为化合物5b的反应完成(过程中控制反应混合物中的化合物4＜1％)。将反应器的内容物冷却到5+5℃，2小时，通过GL Nutsche过滤器过滤获得固体，然后用二氧杂环己烷(50Kg)洗涤，滤饼用8±7磅/平方英寸的氮气吹干达30分钟。通过HPLC分析纯度。过滤的固体在45℃的真空烘箱中干燥达48小时至恒重，移出化合物5b(65.8Kg，实际收率110.6％)，并通过¹H NMR和HPLC分析进行分析。¹H NMR(DMSO)：δ11.75(s，1H)，7.88(dd，1H)，7.32(m，4H)，7.21(dd，1H)。

步骤3：3-(4-氨基苯基)-6-氟-7-(甲基氨基)喹唑啉-2，4(1H，3H)-二酮，化合物5c的合成

向PP 1-R2000(200L HP反应器)加入化合物5b(18Kg，1.0当量)，用100±5psig的氮气加压，通过常压排气管路从反应器放出氮气，然后打开冷凝器阀，然后在氩气层下向反应器中添加二甲亚砜(＞99.7％，105Kg)。反应器内容物在22℃(19-25℃)搅拌15分钟，然后在200L HP反应器上抽出最大可获得的真空并关闭所有阀。在确定的真空下，向200L HP的反应器中添加甲胺(33％wt％，在绝对乙醇中，37.2Kg)，添加速率为保持内部温度在25±5℃，并在添加期间在试剂溶液上保持氮气层。在用二甲亚砜(5Kg)漂洗进料管路后，关闭200L HP反应器冷凝器阀，并将反应器内容物加热到110±5℃。将反应器内容物在110±5℃搅拌至少5小时，在5小时40分钟后的过程中HPLC显示化合物5b的含量为0.09％，表明反应完全(过程中的检验规格＜1％)。将200LHP反应器的内容物冷却到25±5℃。将200L反应器冷却的同时，关闭PP1-R1000反应器(2000L GL反应器)的所有阀，并加入工艺过滤水(550Kg)，在15分钟内将200L HP反应器的内容物转移到2000L GL反应器中，然后将进料管路用工艺过滤水(50Kg)漂洗。将2000L GL反应器的内容物在5±5℃搅拌2小时，通过在装有Mel-Tuf 1149-12滤纸的PPF200(GL mutsche过滤器)上真空过滤得到可过滤的固体。取出湿滤饼并将其转移到具有杜邦氟碳化合物薄膜(Kind 100A)的预衬真空盘中，将特殊的烘箱用纸(KAVON 992)压在含该湿化合物6的真空盘上并移至真空烘箱盘式干燥器内。烘箱温度设为55℃，将化合物6干燥至恒重达12小时。移出产物5c(12.70Kg)，76.5％收率(预期收率85-95％)。HPLC显示98.96％的纯度，并且¹H NMR证实了化合物5c的结构。¹H NMR(DMSO)：δ11.10(s，1H)，7.36(d，1H)，6.78(d，2H)， 6.75(m，1H)，6.56(d，2H)，6.20(d，1H)，5.18(d，2H)，2.76(d，3H)。

