CN101227818A - 用于优化运动恢复的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了使用包含一种或多种多甲氧基黄酮(PMF)的组合物来降低个体的运动后恢复时间的方法。在优选实施方案中，该组合物是本文所述的橙皮提取物。在某些实施方案中，运动后恢复时间是个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前VO2水平所用的时间。

Description

用于优化运动恢复的组合物和方法
本申请要求2005年5月24日提交的美国临时申请60/684,336号的利益，该文献的内容被全部纳入本文作为参考。
本发明以由美国陆军Natick士兵系统中心授予的合同号DAAD16-02-C-005受到政府支持。美国政府享有本发明的一定权利。
1.技术领域
本发明涉及组合物和方法，所述组合物和方法涉及将橙皮提取物和在橙皮中发现的多甲氧基黄酮化合物用于产生有益的运动恢复结果。
2.技术背景
运动通常被接受作为获得心血管健康、体重控制、和良好主观感觉的方式。作为各种生理症状经历的与运动相关的不适感通常会阻止个体参与运动程序。而且，由于进行活动所需的身体努力，一些个体可能甚至避免日常活动，例如散步或爬楼梯。
尽管用于减少与运动相关的不适感的严重性或时间段的剂型是高度合意的，但这些剂型应该是安全的，并优选可促进健康。尤其是，希望所述剂型易于获得、廉价并优选来自天然来源。
3.发明概述
在一个方面，本发明提供了用于减少个体的运动后恢复时间的方法。在某些实施方案中，个体是哺乳动物，更优选人。尤其是，所提供的方法包括向个体施用有效量的包含一种或多种多甲氧基黄酮(PMF)的组合物，以减少个体从运动中恢复所需的时间。
在所提供方法的某些实施方案中，运动后恢复时间的减少为约10秒至约10分钟，更典型为约25秒至约120秒。
在某些实施方案中，所提供的方法包括紧接在个体开始运动前，向个体施用一定量的包含一种或多种PMF的组合物，其中组合物的量可有效地减少个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间。
在某些实施方案中，本文中的“紧接”指在个体开始运动前约120、约90、约60、约50、约40、约30、约20、约10、约5分钟或更少的时间。
在一些实施方案中，所提供的方法包括在运动过程中向个体施用一定量的包含一种或多种PMF的组合物，其中组合物可有效地减少个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间。
在一些实施方案中，所提供的方法包括向个体施用一定量的包含一种或多种PMF的组合物，其中组合物的量可有效地在个体的运动后耗氧量(VO2)水平向运动前基础VO2水平恢复时完成快组分。
在某些实施方案中，提供了用于减少已经终止运动的个体使其运动后耗氧量(VO2)回到运动前基础VO2值所用的时间的方法，该方法包括向个体施用组合物，其中所述组合物包含PMF部分和非PMF部分。通常，PMF部分包含一种或多种PMF。
在一些实施方案中，将组合物口服施用至个体。
在某些实施方案中，提供了优化个体运动后恢复的方法，该方法包括在个体进行运动之前或在运动过程中向个体施用组合物，其中所述组合物包含非PMF部分和含有一种或多种PMF的PMF部分，其中所施用的组合物量可有效地减少个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间，从而优化个体的运动后恢复。
在另一个实施方案中，提供了提高个体的耐力以持续运动或在运动过程中延迟个体疲劳的方法，该方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含非PMF部分和含有一种或多种PMF的PMF部分，其中所施用的组合物量可有效地提高个体的耐力以持续运动或在运动过程中延迟个体的疲劳。
在还一方面，本发明提供了用于减少个体体内与运动相关的肌肉痛苦的方法，该方法包括在个体运动前、在运动过程中或在运动后向个体施用有效量的包含一种或多种PMF的组合物。
在一个方面，本发明提供了用于提高个体运动表现的方法。尤其是，在一些实施方案中，所提供的方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含非PMF部分和PMF部分，其中PMF部分包含一种或多种PMF，其中所施用的组合物量可有效地提高个体的运动表现。
在一些实施方案中，运动表现的提高是个体的奔跑速度或奔跑距离的提高。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在个体运动时到达疲劳时间的延迟。
在一些实施方案中，运动表现的提高是降低在不施用本发明组合物时将出现的乳酸浓度。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在举重时个体能够做到的重复次数的提高。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在个体运动时脂肪分解代谢或心率的优化。
本发明的组合物可以包含一种PMF或多种PMF。通常，组合物不是天然来源的，例如橙皮。
在某些实施方案中，组合物包含约25％(w/w)(干重)至约75％(w/w)(干重)PMF部分。在一些实施方案中，PMF部分的范围为0.5％(w/w)至约5％(w/w)、约1％(w/w)至约10％(w/w)、约10％(w/w)至约20％(w/w)、约20％(w/w)至约30％(w/w)、约30％(w/w)至约40％(w/w)、约40％(w/w)至约50％(w/w)、约50％(w/w)至约60％(w/w)、约60％(w/w)至约70％(w/w)、约70％(w/w)至约80％(w/w)或约80％(w/w)至约98％(w/w)。
