CN101720324A - [4-(6-氟-7-甲基氨基-2,4-二氧代-1,4-二氢-2h-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲盐、其相关的形式和方法 - Google Patents

[4-(6-氟-7-甲基氨基-2,4-二氧代-1,4-二氢-2h-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲盐、其相关的形式和方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了式(I)的盐的新的磺酰基脲盐及其多晶型物形式。各种形式的所述化合物是有效的血小板ADP受体抑制剂，且可用于各种药物组合物，且对预防和/或治疗心血管疾病、特别是血栓形成相关疾病特别有效。本发明还提供了用于制备所述化合物和形式的方法，和用于预防或治疗哺乳动物中血栓形成和血栓形成相关病症的方法，其包括施用治疗有效量的式(I)的盐或其可药用形式的步骤。

Description

[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲盐、其相关的形式和方法
相关申请的交叉参考
本申请要求了2007年5月2日提交的美国临时专利申请60/927,328的优先权，为所有目的将其全部内容引入本文作为参考。
发明背景
血栓形成性并发症是工业化世界中的主要死亡原因。这些并发症的实例包括急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、慢性稳定型心绞痛、短暂性脑缺血发作、中风、外周血管疾病、先兆子痫/子痫、深部静脉血栓形成、栓塞、弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic cytopenicpurpura)。在一些侵入性操作后也常发生血栓形成性和再狭窄性并发症，所述侵入性操作例如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置与假体的插入，以及与遗传素质或癌症有关的高凝状态。一般认为血小板聚集在这些事件中发挥重要作用。在由破裂的动脉粥样硬化病灶或侵入性处理如血管成形术导致血流紊乱的情况下，血小板(正常情况下其在血管系统中自由循环)被活化并聚集形成血栓，从而导致血管闭塞。许多物质例如暴露的内皮下基质分子如胶原或在凝血级联中形成的凝血酶均可引起血小板活化。
血小板活化和聚集的一种重要介质是ADP(腺苷5′-二磷酸)，其在被各种物质如胶原和凝血酶活化后被血管系统中的血小板以及被受损的血细胞、内皮或组织释放。被ADP活化导致更多血小板的募集和已经存在的血小板聚集体的稳定。血小板ADP受体介导的聚集被ADP及其一些衍生物活化，被ATP(腺苷5′-三磷酸)及其一些衍生物拮抗(Mills，D.C.B.(1996)Thromb.Hemost.76：835-856)。因此，血小板ADP受体是嘌呤和/或嘧啶核苷酸所活化的P2受体家族的成员(King，B.F.，Townsend-Nicholson，A.&Burnstock，G.(1998)Trends Pharmacol.Sci.19：506-514)。
最近使用选择性拮抗剂得到的药理学数据表明，ADP-依赖性血小板聚集需要至少两种ADP受体的活化(Kunapuli，S.P.(1998)，Trends Pharmacol.Sci.19：391-394；Kunapuli，S.P.&Daniel，J.L.(1998)Biochem.J.336：513-523；Jantzen，H.M.等人(1999)Thromb.Hemost.81：111-117)。一种受体似乎与克隆的P2Y1受体相同，介导磷脂酶C活化和细胞内钙动员，并且是血小板形状改变所需的。第二种对于血小板聚集而言很重要的血小板ADP受体介导腺苷酸环化酶的抑制。根据其药理学和信号传导性质，这种受体暂时被称为P2YADP(Fredholm，B.B.等人(1997)TIPS 18：79-82)、P2TAC(Kunapuli，S.P.(1998)，Trends Pharmacol.Sci.19：391-394)或P2Ycyc(Hechier，B.等人(1998)Blood 92，152-159)。最近这种受体的分子克隆(Hollopeter，G.等人(2001)Nature 409：202-207)已揭示其是G-蛋白偶联家族的新成员，并且是噻吩并吡啶类药物噻氯匹定和氯吡格雷的靶标。该受体被命名为P2Y12。
已经报道了许多具有抗血栓形成活性的直接或间接起作用的合成ADP-依赖性血小板聚集抑制剂。口服有效的抗血栓形成的噻吩并吡啶类药物噻氯匹定和氯吡格雷，可能通过形成不稳定的和不可逆的起作用代谢物间接抑制ADP-诱导的血小板聚集、放射性标记的ADP受体激动剂2-甲硫基腺苷5′-二磷酸与血小板的结合以及其它ADP-依赖性事件(Quinn，M.J.&Fitzgerald，D.J.(1999)Circulation 100：1667-1667)。内源性拮抗剂ATP的一些嘌呤衍生物例如AR-C(以前被称为FPL或ARL)67085MX和AR-C69931MX是选择性血小板ADP受体拮抗剂，其抑制ADP-依赖性血小板聚集，在动物血栓形成模型中有效(Humphries等人(1995)，TrendsPharmacol.Sci.16，179；Ingall，A.H.等人(1999)J.Med.Chem.42，213-230)。已经公开了一些作为P2T-拮抗剂的新的三唑并[4，5-d]嘧啶类化合物(WO99/05144)。在WO 99/36425中也已经公开了作为血小板ADP受体抑制剂的三环化合物。这些抗血栓形成化合物的靶标似乎是P2Y12(介导腺苷酸环化酶抑制的血小板ADP受体)。
尽管有这些化合物，但是仍然需要更有效的血小板ADP受体抑制剂。特别是需要可用于预防和/或治疗心血管疾病、特别是与血栓形成有关的疾病的具有抗血栓形成活性的血小板ADP受体抑制剂。
此外，尽管对于有效的药物来说生物活性是一个必要条件，但该化合物必须能够大规模生产，且该化合物的物理性质能显著影响所配制的活性成分的有效性和成本。酸性和碱性化合物的盐可以改变或改善母体化合物的物理性质。然而由于没有可靠的方法预测在剂型中某种盐对母体化合物性质的影响，所以这些成盐剂必须由药物化学家凭经验确定。令人遗憾的是，缺乏可简化选择程序的有效筛选技术(G.W.Radebaugh和L.J.RavinPreformulation.Remington：The Science and Practice of Pharmacy(药学科学与实践)；A.R.Gennaro编辑；Mack Publishing Co.Easton，Pa.，1995；第1456-1457页)。
在可药用的化合物中经常遇到无定形和不同结晶形式的(多晶型的或溶剂化物形式的)盐。多晶现象是任何元素或化合物以多于一种晶格排列结晶的能力。对于相同化合物的不同固体形式来说，包括溶解度、熔点(DSC分析中开始吸热点)、密度、硬度、晶形和稳定性在内的物理性质可以不同。
晶体和无定形形式可以通过散射技术例如X射线粉末衍射，通过光谱法例如红外、固态13C和19F核磁共振波谱法，及通过热技术例如差示扫描量热法(DSC)或热重分析法(TGA)进行表征。尽管在不同批次的多晶型物的X射线粉末衍射图中峰强度可以略微改变，但峰位置对于特定结晶固体形式而言是特征性的。此外，红外、拉曼和热分析法已被用于阐释晶形之间的不同。结晶和无定形形式可以通过X射线粉末衍射图的数据来测定，所述X射线粉末衍射图根据本领域已知的方法测定(参见J.Haleblian，J.Pharm.Sci.1975 64：1269-1288和J.Haleblain和W.McCrone，J.Pharm.Sci.1969 58：911-929)。
如在U.S.专利申请11/556,490中所论述的，式I化合物的盐的游离酸化合物(式II)是有效的血小板ADP受体抑制剂。令人惊奇并意外地是，已发现本发明的某些盐及晶形显示出改善的性质，这些性质非限制性地包括结晶性、热、水解与吸湿稳定性以及纯度。此外，本发明式I的盐可用于治疗在哺乳动物中不希望的血栓形成。
发明概述
一方面，本发明提供了包含式I化合物与选自钙、L-赖氨酸、铵、镁、L-精氨酸、氨丁三醇、N-乙基葡糖胺和N-甲基葡糖胺的离子的盐：
另一方面，本发明提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的钠、钾、钙、L-赖氨酸、铵、氨丁三醇盐的结晶固体形式。
另一方面，本发明提供了用于预防或治疗哺乳动物中血栓形成和血栓形成相关病症的药物组合物。所述药物组合物包含治疗有效量的一种或多种式(I)的盐或其可药用盐，以及可药用载体或赋形剂。本发明还提供了通过施用治疗有效量的式(I)的盐来预防或治疗哺乳动物中血栓形成和血栓形成相关病症的方法。
另一方面本发明提供了用于制备式(I)的盐、它们的结晶固体形式和无定形形式以及用于预防或治疗哺乳动物中血栓形成和血栓形成相关病症的药物组合物。
在一些实施方案中，本发明提供了用于预防或治疗在哺乳动物中以不希望的血栓形成为特征的病症的方法，其包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的式I的盐或具有结晶多晶型物形式的包括钠和钾盐的式I的盐。在另一个实施方案中，所述病症选自急性冠脉综合征、心肌梗死、不稳定型心绞痛、顽固性心绞痛、溶栓治疗后或冠脉血管成形术后发生的闭塞性冠脉血栓、血栓形成介导的脑血管综合征、栓塞性卒中、血栓形成性卒中、短暂性脑缺血发作、静脉血栓形成、深部静脉血栓形成、肺栓子(pulmonaryembolus)、凝血病、弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜、闭塞性血栓性血管炎、与肝素诱导的血小板减少有关的血栓形成性疾病、与体外循环有关的血栓形成性并发症、与器械操作(instrumentation)有关的血栓形成性并发症，及与假器官装置适配有关的血栓形成性并发症。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于抑制血液样品凝结的方法，其包括将所述样品与包含式I的盐的盐接触的步骤，所述式I的盐包括结晶固体形式的式I的盐。
在另一个的实施方案中，本发明提供了用于制备式I的盐的方法，其包括在形成式I的盐的条件下将碱与式II化合物或其盐接触
Figure G2008800226049D00051
在一些实施方案中，所述条件是亲核加成反应条件，且包括非极性、非质子溶剂的使用。在一些其他实施方案中，所述溶剂选自：四氢呋喃、乙醚、二甲氧基甲烷、二噁烷、己烷、甲基叔丁基醚、庚烷和环己烷。在一些实施方案中，式II化合物的盐是酸盐。
在一些实施方案中，本发明提供了制备式I的盐的方法，其中所述方法在10℃以下的温度进行。
在进一步的实施方案中，本发明提供了制备式I的盐的方法，其中具有式I结构的化合物的收率至少为50％。在另一个实施方案中，具有式I结构的化合物的收率至少为65％。在另一个实施方案中，具有式I结构的化合物的收率至少为75％。
在另一个实施方案中，本发明提供了以克的规模或千克的规模制备式I的盐的方法。
附图简述
图1提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾和/或钠盐的结构。
图2a显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的结晶固体A型的X射线粉末衍射图(XRPD)。图2b显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的结晶固体A型的XRPD，其显示峰位信息。
图3a显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的结晶固体B型的XRPD。图3b显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的结晶固体B型的XRPD，其显示峰位信息。
图4显示无定形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的XRPD。
图5显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的结晶固体A型的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)。
图6显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的结晶固体B型的傅里叶变换红外光谱(FT-IR)。
图7显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的无定形形式的FT-IR。
图8显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的1H-NMR。
图9显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的1H-NMR。
图10显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的1H-NMR。
图11提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物(A型)的结晶固体A型的重量法蒸气吸附(GVS)数据。
图12a提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的结晶固体B型的重量法蒸气吸附(GVS)数据。在GVS实验完成后回收样品，并通过XRPD重新检测(B型)。结果(图12b)显示在GVS实验期间没有相变发生。在约5.4°2θ处的峰强度的改变是优选的取向作用。
图13提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的无定形形式的重量法蒸气吸附(GVS)数据。
图14提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的结晶固体A型的差示扫描量热法(DSC)数据。
图15提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的结晶固体A型的TGA数据。
图16提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐半水合物的结晶固体B型的DSC数据。
图17提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的结晶固体B型的TGA数据。
图18提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-一氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的无定形形式的DSC数据。
图19提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐的无定形形式的TGA数据。
图20a显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐(C型)的XRPD。图20b显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(C型)的XRPD。
图21提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(C型)的VT XRPD实验。显示C型去溶剂化成为无定形相。
图22提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(C型)的1H NMR。NMR确定样品中唯一的溶剂是水且因此从TGA重量损失确定具有3.66摩尔的水(NMR是在DMSO中进行的，因此其信号不可用于对溶剂含量进行定量)。还进行VT XRPD实验以检测是否有无水形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐三水合物(图21)。
图23提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐三水合物(C型)的重量法蒸气吸附(GVS)数据。C型从40％RH至90％RH显示低吸收(以重量计约1％)。然而，脱附周期显示当干燥至0％RH时，样品减少其重量的约8wt％，然后当湿度增加至40％RH时，样品没有达到如所提供的材料一样的水合程度。
图24提供了GVS后重新测定的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐三水合物(C型)的XRPD。该测定显示在GVS实验后样品结晶度降低，同时形式上有细微变化。
图25显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐三水合物C型的DSC和TGA数据。DSC实验显示吸热始于56℃吸热为267Jg-1，与之相关在TGA中重量减少为10.5w％。
图26提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(D型)的XRPD。
图27通过XRPD显示的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(D型)在40℃/75％RH条件下的稳定性。在储存时所述固体转化为无定形相。
图28提供了钾盐的1H NMR谱。
图29提供了[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(D型)的DSC和TGA数据。前两次重量减少可能是由于溶剂的减少(THF、IPA和水)。
图30显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐(A型)的XRPD。
图31通过XRPD显示的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐(A型)在40℃/75％RH条件下的稳定性。在研究的前3天后样品为无定形，且在所述研究的接下来的4天保持无定形。
图32显示钠盐的1H NMR谱。
图33显示钠盐A型的TGA(绿线)和DSC(蓝线)。
图34显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐(B型)的XRPD。
图35显示Na盐B型的XRPD。
图36显示Na盐B型的TGA图。
图37显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-一氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐(C型)的GVS。
图38显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐(A型)的XRPD。
图39通过XRPD显示的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐(A型)的稳定性。该样品在40℃/75％RH条件下3天后、再在60℃/75％RH四天后保持稳定。
图40显示钙盐A型的1H NMR谱。
图41显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐(A型)的GVS。
图42显示钙盐A型的TGA(绿线)和DSC(蓝线)。
图43显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐(A型)的XRPD。
图44通过XRPD显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐(A型)的稳定性。该样品在40℃/75％RH条件下3天后有一些变化，但再在60℃/75％RH四天后没有进一步的变化。
图45显示氨丁三醇盐A型的1H NMR谱。
图46显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐(A型)的GVS。
图47显示氨丁三醇盐A型的TGA(绿线)和DSC(蓝线)。
图48显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲铵盐(A型)的XRPD。
图49通过XRPD显示的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐(A型)的稳定性。黑色衍射图是干燥铵盐A型的图，红色衍射图是在40℃/75％RH条件下3天后的样品的图，且蓝色衍射图是再在60℃/75％RH的条件下10天后的样品的图。
图50显示半铵盐A型的1H NMR谱。
图51显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐(A型)的GVS。
图52显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐(A型)的XRPD。黑色衍射图是干燥半铵盐A型的图，且红色衍射图是GVS实验后的样品的图。
图53显示半铵盐A型的TGA(绿线)和DSC(蓝线)。
图54显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐(B型)的XRPD。
图55通过XRPD显示的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲铵盐(B型)的稳定性。黑色衍射图是干燥铵盐A型的图，且红色衍射图是在60℃/75％RH的条件下10天后的样品的图。
图56显示半铵盐B型的1H NMR谱。
图57显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐(B型)的GVS。
图58显示半铵盐B型的TGA(绿线)和DSC(蓝线)。
图59显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-赖氨酸盐一水合物(A型)的XRPD。
图60显示无定形L-赖氨酸盐的1H NMR谱。
图61显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲镁盐(A型)的XRPD。
图62显示镁盐A型的1H NMR谱。
图63显示镁盐A型的TGA图。
图64显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-精氨酸盐(无定形形式)的三个XRPD：黑色衍射图得自乙腈/水中的L-精氨酸，红色衍射图得自异丙醇中L-精氨酸，且蓝色衍射图得自水中的L-精氨酸。
图65显示从乙腈/水中得到的无定形形式的L-精氨酸盐的1H NMR谱。
图66显示从乙腈/水中得到的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-乙基葡糖胺盐(无定形形式)的XRPD。
图67显示从THF中得到的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-甲基葡糖胺盐(无定形形式)的XRPD。
