CN101269220A - 白芨胶为载体的雷帕霉素眼内植入型释药系统 - Google Patents

Abstract

一种白芨胶为载体的雷帕霉素眼内植入型释药系统。包括作为药物的雷帕霉素和载体，其特征在于载体是白芨胶，该白芨胶主要成分为由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000，白芨胶以葡配甘露聚糖计，含量＞85％，而其中药物加入的量，以白芨胶干重计0.05％～50％。上述的白芨胶中还加入交联剂。交联剂为甲醛、戊二醛、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚。白芨胶中又加入白蛋白、明胶等。白芨胶有抑制新生血管、抗肿瘤等作用，联合使用可发挥协同的治疗作用，本发明充分利用白芨胶体内生物降解，缓慢释放出活性药物，减少了药物的用量、用药次数和毒副作用，而且对于药物吸收困难的部位，也能达到更好的用药效果。

Description

白芨胶为载体的雷帕霉素眼内植入型释药系统

技术领域

本发明涉及一钟眼内植入型释药系统，特别涉及到一种以白芨胶作为药物载体的雷帕霉素长效眼内缓释系统——白芨胶为载体的雷帕霉素眼内植入型释药系统。

背景技术

角膜移植是治疗角膜盲的重要复明手术，也是治疗某些顽固角膜病变的主要措施。角膜移植术后的免疫排斥反应仍为角膜移植失败的首要原因。尤其是血管化角膜及多次角膜移植等高危角膜移植的患者，术后免疫排斥反应发生率高达60％以上，大大降低了角膜植片的存活率。其中角膜新生血管化是高危角膜移植的最主要、最常见的因素。因此在角膜移植后抑制免疫排斥反应发生的同时如能够有效地控制角膜新生血管的生成，则可大大提高角膜植片的存活率，延长植片的透明时间。

雷帕霉素(Rapamycin，商品名Sirolimus)是一种新型强效的免疫抑制剂，具有抑制角膜新生血管的增殖，对其降低角膜移植术后免疫排斥反应和延长植片存活时间起着重要的作用。目前雷帕霉素仅有全身制剂，但全身用药眼内药物浓度低，疗效差。雷帕霉素属脂溶性药物，溶解性差、治疗窗口窄，尚不能在眼科广泛应用。对此，山东省眼科研究所开展了雷帕霉素眼内植入型缓释系统(专利申请号200410086255.0)的研究，使用的载体限于胶原、壳聚糖(几丁质)、PGA(聚羟基乙酸)、PLA(聚乳酸)、EVA(聚乙烯醋酸乙酸酯)及其共聚物PLGA(羟基乙酸与乳酸的共聚物)、PGLC(乙交酯一丙交酯一己内酯三元无规共聚物)等，载体没有治疗作用，仅为一种载体而已。

但角膜新生血管的生成是一个及其复杂的病理过程，其发生与促血管生成因子增加、抑制血管生成因子减少、炎症反应等多个因素有关，这些因素之间具有代偿性，一个因素作用受到抑制，其它因素作用就可代偿性地增强，如促血管生成因子VEGF的表达受到抑制，成纤维细胞生长因子(bFGF)和白介素6(IL-6)等促血管生成因子表达则会相应增加，产生“耐受性”。如能联合用药或使用有抑制新生血管作用的载体来制备缓释剂而同时作用于角膜新生血管生成病理过程的各个通路，则能有效地增强药效，减少药物用量，同时也减少了不良反应和耐受性的发生。

发明内容

本发明的目的是提供一种以白芨胶作为药物载体的雷帕霉素长效眼内缓释系统，以弥补现有技术的不足。

本发明是在原雷帕霉素眼内植入型缓释系统(专利申请号200410086255.0)研究基础上，创造性地使用白芨胶作为缓释载体。研究发现，白芨胶本身具有很强的抑制眼新生血管的作用，包括角膜、脉络膜和视网膜新生血管在内的眼新生血管，且作用机制和雷帕霉素不一致，同时，自芨胶体内生物降解，缓慢释放出抗血管增生药物雷帕霉素，两者联合使用，同时作用于角膜新生血管生成病理过程的各个通路，可使植入剂发挥双重、协同的治疗作用，取得更佳的防治高危角膜移植免疫排斥反应和新生血管增殖的效果。但商品化白芨胶系杂质多、分子量分布广，仅限于口服或是外用，不适合眼内应用。将普通白芨胶商品进行多级纯化，得到满足眼科应用要求的精制白芨胶。