在所提供方法的一些实施方案中，所述组合物包含PMF部分，该PMF部分包含选自下列的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种、至少十一种、至少十二种、至少十三种或所有的PMF：5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮(sinensetin))；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素(nobeletin))；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮(tangeretin))；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素(auranetin))；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物的PMF部分由选自下列的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种、十三种或所有的PMF组成：5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，用于所提供方法的组合物基本上由生理学可接受的溶剂、赋形剂或载体，和一种或多种下列PMF组成：5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，所述组合物的PMF部分包含选自下列的一种或多种PMF：3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮和5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含PMF的混合物，其中组合物中的PMF浓度不同于天然来源中的PMF浓度，或者组合物中一种PMF与该组合物中另一种PMF的比率不同于天然来源中的比率。通过例如加工天然来源的PMF如橙皮，从而选择性地去除、保留或富集至少一种特定的PMF，可以制备所述组合物。或者，可以使用一种或多种分离或合成的PMF来制备所述组合物，或者将一种或多种分离或合成的PMF添加到天然来源PMF的经加工形式中。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含橙皮提取物。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物可以是营养制品组合物，该营养制品组合物包含一种或多种PMF和食品、食品添加剂、膳食补充剂或药用食品。
通常，在本发明方法中施用至个体的组合物的PMF部分的量为每天约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1.0mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg或约50mg至约75mg、约100mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约750mg、约800mg、约900mg、约1g、约2g、约3g或约5g。
在一些实施方案中，通过口腔、鼻、口、肠胃外、直肠、舌下、局部或透皮施用途径来施用本发明方法中所施用的组合物。在某些实施方案中，以水性液体形式口服施用组合物。在其中以水性液体形式口服施用组合物的一些实施方案中，组合物还包含混合剂、掺合剂或乳化剂，优选卵磷脂。
在一些实施方案中，以气雾剂、咀嚼棒、散装或松散的干燥形式、胶囊、乳膏、饮料、乳液、酏剂、流体、凝胶、颗粒、口香糖、洗剂、锭剂、油膏、糊剂、贴剂、丸剂、粉末、溶液、喷雾、栓剂、悬浮剂、糖浆、片剂、茶、酊剂、气体混合物或扁圆片的形式施用本发明方法中所施用的组合物。
在所提供方法的某些实施方案中，将包含一种或多种PMF和生物活性成分(其中所述生物活性成分不是PMF)的组合物施用至个体。
在某些实施方案中，本文中的“生物活性成分”指有助于优化运动表现的任何试剂(不包括PMF)，所述试剂包括例如但不限于水、其代谢物或前体、电解液、帮助获得能量的能量供应剂或催化剂、刺激物(例如麻黄碱、咖啡因等)、抗炎剂等。例如，在一些实施方案中，“生物活性成分”可以是碳水化合物、单糖、淀粉、戊糖、蛋白质、氨基酸、多肽、甘油三酯、脂肪酸、维生素或矿物质。
在一些实施方案中，生物活性成分是姜提取物。
在还一个实施方案中，本发明提供了包含姜提取物的组合物，以用于本文所述的方法中。
4.附图简述
图1提供从施用了含有多甲氧基黄酮部分的组合物的马体内除去该组合物的药物代谢动力学。
图2提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的恢复时间，表明各组之间存在明显(p＜0.05)差异。
图3提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的需氧代谢水平，即最大耗氧量(VO2max)。
图4提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的换气比值水平。
图5提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的平均奔跑时间。
图6提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的血浆IFN-γ浓度。
图7提供在用水或橙皮提取物治疗并进行分级运动实验的马中观察到的血浆TNF-α浓度。
