CN101254213B

CN101254213B - 调理培养基和其应用

Info

Publication number: CN101254213B
Application number: CN2008100920732A
Authority: CN
Inventors: A·古尼切
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2007-02-26
Filing date: 2008-02-26
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2028-02-26
Also published as: US8101167B2; EP1974719B1; US20080206171A1; EP1974719A1; ES2465671T3; CN101254213A; FR2912917A1; FR2912917B1; BRPI0801858A2

Abstract

本发明涉及至少一种调理细胞培养基或其提取物用于制备治疗炎症和/或免疫紊乱症状的组合物的用途，所述培养基能通过接触至少一个消化道细胞培养物和至少益生菌微生物来获得。其还涉及包含调理培养基和具有刺激副作用的因子的组合物。

Description

调理培养基和其应用

本发明涉及调理(conditioned)培养基和其用途，特别是在化妆和皮肤领域。从而涉及所述调理培养基、其提取物或包含它们的组合物对炎症或免疫紊乱的刺激体征的治疗和预防。本发明还涉及一种组合物，所述组合物包含至少一种化妆品或药物化合物和至少一种根据本发明的调理培养基或其提取物的组合，所述化合物或能引起对皮肤的刺激。

人的皮肤是由两层组成的，即表层，表皮层，和深层，真皮层。

表皮主要是由三种类型的细胞构成的，即角质化细胞(主要的)、黑色素细胞和郎格罕氏(Langerhans)细胞。这些细胞类型中的每一个借助它固有的功能在人体内皮肤位置起到重要的作用，特别是保护人体对抗外来攻击的作用。真皮为表皮提供牢固的支撑。它也是供养要素。它主要由成纤维细胞和细胞外基质组成，它本身主要是由胶原、弹性蛋白和基质构成。其中也可以找到白细胞、肥大细胞和组织巨噬细胞。最后，血管和神经纤维横贯真皮层。

皮肤构成了一个屏障对抗外来攻击，特别是：化学的、机械的和感染性的攻击，和在这方面，在这里发生的对抗环境因素(气候、紫外线、烟草、污染、传染等等)和/或生物体内异物因素(例如，某药剂)的若干防御反应。

因此，保持或重建它的多种功能的完整性和平衡是必要的，特别是细胞的更新和分化过程，或最佳湿度。

皮肤刺激通常被定义为是一个可逆的和非免疫学的局部炎症反应，以浮肿和红斑为特征，所述浮肿和红斑是由化学物质和皮肤之间一次或重复接触诱发的。急性的刺激接触性皮炎(ICD)主要以炎症为特征，而慢性的ICD以角质化细胞过度增殖和暂时的表皮角化病为特征。ICD是一种多因子的疾病，其由内因和外因两者共同引发。年龄、遗传背景和性别都构成可以影响病理学发展的因素。此外，刺激剂的效果与它们的化学性质和应用的浓度直接相关，所述浓度影响皮肤的吸收。

皮肤刺激是非常重要的现象表现，因为其代表大约在60％到80％之间的接触性皮炎的临床病例。其他病例的大多数表现为变应性接触性皮炎。

属于非常不同的化学产品的不同种类的物质，例如角蛋白溶剂、脱水剂或氧化或还原剂可能被认为是刺激剂。由于这种多相性，难以给出一个方法，以利用它的化学结构作为基础来辨别刺激性产品。不同的刺激剂可以诱导不同类型的炎症。除了它们的腐蚀作用之外，其诱导预先形成的炎性介质的释放，化学产品可以损害细胞的功能或诱导先天免疫的皮肤细胞的活化。这导致多种炎症特异性的化合物例如细胞因子、化学增活素、补体化合物和血管扩张化合物例如组胺或花生四烯酸途径的代谢产物的释放，其调整皮肤炎症和细胞的聚集。

在建立ICD生理病理学中化合物对皮肤的穿透度是主要参数(Norlen L等，J.Invest Dermatol 117：823-829，2001，Mizutani H等，J.Clin Invest 87：1066-1071，1991)。所述的穿透度与皮肤的透过性的程度(其与它的生理情况有关系)和化合物的被认为限制进入的物理化学性质(分子量、极性、离子化程度)和携带物质与皮肤接触的自然环境(赋形剂、载体)有关系。

这个基本步骤对应的是将要扩散的分子从外部环境或载体的释放，并因此成为身体可获得的。

当刺激剂与皮肤接触时，角质化细胞是首先被化合物激活的细胞。因此，在ICD上大部分研究集中于这种细胞类型，并已知有关它们对ICD生理病理的参与的大量数据。角质化细胞在皮肤炎症反应的初始化中通过释放多种介质和细胞因子扮演重要角色，所述多种介质和细胞因子引发产生ICD临床症状的完整的一系列炎症反应。其中，IL-1α和花生四烯酸衍生物在炎症的发展中具有特别的重要性。

IL-1α的释放通过活化NF-kB转录因子来诱导涉及炎症的基因转录，例如细胞因子IL-1β、IL-6、GM-CSF、TNFα、化学增活素、包括IL-8、MCP-1、MIP-1α和嗜酸细胞活化趋化因子(chemokine)、以及粘附分子的表达例如E-选择蛋白或ICAM-I和VCAM-I(Gordon JR，Nature 19：346(6281)：274-276)。

从角质化细胞激活产生的信号级联开始于预存关键介质的释放。事实上，静止角质化细胞包含大量预先形成和生物学活性的IL-1α(Marks F等，ToxicolLett 96：111-118，1998)、以及花生四烯酸(Murphy JE等，J Invest Dermatol 114：602-608，2000)。因为这两种化合物是由角质化细胞组成性产生的，并保持储存在细胞中，表皮可以被认为是高炎性介质的主要贮存处。由于化合物腐蚀作用、烧伤或暴露于紫外线对角质化细胞的损伤导致IL-1α和花生四烯酸的释放，其成为躯体的首先的防御反应。IL-1α不但具有自分泌作用，而且已经被描述为，通过激活NF-kB转录因子通道，在多种皮肤细胞类型中诱导超过90种不同基因的转录，例如角质化细胞、内皮细胞或成纤维细胞(Gordon JR，Nature 19：346(6281)：274-276)。

为了发挥它的作用，花生四烯酸快速的代谢为许多高活性的化合物，类花生酸类物质如前列腺素、凝血噁烷和白细胞三烯充当短持续期的局部介质的角色，涉及到增殖、分化、凋亡的控制，或其他浮肿的形成或白细胞的激活(MurphyJE等，J Invest Dermatol 114：602-608，2000)。

因此，IL-1α和花生四烯酸可以被认为是触发应答化学应力的刺激现象的关键性介质(Murphy JE等，J Invest Dermatol 114：602-608，2000)。

在所有的炎性介质中，除IL-1s和花生四烯酸之外，仅有TNF-α可以激活足够数量的机制以独立产生皮肤炎症。这个皮肤炎症主要的细胞因子已经预存在皮肤的肥大细胞中(Larrick JW等，J Leukoc Biol 45：429-433，1989)，但也可以在刺激之后由角质化细胞和郎格罕氏细胞产生(Groves RW，等，J InvestDermatol 98：384-387，1992)。TNF-α对炎症反应最有影响的一个机制是诱导粘附分子与IL-1产生协同作用。粘附分子在白细胞的循环和从周围血管向真皮和表皮的渗透中扮演重要的角色(Holliday MR等，Am J Contact Dermat 8：158-164，1997)。

大量化学产品可以诱导皮肤刺激反应；然而，它们产出前炎症细胞因子的能力是不同的，并且皮肤炎症不是系统地依赖于TNF-α的产生。

还应当着重注意到在炎症位点由激活的巨噬细胞产生的IL-12和IL-18在局部的放大循环中也起了重要的作用。这是因为这些细胞因子通过附近的T淋巴细胞刺激产生IFN-γ，之后其成为对巨噬细胞和角质化细胞的强大的共激活因素。

此外，发生血管细胞和角质化细胞引起的趋化因子分泌。CC亚型(如此命名是因为第一个半胱氨酸是相邻的)的趋化因子对于多形核细胞和特定淋巴细胞是趋化性的，其原型是IL-8。CXC型(如此命名是因为一个氨基酸整合在前两个半胱氨酸之间)的趋化因子对于单核细胞/巨噬细胞和特定淋巴细胞是趋化性的，其原型是MCP-1(单核细胞趋化因子-1)。这两种趋化因子在炎症位点的释放阐明了在发炎组织中发现多核细胞浸润的原因。

IL-6也是一种由角质化细胞、巨噬细胞和血管细胞在炎症期间激活分泌的细胞因子。这个重要的细胞因子包含于许多体系中，例如免疫反应、血细胞生成、成骨细胞增殖等等。在皮肤刺激反应中，IL-6可以在局部生成，可以到达体循环并触发局部和整体的反应。

与细胞因子和趋化因子以及花生四烯酸代谢产物平行的，另一个主要的炎症介质是氧化应激(oxidative stress)。

特定的化学刺激物已知产生自由基和ROS(活性氧物质)，能诱导脂质过氧化或DNA改变。氧化应激在由化合物诱导的刺激现象的表征中起作用的假设被ROS抑制剂剂/清除剂抑制皮肤炎症的事实所支持(Zhang L等，J Invest Dermatol115：168-176，2000)。

