CN101227886B - 包含明胶的局部用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供局部用药物组合物或化妆品组合物，其包括药物活性剂或化妆品活性剂和胶凝剂，其特征在于所述胶凝剂包括鱼明胶和多糖。

Description

包含明胶的局部用组合物

技术领域

本发明涉及包含明胶的局部用组合物，例如施用于皮肤的药物组合物或化妆品组合物及其制备和用途。

背景技术

在将药物组合物或化妆品组合物配制成用于体表局部应用的情况下，该组合物除“活性”成分之外，通常还包含确保组合物具有适于贮存、应用和皮肤表面保持的性质的成分。就此而言，当前许多这样的组合物都包含哺乳动物明胶，例如作为胶凝剂。

明胶是胶原的衍生物，胶原是动物体内最富足的蛋白质。胶原是结缔组织的主要组分，胶原在结缔组织中以水不溶性的胶原纤维的形式存在。一般氨基酸序列是Gly-X-Y，其中X通常是脯氨酸，Y通常是羟脯氨酸。亚氨基酸脯氨酸和羟脯氨酸的含量因不同的物种而不同，与源自变温动物(例如鱼类)的胶原相比，源自恒温动物(例如哺乳动物)的胶原所具有的这些亚氨基酸的含量较高。

最常见的是，通过酸提取方法或碱提取方法，从源自牛或猪的骨和皮的胶原制备明胶。这两种提取方法分别得到A型明胶和B型明胶，二者具有不同的等电点。胶原分子是由三个α-链组成的右手三螺旋(right-handedtriple helix)。所述三螺旋即胶原的有序构型通过α-链中的脯氨酸和羟脯氨酸单元而稳定。术语“胶原”是指在三螺旋中发现的未改性分子(unmodifiedmolecules)。明胶是胶原分子末端丢失的截取胶原(extracted collagen)。明胶的胶凝被认为是对由无序氨基酸片段(无规卷曲)互联的三螺旋结构(有序构型)的区域进行再建的结果。这些凝胶是热致可逆的，并且胶凝温度(gellingtemperature)和融化温度(melting temperature)受到脯氨酸和羟脯氨酸的含量的影响。源自哺乳动物的包含大概24％的这些亚氨基酸的明胶分别具有大约20-25℃的胶凝温度和大约35-40℃的融化温度。冷水鱼类物种只包含16-18％，并且鱼明胶(fish gelatin)通常在低于8℃胶凝，在12-14℃融化。因此，基于未改性的鱼明胶的凝胶只在相应于冰箱中的温度(0-5℃)是机械稳定的。

明胶在药物、食物和化妆品，及在影像、胶水和复合材料中使用数十年。在过去的数十年中，特别是由于牛绵状脑病(Bovine SpongiformEncephalopathy，BSE)的爆发，对哺乳动物明胶的替代品的研究日益增加，牛绵状脑病对成年牛是致命的神经错乱，也可能以新变种克-雅二氏病(newvariant Creutzfeldt-Jacob disease，nvCJD)的形式感染人类。另外，哺乳动物明胶的使用受到宗教顾虑的限制，穆斯林信徒(Muslims(Halal/Haram))、犹太教信徒(Jews(Kosher))和印度教信徒(Hindus)都不接受源自哺乳动物的明胶。

发明内容

发明人现在已经发现，通过与多糖胶凝剂(polysaccharide gelling agent)一同配制，鱼明胶的胶凝性质可以改变，从而制备适于体表局部应用例如施用于皮肤的组合物，鱼明胶就其使用而言不受宗教顾虑的限制，并且没有患上nvCJB的风险。因而，例如这种一同配制可以制备胶凝特征等于或优于使用哺乳动物明胶的组合物的组合物。

因而，鉴于一个方面，本发明提供包括药物活性剂或化妆品活性剂和胶凝剂的局部用药物组合物或化妆品组合物，其特征在于所述胶凝剂包括鱼明胶和多糖。

本发明的组合物的形式典型地可以为凝胶、乳液、霜、洗剂、溶液、分散剂等，并且本发明的组合物典型地还可以包含传统的成分例如溶剂、着色剂、芳香剂、稳定剂、pH调节剂、粘度调节剂、皮肤渗透促进剂(例如DMSO)、抗氧化剂、填充剂等。例如在这些组合物用作贴剂(patch)以例如通过离子电渗(iontophoresis)例如进行经皮给药的情况下，这些组合物还可以包含例如以下成分：包封部分、支撑物等。

这些组合物优选地包含连续的水相，该水相的胶凝温度范围为10至30℃，更优选地为15至28℃，而融化温度范围为20至42℃，更优选地为24至40℃，尤其为28至37℃。