步骤4：5-氯-N-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基氨基甲酰基)噻吩-2-磺酰胺

向PP1-R2000(200L HP反应器)反应器中加入6(20.7Kg，1.0当量)、5-氯噻吩-2-基磺酰基氨基甲酸乙酯(37.5Kg，2.0当量，＞95％)、二甲亚砜(＞99％，75Kg)，并搅拌15分钟，同时抽出最大可获得的真空，将200LHP反应器(编号PP1-R2000)在65±5℃加热15小时。从反应器取出示例性样品用于HPLC分析，过程中HPLC表明在反应混合物中残留＜0.9％的化合物5c(反应完成的过程中标准为化合物6＜1％)。向800L反应器(编号PP5-R1000)中加入工艺过滤水(650Kg)，然后将200L HP内容物转移到800L中，并同时保持内部温度低于25℃，200L HP反应器用二甲亚砜(15Kg)漂洗，并转移到800L反应器中，然后在5±5℃搅拌反应器2小时，在真空下通过过滤器PP-F2000将固体形式过滤到200L GL接收器中，并将滤饼用工艺过滤水(60Kg)漂洗。取该湿滤饼的代表性样品并进行HPLC分析，如果化合物6a的纯度＜95％(过程中的对照物＜95％，需要二氯甲烷研磨)，向800L GL反应器中加入所有的湿化合物6a、二氯甲烷(315Kg)并搅拌内容物达3小时。在真空下使固体过滤通过衬有1片T515LF TYPAR滤纸的GL nutsche过滤器，滤饼用二氯甲烷(50Kg)漂洗，并用8±7磅/平方英寸的氮气吹干滤饼达15分钟。将滤饼转移到具有杜邦氟碳化合物薄膜(Kind 100A)的预衬真空盘中，然后放入到设定在60℃的真空烘箱盘式干燥器中达12小时，分离干燥的化合物6a(33.6Kg，93％收率)，HPLC纯度为93.5％，和4.3％的磺酰胺。¹H NMR证实了化合物7的结构。¹H NMR(DMSO)：δ11.20(s， 1H)，9.15(s，1H)，7.68(d，1H)，7.42(d，2H)，7.36(d，1H)，7.26(m，1H)，7.16(d，2H)，6.78(m，1H)，6.24(d，1H)，2.78(d，3H)。

步骤5：(5-氯噻吩-2-基磺酰基)(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基氨基甲酰基)酰胺钾，化合物7a

向800L GL反应器(编号PP5-R 1000)加入乙腈(134Kg)、WFI软化水(156Kg)，并搅拌内容物5分钟，然后向其中添加化合物6a(33.6Kg，1.0当量)，此时反应混合物是悬浮液。向悬浮液加入氢氧化钾(4.14Kg，1.15当量，＞85％)的水溶液(WFI水，35Kg)，加入速率保持内部温度低于30℃。进料管路用WFI软化水(2Kg)漂洗，然后将800L GL反应器的内容物加热到50±5℃达1小时，然后将内容物热过滤通过袋形过滤器，然后通过七滤筒0.2微米抛光过滤器过滤以清洗HDPE筒。在整个过滤过程中保持热过滤系统使得没有物质从溶液损失。将800L GL反应器夹套冷却到25±5℃，然后继续漂洗反应器，将800L GL反应器用乙腈(8.5Kg)和WFI软化水(10Kg)的预混合溶液漂洗，通过过滤系统进入圆筒，标记为7a的热过滤。使用压力容器将800L GL反应器用WFI软化水(20Kg)漂洗，然后用丙酮(20Kg)漂洗，然后用氮气(3+2psig)吹干。关闭800GL反应器的底阀并抽20+10英寸Hg的真空，然后打破真空，并向反应器加入标记为7a热过滤的圆筒中的内容物。将800LGL反应器(编号PP5-R1000)内容物冷却到20±5℃，然后使用抛光过滤器(PP-PF09)，向反应器加入甲醇(373kg，＞99％)，同时保持内部温度低于30℃。800GL反应器(编号PP5-R1000)的内容物被冷却到15±5℃，然后在该温度将内容物搅拌12小时。在此期间，通过洁净的过滤装置(PP-F1000)将可滤过的固体过滤到洁净的200L GL接收器(PPR-04)中，然后将反应器加压，在过滤器/接收器上抽20+10英寸Hg的真空，并过滤内容物。将滤饼用甲醇(30Kg)洗涤，用8+7磅/平方英寸的氮气吹干达10分钟。将真空烘箱盘式干燥器温度设在80℃，然后装载7a的湿滤饼，将滤饼转移到具有杜邦氟碳化合物film(Kind 100A)的预衬真空盘中，并将特殊烘箱用纸(Kavon Mel Tuf纸)压在含有该产物湿7a的真空盘上并移至该真空烘箱盘式干燥器内，并被转移到真空烘箱盘式干燥器中。设定烘箱温度为80℃，并将湿产物7a干燥至恒重(恒重的定义是，当在相隔至少1小时后托盘读数具有在+50g内的相同重量)。分析示例性样品的残余溶剂(API的残余溶剂检验规格)并且其满足该检验规格。使用一盘WFI软化水的存在下，使最终的API经历水(5-6％)平衡12小时，然后彻底翻转并放置另外的12小时，并最终经历KF分析(5.5％含水率)。将7-钾(21.80Kg，60.6％收率)转移到双强力塑料袋中并储存在二级污染中。HPLC显示7a的纯度为99.7％，¹H NMR证实了7a的结构。1H NMR(DMSO)：δ11.14(s，1H)，8.60(s，1H)，7.48(m，2H)，7.35(d，1H)，7.22(d，1H)，6.95(m，3H)，6.75(m，1H)，6.22(d，1H)，2.78(d，3H)。