虽然郎格罕氏细胞(LC)在抗原特异反应的诱导中扮演了一个基本的角色，它们看来似乎在ICD的生理病理中不具有重要作用。许多研究已经描述了LC在刺激剂上皮应用(epicutaneous application)之后的形态或密度上的变化(Mikulowska A等，Contact Dermatitis 34：397-401，1996；Kimber I等，J InvestDermatol 99：48S-50S，1992)。然而，这个结果更可能代表对炎症反应产生的一个非特异的反应。显然在ICD期间产生的IL-1α和TNF-α具有以剂量依赖的方式引起LC迁移的能力。因此，可能是由刺激剂诱导的IL-1α和TNF-α的局部浓度可以产生LC可变的迁移(Kimber I等，J Invest Dermatol 99：48S-50S，1992)。

在皮肤先天免疫系统的各种群体中，肥大细胞是在ICD发展中的主要细胞。肥大细胞存在于接近血管的真皮中，并是包含预存和生理活性的TNF-α的唯一细胞(Larrick JW等，J Leukoc Biol 45：429-433，1989)。

与这些前炎性细胞因子相反，还存在抗炎细胞因子例如TGF--β和IL-10以及已知能调整任何“危险信号的休克蛋白(即，：BiP(grp78)和HSP27)(PanayiG等，Cur Opinion Immunol 16：531-534，2004)。

因此，期望发现新的增强皮肤对这些有害机制的抵抗力的方法，并用来避免、治疗和预防炎症和免疫紊乱。

专利申请WO 02/098365(高级组织科学)给出了调理培养基用于化妆品或药物应用的用途。调理培养基是通过培养人皮肤细胞获得的，特别是成纤维细胞或角质化细胞。这些细胞被遗传性的修饰以增加它们生长因子或培养基中抗氧化剂的产量，其通常包含可溶性胶原。

US 2005/0249691描述了化妆品或皮肤用组合物，包括与凝胶基质结合，用于皮肤或角质层细胞的培养基；组合物必须包含胶原、壳聚糖和氨基多糖。

US 2006/0182701还描述了化妆品或皮肤用组合物，包括用于皮肤细胞的培养基。其目的的是为组合物的施用的皮肤细胞提供一个培养基，所述培养基将允许皮肤细胞按其在体外被获得的类似方式生长。

出人意料的，本发明发现，以完全不同于皮肤细胞的细胞调理的培养基可以被用于促进皮肤的或它的附属物保持完好状态，并可对抗炎症和/或刺激现象和/或免疫扰乱。

为此，本发明的一个目的的是至少一种调理细胞培养基或其提取物用于制备治疗炎症和/或免疫紊乱病征的组合物的用途，所述培养基能通过使至少一种消化道细胞培养物和至少益生菌微生物接触来获得。

有益的，细胞培养基，根据本发明还可以称为调理培养基，可以通过接触外周血细胞，特别是白细胞来获得。

这些白细胞可以，例如，在消化道细胞的培养基的培养物中。

优选的，这些白细胞主要包含淋巴细胞，但还可以包含其他外周血细胞例如单核细胞，其被与培养基接触。

根据本发明一个有益的实施例，消化道细胞培养物是三维培养物。

被用于实现本发明的消化道细胞可以来源于消化道的不同部分，例如食管、胃或肠。有益的，使用来源于肠道上皮的细胞；这种肠道上皮细胞是本领域技术员已知的。作为非限定性的实施例，肠来源的人细胞制备的称为Caco2、HT29或T84。

相应的株被保藏在ATCC的培养物保藏中心，编号如下：

Caco 2：ATCC No.HTB-37

HT29：ATCC No.HTB-38

T84：ATCC No.CCL-248

对于本发明的目的的，术语“益生菌微生物”是用来意指一个活的微生物，其被使用足够数量时，对它的宿主的健康具有积极的效果，“joint FAO/WHOExpert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic inFood Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria(联合FAO/WHO专家鉴定食物中益生菌对健康的价值和营养性质，包括具有活乳酸菌的奶粉)，2001年10月6日”，并且其可以特别改善肠道的微生物平衡。

益生菌可以用活细胞混悬液的形式引入细胞培养基，其浓度可以由本领域技术人员根据混合物其他成分的量来调整。作为启示，可以使用包括大约10⁴到10⁹cfu/ml的接种物(cfu表示“集落形成单位”，即“能形成一个集落的单位”)，优选至少10⁵cfu/ml。益生菌接种物可以通常浓度为大约10⁶到10⁷cfu。

适合本发明的微生物可以特别选自子囊菌(ascomycetes)例如酵母(Saccharomyces)、耶罗威亚酵母(Yarrowia)、克卢费氏酵母属(Kluyveromyces)、有孢圆酵母属(Torulaspora)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、德巴利酵母属(Debaromyces)、假丝酵母(Candida)、毕赤氏酵母(Pichia)、曲霉(Aspergillus)和青霉菌(Penicillium)，和如下属的细菌：双歧杆菌属(Bifidobacterium)、畸形菌体(Bacteroides)、梭菌属(Fusobacterium)、蜜蜂球菌属(Melissococcus)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、肠球菌(Enterococcus)、乳酸球菌属(Lactococcus)、葡萄球菌(Staphylococcus)、消化链球菌属(Peptostrepococcus)、杆菌(Bacillus)、小球菌属(Pediococcus)、微球菌(Micrococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、魏斯氏菌属(Weissella)、气球菌属(Aerococcus)、乳球菌属(Oenococcus)或乳杆菌属(Lactobacillus)，和其混合物。

作为最适合于本发明的子囊菌(ascomycetes)，特别的提及耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolitica)和乳酸克鲁维斯酵母(Kluyveromyces lactis)，以及有孢圆酵母属(Torulaspora)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、假丝酵母(Candida)和毕赤氏酵母(Pichia)，或者可替换的酵母，例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或酵母菌(boulardii)。

关于益生菌微生物，通常使用下列细菌和酵母属：

—乳酸菌(lactic acid bacteria)：其通过发酵糖产生乳酸。它们按照形态学被分为两个群：

●乳杆菌类(Lactobacillus species)：嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus(LCl，NCFB 1748))；乳酸杆菌(amylovorus)、干酪乳杆菌(casei(Shirota))、鼠李糖乳杆菌(rhamnosus(strain GG))、短乳杆菌(brevis)、卷曲乳杆菌(crispatus)、德氏乳杆菌(delbrueckii(保加利亚亚种subsp bulgaricus，lactis))、发酵乳杆菌(fermentum)、瑞士乳杆菌(helveticus)、鸡乳杆菌(gallinarum)、格氏乳酸杆菌(gasseri johnsonii)、副干酪乳杆菌(paracasei)、植物乳杆菌(plantarum)、罗伊氏乳杆菌(reuteri)、鼠李糖乳杆菌(rhamnosus)、唾液乳杆菌(salivarius))、消化乳杆菌(alimentarius)、弯曲乳杆菌(curvatus)、干酪乳杆菌干酪亚种(casei subsp.Casei)、清酒乳杆菌(sake)；

●Gocci：肠球菌(Enterococcus)(粪肠球菌faecalis、尿肠球菌faecium)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis(subspp lactis或cremoris))、肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、嗜酸芽孢乳酸菌(Sporolactobacillus inulinus)、Streptococcus salvarius subsp.Thermophilus、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)；

—双歧杆菌或双歧杆菌属类：青春双歧杆菌(adolescentis)、动物双岐杆菌(animalis)、两歧双歧杆菌(bifidum)、短双岐杆菌(breve)、乳双歧杆菌(lactis)、长双歧杆菌(longum)、婴儿双歧杆菌(infantis)、假小链双歧杆菌(pseudocatenulatum)；

—其他生成孢子的细菌：杆菌(Bacillus)(Toyo菌cereus var toyo或枯草芽孢杆菌subtilis)、凝结芽胞杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、Escherichia coli strain nissle、费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)。

特定的益生菌微生物实施例是青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、动物双岐杆菌(Bifidobacterium animalis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)、假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus(LCI，NCFB 1748))；食淀粉乳杆菌(Lactobacillusamylovorus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei(Shirota))、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus(GG菌株)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii(保加利亚亚种subsp bulgaricus，lactis))、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、鸡乳酸杆菌(Lactobacillus gallinarum)、格氏乳酸杆菌(Lactobacillus gasseri)，Lactobacillus johnsonii、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus caseisubsp.casei)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sake)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、肠球菌(Enterococcus(粪肠球菌faecalis、尿肠球菌faecium))、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis(subspp lactis或cremoris))、肠膜明串珠菌葡聚糖亚种(Leuconstoc mesenteroides subsp dextranicum)、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、嗜酸芽孢乳酸菌(Sporolactobacillus inulinus)、Streptococcus salvariussubsp.Thermophilus、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、酵母(Saccharomyces(cerevisiae或其他的boulardii))、杆菌Bacillus(Toyoi菌cereus vartoyo或枯草芽孢杆菌subtilis)、凝结芽胞杆菌(Bacillus coagulans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、Escherichia coli strain nissle和费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)，和它们的混合物。

有益的，至少一个益生菌微生物是选自乳酸菌(lactic acid bacteria)、双歧杆菌(bifidobacteria)和酵母菌(Saccharomyces yeasts)的。