本发明包括作为药物的雷帕霉素和载体，其特征在于载体是白芨胶，该白芨胶主要成分为由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000，白芨胶以葡配甘露聚糖计，含量＞85％，而其中作为药物的雷帕霉素加入量为载体干重计0.05％～50％。

上述的白芨胶优选平均分子量99658道尔顿。

上述的白芨胶中可加入起固化作用的交联剂，而将载体之间或药物与载体之间进行交联耦合，更增加载体的载药量，减少突释，增强药物缓释效果。交联剂为甲醛、戊二醛、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚或丁二醇双缩水甘油醚，交联剂入量为白芨胶和交联剂的质量比为100∶0.01～20。

上述白芨胶中可加入以白芨胶干重计0.5～40％的白蛋白、明胶或阿拉伯胶。

本发明所需的白芨胶以如下工艺提取和纯化方法包括粗多糖提取和分离纯化：

一、粗多糖提取

将白芨块茎干制品粉碎、过筛、烘干，加20倍体积蒸馏水，60℃回流提取4h。重复提取一次。合并两次提取液。离心，取上清，70℃减压浓缩，加三倍体积95％乙醇沉淀。离心收集沉淀，冷冻干燥，得粗白芨胶(简写为BRO)，即得到普通的商品白芨胶。

二、分离纯化

将BRO溶于最小体积水中，Sevag法脱蛋白至考马斯亮蓝G-250法检测几无蛋白质被测出，然后用对流水透析三天，真空冷冻干燥，得一级纯化白芨胶——BR1；

将BR1 400mg溶于20ml蒸馏水中，离心取上清液，在阴离子交换纤维素DE-52柱上层析，先以2～5个柱体积的蒸馏水洗脱，再用0～4mol/L NaCl溶液直线梯度洗脱，流速为24ml/h，以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置并收集洗脱产物，冷冻干燥，得二级纯化白芨胶——BR2；

将BR2 50mg溶于2ml蒸馏水中，离心取上清液，上Sephadex G-100柱以0.02mol/L NaCl洗脱，流速16ml/h，以2ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置，收集洗脱产物，冷冻干燥即得本发明所需的精制的白芨胶。

本发明充分利用白芨胶体内生物降解，缓慢释放出活性药物，可使药物浓度长时间保持在较为稳定的治疗水平，减少了药物的用量、用药次数和毒副作用，对于药物吸收困难的部位，也能达到很好的用药效果。此外，白芨提提物本身也具有抑制新生血管、抗肿瘤等作用，联合使用可使植入剂发挥双重、协同的治疗作用，可取得更好的抑防治效果。

附图说明

图1：不同雷帕霉素植入剂房水中雷帕霉素浓度变化曲线(n＝5)。

图2：A组(空白对照)术后2周，植片水肿、混浊增厚，大量新生血管长入角膜植片2～3mm，植片发生免疫排斥反应(箭头示植片与植床交界处)。×10

图3：E组(白芨胶雷帕霉素缓释片前房植入，含雷帕霉素0.5mg)术后8周，植片透明，植床新生血管消退，前房内RAPA缓释片大部分吸收，仅存原来1/3(箭头所示)。×10

图4：F组(白芨胶雷帕霉素缓释片前房植入，含雷帕霉素0.3mg)术后8周，植片透明，植床新生血管消退，前房内RAPA缓释片在位，未见包裹，明显变小(箭头所示)。×10