图68显示从THF中得到的无定形形式的N-甲基葡糖胺盐的1H NMR谱。
发明详述
本发明涉及磺酰基脲类化合物和它们的衍生物及其结晶固体形式和无定形形式，以及它们的制备。已将所选择[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的盐分离为具有高纯度的结晶固体。本发明的盐可用于治疗和预防哺乳动物中不希望的血栓形成及血栓形成相关病症。
I.定义
除非另外明确指出，否则依据本发明且如本文中所用的那样，以下术语定义为以下含义。
本文所使用的术语“一种”或“一个”实体是指一种/个或多种/个该实体；例如，一种化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。因此，术语“一种”(或“一个”)、“一种或多种”和“至少一种”在本文中可以互换使用。
本文所使用的术语“约”是指从不同的仪器、样品和样品制备物得到的测量结果中可见的偏差。这些偏差可包括例如热测量法的依数性质。对于结晶固体形式而言，不同X-射线衍射仪和样品制备物中的通常偏差为约0.2°2θ。拉曼分光光度计和IR分光光度计的通常偏差是分光光度计分辨率的约两倍。使用的分光光度计的分辨率为约2cm-1。
术语“溶剂化物”是指本发明化合物或其盐，其还包含化学计量或非化学计量的溶剂，所述溶剂通过非共价结合或通过占据晶格中空穴而成为晶格的一部分。
本文所使用的术语“水合物”是指本发明的化合物或其盐，其还包含化学计量或非化学计量的水，所述水通过非共价结合或通过占据晶格中空穴而成为晶格的一部分。水合物通过一或多个分子的水与一种物质结合形成，在该物质中水保持其分子状态H2O，该结合能够形成一个或多个水合物。
本文所使用的术语“无水的”是指晶格中不含溶剂的本发明化合物或其盐。
本文所使用的术语“干燥”是指从本发明化合物除去溶剂和/或水的方法，除非另有说明，该方法可以在大气压下或减压和加热或不加热时进行，直至保留的溶剂和/或水的水平达到可接受水平。
本文所使用的术语“多晶型物”是指其中化合物能以不同晶体堆积排列结晶的晶体结构，所有的晶体堆积排列都具有相同的元素组成。不同的晶形可以具有不同的X射线衍射图、红外光谱、熔点/吸热起始点和最大吸热值、密度、硬度、晶形、光学和电性能、稳定性和溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度、和其他因素可影响晶形的产生。
本文所使用的术语“固体形式”是指其中化合物能以不同堆积排列结晶的晶体结构。固体形式包括如本发明中所使用的那些术语的多晶型物、水合物和溶剂化物。相同化合物的不同的固体形式，包括不同的多晶型物，可展现不同的X射线粉末衍射图和不同的光谱，包括红外、拉曼、DSC和固态NMR的。它们的光学性质、电性质、稳定性和溶解度性质也可不同。
本文所使用的术语“表征”是指选择得自分析测量的数据以区别化合物的一种固体形式与化合物的其它固体形式，所述分析测量例如X射线粉末衍射、DSC、红外光谱、拉曼光谱和/或固态NMR。
术语“哺乳动物”非限制性地包括人类、家养动物(例如，狗或猫)、农畜(牛、马或猪)、猴、兔、小鼠和实验动物。
术语“烷基”是指饱和的脂肪族基团，其包括具有指定数目碳原子的直链、支链和环状基团，或如果碳原子数目没有指定，则具有多至约12个碳原子。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。
术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)依据它们通常的意义使用，且指这些烷基分别经由氧原子、氨基或硫原子连接于分子的剩余部分。简言之，术语C1-6烷基氨基意在包括直链、支链或环烷基或其组合，如甲基、乙基、2-甲基丙基、环丁基和环丙基甲基。
本文所使用的术语“C1-C6烷基氨基”或“C1-6烷基氨基”是指连接于分子的剩余部分的氨基部分，其中氮被一个或两个如上文定义的C1-6烷基取代基所取代。
除非另有说明，术语“卤代”或“卤素”自身或作为另一个取代基的部分，是指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语如“卤代烷基”意在包括一卤代烷基多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”意在包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
术语“可药用衍生物”包括根据本文所述化合物上存在的特定取代基用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明化合物包含相对酸性的官能团时，能在无溶剂或在适合的惰性溶剂中通过将中性形式的所述化合物与足够量的所需碱接触得到碱加成盐。可药用碱加成盐的实例包括衍生自无机碱的那些，如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。特别优选的是钾、钠、钙、铵和镁盐。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括以下碱的盐：伯、仲和叔胺，被取代的胺，包括天然存在的被取代的胺，环胺以及碱性离子交换树脂，如异丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙基胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、氨丁三醇(trimetharnine)、二环己基胺、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-乙基葡糖胺、N-甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤类、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂(polyamine resin)、氨基酸类如赖氨酸、精氨酸、组氨酸等。特别优选的有机无毒性碱是L-氨基酸类如L-赖氨酸和L-精氨酸、氨丁三醇、N-乙基葡糖胺和N-甲基葡糖胺。当本发明化合物包含相对碱性的官能团时，能在无溶剂或在适合的惰性溶剂中通过将中性形式的所述化合物与足够量的所需酸接触得到酸加成盐。可药用酸加成盐的实例包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及衍生自相对无毒有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的那些盐。还包括氨基酸的盐如精氨酸盐等，以及有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见，例如，Berge，S.M.等人，“Pharmaceutical Salts(药用盐)”，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19；Bundgaard，H.编辑，Design of Prodrugs(前药设计)(Elsevier Science Publishers，阿姆斯特丹1985))。本发明某些特定化合物既包含碱性官能团和又包含酸性官能团，使得所述化合物可以转化为碱加成盐或酸加成盐。
可以通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生中性形式的化合物。化合物的母体形式与各种盐形式在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解度方面不同，但是对于本发明的目的而言，盐等价于化合物的母体形式。
除盐形式外，术语“可药用衍生物”还包括前体药物形式的化合物。本文所述的化合物的“前体药物”是在生理条件下易于发生化学变化从而提供本发明的化合物的那些化合物。此外，在体外环境中，前体药物也能通过化学或生物化学方法被转化成本发明的化合物。例如，当被放置在具有适宜酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前体药物可以被缓慢转化成本发明的化合物(参见Bundgaard，H.编辑，Design of Prodrugs(前药设计)(Elsevier Science Publishers，阿姆斯特丹1985))。
“可药用酯”是指在酯键的水解后保持羧酸或醇的生物学有效性和性质、且不是生物学或其他方面不希望的那些酯。如前体药物一样对可药用酯的描述参见上述Bundgaard，H.。这些酯一般由相应的羧酸和醇形成。通常，酯的形成可以经由常规合成技术完成(参见，例如，March AdvancedOrganic Chemistry(高等有机化学)，第三版，第1157页(John Wiley&Sons，纽约1985)和该文所引用的参考文献，以及Mark等人，Encyclopedia ofChemical Technology(化学技术百科全书)，(1980)John Wiley&Sons，纽约)。酯的醇组分通常包括：(i)可以或不可以包含一个或多个双键且可以或不可以包含支链碳的C2-C12脂肪醇；或(ii)C7-C12芳族或杂芳族醇。本发明还涉及既是如本文所述的酯同时又是其可药用酸加成盐的那些组合物的应用。
“可药用酰胺”是指在酰胺键的水解后保持羧酸或胺的生物学有效性和性质、且不是生物学或其他方面不希望的那些酯。如前体药物一样对可药用酰胺的描述参见上述Bundgaard，H.，编辑。这些酰胺一般由相应的羧酸和胺形成。通常，酰胺的形成可以经由常规合成技术完成。参见，例如，March等人，Advanced Organic Chemistry(高等有机化学)，第三版，第1152页(John Wiley&Sons，纽约1985)，以及Mark等人，Encyclopedia ofChemical Technology(化学技术百科全书)，(John Wiley&Sons，纽约1980)。本发明还涉及既是如本文所述的酰胺同时又是其可药用酸加成盐的那些组合物的应用。
术语“可药用衍生物”还包括以非溶剂化物形式以及溶剂化物形式存在的本发明化合物，包括水合物形式。通常，溶剂化物形式等价于非溶剂化物形式，且旨在将其包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多种晶形或无定形形式存在。通常，对于本发明所涉及的应用而言，所有物理形式都是等价的，且旨在将其包括在本发明的范围内。
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(手性中心)或双键；旨在将外消旋物、非对映体、几何异构体和单个异构体(例如，单独的对映体)全都包括在本发明的范围内。
本发明化合物还可在一个或多个构成该类化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可以用放射性同位素例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)对化合物进行放射性标记。不管是否为放射性的，本发明的化合物的所有同位素变型都被包括在本发明的范围内。
对于本文目的，“生物学性质”是指本发明化合物直接或间接实现的体内效应器或抗原的功能或活性，其通常由体外试验证明。效应器功能包括受体或配体结合、任何酶活性或酶调节活性、任何载体结合活性、任何激素活性、在促进或抑制细胞与细胞外基质或细胞表面分子粘着中的任何活性、或任何的结构上的作用。抗原功能包括拥有能够与出现的针对性抗体反应的表位或抗原位点。
术语“疗法”或“治疗”是指个体如哺乳动物中疾病或病症的治疗，其包括：
预防或防护以避免疾病或病症，即使得临床症状不形成；
抑制疾病或病症，即阻止或抑制临床症状的发展；和/或
缓解疾病或病症，即使临床症状消退。
本文中使用的术语“预防”是指预防性治疗有需要的患者。预防性治疗可以通过对处在罹患疾病危险下的个体提供适当剂量的治疗剂来实现，从而实质上防止疾病的发作。
本领域技术人员会理解在人类药物中，不可能总能将“预防”和“抑制”区分开，因为最终诱发的事件可能是未知的、潜伏的，或直至所述事件出现之后，患者是不确定的。因此，用于本文的术语“预防”旨在作为“治疗”的一个要素以包括本文定义的“预防”和“抑制”。用于本文的术语“防护”意在包括“预防”。
术语“治疗有效量”是指将本发明的盐施用于需要本文所定义的治疗的个体时，足以实现所述治疗方法的本发明的盐的量，本发明的盐通常作为药物组合物施用。治疗有效量会根据被治疗的个体和疾病状况、个体的重量和年龄、疾病状况的严重性、选择的特定化合物、随后的给药方案、施用时间安排和施用方式等而变化，这些都可以由本领域的普通技术人员容易地决定。
本文中使用的术语“病症”是指使用的本发明的化合物、组合物和方法所针对的疾病状态。
本文所用的术语“ADP-介导的疾病或病症”等是指以低于或高于正常ADP活性为特征的疾病或病症。ADP-介导的疾病或病症是其中ADP的调节导致对基础病症或疾病的某些作用(例如，ADP抑制剂或拮抗剂在至少一些患者中导致患者健康的一定程度的改善)的疾病或病症。
本文中使用的术语“血液样品”是指采自个体的全血，或任何血液成分，包括血浆或血清。
在本发明的化合物中，与四个不相同的取代基键合的碳原子是不对称的。因此，化合物可以以其非对映体、对映体或其混合物的形似存在。本文所述的合成可以使用消旋物、对映体或非对映体作为起始原料或中间体。得自上述合成的非对映体产物可通过色谱法或结晶法分离，或通过本领域已知的其他方法分离。同样地，可使用相同的技术或通过本领域已知的其他方法分离对映体产物的混合物。每一个不对称碳原子，当其存在于本发明的化合物中时，可以是两种构型(R或S型)中的一种，二者都包括在本发明的范围内。
II.游离酸化合物
式(II)化合物包括具有下式结构的化合物：
III.游离酸化合物的制备
流程1阐明了制备某些式I和II化合物的的方法，其中Ar是亚苯基。
流程1
Figure G2008800226049D00182
式II化合物可以通过本领域技术人员已知的方法通过还原2-硝基-苯甲酸甲酯化合物1得到苯胺2来制备。(还参见公开的专利申请US2002/077486)。例如，一种还原硝基的方法可以通过氢化反应进行。该氢化反应用适合的催化剂(例如，10％Pd/C或Pt(s)/C)在氢气中且在适合的溶剂中(一般在醇中、优选地在乙醇中)在室温下进行。用适当取代的异氰酸芳基酯处理化合物2(方法A)得到中间体脲3a。或者，可以通过用三光气在碱如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下、在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和MeCN中、在适合的温度下、优选在20℃下处理化合物2，随后用被取代的苯胺进行处理来形成脲3a(方法B)。通过方法A或方法B制备的通常未经进一步纯化的脲3a可以进行加热或经碱(如N-甲基吗啉(NMM)或聚苯乙烯-NMM(PS-NMM))诱导的关环反应以得到喹唑啉二酮4a。可将化合物4a的硝基通过本领域技术人员已知的方法还原来得到游离氨基。例如，还原的方法可以通过氢化反应用适合的催化剂(例如，10％披钯碳)在适合的溶剂、通常是在醇中进行。磺酰基脲连接基团的形成可以通过以下步骤完成：用被取代的噻吩-2-磺酰胺、N，N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯和四甲基胍在二氯甲烷中预混合的溶液处理被还原的产物苯胺5a，随后用二氯甲烷中的TFA在室温下处理来得到式II的磺酰基脲。或者，可以通过将苯胺5a和5-氯-噻吩-2-磺酰基氨基甲酸乙酯在适合的溶剂中反应而形成磺酰基脲连接基团，所述溶剂非限制性地包括甲苯、乙腈、1，4-二噁烷和DMSO。
流程2阐明了作为选择的制备式II化合物的方法，其中例如L1是卤素、烷基磺酸基、卤代烷基磺酸基和芳基磺酸基。
流程2
Figure G2008800226049D00201
可以通过用三光气或氯甲酸对硝基苯基酯在碱如三乙胺和/或二异丙基乙胺的存在下、在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和/或MeCN中、在适合的温度、通常在约20℃处理化合物2，随后用被适当保护的苯胺处理来制备脲3b(方法B)。通常未经进一步处理的脲3b可以经碱诱导的关环反应得到中间体喹唑啉二酮4b。可以使用适合所使用的保护基团的标准技术来除去化合物4b的保护基团。例如可以通过用在二噁烷中的4N HCl处理化合物4b来除去BOC保护基团。然后通过在约120℃用在DMSO中的甲胺处理以置换化合物5b的C-7氟而得到苯胺5c。目标磺酰基脲II的制备可以通过用5-氯-噻吩-2-磺酰基氨基甲酸乙酯在适合的溶剂如二甲亚砜、二噁烷和/或乙腈中加热处理苯胺5c来完成。用酸或碱处理本发明的化合物可以分别形成可药用酸加成盐和可药用碱加成盐，其各自如本文所定义。包括本文所定义的本领域已知的多种无机和有机酸和碱可以用于影响向盐的转化。
流程3阐明了作为选择的制备式II化合物的方法，其中例如L1是卤素、烷基磺酸基、卤代烷基磺酸基和芳基磺酸基且M是K。
流程3
Figure G2008800226049D00221
可以通过用氯甲酸对硝基苯基酯在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和/或MeCN中、在适合的温度、通常在约20℃处理化合物2，随后用被适当保护的苯胺处理来制备喹唑啉二酮5b(方法B)。然后通过在约120℃用在DMSO中的甲胺处理以置换化合物5b的C-7氟而得到苯胺5c。目标磺酰基脲II的制备可以通过用5-氯-噻吩-2-磺酰基氨基甲酸乙酯在适合的溶剂如二甲亚砜、二噁烷和/或乙腈中加热处理苯胺5c来完成。依据本发明，式(I)化合物可以被进一步处理以形成可药用盐，例如I.用酸或碱处理本发明的化合物可以分别形成可药用酸加成盐或可药用碱加成盐，其各自如上文所定义。包括本文所定义的本领域已知的多种无机和有机酸和碱可以用于影响向盐的转化。
式II化合物可以使用本领域已知的通常的分离和纯化技术进行分离，所述技术包括，例如色谱法和重结晶法。
IV.式I的盐的制备
依据本发明的一个实施方案，可以对式II化合物进行进一步处理以形成可药用盐。用酸或碱处理本发明的化合物可以分别形成可药用酸加成盐或可药用碱加成盐，其各自如上文所定义。这些盐优选地提供需要的结晶度、热、水解和吸湿稳定性及纯度。包括本文所定义的本领域已知的多种无机和有机酸和碱可以用于影响向盐的转化。在一个实施方案中，所述盐非限制性地包括钠和钾盐。在另一个实施方案中，所述盐非限制性地包括钙、L-赖氨酸、铵、镁、L-精氨酸、氨丁三醇、N-乙基葡糖胺和N-甲基葡糖胺盐。本领域技术人员会识别可用于制备可用于本发明的包含式I化合物的盐的其他的碱。还可理解能将本发明的盐容易地转化为本发明的其他盐。
进行了本领域技术人员所知道的测试以评价所述盐的热和水解稳定性。这些测试在下文有更充分的论述。
多种方法可用于上文所述盐的制备且为本领域技术人员所知。例如，式II化合物与一个或多个摩尔当量的所需碱在不溶解所述盐的溶剂或溶剂混合液中或在溶剂如水中反应，然后通过蒸发、蒸馏或冻干除去溶剂。或者，可以将式II化合物通过离子交换树脂而形成所需盐，或可以使用相同的通用方法将产物的一种盐形式转化为另一种。
可以依据几种不同工艺中的任何一种以克的规模(＜1kg)或千克的规模(＞1kg)制备式I的盐。
多种溶剂可以被用于如上文所述的本发明方法，所述溶剂非限制性地包括非极性的、非质子性的溶剂如四氢呋喃(THF)、乙醚、二甲氧基甲烷、二噁烷、己烷、甲基叔丁基醚、庚烷和环己烷。此外，脲的形成可以在10℃以下进行。本领域技术人员会认识到本发明的方法能使用多种其他溶剂、试剂和反应温度来实施。
使用本发明的方法可以以50％以上的收率制备式I的盐。在一些情况下，可以以65％以上的收率制备式I化合物。在其它情况下可以以75％以上的收率制备式I化合物。本领域技术人员会认识到式I的盐可以经由其他化学工艺以克和千克的规模来制备。
本发明还提供式(I)化合物的可药用的同分异构体、水合物和溶剂化物。式(I)化合物还可以以不同的异构形式和互变异构形式存在，其包括所述异构体和互变异构体的可药用盐水合物和溶剂化物。例如，虽然本发明提供的一些化合物是每分子式II化合物具有两分子水的二水合物，本发明还提供了为无水、半水合物、一水合物、三水合物、倍半水合物等形式的化合物。
IV.本发明结晶固体和无定形的实施方案和它们的制备
本发明还提供了结晶固体和/或无定形的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的盐和它们制备方法，及包含这些形式的药物组合物。这些盐具有以下通式：
Figure G2008800226049D00241
其中M是选自以下的离子：钙、L-赖氨酸、铵、镁、L-精氨酸、氨丁三醇、N-乙基葡糖胺和N-甲基葡糖胺。在其他实施方案中，M选自钠或钾。相同化合物的不同结晶形状能影响到一种或多种不同的物理性质，如稳定性、溶解度、熔点、堆密度、流动性质、生物利用度等。
在用于制备活性药物成分(API)的方法的开发中，有两个因素非常重要：杂质分布与化合物的晶体形态学。最初的分离和结晶操作结果显示[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲占99.6％。优选地API具有低于0.2％的杂质水平并处于热力学最稳定结晶固体形式。分离和结晶操作表明有[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的钾盐的无定形相和至少四种结晶固体形式(称为A、B、C和D型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的钠盐的无定形相和至少三种结晶固体形式(称为A、B和C型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的钙盐的至少两种结晶固体形式(称为A和B型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的铵盐的至少两种结晶固体形式(称为A和B型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的L-赖氨酸盐的至少一种结晶固体形式(称为A型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的镁盐的至少一种结晶固体形式(称为A型)，[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的氨丁三醇盐的至少一种结晶固体形式(称为A型)，以及[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的L-精氨酸盐、N-乙基葡糖胺盐和N-甲基葡糖胺盐的至少一种无定形形式。
可以通过几种技术中一种或多种描述本发明的固体形式，所述技术包括X射线粉末衍射、拉曼光谱、IR光谱和热分析法。此外，这些技术的组合可以用于描述本发明。例如，一个或多个X射线粉末衍射图结合一个或多个拉曼光谱可以用于描述本发明的一种或多种固体形式，在某方面将其与其它固体形式区别开。
尽管整个衍射图或光谱表征了形式，但不需要只依靠整个衍射图或光谱来表征固体形式。制药领域的普通技术人员认可可使用衍射图或光谱的一部分来表征固体形式，条件是所述部分将被表征的固体形式与其它固体形式区别开。因而，一个或多个X射线粉末衍射图可以单独地用于表征固体形式。同样的，一个或多个IR光谱或拉曼光谱也可以单独地用于表征固体形式。上述表征通过比较各形式中的X-射线、拉曼和IR数据以决定特征峰来完成。