更特别的，它们是来源于乳酸菌群的益生菌微生物，例如尤其是乳杆菌属和/或双歧杆菌属，特别乳杆菌属。作为这些乳酸菌的例证，更特别的可提及Lactobacillus johnsonii、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、Lactobacillus casei或两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、动物双岐杆菌(Bifidobacterium animalis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)或假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)，和它们的混合物。

最适合的种类是Lactobacillus johnsonii、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis NCC 2818)(也标识为Bbl2 ATCC 27536)；还可以特别提及下列菌株，按照布达佩斯条约保藏在culture collection of the Institut Pasteur(28 rue du Docteur Roux，F-75024 Pariscedex 15)的30/06/92、12/01/99、15/04/99、15/04/99和07/06/05：Lactobacillusjohnsonii(CNCM I-1225)、Lactobacillus paracasei(CNCM I-2116)、Bifidobacterium adolescentis(CNCM I-2168)和Bifidobacterium longum(CNCM I-2170)和Bifidobacterium lactis(CNCM I-3446)、和属Bifidobacteriumlongum(BB536)。Bifidobacterium lactis CNCM I-3446株可以获自Hansen(Chr.Hansen A/S，10-12 Boege Alle，P.O.Box 407，DK-2970 Hoersholm，Denmark)。

用于与细胞接触的细胞培养基是适合所使用的不同类型的细胞存活和/或培养的任何营养培养基。其通常包含碳和氮源、矿物质、维生素和/或痕量元素，例如氨基酸、糖、蛋白质和脂肪酸。

细胞可以在它们的来源组织之外培养。为此，它们将在接近于它们在组织中的自然条件的环境下培养。这些培养在它们的培养基中需要基本的因子。该环境应该具有确定的由矿物质和生物材料组成的组合物，被称为培养基。所述培养基通常由专业的供应商提供，并且根据细胞类型具有特定的特征。培养基通常还包含适当数量的水、碳和氮源、磷酸盐和硫酸盐、矿物质、生长因子和维生素。

在这种类型的培养基种培养的细胞通常需要添加血清。所述血清具有复杂的组分，并至少为细胞提供激素、粘附因子和氨基酸。该血清可以，例如，全部或部分被本发明的调理培养基的添加所替代。事实上，调理培养基也可以另外被添加到培养基中，如同增浓。

本领域技术人员能容易的确定合适的培养基。非限定性的，可提及的有RPMI 1640培养基、Dulbecco′s Modified Eagle′s培养基(DMEM)，、最小基本培养基(MEM)、M199、RPMI 1640或Iscove′s Modified Dulbecco′s培养基(EDMEM)、Ham′s F-12、Ham′s F-10、NCTC 109和NCTC 135。

这些培养基可以以通常被用于细胞培养的任何添加剂补充，例如，非限定性的，磷脂前体、非必需氨基酸、核酸、维生素、抗生素、酶辅助因子、无机盐、胰岛素、转铁蛋白、三碘甲腺原氨酸、乙醇胺、O-磷酸乙醇胺或生长因子例如神经生长因子或神经营养因子-3。

通常被用来补充细胞培养基的各种添加剂的浓度可以被本领域技术人员特别地根据被培养的细胞的类型确定和调整。

其他的培养基描述于Ham和McKeehan，“Methods in Enzymology”，58：44-93，1979中，或于Bottenstein等，“Methods in Enzymology”，58：94-109，1979，其内容在此引入作为参考。

此外，还可以使用不同培养基的混合物，特别是上述培养基的，例如DMEM/HAM F12的混合物。

这些培养基可以由特定生长因子补充，或例如血清，不过后一组分也可以不补充。

根据一个实施例，没有胶原被添加到培养基中。

所述培养基可以是液体、半液体、凝胶或固体，优选至少部分是液体。

措词“调理培养基的提取物”是用来特别意指通过透渗析、分馏法、相分离、凝胶过滤层析、亲和色谱法、沉淀、浓缩、冻干法等方法得到的所述调理培养基的部份或亚化合物。

调理培养基可以从缺少血清和动物产品的培养基中产生。该调理培养基优选在存在人白细胞的情况下(并且特别是乳杆菌属或双歧杆菌属类的益生菌存在下)由消化道细胞的刺激之后得到，具有益生菌。

有益的，被用于本发明组合物的培养基(或它的提取物)是稳定了的培养基，即，它已经经受了用于保存其在选择的给定瞬间的状态的操作，通常是在制备过程的最后，同时已经保存了它的固有性状。特别的，该操作是用来使所述培养基变得无菌的，即，能够抑制微生物生长，同时保存了其具有的生物学性质。培养基的稳定可以通过本领域技术人员已知的任何方法获得，例如，灭菌过滤、高压蒸汽灭菌、超高温(UHT方法)、高压灭菌、γ-辐射或冷冻。

根据本发明的调理培养基、它的提取物或含有该成分的组合物特别适用于预防、减少或治疗皮肤刺激的病症。

皮肤反应，特别是皮肤刺激反应，可能是由化学起源的外源性因素所诱发，例如能引起皮肤刺激的生物体内异物、抗原、变态反应原、化学产品、化合物，或剥落导致的外源性因素，或环境起源的外源性因素(温度、气候、紫外辐射、大气污染、特别是重金属、臭氧、抽烟等等)，或机械起源的外源性因素(摩擦、刮)，和内源性因素例如紊乱包括影响皮肤、粘膜、头皮和/或毛发的炎性和/或激素反应机制。

生理性内源性因素可以，例如，是与前炎症介质的异常产生(神经介质、细胞因子、趋化因子)或雄激素性脱发相关的。

特别的，本发明的目的是至少一种调理培养基或至少一种上述定义的提取物在制备用于治疗皮肤和/或头皮刺激现象症状组合物中的用途。

因此，发明涉及至少一种调理培养基或其提取物的非治疗用途，如镇静剂。

本发明的目的还是至少一种根据本发明的调理培养基或其提取物的所述非治疗用途，用于预防和/或治疗皮肤反应，选自发红、痒、发热感、烧灼感、刺痛和肌肤紧张。

本发明的目的还是根据本发明的所述用途，其特征在于所述调理培养基或其提取物是用于预防和/或降低由至少一个条件诱发的所述皮肤反应，所述条件选自能引起皮肤刺激的生物体内异物、抗原、变态反应原、化学产品、化合物的作用，或剥落的作用，或温度、气候、紫外辐射或大气污染的作用，或者由摩擦、前炎症介质的异常产生和雄激素性脱发引起的作用。

特别的，调理培养基或其提取物可以被用于预防和/或降低化妆品或皮肤学组合物的刺激效果。所述化妆品或皮肤学组合物包含一个或多个能引起刺激现象的组合物。

本发明的目的还是至少一种调理培养基或其提取物在制备用于预防和/或治疗涉及皮肤刺激的皮肤紊乱的化合物中的用途，例如具有易刺激的和/或过敏的皮肤和/或粘膜和/或头皮的个体遇到的皮肤刺激。

更特别的，本发明的目的是用于制备供预防和/或治疗皮肤刺激的组合物的所述用途，其特征在于所述皮肤刺激是由至少一种条件诱生的，所述条件选自能引起皮肤刺激的生物体内异物、抗原、变态反应原、化学产品、化合物的作用，或剥落的作用，或温度、气候、紫外辐射或大气污染的作用，或者由摩擦、前炎症介质的异常生成和雄激素性脱发引起的作用。

本发明的目的还是至少一种调理培养基或其提取物在制备用于预防和/或治疗涉及皮肤反应的皮肤紊乱的组合物中的用途，例如炎性或免疫反应类型。

因此，根据本发明的调理培养基或组合物更特别用于对抗皮肤紊乱，所述皮肤紊乱选自干屑、浮肿和/或丘疹、炎性发红；瘙痒；牛皮癣、皮肤特异反应、特应性皮炎；荨麻疹；接触性皮炎；湿疹；皮下脂溢性皮炎；痤疮；炎性的色素过度沉着；免疫性皮肤病；大疱类免疫性疾病(bullous immune diseases)；硬皮病；光化学性弹性组织变性(actinic elastosis)；斑秃或斑块状脱发；白斑病；全身性红斑狼疮；寻常天疱疮；营养不良性大疱性表皮松解症和自身免疫源性灰发症。

事实上，已知的某些皮肤紊乱是涉及炎性或免疫反应型皮肤反应的，在其中有炎性的发红、牛皮癣、皮肤特异反应、特应性皮炎、速发型过敏性变态反应、例如荨麻疹、迟发型过敏性变态反应、例如接触性皮炎、湿疹；皮下脂溢性皮炎、痤疮、炎性的色素过度沉着、免疫性皮肤病、光化学性的弹性组织变性、斑秃或斑块状脱发；白斑病；系统性红斑狼疮；寻常天疱疮；营养不良性大疱性表皮松解症和自身免疫源性灰发症。

此外，就皮肤而言，暴露在紫外线中产生严重的炎症反应并且这具有刺激剂的效果，其可以导致发红、浮肿和/或表皮角化病的产生。这些炎性和/或刺激反应与免疫系统中特定参与因素的刺激有关。

根据本发明的一个实施方案，根据本发明的调理培养基或组合物用于保护皮肤细胞免受紫外辐射引起的伤害。

根据本发明的调理培养基或组合物被有益地用于保护细胞，特别是皮肤细胞，使其DNA免受伤害。

特别地，组合物被用于：

1)修复改变的DNA，并因此降低了癌变的风险(例如，按照环境相关因素在皮肤内诱导产生的)。特别的，这些物质可以影响哺乳动物中遗传物质修复的主要机制，核苷切除的修复；