具体实施方式

本发明的提供下列实施例，以进一步说明本发明所述眼用植入剂的缓释和协同作用的效果。

实施例1

本发明的白芨胶的提取：以如下工艺提取和纯化本发明所需的白芨胶。

一、粗多糖提取

将白芨块茎干制品粉碎、过筛、烘干，加20倍体积蒸馏水，60℃回流提取4h。重复提取一次。合并两次提取液。离心(5000×g，10min)，取上清，70℃减压浓缩，加三倍体积95％乙醇沉淀。离心收集沉淀，冷冻干燥，得粗白芨胶(简写为BRO)。

二、分离纯化

将BRO溶于最小体积水中，Sevag法脱蛋白至考马斯亮蓝G-250法检测几无蛋白质被测出，然后用对流水透析三天，真空冷冻干燥，得一级纯化白芨胶——BR1；

将BR1 400mg溶于20ml蒸馏水中，离心取上清液，在阴离子交换纤维素DE-52柱上层析，先以2～5个柱体积的蒸馏水洗脱，再用0～4mol/L NaCl溶液直线梯度洗脱，流速为24ml/h，以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置并收集洗脱产物，冷冻干燥，得二级纯化白芨胶——BR2；

将BR2 50mg溶于2ml蒸馏水中，离心取上清液，上Sephadex G-100柱以0.02mol/L NaCl洗脱，流速16ml/h，以2ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置，收集洗脱产物，冷冻干燥即得本发明所需的精制的白芨胶。

白芨胶纯度鉴定为葡配甘露聚糖单体纯度为95.8％，分子量为99658道尔顿。

实施例2

选用实施例1制备的白芨胶，配制12％的白芨胶水溶液，取白芨胶水溶液20.0ml，加入无菌玻璃瓶中，无菌条件下，加入雷帕霉素微粉化粉末600mg，搅拌分散均匀，再加入乙二醇双缩水甘油醚20mg，搅拌均匀，55℃水浴放置3-5小时。取出充分洗涤以去除残留的交联剂，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40℃的烘箱干燥制膜。待膜片充分干燥后，取出放入注射生理盐水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完全干燥后，得到厚度为1.5-2毫米的片状药剂，再用孔径为1.5-2.0毫米的冲模冲压成厚为1.0-2.0毫米、直径为1.5-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周后即可。

实施例3

将实施例1中乙二醇双缩水甘油醚换成丙二醇双缩水甘油醚，其余条件不变，亦可得到同样的交联作用。

实施例4

将实施例1中乙二醇双缩水甘油醚换成丁二醇双缩水甘油醚，其余条件不变，亦可得到同样的交联作用。

实施例5

选用实施例1制备的白芨胶，配制10％的白芨胶水溶液，取10％的白芨胶水溶液50.0ml于100ml烧杯中，加入雷帕霉素微粉化粉末5.0g，搅拌分散均匀，再加入乙二醇双缩水甘油醚500.0mg，搅拌均匀，55℃水浴放置3～5小时以充分交联固化白芨胶，固化结束后用注射生理盐水充分浸泡洗涤以去除未反应的交联剂。洗涤后将整个烧杯置于冷冻干燥机中，冷冻干燥72小时以充分去除水。将冷冻干燥后的疏松状载有雷帕霉素的白芨胶用液压机压制成后约0.5ml的致密薄膜，40℃的烘箱干燥制膜，再用孔径为1.0-2.0毫米的冲模冲压成直径为1.0-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周后即可。

实施例6

选用实施例1制备的白芨胶，配制10％的白芨胶水溶液，取10％的白芨胶水溶液2.0ml，加入无菌玻璃瓶中，无菌条件下，加入雷帕霉素微粉化粉末100mg，搅拌分散均匀，再加入10％戊二醛水溶液0.2mL，搅拌均匀，55℃水浴放置3～5小时。取出充分洗涤以去除残留的交联剂，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40℃的烘箱干燥制膜。待膜片充分干燥后，取出放入注射生理盐水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完全干燥后，得到厚度为1.5-2毫米、呈10纳米小孔结构的片状药剂，再用孔径为1.5-2.0毫米的冲模冲压成厚为1.0-2.0毫米、直径为1.5-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周即可。