实施例5：药理学试验

通过以下体外试验测定本发明的每种化合物的药理学活性。

体外抑制ADP介导的血小板聚集

在96孔微量滴定试验(一般参见Jantzen，H.M.et al.(1999)ThrombHemost.81：111-117中的过程)或标准的使用人血小板富集血浆(PRP)或人洗涤血小板的比色杯透光率聚集度测定法评价本发明的化合物对ADP诱导的人血小板聚集的效果。

为了制备用于聚集试验的人血小板富集血浆，从健康的未用药志愿者收集人静脉血到0.38％枸橼酸钠(0.013M，最终pH 7.0)中，通过在室温下以160Xg对全血离心20分钟制备血小板富集血浆(PRP)。移出 PRP层，将其转移到新试管中，如有必要，使用乏血小板血浆(PPP)调节血小板计数，实现血小板浓度为～3×10⁸个血小板/毫升。PPP的制备通过将剩余的血液样品(除去PRP后)在800Xg离心20分钟进行。制备PRP后可随后用于96孔板或标准比色杯聚集度测定法的聚集试验中。

为了制备洗涤血小板，从健康的未用药志愿者收集人静脉血到ACD(85mM枸橼酸钠、111mM葡萄糖、71.4mM枸橼酸)中，ACD含有PGI₂(1.25ml ACD，含0.2M PGI₂，最终浓度；PGI₂得自St Louis，Mo.)。血小板富集血浆(PRP)通过在室温下在160Xg离心20分钟制备。洗涤血小板的制备如下进行：将730g的PRP离心10分钟，并将血小板小球悬浮在含有1U/ml腺苷三磷酸双磷酸酶(grade V，Sigma，St.Louis，Mo.)的CGS中(13mM枸橼酸钠、30mM葡萄糖、120mM NaCl；2ml CGS/10ml初始血量)。在37℃培养15分钟后，通过在730g离心10分钟收集血小板并将其以3×10⁸个血小板/毫升的浓度再悬浮在含有0.1％牛血清清蛋白、1mM CaCl₂和1mM MgCl₂的Hepes-Tyrode′s缓冲液(10mM Hepes，138mM NaCl，5.5mM葡萄糖，2.9mM KCl，12mM NaHCO₃，pH 7.4)中。在用于聚集试验之前在37℃保持血小板悬液＞45分钟。

对于比色杯聚集试验，在96孔V形底的板中在100％DMSO中制备试验化合物的连续稀释液(1∶3)(比色杯中的最终DMSO浓度为0.6％)。试验化合物(在二甲亚砜中的3μl的连续稀释液)在聚集反应开始之前与PRP预培养30-45秒，其在ChronoLog聚集度计中通过在37℃添加激动剂(5或10μM ADP)到490μL的PRP中进行。有时候，在37℃使用490μL的洗涤血小板(如上所述制备)进行透光率聚集度测定法，通过添加5μM ADP和0.5mg/ml人纤维蛋白酶原(AmericanDiagnostics，Inc.，Greenwich，Conn.)引发聚集。聚集反应记录约5分钟，通过基线的聚集程度与在试验五分钟内发生的最大聚集之间的差测定聚集的最大程度。计算聚集的抑制作为在抑制剂存在下与不存在抑制剂相比所观察到的最大聚集。使用Prism软件(GraphPad，San Diego，CA)通过非线性回归分析计算IC₅₀。