2)在特应性皮炎或接触过敏的情况下抑制胱门蛋白酶(caspases)，抑制活化的T细胞浸润受影响个体的皮肤，所述T细胞浸润诱导临近的角质化细胞的凋亡。这样，凋亡的角质化细胞的数目将被减少，因此细胞间的粘附力受损(皮肤棘层松解)和从而形成水疱。

此外，某些特定局部化合物的用途，在特定的导致出现皮肤反应情况下例如敏感皮肤、受红斑痤疮影响的皮肤、高浓度的所述化合物等等，可以被用于化妆品或皮肤学组合物，当然可以用于其他效果。

因此，化妆品组合物包含，例如，角质层分离剂和/或脱落活化剂用于防老化，和特别是剥落活化剂和/或用于细胞再生的活化剂，例如α-羟酸(特别是乳酸、羟基乙酸、柠檬酸)，β-羟酸(特别是水杨酸、5-氮-辛酰基水杨酸)和类视黄醇(特别是全反式或13-顺视黄酸、视黄醇)。不幸的是，如果这些活化剂使用量太大时，它们会导致皮肤刺激。这些化合物的用途，特别是对于具有易刺激的和/或过敏的皮肤和/或易刺激的和/或过敏的头皮的患者，因此将受到限制。

另外，甚至某些被认为在化妆品或皮肤用组合物中被认为是惰性的化合物，例如，防腐剂、表面活性剂、芳香剂、溶剂或推进剂，实际上在应用到角蛋白材料，和特别是皮肤，包括头皮，具有易刺激的和/或过敏的皮肤的个体上，也可能是刺激性的，所述实际的刺激性依赖于使用的化合物和皮肤的敏感性和使用者的固有皮肤菌群。

能引起皮肤刺激的化合物通常使用较低的剂量。少量这些化合物的使用可能被证明与使用其他化合物相比相对没有益处，所述其他化合物具有较低活性但是具有较少的刺激性或根本没有刺激性，和因此大量使用，或与化合物的目的有关的使用，例如在乳剂存在情况下保持组合物的稳定性，或在防腐剂存在情况下良好保存组合物。

因此，存在发现化合物的需求，所述化合物具有镇静效果，特别是能预防和/或减低包含一个或多个能引起皮肤刺激的化合物的化妆品或皮肤学组合物的刺激反应，而且预防和/或治疗与炎性或免疫过敏类型的皮肤刺激有关的皮肤紊乱。

因此，本发明的目的还是至少一种调理培养基或其提取物用于制备组合物的用途，其特征在于所述调理培养基或其提取物是用于预防和/或减少包含一个或多个能引起皮肤刺激的化合物的化妆品或皮肤学组合物的刺激反应。

不管是出于化妆或治疗目的，根据本发明的用途特别地是用于治疗易刺激的和/或过敏的皮肤和/或粘膜和/或头皮。

本发明的目的还是用于局部施用于皮肤和/或粘膜和/或头皮的组合物，其在生理上可接受的培养基中包括：

—至少一种能引起皮肤刺激的化妆用或药用化合物，和

—至少一种调理培养基或其提取物。

至少一种调理培养基或其提取物的使用因而与其他相比特别具有消除由具有刺激副作用的化合物可能引起的皮肤刺激的益处，以及使在化妆品或皮肤用组合物中与通常用量相比可能增加所述化合物的用量、意在增加后者的有效性的益处。

因此，可以在包括易刺激的和/或过敏的皮肤和/或粘膜和/或头皮的组合物中使用能引起皮肤刺激的药剂，例如化妆品活性剂(例如：角质层分离的和/或脱落药剂)、皮肤活性剂(例如：类视黄醇)、某些表面活性剂、防腐剂、芳香剂、溶剂和推进剂、和它们的混合物，条件是所述的组合物中包括至少一种调理培养基或它的提取物。

根据本发明术语“易刺激的和/或过敏的皮肤和/或粘膜和/或头皮”是特别意指通常对外来的侵袭以夸大的方式作出反应的皮肤和/或粘膜和/或头皮。与过敏的皮肤相对，这种皮肤和/或这种粘膜和/或这种头皮经历进一步的皮肤反应的发展过程，这些皮肤反应通过红、痒表现和/或涉及免疫学或炎性的发病机制。

在本文的描述中，除非另作说明，术语“皮肤”是用来意指覆盖人体的全部外层部分，即，皮肤、粘膜和头皮。

术语“体表(integument)”指的是指甲、头发和体毛，例如睫毛。

根据本发明在组合物中调理培养基或其提取物的用量将由本领域技术人员调整以便获得预期效果。因此，有效量通过常规方法确定，包括体外试验和体内试验，并且特别的依赖于使用的提取物的类型和选择的配方的类型。

通过指定，调理培养基活性物质的浓度相对于组合物的总重量可以在0.001％至50重量％之间，特别是少于或等于10％，这些量可以在没有任何不利因素的前提下变化。

根据本发明的组合物还包含生理可接受的培养基，特别是一个化妆品或药学可接受的培养基。更特别的是它们是化妆品或药学的组合物，特别是皮肤学的组合物。

对于本发明的目的，术语“化妆品组合物或产品”是用来特别意指任何用于与人体的各种表面部分(表皮、头发和体毛系统、指甲、口唇和外生殖器)、或牙齿或口腔粘膜接触的物质或制剂，用于专门的或主要的，来清洁它们、来芳香它们、改变它们的外观和/或矫正体味和/或保护他们或使它们维持在好的状态(Cosmetic Guideline(化妆品指南)76/768/EEC修正版)。

这些组合物通常具有一种能用在人体皮肤上使人愉快的气味和外观。

优选的，本发明的组合物是被应用到皮肤或粘膜上的。

根据考虑到的使用的方法，其可以是任何通常使用的植物制剂的形式。

为了局部施用到皮肤或粘膜，特别地，组合物的形式可以是洗液或血清类型的水或油溶液或分散体、通过在水相中分散油类(O/W)或反之亦然(W/O)获得的乳液类型的液体或半液体稠度的乳剂、或具有水或无水乳膏或凝胶类型的具有柔软状态的性质的混悬液或乳剂、或微囊或微粒、或离子的和/或非离子类型的泡状的分散体、或泡沫。它们的形式也可以是用于控制释放的微球或纳米球或脂囊泡或高分子微泡或高分子修补剂和水凝胶。

根据一个有益的实施方案，所述组合物是皮肤化妆品组合物，包含根据本发明的至少一种调理培养基或一种提取物在化妆品或药物可接受的载体中，比例按重量计为相对于组合物的总重量的至少0.001％，并优选从0.05％到3％。

这些组合物按照常用的方法制备。

根据本发明的组合物中各种组分的用量是按照本领域的常用量考虑使用的。其组分和用量优选不会影响调理培养基或它的提取物的活性，即降低所述活性。

在化妆品领域，特别地，这些组合物组成用于脸、用于手、用于脚、用于大的组织皱褶或用于身体的清洁、保护、治疗或护理乳膏(例如，日霜、晚霜、卸妆霜、粉底霜、防晒霜)，粉底液、卸妆乳、护肤乳或护理液、防晒乳、皮肤护理洗液、凝胶或泡沫，例如清洁洗液、人工晒黑洗液、沐浴组合物、包含杀菌剂的除臭组合物、或须后凝胶或洗液。

根据本发明的组合物也可以制备成固体形式，制成肥皂或洁肤皂。

组合物还可以包装成气雾剂组合物的形式，也包括挤压输送的推进剂。

根据本发明的组合物还可以是头皮护理组合物，特别是洗发剂、头发定型水、治疗性洗液、定型胶或定型膏、生发洗液、防脱发洗液或凝胶、抗寄生虫洗发剂、去头屑洗发剂等等。

组合物还可以用于口牙用途，例如牙膏。在这种情况下，组合物可以包含通常用于口腔用组合物的常规辅料和添加剂，特别地，和表面活性剂、增稠剂、湿润剂、磨光剂例如二氧化硅、各种活性成分例如氟化物、特别是氟化钠、和可选择的甜味剂例如糖精钠。

当组合物是乳剂时，油相的比例按重量计相对于组合物的总重量可以从大约5％到80重量％变化，和优选按重量计从大约5％到50％。用于乳剂形式的组合物的油、蜡、乳化剂和辅助乳化剂是选自化妆品领域常规使用的种类。在组合物中，乳化剂和辅助乳化剂按重量计相对于组合物总重量以从0.3％到30％的比例存在，和优选按重量计从0.5％到20％。乳剂还可以包含脂囊泡。

当组合物是油性溶液或凝胶时，油相可以以超过组合物总重量90％的比例存在。

以已知的方式，化妆品组合物还可以包含化妆品领域常用的辅料，例如亲水的或亲脂性的胶凝剂、亲水的或亲脂性的添加剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、芳香剂、填料、遮蔽剂、气味吸收剂和染料。这些各种辅料的用量是化妆品领域的常用量，和，例如，范围是从组合物总重量的大约0.01％到10％。依赖于它们的自然特性，这些辅料可以被被引入油相、引入水相和/或引入脂质小球中。