图8提供在用蔓越橘(黑条带)、姜(白条带)和水组(灰条带)治疗的马中观察到的(A)VO2max、(B)奔跑直至疲劳的时间、和(C)心血管恢复时间。星号(*)表示各组之间存在明显(p＜0.05)差异。
5.术语
用于本文时，术语“约”指这样的值，该值高于或低于该术语所修饰值的不超过10％。例如，术语“约5分钟”指4.5分钟至5.5分钟的范围。
在用于本文时，术语“组合物”意味着包括药物组合物、生理学可接受的组合物和营养制品组合物。将理解，当“组合物”中的组分如多甲氧基黄酮(PMF)也存在于天然来源(例如橙皮)中时，术语“组合物”不包含该组分的天然来源(例如橙皮)，但在某些实施方案中可以包含天然来源的物理或化学改性或加工形式，例如天然来源的提取物。
在用于本文时，术语“有效量”指当施用至个体时，足够产生合意或有益效果的化合物或组合物的量。在某些实施方案中，当施用至个体时，化合物或组合物的“有效量”可减少运动后的恢复时间。在一些实施方案中，当施用至个体时，化合物或组合物的“有效量”可提高个体的耐力以持续运动。在一些实施方案中，化合物或组合物的“有效量”可减少个体体内与运动相关的肌肉痛苦。
在用于本文时，“运动”指个体的任何身体活动，与发生活动之前的个体VO2(“基础VO2”)相比，该活动可在个体体内产生峰耗氧量(“峰VO2”)，即非平台期，或最大耗氧量(“VO2max”)，即平台期。在个体终止身体活动后，个体的峰VO2或VO2max向着基础VO2移动或回到基础VO2。
在用于本文时，术语“疲劳”指个体不能保持身体活动或运动的稳定水平。在某些实施方案中，“疲劳”在本文中用于指为了保持运动的稳定水平而必需损耗能量贮存，和/或在个体体内产生毒性代谢物等，但不是由于缺乏睡眠、代谢疾病或患病。
当用于可由天然来源获得的化合物或组合物的语境中时，术语“分离的”指从其天然来源的一种或多种组分中分离的化合物或组合物。天然来源可以是菌类、植物或动物，或由菌类、植物或动物产生的天然和未经改变的产物，包括树皮、血液、胞液、叶子、乳液、粘液、皮、血浆、树脂、外壳、树液、唾液、茎、汗、尿等。例如，天然来源可以是橙皮。因此，“分离的”化合物或组合物所处的形式使得其浓度或纯度大于在其天然来源内的浓度或纯度。例如，在某些实施方案中，可以通过从天然来源中纯化或部分纯化化合物或组合物而获得“分离的”化合物或组合物。在一些实施方案中，在合成、生物合成或半合成有机化学反应混合物中，在体外获得“分离的”化合物或组合物。
在用于本文时，术语“优化”指当对个体实践本文提供的方法时，个体获得的有益效果。在某些实施方案中，向个体施用本文所述的组合物以“优化”运动后恢复，从而使个体能够比未施用本文所述组合物时更快地从事身体活动。在一些实施方案中，向个体施用本文所述的组合物以“优化”运动后恢复，从而防止在不施用本文所述组合物时个体将会经历的肌肉痛苦或减少个体将会经历的肌肉痛苦的时间。通常，个体在运动后一至三天会经历肌肉痛苦，尤其当个体不适应或不习惯所进行的运动类型或强度时。
术语“表现”和“运动表现”指个体的受控运动，该运动可以维持一段运动时间，以获得强度、速度、毅力、力量、精确度或代谢输出的期望结果。在某些实施方案中，可以将表现的提高测量为例如更快的速度、提高的持久力、更高的力量输出等。因此，在一些实施方案中，表现的提高是在达到疲劳前，个体在举重时的重复次数或所举质量的提高。在一些实施方案中，表现的提高是在达到疲劳前，个体例如在奔跑、游泳或骑车时推进自身的速度或距离提高。在一些实施方案中，表现的提高是在达到疲劳前的运动过程中，在摩托运动如投掷或捕捉等中的精确度保持的提高。在一些实施方案中，可以根据生理参数测量表现的提高，例如提高脂肪代谢、优化乳酸代谢、优化心率等。
除非另有说明，术语“多甲氧基黄酮”或“PMF”指具有下式的化合物：
Figure S2006800271083D00111
其中当化合价允许时，式中的至少一个碳，优选两个或多个碳连接至-OCH3基团(代替式中未表示的一个或多个氢原子)。任选地，取代基如羟基、卤素、单糖或其它基团可以取代到未用甲氧基取代的一个或多个碳原子上。例如，  “羟基化的PMF”是这样的PMF，其包含连接至未用甲氧基取代的碳原子的一个或多个羟基。“未羟基化的PMF”指不含羟基的PMF。
在用于本文时，“从运动中恢复的时间”和“运动后的恢复时间”指在个体终止运动后，个体的峰VO2或VO2max回到个体基础VO2所用的时间。不希望受任何理论或机理的限制，个体的峰VO2或VO2max回到基础VO2的特征通常为快阶段、慢阶段，在某些情况下为超慢阶段。参见Gaesser & Brooks(1984)Med.Sci.Sports Exerc.16：29-43，该文献被纳入本文作为参考。在某些实施方案中，“运动后的恢复时间”是快阶段组分的持续时间。在某些实施方案中，“运动后的恢复时间”是个体的峰VO2或VO2max回到基础VO2时除任何慢阶段组分(如果存在)以外的快阶段组分的持续时间。
在用于本文时，“减少肌肉痛苦”指放松或减少由运动带来的个体所经历的肌肉痛苦的严重性。在某些实施方案中，“减少肌肉痛苦”指减少个体经历的由运动带来的肌肉痛苦的时间。
“溶剂化物”指这样的化合物如PMF，该化合物还包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的量的溶剂。当溶剂为水时，溶剂化物为水合物。
在用于本文时，术语“个体”和“患者”互换使用。术语“一个个体”和“多个个体”指动物，优选哺乳动物，包括非灵长类和灵长类(例如猴子如黑猩猩和人)，更优选人。术语“动物”还包括但不限于陪伴动物如猫和狗；动物园动物；野生动物；农场或运动动物如反刍动物、非反刍动物、家畜和家禽(例如马、牛、绵羊、猪、火鸡、鸭和鸡)，包括用于竞赛的任何动物和动物品种(例如灰狗)；和实验动物，例如啮齿动物(例如小鼠、大鼠)、兔、和豚鼠，以及通过基因方式或其它方式克隆或改性的动物(例如转基因动物)。
6.发明详述