实施例7

将实施例5中戊二醛换成甲醛，其余条件不变，亦可得到同样的交联作用。

实施例8

选用实施例1制备的白芨胶，配制5％的白芨胶水溶液，取5％的白芨胶水溶液100.0ml于无菌玻璃瓶中，加入2.5g的明胶，50℃水浴放置一夜以溶胀明胶后，无菌条件下，加入雷帕霉素微粉化粉末5g，搅拌分散均匀，再加入10％甲醛水溶液5.0mL，搅拌均匀，55℃水浴放置3～5小时。取出充分洗涤以去除残留的交联剂，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40℃的烘箱干燥制膜。待膜片充分干燥后，取出放入注射生理盐水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完全干燥后，得到厚度为1.5-2.0毫米、呈10纳米小孔结构的片状药剂，再用孔径为1.5-2.0毫米的冲模冲压成厚为1.0-2.0毫米、直径为1.5-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周即可。

实施例9

选用实施例1制备的白芨胶，配制12％的白芨胶水溶液，取12％的白芨胶水溶液200.0ml于无菌玻璃瓶中，加入6g的阿拉伯胶，50℃水浴放置一夜以溶胀明胶后，无菌条件下，加入雷帕霉素微粉化粉末5g，搅拌分散均匀，再加入10％甲醛水溶液20.0mL，搅拌均匀，55℃水浴放置3～5小时。取出充分洗涤以去除残留的交联剂，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40℃的烘箱干燥制膜。待膜片充分干燥后，取出放入注射生理盐水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完全干燥后，得到厚度为1.5-2.0毫米、呈10纳米小孔结构的片状药剂，再用孔径为1.5-2.0毫米的冲模冲压成厚为1.0-2.0毫米、直径为1.5-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周即可

实施例10

选用实施例1制备的白芨胶，配制10％的白芨胶水溶液，取10％的白芨胶水溶液2.0ml和8％的牛血清白蛋白溶液1ml，加入无菌玻璃瓶中，无菌条件下，加入雷帕霉素微粉化粉末280mg，搅拌分散均匀，再加入乙二醇双缩水甘油醚3.0mg，搅拌均匀，55℃水浴放置3-5小时。取出充分洗涤以去除残留的交联剂，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40℃的烘箱干燥制膜。待膜片充分干燥后，取出放入注射生理盐水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完全干燥后，得到厚度为1.5-2毫米、呈10纳米小孔结构的片状药剂，再用孔径为1.5-2.0毫米的冲模冲压成厚为1.0-2.0毫米、直径为1.5-2.0毫米的制剂。将此制剂用环氧乙烷熏蒸24小时灭菌消毒、再放置1周后即可。

实施例11

本发明的体外释药特性

将制得的载药0.3g的植雷帕霉素白芨胶入剂放置于25mL含0.05％叠氮化钠的pH7.4磷酸盐缓冲液中，置入37℃恒温水浴振荡器以72rpm的速度水平振荡，头两周每天更换介质并用高效液相测定介质中雷帕霉素的药物量，两周后每周测定一次，联系测定12周，结果表明体外具有明显的缓释特性。

实施例12

本发明的药代动力学试验

动物：家兔8只(2.5±0.5kg，雌雄不限)

试验设计：将2mg的雷帕霉素白芨胶缓释剂植入兔眼前房，第一周内于1、3、7天，第二周开始每周1次，30号穿刺针自角膜缘斜行进针刺入前房，抽取各只兔房水0.1mL，高效液相色谱分析雷帕霉素的浓度。作药时曲线图，见图1。可见雷帕霉素白芨胶植入剂具有显著的体内缓释作用。

实施例13

本发明防治兔高危角膜移植术后免疫排斥和角膜新生血管增殖的的药效学试验。

实验药物：雷帕霉素白芨胶缓释植入剂(载药0.5mg和0.3mg两个规格)、雷帕霉素PLGA缓释植入剂(载药0.5mg)、空白PLGA植入剂、空白白芨胶植入剂

动物：家兔70只(2.5±0.5kg，雌雄不限)