就本发明的药物组合物而言，药物活性剂可以是任何药物物质，该药物物质能够在施用部位或在经过皮肤吸收之后发挥期望的治疗或预防作用，例如抗生素作用、抗炎作用或止瘁作用。常规局部用组合物中局部施用的多种药物物质(即使不是大多数)(例如甾类、NSAIDs(例如布洛芬)、抗真菌剂(例如酮康唑)、锂化合物(例如用于治疗皮脂性皮炎(sebnorrhaicdermatitis)或传染性软疣(molluscum contagiosum))、抗痤疮化合物(例如壬二酸)、抗头屑剂(例如巯氧吡啶锌(zinc pyrithione))等)可以用于本发明的组合物中。就本发明的化妆品组合物而言，化妆品活性剂可以是任何物质，该物质能够在应用部位或在吸收到皮肤内之后发挥期望的美容作用，例如维生素、植物油、UV吸收剂、皮肤水合剂(skin hydraing agent)、清洁剂、着色剂、芳香剂等。再次，常规局部用组合物中局部施用的多种美容剂(即使不是大多数)可以用于本发明的组合物中。这些活性剂可以以类似或相当于当前所使用的浓度使用。

如在此所使用的那样，术语“多糖”是指糖聚合物，其碳水化合物骨架能够进行溶胶/凝胶转变。

在本发明组合物中的多糖胶凝剂可以源自多种来源，例如陆生或水生动物、植物、藻类等，并且这些胶凝剂可以是合成或天然存在的多糖或天然存在的多糖的衍生物。合适的水生多糖(marine polysaccharide)的实例包括角叉菜胶(carrageenan)、藻酸盐(alginate)、琼脂(agar)和壳聚糖(chitosan)。合适的源自植物的多糖的实例包括果胶(pectin)。合适的源自微生物的多糖的实例包括胶凝糖(gellan)和小核菌葡聚糖(scleroglucan)。当使用水生多糖时，特别是角叉菜胶和藻酸盐时，尤其是角叉菜胶时，使用带电的多糖，例如以静电方式带电的多糖和/或硫酸化的多糖是优选的。以下特别就角叉菜胶对本发明做进一步说明。

包括τ-和κ-角叉菜胶的角叉菜胶家族是一类从红藻制备的线性硫酸化多糖。在κ-角叉菜胶中重复的二糖单元是β-D-半乳糖-4-硫酸和3，6-去水-α-D-半乳糖，而在ι-角叉菜胶中重复的二糖单元是β-D-半乳糖-4-硫酸和3，6-去水-α-D-半乳糖-2-硫酸。κ-和τ-角叉菜胶均在食物制品中使用。角叉菜胶用作稳定剂、乳化剂、胶凝剂和脂肪置换剂(fat replacer)。

在水环境中，这两种角叉菜胶都形成盐致可逆或冷致可逆的凝胶(salt-or cold-setting reversible gels)。卷曲-螺旋转变和螺旋的聚集形成胶凝网络。κ-角叉菜胶具有结合特定一价阳离子的位点，从而产生凝胶形成，而剪切模量和弹性模量以Cs⁺＞K⁺＞＞Na⁺＞Li⁺的顺序减小。通常，增加盐浓度使κ-角叉菜胶的弹性模量、凝固温度和融化温度提高。当根据本发明使用κ-角叉菜胶时，例如以至多100mM使用时，更尤其以至多50mM的浓度使用时，使用水溶性的钾化合物、铷化合物或铯化合物，特别是钾化合物，特别是使用天然存在的化合物(例如盐)是优选的。对于τ-角叉菜胶，也发现了盐依赖性的构型转变。人们也知道，在存在多价阳离子例如Ca²⁺的情况下，这些分子在强螺旋稳定化的情况下经历卷曲-螺旋转变。当根据本发明使用τ-角叉菜胶时，例如以至多100mM的浓度使用时，使用水溶性的钙化合物、锶化合物、钡化合物、铁化合物或铝化合物，尤其是钙化合物，特别是使用天然存在的化合物(例如盐)是优选的。

根据本发明使用的多糖的重均分子量典型地为5kDa至2MDa，优选地为10kDa至1MDa，最优选地为100kDa至900kDa，特别为400至800kDa。多糖的使用浓度典型地为0.01至5wt％，优选为0.1至1.5wt％，特别为0.2至1wt％。在将一价或多价阳离子，典型地是第1主族或第2主族金属离子包括在组合物中的情况下，阳离子的浓度范围典型地为2.5至100mM，优选地为5至50mM。