还在96孔平底微孔板中使用微量滴定板振荡器和板读数器，以类似于Frantantoni等人在Am.J.Clin.Pathol.94，613(1990)中所述的过程测定了ADP依赖性聚集的抑制。所有步骤在室温下进行。对于使用血小板富集血浆(PRP)的96孔板聚集，0.2ml/孔的总反应量包括180μl的PRP(～3×10⁸个血小板/毫升，参见上面)，6μl的试验化合物在20％DMSO中的连续稀释液或缓冲剂(用于对照孔)，和10μl的20X ADP激动剂溶液(100μM)。然后使用可在0分钟读数的微量滴定板读数器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，Calif.)在450nm测定样品的OD。然后将板在微量滴定板振荡器上振荡5分钟，并且在板读数器中获得5分钟读数。从在450nm下在t＝5分钟与t＝0分钟相比的降低计算聚集作用，并且在校正不凝聚对照样品中的改变后的ADP对照样品的降低百分比表示。通过非线性回归分析计算IC₅₀。

对于使用洗涤血小板的96孔板中，0.2ml/孔的总反应量包括在Hepes-Tyrodes缓冲液/0.1％BSA中的：4.5×10⁷个经腺苷三磷酸双磷酸酶洗涤的血小板，0.5mg/ml人纤维蛋白酶原(American Diagnostica，Inc.，Greenwich，Conn.)，试验化合物在0.6％DMSO中的连续稀释液(缓冲液用于对照孔)。在室温下～5分钟的预培养后，添加ADP到最终浓度为2μM，其诱导亚最大聚集。用缓冲液代替ADP被添加到另一组对照孔中(ADP-对照)。然后使用可在0分钟读数的微量滴定板读数器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，Calif.)在450nm测定样品的OD。然后将板在微量滴定板振荡器上振荡5分钟，并且在板读数器中获得5分钟读数。从在450nm下在t＝5分钟与t＝0分钟相比的降低计算聚集作用，并且在校正不凝聚对照样品中的改变后的ADP对照样品的降低百分比表示。通过非线性回归分析计算IC₅₀。

[³H]2-MeS-ADP与血小板结合的抑制

使用放射性配体结合试验测量候选分子抑制[³H]2-MeS-ADP与血小板上的P2Y12受体结合的能力

使用该试验测定了所述化合物抑制[³H]2-MeS-ADP与全部血小板结合的效力。在下面所述的条件下，[³H]2-MeS-ADP的结合仅仅是由于该配体与P2Y₁₂受体的相互作用，其原因为在本试验中所测得的所有的特异性结合作用是与P2Y₁₂拮抗剂竞争(即，通过与过量P2Y₁₂拮抗剂竞争而使特异性结合作用减至背景值，且当P2Y₁拮抗剂是经该血小板制剂预培养时，并无结合作用的竞争性)。[³H]2-MeS-ADP结合实验使用通过标准程序在医院血库收集的过期人血小板按照常规进行。经腺苷三磷酸双磷酸酶洗涤的过期血小板的制备如下(所有步骤在室温下进行，除非另外指出不是这样)：

将过期血小板悬浮液用1体积的CGS稀释，在1900Xg将成小球的血小板离心45分钟。将血小板小球以3-6×10⁹个血小板/毫升的浓度再悬浮在CGS(CGS含有1U/ml腺苷三磷酸双磷酸酶(grade V，Sigma，St.Louis，Mo.)中并且在37℃培养15分钟。在730Xg离心20分钟后，将小球以6.6×10⁸个血小板/毫升的浓度再悬浮在含有0.1％BSA(Sigma，St.Louis，Mo.)的Hepes-Tyrode′s缓冲液中。结合实验在血小板静止＞45分钟之后进行。

或者，结合实验使用如上述的(体外抑制ADP介导的血小板聚集)所述制备的新鲜人血小板进行，不同的是将血小板以6.66×10⁸个血小板/毫升的浓度再悬浮在含有0.1％BSA(Sigma，St.Louis，Mo.)的Hepes-Tyrode′s缓冲液中，使用新鲜血小板和过期血小板获得非常相似的结果。