作为可以被用于本发明的油或蜡，可提及到矿物油(液体石蜡)、植物油(牛油树脂的液体部份、向日葵油)、动物油(全氢化角鲨烯)、合成油(普赛林)、硅油或蜡(环甲硅油)和氟代油(全氟聚醚)、蜂蜡、巴西棕榈蜡或石蜡。脂肪醇和脂肪酸(硬脂酸)也可以被添加到这些油中。作为可以用于本发明的乳化剂，提及到的乳化剂可以是，例如，硬脂酸甘油酯、聚山梨酸酯60和由Gattefosse公司以

出售的PEG-6/PEG-32/硬脂酸乙二醇酯的混合物。

作为可用于本发明的溶剂，提及到低级醇，特别是乙醇和异丙醇、和丙二醇。

作为可用于本发明的亲水胶凝剂，提及到羧基乙烯聚合物

丙烯酸共聚物例如丙烯酸酯/丙烯酸烷基酯共聚物、聚丙烯酰胺、多糖例如羟丙纤维素、天然的胶质和粘土，和作为亲脂性的胶凝剂，提及到改良粘土例如有机皂土、金属脂肪酸盐例如硬脂酸铝、疏水性二氧化硅、乙基纤维素和聚乙烯。

能够引起皮肤刺激的化妆品或药学成分

特别的，本发明的非治疗用途是特别用于预防和/或降低化妆品或皮肤学组合物的刺激反应，所述化妆品或皮肤学组合物包含一个或多个能引起皮肤刺激的化合物。

根据本发明的组合物包括至少一种能引起皮肤刺激的化妆品或药学化合物。

在这些化合物中，可特别提及的是化妆品化合物或活性剂、皮肤用化合物或活性剂、表面活性剂，特别是离子表面活性剂、防腐剂、清洁剂、芳香剂，和特别是芳香醇溶液、溶剂和推进剂、和它们的混合物。

更特别的，作为皮肤学或化妆品活性剂，可提及某些也可以作为剥落剂的脱落剂。

在这些特别用于剥落的药剂中，可提及矿物质来源的、天然的或合成来源的研磨的/片状脱落微粒。更特别的可提及浮石微粒、二氧化硅微粒、聚乙烯小球、尼龙小球和果仁粉末。

在这些脱落剂中，下列可能引起皮肤刺激：饱和的一元羧酸(乙酸)和不饱和的一元羧酸、饱和的和不饱和的二元羧酸、饱和的和不饱和的三元羧酸；一元羧酸的α-羟酸和β-羟酸；二元羧酸的α-羟酸和β-羟酸；三元羧酸的α-羟酸和β-羟酸，酮酸，多元羧酸、多羟基一元羧酸、多羟基二元羧酸和多羟基三羧酸的α-酮酸或β-酮酸。

在α-羟酸或其酯中，特别提及的有：羟基乙酸、二元酸，例如十八碳烯二酸或由Uniqema公司出售的Arlatone dioc DCA、柠檬酸、乳酸、酒石酸、马来酸或杏仁酸、和它们的酯，例如二烷基(C₁₂/C₁₃)酒石酸酯或Cosmacol ETI、和支链C_12-13三乙醇柠檬酸酯或由Sasol公司出售的Cosmacol ECI。

在β-羟酸中，可提及：水杨酸和其衍生物(包括5--正辛酰基水杨酸)。

在α-酮酸中，可提及抗坏血酸和其衍生物。

在其他脱落剂中，可提及：丙酮酸、葡糖酸、葡糖醛酸、草酸、丙二酸、丁二酸、乙酸、龙胆酸、肉桂酸、壬二酸；苯酚；间苯二酚、尿素和其衍生物，羟乙基尿素或源自天然淀粉的

寡海藻糖；茉莉酸和其衍生物；抗坏血酸和其衍生物、三氯乙酸；槐和白藜芦醇的提取物。

在脱落剂中，能作用于涉及脱落或角化粒退化的酶的那些也可能能够引起皮肤刺激。

在这些中，特别可提及无机盐螯合剂例如EDTA；N-酰基-N，N′，N′-乙烯二胺三乙酸；氨基磺酸化合物，且特别是(N-2-羟乙基-哌嗪-N-2-乙烷)磺酸(HEPES)；2-氧噻唑烷-4-羧酸(丙环司坦)的衍生物；甘氨酸类型的α-氨基酸衍生物(如EP 0 852 949所述的，以及由BASF以商品名

出售的甲基甘氨酸双醋酸钠)；蜂密；和糖衍生物例如O-辛酰基-6-D-麦芽糖、O-亚油基-6-D-葡萄糖和N-乙酰葡糖胺。

类视黄醇也是能引起皮肤刺激的化合物。其可被提及的实例包括视黄醇和其酯、视黄醛、视黄酸和其衍生物例如在文献FR-A-2 570 377，EP-A-199 636，EP-A-325 540和EP-A-402 072所述的，和阿达帕林。

盐和衍生物，例如顺式或反式，上述化合物的外消旋混合物和右旋的或左旋的形式也被认为是能引起皮肤刺激的化合物。

下面也提及了能引起皮肤刺激的其他皮肤学的或化妆品活性剂：

—尿素和其衍生物，例如羟乙基脲或来自于联合淀粉的

—某些维生素例如维生素D和其衍生物例如维生素D3或维生素D2、钙三醇、卡泊三醇、他卡西醇、24，25-二羟基维生素D3、1-羟基维生素D2和1，24-二羟基维生素D2；维生素B9和其衍生物，

—过氧化物例如过氧化苯甲酰或双氧水，

—用于抗脱发的药剂，例如米诺地尔和其衍生物例如aminexil，

—毛发染料和毛发着色剂、例如氨基苯酚和其衍生物例如对间苯二胺(p-PDA)、N-苯基p-PDA、2，5-甲苯二胺硫酸盐、间—间苯二胺(m-PDA)、3，4-甲苯二胺和邻—间苯二胺(o-PDA)，

—防汗剂，例如铝盐例如铝羟基氯化物，

—除臭剂，

—脱毛和/或永久的烫发活性剂例如巯基乙酸酯或氨水，

—巯基乙酸酯和其盐，

—苯氧乙醇，

—1，2-戊二醇，

—芳香醇溶液(芳香剂、eaux de toilette、须后水或除臭剂)，

—蒽林(蒽三酚)，

—结合蒽醌(例如，文献EP-A-319028中描述的)，

—锂盐，

—脱色剂(例如：氢醌、高浓度维生素C、曲酸)，

—某些具有热效应的减肥活性剂，

—烟酸盐和其衍生物，

—辣椒素，

—抗虱活性剂(除虫菊酯)，

—抗增殖剂例如5-氟尿嘧啶或氨甲蝶呤，

—抗病毒剂，

—抗寄生虫药，

—抗真菌剂，

—止痒剂，

—抗皮脂溢剂，

—色素原药剂例如补骨脂素和methylangeciline，和

—它们的混合物。

作为防腐剂，可提及苯氧乙醇、洗必泰和洁尔灭。

作为表面活性剂，可提及阴离子的、阳离子的和两性表面活性剂，更特别是阴离子表面活性剂例如烷基硫酸盐和烷基醚硫酸盐，例如月桂基硫酸盐和月桂基醚硫酸盐，和特别的它们的钠盐。

根据本发明优选的实施方案，能够引起皮肤刺激的化合物选自类视黄醇、α-羟酸、β-羟酸、饱和的和不饱和的二元羧酸例如十八烯二酸或由Uniqema公司出售的Arlatone DIOC DCA，阴离子的、阳离子的或两性表面活性剂，5-正辛酰基水杨酸、防汗活性剂例如铝盐、(N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷)磺酸(HEPES)和肉桂酸。

能引起皮肤刺激的化合物可以在根据本发明的组合物中以足够引起皮肤刺激反应的数量存在。举例来说，相对于组合物的总重量，按重量计其含量可以在从0.0001％到70％，优选按重量计从0.01％到50％、和更好是按重量计从0.1％到30％。

在根据本发明的皮肤化妆品组合物中，调理培养基提取物可以联合类视黄醇或皮质甾类、或与自由基清除剂、α-羟酸或α-酮酸或它们的衍生物、或离子通道阻滞剂相结合。

根据本发明的皮肤化妆品组合物还可以包含惰性的或乃至药效或美容活性的添加剂或这些添加剂的组合，且特别是：润湿剂、脱色剂例如氢醌、壬二酸、咖啡酸或曲酸；软化剂；润湿剂例如甘油、PEG-400或尿素；抗衰老剂、抗皮脂溢剂或抗痤疮剂，例如S-羧甲基半胱氨酸、S-苯甲基巯基乙胺、它们的盐和它们的衍生物，或苯甲酰过氧化物；抗生素例如红霉素和其酯、新霉素、氯洁霉素和其酯、四环素；抗真菌剂例如酮康唑或4，5-聚亚甲基-3-异噻唑；促进毛发再生的药剂，例如米诺地尔(2，4-二氨基-6-哌啶基嘧啶-3-氧化物)和其衍生物、二氮嗪(7-氯-3-甲基-1，2，4-苯丙噻二嗪1，1-二氧化物)和苯妥英(5，4-二苯基咪唑啉-2，4-二酮)；非甾体类抗炎剂、类胡萝卜素，和特别的β-胡萝卜素；牛皮癣治疗剂例如蒽林和其衍生物，和，最后的二十碳-5，8，11，14-四烯酸和二十碳-5，8，11-trynoic酸、其酯和酰胺。