在本发明的组合物中使用的鱼明胶可以从任何水生物种的胶原制备，然而使用源自咸水鱼类特别是冷水鱼类的明胶是优选的。亚氨基酸含量为5至25wt％的鱼明胶是优选的，更尤其为亚氨基酸含量为10至20wt％的鱼明胶。鱼明胶的重均分子量的范围典型地为10至250kDa，优选地为75至175kDa，尤其为80至150kDa。鱼明胶在组合物中的浓度典型地为1至50wt％，优选地为2至15wt％，特别为3至7wt％。在期望抗老化作用的情况下，所使用的鱼明胶可以任选地包括低分子量成分，例如重均分子量低于10kDa的低分子量成分。鱼明胶与多糖在本发明的组合物中的重量比例典型地为50∶1至5∶1，优选地为40∶1至9∶1，尤其为20∶1至10∶1。

本发明的组合物的pH范围优选地为3至9，更优选地为5至7.5。

将鱼明胶和多糖组合是具有协同增效作用的，所形成的组合物在环境温度(以这些成分在单独使用时不会形成稳定凝胶的浓度)形成具有局部施用相关性质的稳定凝胶，然而单独使用这些成分或使用传统的哺乳动物明胶，不能得到这些性质。

如上所述，与哺乳动物明胶相比，源自冷水物种的鱼明胶具有相当较低的凝固温度(＜8℃)和融化温度(低于14-15℃)。在室温(20-22℃)，鱼明胶分子处于无规卷曲构型(与哺乳动物明胶分子不同，哺乳动物明胶分子处于有序构型)。因而，鱼明胶自身不能制备在环境温度具有机械稳定性的凝胶组合物。然而，与以有序构型存在的分子相比，以无规卷曲构型存在的鱼明胶分子意味着其具有改善的水结合性质。对于局部用产品，这是主要的优点，因为无规卷曲构型意味着可以将鱼明胶最适宜开发成皮肤保湿剂(skin moisture preserver)。当作为生物聚合物膜存在于皮肤表面的时候，高分子量无规卷曲鱼明胶在锁水和吸水方面也是较有效的。

将鱼明胶与多糖混合，可以设计出胶凝系统，其中鱼明胶仍以无规卷曲分子的形式存在，但该系统作为整体有助于皮肤产品的机械性质，同时仍将水限制在水凝胶中。通过对鱼明胶与多糖的混合比例进行控制，可以将这些系统的融化温度向特定的温度调节。这使所组合的明胶/多糖凝胶的融化过程受到控制，并且能够在不另外添加人造表面活性剂或脂肪/脂质的情况下制备水含量很高的皮肤产品。

因而，多糖和鱼明胶的组合在皮肤表面上形成极好的保持皮肤水合作用的保湿膜。无规卷曲明胶分子中的一些也可以渗入皮肤，并且在真皮中置换一些降解的I型胶原。当实现分子渗入的时候，非常重要的是，这些分子以柔性的无规卷曲的形式存在，而不是如胶原和处于有序构型的明胶那样，以刚性和伸展的有序分子的形式存在。哺乳动物明胶或胶原决不会在皮肤表面(28-32℃)融化以形成优异的无规卷曲构型，因为这些温度显著低于体内的温度，因此也低于这些明胶和胶原的融化温度。

本发明的组合物的另一个优点是，在皮肤温度处于无规卷曲构型的鱼明胶(不同于哺乳动物明胶)可以渗入皮肤，从而通过提高皮肤胶原含量，或通过对引起皮肤老化的内源性基质金属蛋白酶(endogenous matrixmetalloproteinase)提供替代皮肤自身胶原的底物，来改善皮肤柔性。

鉴于另一个方面，本发明提供对人类对象进行美容处理的方法，其包括将化妆品组合物施用于所述对象的皮肤，其特征在于所述组合物是根据本发明的组合物。

鉴于另一个方面，本发明提供鱼明胶和多糖胶凝剂在制备包含可局部给予的药物物质的药剂中的用途，该药剂用于包括将所述药剂施用于人类对象的皮肤的处理方法中。

鉴于另一个方面，本发明提供对人类对象进行处理的方法，其包括将有效量的根据本发明的药物组合物施用于所述对象的皮肤。

鉴于另一个方面，本发明提供用于制备本发明的组合物的方法，该方法包括将鱼明胶、多糖胶凝剂、药物活性物质或化妆品活性物质，以及任选和优选的水混合，所述方法任选地包括对混合物进行乳化。

使用在局部用化妆品和药物特别是包含哺乳动物明胶的局部用组合物的制备和应用中的常规操作，可以实现本发明的用途、方法和工艺。

本发明能够制备水含量高的最优化皮肤制品，其包含处于无规卷曲构型的高分子量鱼明胶或高低分子量鱼明胶的混合物，以及混合有一种或几种多糖。这可通过将所组合的鱼明胶/多糖系统的融化温度向皮肤的表面温度调节来实现。通过使用本发明，第一次可以通过水相而不是油相对乳化的皮肤制品的融化行为进行控制。该产品在皮肤表面上形成极好的保湿膜层，因而保持皮肤的水合作用。无规卷曲明胶渗入皮肤的较下层，这可以改善皮肤的柔性。这些乳化的产品在室温可以如霜那样稳定，这是由于其含有多糖。这些优异的物理性质在纯的水凝胶状态下以及在脂质、脂肪和油存在的乳化系统中都是有效的(valid)。这些产品不能用哺乳动物明胶得到。