在所述表征中还可以结合来自其他技术的数据。因而，可以依赖一个或多个X射线粉末衍射图及例如拉曼或IR数据以表征一种形式。例如，如果用一个或多个X-射线衍射峰表征一种形式，则还可以考虑拉曼或IR数据表征该形式。考虑拉曼数据有时是有帮助的，例如在药物制剂中。
通过使用不同的结晶条件分离多晶型物。对于钾盐，(1)从甲醇中结晶粗的湿-滤饼并将其干燥以除去溶剂后分离结晶形式A，(2)从EtOH/H2O结晶或通过用甲醇研磨来形成结晶固体B型，(3)通过在水中研磨或混悬B型形成结晶固体C型，或通过在环境条件下在水中混悬无定形钾盐，其在16小时内转化为C型。从THF中的KOH结晶还可以形成D型。
将钾盐混悬于甲醇中，然后加热直至观测到成为澄清溶液。随后冷却并分离得到的结晶固体，并在室温下减压干燥，得到结晶固体钾盐A型。A型是单钾盐2.5水合物。B型是单钾盐半水合物。图14和2分别显示结晶固体A型的DSC图和X-射线粉末衍射图。[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐A型的差示扫描量热法(DSC)确定无水盐在238℃熔化。记录了大的分解峰，起始温度约300℃。
在X射线粉末衍射图中，在约9.5和25.5处的峰为该图的主要特征(对X射线粉末衍射图的理论的论述参见H.P.Klug和L.E.Alexander，J.Wiley，″X-射线衍射方法″，纽约(1974))。相对于B型，在约9.5°2θ和25.5°2θ处的峰表征了A型，因为B型在A型的两个峰的0.2°2θ内没有峰，0.2°2θ为X射线粉末衍射峰近似精确度的两倍。由于在任何给定的X射线粉末衍射图中的峰的典型偏差为约0.2°2θ，所以当选择峰来表征多晶型物时，选择离另一多晶型物的峰至少两倍于所述数值(即，0.4°θ)的峰。因此，在一个具体的多晶型物X射线图中，与另一种多晶型物中的峰相差至少0.4°θ的峰可被认为是能单独或与另外的峰一起用于表征该多晶型物的峰。表1和2确定了A型和B型的主要峰。从列表可看出，当取一个小数位时，在约25.5°2θ(在表中为25.478°2θ)处的峰，与B型中的任何峰的距离大于0.2°2θ。因此在约25.5°2θ处的峰可用于区分A型和B型。在约9.5°2θ(在表1中为9.522°2θ)的峰是图2的A型X射线粉末衍射图中的最强峰，并且与B型中的任何峰相距大于0.2°2θ。因此在约9.5°2θ和25.5°2θ处的A型的峰将A型与B型区分开。在该方法的这一阶段分离的固体形式相对每一分子盐含有约2.5分子的水。
表1钾盐A型的XRPD峰(°2θ)和强度％列表数据，从图2b得出。
表2钾盐B型的XRPD峰(°2θ)和强度％列表数据，从表3b得出。
Figure G2008800226049D00272
在XRPD图中，优选取向能影响峰强度，且在一些情况下能影响峰位置。在钾盐的情况下，优选取向对较低角的影响最显著。优选取向使该区域内的一些峰减弱(或增强)。固体形式中晶体习性没有明显地差异；已经观察了各种形式，包括针状、刀片形、片形和不规则形状粒子的各种习性。
图16和3分别显示另一个结晶固体的DSC图和X-射线粉末衍射图。当除去残留水时可以观测到这些结果。在DSC图中，在约286℃的吸热起始是显著的，因为脱水的A型在246℃熔化。在X射线粉末衍射图中，相对于A型而言，在约20.3°2θ和25.1°2θ的两个峰也表征了B型，因为A型在离B型的这两个特征峰的0.2°2θ(X射线粉末衍射峰近似精度)之内没有峰(参见表1和2)。从列表可看出，当取一个小数位时，在约20.3°2θ和25.1°2θ(在表中分别为20.328°2θ和25.087°2θ)处的峰，与A型中的任何峰的距离大于0.2°2θ。因此在约20.3°2θ和25.1°2θ处的峰能用于区分B型和A型。
钾盐C和D型
图25和20分别显示另一种结晶固体C型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约56℃的吸热起始是显著的。
图29和26-27别显示另一种结晶固体D型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在约132℃的吸热起始是显著的。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为C型和D型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图26或27一致的X射线粉末衍射图和
(ii)基本上与图29一致的DSC扫描图；
该结晶固体形式在本文中被称为D型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约56℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为C型。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图20b一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图25一致的DSC图；该结晶固体形式在本文中被称为C型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约132℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为D型。
在另一个实施方案本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐。
钠盐A、B和C型
图33和30分别显示另一个结晶固体A型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约162℃的吸热起始是显著的。
图36显示另一个结晶固体B型的X-射线粉末衍射图。
图20a显示另一个结晶固体C型的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为A型、B型和C型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图30一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图33一致的DSC图；
该结晶固体形式在本文中被称为A型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-氧代-1，4-氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约162℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，包括基本上纯的形式，其提供了：
(i)基本上与图36一致的X射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图20a一致的X射线粉末衍射图；该结晶固体形式在本文中被称为C型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约80℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为C型。
钙盐A型
图42和38分别显示另一个结晶固体A型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约125℃的吸热起始是显著的。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为A型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图38一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图42一致的DSC图；
该结晶固体形式在本文中被称为A型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钙盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约125℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
氨丁三醇盐A型
图47和43分别显示另一个结晶固体A型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约165℃的吸热起始是显著的。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为A型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图43一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图47一致的DSC图；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲氨丁三醇盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约165℃的DSC吸热起始点；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
半铵盐A和B型
图53和48分别显示另一个结晶固体A型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约146℃的吸热起始是显著的。
图58和54分别显示另一个结晶固体B型的DSC图和X-射线粉末衍射图。在DSC图中，在约183℃的吸热起始是显著的。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为A型和B型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图48一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图53一致的DSC图；
该结晶固体形式在本文中被称为A型。
在另一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐，包括基本上纯的形式，其提供了在约146℃的DSC最大吸热峰；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式得到[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲半铵盐，包括基本上纯的形式，其提供了以下几项中至少一项：
(i)基本上与图54一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图58一致的DSC图；该结晶固体形式在本文中被称为B型。
L-赖氨酸盐A型
图59显示无定形形式的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-赖氨酸盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-赖氨酸盐，包括基本上纯的形式，其提供了基本上与图59一致的X射线粉末衍射图；该无定形形式在本文被称为无定形。
镁盐A型
图61显示无定形形式的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了被称为A型的新结晶形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲镁盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了结晶固体形式[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲镁盐，包括基本上纯的形式，其提供了基本上与图61一致的X射线粉末衍射图；该结晶固体形式在本文中被称为A型。
L-精氨酸盐无定形形式
图64显示无定形形式的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-精氨酸盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲L-精氨酸盐，包括基本上纯的形式，其提供了基本上与图64一致的X射线粉末衍射图；该无定形形式在本文被称为无定形。
N-乙基葡糖胺盐无定形形式
图66显示显示无定形形式的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-乙基葡糖胺盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-乙基葡糖胺盐，包括基本上纯的形式，其提供了基本上与图66一致的X射线粉末衍射图；该无定形形式在本文被称为无定形。
N-甲基葡糖胺盐无定形形式
图67显示无定形形式的X-射线粉末衍射图。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-甲基葡糖胺盐。
因而在一个实施方案中，本发明提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲N-甲基葡糖胺，包括基本上纯的形式，其提供了基本上与图67一致的X射线粉末衍射图；该无定形形式在本文被称为无定形。
[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的结晶形式A是2.5水合物，其在相对湿度20-90％之间在25℃是稳定的，但在相对湿度20至0％之间在25℃脱水。已发现钾盐的A型与钠盐的无定形形式稳定性相当。在高温(40℃)和高的相对湿度(75％RH)的稳定性加速实验中一周后，观察到任一种盐形式的化学纯度没有改变。钾盐结晶A型的优点是与钠盐的无定形形式相比吸湿性较低，钠盐在40％RH下吸收＞15％w/w的水。K盐均如此？A型和B型对何稳定？钾盐的B型是半水合物且不吸湿。钾盐的B型在较长时段后仍保持较好的物理性质和操作性质。药物剂型物理性质的改善既增强了医师和患者的对其的接受性还增加了治疗成功的可能性。
本发明的其它实施方案包括[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲基及其盐的不同结晶固体形式及无定形形式的混合物。该混合物包括含有选自A型、B型、C型、D型和无定形形式的至少一种固体形式或至少两种固体形式的组合物。可以使用本文所述的任何技术来检测在所述组合物中固体形式的存在。检测可以定性、定量或半定量进行，正如固态分析领域的技术人员对这些术语所使用和理解的那样进行。
对于这些分析，可使用包括参考标准的标准分析技术。另外，所述方法可包括使用如最小二乘法连同光谱学分析技术的技术。这些技术还可用于本发明的药物组合物中。
V.本发明结晶固体形式和无定形形式的制备
此外，本发明涉及用于制备[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾和钠盐结晶固体形式和无定形形式的方法。
本发明化合物的结晶固体形式和无定形形式可以通过下文所述的各种方法制备。可以利用其它的众所周知的结晶方法以及上述方法的变型。
在本发明另外的实施方案中提供了结晶固体A型的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，其通过以下几项中的至少一项获得：
(i)从选自乙醇、甲醇及其组合的至少一种溶剂中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐结晶，并干燥，使得晶体包含一些溶剂；
(ii)在选自乙醇、甲醇及其组合的至少一种溶剂中通过加热使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐重结晶；在约50℃至-10℃的温度下结晶，并干燥，直至晶体包含至少约0.05％的溶剂。
(iii)加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲与四氢呋喃中的氢氧化钠或乙醇钠；在约50℃至25℃的温度下结晶，并干燥，直至晶体包含至少约0.05％的溶剂。
在本发明的另一个实施方案中提供了结晶固体B型的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，其通过以下几项中的至少一项获得：
(i)在乙醇和水的溶剂组合中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐；在约50℃至-10℃的温度下结晶，并干燥，直至晶体包含至少约0.05％的有机溶剂。
(ii)从乙醇和水的组合溶剂中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐结晶，并干燥，使得晶体包含至少约0.05％的有机溶剂。
(iii)在异丙醇中或乙腈和水的溶剂组合中的氢氧化钾或乙醇钾中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲；在约50℃至4℃的温度下结晶，并干燥，直至晶体包含至少约0.05％的有机溶剂。
在本发明的另一个实施方案中提供了结晶固体C型的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐，其通过以下的至少一项获得：
(i)用水中的1.15当量的乙醇钾处理[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲；并在50℃加热达2小时，随后冷却至4℃并干燥。
在本发明的另一个实施方案中，通过在异丙醇中研磨并干燥提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐。
在本发明的另一个实施方案中提供了无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐，其通过以下几项中至少一项获得：(i)在选自异丙醇、乙腈、乙醇及其组合的至少一种溶剂中加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐；并在约50℃至-10℃的温度下结晶；
(ii)从选自异丙醇、乙腈、乙醇及其组合的至少一种溶剂中使[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钠盐结晶；和
(iii)在50℃加热[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲与在四氢呋喃或异丙醇中的氢氧化钠，随后冷却至25℃，过滤并干燥，得到钠盐A型。
此外，本发明涉及上文所述的用于制备[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾和钠盐的结晶固体形式和无定形形式的方法。
结晶固体或无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲可以通过下文在实施例中进一步描述的各种方法来制备。实施例阐明但不限制本发明的范围。结晶固体或无定形形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲可以使用本领域已知的常规的分离和纯化技术分离，所述技术包括例如色谱法和其他方法，以及上述方法的变型方法。
在配制[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐以制备速释珠的过程中，即，采用湿法制粒，随后进行挤出、滚制和干燥，得到的珠的溶出缓慢且不完全。所述珠的XRPD图在补偿背景信号后与[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐B型(初始API形式或游离酸的已知形式)的不一致。
进行了使用研钵和研棒的研磨实验来模拟湿法制粒情况。用35％或90％的水将[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的B型研磨大概10分钟，然后在40℃烘箱中干燥过夜。用90％的水研磨的样品的XRPD结果得到一个完全不同的XRPD图，其与所述珠中的API的形式的XRPD图是一致的。用35％的水研磨的样品得到与B型相似的XRPD图。所述样品还进行了TGA和DSC测定。用75％的水研磨B型10-20分钟并进行分析，给出了XRPD数据，其表明API已转化为无定形形式。将该样品在室温储存1个月后再进行XRPD分析。根据XRPD的结果判断，材料已转化为C型。该结果表明B型向C型的转化可能经由无定形相进行。
已发现将API与Tox配方的稀释剂(即0.5％甲基纤维素和0.1M磷酸钠缓冲液，pH7.4)研磨后，药物颗粒变得非常粘稠，并且在转移和给药期间快速沉淀。重复所述操作，还发现所述悬浮颗粒快速聚结并形成团块，所述团块变得难以再分散。进行研究以确定不引起聚结和固态转化的介质和操作方法。发现通过从所述配方中除去0.5％甲基纤维素，能解决不可逆的聚结问题。另外，如果首先仅采用干燥研磨来减小API的粒度，随后快速将API分散于水性的0.1M磷酸盐缓冲液而不施加显著的机械应力，则API的固体形式能保持为B型达至少6小时。
通过用90％w/w以上的水反复研磨，随后在40℃的烘箱中干燥至少2小时来制备另外的大量C型。在制备的不同阶段，对API的固体状态进行DSC和TGA测定。
在实施例中提供了制备本发明盐的无定形和结晶形式其他方法。
VI.药物组合物
可将本发明的式(I)的盐配制成药物组合物。因此，本发明还提供了用于预防或治疗哺乳动物中血栓形成、特别是涉及血小板聚集的那些病理学状况的药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)的盐或其可药用盐(各自如上文所述)以及可药用的载体或物质。优选地，本发明的药物组合物包含有效抑制哺乳动物特别是人的血小板聚集、更优选ADP依赖性聚集的量的式(I)的盐或其形式。可药用的载体或物质包括本领域已知的那些并且描述如下。
本发明的药物组合物可通过将式(I)的盐与生理学可接受的载体或物质混合来制备。本发明的药物组合物还可以包含赋形剂、稳定剂、稀释剂等，并且可以以缓释制剂或延时释放制剂的形式提供。用于治疗用途的可接受的载体、物质、赋形剂、稳定剂、稀释剂等是药学领域中公知的，并且在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(药学)，Mack PublishingCo.，编辑A.R.Gennaro(1985)中描及。这些物质在所用剂量和浓度下对于接受者是无毒的，并且包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸盐，抗氧化剂如坏血酸，低分子量(约10个残基以下)的肽如聚精氨酸，蛋白质如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白，亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸，单糖、二糖和其他碳水化合物，包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精，螯合剂如EDTA，糖醇如甘露醇或山梨醇，抗衡离子如钠和/或非离子型表面活性剂如吐温或聚乙二醇。