如下面实施例部分所述，通过经验方法发现了包含PMF部分的组合物，该组合物具有在马的耗竭性运动中减少运动后恢复时间的性质。部分6.1描述了使用包含PMF部分的组合物的方法。部分6.2描述了包含PMF的组合物及其制备方法。
6.1.使用PMF组合物的方法
本发明提供了优化身体活动如运动的表现、和/或从身体活动如运动中恢复的方法。所述方法对于例如运动至疲劳状态的个体是有益的。在一些实施方案中，个体是受训的个体，例如运动员。在一些实施方案中，个体是未受训的个体，例如具有久坐生活方式的个体而非运动员。
在一方面，本发明提供了在有需要的个体中减少运动后的恢复时间的方法，该方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中PMF部分包含一种或多种多甲氧基化的黄酮(PMF)，其中组合物的施用量可有效地减少个体从运动中恢复所需的时间。
不希望受任何具体理论或机理的约束，运动后的恢复时间可以持续几秒，通常为几十秒、几分钟、或几小时，甚至在一些情况下高至十二小时、二十四小时、或更多小时。在某些实施方案中，运动后恢复时间的减少为约10秒至约10分钟，更典型为约25秒至约120秒。在所提供方法的一些实施方案中，运动后恢复时间的减少为约5秒至约1分钟、约1分钟至约5分钟、约5分钟至约20分钟、约20分钟至约1小时、约1小时至约5小时或约5小时至约12小时。
在某些实施方案中，所提供的方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中组合物的量可有效地减少个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间。
在一些实施方案中，所提供的方法包括向个体施用一定量的本发明组合物，其中组合物的量可有效地在个体的运动后耗氧量(VO2)水平向运动前基础VO2水平恢复时完成快组分。
在某些实施方案中，提供了减少已终止运动的个体使其运动后耗氧量(VO2)回到运动前基础VO2值所用的时间的方法，该方法包括向个体施用本发明的组合物。
在一些实施方案中，将组合物口服施用至个体。
在所提供方法的某些实施方案中，紧接在个体开始运动前将本发明的组合物施用至个体。
在某些实施方案中，本文中的“紧接”指在个体开始运动前约120、约90、约60、约50、约40、约30、约20、约10、约5分钟或更少的时间。
在所提供方法的一些实施方案中，在运动过程中将本发明的组合物至个体。
在某些实施方案中，提供了优化个体运动后恢复的方法，该方法包括在个体进行运动之前或在运动过程中向个体施用本发明的组合物，其中所施用的组合物量可有效地减少个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间，从而优化个体的运动后恢复。
在另一方面，本发明提供了提高个体的耐力以持续运动或在运动过程中延迟个体疲劳的方法，该方法包括向个体施用一定量的本发明组合物，其中所施用的组合物量可有效地提高个体的耐力以持续运动或在运动过程中延迟个体的疲劳。
在某些实施方案中，提供了提高个体的耐力以持续运动的方法，该方法包括向个体施用有效量的组合物以提高个体的耐力从而持续运动，所述组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中PMF部分包含一种或多种PMF，其中在个体运动前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内施用组合物。
在还一方面，本发明提供了用于减少个体体内与运动相关的肌肉痛苦的方法，该方法包括在个体运动前、在运动过程中或在运动后向个体施用包含一种或多种PMF的有效量组合物。
在某些实施方案中，提供了用于减少个体体内与运动相关的肌肉痛苦的方法，该方法包括在个体运动前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内，向个体施用包含括PMF部分和非PMF部分的有效量组合物，其中PMF部分包含一种或多种PMF。
在某些实施方案中，可以在个体已经终止运动约1分钟、约10分钟、约20分钟、约40分钟、或约一小时或更多时间内施用本发明的组合物。
在一个方面，本发明提供了用于提高个体的运动表现的方法。尤其是，在一些实施方案中，所提供的方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含非PMF部分和PMF部分，其中PMF部分包含一种或多种PMF，其中所施用的组合物量可有效地提高个体的运动表现。
在一些实施方案中，提供了用于提高个体的运动表现的方法，该方法包括向个体施用一定量的组合物，所述组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中PMF部分包含一种或多种PMF，其中所施用的组合物量可有效地提高个体的运动表现，其中在个体运动前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内施用组合物。在某些实施方案中，运动表现的提高是在运动过程中到达疲劳的时间延长。在某些实施方案中，运动表现的提高是奔跑时间的提高。
在一些实施方案中，运动表现的提高是个体的奔跑速度或距离提高。例如，在一些实施方案中，个体的奔跑速度或距离提高可以为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在个体运动时到达疲劳的时间延迟。例如，在一些实施方案中，与未施用包含PMF部分和非PMF部分的组合物时相比，到达疲劳的延迟时间长出约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、或约10％。