使用本发明，尤其可以得到以下优点：

可以制备基于鱼明胶的凝胶和在存在脂质情况下的这些凝胶的乳液，其在室温是机械稳定的；

可以制备乳化的皮肤霜制品，其是室温稳定的，并且具有高水含量；

可以将这些凝胶的融化温度特定地调至生物表面的温度；

可以就皮肤沉积物(skin deposition)对这些凝胶的流变学行为和结构(texture)进行优化；

可以从源自可持续资源的生物相容的聚合物制备化妆品皮肤制品和药物皮肤制品；

例如就疾病的风险和/或基于宗教的限制而言，可以改善皮肤制品的使用者友好性；

可以制备基于鱼明胶和多糖的混合物的皮肤制品，其在生物表面是易溶的；

可以制备基于鱼明胶和多糖的混合物的皮肤制品，就皮肤吸收和粘性对其进行优化；以及

可以得到改善的皮肤保湿作用(由于施用处于无序(无规卷曲)状态的明胶)。

鱼明胶渗入皮肤，因而可以用于提高其它药物活性物质或化妆品活性物质的皮肤渗透性。

因而，鉴于另一个方面，本发明提供包括药物活性剂或化妆品活性剂和皮肤渗透促进剂(skin penetration enhancing agent)的局部用药物组合物或化妆品组合物，其特征在于所述皮肤渗透促进剂包括鱼明胶。

鉴于另一个方面，本发明提供鱼明胶用于制备包含化妆品活性剂或药物活性剂的局部用化妆品组合物或药物组合物的用途，所述组合物用于包括将所述药剂施用于人类或非人类哺乳动物对象的皮肤的处理方法中。

包含作为皮肤渗透促进剂的鱼明胶的组合物也优选地包含多糖，从而实现胶凝作用。然而，可以使用鱼明胶，但不是作为胶凝剂的成分，因而，组合物可以采取适于局部应用的任何形式例如霜、膏(paste)、油膏(unguent)、凝胶、乳液、分散剂、悬浮液、溶液、喷雾剂等。使用溶液、霜、膏和凝胶是特别优选的。例如如前所述，组合物中的活性成分可以是任何期望局部应用的活性剂。然而，活性成分尤其优选地是止痛剂、适于对抗皮肤症状(例如痤疮)的物质、能够对抗辐射(例如日晒)损伤的物质(例如谷胱甘肽)、血流刺激剂(例如血管扩张剂)等。

鱼明胶渗入皮肤，这使得其可以在皮肤内对引起皮肤老化的内生基质金属蛋白酶而言作为替代皮肤自身胶原的底物。

因而，鉴于另一个方面，本发明提供鱼明胶用于制备局部用组合物的用途，该组合物施用于人类皮肤，例如通过提高所述皮肤的胶原含量，来改善其柔性。

鉴于另一个方面，本发明提供对人类对象进行治疗以改善其皮肤柔性的方法，该方法包括例如以霜、膏、油膏、蜡、凝胶、乳液、分散剂、悬浮液、溶液或喷雾剂的形式，将有效量的无菌的、包含鱼明胶的组合物施用于所述对象的皮肤。

期望将组合物施用于面、颈、上肢(upper arms)、手、上胸和下肢(lowerthigh)中的至少一种的皮肤，特别是面、颈和上胸的皮肤，尤其是眼周围的皮肤。

在形成这些组合物时所使用的鱼明胶和所使用的任何多糖可以如以上所述的那样。

根据本发明所使用的组合物优选地与其局部应用的指导一起提供，这些指导例如在包装说明书中，在容器标签或容器包装上。期望组合物是无菌的，并且没有鱼类组织，而且其优选地包含至少一种药物或化妆品载体或赋形剂。

附图说明

现在，参考接下来的非限制性实施例，并且参考以下附图，进一步对本发明的组合物进行说明。

图1a(基质皮肤霜(base skin cream)的融化和凝固行为)、1b(比例为1∶1的基质和水的融化和凝固行为)、1c(比例为1∶1的基质和10％(w/v)FG的融化和凝固行为)、1d(以1∶1的比例混合的基质和0.75(w/v)％CG+15(w/v)％FG的融化和凝固行为)和1e(以1∶1的比例混合的基质和0.75％CG+15％FG+20mM KCl的融化和凝固行为)是针对五种组合物的温度(T)、弹性模量(G’)、粘度(η^*)和相角(δ)对时间的坐标图，将这五种组合物从20℃加热到40℃，然后冷却回20℃；

