CN101259259B

CN101259259B - 一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法

Info

Publication number: CN101259259B
Application number: CN2008100179942A
Authority: CN
Inventors: 王延岭; 侯建平
Original assignee: Shaanxi Kanghui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shaanxi Kanghui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2008-04-17
Filing date: 2008-04-17
Publication date: 2010-11-24
Anticipated expiration: 2028-04-17
Also published as: CN101259259A

Abstract

本发明涉及一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，选用按重量份数计的黄连、白花蛇舌草、沙棘油、元胡、焦山楂、生麦芽、鸡内金和干姜。其制备方法：黄连粉碎成细粉；提取干姜中的挥发油；将元胡、白花蛇舌草、山楂用乙醇提取，醇提后的药渣与姜药渣、麦芽、鸡内金一起加水煎煮，滤过，浓缩成浸膏，备用；将沙棘油与黄连细粉拌匀，再与提取浸膏混合。本发明工艺简单易行，制备的药剂适应症广泛，采用正交试验筛选乙醇提取的加乙醇量、提取时间、提取次数以及水煎煮的加水量、提取时间、提取次数，最大限度的保留了药材中对适应症有作用的各个有效成分，同时减少了无效成分的浸出，起到了浓缩而不丢失有效成分的作用，降低了成本。

Description

一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法。

背景技术

慢性萎缩性胃炎属胃脘痛范畴，祖国医学认为慢性萎缩性胃炎多与饮食不节，七情内伤及劳倦过度诸多因素有关。其病位随以胃为中心，但涉及肝、胆、脾、肾诸脏腑；病机常与寒热错杂，脾胃不和有密切关系，并涉及痰、气、食积等，治疗方法目前甚多不一。

慢性胃炎是临床常见病，其中慢性萎缩性胃炎难于根治，而且慢性萎缩性胃炎有一定的比例(7-10％)最终会发展成胃癌。因此，如何治疗慢性胃炎，并阻止向胃癌发展，是目前胃病治疗中的主要课题。常见的西药在治疗萎缩性胃炎方面无特效药，它的治疗方案采用的仅仅是给予对症治疗，监测病变情况，一旦发现其癌变，即给予手术切除。相对于西药，中成药在慢性萎缩性胃炎治疗方面有一定的临床疗效，但目前投放市场的仅仅有养阴清胃颗粒、摩罗丹等几个品种，而且它们在临床应用方面还存在以下缺点：(1)养阴清胃颗粒由石斛、知母、竟连、苦参、茯苓、白术、黄芪等组成，以养阴清胃、健脾和中为治则，主要用于慢性萎缩性胃炎，属郁热蕴胃、伤及气阴证，虽然疗效尚满意，但价格较高，口感较差；(2)摩罗丹，其主要成分为三七、茵陈、鸡内金等，功能主要为和胃降逆、健脾消胀、通络定痛，对慢性萎缩性胃炎肠化和不典型增生有消除作用，但对其它症型无明显消除作用，因此，其治疗症型有局限，难以满足广大患者的临床要求。

现有制备方法制备出的治疗慢性萎缩性胃炎的中药制剂，其药物有效成分含量不高，疗效一般且适应症受到局限。

发明内容

本发明的目的是为克服背景技术的不足，而提供一种可提高药物有效成分的治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法。以制备出无毒副作用、疗效显著且适应症广泛的治疗慢性萎缩性胃炎的中药制剂。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，它以按重量份计的黄连1-6、白花蛇舌草3-9、沙棘油0.3-3、元胡3-6、焦山楂3-6、生麦芽1-6、鸡内金1-6和干姜1-6为原料，其特征在于其制备过程为：

(1)黄连粉碎成细粉，过100～150目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；

(2)白花蛇舌草、山楂，分别以7～9倍量70％～80％乙醇回流提取2次，每次1.5～2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩为清膏I，药渣另器保存；

(3)元胡粉碎成粗粉，分别以7～9倍量60％～70％乙醇回流提取2～3次，第1、2次各1.5～2.5小时，第3次1～2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩为清膏II，备用；