将使用氚化的强力激动剂配体[³H]2-MeS-ADP的血小板ADP受体结合试验(ARB)(Jantzen，H.M.et al.(1999)Thromb.Hemost.81：111-117)修饰成96孔微量滴定板格式。在含有0.1％BSA和0.6％DMSO的0.2 ml试验量的Hepes-Tyrode′s缓冲液中，在96孔平底微量滴定板中将1×10⁸个经腺苷三磷酸双磷酸酶洗涤的血小板与试验化合物的连续稀释液进行预培养，然后添加1nM的[³H]2-MeS-ADP([³H]2-甲硫腺苷-5′-二磷酸，铵盐；比活性20-50居里(Ci)/毫摩尔，委托Amersham LifeScience，Inc.，Arlington Heights，I11.，或NEN Life Science Products，Boston，Mass.合成)。在没有试验化合物存在下测定总结合性。用于非特异性结合的样品可含有10μM的未标记的2-MeS-ADP(RBI，Natick，Mass.)。在室温下培养15分钟后，通过快速过滤并使用冷(4-8℃)的结合洗涤缓冲液(10mM Hepes pH 7.4，138mM NaCl)，使用96孔细胞收集器(Minidisc 96，Skatron Instruments，Sterling，Va.)和8×12GF/C玻璃纤维过滤垫(Printed Filtermat A，for 1450 Microbeta，Wallac Inc.，Gaithersburg，Md.)分离未结合的放射性配体。在过滤垫上的血小板结合型放射性在闪烁计数器(Microbeta 1450，Wallac Inc.，Gaithersburg，Md.)中进行测定。通过从总结合中减去非特异性结合测量特异性结合，并且在试验化合物存在条件下的特异性结合用在没有试验化合物稀释液存在下的特异性结合百分比表示。通过非线性回归分析计算IC₅₀。

在下表中，PRP试验中的活性提供如下：+++，IC₅₀＜10μM；++，10μM＜IC₅₀＜30μM。ARB试验中的活性提供如下：+++，IC₅₀＜0.05μM；++，0.05μM＜IC₅₀＜0.5μM。

实施例编号	ARB结合性	PRP活性
			实施例2	+++	+++
实施例3	++	++

实施例6：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐(9a)(非晶形)的合成

将游离酸磺酰脲(7.0g，13.365mmol)悬浮在THF/H₂O(55∶22mL，约2.5∶1)中，由在约5分钟内滴加2M KOH处理(7.70mL，15.40mmol，1.15当量)，添加结束时，得到透明溶液。但是，然后不久以后(＜5分钟)，沉淀析出固体，反应混合物变成浓稠悬浮液，将其在油浴中加热到50℃，得到的澄清的粘稠浅棕色溶液保持在该温度下达0.5小时，待冷却后，沉淀析出标题化合物。混合物用异丙醇(250mL，3倍于初始反应体积)稀释，在室温搅拌3小时，然后通过布氏漏斗过滤，得到标题化合物，为无色固体。将其在真空烘箱中在80℃干燥，得到7.20g(96％)的非晶形固体。MS(负离子扫描)：521.7；523.7。

实施例7：磺酰脲(7a)向其钠盐(10a)的转化

将1-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基)脲(3.0g，5.728mmol)7a悬浮在CH₃CN/H₂O(1∶1；70mL)中，在约15分钟内通过滴加2N NaOH(2.90mL，5.80mmol)进行处理，得到透明溶液，搅拌1小时后，将目前是浅棕色的溶液冻干，得到粗产物，为非晶形固体10a。MS(负离子扫描)：522.0； 524.0。