图2a(纯的基质皮肤霜的融化过程)、2b(比例为1∶1的基质和水的共混物的融化过程)、2c(比例为1∶1的基质和10％FG的混合物的融化过程)、2d(比例为1∶1的基质和0.75％CG+15％FG的混合物的融化过程)和2e(比例为1∶1的基质和0.75(w/v)％CG+15(w/v)％FG+20mM KCl的混合物的融化过程)是针对五种组合物的温度(T)和弹性模量(G’)对时间的坐标图，在此期间将这五种组合物从20℃加热到40℃；

图3a(在剪切应力增加的情况下，纯的基质皮肤霜的机械响应，重复数次)、图3c(在剪切应力增加的情况下，基质∶水(1∶1)的机械响应，重复数次)、3e(在剪切应力增加的情况下，基质：10％FG(1∶1)的混合系统的机械响应，重复数次)、3g(在剪切应力增加的情况下，基质：FG/CG/水(1∶1)的混合系统的机械响应，重复数次，2＝0.5％CG+10％FG，14-16＝0.75％CG+15％FG)和3i(在剪切应力增加的情况下，基质：FG/CG/20mM KCl/水(1∶1)的混合系统的机械响应，重复数次)是针对五种组合物的弹性模量(G’)对剪切应力的坐标图，而图3b(在剪切应力增加的情况下，纯的基质的相角的变化)、3d(在剪切应力增加的情况下，基质∶水(1∶1)的混合系统的相角的变化)、3f(在剪切应力增加的情况下，基质：10％FG(1∶1)的混合系统的相角的变化)、3h(在剪切应力增加的情况下，基质：FG/CG/水(1∶1)的系统的相角的变化，在高剪切应力下没有任何流动，2＝0.5％CG+10％FG，14-16＝0.75％CG+15％FG)和3j(在剪切应力增加的情况下，基质：FG/CG/20mM KCl/水(1∶1)的系统的相角的变化，在高剪切应力下没有任何流动)是针对五种组合物的相角(δ)对剪切应力的坐标图，这五种组合物中的每种都数次经受增加的剪切应力(经受次数出现在坐标图之下)；

图4a(混合的0.5(w/v)％κ-CG和10(w/v)％FG水系统的相角随温度的变化。在27℃发生胶凝，在40℃发生融化)、4b(对0.5(w/v)％κ-CG的微小应变振荡测量(small-strain oscillatory measurement)，相角随温度的变化，在13℃发生胶凝，在29℃发生融化)和4c(对10(w/v)％FG的微小应变振荡测量，相角随温度的变化，在4℃发生胶凝，在13℃发生融化)是针对三种组合物的相角(δ)对温度的坐标图，使这三种组合物融化，然后使其冷却，形成凝胶；

图5a(对冷却到4℃的0.5(w/v)％κ-CG和10(w/v)％FG的微小应变振荡测量，外推到G’无限，得到G’＝3620Pa)、5b(对冷却到4℃的0.5(w/v)％κ-CG的微小应变振荡测量的结果)和5c(对冷却到4℃的10(w/v)％FG的微小应变振荡测量的结果，外推到G’_无限，得到G’＝1100Pa)是针对三种组合物的温度(T)、弹性模量(G’)和相角(δ)的坐标图，将这三种组合物从20℃冷却到4℃，然后加热到40℃；

图6是显示0.5(w/v)％κ-CG和10或15(w/v)％FG的混合系统在室温的杨氏模量(YounG’s modulus)(E)的示图(平均值±标准偏差，n＞4)；

图7是鱼明胶浓度对在280nm的吸光度(absorbance)的坐标图；以及

图8是鱼明胶浓度对时间的坐标图。

具体实施方式

在接下来的实施例中，使用以下材料和方法：

角叉菜胶

平均分子量的范围为400-800kDa的κ-角叉菜胶(FMC Biopolymer A/S，Drammen，Norway)。

平均分子量的范围为400-800kDa的τ-角叉菜胶(FMC Biopolymer A/S，Drammen，Norway)。

鱼明胶

从冷水鱼类物种的皮制备鱼明胶(FG)样品(Norland Inc.，USA)，其平均分子量的范围为90-140kDa。

乳化模型系统

模型基质是“Biodermica”日霜(BIOlink AS，Sandefiord，Norway andFitzone-KMB GmbH，Hamburg，Germany)。通过用Ultra Thurrax进行乳化，制备脂质和水混合物。

除非另有说明，比例和百分比是以重量计。

实施例1：与鱼明胶和κ-角叉菜胶的共混物(1∶1)一起乳化、与水一起乳化和与纯的鱼明胶溶液一起乳化的基质皮肤霜的完整的融化和凝固行为

图1a显示当温度从20℃升高到40℃然后降低回20℃的时候纯的基质皮肤霜的融化和再建。当温度增加的时候，反映霜的固体性质的弹性模量(G’)具有轻微的温度依赖性，即单调地轻微地减小，随后当温度降低的时候，G’急剧地增大。这种滞后现象最有可能是由于脂质成分的融化和重结晶引起的。