(4)干姜加7～8倍量水浸泡1.5～2小时，蒸馏提取3～5小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；

(5)将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，加12倍、10倍量水煎煮2次，每次1.5～2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩；

(6)向步骤(5)中加入清膏I，继续浓缩，并入清膏II，拌入步骤(1)中含沙棘油的黄连细粉，混匀，低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入步骤(4)中的干姜挥发油，密闭放置1～2小时，装入胶囊，得胶囊剂；或者整粒后，加入适量辅料，压片，包衣，制成片剂；或者直接制成无糖颗粒剂。

本发明优选的技术方案是：一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，其特征在于其制备过程为：

(1)黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；

(2)白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)清膏I，药渣另器保存；

(3)元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)清膏II，备用；

(4)干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；

(5)将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20，60～70℃热测；

(6)向(5)中加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30，60℃热测，并入清膏II，拌入步骤(1)中含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入步骤(4)中的干姜挥发油，密闭放置2小时，装入胶囊，得胶囊剂；或者整粒后，加入适量辅料，压片，包衣，制成片剂；或者直接制成无糖颗粒剂。

所述片剂为糖衣片、薄膜衣片、泡腾片或咀嚼片。

所述的重量份可以为克、两、斤、公斤、吨等重量计量单位。

本发明制备方法中选用干姜辛开温中，调胃暖脾；用黄连解毒泄火，健胃；鸡内金健脾消滞，行气活血；白花蛇舌草清热解毒，抗萎防癌；元胡疏肝理气止痛；沙棘油具有防萎抗癌之功效；辅以山楂、生麦芽等消积开胃、扶助后天，诸药合用，共奏辛开苦降，调中健胃之功，并有抗幽门螺旋杆菌感染之效。

以下为本发明制备方法中的工艺考察：

(一)黄连粉碎出粉率考察：

仪器与设备：LWJ植物粉碎机(四川绵阳机械设备有限公司)

a粉碎方法及粒度：普通粉碎法。

b黄连出粉率考察：称取黄连药材5公斤，共3份，分别进行粉碎，过120目筛，得细粉，称重，计算出粉率，见表1。

表1黄连出粉率考察结果

结果：黄连平均出粉率在92.13％，符合要求。

(二)元胡、乙醇提取条件考察：

元胡为方中臣药，主含20余种生物碱，以延胡索甲素、延胡索乙素生物活性较强。具有明显的镇痛、催眠、抗惊厥作用，根据文献报道，这些生物碱采用醇提作用最为明显。故采用乙醇回流提取的工艺。

1、实验材料与仪器：Waters 2690型高效液相色谱仪(美国)，996型光电二极管阵列检测器，MILLENNIUM³²色谱工作站，自动进样器，TH66025型超声清洗器。色谱柱：Kromasil C₁₈(200mm×4.6mm I.D，5μm)，流动相：0.04％mol/L磷酸-甲醇(30∶70)，用10％氨水调节PH至6.0，流速1mL/min，检测波长：254nm。

延胡索乙素对照品(批号：0726-200107，由中国药品生物制品检定所提供)，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

2、实验方法与结果：

2.1因素水平确定：对乙醇热回流产生影响的因素有：乙醇浓度、乙醇用量、回流时间、提取次数，实验以浸膏得率、总生物碱含量、延胡索乙素含量为考察指标，因素水平的选择见表2。

表2因素水平表

注：第3、4次提取的加醇量分别为同水平第2次提取时加入量，提取时间分别为1小时。

2.2实验方法与结果：将元胡除去杂质、粉碎过2号筛，分别称取处方量元胡9份，每份12g。分别置250mL圆底烧瓶中，按正交表L₉(3⁴)的安排进行试验，以不同浓度乙醇、不同用量乙醇、不同回流时间和提取次数进行乙醇热回流提取。收集1～9份回流提取液，合并，滤过，分别定容至250mL，备用。

(1)醇浸膏得率测定

精密吸取上述提取液50mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105±1℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表3。

W₀---------取样量(g)

W₁--------醇浸膏重(g)