本发明另外的实施方案包括[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲、其盐和包括本文所公开的治疗有效量的盐的结晶和无定形形式在内的各形式的药物组合物。至少一种所述形式的所述的量可以是治疗有效量或可以不是治疗有效量。这种药物组合物可以是固体口服组合物的形式，如片剂或胶囊剂，或吸入用干粉剂。
湿法制粒是用于制备固体口服药物剂型的重要方法。钾盐的C型是在湿法制粒过程中产生的一种独特的形式。C型的存在阻碍了经滚制的珠的溶出，所述珠包含C型直至珠被物理破碎。所述被阻碍的溶出可能是由于在该特定制剂中C型与赋形剂之间特殊的相互作用。用不同赋形剂的组合物可实现改善的或至少等同的溶出性质。
可药用载体
本发明的盐的诊断应用通常采用制剂如溶液剂或混悬剂。
在血栓形成性病症的应对中，本发明的盐可以以组合物形式使用，如用于口服施用的片剂、胶囊剂、锭剂或酏剂，栓剂，可注射施用的灭菌溶液剂或混悬剂等，或被引入到成型制品内。可以向需要所述治疗的个体(典型地是哺乳动物个体)施用将提供最佳效果的、适合剂量的本发明化合物。施用剂量和方法会依据不同个体而变化，且会依据以下因素而定：治疗的哺乳动物种类、其性别、体重、饮食、同时服用的药物、总体临床状态、所使用的特定盐、使用这些盐的特定用途，和药物领域那些技术人员会认识到的其他因素。
用于本发明的胶囊可以使用常规且已知的包胶囊技术来制备，如在Stroud等人，U.S.专利5,735,105中所描述的。胶囊通常是具有足以将含适合剂量的活性物质的药用溶液组合物装入其内的直径和长度的通常为圆筒状的空心壳。胶囊外壳可以包含增塑剂、水、明胶、改性淀粉、树胶、角叉菜胶和其混合物。本领域的技术人员会鉴别哪种构成是适合的。
除活性物质外，用于本发明的片剂可以包含本领域技术人员认可的填充剂、粘合剂、压缩剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、水、滑石粉和其他成分。片剂可以是均一的，片芯是单层，或具有多层以实现优选的释放性质。在一些实例中，本发明的片剂可以进行包衣，如包肠溶衣。本领域技术人员会鉴别可用于本发明片剂的其他赋形剂。
用于本发明的锭剂包含适当量活性物质以及任何填充剂、粘合剂、崩解剂、溶剂、增溶剂、甜味剂、着色剂和本领域技术人员鉴别为所需的任何其它成分。本发明的锭剂被设计为与患者的嘴接触时溶解和释放活性物质。本领域技术人员会鉴别可用于本发明的其他递送方法。
通过将具有所需纯度的盐与生理学可接受的载体、赋形剂、稳定剂等混合制备本发明盐的制剂用于储存或施用，且可以以缓释或延时释放制剂被提供。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域众所周知，且在例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences(药学)，Mack Publishing Co.，(A.R.Gennaro编辑1985)中述及。所述物质在所使用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸盐，抗氧化剂如坏血酸，低分子量(约10个残基以下)的肽如聚精氨酸，蛋白质如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白，亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸，单糖、二糖和其他碳水化合物，包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精，螯合剂如EDTA，糖醇如甘露醇或山梨醇，抗衡离子如钠，和/或非离子型表面活性剂如吐温或聚乙二醇。
用于治疗施用的本发明盐的制剂必须是无菌的。无菌通过经无菌膜如0.2微米膜过滤或通过其他常规方法容易地实现。制剂通常会以低压冻干的形式储存或作为水溶液储存。本发明制剂的pH通常在3至11之间、更优选5至9且最优选7至8。应理解上述某种赋形剂、载体或稳定剂的使用会导致形成环状多肽盐。尽管优选的施用途径是通过注射，但也考虑其他的施用方法如静脉内(推注和/或输注)、皮下、肌内、结肠、直肠、经鼻或腹膜内施用，其使用多种剂型如栓剂、植入的小球或小圆筒(smallcylinder)、气雾剂、口服制剂(如片剂、胶囊剂和锭剂)和局部制剂如软膏剂、滴剂和皮肤贴片。预期将本发明的无菌物引入成形制品如植入物中，其可使用惰性物质如可生物降解的聚合物或合成硅酮类，例如硅橡胶、硅酮橡胶或其他市售的聚合物。
本发明的盐还可以以脂质体递送系统的形式施用，如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体能由多种脂质如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱形成。
本发明的盐还可通过使用盐分子偶联的抗体、抗体片段、生长因子、激素或其他靶向部分递送。本发明盐还可以与作为可靶向的药物载体的适合的聚合物偶联。所述聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基-丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟基乙基-天冬酰胺-苯酚、或被棕榈酰基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本发明盐可以偶联于一类生物可降解聚合物，所述聚合物可用于实现药物的控制释放，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛类、聚二氢吡喃类、聚腈基丙烯酸酯、和水凝胶类的交联或两亲嵌段共聚物。聚合物和半渗透性的聚合物基质可以被形成成型制品，如瓣膜、支架、管、假体等。
给药
通常，约0.5至500mg本发明的盐或盐的混合物与生理学可接受的介质、载体、赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、着色剂、矫味剂等混合，如所公认的药学实践所要求的那样。这些组合物中活性成分的量为使得获得在指明范围内的适当剂量的量。
预期常规的剂量范围是约0.001mg/kg至约1000mg/kg，优选约0.01mg/kg至约100mg/kg，且更优选约0.10mg/kg至约20mg/kg。本发明的化合物可以每日一次或几次施用，且也可以使用其他给药方案。
VII.治疗/施用方法
A.预防和治疗以不希望的血栓形成为特征的病症
本发明的预防或治疗哺乳动物的血栓形成的方法包括对哺乳动物特别是人施用治疗有效量的单独的或作为如上所述的本发明药物组合物的一部分的式(I)化合物。本发明的式(I)化合物和包含式(I)盐的药物组合物适于单独或作为多组分治疗方案的一部分用于预防或治疗心血管疾病，特别是那些血栓形成相关的疾病。例如，本发明的化合物或药物组合物可以用作用于任何血栓形成、特别是血小板依赖性血栓形成性适应症的药物或治疗剂，所述病症非限制性地包括急性心肌梗死，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，外周血管疾病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，在侵入性操作后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，所述侵入性操作例如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置与假体的插入，以及与遗传素质或癌症有关的高凝状态。在另一组实施方案中，适应症选自：包括血管成形术和/或支架放置的经皮冠脉介入(PCI)、急性心肌梗死(AMI)、不稳定型心绞痛(USA)、冠状动脉疾病(CAD)、短暂性脑缺血发作(TIA)、中风、外周血管疾病(PVD)、冠脉旁路手术、颈动脉内膜切除术。
本发明的化合物和药物组合物还可以作为多组分治疗方案的一部分与其他治疗剂或诊断剂结合用于预防或治疗哺乳动物的血栓形成。在某些优选实施方案中，本发明的化合物或药物组合物可与其它的通常根据公认的医疗实践被开具用于这些病症的化合物共同施用，所述其它化合物为例如抗凝剂、溶栓剂或其他抗血栓药，包括血小板凝集抑制剂、组织纤溶酶原激活剂、尿激酶、尿激酶原、链激酶、肝素、阿司匹林或华法林或抗炎剂(非甾体抗炎药、环加氧酶II抑制剂)。共同施用还可以允许使用减少剂量的抗血小板剂和溶栓剂，并因此使潜在的出血副作用最小化。本发明的化合物和药物组合物还可以以协同方式起作用，用于防止在成功的溶栓治疗后的再闭塞和/或减少再灌注时间。
本发明的化合物和药物组合物可用于体内，通常用于哺乳动物，如灵长类(例如人)、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠，或可以用于体外。本发明的化合物或药物组合物的如上文所定义的生物学性质可容易地通过本领域所公知的方法进行表征，例如通过内体试验评价抗血栓形成效应，以及对止血和血液学参数的影响。
本发明的化合物和药物组合物可以为溶液或混悬液的形式。在血栓形成性病症的应对中，本发明的化合物和药物组合物还可以是例如以下的形式：口服用片剂、胶囊剂或酏剂，栓剂，可注射施用的灭菌溶液或混悬剂等，或被引入到成型制品内。可以向需要使用本发明的化合物和药物组合物进行治疗的个体(典型地是哺乳动物个体)施用能提供最佳功效的剂量。施用剂量和方法会依据不同个体而变化，且会依据以下因素而定：治疗的哺乳动物种类、其性别、体重、饮食、同时服用的药物、总体临床状态、所使用的特定式(I)盐、所使用化合物或药物组合物的特定的用途，以及药物领域那些技术人员会认识到的其他因素。
B.治疗有效量
用于治疗施用的式(I)化合物或包含本发明的化合物的药物组合物的制剂必须是无菌的。无菌通过经无菌膜如0.2微米膜过滤或通过其他常规方法容易地实现。制剂通常会以固体形式，优选以冻干形式储存。尽管优选的施用途径是口服，但本发明的式(I)化合物或药物组合物的制剂还可以通过以下途径施用：注射、静脉内(推注和/或输注)、皮下、肌内、结肠、直肠、经鼻、透皮或腹膜内施用。可以使用多种剂型，其非限制性地包括栓剂、植入的小球或小圆筒、气雾剂、口服制剂和局部制剂如软膏剂、滴剂和皮肤贴片。本发明的式(I)化合物和药物组合物还可以被引入成型体或制品如植入物中，其可使用惰性物质如可生物降解的聚合物或合成硅酮类，例如硅橡胶、硅酮橡胶或其他市售的聚合物。本发明的化合物和药物组合物还可以以脂质体递送系统的形式施用，如小单层脂质体、大单层脂质体和多层脂质体。脂质体能由多种脂质如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱形成。
治疗有效剂量可以通过体外或体内方法确定。对于各种特定的本发明的化合物或药物组合物，可进行单独测定以确定所需的最佳剂量。治疗有效剂量的范围将受施用途径、治疗目的和患者病症的影响。对于通过皮下针进行的注射而言，可假定剂量被递送进入体液中。对于其他施用途径，必须根据药理学领域公知的方法单独测定每种化合物的吸收效率。因此，治疗学家有必要根据需要调整剂量和改变施用途径以获得最佳的治疗效果。有效剂量水平的测定，即，实现所需结果所必须的剂量水平的测定，可由本领域技术人员容易地确定。通常，化合物的施用在较低剂量水平开始，然后剂量水平逐渐增加，直到实现所需效果。
有效剂量水平的测定，即，实现所需结果，即血小板ADP受体抑制所必需的剂量水平的测定，可由本领域技术人员容易地确定。通常，本发明的化合物或药物组合物的施用在较低剂量水平下开始，然后剂量水平逐渐增加，知道实现所需效果。本发明的化合物和组合物可以以约0.01至1000mg/kg剂量范围内的有效量口服施用，每天给药一次或分几次给药。如果在本发明的药物组合物中使用可药用的载体，则通常将约5至500mg的式(I)的盐与如公认的药学实践所述的可药用的载体混合，所述可药用的载体非限制性包括生理学可接受的介质、载体、赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、着色剂、矫味剂等。这些组合物中活性成分的量为使得获得在指明范围内的适当剂量的量。
C.施用
通常将治疗性化合物液体制剂置于带有无菌入口的容器中，例如具有可由皮下注射针刺入的塞子的静脉内给药用溶液袋或小瓶。
可被引入到片剂、胶囊剂、锭剂等中的常规的辅助剂为粘合剂如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶，和赋形剂如微晶纤维素，崩解剂如玉米淀粉或藻酸，润滑剂如硬脂酸镁，甜味剂如蔗糖或乳糖，或矫味剂。当剂型为胶囊剂时，除了上述材料外，其还可以包含液体载体如水、盐水或脂肪油。其它的各种类型的材料可以用作剂量单位物理形式的包衣或用作改性剂。注射用无菌组合物可根据常规的药学实践来配制。例如，可能需要活性化合物在介质如油或合成脂肪介质如油酸乙酯中或在脂质体中溶解或悬浮。可根据公认的药学实践引入缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等。
D.组合治疗
本发明化合物还可以与其他治疗剂或诊断剂组合使用。在某些优选实施方案中，本发明的化合物可与其他的通常根据公认的医疗实践被开具用于这些病症的化合物共同施用，所述其他化合物为例如抗凝剂、溶栓剂或其他抗血栓药，包括血小板凝集抑制剂、组织纤溶酶原激活剂、尿激酶、尿激酶原、链激酶、肝素、阿司匹林或华法林。本发明的化合物还可以以协同方式起作用，用于防止在成功的溶栓治疗后的再闭塞和/或减少再灌注时间。这些化合物还可允许降低所使用的溶栓剂的剂量，因而最小化潜在的出血性副作用。这些化合物还可以用于体内，通常用于哺乳动物体内，如灵长类(例如人)、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠，或者用于体外。
应该理解的是，上文的讨论、实施方案和实施例仅仅代表某些优选方案的详细说明。对本领域普通技术人员显而易见的是可进行各种变型和等价改变而不脱离本发明的主旨和范围。上文所讨论或引用的所有专利、期刊文章和其他文献被引入本文作为参考。
给出以下制备方法和实施例使得本领域技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。不应认为它们限制本发明的范围，而其仅仅是说明性的和代表性的。
VIII.实施例
除非另有说明，本说明书通篇所使用的缩写具有以下含义：
Figure G2008800226049D00461
Figure G2008800226049D00481
通用方法
在制备这些化合物中使用的原料和试剂通常得自商业供应商，如Aldrich Chemical Co.，或通过本领域技术人员已知方法根据如以下的参考文献中所述的方法制备：Fieser and Fieser’s Reagents for OrganicSynthesis(有机合成试剂)；Wiley&Sons：纽约，1967-2004，笫1-22卷；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds(碳化合物化学)，Elsevier SciencePublishers，1989，第1-5卷和增刊；和Organic Reactions(有机反应)，Wiley&Sons：纽约，2005，第1-65卷。下列合成反应流程仅仅是说明一些能合成本发明化合物的方法，并且能对这些合成反应流程进行各种变型，并且是对阅读了本申请中公开内容的本领域技术人员的提示。
如果需要，可以使用常规方法分离和纯化合成反应流程中的原料和中间体，所述方法非限制性地包括过滤法、蒸馏法、结晶法、色谱法等。这些材料可以使用常规手段包括物理常数和光谱数据进行表征。
除非有相反说明，否则本文所述的反应优选在惰性气氛中，在大气压力下，在约-78℃至约150℃的反应温度范围内进行，优选反应温度范围为约0℃至约125℃，最优选且方便地在约室温(或环境温度)下进行，例如，在约20℃至约75℃下。
就下述的实施例而言，使用本文所述的方法或本领域公知的其他方法合成本发明的化合物。
化合物和/或中间体采用带有2695分离模块(Milford，Mass.)的WatersAlliance色谱分离系统通过高效液相色谱法(HPLC)进行表征。分析柱是得自Merck KGaA(Darmstadt，德国)的C-18 SpeedROD RP-18E柱。或者，使用具有Waters Acquity UPLC BEH C-182.1mm×15mm柱的WatersUnity(UPLC)系统进行表征。使用梯度洗脱，通常从5％乙腈/95％水开始，并且对于Alliance系统在5分钟内逐步增加到95％乙腈，对于Acquity系统在1分钟内逐步增加到95％乙腈。所有溶剂含有0.1％三氟乙酸(TFA)。通过检测在220或254nm处的紫外线(UV)吸收检测化合物。HPLC溶剂来自EMD Chemicals，Inc.(Gibbstown，NJ)。在某些情况下，通过使用玻璃硅胶板如例如EMD硅胶602.5cm×7.5cm板的薄层色谱法(TLC)检测纯度。在紫外光下可容易地用肉眼观察到TLC结果，或者通过使用公知的碘蒸气和其他各种染色技术。
在使用乙腈/水作为流动相的一个或两个Agilent 1100系列LCMS仪器上进行质谱分析。一个系统使用作为改性剂的TFA并且以阳离子模式检测[报告值以MH+、(M+1)或(M+H)+表示]，另一个系统使用甲酸或乙酸铵并且以阳离子模式检测[报告值以MH+、(M+1)或(M+H)+表示]和阴离子模式检测[报告值以M-、(M-1)或(M-H)-表示]。
对一些化合物用Varian 400MHz NMR(Palo Alto，加利福尼亚州)进行核磁共振(NMR)分析。波谱的参比是TMS或已知的溶剂化学位移。
本发明的一些化合物的纯度通过元素分析(Robertson Microlit，Madison NJ.)测定。
在Laboratory Devices Mel-Temp装置(Holliston，Mass.)上测定熔点。
使用购自Teledyne Isco，(Lincoln，NE)的Sq16x或Sg100c色谱分离系统和预装硅胶柱进行制备性分离。或者，将化合物和中间体经过使用硅胶(230-400目)填料的快速柱色谱纯化，或经使用C-18反相柱的HPLC纯化。用于Isco系统和快速柱色谱的常规溶剂是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷、丙酮、羟胺水溶液和三乙胺。用于反相HPLC的常规溶剂是含有0.1％三氟乙酸的不同浓度的乙腈和水。
用于固体形式的仪器和方法详述
1.FT红外光谱(FTIR)
在装有Universal ATR取样入口并运行Spectrum V5.0.1软件的Perkin-Elmer Spectrum One上检测样品。分辨率设定为4cm-1，在4000cm-1至400cm-1范围收集16次扫描。对照和分析软件：Spectrum v 5.0.1。
2.差示扫描量热法(DSC)
在装有50位自动取样器的TA Instruments Q1000上，或在装有34位自动取样器的Mettler Instrument DSC 823e型上收集DSC数据(热分析图)。这两个仪器的能量和温度校准标准是经过检定的铟。这两个仪器的使用方法是将样品以10℃/分钟的速率从10℃加热至250℃。对样品保持氮气吹扫净化，对于TA Instrument氮气速率为约30至50ml/分钟，对于Mettler Instrument氮气速率为50ml/分钟。
除非另有说明，使用0.5至3mg的样品，并且将所有样品密封在铝锅中，锅盖上留有针孔。TA Instrument的控制软件是：Advantage Q seriesv 2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1。且TA Instrument的分析软件是：Universal Analysis 2000v 4.1D Build 4.1.0.16。Mettler DSC的控制和分析软件是：STARE v.9.01。
3.热重分析(TGA)
在具有16为自动取样器的TA Instrument Q500 TGA上，或在装有34位自动取样器的Mettler Instrument TGA/SDTA 851e型上采集TGA数据(热分析图)。使用经过检定的镍基热电偶校准TA Instrument温度，MettlerInstrument使用的是经过检定的铟。这两个仪器的使用方法是将样品以10℃/分钟的速率从环境温度加热至350℃。以约60至100ml/分钟对样品保持氮气吹扫净化。
当使用TA Instrument时，通常将5-30mg的各样品装载到预配衡铂坩埚和开口铝DSC盘中。控制软件是：Advantage Q series v 2.2.0.248，Thermal Advantage Release 4.2.1.，分析软件是：Universal Analysis 2000v4.1D Build 4.1.0.16。当使用Mettler Instrument时，通常将5-10mg样品装入开口铝盘中。该仪器的软件(仪器控制和数据分析)是：STARE v.9.01。
4.XRPD(X射线粉末衍射)
Bruker AXS C2 GADDS衍射仪
在Bruker AXS C2 GADDS衍射仪上采集样品的X射线粉末衍射图，衍射仪使用Cu Kα辐射(40kV，40mA)、自动XYZ阶段、用于自动样品定位的激光视频显微镜和HiStar二维区域检测器。X-射线光路由单一的
Figure G2008800226049D00511
多层镜结合0.3mm的真空准直仪组成。
光束发散度，即样品上X-射线束的有效大小为约4mm。使用样品与检波器距离为20cm的θ-θ连续扫描方式，得到3.2°-29.7°的有效2θ范围。样片的典型曝光时间是120秒。
环境条件
使用未经研磨的原样粉末，将在环境条件下运行的样品制备成扁片试样。将约1-2mg的样品轻轻地压到玻璃载玻片或硅晶片上以获得压扁面。
单晶XRD(SCXRD)
在Bruker AXS 1K SMART CCD衍射仪或装有Oxford CryosystemsCryostream冷却装置的Bruker-Nonius Kappa CCD上采集数据。使用SHELXS或SHELXD程序解析结构，并用作为Bruker AXS SHELXTL套件一部分的SHELXL程序精修。除非另有说明，对连接于碳的氢原子采用几何加氢方式定位，并可用各向同性位移参数精修。在差值傅里叶综合法中定位连接于杂原子的氢原子并用各向同性位移参数自由精修。
5.重量分析蒸气吸附(GVS)研究
使用由CFRSorp软件控制的Hiden IGASorp水分吸附分析器得到吸附等温线。通过Huber再循环水浴使样品温度保持在25℃。通过混合干湿氮气流控制湿度，氮气总流速为250ml/分钟。通过将校准的Vaisala RH探测器(动态范围为0-95％RH)放置在样品旁测量相对湿度。通过微量天平(精确度±0.001mg)不间断检测作为％RH函数的样品的重量变化(质量弛豫(mass relaxation))。
