CN101229203A - 一种骆驼蓬子有效部位及去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其用途 - Google Patents
一种骆驼蓬子有效部位及去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其在镇痛或治疗消化系统疾病中的用途。它首先采用二氧化碳超临界萃取进行脱脂和碱性水冷浸进行去杂处理，然后采用酸性醇水溶液提取，最后经酸溶、碱沉、纯化、减压干燥而得，其主要成分为去氢骆驼蓬，经冰醋酸致小鼠扭体次数的影响试验和对吲哚美辛致小鼠胃溃疡的影响试验证明骆驼蓬子有效部位及去氢骆驼蓬碱单体具有一定的镇痛和抗溃疡作用，提示可作为活性成分在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其应用，具体的说是按所述方法可制得骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体，而且制得的骆驼蓬子的有效部位可与药学上可接受的载体或其他适宜的赋型剂相结合，按照常规方法可制成经口服给药的内用剂型和非口服给药的注射剂或其它剂型，而且制得的骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体具有镇痛作用和治疗消化系统疾病的作用，可以用于制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物。
背景技术
骆驼蓬子是蒺藜科骆驼蓬属植物Peganum harmala L.的干燥成熟种子，气微，味苦。骆驼蓬主要生于戈壁滩、盐碱化荒地，分布于亚洲、欧洲、北非等地，在我国主要分布于西北部新、蒙、陕、甘、宁等荒漠或半荒漠地区。骆驼蓬别名：臭蓬、臭草、臭古朵、臭牡丹等，为西北地区维吾尔族、哈萨克族、蒙古族等少数民族沿用已久的民族药材，维语药名“阿地热斯忙”，蒙语药名“阿尔格林伊德”，药用部位为种子和全草，主治咳嗽气喘、风湿痹痛、无名肿痛等症。
骆驼蓬植物种子中主要含有生物碱、黄酮、脂肪酸、蛋白质等成分。主要的活性成份为：骆驼蓬碱(Harmaline)、去氢骆驼蓬碱(Harmine)、去甲骆驼蓬碱(HarmatoL)和鸭嘴花碱(Vasicine)等统称为骆驼蓬总碱(Total a lkaloid harmala)。
目前已报道的骆驼蓬提取物制备及生物碱提取分离方法主要有以下几种：
①用40％-95％的乙醇水溶液进行萃取得到骆驼蓬子浸膏。
②以5％的醋酸浸提骆驼蓬子，用10％的氯化钠将醋酸盐转变为盐酸盐然后冷热反复处理得到骆驼蓬生物碱。
③用乙醇渗漉，回收乙醇，水液用乙醚脱脂，水沉用氨水调pH6.5加入硫酸铵，用焦炭过滤，加KI，再用含HI的焦炭处理，盐用10％的氨水处理得到骆驼蓬生物碱。
④用5％的盐酸浸提，酸液用阳离子树脂交换，用氨水碱化树脂，并用乙醚、氯仿或无水乙醇洗脱得到骆驼蓬生物碱。
⑤用95％的乙醇回流提取，浓缩至糖浆状，用稀盐酸转溶，氯仿脱脂后的酸液用氨水碱化，析出沉淀，得到骆驼蓬生物碱。
⑥用酸水与碱水交替煎煮，合并溶液干燥得到骆驼蓬生物碱。
⑦用乙醇提取，提取液用氯化汞处理使去氢骆驼蓬碱与骆驼蓬碱以复合物沉淀下来，然后用H2S处理得到骆驼蓬生物碱。
⑧用碱性醇浸润后回流提取，经碱化游离、回流分离、转溶精制、水沉过滤及喷雾干燥得到骆驼蓬生物碱。
药理研究显示该植物具有抗癌、抗肿瘤、镇痛、消炎、杀菌、驱虫和抑制单胺氧化酶等多种生物活性。目前多集中于抗肿瘤方面的研究和应用，而其他方面的作用特点受到忽略，作为特色资源未得到充分的开发利用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用。
具体说，本发明的目的之一在于提供一种骆驼蓬子的有效部位的制备方法及其在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用；
本发明的另一目的在于提供一种去氢骆驼蓬碱单体的制备方法及其在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：
本发明提供的骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体，其为由如下的方法得到：
1)、有效部位：将干燥成熟的骆驼蓬种子粉碎至10～20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力15～35Mpa、温度35～45℃、二氧化碳流量4～5L/h条件下萃取2～3小时，萃取后药渣加6～8倍量水，用浓氨水调pH9以上，冷浸提取1～2次，24～48h/次，过滤，弃取碱水液，药渣再用70～95％酸性乙醇水溶液(加盐酸调pH值至3～6)作为提取溶剂进行提取，所得提取物减压浓缩干燥后，加5～10倍量的1～2％盐酸浸泡8～24小时，过滤，滤液中加氨水调pH9以上，冷贮24小时，过滤，干燥得有效部位。