(2)总生物碱测定：

精密吸取上述1～9号提取液5.0mL，置250mL三角瓶中，水浴挥干溶剂，放冷，精密加入0.0208mol/L硫酸标准溶液10mL，摇匀，放置5～10分钟，加100mL蒸馏水，滴加2～3滴溴甲酚紫指示剂，充分摇匀，用0.04532mol/L的氢氧化钠滴定，滴定溶液的颜色由亮黄色转为紫兰色，即为滴定终点，记录消耗的氢氧化钠体积，按下式计算总生物碱含量，结果见表3。

V_H2SO4＝10-M_NaOH×V_NaOH/M_H2SO4×2

(M_H2SO4＝0.0208mol/L)

(3)延胡索乙素含量测定：

对照品溶液的制备：称取1.58mg的延胡索乙素对照品，加甲醇定容于5.0mL容量瓶中，备用。

供试品溶液的制备：精密吸取上述1～9号提取液1.0mL，分别加入95％乙醇稀释并定容至10mL量瓶中，过0.25μm的滤膜，取续滤液即为1～9号供试品溶液。按上述条件进行液相色谱分析，进样量10μL。结果见表3。

表3元胡乙醇热回流提取工艺正交试验结果L₉(3⁴)

正交结果方差分析见表4、5、6。

表4浸膏得率方差分析结果

表5总生物碱方差分析结果

表6延胡索乙素方差分析结果

(4)实验结果

由浸膏得率极差及方差分析结果表明：各因素作用主次为A＞B＞C＞D，其中A因素有显著性差异(P＜0.05)，B、C、D因素无显著性差异(P＞0.05)，最佳工艺为A₂B₁C₂D₃；总生物碱方差分析结果表明：各因素作用主次为C＞A＞B，其中C因素有极其显著性差异(P＜0.01)，A、B因素有显著性差异(P＜0.05)，D因素无显著性差异，最佳工艺为A₁B₂C₃D₃；以延胡索乙素方差显示：各因素作用主次为A＞B＞C＞D，方差分析表明：其中A、B因素有显著性差异(P＜0.05)，C、D因素无显著性差异(P＞0.05)，最佳工艺为A₂B₃C₂D₂。

结合生产实际，考虑到延胡索乙素转移率，综合比较，元胡的最佳提取工艺为：A₂B₃C₂D₂即元胡分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，每次2.0、2.0、1.0小时。

(5)验证实验：据此条件，重复三次，结果见表7。

表7元胡乙醇回流提取验证结果

验证结果与正交结果基本一致，故提取工艺条件基本稳定。

(三)干姜挥发油的提取条件考察：

1、挥发油含量测定：

取干姜100g，参照挥发油测定法(中国药典2000年版一部附录XD挥发油测定法甲法)试验，测得本品挥发油含量为0.83％，符合中国药典2000年版一部干姜项下有关规定，结果见表8。

表8挥发油含量测定结果

2、挥发油提取工艺条件选择

2.1材料与仪器挥发油提取装置一套。

2.2方法与结果：

①因素水平确定：为了探讨处方中挥发油的提取工艺，以挥发油提取量为考察指标，采用正交试验，对提取的加水量、浸泡时间及蒸馏时间进行了考察，见表9。

表9因素水平

②试验方法及数据

称取干姜100g，9份，按正交表L₉(3⁴)安排试验，分别加入不同水量、按不同时间浸泡，蒸馏不同时间。提取收率按干姜挥发油含量为0.83％时提取率为100％进行计算，结果见表10。

表10干姜挥发油提取工艺正交试验考察结果L₉(3⁴)

表10结果方差分析见表11。

表11提取收率方差分析

3实验结果

以挥发油含量为考察指标，由表中极差R大小显示，各因素作用主次为A＞B＞C，方差分析结果表明：A因素有显著性差异(＜0.05)，B、C因素无显著性差异(＞0.05)，最佳工艺为A₂B₂C₁。结合生产实际，综合比较，干姜挥发油的最佳提取工艺为干姜饮片加8倍量水浸泡2小时，水蒸气蒸馏4小时。