通常在环境条件下将10-20mg样品放入配衡的网眼不锈钢篮中。在40％RH和25℃(常规的室内条件)下装载或卸载样品。
如下文所述地完成吸湿等温线(2次扫描给出1个完整循环)。在25℃在10％RH期间经0-90％RH完成标准等温线。
  参数   值
  吸附-扫描1   40-90
  脱附/吸附-扫描2   85-干燥，干燥-40
  期间(％RH)   10
  扫描数   2
  流速(ml.分钟-1)   250
  温度(℃)   25
  稳定性(℃.分钟-1)   0.05
  最小吸附时间(小时)   1
  最大吸附时间(小时)   4
  模式   AF2
  精确度(％)   98
软件使用最小二乘法和质量弛豫模型来预测渐进值。在选择下一个％RH之前，所测定的质量弛豫值必须在软件预测的值的5％之内。最小平衡时间设定为1小时，最大平衡时间设定为4小时。
在完成等温线后回收样品，并通过XRPD再进行分析。
6.1H NMR
用装备有自动取样器的Bruker 400MHz采集波谱数据。除非经另有说明，样品在d6-DMSO中制备。
7.纯度分析
使用ChemStation软件v9在装备有二极管阵列检测器的AgilentHP1100系统上进行纯度分析。
Figure G2008800226049D00531
Figure G2008800226049D00532
  钾盐   钠盐
  纯度   99.4％(a/a)   99.4％(a/a)
  杂质
  单独的峰≥0.1％(a/a)   ％(a/a)   ％(a/a)
  RRT＝0.57   0.14   0.11
  RRT＝1.08   0.15   0.18
  峰总计＜0.1％(a/a)   0.3   0.3
8偏光显微镜检查(PLM)
在使用带有用于摄像的数字摄像机的Leica LM/DM偏光显微镜上研究样品。将少量的各样品放到载玻片上，用浸镜用油包埋并用盖玻片盖上，尽可能的分离单个的颗粒。用适合的放大倍数和局部偏振光观测样品，其配合λ假色过滤器。
9热台显微镜检查(HSM)
使用Leica LM/DM偏光显微镜联合Mettler-Toledo MTFP82HT热台和用于摄像的数字摄像机来实现热台显微镜检查。将少量的各样品放到载玻片上，尽可能的分离单个的颗粒。用适合的放大倍数和局部偏振光观测样品，其配合λ假色过滤器，同时将样品从环境温度常规地以10-20℃/分钟进行加热。
10.通过Karl Fischer进行水分测定
使用Hydranal Coulomat AG试剂并用氩气吹扫净化，在MettlerToledo DL39库仑计上测量各样品的含水量。将称量过的样品引入到在铂TGA盘上的管中，其连接翻口塞以避免进入水。每次使用约10mg样品，并重复测定一次。
11.水溶解度
通过将足够的化合物混悬于0.25ml水中得出该化合物的母体游离形式的最大终浓度≥10mg.ml-1，从而测定水溶解度。将该混悬液在25℃平衡24小时，然后测量pH。然后将该混悬液经由玻璃纤维C过滤器过滤至96孔板中。然后按101的系数稀释该滤液。比照在DMSO中的约0.1mg.ml-1的标准溶液，通过HPLC定量。注射不同体积的标准的、稀释的和未稀释的样品溶液。采用由与标准进样中的主要峰的保留时间相同的峰的积分测定的峰面积来计算溶解度。
如果在滤板中有足够的固体，采集XRPD图。
Figure G2008800226049D00551
12.离子色谱法
使用IC Net软件v2.3在Metrohm 861 Advanced Compact IC上采集数据。将样品制备为在水中的1000ppm储备液。当样品溶解度低时，使用适合的溶剂如DMSO。在测试前用适合的溶剂将样品稀释至50ppm或100ppm。通过与被分析的离子的已知浓度的标准溶液比较来完成定量。
  方法类型   阴离子交换
  柱：   Metrosep A Supp 5-250(4.0×250mm)
  柱温(℃)：   环境温度
  进样(μl)：   20
  检测：   电导检测器
  流速(ml/分钟)：   0.7
  洗脱：   3.2mM碳酸钠，1.0mM碳酸氢钠水溶液
  方法类型   阳离子交换
  柱：   Metrosep C2-250(4.0×250mm)
  柱温(℃)：   环境温度
  进样(μl)：   20
  检测：   电导检测器
  流速(ml/分钟)：   1.0
  洗脱：   4.0mM酒石酸，0.75mM吡啶二羧酸水溶液
实施例1：中间体磺酰脲氨基甲酸酯的合成(8)
Figure G2008800226049D00561
步骤1-制备5-氯噻吩-2-磺酰氯：
Figure G2008800226049D00571
以下方法由C.A.Hunt等人.J.Med.Chem.1994，37，240-247所述方法修改得到。在装备有机械搅拌器、空气冷凝器、滴液漏斗和防潮管的三颈圆底烧瓶内加入氯磺酸(240mL，3.594mol)。在搅拌下，经约45分钟的时间，分批加入PCl5(300g，1.44mol，0.40当量)。添加过程中，剧烈释放大量的HCl气，但是混合液的温度没有显著增加(＜40℃)。等到加入所有的PCl5，得到几乎澄清的浅黄色溶液，只有少量PCl5固体小片漂浮在混悬液中。将其搅拌直至气体释放停止(0.5小时)。
然后将反应容器在冰中冷却，经1.0小时的时间通过滴液漏斗添加2-氯-噻吩(66.0mL，0.715mol)。随着最初添加几滴2-Cl-噻吩，混合液变为暗紫色，等到加入所有的噻吩后，形成了暗紫色的溶液。在添加期间，以较慢速率持续放出HCl气。然后在室温搅拌反应混合液过夜。
然后经0.5小时的时间，将混合液(暗紫色澄清溶液)滴加入碎冰(3L)中。一旦添加到冰上，紫色瞬时消失；将无色的稀薄乳状液在室温下机械搅拌约15小时。然后用CH2Cl2萃取该混合液(3×300mL)。将合并的CH2Cl2-萃取液用水(1×200mL)、饱和的NaHCO3(1×250mL)、盐水(1×100mL)洗涤，经干燥(Na2SO4)，并在旋转蒸发仪上浓缩，得到浅黄色胶状的粗产物，其具有固化倾向，得到半固体物质。然后通过高真空蒸馏(bp110-112°/12mm)纯化，得到135.20g(88％)无色/浅黄色半固体状的标题化合物。
步骤2-5-氯噻吩-2-磺酰胺：
Figure G2008800226049D00572
以下方法由C.A.Hunt等人.J.Med.Chem.1994，37，240-247所述方法修改得到。在装备有机械搅拌器的三颈圆底烧瓶内加入浓NH4OH(500mL，148.50g NH3，8.735mol NH3，13.07当量NH3)。将烧瓶在冰中冷却，并经0.5小时的时间分批加入5-氯噻吩-2-磺酰氯(145.0g，0.668mol)(其是低熔点固体，将其通过加热熔融，然后通过宽口径聚乙烯吸管方便的添加)。磺酰氯在反应烧瓶中立即固化。在加入所有的磺酰氯后，将含有磺酰氯的烧瓶用THF(25mL)冲洗，将其也转移到反应容器中。然后在室温下将该浓稠悬浮液搅拌约20小时。此时反应混合液仍然是混悬液，但是具有不同的质地。
然后将该混合液在冰中冷却，用H2O(1.5L)稀释，并用浓HCl酸化至pH约3。使用布氏漏斗收集固体产物，用冷水冲洗，并风干，得到白色固体状的标题化合物，103.0g(78％)。MS(M-H)：196.0；198.0。
步骤3-5-氯噻吩-2-基磺酰基氨基甲酸乙酯：
Figure G2008800226049D00581
向装备机械搅拌器、滴液漏斗的2-L的3-颈圆底烧瓶中加入磺酰胺(60.0g，303.79mmol)和THF(900mL)中的Cs2CO3(200g，613.83mmol，2.02当量)。在冰中冷却澄清的溶液，经约30分钟的时间加入氯甲酸乙酯(70.0mL，734.70mmol，2.418当量)，然后将浓稠的悬浮液在室温下搅拌约36小时。
然后将该混合液用水(200mL)稀释，得到澄清的无色溶液，将其在旋转蒸发仪上浓缩至三分之一的体积。然后将其用EtOAc(250mL)稀释，在冰中冷却，用6N HCl酸化至pH约1。将双相混合液转移至分液漏斗，分层，用2×75mL EtOAc再次萃取水层。将合并的有机萃取物用水/盐水(2×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到浅色油状的标题化合物。将其经硅胶短柱过滤纯化。将粗产物置于在EtOAc中的烧结漏斗上的硅胶短柱，然后用EtOAc(1升)洗脱。浓缩EtOAc滤液，得到白色固体状的标题化合物8，71.28g(87％)。MS(M-H)：268.0；270.0。1H NMR(DMSO)：δ7.62(d，1H)，7.25(d，1H)，4.10(q，2H)，1.16(t，3H)。
实施例2：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯 基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲(7a)的合成
步骤1
Figure G2008800226049D00591
将苯胺1(1H NMR(DMSO)：7.58(dd，1H)，6.72(dd，1H)，3.77(s，3H)；6.0g，32.085mmol)置于500mL的圆底烧瓶，并加入20％在甲苯中的光气(175mL，332.50mmol，10.36当量)。然后在室温下将得到的有些粘稠的混悬液进行磁力搅拌过夜，得到澄清的无色溶液。取出一个等分试样后，用氩气吹干，用甲醇淬灭，通过RP-HPLC/MS分析，显示没有未反应的苯胺1，完全形成异氰酸酯2a和/或氨基甲酰氯2b，如其氨基甲酸甲酯所分析的。首先通过旋转蒸发，再在高真空下浓缩，得到6.76g(99％收率)自由流动的无色固体状的异氰酸酯2a和/或氨基甲酰氯2b。
步骤2
Figure G2008800226049D00592
在500mL的圆底烧瓶中加入在DMF(100mL)中的N-Boc-1，4-亚苯基二胺(6.22g，29.866mmol，1.20当量)。注入三乙胺(5.30mL，38.025mmol，1.52当量)。然后经15分钟的时间将澄清的暗棕色溶液通过滴加异氰酸酯2a(5.30g，24.88mmol)和/或氨基甲酰氯2b的DMF(50mL)溶液来处理。添加完成后，得到微混浊的混合物，将其在室温下搅拌过夜。对一个等分试样进行分析，用MeOH淬灭后，显示没有未反应的异氰酸酯，完全形成脲3a和喹唑啉-1，3-二酮4a，比率为约2.5∶1。MS(M-H)：388.0。
然后经5分钟的时间通过注射器滴加DBU(3.75mL，25.07mmol，ca.1.0当量)，得到澄清的暗褐色溶液。将其在室温下搅拌3.0小时得到混浊的混合液。HPLC分析显示没有脲3a，完全形成喹唑啉-1，3-二酮4a。将该反应混合液在旋转蒸发仪上浓缩，得到固体状的粗产物。在高真空下将其干燥，然后用CH2Cl2/H2O(5∶1)研磨，得到8.40g几乎是白色固体状的4a(收率87％)。1H NMR(DMSO)：δ9.39(s，1H)，7.68(dd，1H)，7.45(d，2H)，7.03(m，2H)，6.98(dd，1H)，1.48(s，9H)。
步骤3
Figure G2008800226049D00601
将N-Boc-苯胺4a(4.0g，10.28mmol)置于圆底烧瓶中，并加入在二噁烷中的4N HCl(50.0mL，200mmol，19.40当量)。将浓稠的几乎未溶剂化的混悬液在室温下搅拌5.0小时。HPLC显示没有原料，完全形成苯胺5a。然后将该混合液在旋转蒸发仪浓缩，得到粗产物。将由此获得的固体用CH2Cl2研磨，得到3.22g几乎白色固体状的纯品5a(收率96％)。MS(M-H)：290.3。1H NMR(DMSO)：δ11.75(s，1H)，7.88(dd，1H)，7.32(m，4H)，7.21(dd，1H)。
步骤4
Figure G2008800226049D00611
将二氟化合物5a(1.0g，3.072mmol)置于螺旋帽密封管中。加入DMSO(20mL)，随后加入甲胺(2.0M在THF中)(15.0mL，30mmol，9.76当量)，得到澄清的溶液。然后将其在油浴加热至110℃达3小时。HPLC显示没有未反应的5a，完全形成5b。然后将该混合液冷却至室温，将所有的MeNH2和THF蒸发，并用100mL水稀释残余物以沉淀5b。在室温下搅拌约2小时后，经布氏漏斗过滤收集白色固体，并用H2O(100mL)冲洗，风干。对该固体进行HPLC分析显示其是纯的并且没有任何的DBU。将该固体通过用Et2O研磨进一步纯化，然后用CH2Cl2研磨，如以上对该苯胺的反应路线中所述，得到875mg标题化合物(95％收率)。MS(M+1)301.2。1H NMR(DMSO)：δ11.10(s，1H)，7.36(d，1H)，6.78(d，2H)，6.75(m，1H)，6.56(d，2H)，6.20(d，1H)，5.18(d，2H)，2.76(d，3H)。
步骤5-1-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基)脲(6a)的合成：
将包含苯胺(5a，16.0g，53.33mmol)和磺酰基-氨基甲酸乙酯(8，28.77g，106.66mmol，2.0当量)在CH3CN(1300mL)中的反应混合液加热至回流达36小时。在此期间，该反应混合液一直为浓稠的混悬液。HPLC分析显示为完全反应，且未反应的苯胺＜1％。将该浓稠混悬液冷却至室温，并经布氏漏斗过滤。用CH3CN(3×40mL)进一步冲洗白色的固体产物。对滤液的HPLC显示仅有痕量的所需产物存在，大部分为过量的氨基甲酸酯。然后将粗产物用CH2Cl2(400mL)研磨，通过布氏漏斗过滤收集几乎白色的固体产物(6a)：收率，25.69g(92％)。MS(M+1)：524.0；526.0。1H NMR(DMSO)：δ11.20(s，1H)，9.15(s，1H)，7.68(d，1H)，7.42(d，2H)，7.36(d，1H)，7.26(m，1H)，7.16(d，2H)，6.78(m，1H)，6.24(d，1H)，2.78(d，3H).
实施例3：[4-(6-氯-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯 基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲(6b)
如对实施例2(步骤1-5)的所述来合成实施例3中的化合物，不同之处在于从2-氨基-5-氯-4-氟苯甲酸甲酯起始，所述原料通过用Pt(S)C还原2-硝基-5-氯-4-氟苯甲酸甲酯得到。
实施例4：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯 基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲(6a)和钾盐(7a)的合成
Figure G2008800226049D00631
步骤1：
Figure G2008800226049D00632
将2-氨基-4，5-二氟苯甲酸甲酯(2)(38kg，1.0eq)和二氯甲烷(560kg，8X，ACS＞99.5％)装入PP1-R1000反应器(2000L GL反应器)中。将该反应混合液搅拌5分钟。将氯甲酸4-硝基苯基酯(49.1kg，1.2当量)装入PP1-R2000反应器(200L)中，随后加入二氯甲烷(185kg)，并将内容物搅拌5分钟。将200L反应器加压后，将氯甲酸4-硝基苯基酯溶液转移至含(2)的二氯甲烷溶液的2000L反应器中。将该反应混合物在氮气吹扫下加热至40±5℃(回流)达3小时。示例性的TLC分析证实反应完成(反应过程中的TLC，没有化合物(2)残留；99∶1的CHCl3-MeOH)。将该溶液冷却至30℃并在真空下蒸馏掉460kg的二氯甲烷。向2000L反应器中装入520kg己烷，将反应器的内容物冷却至0±5℃，并搅拌4小时。经衬有一片T-515LF Typar滤纸和一片Mel-Tuf 1149-12滤纸的GF Nutsche过滤器过滤获得的固体。用20kg己烷洗涤滤饼，并在35℃真空干燥直至达到恒重。移出干燥产物(70.15kg)，收率98％。产物通过1H NMR和TLC分析证实。
步骤2.3-(4-氨基苯基)-6，7-二氟喹唑啉-2，4(1H，3H)-二酮盐酸盐，化合物5b的合成
Figure G2008800226049D00641
向PP1-R1000(2000L GL反应器)反应器中加入3a(64.4kg，1.0eq)、无水四氢呋喃(557kg)和三乙胺(2.2kg，0.1当量)。用四氢呋喃(10kg)冲洗2000L GL反应器的装料管路。将反应器的内容物搅拌25分钟，在此期间获得完全的溶液。向PP1-R2000(200L HP反应器)反应器中加入N-Boc-对亚苯基二胺(38kg，1.0当量)、四氢呋喃(89kg)，并搅拌30分钟直至获得完全的溶液。将200L HP反应器的内容物转移至含化合物3a的2000LGL反应器中，并在65±5℃加热2小时。通过HPLC监测，在确认原料3a消失后认为反应完成(在过程中的规格＜1％)。将2000L GL反应器的内容物冷却至20±5℃，然后经20分钟的时间装入甲醇钠(25％的甲醇溶液，41.5kg，1.05当量)，使温度保持在30℃以下。用四氢呋喃(10kg)冲洗装料管路。将内容物在25±5℃搅拌4小时。反应过程中的HPLC分析证实了当保留在反应混合液中的化合物3b的量＜1％时该反应完成。向该反应混合液中加入工艺过滤水(500kg)并在真空下将2000L GL反应器内容物蒸馏到洁净的200L GL接收器中，直至蒸馏出300kg溶剂。使用GLNutsche过滤器将得到的固体过滤，用工艺过滤水洗涤，直至固体化合物4b的颜色成为白色到浅灰色。向2000L GL反应器中加入湿的化合物4b滤饼、二噁烷(340kg)，并将内容物搅拌1小时。经铺有一片T-515 LF Typar滤纸的GL Nutsche过滤器过滤得到的可过滤固体。将固体滤饼吹干达2小时，然后将二噁烷(200kg)加入2000L GL反应器中。将内容物搅拌10分钟，然后经3小时的时间加入含4N HCl的二噁烷(914kg)，并将内部温度保持30℃以下。用另外的二噁烷(10kg)清洗装料管路，将反应器的内容物在25±5℃搅拌6小时。通过HPLC监测化合物4b转化为化合物5b反应的完成(过程中对照化合物4b＜反应混合物的1％)。将反应器的内容物冷却至5±5℃达2小时，并经GL Nutsche过滤器过滤得到的固体，随后用二噁烷(50kg)洗涤。将用滤饼8±7磅/平方英寸的氮气吹干达30分钟。通过HPLC分析纯度。过滤的固体在45℃的真空烘箱中干燥达48小时至恒重。移出化合物5b(65.8kg，实际收率110.6％)，并通过1H NMR和HPLC进行分析。1H NMR(DMSO)：δ11.75(s，1H)，7.88(dd，1H)，7.32(m，4H)，7.21(dd，1H)。
步骤3.3-(4-氨基苯基)-6-氟-7-(甲基氨基)喹唑啉-2，4(1H，3H)-二酮，化合物5c的合成
Figure G2008800226049D00661
向PP1-R2000(200L HP反应器)中加入化合物5b(18kg，1.0当量)，并用100±5磅/平方英寸的氮气加压。将来自反应器中的氮气通过常压排气管路放出，然后打开冷凝器阀，然后在氩气层下向反应器中加入二甲亚砜(＞99.7％，105kg)。在22℃(19-25℃)将反应器内容物搅拌15分钟，关闭所有剩余阀后，在200L HP反应器上抽成可获得的最大真空。使用刚才形成的真空，以使内部温度保持在25±5℃的速率将甲胺(在无水乙醇中33％wt％，37.2kg)加入200L HP反应器中，在加料期间保持氮气层在试剂溶液上。在用二甲亚砜(5kg)冲洗加料管路后，关闭200L HP反应器冷凝器阀，并将反应器内容物加热至110±5℃。将反应器的内容物在110±5℃下搅拌至少5小时。5小时40分钟后进行的反应过程中的HPLC显示化合物5b的含量为0.09％，表明反应完全(过程中的检验规格为≤1％)。将200L HP反应器的内容物冷却至25±5℃。当200L反应器冷却时，关闭PP1-R1000反应器(2000L GL反应器)的所有阀，并向其中加入工艺过滤水(550kg)。经15分钟的时间将200L HP反应器的内容物转移至2000LGL反应器中，随后将加料管路用工艺过滤水(50kg)冲洗。在5±5℃将2000L GL反应器的内容物搅拌2小时。在真空下经铺有Mel-Tuf 1149-12滤纸的PPF200(GL Nutsche过滤器)过滤得到的可过滤的固体。取出湿的滤饼，并将其转移至带有Dupont氟碳化合物薄膜(Kind 100A)的预衬真空盘中。将特定的烘箱用纸(KAVON 992)压在含该湿化合物5c的真空盘上，并将其转移至真空烘箱盘式干燥器中。将炉温设为55℃，并将化合物5c干燥至恒重达12小时。取出产物5c(12.70kg)，收率76.5％(预期收率85-95％)。HPLC显示纯度98.96％，并且1H NMR证实化合物5c的结构。1H NMR(DMSO)：δ11.10(s，1H)，7.36(d，1H)，6.78(d，2H)，6.75(m，1H)，6.56(d，2H)，6.20(d，1H)，5.18(d，2H)，2.76(d，3H)。
步骤4.5-氯-N-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基氨基甲酰基)噻吩-2-磺酰胺
Figure G2008800226049D00671
向PP1-R2000(200L HP反应器)反应器中加入6(20.7kg，1.0当量)、5-氯噻吩-2-基磺酰基氨基甲酸乙酯(37.5kg，2.0当量，＞95％)、二甲亚砜(＞99％，75kg)，并搅拌15分钟。在抽成可获得的最大真空的同时，将200LHP反应器(编号PP1-R2000)加热至65±5℃达15小时。从反应器中取出示例性样品用于HPLC分析，反应过程中的HPLC表明在反应混合液中残留＜0.9％的化合物5c(对反应完成而言的反应过程中标准为化合物6a＜1％)。向800L反应器(编号PP5-R1000)中加入工艺过滤水(650kg)，然后将200L HP内容物转移到800L反应器中，同时保持内部温度在25℃以下，用二甲亚砜(15kg)冲洗200L HP反应器，并转移至800L反应器中，然后在5±5℃搅拌2小时。在真空下通过过滤器PP-F2000将形成的固体过滤至200L GL接受器中，并将滤饼用工艺过滤水(60kg)冲洗。取该湿滤饼的示例性样品，并进行HPLC分析，如果化合物6a的纯度＜95％(过程中对照＜95％)，则需要用二氯甲烷研磨。向800L GL反应器中加入所有的湿化合物6a、二氯甲烷(315kg)，并将内容物搅拌3小时。在真空下将固体经衬有一片T515 LF TYPAR滤纸的GL Nutsche过滤器过滤。用二氯甲烷(50kg)冲洗滤饼，并将滤饼用8±7磅/平方英寸的氮气吹干达15分钟。将滤饼转移至带有Dupont氟碳化合物薄膜(Kind 100A)的预衬真空盘中。然后放入至设定在60℃的真空烘箱盘式干燥器中达12小时。分离干燥的化合物6a(33.6kg，93％收率)，HPLC分析纯度为93.5％，及磺酰胺为4.3％。1H NMR确定了化合物6a的结构。1H NMR(DMSO)：δ11.2O(s，1H)，9.15(s，1H)，7.68(d，1H)，7.42(d，2H)，7.36(d，1H)，7.26(m，1H)，7.16(d，2H)，6.78(m，1H)，6.24(d，1H)，2.78(d，3H).