实施例8：非晶形钠盐的制备

将钠盐10b悬浮在异丙醇(100mL)中并回流约45分钟，然后过滤，得到黄褐色固体，其通过HPLC分析主要是标题化合物。将黄褐色固体悬浮在CH₃CN∶EtOH(1∶2)(100mL)中并回流45分钟，然后进行热过滤，得到2.54g的标题化合物，为黄褐色固体(通过分析性HPLC，长柱，测定纯度为99.6887％)。将滤液用EtOH稀释，直到ACN∶EtOH的比变为1∶3，然后将其在室温下放置过夜，沉淀析出标题化合物，得到210mg的标题化合物(通过分析性HPLC，长柱，测定纯度为99.6685％)。

实施例9：通过重结晶制备钾盐的多晶型物A形

重结晶：粗产物可以从MeOH或者MeOH/EtOH(3∶1)重结晶，首先加热至回流以溶解，然后冷却到室温以析出沉淀。

从MeOH重结晶：将1.0g的钾盐悬浮在MeOH(150mL)中，并加热回流0.5小时，得到几乎透明的溶液，然后通过布氏漏斗进行热过滤。澄清滤液在室温下放置，析出无色固体。将其搅拌过夜，然后通过布氏漏斗过滤收集。将固体产物用EtOH漂洗(2×4.0mL)，并在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到740mg的无色固体。将母液浓缩到其原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。

从EtOH/MeOH重结晶：将1.0g的钾盐悬浮在EtOH/MeOH的溶剂混合物(1∶3)(200mL)中，加热回流0.5小时，得到几乎透明的溶液，然后将其通过布氏漏斗进行热过滤。澄清滤液在室温放置析出无色固体。将其通过布氏漏斗过滤进行收集，将该固体产物用EtOH漂洗，并在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到无色固体。母液通过浓缩到其原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。

实施例10：通过重结晶制备钾盐的多晶型物B形

重结晶：粗产物可以从EtOH/H₂O(91∶9)或少量MeOH重结晶，首先加热至回流以溶解，然后冷却到室温以析出沉淀。

从EtOH/H₂O重结晶：将1.0g的钾盐悬浮在EtOH(190mL)中并加热回流。向浓稠悬浮液中滴加H₂O(18.0mL)，得到澄清的无色溶液。在室温冷却后，沉淀析出标题化合物，为无色固体。通过布氏漏斗过滤收集固体，用EtOH漂洗(2×4.0mL)，将其在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到650mg的无色固体。母液通过浓缩到原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。

从少量MeOH进行大规模重结晶：将6.6g的钾盐悬浮在MeOH(30mL)中，并加热回流5小时，固体在较小体积的甲醇中没有完全溶解。冷却后，固体经过滤，用异丙醇漂洗。将其在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到6.2g的无色固体，表征为B形。

尽管通过举例和实施例在上文相当详细地描述了本发明，其仅仅是用于清楚理解的目的，本领域技术人员可以理解的是，可在本发明的范围内进行某些改变和修改。另外，本文提供的每篇文献作为参考以全文并入本文，其并入程度如同各参考资料个别并入本文以为参考资料一样。

Claims

1.下式的化合物[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲：

或其可药用的盐或水合物。

2.权利要求1的化合物，其中可药用的盐选自：

或其水合物。

3.权利要求1的化合物，其中化合物是下式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐：

4.权利要求1的化合物，其中化合物是下式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐：

或其水合物。

5.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由以下至少之一表征的结晶固体A形：

(i)实质上根据图5的红外光谱；

(ii)实质上根据图2的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图14的DSC扫描图。

6.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由实质上根据图5的红外光谱表征的结晶固体A形。

7.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由以下至少之一表征的结晶固体A形：

(i)包括在约3559、3389、3324、1698、1623、1563、1510、1448、1431、1403、1383、1308、1269、1206、1174、1123、1091、1072、1030、987、939、909、871、842、787、780、769、747、718、701、690和667cm^-1处的吸收峰的红外光谱；和

(ii)在约246℃处的DSC最大吸热峰。

8.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由包括在约3559、3389、3324、1698、1623、1563、1510、1448、1431、1403、1383、1308、1269、1206、1174、1123、1091、1072、1030、987、939、909、871、842、787、780、769、747、718、701、690和667cm^-1处的吸收峰的红外光谱表征的结晶固体A形。