另外的活性剂

根据本发明使用的调理培养基或其提取物，还可以与按重量计至少0.00001％到95％的抗炎剂、其他镇静剂或它们的混合物结合。

作为“抗炎剂”的实施例，可提及：

—炎性细胞因子的拮抗剂；

—甾体抗炎剂(氢化可的松、倍他米松、地塞米松等等)；

—非甾体类抗炎剂例如阿司匹林；

和它们的混合物。

优选的，抗炎剂在根据本发明的组合物中以按重量计相对于组合物总重量的大约在0.00001％和10％之间的浓度存在。更优选的，组合物中的抗炎化合物可以在按重量计相对于组合物总重量的0.0005％和2％之间。

特别的，其他镇静剂可以有益的选自尿囊素，β-甘草次酸，包含相同物质的提取物，例如，甘草Glycyrrhiza glabra(甘草)的提取物，和包含相同物质的复合物，例如尿囊素/甘草次酸的复合物；冻干或非冻干的浮游生物，其提取物和其复合物；花和植物的水和提取物：甘菊水、酸柚水、玫瑰水、桦提取物；没药醇；精油，例如芫荽油；藻类，特别是昆布类型的(例如红藻或褐藻)，例如褐藻Padina pavonica的提取物，例如Alban Muller公司出售的HPS 3 PadinaPavonica；醋己氨酸和凝血酸(4-反式-氨基甲基环己烷羧酸)；熊果酸和包含它的提取物，例如迷迭香叶提取物；包含海藻糖的多糖，例如由Solabia公司出售的Fucogel 1000；电解质，且特别是水的混合物例如“死海沐浴盐(Dead Sea bathsalts)”；氨基酸，例如来自Seppic的Sepicalm S和VG，和二价镁盐例如葡萄糖酸镁。

根据本发明的组合物，特别是化妆品或皮肤学组合物，特别的可以通过包括第一阶段的方法制备，在所述的第一阶段中制备调理培养基，可选择地制备所述调理培养基的提取物。

这种方法至少包括下述步骤：

a)在第一营养培养基中的载体上培养来源于肠道上皮的细胞一段时间，培养的时间足以获得它们的分化；

b)在覆盖有白细胞的腔室中制备第二细胞培养基；

c)回收步骤a)结束时获得的在载体(特别是多孔载体)上的分化细胞培养物，并转移至步骤b)结束时获得的第二培养基；

d)把在第二培养基中来源于肠道上皮的所述的分化细胞的培养物与至少包括益生菌的微生物培养物相接触足够的时间，以使细胞之间产生交互作用，所述益生菌可以是，例如，乳杆菌属种类的(Lactobacillus species)；

e)除去细胞培养物并回收第二细胞培养基，去除白细胞，以获得调理培养基；

f)将调理培养基，或其提取物，合并到化妆品或皮肤学组合物中。

优选的，步骤a)中的载体是多孔载体。术语“多孔载体”是用来特别意指骨架上包括小孔的插入单元。

例如，孔径大小可以是从0.001到10μm，优选大于或等于0.3μm。作为非限定性的例子，因此适用于本发明的多孔插入单元的骨架可以包含选择性地包括氨基多糖和/或成纤维细胞的多孔的胶原基质，透明质酸和/或胶原和/或粘连蛋白和/或纤维蛋白凝胶或薄膜、半渗透性的硝化纤维、尼龙、特氟隆、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)薄膜、半渗透性的

无机膜、醋酸纤维薄膜、

半透膜、半渗透性的聚酯薄膜和聚羟基乙酸薄膜。

在步骤a)中的接触时间可以由本领域技术人员调整，但通常在几小时和几天之间，特别是在1天和35天之间，例如从18到22天，优选大约21天。细胞初始被以单层的形式放置，因而在步骤a)结束时，得到一个具有若干层分化细胞的三维体系。有益的，培养基将被有规律地更新，例如每2天，以使来源于肠道上皮的细胞，例如Caco2细胞，获得最佳的分化。

在步骤b)中，白细胞形成了细胞的毯状物；即腔室的表面实质上均匀的覆盖了白细胞；后者可以是单层或多层的形式。

特别的，这些白细胞是收集自至少经过一个分离步骤(特别是离心分离)然后至少部分的去除单核细胞之后的血液样品。随后它们被悬浮在与它们的生存能力相适应的营养培养基中，特别是RPMI培养基。

通常，培养基可以由本领域技术人员根据他们的常识选择，特别是从上述培养基中选择。

举例来说，适合用于本发明的腔室，可提及培养平板的孔，例如通常用于细胞培养的6-、12-、24-、48-孔或96-孔细胞培养板。

有益的，在步骤c)中的转移之前，分化细胞培养物将要使用适合于白细胞生存能力的培养基洗。分化细胞和益生菌之间的接触，在白细胞参与的情况下，将要进行允许建立交互作用的时间，即在不同细胞类型之间的化学或生物学的交换。

对于本发明，措辞“细胞的化学交换”是用来表示由分子代表的所有信号，所述分子从细胞中释放并能够影响远处的另一个细胞的活性，所述的另一个细胞可以属于或不属于相同的细胞类型。非限定性的，所述分子可以，例如，是肽、蛋白质、脂质、糖、甾类激素或儿茶酚胺。其可以通过分泌的形式释放。

应该理解，这种交互作用可以在没有直接物理性接触的不同细胞类型之间发生；特别的，通过安排第一、来源于肠道上皮的细胞和，第二、可以是或不是放置在单独腔室中的白细胞的细胞毯状物，依靠将它们培养在其中的培养基开始彼此交换，没有肠道细胞培养物的细胞能够与其他细胞毯状物的细胞直接接触，例如在细胞体之间或通过细胞延伸的方法接触。

有益的，益生菌微生物被在从顶端添加到肠道细胞培养物中。

适合建立这种交互作用的时段可以是几个小时到几天，通常至少6小时，优选至少10，特别的大于或等于16小时，但可以无限扩展。益生菌被，例如，与肠道细胞在包括白细胞的腔室中接触6到36小时。

随后，从所有细胞中分离回收出培养基，例如，在基底侧水平采集获得：这种培养基已经受到两种细胞类型和它们的相互关系的影响。

在作为成分被引入组合物，特别是根据本发明的化妆品或药学或皮肤化妆品组合物之前，其随后可以经受本领域技术人员本身公知的浓缩、提取和/或分馏步骤。

本发明将在下述的实施例中更详细的说明。

实施例1：制备调理培养基

接近于人肠道上皮细胞的细胞，Caco2(在通道60和65之间)以2.5×10⁵细胞/ml的浓度接种在25mm培养插入单元中(具有0.4μm的核孔，Becton Dickinson，Basle，Switzerland)。这种插入单元被放置在培养皿(Nunc)中，并在37℃/10％CO₂的DMEM(包含谷氨酰胺和高浓度葡萄糖(Amimed，Allschwill，Switzerland))中培养18到22天，所述DMEM补充了非必需氨基酸(Gibco，BRL)、10mg/ml庆大霉素(GIBCO BRL)和0.1％的青霉素/链霉素(10000IU/ml和10000μg/ml)(GIBCO)。每2天更换一次培养基直到细胞完全分化(21天)。当Caco2细胞融合成一个单层时，使用多孔(multicell)-ERS电极(伏特计/欧姆计)不断的测量经上皮的电阻大小。

此外，通过淋巴细胞的离心，从无关的正常供血者的周围血液中分离来自于正常志愿者的血白细胞。细胞悬液(10⁷细胞/ml)被放置在陪替氏培养皿中，在37℃培养1小时30分让单核细胞粘附。因此，包含在非粘附细胞群中的白细胞，主要是T淋巴细胞，用它们的在有绵羊红细胞存在的情况下形成玫瑰花形的性质被纯化。随后在存在NH₄Cl(8.7mg/l)的情况下通过渗透性冲击去除绵羊红细胞。最终，白细胞悬液的存活力大于95％。

随后这些白细胞被稀释在包含20％去补体人AB血清(在56℃去补体30分钟，Sigma，St Louis，Missouri，USA)的RPMI 1640中。

随后可以制备Caco2/白细胞共培养模型。为此，Caco2细胞培养插入单元在RPMI 1640培养基中洗两次，并转移到一个包含RPMI培养基的6-孔培养平板中，其中孔已经提前涂有毯状物的新近纯化的白细胞(2×10⁶细胞/ml)。因此，白细胞在基底层和Caco2细胞在顶端层。

根据如下所述的条件对具有益生菌的Caco2/白细胞(外周血白细胞)共培养物进行刺激：

如此，1×10⁷cfu/ml的益生菌被从顶端加入。单独的培养基作为阴性对照。在共培养物刺激6到36小时(37℃，10％CO₂)后，从基底侧收集调理培养基。

Lactobacillus paracasei，特别是在CNCM以编号No.CNCM I-2116保藏的菌株，被特别用作益生菌。

实施例2：

肠道细胞系Caco2以2×10⁵细胞/孔的比率在10.5mm的插入单元(BectonDickinson)上培养。随后这些插入单元被放置在12-孔板(Nunc)中培养。随后细胞被在37℃/10％CO₂的DMEM中培养21天，所述DMEM补充有10％FCS和0.1％青霉素/链霉素(10000IU/ml，Gibco BRL)。