在一些实施方案中，运动表现的提高是与未施用本发明组合物时相比乳酸浓度的减少。例如，在一些实施方案中，个体体内乳酸浓度的减少可以为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、或约10％。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在举重时个体能够做到的重复次数提高。例如，在一些实施方案中，与未施用本发明组合物时能够做到的相比，个体能够完成一次、两次或多次额外的重复。
在一些实施方案中，运动表现的提高是在个体运动时脂肪分解代谢或心率的优化。
6.2.包含PMF的组合物及其制备方法
用于本发明方法的组合物通常包含PMF部分和非PMF部分。在某些实施方案中，PMF部分包含一种或多种PMF。
在某些实施方案中，能够从天然来源中分离例如提取PMF，以包含在用于本发明方法的组合物中。在一些实施方案中，从包含PMF部分的天然来源中提取组合物。在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含来自冷压橙皮油固体的提取物。优选地，用于本发明方法的组合物包含来自橙的Valencia和Hamlin变种的提取物。用于制备橙皮提取物以用作本发明方法中的组合物的溶剂包括。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含PMF的混合物，其中组合物中PMF的浓度不同于天然来源中的PMF浓度。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含PMF部分，其中所述部分中一种PMF与所述部分中另一种PMF的比率不同于PMF天然来源中的比率。
在某些实施方案中，可以通过合成获得PMF，以包含到用于本发明方法的组合物中。可以使用任何合成或半合成技术合成PMF，没有限制。用于黄酮的一般合成流程可以在例如Cushman and Nagarathnam(1990)Tetrahedron Letters 31：6497-6500中找到。
在某些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含约25％(w/w)(干重)至约75％(w/w)(干重)PMF部分。在一些实施方案中，PMF部分的范围为0.5％(w/w)至约5％(w/w)、约1％(w/w)至约10％(w/w)、约10％(w/w)至约20％(w/w)、约20％(w/w)至约30％(w/w)、约30％(w/w)至约40％(w/w)、约40％(w/w)至约50％(w/w)、约50％(w/w)至约60％(w/w)、约60％(w/w)至约70％(w/w)、约70％(w/w)至约80％(w/w)或约80％(w/w)至约98％(w/w)。
在某些实施方案中，用于本发明方法的组合物中的PMF部分包含选自下列的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种、至少十一种、至少十二种、至少十三种或所有的PMF：5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，组合物的PMF部分包含选自下列的一种或多种PMF：3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮和5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮。
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物中的PMF部分由选自下列的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种、至少十一种、至少十二种、至少十三种或所有的PMF组成：5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮中的一种或多种组成。
在一些实施方案中，用于所提供方法的组合物基本上由生理学可接受的溶剂、赋形剂或载体和选自下列的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种、至少十种、至少十一种、至少十二种、至少十三种或所有的PMF组成：5，6，7，3 ′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮中的一种或多种组成。
在某些实施方案中，用于所提供方法的组合物由PMF部分和一种或多种非PMF部分组成，其中非PMF部分包含例如生理学可接受的溶剂、赋形剂、载体、着色剂、调味剂、食品添加剂、营养物质、维生素、矿物质、代谢物、乳化剂、稳定剂、电解液等(也就是PMF以外的组分)，其中PMF部分富集了羟基化的PMF。在本文中结合“富集的羟基化PMF”的部分使用时，术语“富集的”包括这样的PMF部分，其中该部分中羟基化PMF占PMF部分总重的至少15％至约95％，和/或该部分中羟基化PMF与非羟基化PMF的比例大于在包含PMF的天然来源中发现的羟基化PMF与非羟基化PMF的比例。
在某些实施方案中，组合物中“富集的羟基化PMF”的部分包含PMF部分总重的至少15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、或至少约95％羟基化PMF。