9.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由在约246℃处的DSC最大吸热峰表征的结晶固体A形。

10.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由以下至少之一表征的结晶固体B形：

(i)实质上根据图6的红外光谱；

(jiij)实质上根据图3的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图16的DSC扫描图。

11.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由实质上根据图6的红外光谱表征的结晶固体B形。

12.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由以下至少之一表征的结晶固体B形：

(i)包括在约3584、3327、3189、2935、2257、2067、1979、1903、1703、1654、1630、1590、1557、1512、1444、1429、1406、1375、1317、1346、1317、1288、1276、1243、1217、1182、1133、1182、1133、1093、1072、1033、987、943、907、883、845、831、805、776、727、694和674cm^-1处的吸收峰的红外光谱；和

(ii)在约293℃处的DSC最大吸热峰。

13.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由包括在约3584、3327、3189、2935、2257、2067、1979、1903、1703、1654、1630、1590、1557、1512、1444、1429、1406、1375、1317、1346、1317、1288、1276、1243、1217、1182、1133、1182、1133、1093、1072、1033、987、943、907、883、845、831、805、776、727、694和674cm^-1处的吸收峰的红外光谱表征的结晶固体B形。

14.权利要求4的化合物，其是[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物，且由在约293℃处的DSC最大吸热峰表征的结晶固体B形。

15.权利要求3的化合物，具有提供以下至少之一的非晶形：

(i)实质上根据图7的红外光谱；

(ii)实质上根据图4的X射线粉末衍射图案；和

(iii)实质上根据图18的DSC扫描图。

16.权利要求3的化合物，具有由包括在约3560、1711、1632、1556、1512、1445、1407、1375、1309、1280、1227、1133、1092、1032、987、905、781、770和691cm^-1处的吸收峰的红外光谱表征的非晶形。

17.权利要求3的化合物，具有提供实质上根据图4的X射线粉末衍射图案的非晶形。

18.权利要求15的化合物，其是经分离并经纯化的形式。

19.药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药用的盐或水合物和可药用的媒介物或载体。

20.权利要求19的药物组合物，其中组合物中的化合物或其可药用的盐或水合物是固体形式。

21.权利要求19的药物组合物，其中所述固体形式选自：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物A形、[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物B形和[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐非晶形。

22.权利要求19的药物组合物，其中[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物A形、[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钾盐二水合物B形和[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰脲钠盐非晶形中的至少一种以治疗有效量存在。

23.权利要求21或22的药物组合物，其中组合物选自：固体口服组合物和吸入用干粉剂。

24.权利要求23的药物组合物，其中固体口服组合物是片剂或胶囊。

25.权利要求19的药物组合物，其中所述治疗有效量是有效抑制哺乳动物中血小板聚集的量。

26.权利要求25的药物组合物，其中所述血小板聚集是血小板ADP依赖性聚集。

27.权利要求26的药物组合物，其中所述哺乳动物是人。

28.权利要求19的药物组合物，其中组合物是固体口服组合物。

29.权利要求19的药物组合物，其中组合物是片剂或胶囊。

30.权利要求19的药物组合物，其中组合物是气雾剂或吸入用干粉剂。

31.治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐在制备用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成和血栓形成相关病况的药物中的应用。

32.权利要求31的应用，其中所述哺乳动物易患或罹患心血管疾病，所述心血管疾病选自急性心肌梗塞，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，周围血管病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，由血管成形术、颈动脉内膜切除术、冠状动脉旁路移植手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置和假体的插入引起的介入过程后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，和与遗传倾向性或癌有关的凝固性过高状态后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症。

33.制备药物组合物的方法，包括将治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药用的盐或水合物与可药用的媒介物或载体混合。

34.权利要求19的药物组合物，其中组合物用于静脉内给药。

35.权利要求19的药物组合物，其中组合物用于吸入。

36.药物组合物，包括治疗有效量的权利要求5的化合物和可药用的媒介物或载体。

37.权利要求19的药物组合物，其中组合物被配制成含5-500mg所述化合物或其可药用的盐或水合物的剂量单位。