(四)白花蛇舌草、山楂提取工艺研究：

1、白花蛇舌草、山楂提取方法考察

目的：比较热回流提取、渗漉提取法对总有机酸含量影响。

方法：参照中国药典2000年版一部山楂项下总有机酸含量测定法。

(1)热回流提取法：称取1/2处方量白花蛇舌草、山楂药材粗粉，2份，分别置500mL圆底烧瓶中，加入50％乙醇250mL回流提取3次，每次2小时。合并3次提取液，分别用50％乙醇定容至250mL，分加吸取10mL于蒸发皿中，水浴蒸干溶剂，残渣加水定容至25mL量瓶中，精密吸取5.0mL于三角滴瓶中，加水50mL，加酚酞指示剂2滴，用0.04595mol/mL标准氢氧化钠滴定液滴定，记录消耗的氢氧化钠体积，计算，即得总有机酸含量。

每1mL氢氧化钠滴定液(0.1mol/mL)相当于6.404mg枸橼酸(C₆H₈O₇)。

V---消耗氢氧化钠体积

W----取样量(总生药重量)

(2)渗漉提取法：称取1/2处方量白花蛇舌草、山楂药材粗粉，共2份，置渗漉筒中，加入50％乙醇50mL浸泡18小时后，继用50％乙醇200mL渗漉提取4小时。收集渗漉液，过滤后，转移并定容至250mL量瓶中。精密吸取10mL自(1)“于蒸发皿中....”起同法操作，测定结果见表12。

(3)提取次数考察：结果见表12

表12脂溶性总有机酸含量测定结果

试验结果表明：采用热回流提取2次的方法，测得总有机酸含量分别为1.9％、2.0％，第3次醇提总有机酸含量分别为0.11％、0.12％，所占比例为提取率为8％，说明2次基本提尽；以渗漉法提取，测得有机酸含量分别为1.31％和1.21％。故实验采用乙醇热回流提取2次的方法。

2、白花蛇舌草、山楂乙醇提取正交试验

2.1材料与仪器：

白花蛇舌草、山楂为市售药材，经鉴定符合广西地标、药典规定。

仪器条件：美国HP1100型高效液相色谱仪，UV紫外检测器，自动进样器，TH 66025型超声清洗器。色谱柱：HYPERSIL C₁₈(4.6×60mm I.D，3μm)，C₁₈ GUARD-PAK预柱，柱温40℃。流动相：甲醇-水(体积百分比76∶24)，流速1mL/min，检测波长：210nm。

甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

熊果酸对照品(批号：0742-9909，供含量测定用)，齐墩果酸对照品(批号：0709-9803，供含量测定用)，均购于中国药品生物制品检定所。

2.2实验方法与结果：

(1)因素水平确定

以醇提浸膏得率、总有机酸含量、熊果酸含量为考察指标，采用正交试验优选乙醇浓度、乙醇用量、提取时间。见表13。

表13因素水平表

注：第3次提取的乙醇用量为同水平第2次提取时加入量，提取时间为1小时。

结合考虑生产条件，本次实验固定回流温度，以回流沸起为度。

(2)实验方法与结果

将白花蛇舌草切细、山楂粉碎为粗粉。称取1.5倍处方量的药材，混合均匀，置1000mL圆底烧瓶中，共9份。按设定的正交方案L₉(3⁴)进行试验，即分别加入不同浓度、不同用量乙醇，回流提取不同时间，合并滤液，滤过，滤液浓缩并定容至1000mL，备用。

(A)醇浸膏得率测定

精密吸取上述乙醇提取液100mL，于恒重的蒸发皿中，水浴蒸干溶剂，于105±1℃烘箱中干燥3小时，取出，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表14。

W₀--------取样量(g)，60g

W₁--------醇浸膏重(g)

(B)总有机酸含量测定(参照中国药典一部山楂项下方法)

精密吸取上述1～9号提取液100mL，置于蒸发皿中，水浴挥干溶剂，放冷，残渣加蒸馏水90mL分次转移至100mL容量瓶中，超声处理40分钟后，加水至刻度，摇匀，滤过。精密吸取续滤液10mL于三角滴瓶中，加水100mL，摇匀，加酚酞指示剂2滴，充分摇匀，用0.04595mol/L的氢氧化钠滴定液滴定，至溶液颜色由无色变为红色且1分钟内不褪色为止，记录消耗的氢氧化钠体积，按下式计算，即得总有机酸含量。结果见表14。