2)、去氢骆驼蓬碱单体：以1)所述步骤制得有效部位，取有效部位加5～10倍量经氨水碱化的95％乙醇(pH9～10)，回流15～30分钟，过滤，干燥，加盐酸酸化的95％乙醇(pH2～3)重结晶，晶体干燥后加水，用氨水调pH7，冷贮，析出晶体再用无水乙醇重结晶，即得去氢骆驼蓬碱单体。
所述步骤1)的酸性乙醇水溶液提取为加入6～8倍量的提取溶剂提取2～3次，提取方式为：在室温下浸渍提取24～48h/次；或为用20～70kHz的超声波提取20～30min/次；或在60～80℃加热提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
所述步骤1)的酸性乙醇水溶液提取优选60～80℃加热提取1～2次；或回流提取1～2h/次。
本发明所述的骆驼蓬子的有效部位主要成分为去氢骆驼蓬碱，骆驼蓬子有效部位或去氢骆驼蓬碱单体中去氢骆驼蓬碱的含量分别为骆驼蓬子有效部位20～40％，去氢骆驼蓬碱单体纯度在95％以上。
本发明提供一种所述的骆驼蓬子的有效部位和去氢骆驼蓬碱单体及其在药学上可接受的酸形成的加成盐在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用，所述酸如盐酸、磷酸、硫酸、醋酸、柠檬酸、马来酸、酒石酸。将骆驼蓬子的有效部位作为治疗镇痛药物与消化系统疾病的有效成分，使之与药学上可接受的载体或其他适宜的赋型剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用剂型和非口服给药的注射剂或其它剂型，可以临床应用于镇痛与消化系统疾病的治疗。
本发明提供的骆驼蓬子的有效部位和去氢骆驼蓬碱单体制备工艺有三个重要特点：
本发明第一个重要特点是：首先采用二氧化碳超临界萃取装置对样品进行脱脂处理，即避免了油酯成分对后处理工序的干扰，又可保证更有效的提取有效成分，比采用低极性有机溶剂进行脱脂更具优势。
本发明第二个重要特点是：脱脂处理后采用碱性水冷浸提取，过滤弃取碱水液，进一步除去了有效成分以外的水溶性杂质，使有效部位提取物的有效成分含量更高，且便于进一步纯化得到去氢骆驼蓬碱单体。
本发明第三个重要特点是：采用两步除杂后，直接采用酸性醇水溶液进行提取，有效成分在此条件下更易溶解浸出。
本发明提供的骆驼蓬子有效部位和去氢骆驼蓬碱单体的制备方法工艺操作简便，生产成本低，便于工业化生产。所得有效部位纯度高，纯化得到的去氢骆驼蓬碱单体收率高。相比同类工艺，不仅更易操作，去氢骆驼蓬碱单体收率也由0.5～0.6％提高到0.6～0.7％。
本发明通过对冰醋酸致小鼠扭体次数的影响试验和对吲哚美辛致小鼠胃溃疡的影响试验证明了骆驼蓬子有效部位和去氢骆驼蓬碱单体具有一定的镇痛和抗溃疡作用，提示了骆驼蓬子的有效部位及单体去氢骆驼蓬碱可作为活性成分在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用。
具体实施方法
实施例1、骆驼蓬子有效部位的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力35Mpa、温度40℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取3小时，萃取后药渣加8000毫升水，用浓氨水调pH＝9.5，冷浸提取2次，24h/次，过滤，弃去碱水液，药渣用7500毫升80％酸性乙醇水溶液(调pH值至4)回流提取三次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩至近干，加2200毫升的2％盐酸浸泡12小时，过滤，滤液中加浓氨水调pH＝9.5，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，即得骆驼蓬子有效部位65克，含量以去氢骆驼蓬碱计为35.2％。
实施例2、骆驼蓬子有效部位的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至10目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力15Mpa、温度35℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取3小时，萃取后药渣加8000毫升水，用浓氨水调pH＝9.5，冷浸提取48h，过滤，弃去碱水液，药渣用6000毫升90％酸性乙醇水溶液(调pH值至5)用50kHz的超声波提取三次，每次30min。合并提取液，减压浓缩至近干，加1600毫升的1％盐酸浸泡8小时，过滤，滤液中加氨水调pH＝10，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，即得骆驼蓬子有效部位71克，含量以去氢骆驼蓬碱计为31.2％。