在一些实施方案中，用于所提供方法的组合物包含富集的羟基化PMF的部分和一种或多种非PMF部分，其中富集了羟基化PMF的PMF部分由选自下列羟基化PMF的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种或多种羟基化PMF组成：3-羟基-5，6，7，4′-四甲氧基黄酮、3-羟基-5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮、3-羟基-5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮、5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮、5-羟基-3，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮、5-羟基-3，7，3′，4′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，8，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮、5-羟基-6，7，4′-三甲氧基黄酮、5，3′-二羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮、5-羟基-7，8，3′，4′-四甲氧基黄酮、5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮、7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮、7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮、3′-羟基-5，6，7，4′-四甲氧基黄酮、3′-羟基-5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮、3′，4′-二羟基-5，6，7，8-四甲氧基黄酮、和4′-羟基-5，6，7，8，3′-五甲氧基黄酮。
在所提供方法的某些实施方案中，将包含一种或多种PMF和生物活性成分(其中所述生物活性成分不是PMF)的组合物施用至个体。
在某些实施方案中，本文中的“生物活性成分”指有助于优化运动表现的任何试剂(不包括PMF)，所述试剂包括例如但不限于水、其代谢物或前体、电解液、帮助获得能量的能量供应剂或催化剂、刺激物(例如麻黄碱、咖啡因等)、抗炎药等。例如，在一些实施方案中，“生物活性成分”可以是碳水化合物、单糖、淀粉、戊糖、蛋白质、氨基酸、多肽、甘油三酯、脂肪酸、维生素或矿物质。
在一些实施方案中，生物活性成分是姜提取物。
在还一个方面，本发明提供了包含姜提取物的组合物以用于本文所述的方法中。
在某些实施方案中，可以将包含橙皮提取物和姜提取物的混合物的组合物用于本文提供的方法中。
6.2.1.营养制品剂型
在某些实施方案中，用于本发明方法的组合物可以是营养制品组合物。在用于本文时，术语“营养制品组合物”指包含食品、食品添加剂、膳食补充剂、用于特殊膳食用途的药用食品或食品和PMF部分的组合物。
在一些实施方案中，本发明的营养制品组合物通常包含一种或多种可消费的运载体、载体、赋形剂或填充剂。术语“可消费的”指通常适合、或由联邦或州政府的规章部门批准供动物、更具体为供人消费的。
在用于本文时，“食品”指经加工、半加工、或未加工的任何物质，该物质用于供动物包括人消费，但不包括化妆品、烟草产品或只用作药品的物质。
在用于本文时，术语“膳食补充剂”指用于补充膳食的产品(除烟草外)。通常，膳食补充剂是这样的产品，该产品被标注作为膳食补充剂，不提议用作常规食品或作为进餐或饮食的单独项目。膳食补充剂通常包含一种或多种下列膳食成分：维生素；矿物质；草药或其它植物药；氨基酸；人使用通过提高总膳食摄取来补充饮食的膳食补充剂；或者任何所述成分的浓缩物、代谢物、成分、提取物或组合。膳食补充剂可以独立于任何食品而被个体消费，不像在食品的加工、制备、准备或递送过程中、或紧接在食品消费前加入食品的食品添加剂。
在用于本文时，术语“药用食品”指这样的食品，其被配制以供在医师或兽医的监督下经肠消费或施用，并基于公认的科学原理，用于由医学评价确定需要特殊营养的疾病或状况的特殊膳食控制。药用食品的例子包括但不限于：单一来源的营养产品，它们是用于代替所有其它食物摄取的完全营养产品；口服再水化溶液，用于代替腹泻或呕吐后的流体和电解液损失；包含特殊选择成分的模板营养产品，并非作为完全的营养来源，而被设计成控制特殊疾病，并已经被直接或暗示地声明其有效性；和希望用于新陈代谢的先天错误的膳食控制的产品。
在用于本文时，术语“用于特殊膳食用途的食品”指被提议用于至少一种下列情况的食品：供应由于身体、生理、病理或其它状况而存在的特殊膳食需要，所述其它状况包括但不限于疾病状况、逐渐康复、妊娠、哺乳、幼年、对食品高度过敏、体重不足、超重、或需要控制钠的摄取；供应维生素、矿物质、或其它成分供人使用，以通过提高总膳食摄取补充其饮食；和供应由于作为食品被用作单一饮食项目而存在的特殊膳食需要。
用于本发明方法的营养制品组合物还可以包含带来额外健康或医学益处的一种或多种其它成分。
在一些实施方案中，用于本发明方法的营养制品组合物包含PMF部分和一种或多种“公认安全”(“GRAS”)物质。许多GRAS物质是已知的，列于美国公共健康署21 CFR 73、74、75、172、173、182、184和186的规章的各个部分，这些文献被全部纳入本文作为参考。
在某些实施方案中，术语“药用食品”、“用于特殊膳食用途的食品”、“膳食补充剂”或“食品添加剂”的意思是由州政府或美国联邦政府的规章机构、包括美国食品和药品管理局定义的那些术语的意思。
在某些实施方案中，用于本发明方法的营养制品组合物包含按重量计约0.001％至约90％PMF部分。还可预期的其它组合量为按重量计约0.0075％至约75％、约0.005％至约50％、约0.01％至约35％、0.1％至约20％、0.1％至约15％、1％至约10％、和2％至约7％PMF部分。