V---消耗氢氧化钠体积

W----取样量(总生药重量)

V₁----乙醇提取液定容体积(1000mL)

(C)熊果酸含量测定：

熊果酸对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品1.48mg于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.296mg/mL的熊果酸对照品溶液。

齐墩果酸对照品溶液的制备：精密称取齐墩果酸对照品1.70mg于5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.34mg/mL的熊果酸对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密吸取上述1～9号乙醇提取液10.0mL，于蒸发皿中，水浴挥干溶剂，残渣加甲醇50mL分次定量转移至100mL容量瓶中，超声处理20分钟后，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液适量，过0.45μm滤膜，续滤液即为供试品溶液。

色谱条件选择：实验采用三根柱子：Kromasi C₁₈(4.6×60mmI.D，5μm)；DiamosilCTM钻石C₁₈(4.6×200mmI.D，5μm)；HYPERSIL C₁₈(4.6×60mmI.D，3μm)，进行混合标品色谱分离，检测波长210nm，流动相：甲醇-水(76∶24)，流速1mL/min。

由于熊果酸、齐墩果酸互为化学同分异构体，在用非手性色谱柱分离时，两者均有不同程度的分离，但均不能达到很好分离度，结合参考文献，样品中熊果酸含量较齐墩果酸高，故实验采用熊果酸作为正交提取工艺考察指标。

经高效液相色谱条件比较，HYPERSIL C₁₈(4.6×60mm I.D，3μm)色谱柱分离较佳。按此条件，分别吸取熊果酸对照品溶液10μL、供试品溶液5μL(1～9号)，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。结果见表14。

表14白花蛇舌草及山楂提取工艺正交试验结果L₉(3⁴)

表14方差分析结果见表15、16、17。

表15浸膏得率方差分析结果

表16总有机酸方差分析结果

表17熊果酸方差分析结果

综上分析，以醇提浸膏得率为考察指标，由表14中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞C＞B，方差分析表明A因素有显著性差异(p＜0.05)，以A₁B₃C₁D₃组合为佳；以总有机酸含量为考察指标，极差R值显示：各因素作用主次为A＞C＞B，方差分析表明A因素有显著性差异(p＜0.05)，以A₂B₂C₂D₃组合为佳；以熊果酸含量为考察指标，极差R值显示：各因素作用主次为A＞B＞C，方差分析表明，A因素有显著性差异(p＜0.05)，以A₃B₂C₁D₁组合为佳。见表15、表16、表17。

D验证试验：由于优选的工艺未包括在正交表的9次试验中，考虑到熊果酸、总有机酸指标的重要性，故对其进行了验证试验。用同批药材，称取1/2处方量，共5份，分别按A₂B₂C₂D₃和A₃B₂C₁D₁进行对比试验，测得浸膏得率及熊果酸含量。结果见表18。

表18验证试验结果

由此可见，以醇浸膏得率为指标A₂B₂C₂D₃优于A₃B₂C₁D₁，以熊果酸含量为指标，则A₃B₂C₁D₁较A₂B₂C₂D₃为优；综合分析，白花蛇舌草、山楂乙醇提取最佳工艺确定为：A₃B₂C₁D₁。即药材用80％乙醇8、8倍量回流提取2次，每次2小时。药渣进入水煎。