图1b显示当基质霜与水以1∶1混合的时候的行为。该混合物形成洗剂型的不均匀产品，而不是霜，因此显示非期望的行为。这是由于水在系统中的非最优化作用使得缺乏稳定性。在该产品中，也观察到由于水域较大而发生颗粒一致性(grainy consistency)(这表明完全的相分离会随着时间的推移而发生)。

图1c显示当基质霜与10％鱼明胶水溶液以1∶1混合的时候的行为。在这个实施例中，也观察到纯的霜的滞后行为(参见图1a)。然而，G’是非常低的，这意味着机械性质很差。

图1d显示当基质霜与包含0.75％κ-角叉菜胶和15％鱼明胶的水溶液以1∶1混合的时候的行为。调节这种凝胶，使其在人类皮肤上融化。当温度升高的时候，观察到非常显著的效果，当温度降低的时候，再次观察到在图1中观察到的滞后现象。得到滑润的柔和的产品。

图1e显示当基质霜以1∶1与0.75％κ-角叉菜胶和15％鱼明胶的溶液并且与20mM KCl混合的时候的行为。设计这种混合物，使其在皮肤表面也保持其机械结构。示图现在显示其机械性质类似纯的基质霜(图1a)，不同的是在对该系统进行冷却之后的滞后现象。这个结果表明该非融化产品的机械性质可能在相当较大的程度上受到多糖含量的影响。

实施例2：与鱼明胶和κ-角叉菜胶的共混物(1∶1)一起乳化、与水一起乳化和与纯的鱼明胶溶液一起乳化的基质皮肤霜的初始的融化行为。皮肤接触行为

图2a-2e相应于图1a-1e的初始相。清楚地观察到，被调节成在人类皮肤上融化的样品(图2d)是在G’发展过程中在皮肤温度(30℃)附近出现显著突变的唯一样品，这表明鱼明胶/角叉菜胶凝胶在皮肤上融化，因而有助于无规卷曲明胶在皮肤上的分布。在温度降低的情况下，所有其它样品的G’都或多或少地单调地减小，这表明霜的弱化是由于油相的变化。

实施例3：与鱼明胶和κ-角叉菜胶的共混物(1∶1)一起乳化、与水一起乳化和与纯的鱼明胶溶液一起乳化的基质皮肤霜的应力耐受(stresstolerance)。在20℃的稳定性

图3a和3b显示纯的基质皮肤霜的机械响应(G’和相角(δ)的发展过程)。观察到霜在大约20Pa的应力下开始流动(G’减小而δ增大)。由于当对霜进行数次测试的时候，在线性区域内或在开始流动时没有观察到任何变化，所以系统的可逆性也是良好的。

图3c和3d显示基质和水的1∶1共混物的机械响应。清楚地观察到，该系统在相当较低的应力下开始流动，并且在反复应力循环的情况下，引起流动所必需的应力变得更小，这表明系统是非平衡的，产品是非最优化的。

图3e和3f显示基质和鱼明胶的10％水溶液的1∶1共混物的应力行为。如水共混物那样，该系统也在相当较低的应力下流动，并且就变形循环的次数而言，该系统对引起流动的应力具有依赖性。这表明鱼明胶单独不足以形成稳定的皮肤霜。

图3g和3h显示基质皮肤霜和鱼明胶和κ-角叉菜胶的两种水混合物(15％/0.75％和10％/0.50％)的1∶1混合物的应力所引起的机械响应。由于这些系统直到应力与纯的基质霜所需要的应力相当的时候才会流动，所以这些系统与添加纯水或10％鱼明胶的情况有很大不同，并且其也是完全可逆的系统(即机械响应不依赖于变形循环的次数)。此外，所观察到的相角显示，在所测试的应力范畴内，这些凝胶根本不会变成以液体为主(相角(δ)总是小于45°)。这表明胶凝的多糖在使霜稳定方面是重要的。因此，这种水含量增加的1∶1混合物在20℃与纯的基质霜相比，是更稳定的产品。

图3i和3i显示基质和添加了20mM凝胶促进离子K⁺的鱼明胶/κ-角叉菜胶共混物的1∶1混合物的机械响应。这些示图显示，通过添加这样的离子，由于使角叉菜胶网络额外稳定，从而可以使该系统甚至更稳定。与没有任何额外钾离子的非流动混合系统相比，在这种系统中，相角在所测试的最大应力下仍较小。

