CN101288382B - 胡椒木离体培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胡椒木离体培养方法，包括准备外植体、诱导、增殖和生根等步骤。准备外植体即准备适合发芽的胡椒木茎段；诱导即将外植体接种于幼芽诱导培养基上，使得外植体上发出幼芽；增殖即将幼芽接种于增殖培养基上增殖产生丛生芽；生根即将丛生芽接种于生根培养基使得丛生芽生根，即成胡椒木幼苗。采用本发明技术方案的胡椒木离体培养方法，由于采用了组织培养技术对胡椒木进行离体培养，可以不受季节限制，快速低成本的繁殖出大量胡椒木的幼苗，因而经济效益可观，具有良好的市场前景。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体涉及一种胡椒木离体培养方法。
背景技术
胡椒木(Zanthoxylum Piperitum)，是芸香科多年生常绿灌木，又名黑胡椒、山椒、风车草。株高约30～90公分，雌雄异株，雄花黄色，雌花红橙色，子房3～4个，果实椭圆形。胡椒木的观赏价值较高，主要集中在枝叶上，约0.6公分的倒卵形对生小叶，革质，浓绿油亮，娇小玲珑，非常可爱。枝叶青翠适合修剪成型、庭植美化、绿篱或盆栽，成为庭院、公园中进行平面及垂直绿化的良好材料。胡椒木一般采用扦插方式繁殖，但是扦插繁殖受母株材料和繁殖季节的影响，往往无法满足市场的需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种任何季节均能大量快速繁殖胡椒木的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
胡椒木离体培养方法，包括如下步骤：
S1)、准备外植体：即准备适合发芽的胡椒木茎段作为外植体；
S2)、诱导：将步骤S1准备的外植体接种于幼芽诱导培养基上，使得外植体上发出幼芽，所述的幼芽诱导培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L；
S3)、增殖：将步骤S2中所述幼芽接种于增殖培养基上增殖产生丛生芽，所述增殖培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L；
S4)、生根：将步骤S3中所述的丛生芽接种于生根培养基使得丛生芽生根，即成胡椒木幼苗，所述生根培养基为1/2 MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L。
优选的技术方案中，所述幼芽诱导培养基优选为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。
优选的技术方案中，所述增殖培养基优选为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。
优选的技术方案中，所述生根培养基优选为1/2MS+萘乙酸0.4mg/L。
具体的，所述步骤S1包括制作外植体和消毒两个步骤；所述制作外植体是指选择胡椒木枝条剪切成包括侧芽的胡椒木茎段；所述消毒是指对前述胡椒木茎段进行消毒处理。
优选的技术方案中，所述制作外植体具体包括：挑选健壮的当年生胡椒木幼嫩枝条，除去叶片后用蒸馏水清洗，然后剪成胡椒木小段，并且使得每段胡椒木小段至少包含一个侧芽，每小段包含侧芽的胡椒木茎段即是外植体。
优选的技术方案中，所述消毒是指对作为外植体的胡椒木茎段先用75％酒精消毒，再用0.1％的升汞溶液消毒，之后再用无菌水冲洗。
采用本发明技术方案的胡椒木离体培养方法，与现有技术对比的有益效果在于：
由于采用了组织培养技术对胡椒木进行离体培养，可以不受季节限制，快速低成本的繁殖出大量胡椒木的幼苗，因而经济效益可观，具有良好的市场前景。
由于采用特制的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L作为幼芽诱导培养基，在其中诱导外植体发芽，发芽率高。
由于进一步优选了幼芽诱导培养基的配方，使得发芽率最高可达95.8％。
由于采用特制的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L作为增殖培养基，在其中对幼芽进行增殖，可使得幼芽产生出大量的丛生芽。
由于进一步优选了增殖培养基的配方，使得增殖效果最好。
由于采用了特制的1/2MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L作为生根培养基，生根效果好。
由于进一步优选了生根培养基的配方，使得生根效果最好，生根率最高可达98％。
由于准备外植体除了包括制作外植体外，还包括消毒，使得外植体干净无污染，可以保证后续步骤顺利进行。
由于选用强壮的一年生幼嫩胡椒木枝条制作外植体，可以保证培养出来的胡椒木幼苗的遗传学质量。
由于消毒包括酒精消毒和升汞溶液消毒，并且消毒后用无菌水清洗，使得消毒非常彻底。
附图说明
图1是本发明具体实施方式中幼芽诱导阶段初期的植株图；
图2是本发明具体实施方式中幼芽诱导阶段后期的植株图；
图3是本发明具体实施方式中幼芽增殖阶段的植株图；
图4是本发明具体实施方式中丛生芽生根阶段的植株图。
以下将结合附图对胡椒木茎段离体培养做进一步的说明。
具体实施方式
本具体实施方式提供的胡椒木茎段离体培养方法包括如下步骤：
1.准备外植体