通过离心穿过Ficoll-Hypaque 1077柱(Pharmacia)从血袋白细胞层纯化得到人周围血液单核细胞(白细胞)，随后被悬浮在补充有人AB血清(Gibco BRL)的完整的RPMI培养基中。随后白细胞(2×10⁶细胞/ml)被添加到“通过-孔”培养物的基底层中，此时后者显示出Caco2细胞融合层，其已经提前使用它们的培养基洗过。

如此建立的共培养物通过在单层上皮细胞(Caco2)的顶端表面添加1×10⁷cfu/ml的益生菌来刺激。随后系统在37℃/5％CO₂培养16小时。在培养4小时之后向培养基中添加150μg/ml庆大霉素。

在培养结束时(16h)，在基底层中的培养基被移出进行试验。

下表说明由使用1×10⁷cfu/ml副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)和长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)刺激16h获得的调理培养基的细胞因子分布。

IL10pg/ml IFNγpg/ml

B.longum 170 110

L.paracasei 80 40

B.longum+

L.paracasei 110 40

这些结果显示益生菌优先地诱导常规细胞因子IL-10的产生而不是前炎症细胞因子IFN-γ。

实施例3：在生存状态下人皮肤模型中抑制炎症的评价

根据实施例1的方案，使用1×10⁷cfu/ml的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)制备得到调理培养基。

使用维持在生存状态的用神经介质(P物质、SP)刺激的人皮肤模型。这种神经介质实际上一个负责炎性反应的因子。伴随SP的血管效应(浮肿、血管舒张、在内皮细胞壁上ELAM-1的表达)，在测试的条件下，SP还诱导释放前炎症介质(1L1α，IL6，TNFα)的生化反应以及肥大细胞脱颗粒(Lembeck F.，1983；Matsuda H.等，1989；Weidner C.等，2000)。

评价在组织学(评价浮肿、改变毛细血管直径以及脱颗粒的肥大细胞的数目)和生物化学范围内(分析TNFα)进行。

来自不同供体者的皮肤片段被放置在插入单元中，所述插入单元自己被放置在培养孔上悬浮液中。培养基(Dulbecco的最小基本培养基，DMEM)(抗生素，FCS)被添加到孔的底部，在两个室之间经由多孔膜(0.45μm)缓慢扩散发生转移。在开始方案之前必须再平衡五个小时。

在5小时的再平衡之后，用L.paracasei(或不用)刺激的调理培养基以浓度30％被添加到DMEM培养基作为预处理。随后皮肤片段在培养箱中，在潮湿空气、37℃和存在5％CO₂的调理下保持器官培养24小时。

在第一天，通过向培养基中添加10μM的P物质来制备实验炎症模型。对于所有的情况，更新营养培养基和进一步培养24小时。

因此，在下列的8种情况之间进行比较研究：

SP刺激模型与对照皮肤比较：

—具有DMEM培养基的对照皮肤(基本情况：皮肤非刺激，非处理)，

—在DMEM培养基中使用5μM的P物质刺激的皮肤，

绝对对照(情况A)：

—在30％营养培养基(RPMI)的DMEM培养基中培养的皮肤，

—使用P物质刺激的和在30％营养培养基(RPMI)的DMEM培养基中培养的皮肤，

阴性对照(情况B)：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、未使用乳酸菌(lactic ferments)刺激的30％营养培养基(RPMI)培养的皮肤，

—使用P物质刺激和使用没有副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)刺激的调理培养基培养的皮肤，

阳性对照(情况C)：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、使用副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)刺激的30％营养培养基(RPMI)培养的皮肤，

—使用P物质刺激和使用副干酪乳杆菌(L.paracasei刺激)的调理培养基培养的皮肤。

1-浮肿和毛细血管直径改变的组织学评价

皮肤片段被固定在布安氏液中，并石蜡包埋。在使用hemalun-eosin染色之后，在皮肤层评价2个指标：毛细血管口径和浮肿。

结果如下：

a)扩张毛细血管的整体百分率的评价

SP刺激模型与对照皮肤比较：

应用SP诱导的血管舒张与对照皮肤比较是统计学上是有显著意义的：84.5％对58.3％(p＜0.05)。

绝对对照(情况A)：

如实验模型，在应用P物质之后观察到了统计上有显著意义的毛细血管扩张：78.3％对61.5％(p＜0.05)。

阴性对照(情况B)：

结果类似于情况A获得的结果，在应用P物质之后观察到统计上有显著意义的毛细血管扩张，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：82.2％对56.7％(p＜0.05)。

阳性对照(情况C)：

在情况C和C+SP之间扩张毛细血管的百分率没有区别(60.9％对54.9％)，证明使用副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况C+SP和其他情况之间存在统计上显著性的差异确认了这个结果：对照+SP，A+SP和B+SP(p＜0.05)。

b)测量毛细血管的平均表面积

有关测量毛细血管平均表面积的结果类似于分析扩张毛细血管的整体百分率获得的结果。

SP刺激模型与对照皮肤比较：

应用SP诱导的血管舒张与对照组皮肤比较是统计学上显著的：164.5μm²对69μm²(p＜0.05)。

绝对对照(情况A)：

如实验模型，我们观察到在应用P物质之后出现了统计上有显著意义的毛细血管扩张：127.8μm²对57μm²(p＜0.05)。

阴性对照(情况B)：

结果类似于情况A获得的结果，我们观察到在应用P物质之后出现了统计上有显著意义的毛细血管扩张，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：154μm²对67μm²(p＜0.05)。

阳性对照(情况C)：

与情况C相比，情况C+SP的扩张的毛细血管的表面积呈显著的下降(59.2μm²对87μm²)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)刺激的调理培养基有抗炎的效果(p＜0.05)。在情况C+SP和其他情况之间存在统计上显著性的差异确证了这个结果：对照+SP、A+SP和B+SP(p＜0.05)。

皮肤浮肿的评价

SP刺激模型与对照皮肤比较：

应用SP诱导的浮肿与对照皮肤比较是统计学上有显著意义的：计分1.8对0.7(p＜0.05)。

绝对对照(情况A)：

如实验模型，在应用P物质之后观察到了统计上有显著性差异的浮肿：计分1.9对1.3(p＜0.05)。

阴性对照(情况B)：

结果类似于情况A获得的结果，在应用P物质之后记录到浮肿，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：计分1.9对0.8(p＜0.05)。

阳性对照(情况C)：

与情况C相比，情况C+SP在浮肿方面没有增加(0.9对1)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei.)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况C+SP和其他情况之间存在统计上显著性的差异确认了这个结果：对照+SP、A+SP和B+SP(p＜0.05)。

2-肥大细胞脱颗粒的组织学评价

通过使用甲苯胺蓝染色，存在于真皮的肥大细胞显示蓝紫色。组织学上，肥大细胞显示出更多或更少的强蓝紫色和颗粒对应于在它们的细胞质中存在更多或更少的物质，所述物质是嗜碱的且变色的颗粒特别包含组胺。

在保持在生存状态的皮肤SP刺激模型中，在高度颗粒化的肥大细胞(计分3)的百分率中观察到统计上显著性的下降：32.1％对根据对照皮肤的53％，并观察到计分1的细胞百分率的增加：26.5％对9.5％。这样实际上获得了P物质诱导的脱颗粒。

绝对对照(情况A)：

如实验模型，观察到具有计分3的肥大细胞百分率的下降：14.8％对41.7％，和计分1的增加：36.9％对12.2％(p＜0.05)。

阴性对照(情况B)：

结果类似于情况A获得的结果，计分3的肥大细胞的百分率下降：17.5％对38.5％，和计分1的细胞百分率增加：33.3％对20.4％(p＜0.05)。这个结果可以得出结论是未刺激的调理培养基不能对抗P物质诱导的脱颗粒。

阳性对照(情况C)：

在情况C和情况C+SP之间的计分3的肥大细胞百分率上没有获得显著性的差异(计分46.9％对37.2％)。因此，缺乏差异证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)刺激的调理培养基对于P物质诱导的脱颗粒有适度的保护效果。这个结果部分是因为与其他情况比较计分1的肥大细胞百分率增加但只是较低水平的增加：对照+SP、A+SP和B+SP(p＜0.05)。然而，因为增加很少，在情况C+SP和其他情况之间存在统计上显著的差异：对照+SP、A+SP和B+SP(p＜0.05)。

3-前炎症细胞因子分析

研究了细胞因子分泌的调节例如TNF-α。

这种细胞因子通过免疫测定方法使用分光光度法读取浓度来分析(pg/ml)(Chemicon International Inc.分析试剂盒)。因为皮肤片段具有相同的表面积(每个片段重量证实)，使用培养物上清液来进行分析。

TNF分析的结果如下：

相应于绝对对照的对照皮肤和情况A，与对照皮肤相比SP的应用诱导了TNF数量的统计上显著的的增加：分别，计分31.5对10.7和计分28.6对8.32pg/ml(p＜0.05)。

情况C+SP统计上地不同于调理对照皮肤+SP(p＝0.017)，提示副干酪乳杆菌(L.paracasei)调理的培养基减少了TNF-α的产生(量10.9对16.3pg/ml)。

结论

在维持在生存状态的这个人皮肤模型中，使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)(C)刺激的调理培养基的抗炎效果被证实，与情况A+SP(RPMI培养基)和B+SP(未刺激调理培养基)相比，由P物质诱导的血管舒张、浮肿、肥大细胞脱颗粒和TNT的释放有客观的和统计学上显著性的下降。