(五)麦芽、鸡内金等水煎煮提取工艺研究：

1、麦芽、鸡内金等药材吸水率的测定

方法：取1/2处方量药材(水煎煮药材)，共3份，加水6倍量，浸泡至透心，滤过，药渣称重，按下式计算。见表19。

表19麦芽、鸡内金等药材吸水率的测定结果

故测得麦芽、鸡内金等药材吸水率为123％。

2、麦芽、鸡内金等药材煎煮次数选择

称取1/2处方量药材，加10倍量水，煎煮3次，每次1.5h，测定第一、二次煎煮及第三次煎煮的浸膏得率，结果第二次煎煮浸膏得率为6％，说明二次煎煮已基本提取完全。

3、麦芽、鸡内金等水煎煮提取正交试验：

3.1试剂与仪器：

仪器：UV-265FW型紫外分光光度计(日本岛津)。

电热恒温水浴锅(广东省汕头市仪器厂)，电热真空干燥箱(南京电工科学机械制造厂)；万分之一分析天平(上海第一分析仪器厂)。

药品与试剂：葡萄糖、苯酚为分析纯，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.2方法与结果

3.2.1因素水平确定：由于煎煮次数交互作用较多，故对煎煮次数以干浸膏得量和多糖量为指标进行单因素考察，结果见表20。正交试验对药材浸泡时间、加水量、煎煮时间进行筛选，以干膏收率、总多糖含量为评价指标。见表21。

表20煎煮次数考察结果

从表20结果可以看出，煎煮两次可将多糖和相关成分提取完全。故煎煮次数定为两次。

表21因素水平

3.2.2试验方法与数据：(全方水煎煮提取工艺优选)

操作方法：称取处方量麦芽、鸡内金药材，加入白花蛇舌草、山楂、干姜药渣，共9份，按表20设置的水平条件进行煎煮，滤过，滤液合并，置冰箱中放置过夜，滤过，收集上清液，加热浓缩至200mL，

供以下试验备用。

A浸膏得率测定：

精密吸取上述水煎液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105±1℃干燥3小时，置干燥器中冷却0.5小时，迅速称重，按下式计算浸膏得率，结果见表22。

B总多糖的含量测定

葡萄糖标准曲线的绘制：精密称取105±1℃干燥至恒重的标准葡萄糖97.6mg，置100mL容量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取10mL于50mL量瓶中，用水稀释至刻度，即得每1mL含0.488mg葡萄糖标准溶液。

苯酚试剂的配制：称取分析纯苯酚4g，加入100mL蒸馏水，混匀，使溶解。置棕色瓶内，放入冰箱，备用。

标准曲线的制备：精密吸取上述葡萄糖标准溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，分别置试管中，各加水使成2.0mL，再依次加入苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，迅速摇匀，放置5min，于50℃保温15min，冷水迅速冷却至室温；另以2.0mL蒸馏水同样操作，作空白对照，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VA)试验，于490nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横纵标，绘制工作曲线，求得回归方程：

Y＝47.438X-0.7742，r²＝0.9972(X-吸收度，Y-浓度)。

供试品溶液的制备：精密吸取上述水煎液100mL，置500mL烧杯中，滤液加入4倍量95％乙醇搅拌均匀，使沉淀，静置24小时，滤过，取沉淀物，加水80mL分次溶解，加3％明胶10mL，充分搅拌，2500转/分离心10分钟，弃沉淀，上清液滤过后，加水定容至100mL量瓶中；精密吸取0.5mL，加水稀释定容至10mL量瓶中，即得供试品溶液。

精密吸取1～9号供试液1.0mL，置试管中，加蒸馏水1.0mL，按标准曲线项下加4％苯酚试液1.0mL-----在490nm波长处测定吸收度，经回归求出供试液中葡萄糖浓度，按下式计算样品中多糖的含量：结果见表22。

多糖含量(％)＝多糖测定值(g)/取样量(g)×100％

22水煎煮正交试验结果L₉(3⁴)

表21正交试验方差分析见表23、24。

表23浸膏得率方差分析结果

表24总多糖方差分析结果

以干浸膏得率为考察指标，由表21中极差R值大小显示，各因素作用主次为C＞A＞B，方差分析表明C因素有显著性差异(p＜0.05)，以A₂B₁C₁组合为佳；以总多糖含量为考察指标，极差R值大小显示，各因素作用主次为C＞A＞B，方差分析表明，A、C因素有极显著性差异(p＜0.01)，B因素无显著性影响(＞0.05)，以A₂B₁C₁组合为佳，两者相吻合。综上分析，水煎煮提取最佳工艺为：麦芽、鸡内金等加12、10倍量水，浸泡2小时后，煎煮2次，每次煎煮2小时。