实施例4：鱼明胶和κ-角叉菜胶的水共混物的胶凝温度和融化温度

图4a显示0.5％κ-角叉菜胶和10％鱼明胶的共混物的胶凝温度(Tg)和融化温度(Tm)，同时图4b和4c显示两种单一成分(分别为0.5％κ-角叉菜胶(1b)和10％鱼明胶(1c))的Tg值和Tm值。这些结果表示成微小振荡测量中相角的变化(＝arctanG”/G’)，表明从以固体为主的系统变化成以流体为主的系统(δ＝45)，反之亦然。

清楚地观察到，由于两种成分中的任何一种单独都不会在室温形成凝胶，所以这种混合物是真正具有协同增效作用的系统，同时混合系统令人惊讶地具有接近哺乳动物明胶凝胶的胶凝温度(～27℃)和融化温度(～40℃)。

实施例5：鱼明胶和κ-角叉菜胶的共混物的凝胶强度发展过程

图5a显示0.5％κ-角叉菜胶和10％鱼明胶的混合物的凝胶强度的发展过程(通过微小应力振荡测量以动态储能模量(dynamic storage modulus)(G’)的形式给出)。在图5b和5c中，分别给出两种单独成分(0.5％κ-角叉菜胶和10％鱼明胶)的凝胶强度的相应发展过程。由于两种成分中的任何一种单独都不会在室温形成凝胶，所以所有结果都在4℃得到(也参见实施例1)。通过所显示的数据，再次显而易见的是，由于混合系统的G’显著高于针对两种单独成分所测量的G’值，所以得到真正具有协同增效作用的系统。

实施例6：高FG浓度时混合的鱼明胶/κ-角叉菜胶凝胶的强度

图6显示没有添加任何盐的混有10和15％鱼明胶的0.50％κ-角叉菜胶的凝胶强度(通过压缩分析，以杨氏模量(E)的形式给出)。实施例4显示，两种成分中的任何一种单独都不会在室温形成稳定的凝胶，但0.50％κ-角叉菜胶和10％鱼明胶的共混物可以在室温形成稳定的凝胶。图6显示，在包括15％鱼明胶的情况下，该结果也得以证实。事实上，在κ-角叉菜胶与鱼明胶的比例为1∶20至1∶30的情况下，该混合系统的凝胶强度没有受到任何显著的影响，这证明该混合系统是坚固的(robust)。

实施例7

将平均分子量为55000Da的鱼明胶溶解在PBS中，使其达到5％wt，将500μL加至8份组织插入物(tissue insert)。用来自SkinEthic，France的17天日龄的表皮模型(epidermis model)覆盖组织插入物中的膜。

将1mL的PBS加至24-孔板的孔内。将一份带有鱼明胶溶液的组织插入物加至该多孔板的8个孔内。在30℃对该系统进行孵育，每30分钟取走一份组织插入物，如此持续3小时，然后每小时取走一份组织插入物，如此直到5小时。收集孔内的溶液，对280nm的吸光度进行测量，以说明鱼明胶分子已经渗入表皮模型。吸光度值随时间增加，这说明当在30℃进行孵育时，鱼明胶分子渗入表皮模型。

实施例8

将平均分子量为120000Da的鱼明胶溶解在PBS中，使其达到5％wt。添加平均分子量为30000Da的鱼明胶的低分子量级分，使其浓度达到2.5％wt。将500μL的该鱼明胶溶液加至8份组织插入物。用来自SkinEthic，France的17天日龄的表皮模型覆盖组织插入物中的膜。

将1mL的PBS加至24-孔板的孔内。将一份带有鱼明胶溶液的组织插入物加至该多孔板的8个孔内。在30℃对该系统进行孵育，每30分钟取走一份组织插入物，如此持续3小时，然后每小时取走一份组织插入物，如此直到5小时。收集孔内的溶液，对280nm的吸光度进行测量，以说明鱼明胶分子已经渗入表皮模型。吸光度值随时间增加，这说明当在30℃进行孵育时，鱼明胶分子渗入表皮模型。

实施例9

将平均分子量为30000Da的鱼明胶溶解在PBS中，使其达到5％wt，将500μL加至16份组织插入物。用来自SkinEthic，Nice，France(lot no.：06022A 0304)的20天日龄的表皮模型覆盖组织插入物中的膜。

将700μL的PBS加至24-孔板的孔内。将一份带有鱼明胶溶液的组织插入物加至该多孔板的16个孔内。在温和摇动的情况下，在30℃对该系统进行孵育，每20分钟取走一份组织插入物，如此持续3小时，然后每30分钟取走一份组织插入物，如此直到6.5小时。收集孔内的溶液和插入物，对表皮模型之下和之上的280nm的吸光度进行测量，以说明鱼明胶分子已经渗入屏障。在屏障之下的溶液中，吸光度值随时间增加，这说明当在30℃进行孵育时，鱼明胶分子渗入表皮模型。