步骤5.(5-氯噻吩-2-基磺酰基)(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基氨基甲酰基)酰胺钾盐，7a
Figure G2008800226049D00681
向800L GL反应器(编号PP5-R1000)中加入乙腈(134kg)、WFI品质的水(156kg)，并将内容物搅拌5分钟。向其中加入化合物6a(33.6kg，1.0当量)，且该反应混合液在此时是混悬液。以使内部温度保持在30℃以下的速率向该混悬液中加入氢氧化钾(4.14kg，1.15当量，＞85％)的水溶液(WFI水，35kg)。用WFI品质的水(2kg)冲洗加料管路，随后将800L GL反应器内容物加热至50±5℃达1小时。然后将内容物经袋形过滤器热过滤、然后经七筒(seven cartridge)0.2μm增泽过滤器(polish filter)过滤以清洗HDPE筒。在整个过滤过程中保持热过滤系统以避免物质从溶液中损失。将800L GL反应器套冷却至25±5℃，然后继续冲洗反应器。用预混合的乙腈(8.5kg)和WFI品质的水(10kg)的溶液冲洗800L GL反应器，通过过滤系统进入标记为7a热过滤的圆筒。使用压力容器将800L GL反应器用WFI品质的水(20kg)冲洗，随后用丙酮(20kg)冲洗，然后用氮气(3±2磅/平方英寸)吹干。关闭800GL反应器的底阀，并抽成20±10英寸Hg的真空。然后打破真空，并向反应器中加入标记为7a热过滤的圆筒中的内容物。将800L GL反应器(编号PP5-R1000)内容物冷却至20±5℃，然后使用增泽过滤器(PP-PF09)向反应器中加入甲醇(373kg，＞99％)，同时保持内部温度在30℃以下。将800GL反应器(编号PP5-R1000)的内容物冷却至15±5℃，随后在该温度下将内容物搅拌12小时。在此期间，通过洁净的过滤装置(PP-F1000)将可过滤的固体过滤到洁净的200L GL接收器(PPR-04)中，随后将反应器加压。在过滤器/接收器上抽成20±10英寸Hg的真空，并过滤内容物。将滤饼用甲醇(30kg)洗涤，用8±7磅/平方英寸的氮气吹干达10分钟。在装入7a的湿滤饼前，将真空烘箱盘式干燥器温度设定为80℃。将湿滤饼转移至带有Dupont氟碳化合物薄膜Kind 100A的预衬真空盘中，并用特定烘箱用纸(Kavon Mel Tuf纸)压在含有湿的产物7a的真空盘上。将盘转移至真空烘箱盘式干燥器内。将湿的7a干燥至恒重(恒重的定义是，当在相隔至少1小时后托盘指数具有在±50g内的相同重量)。分析示例性样品的残余溶剂(对于API的残余溶剂规格)，并且其满足该规格。在一盘WFI品质的水的存在下，使最终的API与水(5-6％)平衡达12小时，然后彻底翻转，并再放置12小时，并最终进行KF分析(5.5％的含水量)。将化合物7钾盐(21.80kg，60.6％收率)转移至双层加厚塑料袋中，并储存于防泄漏第二容器中。HPLC显示7a纯度为99.7％，且1H NMR证实了7a的结构。1H NMR(DMSO)：11.14(s，1H)，8.60(s，1H)，7.48(m，2H)，7.35(d，1H)，7.22(d，1H)，6.95(m，3H)，6.75(m，1H)，6.22(d，1H)，2.78(d，3H)。
实施例5：药理学试验
通过以下体外试验测定本发明的各化合物的药理学活性：
I.体外ADP介导的血小板聚集的抑制
1.
使用人富血小板血浆(PRP)或洗涤的人血小板在96孔微量滴定板测定法(大致参见Jantzen，H.M.等人(1999)Thromb.Hemost.81：111-117中的操作)或标准比色池透光率集合度测定法中评价本发明的化合物对ADP-诱导的人血小板聚集的影响。
为了制备用于聚集测定法的人富血小板血浆，将来自不使用药物的健康志愿者的人静脉血采集到0.38％柠檬酸钠(0.013M，终浓度为pH 7.0)中。通过在室温下于160xg下离心全血20分钟来制备富血小板血浆(PRP)。取出PRP层，转移到一根新试管中，如果必要，通过贫血小板血浆(PPP)调整血小板计数以获得～3×108个血小板/ml的血小板浓度。PPP是通过将(取出PRP后)剩余的血样在800xg下离心20分钟制备的。随后可以将该PRP制备物在96-孔板或标准比色池集合度测定法中用于聚集测定法。
为了制备洗涤的血小板，将来自不使用药物的健康志愿者的人静脉血采集到包含PGI2的ACD(85mM柠檬酸钠，111mM葡萄糖，71.4mM柠檬酸)中(包含终浓度为0.2μM PGI2的1.25ml的ACD；PGI2得自Sigma，St.Louis，Mo.)。通过在室温下于160xg下离心20分钟来制备富血小板血浆(PRP)。通过将PRP在730xg下离心10分钟并将血小板沉淀物重新混悬于包含1U/ml腺苷三磷酸双磷酸酶(V级，Sigma，St.Louis，Mo.)的CGS(13mM柠檬酸钠，30mM葡萄糖，120mM NaCl；2ml CGS/10ml初始血量)中来制备洗涤的血小板。在37℃下孵育15分钟后，通过在730xg下离心10分钟来收集血小板并将其以3×108个血小板/ml的浓度重新混悬于包含0.1％牛血清白蛋白、1mM CaCl2和1mM MgCl2的Hepes-Tyrode缓冲液(10mM Hepes，138mM NaCl，5.5mM葡萄糖，2.9mM KCl，12mMNaHCO3，pH 7.4)中。将该血小板混悬液在37℃下保持＞45分钟，然后用于聚集测定法。
2.
对于比色池透光率集合测定法而言，在96孔V-底板中在100％DMSO中制备供试化合物的系列稀释液(1∶3)(比色池中DMSO终浓度为0.6％)。在开始聚集反应前，将供试化合物(3μl在DMSO中的系列稀释液)与PRP一起预孵育30-45秒，所述聚集反应在ChronoLog集合度计中在37℃下通过向490μL PRP中加入激动剂(5或10μM ADP)来进行。在一些情况中，透光率集合度测定法是用490μl洗涤的血小板(如上所述那样制得的)在37℃下进行的，通过加入5μM ADP和0.5mg/ml人纤维蛋白原(AmericanDiagnostics，Inc.，GreenwicH，Conn.)来开始聚集。对聚集反应记录～5分钟，通过5分钟测定期内出现的最大聚集与基础聚集程度的差来确定最大聚集程度。计算聚集抑制，即，在存在抑制剂情况下观察到的最大聚集，将其与不存在抑制剂的情况相比。用Prism软件(GraphPad，San Diego，CA)通过非线性回归分析来获得IC50。
3.
与Frantantoni等人，Am.J.Clin.Pathol. 94，613(1990)所述操作类似地，也用微量滴定板振荡器和读板器在96孔平底微量滴定板中测定对ADP依赖性聚集的抑制。所有步骤都是在室温下进行的。对于使用富血小板血浆(PRP)的96-孔板聚集而言，0.2ml/孔的总反应体积包括180μl PRP(～3×108个血小板/ml，见上)、6μl位于20％DMSO中的供试化合物的系列稀释液或缓冲液(对于对照孔而言)和10μl 20X ADP激动剂溶液(100μM)。然后用微量滴定板读数器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，Calif.)在450nm下测定样品的OD，产生0分钟读数。然后将板在微量滴定板振荡器上搅动5分钟，在读板器上获得5分钟读数。由与t＝0分钟时相比t＝5分钟时在450nm的OD的降低来计算聚集，将其表示为针对未聚集对照样品的变化校正后ADP对照样品的降低％。用非线性回归分析获得IC50。
对于使用洗涤的血小板进行的96-孔板聚集而言，0.2ml/孔的总反应体积在Hepes-Tyrodes缓冲液/0.1％BSA中包括：4.5×107个腺苷三磷酸双磷酸酶-洗涤的血小板、0.5mg/ml人纤维蛋白原(American Diagnostica，Inc.，GreenwicH、Conn.)、位于0.6％DMSO中的供试化合物的系列稀释液(对于对照孔而言为缓冲液)。在室温下预孵育～5分钟后，加入ADP至2μM的终浓度，其诱导次最大聚集。向一套对照孔中加入缓冲液而非ADP(ADP-对照)。然后用微量滴定板读数器(Softmax，Molecular Devices，MenloPark，Calif.)在450nm下测定样品的OD，产生0分钟读数。然后将板在微量滴定板振荡器上搅动5分钟，在读板器中获得5分钟读数。由与t＝0分钟时相比t＝5分钟时在450nm的OD的降低来计算聚集，将其表示为针对未聚集对照样品的变化校正后ADP对照样品的降低％。用非线性回归分析获得IC50。
II.[3H]2-MeS-ADP与血小板结合的抑制
1.用放射性配体结合测定法测定候选分子抑制[3H]2-MeS-ADP与血小板 上P2Y12受体结合的能力
利用该测定法来测定该类化合物抑制[3H]2-MeS-ADP与全血小板结合的效力。在下面II(3)所述的条件下，[3H]2-MeS-ADP的结合仅仅是由于这种配体与P2Y12受体的相互作用，因为在该测定法中测量的所有特异性结合均可与P2Y12拮抗剂竞争(即，通过用过量P2Y12拮抗剂竞争来将特异性结合降低至背景水平，当将P2Y1拮抗剂与血小板制备物一起预孵育时，无结合竞争)。[3H]2-MeS-ADP结合实验是用在医院血库中通过标准操作采集的过期的人血小板按照常规进行的。如下制备腺苷三磷酸双磷酸酶-洗涤的过期血小板(如果没有另外指明，所有步骤在室温下进行)：
将过期的血小板混悬液用1体积CGS稀释并通过在1900xg下离心45分钟来使血小板沉淀。将血小板沉淀物以3-6×109个血小板/ml的密度重新混悬于包含1U/ml腺苷三磷酸双磷酸酶(V级，Sigma，St.Louis，Mo.)的CGS中，在37℃下孵育15分钟。在730x g下离心20分钟后，将沉淀物以6.66×108个血小板/ml的浓度重新混悬于包含0.1％BSA(Sigma，St.Louis，Mo.)的Hepes-Tyrode缓冲液中。在血小板静止＞45分钟后，进行结合实验。
2.
或者，用如第I部分(体外ADP-介导的血小板聚集的抑制)中所述那样制得的新鲜的人血小板进行结合实验，不同的是将血小板以6.66×108个血小板/ml的浓度重新混悬于包含0.1％BSA(Sigma，St.Louis，Mo.)的Hepes-Tyrode缓冲液中。新鲜和过期的血小板获得了十分相似的结果。
3.
调节了使用氚标记的有效激动剂配体[3H]2-MeS-ADP的血小板ADP受体结合测定法(ARB)(Jantzen，H.M.等人(1999)Thromb.Hemost.81：111-117)来适合96-孔微量滴定形式。在具有0.1％BSA和0.6％DMSO的0.2ml Hepes-Tyrode缓冲液的测定体积中，将1×108个腺苷三磷酸双磷酸酶-洗涤的血小板在96孔平底微量滴定板中与供试化合物的系列稀释液一起预孵育5分钟，然后加入1nM[3H]2-MeS-ADP([3H]2-甲硫基腺苷-5′-二磷酸，铵盐；比活度20-50Ci/mmole，通过Amersham Life Science，Inc.，Arlington Heights，Ill.或NEN Life Science Products，Boston，Mass.的委托合成获得)。在不存在供试化合物的情况下测定总结合。用于非特异性结合的样品可包含10μM未标记的2-MeS-ADP(RBI，Natick，Mass.)。在室温下孵育15分钟后，通过迅速过滤分离出未结合的放射性配体并利用96-孔细胞收集器(Minidisc 96，Skatron Instruments，Sterling，Va.)和8×12GF/C玻璃纤维Filtermat(Printed Filtermat A，1450 Microbeta，WallacInc.，Gaithersburg，Md.)用冰冷的(4-8℃)结合洗涤缓冲液(10mM HepespH 7.4，138mM NaCl)洗涤两次。在闪烁计数器(Microbeta 1450，WallacInc.，Gaithersburg，Md.)中测定Filtermat上血小板结合的放射活性。通过从总结合中减去非特异性结合来确定特异性结合，将存在供试化合物情况下的特异性结合表示为不存在供试化合物稀释液情况下特异性结合％的形式。用非线性回归分析来获得IC50。
在下表中，PRP试验中的活性提供如下：+++，IC50＜10μm；++，10μm＜IC50＜30μm。ARB试验中的活性提供如下：+++，IC50＜0.05μm；++，0.05μm＜IC50＜0.5μm.
表3：
  实施例号  ARB结合性   PRP活性
  实施例2  +++   +++
  实施例3  ++   ++
实施例6：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯 基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(9a)(无定形形式)的合成
将游离酸磺酰脲(7.0g，13.365mmol)混悬于THF/H2O(55∶22mL，约2.5∶1)，通过经约5分钟的时间滴加2M KOH(7.70mL，15.40mmol，1.15当量)来处理。添加结束后，形成澄清的溶液。但是，在小于5分钟的时间之后，有固体析出，且该反应混合液变成了浓稠的混悬液。将其在油浴中加热至50℃，将得到的澄清的粘稠浅棕色溶液保持在在温度下达0.5小时。一旦冷却至室温，就析出了标题化合物(9a)。将该混合液用i-PrOH(250mL，3倍于初始反应体积)稀释，在室温下搅拌3小时，然后经布氏漏斗过滤，得到白色固体形式的标题化合物(9a)。将其在真空烘箱中在80℃干燥，得到7.20g(96％)的无定形固体。MS(负扫描)：521.7；523.7。
实施例7：磺酰脲(7a)向其钠盐(10a)的转化
Figure G2008800226049D00742
将1-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-(4-(6-氟-7-(甲基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基)脲(3.0g，5.728mmol)7a混悬于CH3CN/H2O(1∶1；70mL)中，通过滴加2N NaOH(2.90mL，5.80mmol)进行处理。在约15分钟内，形成澄清的溶液。搅拌1.0小时后，将目前是浅棕色的溶液冻干，得到无定形固体状的粗产物10a。MS(负扫描)：522.0；524.0。
实施例8：作为选择的钠盐无定形形式的制备
将钠盐10a混悬于异丙醇(100mL)中，并回流约45分钟，然后经热过滤得到黄褐色的固体，通过HPLC分析其主要是标题化合物。将该固体混悬于CH3CN∶EtOH(1∶2)(100mL)中，并回流45分钟，然后经热过滤得到2.54g黄褐色固体状的标题化合物10a(通过分析型HPLC(长柱)测定其纯度为99.7％)。将滤液用EtOH稀释直至ACN∶EtOH的比率变为1∶3，并将其在室温下放置过夜。析出另外一批标题化合物，得到10a固体210mg(通过分析型HPLC(长柱)测定其纯度为99.7％)。
实施例9：[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯 基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的盐筛选
初步筛选
向在3mL各种溶剂中的20mg[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲中加入在1mL溶剂中的1.1当量的碱。将混合液振荡2小时，并将溶液蒸发至其一半的体积以尝试析出盐。结果见下表4中，其中显示了用于筛选的各碱。在THF中的溶液很快蒸发为固体，且将其经XRPD分析。来自THF的大多数样品为无定形油状固体，将其在50℃/环境温度下放置以陈化。向任何未通过蒸发形成固体的溶液中加入作为反溶剂的IPA以诱导固体析出。将含有IPA的未析出的样品放置以蒸发。如下表5中所示，溶液生成一些固体和一些油状物。在50℃/环境温度下将油状物/乳状液和不透明的液体以8小时的周期放置以陈化，达数周。显微镜检查和XRPD结果显示一些样品是晶体的，但缺乏固体意味着不能获得清楚的衍射图。然后过滤固体样品(结晶和无定形)，干燥然后分析以确定它们的纯度、结晶度和稳定性。经1HNMR分析固体以确定盐形成，并通过离子色谱法和TGA分析以获得各盐的化学计量。
表4：初步盐筛选
Figure G2008800226049D00761
表5a和5b：表征结果
表5a
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
氢氧化钾   MeCN/水 溶液  加入IPA反溶剂后形成沉淀 沉淀干燥
乙醇钾   MeCN/水 溶液
氢氧化钾 IPA 固体  部分结晶，与B型一致  部分结晶，与B型一致   所见化学位移，IPA，水
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
乙醇钾 IPA 固体 无定形  部分结晶，与B型一致   所见化学位移，IPA，水
氢氧化钾 水 固体  部分结晶，与C型一致  部分结晶，与C型一致 所见化学位移，水
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
乙醇钾 水 固体 无定形(小颗粒)   部分结晶，与C型一致 所见化学位移，水
  氢氧化钾   DMSO   溶液
  乙醇钾   DMSO   溶液
氢氧化钾 THF 固体 微弱结晶，D型 微弱结晶，D型   所见化学位移，THF，水，DMF
乙醇钾 THF 固体 微弱结晶，D型 微弱结晶，D型   所见化学位移，THF，DMF，IPA和水
氢氧化钠   MeCN/水 溶液
乙醇钠   MeCN/水 固体 无定形(小颗粒)   部分结晶，匹配游离酸
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
氢氧化钠 IPA 固体 微弱结晶，A型 微弱结晶，A型   所见化学位移，IPA，水(痕量THF，DMF)
乙醇钠 IPA 固体 部分结晶，B型 部分结晶，B型   所见化学位移，IPA，水，DMF
  氢氧化钠   水   溶液
乙醇钠 水 固体 无定形   部分结晶，匹配游离酸
  氢氧化钠   DMSO   溶液
  乙醇钠   DMSO   溶液
氢氧化钠 THF 固体 部分结晶，A型 部分结晶，A型   所见化学位移，THF，水，IPA
乙醇钠 THF 固体 部分结晶，A型 部分结晶，A型   所见化学位移，THF，水，DMF
醋酸钙   MeCN/水 固体   部分结晶，匹配游离酸   部分结晶，匹配游离酸
醋酸钙 IPA 固体 非部分结晶，A型 结晶，A型   所见化学位移，IPA，水(痕量THF)
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
醋酸钙 水 固体 微弱结晶   部分结晶，匹配游离酸   无所见化学位移，游离酸
  醋酸钙   DMSO   溶液
醋酸钙 THF   乳状液 部分结晶，B型 部分结晶，B型
  L-赖氨酸一水合物   MeCN/水 溶液
阳离子 溶剂   物理状态 浆体的XRPD 干燥样品的XRPD 1H NMR
  L-赖氨酸一水合物 IPA 固体 微弱结晶，A型 微弱结晶   所见化学位移，IPA，水
  L-赖氨酸一水合物   水   固体  无定形   部分结晶，匹配游离酸
  L-赖氨酸一水合物 DMSO 溶液
  L-赖氨酸一水合物 THF   油状物
表5b
  阳离子   溶剂   物理状态   浆体的XRPD   干燥样品的XRPD
  氢氧化铵   MeCN/水   溶液   结晶，B型   结晶，B型
  氢氧化铵   IPA   固体   部分结晶，A型   部分结晶，A型
  氢氧化铵   水   固体   结晶，B型   结晶，B型
  氢氧化铵   DMSO   溶液
  氢氧化铵   THF   固体   部分结晶，与A型一致   部分结晶，与A型一致
  醋酸镁   MeCN/水   固体   部分结晶，匹配游离酸   部分结晶，匹配游离酸
  醋酸镁   IPA   固体   部分结晶，非游离酸或碱   部分结晶，干燥时形式改变
  醋酸镁   水   固体   部分结晶，匹配游离酸   部分结晶，匹配游离酸
  醋酸镁   DMSO   溶液
  醋酸镁   THF   固体   样品蒸发，所以没有浆体   部分结晶，游离酸和醋酸镁的混合物
  L-精氨酸   MeCN/水   油状物
  L-精氨酸   IPA   固体   无定形   无定形
  L-精氨酸   水   固体   无定形   无定形
  L-精氨酸   DMSO   溶液
  L-精氨酸   THF   油状物
  氨丁三醇   MeCN/水   固体   无定形(小颗粒)   部分结晶，匹配游离酸
  氨丁三醇   IPA   固体   无定形(小颗粒)   部分结晶，非游离酸或碱
  氨丁三醇   水   固体   部分结晶，匹配游离酸   部分结晶，匹配游离酸
  阳离子   溶剂   物理状态   浆体的XRPD   干燥样品的XRPD
  氨丁三醇   DMSO   溶液
  氨丁三醇   THF   固体   部分结晶，A型
  N-乙基葡糖胺   MeCN/水   固体   无定形(小颗粒)   微弱结晶
  N-乙基葡糖胺   IPA   溶液
  N-乙基葡糖胺   水   固体   部分结晶，非游离酸或碱   过滤得到的固体不足
  阳离子   溶剂   物理状态   浆体的XRPD   干燥样品的XRPD
  N-乙基葡糖胺   DMSO   溶液
  N-乙基葡糖胺   THF   油状物
  N-甲基葡糖胺   MeCN/水   溶液
  N-甲基葡糖胺   IPA   凝胶
  N-甲基葡糖胺   水   固体   无定形(小颗粒)   微弱结晶，匹配游离酸
  N-甲基葡糖胺   DMSO   溶液
  N-甲基葡糖胺   THF   油状物
盐形式的放大实验
使用上文所述的方法以100mg规模进行一些盐形式的第二次评价，结果总结在表6和各图中。
表6：放大实验的表征
  阳离子   溶剂   收率   干燥样品的XRPD分析   1H NMR   TGA   DSC
  氢氧化钾   THF   100.30％   与盐筛选样品(D型)一致，更多结晶   所见化学位移，证实盐形成，残余的水、IPA和THF   3.4％损失(32-87℃)7.8％损失(87-229℃)   吸热(开始25℃，54.4J/g)吸热(开始132℃，13.6J/g)
  如所提供的B型(lot lot01POR07a-01-30)   2.8％损失(环境温度-150℃)分解开始于约240℃   吸热(开始25°-140℃，118.7J/g)吸热(开始276.8℃，63J/g).