高危角膜移植动物模型的建立：70只兔子制作高危角膜移植受体动物模型，右眼角膜4个象限各间断缝线1根5-0丝线，跨距2mm，深达2/3角膜基质层，2周新生血管长入角膜后拆除缝线。

试验分组：选择大于三个象限、新生血管长入角膜超过3mm的60只兔，按随机数字法分为6组，A组为对照组，无任何治疗；B组为PLGA空白载体组，术中前房植入PLGA空白载体1mg；C组为雷帕霉素PLGA缓释植入剂组，植入缓释片1mg(载药0.5mg)；D组为白芨胶空白载体组，术中前房植入白芨胶载体1mg；E组为雷帕霉素白芨胶植入剂组，植入缓释片1mg(载药0.5mg)；F组为雷帕霉素白芨胶植入剂组，植入缓释片1mg(载药0.3mg)，每组10只。

手术植入方法：穿透性角膜移植在角膜缝线拆除3～6天之间进行，氯胺酮(50mg/kg)和氯丙嗪(10mg/kg)混合肌肉注射全身麻醉，角膜新生血管化兔作为受体行同种异体穿透性角膜移植，植片与植床直径分别为7.5和7.0mm，各组前房植入药片后10-0尼龙线间断缝合12针至水密状态，平衡盐溶液形成前房。

术后观察和观测指标：角膜移植术后2周内隔日，之后每周2次对植片混浊、水肿、新生血管生长及缓释药片吸收情况进行观察，共观察60天，记录排斥指数(为角膜混浊、水肿及新生血管评分合计)和新生血管指数，具体评分标准如下：角膜混浊：0分，角膜透明；1分，角膜轻度混浊；2分，角膜混浊加重，前房结构仍然清楚；3分，角膜混浊进一步加重，前房结构模糊不清；4分，角膜全部混浊，前房不入。角膜水肿：0分，无角膜水肿；1分，角膜基质轻度增厚；2分，角膜机制弥漫水肿；3分，角膜基质弥漫水肿，伴上皮下微小水泡；4分，大泡性角膜病变。角膜新生血管：0分，植片无新生血管；1分，新生血管长入植片1个象限；2分，新生血管长入植片2个象限；3分，新生血管长入植片3个象限；4分，新生血管长入植片4个象限。排斥指数达到或超过6分判定为免疫排斥反应。

病理组织学检查：术后6天，对6组兔角膜、视网膜、肝脏及肾脏进行病理组织学检查，苏木素-伊红(HE)染色，观察组织结构变化。

试验结果：

(一)术后A～D组角膜植片混浊、水肿、新生血管生长情况如下：

A组(空白对照组)和B组(PLGA载体前房植入组)的观察结果相似：术后一周，植片出现0～1度混浊，1～2度水肿，植床新生血管怒张，长入角膜植片1～2个象限约0.5～1mm；术后2周植片混浊2～3度，植片水肿2～4度，部分缝线出现松动，新生血管长入角膜3～4个象限，长入角膜植片约1～2mm，植片出现免疫排斥反应；术后4周，植片混浊3～4度，水肿2～3度，新生血管长入角膜2～3mm，新生血管充盈程度有所减轻；术后8周与12周检查结果和术后4周大致相同。

C组(雷帕霉素PLGA缓释片组)：术后一周，植片透明，不水肿，植床新生血管仍然存在，较A、B组充盈程度轻，未长入角膜植片，前房内RAPA缓释片在位，未见包裹；术后2周，植片透明，不水肿，植床新生血管充盈程度减轻，部分象限新生血管长入植片约0.5mm，前房内RAPA缓释片无包裹；术后4周，植片透明，不水肿，植床可见新生血管，前房内RAPA缓释片在位，未见包裹，稍变小；术后8周，植片透明，不水肿，植床新生血管基本消退，RAPA缓释片表面蚀解，约一半被吸收；术后12周，3只兔出现免疫排斥反应，余下7只兔植片透明，不水肿，无新生血管长入，前房内RAPA缓释片无包裹，仅存1/3未吸收。