图7显示PBS中的鱼明胶(平均分子量为30000Da)浓度和A280值之间的相关性(coherence)的标准曲线。

下面的表4显示280nm的吸光度值和在表皮模型插入物之下的PBS(700μL)中的鱼明胶浓度的计算值。PBS用作空白样品。显示鱼明胶浓度和A280之间的相关性的标准曲线用于计算鱼明胶浓度，该浓度作为时间的函数。

表1

时间(min)	A280	屏障之下PBS中FG浓度(％)
			0	0.000	0.00
20	0.0316	0.05
			40	0.0366	0.06
60	0.0391	0.07
			80	0.0507	0.09
100	0.0583	0.10
			120	0.0626	0.11
140	0.0859	0.15
			160	0.1064	0.19
180	0.0849	0.15
			210	0.1022	0.18
240	0.1077	0.19
			270	0.1174	0.20
300	0.1379	0.24
			330	0.1599	0.28
360	0.1837	0.32
			390	0.2166	0.38

表1的数据描绘于图8中，其中FG在屏障之下的PBS中的浓度作为时间的函数。

对在系统中处于平衡的FG的最大可能浓度进行计算，其为大约2.08％。这意味着在6.5小时之时，19％的FG已经渗入表皮屏障。

Claims (16)

1.局部用药物组合物或化妆品组合物，其包括药物活性剂或化妆品活性剂和胶凝剂，其特征在于所述胶凝剂包括：

重均分子量的范围为75至175kDa的来自冷水鱼类的鱼明胶，和

重均分子量的范围为100至900kDa的带电的角叉菜胶多糖，其能够进行溶胶/凝胶转变，

其中所述多糖以0.1-1.5％wt的浓度存在于所述组合物中，并且鱼明胶与多糖的比例为20∶1至10∶1，

而且所述组合物包含融化温度范围为20至42℃的连续水相。

2.局部用药物组合物或化妆品组合物，其包括药物活性剂或化妆品活性剂和皮肤渗透促进剂，其特征在于所述皮肤渗透促进剂包括：

重均分子量的范围为10至150kDa的来自冷水鱼类的鱼明胶，和

重均分子量的范围为100至900kDa的带电的角叉菜胶多糖，其能够进行溶胶/凝胶转变，

其中所述多糖以0.1-1.5％wt的浓度存在于所述组合物中，并且鱼明胶与多糖的比例为20∶1至10∶1，

而且所述组合物包含融化温度范围为20至42℃的连续水相。

3.权利要求1或2的组合物，其包含胶凝温度范围为10至30℃的连续水相。

4.权利要求3的组合物，其中所述胶凝温度范围为15至28℃。

5.权利要求1的组合物，其中所述融化温度范围为24至40℃。

6.权利要求5的组合物，其中所述融化温度范围为28至37℃。

7.权利要求1或2的组合物，其中所述鱼明胶具有5至25wt％的亚氨基酸含量。

8.权利要求1或2的组合物，其中所述角叉菜胶是κ-角叉菜胶。

9.权利要求1或2的组合物，其中所述组合物的pH范围为5至7.5。

10.权利要求1或2的局部用药物组合物，其中所述药物活性剂选自抗生素、抗炎剂、止痒剂、甾类、抗真菌剂和抗痤疮化合物。

11.权利要求1或2的局部用药物组合物，其中所述药物活性剂为NSAIDs。

12.权利要求1或2的局部用化妆品组合物，其中所述化妆品活性剂为皮肤水合剂。

13.重均分子量的范围为10至175kDa的来自冷水鱼类的鱼明胶和重均分子量的范围为100至900kDa的能够进行溶胶/凝胶转变的带电的角叉菜胶多糖用于制备权利要求1至12中任一项所限定的局部用化妆品组合物或药物组合物的用途，所述组合物用于包括将所述组合物施用于人类或非人类哺乳动物对象的皮肤的处理方法中。

14.重均分子量的范围为10至175kDa的来自冷水鱼类的鱼明胶和重均分子量的范围为100至900kDa的能够进行溶胶/凝胶转变的带电的角叉菜胶多糖在制备包含可局部给予的药物物质的药剂中的用途，所述药剂用于包括将所述药剂施用于人类对象的皮肤的处理方法中。

15.重均分子量的范围为10至175kDa的来自冷水鱼类的鱼明胶和重均分子量的范围为100至900kDa的能够进行溶胶/凝胶转变的带电的角叉菜胶多糖用于制备局部用组合物的用途，所述组合物施用于人类皮肤以改善其柔性。

16.用于制备权利要求1或2的组合物的方法，所述方法包括将所述鱼明胶、所述多糖、所述药物活性物质或化妆品活性物质，以及水混合，所述方法任选地包括对所述混合物进行乳化。

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