本步骤包括制作外植体的与消毒。首先选取生长健壮的当年生幼嫩枝条，用锋利的剪刀除去叶片，再用蒸馏水清洗除去叶片的枝条。然后将枝条剪成2～3厘米的小段，注意每段外植体应该至少包含一个侧芽，每小段包含侧芽的枝条即是外植体。将外植体用蒸馏水冲洗和浸泡一段时间，然后进行消毒处理。先用75％酒精消毒15秒，再用0.1％的升汞溶液消毒3分钟(加吐温-20)。消毒完成之后再用无菌水冲洗7～8次后即可接种，进行后续的处理。
2.诱导
如图1所示，把外植体接种于幼芽诱导培养基上。实验表明，接种在作为幼芽诱导培养基的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L(6-BA：6-苄基腺嘌呤6-Benzylaminopurine；NAA：萘乙酸Naphthylacetic acid；MS：Murashige和Skoog培养基。)上一段时间之后，外植体有愈伤和幼芽出现，而优选的幼芽诱导培养基为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L， 其幼芽诱导率最高可达95.8％。
外植体7～10天左右可产生愈伤组织，3周时间愈伤生长最快。愈伤组织主要形成于外植体茎段下端切口，少数茎段的愈伤组织出现于茎段与培养基的接触平面。如图2所示，约5～6周后叶色浓绿的幼芽长出。
3.增殖
在幼芽诱导后期，将幼芽切下转接于作为增殖培养基的MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L进行增殖。其中优选的增殖培养基为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L，该培养基增值效率最高，如图3所示，经2～3周会产生大量的丛生芽。
4.生根
当增殖产生的丛生芽高度达到2厘米左右，带有2～4片叶时，将丛生芽从基部切下接种于生根培养基上。10天左右有些丛生芽的基部会产生白色的根，生出根系的丛生芽即可作为胡椒木的幼苗种植了。生根培养基为：1/2MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L。其中优选的生根培养基为1/2MS+萘乙酸0.4mg/L，如图4所示，丛生芽在该优选的生根培养基中表现最好，生根快、根系粗壮，生根率达98％。
组织培养繁殖植物的技术是一种特殊的营养繁殖方式，现在一般称为快速繁殖技术或微繁殖技术。它是在无菌条件下，利用植物体的一部分，包括细胞、组织和器官，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物的方法。该技术用于胡椒木的快速繁殖可不受季节限制，一年四季均可快速低成本的繁殖出大量的胡椒木幼苗，经济效益可观，具有良好的市场前景。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.胡椒木离体培养方法，包括如下步骤：
S1)、准备外植体：即准备适合发芽的胡椒木茎段作为外植体；
S2)、诱导：将步骤S1准备的外植体接种于幼芽诱导培养基上，使得外植体上发出幼芽，所述的幼芽诱导培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～4.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L；
S3)、增殖：将步骤S2中所述幼芽接种于增殖培养基中增殖产生丛生芽，所述增殖培养基为MS+6-苄基腺嘌呤0.5～2.0mg/L+萘乙酸0.1～0.7mg/L；
S4)、生根：将步骤S3中所述的丛生芽接种于生根培养基使得丛生芽生根，即成胡椒木幼苗，所述生根培养基为1/2MS+萘乙酸0.05～0.5mg/L。
2.如权利要求1所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述幼芽诱导培养基为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。
3.如权利要求1所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述增殖培养基为MS+6-苄基腺嘌呤1.0mg/L+萘乙酸0.7mg/L。
4.如权利要求1所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述生根培养基为1/2MS+萘乙酸0.4mg/L。
5.如权利要求1至4中任意一项所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述步骤S1包括制作外植体和消毒两个步骤；所述制作外植体是指选择胡椒木枝条剪切成包括侧芽的胡椒木茎段；所述消毒是指对前述胡椒木茎段进行消毒处理。
6.如权利要求5所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述制作外植体具体包括：挑选健壮的当年生胡椒木幼嫩枝条，除去叶片后用蒸馏水清洗，然后剪成胡椒木小段，并且使得每段胡椒木小段至少包含一个侧芽，每小段包含侧芽的胡椒木茎段即是外植体。
7.如权利要求5所述的胡椒木离体培养方法，其特征在于，所述消毒是指对作为外植体的胡椒木茎段先用75％酒精消毒，再用0.1％的升汞溶液消毒，之后再用无菌水冲洗。
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