D组(白芨胶空白载体组)：术后一周，植片透明，植床新生血管仍然存在，较A、B组充盈程度轻，未长入角膜植片；术后2周，植片透明，不水肿，少量兔部分象限新生血管长入角膜植片约0.5mm；术后4周，植片透明，不水肿，植床新生血管充盈程度有所减轻，植片少量新生血管；术后8周，植片混浊1～3度，植片水肿1～3度，新生血管与术后2周大致相同，未出现明显的免疫排斥反应；术后12周，仅5只兔(2只眼)发生免疫排斥反应，余5只兔均未发生免疫排斥反应，植片混浊2～4度，水肿2～3度，新生血管0～2度。

E组(雷帕霉素白芨胶植入剂组，含雷帕霉素0.5mg)：术后一周，植片透明，植床新生血管明显减少；术后2周至4周，植片透明，不水肿，未见部分象限新生血管长入角膜植片约0.5mm；术后8周，植片混浊1～3度，植片水肿1～3度，新生血管与术后1周大致相同，出现免疫排斥反应；术后12周，仅2只兔(5只眼)发生免疫排斥反应，余8只兔均未发生免疫排斥反应，植片混浊1～3度，水肿1～3度，新生血管0～2度。

F组(雷帕霉素白芨胶植入剂组，含雷帕霉素0.3mg)：术后一周，植片透明，植床新生血管仍然存在，充盈程度轻，未长入角膜植片；术后2周，植片透明，不水肿，少量兔部分象限新生血管长入角膜植片；术后4周，植片透明，不水肿，植床新生血管充盈程度有所减轻，植片少量新生血管；术后8周，植片混浊1～3度，植片水肿1～3度，新生血管与术后2周大致相同，未出现明显免疫排斥反应；术后12周，仅3只兔(2只眼)发生免疫排斥反应，余7只兔均未发生免疫排斥反应，植片混浊2～4度，水肿2～3度，新生血管0～2度。

(二)角膜植片免疫排斥

A、B、C、D、E、F六组兔角膜植片发生免疫排斥反应平均时间分别为16.5±2.5、16.0±2.6、67.6±5.8、35.7±4.1、75.8±6.9、63.1±2.8天。术后2周时A~F六组植片的排斥指数分别为4.9、3.9、0.3、0.8、0.2、0.3；术后4周时A、B、C、D四组植片的排斥指数分别为9.8、9.2、0.4、2.6、0.2、0.5；术后8周时A、B、C、D四组植片的排斥指数分别为8.4、9.4、0.7、4.1、0.4、0.9；术后12周时A、B、C、D四组植片的排斥指数分别为10.4、10.0、2.0、7.2、1.8、2.5。

(三)角膜植片新生血管

术后2周时，A～F六组角膜植片新生血管指数分别为2.4、2.1、0.3、0.6、0.2、0.3(P＝0.000)；术后4周时A～F六组新生血管指数分别为3.8、3.6、0.4、0.8、0.2、0.9；术后8周时A～F六组新生血管指数分别为3.6、3.6、0.4、1.2、0.3、0.2；术后12周时A～F六组新生血管指数分别为3.8、3.8、0.4、3.7、0.3、0.5。

(四)组织病理检查

眼球病理学检查：A、B组出现免疫排斥的角膜植片行病理组织学检查，HE染色，可见角膜植片厚度增加，约为正常角膜厚度的1.5倍。角膜基质内大量炎性细胞浸润，并见大量新生血管生长。D组出现免疫排斥反应的植片厚度增加，角膜基质中较多的炎性细胞浸润，较少的新生血管生长。C、E、F组角膜厚度大致正常，角膜基质中未见明显炎性细胞浸润及新生血管生长。