实施例3、骆驼蓬子有效部位的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力25Mpa、温度40℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取2小时，萃取后药渣加6000毫升水，用浓氨水调pH＝10，冷浸提取48h，过滤，弃去碱水液，药渣用6500毫升70％酸性乙醇水溶液(调pH值至6)60～80℃加热提取2次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩至近干，加1200毫升的2％盐酸浸泡24小时，过滤，滤液中加氨水调pH＝10，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，即得骆驼蓬子有效部位60克，含量以去氢骆驼蓬碱计为32.3％。
实施例4、去氢骆驼蓬碱单体的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力30Mpa、温度45℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取3小时，萃取后药渣加8000毫升水，用浓氨水调pH＝10.5，冷浸提取2次，24h/次，过滤，弃去碱水液，药渣用7000毫升85％酸性乙醇水溶液(调pH值至5)回流提取三次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩成稠浸膏，加2000毫升的1％盐酸浸泡24小时，过滤，滤液中加氨水调pH＝9.5，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，加350毫升氨水碱化的95％乙醇(pH＝10.5)回流15分钟，过滤，干燥，加盐酸酸化的95％乙醇(pH＝2)重结晶，晶体干燥后加水，用氨水调pH＝7，冷贮，析出晶体再用无水乙醇重结晶，即得去氢骆驼蓬碱单体7.0克，含量以去氢骆驼蓬碱计为98.8％。
实施例5、去氢骆驼蓬碱单体的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至10目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力25Mpa、温度35℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取2小时，萃取后药渣加8000毫升水，用浓氨水调pH＝9.5，冷浸提取2次，24h/次，过滤，弃去碱水液，药渣用7500毫升75％酸性乙醇水溶液(调pH值至4)在室温下浸渍提取两次，每次48小时。合并提取液，减压浓缩成稠浸膏，加1800毫升的1％盐酸浸泡24小时，过滤，滤液中加氨水调pH＝10.5，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，加450毫升氨水碱化的95％乙醇(pH＝9.5)回流30分钟，过滤，干燥，加盐酸酸化的95％乙醇(pH＝2.5)重结晶，晶体干燥后加水，用氨水调pH＝7，冷贮，析出晶体再用无水乙醇重结晶，即得去氢骆驼蓬碱单体6.7克，含量以去氢骆驼蓬碱计为95.3％。
实施例6、去氢骆驼蓬碱单体的制备
取骆驼蓬(Peganum harmala L.)的种子1000克粉碎至20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力30Mpa、温度40℃、二氧化碳流量4.5L/h条件下萃取2小时，萃取后药渣加6000毫升水，用浓氨水调pH＝10，冷浸提取2次，24h/次，过滤，弃去碱水液，药渣用6500毫升80％酸性乙醇水溶液(调pH值至3)回流提取三次，每次2小时。合并提取液，减压浓缩成稠浸膏，加1200毫升的2％盐酸浸泡16小时，过滤，滤液中加氨水调pH＝10，冷贮24小时，过滤，滤渣干燥，加550毫升氨水碱化的95％乙醇(pH＝9.5)回流20分钟，过滤，干燥，加盐酸酸化的95％乙醇(pH＝3)重结晶，晶体干燥后加水，用氨水调pH＝7，冷贮，析出晶体再用无水乙醇重结晶，即得去氢骆驼蓬碱单体6.5克，含量以去氢骆驼蓬碱计为96.5％。
实施例7：骆驼蓬子有效部位及单体对冰醋酸致小鼠扭体次数的影响