  氢氧化钠   THF   104.50％   与A型一致，更多结晶   所见化学位移，证实盐形成，残余的水、IPA和THF   2.1％损失(32-66℃)7.5％损失(66-150℃)4.4％损失(150-231℃)1.6％损失(231-276°)   吸热(开始33℃，22.OJ/g)吸热(开始97℃，17.8J/g)吸热(开始162℃，21.8J/g)
  阳离子   溶剂   收率   干燥样品的XRPD分析   1H NMR   TGA   DSC
  氢氧化钠   IPA   104.20％   与A型一致，更多结晶   所见化学位移，证实盐形成，残余的水、IPA和THF   16.9％损失(32-222℃)1.5％损失(222-271℃)   吸热(开始88℃，89.2J/g)吸热(开始256℃，45.9J/g)
  醋酸钙   IPA   124.70％   与盐筛选样品(A型)一致，更多结晶  所见化学位移，证实盐形成，残余的水和IPA   1.0％损失(31-71℃)8.2％损失(71-217℃)1.0％损失(217-264℃)   吸热(开始25℃，11.6J/g)吸热(开始125℃，79.6J/g)
  氨丁三醇   IPA   88.60％   与盐筛选样品(A型)一致，更多结晶  所见化学位移，证实盐形成，酸∶碱比率为1∶1.07，即单盐，残余的水和IPA   0.8％损失(31-68℃)3.1％损失(68-176℃)   吸热(开始25℃，17.6J/g)吸热(开始165℃，43.7J/g)吸热(开始179℃，3.4J/g)
  阳离子   溶剂   收率   干燥样品的XRPD分析   1H NMR   TGA   DSC
  氢氧化铵   IPA   89.70％   与A型一致，结晶度相似  所见化学位移，证实盐形成，残余的水和IPA   1.0％损失(30-80℃)4.8％损失(80-165℃)1.2％损失(165-183℃)   吸热(开始28℃，16.1J/g)吸热(开始146℃，63.9J/g)
  氢氧化铵   水   96.60％   与B型一致，更少结晶，一些封向较小2θ值位移  所见化学位移，证实盐形成，残余的水   8.0％损失(31-115℃)1.3％损失(115-173℃)3.8％损失(173-216℃)   吸热(开始64℃，190.9J/g)吸热(开始139℃，16.7J/g)放热(开始183℃，14.0J/g)
基于无水单盐计算收率。溶解度是水的热力学溶解度，以游离碱当量表述。
钠盐
所有样品以良好的收率(尽管一些样品上有残留的溶剂)和良好的化学纯度成功放大。通过1H NMR确定所有的样品为盐。钠盐均与A型一致，其确证了从THF溶剂系统中获得A型的重现性。IPA/乙醇钠方法有时得到B型，但是放大实验后的粉末图与A和B型均不同。钠盐显示出良好的溶解度但在40℃/75％RH达3天时不稳定。
得自THF的钠盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。残留溶剂：水、IPA、THF。
通过HPLC确定纯度为99.6A％
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.92。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱1∶1.02，即，单盐。
溶解度。溶解度＝＞10mg/ml游离碱当量。澄清溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝8.76。样品为澄清的溶液，所以对于通过XRPD分析来说没有残余物。
得自IPA的钠盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。残留溶剂：水、IPA、THF。
通过HPLC确定纯度为99.0A％
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.92。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱1∶1.11，即，单盐。
溶解度。溶解度＝＞10mg/ml游离碱当量。澄清溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝9.06。样品为澄清的溶液，所以对于通过XRPD分析来说没有残余物。
钙盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。残留溶剂：水、IPA。
通过HPLC确定纯度为98.8A％
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.76。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱1∶0.84。
溶解度。溶解度＝0.04mg/ml游离碱当量。饱和溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝7.36
残余物的XRPD显示新的XRPD图。
氨丁三醇盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。氨丁三醇∶游离酸的比率为1.07∶1，即，具有轻微过量的氨丁三醇的单盐。残留溶剂：水、IPA。
通过HPLC确定纯度为98.7A％
溶解度。溶解度＝2.4mg/ml游离碱当量。饱和溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝8.90
残余物的XRPD显示新的XRPD图(样品几乎变为无定形)。
得自IPA的铵盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。残留溶剂：水、IPA。
通过HPLC确定纯度为98.1A％
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.52。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱是1∶0.56，即半盐。
溶解度。溶解度＝2.3mg/ml游离碱当量。饱和溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝8.80.残余物的XRPD显示新的XRPD图，其与铵盐B型的相似。
得自水的铵盐的表征
1H NMR：所见的化学位移，确定盐形成。残留溶剂：水。
通过HPLC确定纯度为98.1A％
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.50。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱是1∶0.56，即半盐。
溶解度。溶解度＝1.9mg/ml游离碱当量。饱和溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝8.08
残余物的XRPD显示XRPD图没有改变。
实施例9：通过重结晶制备钾盐的多晶型物A型
重结晶：通过首先加热至回流来溶解，然后冷却至室温来析出沉淀，能将粗产物从MeOH或MeOH/EtOH(3∶1)中重结晶。
从MeOH中重结晶：将1.0g钾盐混悬于MeOH(150mL)中，并加热至回流达0.5小时，得到几乎澄清的溶液。然后经布氏漏斗进行热过滤。将澄清滤液在室温静置，析出白色固体。将其搅拌过夜，然后经布氏漏斗过滤收集。将该固体产物用EtOH(2×4.0mL)冲洗，并在真空烘箱中80℃干燥20小时，得到740mg的无色固体。将母液浓缩到其原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。
从EtOH/MeOH中重结晶：将1.0g钾盐混悬于EtOH/MeOH的溶剂混合物(1∶3)(200mL)中，加热回流0.5小时，生成几乎澄清的溶液。然后将其经布氏漏斗进行热过滤。将澄清滤液在室温下放置析出无色固体。将其经布氏漏斗过滤收集。将该固体产物用EtOH冲洗，并在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到白色固体。将母液浓缩到其原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。
从MeOH中重结晶B型：将[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐(C5 009，500mg)加入至100ml的圆底烧瓶中，并加入甲醇(67ml)。将混悬液在磁力搅拌下加热至回流达30分钟。因为没有溶解，所以经1小时的时间再加入两批的甲醇(20ml)。仍然没有溶解，且达到了容器的限制。将该混悬液冷却至环境温度，然后在真空下过滤，并将固体(第1批)在烘箱中在真空下在45℃干燥。将一部分母液(约20ml)在真空下浓缩至干燥(第2批)，并将剩余母液浓缩至约30ml。在几分钟内，可以观测到烧瓶变的非常冷，且许多析出固体析出(第3批)。这表明该溶液在浓缩前是不饱和的。
所有3个批次的XRPD分析显示，只有第3批准确地类似于A型的粉末图。推测第1批和第2批是处于B型和C型之间过渡的固体，因为显示第1批包含是B型特征性的5.22θ峰，且第2批没有B型的峰，但两者都不具有A型的4.82θ峰。来自第3批的液体的单晶体证实A型是2.5水合物，其中一个分子的水配位于钾，且1.5分子的水通过氢键与各个[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐部分结合。认为氢键结合的水移动的容易程度决定了是否可观察到在4.82θ的峰。结构详述见于下文第10部分中。
实施例10：通过重结晶制备钾盐的B型
重结晶：通过首先加热至回流来溶解，然后冷却至室温来析出沉淀，能将粗产物从EtOH/H2O(91∶9)或小体积的MeOH中重结晶。
从EtOH/H2O中重结晶：1.0g钾盐混悬于EtOH(190mL)中，并加热至回流。向该浓稠混悬液中滴加H2O(18.0mL)，生成澄清的无色溶液。冷却至室温后，析出白色固体状的标题化合物。经布氏漏斗过滤收集固体，并用EtOH(2×4.0mL)冲洗。将其在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到650mg的无色固体。将母液浓缩到其原始体积的约三分之一得到更多的标题化合物。
从小体积的MeOH中大规模重结晶：将6.6g钾盐混悬于MeOH(30mL)中，并加热至回流达5小时，固体没有完全溶解于该体积的甲醇中。冷却后，将该固体过滤，并用iPrOH冲洗。将该固体在真空烘箱中在80℃干燥20小时，得到6.2g的无色固体，对其特征分析后显示为B型。
已显示B型对湿度和温度相当稳定。将API暴漏在75％RH/40℃的条件下多达6个月后，其固体状态没有变化。
实施例11：钾盐的B型的多晶研究
研究[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的B型形成多晶型物的倾向。使B型(半水合物)在一系列的溶剂(纯的和混合液)成为浆体。溶剂的选择基于它们的可药用性，还基于一系列的官能团和极性，如醇类、醚类和酯类。为促使水合物形成，还选择含水混合液。所使用的溶剂在表7中详述。
表7环境温度下的多晶实验
  溶剂   体积/μl   XRPD
  丙酮   500   B型
  丙酮/水   500   图中有变化
  THF   500   B型
  THF/水   500   B型和LJC-225-001-2图的混合物
  EtOH   500   B型
  EtOH/水   500   B型
  DCM   500   B型
  DCM/MeOH(9∶1)   500   B型
  MtBE   500   B型
  2-MeOEtOH   500   该溶剂溶解K盐
  溶剂   体积/μl   XRPD
  2-MeOEtOH/水   500   B型
  二噁烷   500   B型
  二噁烷/水   500   B型
  MEK   500   B型
  IPA   500   B型
  IPA/水   500   B型
  EtOAc   500   B型
  EtOAc/庚烷   500   B型
  MeCN   500   B型
  MeCN/水   500   B型
  水   500   B型
将约50mg[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的B型混悬于10个体积的表7中详述的溶剂中，并在环境温度下搅拌2小时。观察到2-甲氧基乙醇是溶解钾盐的唯一溶剂。将该混悬液在在真空下过滤，且通过XRPD分析。大多数的固体保持了B型，丙酮/水1∶1的混合液导致固体形式细微地变化。在四氢呋喃/水1∶1的混合液中生成所述细微不同的形式和B型的混合物。
向所有的B型样品中，再加入五个体积的适合的溶剂的等分试样，并将混悬液在50℃搅拌4小时，然后冷却至室温达4小时。在总共24小时的时间内重复该循环，然后将该混悬液在真空下过滤，并通过XRPD分析。结果在表8中详述。
表8加热循环多晶实验
  溶剂   体积/μl(另外的部分)   XRPD
  丙酮   250   无定形
  丙酮/水   250   N/A
  THF   250   无定形
  THF/水   250   N/A
  EtOH   250   族2
  EtOH/水   250   族1
  DCM   250   族2
  DCM/MeOH(9∶1)   250   族2
  MtBE   250   B型
  2-MeOEtOH   250   N/A
  2-MeOEtOH/水   250   族3
  二噁烷   250   族4
  二噁烷/水   250   族5
  MEK   250   族2
  IPA   250   族2
  IPA/水   250   族1
  EtOAc   250   族2
  EtOAc/庚烷   250   族2
  MeCN   250   B型
  MeCN/水   250   族1
  水   250   B型
在固体形式中观察到的改变与B型只有略微不同。因为这个原因，将不同的相归类为各个族而不给出明确的形式名称，直至进一步的分析确定它们是不同的。
为表征这些物质，采用了一系列技术(DSC、VTXRPD和1H NMR)。
族1的鉴定
族1的粉末图是所有被分离的族中与B型最匹配的。仅存在的不同似乎由于分辨率的降低(可能是由于所使用的设备)。为证实是该情况，进行热分析。DSC显示B型原料在比族1样品略低的温度熔化。为推断这是否由于杂质，对两个样品进行纯度分析。
纯度分析测定族1纯度为99.8面积％，且B型原料纯度为99.9％。因此纯度被排除在造成不同的原因之外。决定进行VT XRPD实验以推断去溶剂化相是什么。然而，当再分析时，该固体完全转化为B型。因此没有再研究族1。
族2的鉴定
标为族2的相从许多所使用的溶剂系统中分离。为推断所述相是否为水合物，进行热分析。DSC实验显示由室温至约102℃的吸热峰，推测其与去溶剂化有关。然后该去溶剂化相在281℃熔化。Karl Fischer分析证实了3.4％的水含量，其相当于1.1摩尔。为获得用于稳定性研究的另外的样品，将另一个等分试样的原混悬液过滤。然而，XRPD显示特征性的5.22θ峰，表明该样品正在变化为B型。进行DSC实验以确定熔点，因为熔点从281℃几乎降低至B型的熔点279℃，所以显示该样品是B型和一水合物的混合物。
族3的鉴定
该固体形式分离自2-MeOEtOH/H2O(1∶1)，在另外一个实验中产生的单晶也是如此分离的。将该单晶体结构解析为半2-甲氧基乙醇溶剂化物半水合物，且发现从数据计算的粉末图与B型的实际的图非常相似。该结构显示水分子位于钾的配位层。但是，2-甲氧基乙醇通过氢键相互作用。认为2-甲氧基乙醇能进入和离开该结构而不引起其任何改变，即导致去溶剂化的溶剂化物，因而粉末图相似。
族4的鉴定
标为族4的固体是该形式的所分离的唯一固体。DSC分析表明来自宽范围的吸热峰的去溶剂化，所述吸热峰开始于25℃至约130℃。在该转变后，扫描图为典型的无定形相的扫描图。猜测该盐是否实际上是去溶剂化为无定形相的溶剂化物。为证实这一猜测，进行了VT-XRPD实验。
通过多晶筛选确定：B型(半水合物)显示进一步水合或溶剂化的倾向。还注意到，当被2-甲氧基乙醇进一步溶剂化时，所述溶剂填充了通道(下文详述)。
2-甲氧基乙醇/水结晶作用
因为，已推断2-甲氧基乙醇是除了二甲基亚砜外溶解[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的唯一的溶剂，所以使用2-甲氧基乙醇和水作为共溶剂进行大量重结晶。进行下列的反应：
表9
  溶剂系统   重结晶条件   实验观测  XRPD结果   1H NMR结果
  2-MeOEtOH/H2O(1∶1)   将B型混悬于10个体积中并搅拌加热至93℃，同时磁力搅拌。   加热溶解固体，但该物质在几分钟内结晶而不需要冷却。  具有与B型相同的粉末图，尽管被怀疑是同构的(isostructrual)2-甲氧基乙醇溶剂化物。   I
  2-MeOEtOH/H2O(60∶40)   将B型混悬于20个体积中并加热至70℃，同时磁力搅拌。   加热溶解固体，但在冷却时不结晶。6天后观察到油状物。  不适用
  2-MeOEtOH/H2O(1∶1)   将B型混悬于20个体积中并加热至73℃，同时磁力搅拌。   加热溶解固体，并在冷却时结晶。  非常接近B型，但被怀疑是同构的2-甲氧基乙醇溶剂化物。   积分的0.68mol2-甲氧基乙醇。含有稍微不同量的2-甲氧基乙醇的不稳定溶剂化物。
  2-MeOEtOH/H2O(60∶40)   将B型混悬于15个体积中并加热至73℃，同时磁力搅拌。   加热溶解固体，并在冷却时结晶。   非常接近B型，但被怀疑是同构的2-甲氧基乙醇溶剂化物。   积分的0.49mol2-甲氧基乙醇。含有稍微不同量的2-甲氧基乙醇的不稳定溶剂化物。
为证实2-甲氧基乙醇溶剂化物去溶剂化转化为半水合物(迄今为止称为B型)没有引起结构上显著的变化，因此进行粉末图(VT XRPD)，并通过1H NMR再分析该固体。已推断2-甲氧基乙醇/水组合不能产生除半水合物B型的2-甲氧基乙醇溶剂化物之外的任何形式。由于其被认为是II类(ICH指南)溶剂，所以排除其为潜在的重结晶溶剂，且因此其残留水平限制为50ppm。
由[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲游离酸形成钾盐
选择在多晶筛选中引起与B型细微不同的溶剂和含水溶剂组合作为用于从游离酸生成钾盐的反应溶剂。进行了下列实验：
表10实验观测和结果
Figure G2008800226049D00891
Figure G2008800226049D00901
将四个混悬液在真空下过滤并风干。然后进行XRPD分析。当出现棕色油状物时，一周后丢弃得自二噁烷/水的样品。充分表征给出新的粉末图的得自二噁烷的固体，推断其为1，4-二噁烷溶剂化物，其中[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲具有2当量溶剂。
进行的实验显示当由B型(干燥微弱结合的溶剂成为半水合物)开始时，固体进一步水合成为一水合物或与某些溶剂溶剂化。所述溶剂填充通道，因此当所述溶剂分子空出该空隙时，其不引起结构上的改变。因为这个原因，需要除单独的XRPD之外的技术以推断分离出的实际形式。对B型的进一步开发而言，必须确定该物质已被充分干燥为半水合物。没有鉴定出无水形式的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐。
实施例12：通过湿法制粒制备钾盐的C型