实施例4：在生存状态下的人皮肤模型中抑制炎症的评价

根据实施例1的方案，使用1×10⁷cfu/ml的副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)或长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)制备得到调理培养基。

使用维持在生存状态的用神经介质(P物质、SP)刺激的人皮肤模型。这种神经介质实际上是对炎性反应和血管效应(浮肿、血管舒张、在内皮细胞壁上ELAM-1的表达)负责的因子。评价在组织学范围内进行(浮肿、毛细血管直径的改变的评价)。

来自不同供体者的皮肤片段被放置在插入单元中，所述插入单元自己被放置在培养孔上悬浮液中。培养基(Dulbecco最小的基本培养基)(DMEM)(抗生素，FCS)被添加到孔的底部，经由多孔膜(0.45μm)在两个室之间缓慢扩散来产生通道。在开始方案之前必须再平衡五个小时。

在5小时的再平衡之后，用副干酪乳杆菌(L.paracasei)和/或长双歧杆菌(B.longum)(或不用)刺激的调理培养基以30％浓度被添加到DMEM培养基作为预处理。随后皮肤片段在培养箱中，在潮湿空气、37℃和存在5％CO₂的条件下保持器官培养24小时。

在第一天，通过添加10μM P物质到培养基中制备试验炎症模型。对于所有的情况，更新营养培养基和进一步培养24小时。

因此，在下列的8种情况之间进行比较研究：

SP刺激膜型与对照皮肤比较：

—在DMEM培养基中使用5μM P物质刺激的皮肤，

绝对对照(情况1)：

—在30％RPMI营养培养基的DMEM培养基中培养的皮肤，

—使用P物质刺激的在30％营养培养基(RPMI)的DMEM培养基中培养的皮肤，

阴性对照(情况2)：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、未使用乳酸菌(lactic ferments)刺激的30％营养培养基(RPMI)培养的皮肤。

—使用P物质刺激和使用没有益生菌刺激的调理培养基培养的皮肤，

情况3：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、使用副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)+长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)刺激的30％营养培养基培养的皮肤，

—使用P物质刺激和使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)+长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基培养的皮肤。

情况4：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、使用副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)刺激的30％营养培养基培养的皮肤，

—使用P物质刺激和使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)刺激的调理培养基培养的皮肤。

情况5：

—用来源于Caco2/PBMC共培养物的、使用长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)刺激的30％营养培养基培养的皮肤，

—使用P物质刺激和使用长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基培养的皮肤。

浮肿和毛细血管直径改变的组织学评价

皮肤片段被固定在布安氏液中，并用石蜡包埋。在使用hemalun-eosin染色之后，在皮肤层评价2个指标：毛细血管口径和浮肿。

结果如下：

a)扩张毛细血管的整体百分率的评价

绝对对照(情况1)：

如实验模型，在应用P物质之后观察到了统计学上有显著意义的毛细血管扩张：86.6％对63.8％(p＜0.05)。

阴性对照(情况2)：

结果类似于情况1获得的结果，在应用P物质之后观察到统计学上有显著意义的毛细血管扩张，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：86.1％对75.3％(p＜0.05)。

情况3：

在情况3和3+SP之间扩张毛细血管的百分率没有改变(72.4％对72.4％)，证明使用副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)+长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基具有抗炎的效果。在情况3+SP和其他情况之间存在统计学上显著性差异确认了这个结果：对照+SP、1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况4：

在情况4和4+SP之间扩张毛细血管的百分率没有改变(73.2％对71.6％)，证明使用副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况4+SP和其他情况之间存在统计学上显著性差异确认了这个结果：对照+SP，1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况5：

在情况5和5+SP之间扩张毛细血管的百分率没有改变(75.6％对66.9％)，证明使用长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况5+SP和其他情况之间存在统计学上显著性差异确认了这个结果：对照+SP、1+SP和2+SP(p＜0.05)。

b)测量毛细血管的平均表面积

绝对对照(情况1)：

如实验模型，在应用P物质之后观察的统计学上有显著意义的毛细血管扩张：172.6μm²对95.36μm²(p＜0.05)。

阴性对照(情况2)：

结果类似于情况1得到的结果，在应用P物质之后观察到统计学上有显著意义的毛细血管扩张，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：163.8μm²对110.3μm²(p＜0.05)。

情况3：

情况3+SP与情况3相比扩张毛细血管的表面积有显著的下降(121.9μm²对102μm²)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)+长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基有抗炎效果(p＜0.05)。在情况3+SP和其他情况之间存在统计学上显著性的差异确认了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况4：

情况3+SP与情况4相比扩张毛细血管的表面积显著的下降(112.3μm²对117.4μm²)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)刺激的调理培养基有抗炎效果(p＜0.05)。在情况4+SP和其他情况之间存在统计上显著的差异确证了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况5：

情况5+SP与情况5相比扩张毛细血管的表面积呈显著的下降(110.4μm²对105.7μm²)，证明使用长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基有抗炎效果(p＜0.05)。在情况5+SP和其他情况之间存在统计学上显著性的差异确认了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

皮肤浮肿的评价

绝对对照(情况1)：

如实验模型，在应用P物质之后观察到了统计上显著的浮肿：计分1.7对1.05(p＜0.05)。

阴性对照(情况2)：

结果类似于情况1获得的结果，在应用P物质之后记录到浮肿，证明未刺激的调理培养基缺乏抗炎的效果：计分1.4对1.3(p＜0.05)。

情况3：

与情况3相比，情况3+SP在浮肿方面没有增加(1.23对1.17)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)+长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况3+SP和其他情况之间存在统计学上的显著性差异确认了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况4：

情况4+SP与情况4相比在浮肿方面没有增加(1.37对1.38)，证明使用副干酪乳杆菌(L.paracasei)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况3+SP和其他情况之间存在统计学上显著性的差异确认了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

情况5：

情况5+SP与情况5相比在浮肿方面没有增加(1.4对1.06)，证明使用长双歧杆菌(B.longum)刺激的调理培养基有抗炎的效果。在情况3+SP和其他情况之间存在统计学上显著性的差异确认了这个结果：1+SP和2+SP(p＜0.05)。

实施例5：组合物

用于使皮肤适应日晒的组合物

刺激的调理培养基^* 2.5％

防腐剂 1.35％

柠檬酸钠 0.035％

PEG-40 1.25％

季戊四醇四辛酸酯 4％

甘油 7％

去水山梨糖醇三硬脂酸酯 0.3％

杏核油 2％

鲸蜡醇 0.7％

丙二醇 2％

三乙醇胺 0.4％

环己硅氧烷 2％

卡波姆 0.75％

维生素E 1％

二氧化硅 2％

维生素C配糖体 0.1％

聚己酸内酯-β-胡萝卜素 5％

水适量至 100％

^*根据实施例1获得

包含遮光剂的组合物

刺激的调理培养基^** 3.5％

鲸蜡基硬脂基醇和氧乙烯化的鲸蜡基硬脂基醇的混合物(33EO)80/20 7.0％

单硬脂酸甘油酯和二硬脂酸甘油酯的混合物 2.0％

鲸蜡醇 1.5％

聚二甲硅氧烷 1.5％

液体凡士林 15.0％

丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷 3.0％

欧托奎雷(octocrylene) 7.0％

甘油 20.0％

去离子水适量至100％

^**根据实施例1获得，但具有副干酪乳杆菌(L.paracasei)和长双歧杆菌(B.longum)的混合物

乳膏

调理培养基提取物^* 1.5％

硬脂酸甘油酯和PEG100硬脂酸酯 5.0％

异十六烷 8.0％

牛油树脂 5.0％

甘油 3.0％

聚羧乙烯(carbopol)9810.2％ 0.2％

Lubragel 5.0％

苯氧乙醇 1.0％

柠檬酸 1.0％

二丁基羟基甲苯(BHT) 0.05％

水适量至100％

^*根据实施例1获得，并冻干

Claims

1.至少一种调理细胞培养基用于制备治疗炎症和/或免疫紊乱症状的组合物的用途，所述培养基能通过接触至少一种消化道细胞培养物和至少益生菌微生物来获得，其中所述消化道细胞是肠道上皮细胞，且所述至少一种益生菌微生物是副干酪乳杆菌或长双歧杆菌。

2.根据权利要求1的用途，其特征在于所述培养基可通过进一步接触外周血细胞获得。

3.根据权利要求2的用途，其特征在于外周血细胞是白细胞。

4.根据权利要求1或2的至少一种培养基的用途，其特征在于组合物用于治疗皮肤的刺激症状。

5.根据权利要求1或2的至少一种培养基的用途，其特征在于组合物用于治疗头皮的刺激症状。

6.根据权利要求1或2的至少一种培养基的用途，其特征在于组合物用于保护皮肤细胞免受紫外辐射引起的伤害。

7.根据权利要求1或2的用途，其特征在于组合物用于保护细胞对抗DNA的损害。

8.根据权利要求1或2的用途，其特征在于组合物是化妆品或药学组合物。

9.根据权利要求1或2的用途，其特征在于组合物是适合局部施用到体表的组合物。

10.根据权利要求1或2的用途，其特征在于组合物是适合局部施用到皮肤的组合物。

11.化妆品或皮肤学的组合物，其特征在于其包含如权利要求1至3中的一项所定义的至少一种调理细胞培养基和至少一种能够引起皮肤刺激的化妆用或药用化合物。