C验证试验：据此条件验证三次，结果见表25。

表25麦芽、鸡内金等验证试验结果

验证结果与正交结果一致，因此，由实验结果确定麦芽、鸡内金等水煎条件为：麦芽、鸡内金等加12、10倍量水，浸泡2小时后，煎煮2次，每次煎煮2小时。

(六)除杂工艺

除杂条件选择：本品为口服固体制剂(胶囊剂、片剂、颗粒剂)，其中黄连打粉入药，除沙棘油外，其它药味全部提取，为减少服药次数，结合处方日服量，实验对水煎液进行两种处理：一份水煎液过100目筛网，除去较大的固体颗粒；一份水煎液醇沉除杂(用95％乙醇使药液醇量达30％，避免多糖沉淀)，结果两者出膏率基本一致，故采用过滤法。结果见表26。

表26除杂实验结果

从表26可以看出，两者之间的干膏量和总多糖量基本一致，故选择过滤法除杂。

滤过前后出膏率测定：将干姜水蒸汽蒸馏芳香水与麦芽、鸡内金、白花蛇舌草、山楂水提液合并，采用板框压滤(过100目滤网)除杂，结果见表27。

表27滤过前后出膏率

结果：水提滤过后平均出膏率为10％。

(七)浓缩试验

由于制剂处方中有效成分不仅含有大量生物碱，而且还有大量有机酸成分，本工艺涉及有乙醇提取溶液和水煎煮提取溶液，为防止有效成分在配伍时受到破坏，为此我们以延胡索乙素和总浸膏得率为评价指标，考察了3种浓缩方法对延胡索乙素的影响：(1)将元胡醇提取溶液、白花蛇舌草和山楂的醇提取溶液、水煎液分别单独进行浓缩，再合并；(2)将白花蛇舌草和山楂的醇提取液与水煎液合并浓缩，元胡醇提取溶液单独浓缩，最后再合并；(3)将元胡醇提取溶液、白花蛇舌草和山楂的醇提取溶液、水煎液三部分提取液，全合并后再浓缩的方法。按(二)工艺中供试品测定方法进行测定。结果见表28。

表28 3种浓缩方法对延胡索乙素的影响

结果表明：3种浓缩方法无显著性差异。

(八)休止角及堆密度测定

将沙棘油拌入黄连粉中，加入上述提取物清膏，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎。为保证成品质量的一致性、稳定性及控制装量，进行了休止角(方法：使颗粒经漏斗流下并呈圆锥体状)和堆密度测定(方法：取一定量的颗粒，装入25mL量筒中，以一定高度落下，使松紧适宜，以重量及容积计算其堆密度)，结果见表29、30。

表29休止角测定结果

表30堆密度测定结果

表29、30结果表明，颗粒流动性较好，适合大生产。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

(1)本发明工艺简单易行，制备的三种剂型服用方便，口感良好，长期服用无毒副作用。

(2)本发明制备的药剂经初步临床试验，对慢性萎缩性胃炎胃粘膜病变治疗有良好疗效，经治疗后胃镜检查94.5％胃粘膜病变范围缩小1/2以上，83.5％活动性炎症消失，慢性炎症好转或达到轻度，溃疡愈合率85％以上，尤其在抗腺体萎缩、肠化增生方面有较理想的疗效。

(3)本发明制备的药剂适应症广泛，不仅很好地针对慢性萎缩性胃炎的各种症状，药效学方面也表明在抗炎、抗溃疡、止血等方面也有良好效果。

(4)采用正交试验筛选乙醇提取的加乙醇量、提取时间、提取次数以及水煎煮的加水量、提取时间、提取次数，最大限度的保留了药材中对适应症有作用的各个有效成分，同时减少了无效成分的浸出，起到了浓缩而不丢失有效成分的作用，降低了成本。