在所提供方法的某些实施方案中，将包含一种或多种PMF的组合物作为水基饮料施用至个体。所述饮料还可以包含生理学可接受的添加剂，如助悬剂(例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；和防腐剂(例如对羟苯甲酯或对羟苯丙酯或抗坏血酸)。在适当时，制剂还可以包含缓冲盐、电解液、调味剂、着色剂和甜味剂。
在一些实施方案中，在气雾剂、咀嚼棒、散装或送赛的干燥形式、胶囊、乳膏、饮料、酏剂、乳液、流体、凝胶、颗粒、口香糖、粉末、溶液、喷雾、悬浮剂、糖浆、片剂、茶等中施用本发明方法中所施用的组合物。
在某些实施方案中，在饮料或凝胶中施用组合物，以期优化运动表现，或按照运动结果的需要增强、代替、补充或恢复流体、营养物质、热量等。运动饮料和凝胶是公知的，包括例如GATORADE运动饮料、GU能量凝胶、GU2O运动饮料、CRANK eGEL能量凝胶、CYTOMAX运动饮料、POWERBAR PERFORM饮料、ULTIMA REPLENISHER饮料、SOBESPORTS SYSTEM饮料、ULTRAFUEL饮料、SHAKELEE PHYSIQUE饮料、ENDUROXR4饮料、HAMMER凝胶、CLIF SHOT凝胶、CARB-BOOM凝胶、ACCELERADE饮料、ACCEL凝胶等。
6.2.2.药物剂型
在某些实施方案中，可以以常规方式配制包含一种或多种PMF和一种或多种生理学可接受的载体或赋形剂的组合物以用于本明。因此，一种或多种生理学可接受的载体或赋形剂与一种或多种PMF及其生理学可接受的盐和溶剂化物的组合可以被配制成通过吸入或喷洒(通过口或鼻)、口服、口腔、肠胃外、直肠、或透皮施用来施用。
对于口服施用，药物组合物可以采用例如片剂或胶囊的形式，通过常规方式以可药用的赋形剂制备所述片剂或胶囊，所述可药用的赋形剂为例如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。可以通过本领域公知的方法将片剂包衣。用于口服施用的液体制剂可以采用例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或者它们可以作为在使用前与水或其它合适的运载体重组的干燥产品出现。可以通过常规方式以可药用的添加剂制备所述液体制剂，所述可药用的添加剂为例如助悬剂(例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水运载体(例如杏仁油、油性的酯、乙醇或经分馏的植物油)；和防腐剂(例如对羟苯甲酯或对羟苯丙酯或抗坏血酸)。在适当时，制剂还可以包含缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。
可以将用于口服施用的制剂适当地配制成提供一种或多种PMF的控释。
对于口腔施用，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
对于通过吸入施用，可以以来自加压包装或喷雾器的气雾剂喷雾的形式方便地递送用于本发明的药物组合物，同时使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀门来确定剂量单位，以递送经计量的量。可以将例如用于吸入器或吹药器的明胶胶囊和筒配制成包含一种或多种PMF和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
药物组合物可以被配制成通过注射、例如通过弹丸注射或连续输液以供肠胃外施用。用于注射的剂型可以存在于单位剂型中，例如在添加防腐剂的安瓿或多剂量容器内。组合物可以采用这样的形式，例如在油性或水性运载体内的悬浮液、溶液或乳液，并可以包含调配剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前与合适的运载体如无菌无热原的水重新配制。
药物组合物还可以被配制成直肠组合物例如栓剂或保留灌肠剂，例如包含常规栓剂基质如可可黄油或其它甘油酯。
除了上述剂型外，药物组合物还可以被配制成贮库制剂。所述长效剂型可以通过植入(例如皮下或肌内内)或通过肌内内注射施用。因此，例如，可以用合适的聚合材料或疏水材料(例如作为可接受油中的乳液)、或离子交换树脂配制复合物，或者作为难溶的衍生物，例如作为难溶的盐。
如果期望，药物组合物可以存在于包装或分配装置内，所述包装或分配装置可以包括含有活性成分的一个或多个单位剂型。包装可以包括例如金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分配装置可以随附施用说明书。
6.3含PMF组合物的给药
在本发明的方法中，要施用至个体的组合物的量、以及施用频率将随着例如个体的年龄、体重、响应和过往药史而变化。可以从源自体外或动物模型实验体系的剂量-响应曲线中外推有效剂量。
通常，以约0.001μg/kg、约0.005μg/kg、约0.01μg/kg、约0.05μg/kg、约0.1μg/kg、约0.5μg/kg、约1μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg、约50mg/kg、约67mg/kg、约75mg/kg、或约80mg/kg的量，将用于本发明方法的组合物中的活性成分，即一种或多种PMF施用至个体，其中所用单位指按照个体体重(kg)的活性成分的质量。
在某些实施方案中，在本发明的方法中，当要将组合物施用至个体、优选人时，所施用的组合物中PMF部分的量为约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1.0mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg或约50mg至约75mg、约100mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约750mg、约800mg、约900mg、约1g、约2g、约3g、约5g、或约10g。