当进行湿法制粒时，确认B型的固相有改变。因而使用研钵和研棒将[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的B型与75％和90％w/w水研磨，随后在40℃加热过夜，结果转化为无定形形式或新形式——[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的C型。C型具有与[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的A型和B型不同的XRPD和DSC性质。该新形式还来自以下的湿法制粒过程：将API与赋形剂在低速剪切制粒机中混合，随后挤压并滚制，所述赋形剂包括：Avicel、三酰基柠檬酸酯(triacylcitrate)和水。此外，当在环境温度下储存，或冷藏(2-8℃)较长的时间(即3天)时，可能在含水浆体中制备该新的形式。
该样品(主要是指C型)通过阳离子色谱法表征以证实钾盐是完整的。测定证实相对于[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲具有0.92当量的钾，将其用从TGA推断出的溶剂含量来校正。随后鉴定该新的C型为[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲的半-钾盐。
表11C型的水溶度测定
  在水中的热力学溶解度/mg.ml-1   pH
  4.5   8.7
  4.5   8.8
以800mg的规模和90％体积的水，将B型在玻璃研钵中与含有磷酸盐缓冲液(pH 7.4，由H3PO4和KOH制备)和DI水的90％体积的水研磨5至10分钟。研磨后通过XRPD再次分析样品。
表12人工研磨实验
  实验  XRPD结果
  将B型在大的玻璃研钵与90％体积的水研磨约5分钟。取出一个等分试样并在4℃储存4天。  B型
  将B型在大的玻璃研钵与90％体积的水研磨约5分钟。将糊铺在载玻片上并风干。  B型
  加入另外的90％体积的水至总样品中，并研磨约5分钟。将糊铺在载玻片上并在45℃干燥。 B型(结晶度大幅降低)
  加入另外的90％体积的水至总样品中，并研磨约5分钟。将样品在45℃储存。 图非常接近C型
结论为：如果充分研磨B型来破坏晶格且无定形相是在存在水的情况下，则其可能水合为C型。为获得B型和C型相对稳定性的进一步的信息，进行了许多实验，其涉及1∶1的固体混合物。
定性的相对稳定性研究
研究A型(二水合物)与B型和C型的相对稳定性。
对B型和C型进行的定性的相对稳定性研究
将约1∶1比率的B型和C型在玛瑙研钵中一起轻微研磨，并获得粉末图。对该混合物进行下列实验。
表13相对稳定性实验
实验   1天后XRPD结果   4天后XRPD结果
将混合物混悬于水(500μl)中，并磁力搅拌。   样品是乳状液，因此将其移液至载玻片来干燥。   固体由干燥的乳状液结晶，为C型
将混合物在75％RH、25℃的气氛下静置   混合物   混合物
将混合物在标准实验室条件下静置，不添加任何物质。 混合物 混合物
这些结果支持无定形钾盐结晶为C型。
得自B型的C型
为推论是否有强有效的方法将B型转化为C型，使用不同批次的[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐进行一系列的实验。各批次间的不同为粒子大小。确立各实验，将混悬液过滤并用水洗涤，结果在表14中详述。
表14实验过程和结果
  PRT 128k盐   盐的量/mg   H2O的体积  混悬液温度/℃   过滤后XRPD结果
  未研磨   约50   3.6  环境温度   B和C的混合物
  未研磨   约50   3.6  4   B和C的混合物
  未研磨   约50   3.6  50   B
  未研磨   约50   5   环境温度   B
  未研磨   约50   5   4   B
  研磨   约50   5   环境温度   B和C的混合物
  研磨   约50   5   4   B和C的混合物
  研磨   约50   5   50   B和C的混合物
进行的九个实验中，证实八个为B型或B型和C型的混合物，且一个得到具有满足用于衍射的品质的单晶。晶体结构解析为水合的半钾盐。水合的水平难以确证，原因是所述水保持在通道中而易于去溶剂化。目前认为在充分占用的情况下，存在3mol水(参加下文详述)。
对A型和C型进行的定性的相对稳定性研究
将约1∶1比率的A型和C型在玛瑙研钵中一起轻微研磨，并获得粉末图。
表15相对稳定性实验
  实验   4天后XRPD结果
  将A/C型混合物暴露于40℃/75％RH气氛下   混合物没有变化
  将A/C型混合物暴露于60℃/75％RH气氛下5天   混合物没有变化
加强的条件没有引起向任何一种形式的转化。
实施例13：单晶X-射线衍射研究
提交四个样品用于单晶X-射线衍射研究。本节剩余的部分提供了得到的结构分析。
表16[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的半2-甲氧基乙醇溶剂化物半水合物的单晶结构
Figure G2008800226049D00941
结构解析采用直接法，采用全矩阵最小二乘法修正F2，权重w-1＝σ2(Fo 2)+(0.0925P)2+(20.0000P)，其中P＝(Fo 2+2Fc 2)/3，各向异性位移参数，无吸收校正。所有数据的最终wR2＝{∑[w(Fo 2-Fc 2)2]/∑[w(Fo 2)2]1/2}＝0.1621，7471个衍射点中F值为Fo＞4σ(Fo)的常规R1＝0.0514，基于所有数据和708个参数的计算获得S＝1.002。最终的Δ/σ(最大值)值为0.005，Δ/σ(平均值)值为0.000。
表17.单乙腈溶剂化物半水合物的单晶结构
Figure G2008800226049D00942
Figure G2008800226049D00951
结构解析采用直接法，采用全矩阵最小二乘法修正F2，权重w-1＝σ2(Fo 2)+(0.1000P)2+(0.0000P)，其中P＝(Fo 2+2Fc 2)/3，各向异性位移参数，无吸收校正。所有数据的最终wR2＝{∑[w(Fo 2-Fc 2)2]/∑[w(Fo 2)2]1/2}＝0.1808，7073个衍射点中F值为Fo＞4σ(Fo)的常规R1＝0.0567，基于所有数据和721个参数的计算获得S＝1.154。最终的Δ/σ(最大值)值为0.003，Δ/σ(平均值)值为0.000。
表18[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐2.5水合物的单晶结构(A型)
Figure G2008800226049D00952
Figure G2008800226049D00961
结构解析采用直接法，采用全矩阵最小二乘法修正F2，权重w-1＝σ2(Fo 2)+(0.1000P)2+(0.0000P)，其中P＝(Fo 2+2Fc 2)/3，各向异性位移参数，无吸收校正。所有数据的最终wR2＝{∑[w(Fo 2-Fc 2)2]/∑[w(Fo 2)2]1/2}＝0.2072，4777个衍射点中F值为Fo＞4σ(Fo)的常规R1＝0.0636，基于所有数据和678个参数的计算获得S＝1.493。最终的Δ/σ(最大值)值为0.01，Δ/σ(平均值)值为0.001。
表19[4-(6-氟-7-甲基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基]-5-氯-噻吩-2-基-磺酰基脲钾盐的半-钾盐水合物(C型)的单晶结构
结构解析采用直接法，采用全矩阵最小二乘法修正F2，权重w-1＝σ2(Fo 2)+(0.1500P)2+(3.5000P)，其中P＝(Fo 2+2Fc 2)/3，各向异性位移参数，无吸收校正。所有数据的最终wR2＝{∑[w(Fo 2-Fc 2)2]/∑[w(Fo 2)2]1/2}＝0.2571，2459个衍射点中F值为Fo＞4σ(Fo)的常规R1＝0.0778，基于所有数据和368个参数的计算获得S＝1.069。最终的Δ/σ(最大值)值为0.004，Δ/σ(平均值)值为0.000。最终差分图(difference map)在+1.143和
Figure G2008800226049D00971
之间。
实施例14：通过重结晶制备钾盐的多晶型物D型
1H NMR：化学位移确定盐形成。
残留溶剂：水、IPA、THF。
通过HPLC确定纯度为98.8A％.
离子色谱法。酸∶碱比率为1∶0.89。当考虑溶剂含量进行调整时，酸∶碱为1∶1.0即单盐。
热力学水溶解度。溶解度＝2.7mg/ml游离碱当量。饱和溶液的pH(在25℃振荡24小时后)＝9.36。残余物的XRPD显示新的XRPD图。
方法：在室温下将40个体积的THF加入100mg的游离酸中。然后将其加热至50℃达2小时，并在4℃缓慢冷却。过滤固体，并在真空烘箱中在25℃干燥。通过离子色谱法证实该固体为单钾盐。
尽管为清楚理解的目的通过具体说明和实施例详细地描述了上述本发明，但本领域技术人员可以理解的是，可在本发明的范围内进行某些改变和改进。另外，将本文提供的每篇文献的全部内容引入本文作为参考，其引入程度如同将各参考文献单独引入本文作为参考。

Claims (70)

1.包含式I化合物和选自钠、钾、钙、L-赖氨酸、铵、镁、L-精氨酸、氨丁三醇、N-乙基葡糖胺和N-甲基葡糖胺的离子的盐
Figure F2008800226049C00011
2.权利要求1的盐，其中离子是钾。
3.权利要求1的盐，其中离子是钠。
4.权利要求1的盐，其中离子是钙。
5.权利要求1的盐，其中离子是L-赖氨酸。
6.权利要求1的盐，其中离子是铵。
7.权利要求1的盐，其中离子是镁。
8.权利要求1的盐，其中离子是L-精氨酸。
9.权利要求1的盐，其中离子是氨丁三醇。
10.权利要求1的盐，其中离子是N-乙基葡糖胺。
11.权利要求1的盐，其中离子是N-甲基葡糖胺。
12.结晶固体C型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00012
其通过以下几项中至少一项表征：
(i)基本上与图20b一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图25中所显示的DSC图一致的DSC图。
13.权利要求12的结晶固体C型的盐，其通过基本上与图24一致的X射线粉末衍射图而表征。
14.权利要求12的结晶固体C型的盐，其通过在约56℃的DSC吸热起始点而表征。这是实情，尽管吸热显示了脱水作用，但因为加热改变了样品，所以剩余产物不再是C型。这对于在本专利中所有的水合的物质都相同。
15.结晶固体D型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00021
其通过以下几项中至少一项表征：
(i)基本上与图26或27一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图29中所显示的DSC图一致的DSC图。
16.权利要求15的结晶固体D型的盐，其通过基本上与图26一致的X射线粉末衍射图而表征。
17.权利要求15的结晶固体D型的盐，其通过在约54℃和在约132℃的DSC吸热现象起始点而表征。
18.结晶固体A型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00022
其提供以下几项中至少一项：
(i)基本上与图30一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图33一致的DSC图。
19.权利要求18的结晶固体A型的盐，其通过基本上与图30一致的X射线粉末衍射图而表征。
20.权利要求18的结晶固体A型的盐，其通过在约33℃、97℃和162℃的DSC吸热现象而表征。
21.结晶固体B型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00031
其提供以下几项中至少一项：
(i)基本上与图35一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图36一致的TGA图。
22.权利要求21的结晶固体B型的盐，其通过基本上与图35一致的X射线粉末衍射图而表征。
23.结晶固体C型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00032
其提供以下中至少一项：
(i)基本上与图20a一致的X射线粉末衍射图。
24.结晶A型的权利要求23的盐，其提供了基本上与图20a一致的X射线粉末衍射图。
25.权利要求23的结晶固体C型的盐，其通过在约80℃的DSC吸热起始点而表征。
26.结晶固体A型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00033
其提供以下几项中至少一项：
(i)基本上与图38一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图42一致的DSC图。
27.具有晶形的权利要求26的盐，其提供了基本上与图38一致的X射线粉末衍射图。
28.权利要求26的结晶固体A型的盐，其通过在约125℃的DSC吸热起始点而表征。
29.结晶固体A型的下式的盐：
Figure F2008800226049C00041
其提供以下几项中至少一项：
(i)基本上与图43一致的X射线粉末衍射图；和
(ii)基本上与图47一致的DSC图。
30.具有无定形形式的权利要求29的盐，其提供了基本上与图43一致的X射线粉末衍射图。
31.权利要求29的结晶固体A型的盐，其通过在约166℃的DSC吸热起始点而表征。
32.以上权利要求中任意一项的盐，其是经分离并纯化的形式。
33.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物和可药用介质或载体。
34.权利要求33的药物组合物，其中组合物中的化合物是至少一种固体形式。
35.权利要求34的药物组合物，其中组合物选自固体口服组合物、片剂、胶囊剂、锭剂和吸入用干粉剂。
36.权利要求35的药物组合物，其中固体口服组合物是片剂、胶囊剂或锭剂。
37.权利要求33的药物组合物，其中所述治疗有效量是对抑制哺乳动物血小板聚集有效的量。
38.权利要求37的药物组合物，其中所述血小板聚集是血小板ADP-依赖性聚集。
39.权利要求38的药物组合物，其中所述哺乳动物是人。
40.权利要求33的药物组合物，其中所述化合物是结合于血小板ADP受体的[3H]2-MeS-ADP的有效抑制剂。
41.权利要求33的药物组合物，其中组合物是固体口服组合物。
42.权利要求33的药物组合物，其中组合物是片剂、胶囊剂或锭剂。
43.权利要求33的药物组合物，其中组合物是气雾剂或吸入式干粉剂。
44.权利要求33的药物组合物，其中组合物是适于输注、注射或透皮递送的形式。
45.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物和另外的治疗剂。
46.依据权利要求45的药物组合物，其中所述另外的治疗剂用于治疗选自以下的病症或障碍：血栓形成，急性心肌梗死，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，外周血管疾病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，在由血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置、假体的插入引起的侵入性操作后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，以及与遗传素质或癌症有关的高凝状态。
47.用于预防或治疗哺乳动物中以不希望的血栓形成为特征的病症的药物组合物，其包含可药用载体和治疗有效量的权利要求1的盐。
48.制备式I的盐的方法：
其包括在形成式I的盐的条件下将碱与式II化合物或其盐接触
Figure F2008800226049C00061
49.权利要求48的方法，其中所述条件包括在10℃以下的温度实施该方法。
50.权利要求48的方法，其中式I的盐的收率至少为50％。
51.权利要求48的方法，其中式I的盐的收率至少为65％。
52.权利要求48的方法，其中式I的盐的收率至少为75％。
53.权利要求48的方法，其中以克的规模或千克的规模制备式I的盐。
54.用于预防或治疗哺乳动物中血栓形成和血栓形成相关病症的方法，其包括向哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1的盐的步骤。
55.用于预防或治疗哺乳动物中至少部分由ADP-诱导的血小板聚集介导的病症或障碍的方法，其包括以下步骤：向需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1的组合物或其可药用盐。
56.用于抑制血液样品凝结的方法，其包括将所述样品与所述盐即权利要求1的盐接触的步骤。
57.权利要求55的方法，其中所述哺乳动物易患或罹患心血管疾病。
58.权利要求57的方法，其中所述心血管疾病选自以下疾病的至少一种：急性心肌梗死，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，外周血管疾病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，在由血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置、支架内血栓形成与血管内装置和假体的插入引起的侵入性操作后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，以及与遗传素质或癌症有关的高凝状态。
59.权利要求54的方法，其中化合物经口服、胃肠外或局部施用。
60.权利要求54的方法，其中化合物与第二种治疗剂组合施用。
61.权利要求60的方法，其中患者是人。
62.权利要求60的方法，其中第二种治疗剂可用于治疗选自以下的病症或障碍：急性心肌梗死，不稳定型心绞痛，慢性稳定型心绞痛，短暂性脑缺血发作，中风，外周血管疾病，子痫前期/子痫，深部静脉血栓形成，栓塞，弥散性血管内凝血和血栓性血小板减少性紫癜，在由血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植术、支架放置和血管内装置、假体的插入引起的侵入性操作后发生的血栓形成性和再狭窄性并发症，以及与遗传素质或癌症有关的高凝状态。
63.依据权利要求60的方法，其中所述化合物与选自以下的第二种治疗剂组合施用：抗血小板化合物、抗凝剂、纤溶剂、抗炎化合物、降胆固醇剂、质子泵抑制剂、降血压剂、5-羟色胺阻滞剂和硝酸酯类(即硝酸甘油)。
64.依据权利要求63的方法，其中所述第二种治疗剂是选自以下的抗血小板化合物：GPIIB-IIIa拮抗剂、阿司匹林、磷酸二酯酶III抑制剂和血栓烷A2受体拮抗剂。
65.依据权利要求63的方法，其中所述第二种治疗剂是选自以下的抗凝剂：凝血酶抑制剂、香豆定、肝素和
Figure F2008800226049C00071
以及fXa抑制剂。
66.依据权利要求63的方法，其中所述第二种治疗剂是选自以下的抗炎化合物：非甾类抗炎剂、环加氧酶-2抑制剂和类风湿性关节炎药。
67.预防继发性缺血事件发生的方法，其包括向患有原发性缺血事件的患者施用治疗有效量的权利要求1的盐与可药用载体。
68.依据权利要求67的方法，其中所述原发性和/或继发性缺血事件选自：心肌梗死、稳定型或不稳定型心绞痛、经皮冠脉介入和/或支架放置后的急性再闭塞、再狭窄、外周血管球囊血管成形术和/或支架放置、血栓形成性卒中、短暂性脑缺血发作、可逆的缺血性神经功能障碍和间歇性跛行。
69.依据权利要求67的方法，其中所述原发性和/或继发性缺血事件选自：包括血管成形术和/或支架放置的经皮冠脉介入(PCI)、急性心肌梗死(AMI)、不稳定型心绞痛(USA)、冠状动脉疾病(CAD)、短暂性脑缺血发作(TIA)、中风、外周血管疾病(PVD)、冠脉旁路手术、颈动脉内膜切除术。
70.用于制备药物组合物的方法，其包括将治疗有效量的权利要求1的盐与可药用介质或载体混合。
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