取小鼠40只，雌雄兼用，体重18-22g，随机分为生理盐水组、阿斯匹林对照组和两个样品组，ig给药，每天一次，连续三天，于末次给药1h后，给小鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，记录10min内小鼠扭体次数，进行统计学分析，数据见表1：
表1 骆驼蓬子有效部位及单体对冰醋酸致小鼠扭体次数的影响
与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01
从表1可见，有效部位115.6mg/kg及盐酸去氢骆驼蓬59.2mg/kg均可显著减少冰醋酸致小鼠的扭体次数。
实施例8：骆驼蓬子有效部位及单体对吲哚美辛致小鼠胃溃疡的影响
取体重为18-22g左右的小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，两个样品组，雷尼替丁0.2g/kg和生理盐水组，ig给药，每天一次，连续5天，末次给药前禁食24h，末次给药后1h皮下注射吲哚美辛20mg/kg，7h后脱颈处死动物，结扎胃贲门及幽门，并沿胃壁注入10％福尔马林2ml/只，30min后剖开胃，在放大镜下计数小鼠胃内的溃疡数，结果见表2。
表2 骆驼蓬子有效部位及单体对吲哚美辛致小鼠胃溃疡的影响
与生理盐水组比较*P＜0.05，**P＜0.01
从表2可见，有效部位115.6mg/kg及盐酸去氢骆驼蓬59.2mg/kg可显著抑制吲哚美辛致小鼠胃溃疡的形成。
Claims (8)
1.一种骆驼蓬子的有效部位及去氢骆驼蓬碱单体制备方法，其特征在于按下列步骤进行：
1)、有效部位：将干燥成熟的骆驼蓬种子粉碎至10～20目，先用二氧化碳超临界萃取装置在压力15～35Mpa、温度35～45℃、二氧化碳流量4～5L/h条件下萃取2～3小时，萃取后药渣加6～8倍量水，用浓氨水调pH9以上，冷浸提取1～2次，24～48h/次，过滤，弃取碱水液，药渣再用70～95％酸性乙醇水溶液(加盐酸调pH值至3～6)作为提取溶剂进行提取，所得提取物减压浓缩干燥后，加5～10倍量的1～2％盐酸浸泡8～24小时，过滤，滤液中加氨水调pH9以上，冷贮24小时，过滤，干燥得有效部位。
2)、去氢骆驼蓬碱单体：以1)所述步骤制得有效部位，取有效部位加5～10倍量经氨水碱化的95％乙醇(pH9～10)，回流15～30分钟，过滤，干燥，加盐酸酸化的95％乙醇(pH2～3)重结晶，晶体干燥后加水，用氨水调pH7，冷贮，析出晶体再用无水乙醇重结晶，即得去氢骆驼蓬碱单体。
2.权利要求1所述的骆驼蓬子的有效部位，其特征在于所述步骤1)中用酸性乙醇水溶液提取时，以6～8倍量的提取溶剂提取2～3次，提取方式为：在室温下浸渍提取24～48h/次；或为用20～70kHz的超声波提取20～30min/次；或在60～80℃加热提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
3.权利要求1所述的骆驼蓬子的有效部位，其特征在于所述步骤1)的酸性乙醇水溶液提取为在60～80℃加热提取1～2h/次；或回流提取1～2h/次。
4.权利要求1所述的方法，其特征在于用该方法制备的骆驼蓬子有效部位中去氢骆驼蓬碱的含量为20～40％；该方法制备的去氢骆驼蓬碱单体纯度为95％以上。
5.权利要求1-3所述的方法制备的骆驼蓬子有效部位，可与药学上可接受的载体或其他适宜的赋型剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用剂型和非口服给药的注射剂或其它剂型。
6.权利要求1-3所述的方法制备的骆驼蓬子有效部位作为制备镇痛药物的用途。
7.权利要求1-3所述的方法制备的骆驼蓬子有效部位作为制备治疗消化系统疾病的药物的用途。
8.权利要求1所述的去氢骆驼蓬碱单体及其在药理学上可接受的酸形成加成盐在制备镇痛药物与治疗消化系统疾病药物中的应用。
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| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: XINJIANG HUASHENGYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY CO Free format text: FORMER OWNER: XINJIANG HUASHIDAN MEDICINE RESEARCH CO.,LTD. Effective date: 20081212 |
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| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080730 |