下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不仅仅限于以下实施例。

具体实施方式

以下实施例的原料均按重量计：

实施例1

本实施例所用的原料为黄连188g、白花蛇舌草313g、沙棘油25g、元胡150g、焦山楂188g、生麦芽150g、鸡内金150g和干姜188g，黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2h，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)的清膏I，药渣另器保存；元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)的清膏II，备用；干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)时，加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)时，并入清膏II，拌入含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入干姜挥发油，密闭放置2小时，装入胶囊，共制成胶囊1000粒，即得(0.38g/粒，口服，每次4粒，每日3次)。

实施例2

本实施例所用的原料为黄连188g、白花蛇舌草313g、沙棘油25g、元胡150g、焦山楂188g、生麦芽150g、鸡内金150g和干姜188g，将黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；白花蛇舌草、山楂分别以8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)的清膏I，药渣另器保存；元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)的清膏II，备用；干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，分别加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)时，加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)时，并入清膏II，拌入含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入干姜挥发油，密闭放置2小时，压片，包薄膜衣，制成1000片，即得(0.4g/片，口服，每次4片，每日3次)。

实施例3

本实施例所用的原料为黄连184g、白花蛇舌草280g、沙棘油24g、元胡192g、焦山楂192g、生麦芽140g、鸡内金140g和干姜180g，黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)的清膏I，药渣另器保存；元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)的清膏II，备用；干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，分别加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)时，加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)时，并入清膏II，拌入含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，加入适量辅料，制粒，整粒，喷入干姜挥发油，密闭放置2小时，分装，制成无糖型颗粒剂，即得(2.0g/袋，开水冲服每次1袋，每日3次)。

实施例4

本实施例所用的原料为黄连180g、白花蛇舌草210g、沙棘油30g、元胡150g、焦山楂180g、生麦芽120g、鸡内金120g和干姜165g，黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2h，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)的清膏I，药渣另器保存。元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)的清膏II，备用；干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)时，加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)时，并入清膏II，拌入含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入干姜挥发油，密闭放置2小时，装入胶囊，共制成胶囊1000粒，即得(0.38g/粒，口服，每次4粒，每日3次)。

实施例5

本实施例所用的原料为黄连176g、白花蛇舌草290g、沙棘油20g、元胡150g、焦山楂180g、生麦芽140g、鸡内金140g和干姜180g，黄连粉碎成细粉，过120目筛，等量递增法拌入沙棘油，混合均匀，备用；白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量80％乙醇回流提取2次，每次2h，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃)的清膏I，药渣另器保存。元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20～1.25(60～70℃)的清膏II，备用；干姜加8倍量水浸泡2小时，蒸馏提取4小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣另器保存；将白花蛇舌草、山楂及干姜药渣并入麦芽、鸡内金中，加12、10倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液与干姜药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.20(60℃)时，加入清膏I，继续浓缩至相对密度为1.25～1.30(60℃)时，并入清膏II，拌入含沙棘油的黄连细粉，混匀，60℃以下低温干燥，粉碎，制粒，整粒，喷入干姜挥发油，密闭放置2小时，装入胶囊，共制成胶囊1000粒，即得(0.38g/粒，口服，每次4粒，每日3次)。

名词解释：等量递增法为取量小的组分及与其等量的量大组分，同时置于混合器中混合均匀，再加入与混合物等量的量大组分衡释均匀，如此倍量地增加直至加完全部量大组分为止，混匀，过筛。

Claims

1.一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，它以按重量份计的黄连1-6、白花蛇舌草3-9、沙棘油0.3-3、元胡3-6、焦山楂3-6、生麦芽1-6、鸡内金1-6和干姜1-6为原料，其特征在于其制备过程为：

2.根据权利要求1所述的一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，其特征在于其制备过程为：

(2)白花蛇舌草、山楂，分别以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次2小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至60～70℃热测相对密度为1.10～1.15的清膏I，药渣另器保存；

(3)元胡粉碎成粗粉，分别以8倍量65％乙醇回流提取3次，第1、2次各2小时，第3次1小时，分别滤过，滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至60～70℃热测相对密度为1.20～1.25的清膏II，备用；

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗慢性萎缩性胃炎的中药组合物的制备方法，其特征在于所述片剂为糖衣片、薄膜衣片、泡腾片或咀嚼片。