A、B、C、D、E、F组动物全眼球切片，HE染色，可见视网膜厚度正常，各层结构清晰，无细胞丢失及坏死，无炎性细胞浸润。

肝肾组织病理学检查：A、B、C、D、E、F六组肝脏检查可见肝小叶排列成放射状，细胞结构正常，中央静脉和汇管区结构无异常，无细胞坏死，无炎性细胞浸润。肾脏检查可见肾小球结构完整，未见血管系膜组织增生，细胞结构正常，未见炎性细胞浸润。

试验结果表明载药0.5mg的雷帕霉素白芨胶植入剂疗效优于载药0.5mg雷帕霉素PLGA缓释植入剂，0.3mg的雷帕霉素白芨胶植入剂疗效同载药0.5mg雷帕霉素PLGA缓释植入剂相当，能够有效防治高危角膜移植术后免疫排斥反应和角膜新生血管增值，白芨胶空白植入剂也具有显著的移植角膜新生血管作用。白芨胶眼用植入剂使用安全有效。

对照例1

以聚硅酮为载体、完全按实施例2的制法、用量及步骤制备雷帕霉素缓释系统。术后肉眼观察和局部组织病理学检查表明雷帕霉素聚硅酮缓释系统有良好的眼内生物相容性，植入后的15周内可维持雷帕霉素在房水为一定浓度，到六个月时房水中检测不到有雷帕霉素存在。但术后一年制剂仍存在于前房内，并且外型、大小和强度无变化，因此必须再手术取出。

本发明释药周期为一周到一年；具有用药量极少，且能长时间在眼内缓慢释放药物的特点；对于药物吸收困难的部位，能达到很好的用药效果。可用于眼科预防和治疗高危角膜移植后的排斥反应，也可用于角膜新生血管增殖及其他眼内新生血管性疾病。

Claims (6)

1、一种白芨胶为载体的眼内植入型释药系统，其包括作为药物的雷帕霉素和载体，其特征在于该载体是白芨胶，该白芨胶为由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000道尔顿，白芨胶以葡配甘露聚糖计，含量＞85％，而其中作为药物的雷帕霉素加入量为载体干重计0.05％～50％。

2、如权利要求1所述的白芨胶为载体的眼内植入型释药系统，其特征在于上述的白芨胶中加入起固化作用的交联剂，交联剂入量为白芨胶和交联剂的质量比100∶0.01～20。

3、如权利要求1或2所述的白芨胶为载体的眼内植入型释药系统，其特征在于上述白芨胶中又加入以白芨胶干重计0.5～40％的白蛋白、明胶或阿拉伯胶。

4、如权利要求1所述的白芨胶为载体的眼内植入型释药系统，其特征在于上述的白芨胶优选平均分子量99658道尔顿。

5、如权利要求2所述的白芨胶为载体的眼内植入型释药系统，其特征在于上述的交联剂为甲醛、戊二醛、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚或丁二醇双缩水甘油醚。

6、眼用白芨胶以提取和纯化方法包括粗多糖提取和分离纯化：

一、粗多糖提取：

首先将白芨块茎干制品粉碎、过筛、烘干，加20倍体积蒸馏水，60℃回流提取4h，重复提取一次，合并两次提取液，离心，取上清，70℃减压浓缩，加三倍体积95％乙醇沉淀，离心收集沉淀，冷冻干燥，得粗白芨胶——BR0；

二、分离纯化：

将BR0溶于最小体积水中，Sevag法脱蛋白至考马斯亮蓝G-250法检测几无蛋白质被测出，然后用对流水透析三天，真空冷冻干燥，得一级纯化白芨胶——BR1；

将BR1 400mg溶于20ml蒸馏水中，离心取上清液，在阴离子交换纤维素DE-52柱上层析，先以2～5个柱体积的蒸馏水洗脱，再用0～4mol/L NaCl溶液直线梯度洗脱，流速为24ml/h，以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置并收集洗脱产物，冷冻干燥，得二级纯化白芨胶——BR2；

将BR2 50mg溶于2ml蒸馏水中，离心取上清液，上Sephadex G-100柱以0.02mol/LNaCl洗脱，流速16ml/h，以2ml收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置，收集洗脱产物，冷冻干燥即得本发明所需的精制的白芨胶。

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