在一些实施方案中，组合物中要施用的PMF部分量为约50mg至约1g。
在一些实施方案中，组合物中要施用的PMF部分量为约100mg至约400mg。
在所提供方法的某些实施方案中，在运动前将包含一种或多种PMF的组合物施用至个体。在一些实施方案中，在运动前约12小时、约6小时、约3小时、约2小时、约1小时、约30分钟、约15分钟、或约1分钟内施用组合物。
在所提供方法的某些实施方案中，在个体运动时将包含一种或多种PMF的组合物施用至个体。
在所提供方法的某些实施方案中，优选在用于减少个体体内与运动相关的肌肉痛苦的方法的实施方案中，在运动后将组合物施用至个体。在一些实施方案中，在运动后约1分钟、约10分钟、约20分钟、约1小时、约3小时、约6小时、约12小时、约24小时、约36小时或约48小时内将组合物施用至个体。
可以通过任何适当的途径施用包含PMF的组合物，所述途径能确保PMF部分在个体循环中的生物利用度。可以使用能提供有效量的含PMF组合物的任何施用途径。尤其是，施用途径可以由剂型如营养制品或药物组合物的类型指示，如上所述。
在一些实施方案中，通过口腔、鼻、口、肠胃外、直肠、舌下、局部或透皮施用途径来施用本发明方法中所施用的组合物。
在优选实施方案中，口服施用包含一种或多种PMF的组合物。在一些实施方案中，以液体形式、优选水性液体形式口服施用包含一种或多种PMF的组合物。
7.实施例
下列实施例示例了包含多甲氧基黄酮成分的组合物在减少个体运动后恢复时间方面的用途。
7.1.提取物的制备
7.1.1.橙皮提取物
从橙的Valencia和Hamlin变种获得橙固体，包括皮，它是来自橙汁工业的副产物。通过冷压皮获得橙皮油。橙皮油包含约0.4％PMF部分、98％轻质挥发性部分和2％残渣。运行利用溶剂提取然后干燥提取物的分离过程，以获得粉末形式的橙皮提取物。橙皮提取物包含占提取物约30％(w/w)的PMF部分和非PMF部分。非PMF部分包含少量或不合可检测的柠檬烯，发现它还包含蜡、不饱和脂肪酸和β-谷甾醇。通过反相高效液相色谱法(HPLC)和正相HPLC分析PMF。
通常，对于正相HPLC，利用尺寸为4.6mm i.d.×25cm长的硅胶HPLC柱(MacMod Analytical Co.Chadds Ford，PA)，以90％己烷/10％氯仿作为起始溶剂。使用10％至90％氯仿梯度运行20分钟，然后以90％氯仿再运行20分钟。使用质谱(MS)-HPLC联用来鉴别个体PMF。使用大气压化学电离MS确定分子量。从Florida Department of Citrus(Lakeland，FL)获得标准物。橙皮提取物粉末包含甲氧基化黄酮的各种类似物的混合物，包括：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
7.2.向马施用橙皮提取物
在下述研究中使用健康、未经训练、标准喂养的母马。马的生理学在以下方面类似于人：(1)心血管功能，(2)对运动的代谢和肌肉响应，(3)对运动的内分泌响应，和(4)通过出汗调节体温。
在马体内的药物代谢动力学研究中，将按部分7.1所述制备的35克橙皮提取物粉末溶于3升水中，将其施用至个体。对于施用至进行分级运动实验(GXT)的马，如下所述，将30克橙皮提取物粉末溶于2升水中，将其施用至个体。溶解橙皮提取物粉末的方案包括将橙皮提取物粉末溶于100mL乙醇中，并添加10g卵磷脂。使混合物沸腾，然后在高剪切条件下缓慢添加到温(120)水中，以形成预乳液。然后在高剪切条件下，将预乳液分散到温水中，以得到期望的最终体积。
通过鼻饲管向马施用溶于水中的橙皮提取物。
7.3.橙皮提取物在马体内的药物代谢动力学
在如上所述向马施用橙皮提取物后，在0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20、24和36小时，从马体内收集血样，对血样进行HPLC/MS，以观察血浆中的橙皮提取物组分。结果示于图1。
记录生理学观察例如体温、呼吸、心率、粘膜颜色、皮肤折痕以及总体表现和行为。
7.4.分级运动实验
7.4.1.方法
实验方案：利用踏板分级运动实验(GXT)来研究用橙皮提取物治疗的马对运动的响应。使用六匹未受训的母马设计随机交叉双盲研究，所述母马被随机安排成用水或橙皮提取物治疗。母马的年龄为10±4岁，平均质量为约450kg。在牧场上饲养母马，提供随意接触的水和牧场放牧，喂给约6kg/天紫花苜蓿和干草，约3kg/天谷物。在开始实验前，使马习惯实验室和在踏板上奔跑。
在运行每次踏板实验前，将马称重，使用无菌技术和局部利多卡因麻醉，将导管(2-Angiocath，14规格，Becton Dickson，Inc.Parsippany，NH；和7个法式导管引导器，Argon Medical，Athens，TX)分别经皮引入左右颈静脉。通过鼻饲管给每匹马施用30g提取物的2L水溶液，使其在自己的畜栏内安静地站立1小时。然后使马走上踏板，踏板上插有热敏电阻探头(型号Bat-10，Physitemp Instruments，Clifton，NJ)和用于测量核心体温。使用微压计导管传感器(Millar Instruments，Houston，TX)测量肺动脉压力、右心室压力和心率。在运动之前和之后，通过使用生理学记录系统(Biopac，Santa Barbara，CA)上记录的代表性血压波形确认压力感应导管的位置。马安静地站立约10-15min。获得了15分钟的血液动力学数据、站立量热数据，然后采集基线血样(10ml)和直肠温度(YSI PRECISION 4000A温度计，YSI Inc.Yellow Springs，OH)。
在固定6％级别下，在马SATOI踏板(Equine Dynamics，Inc.Lexington，KY)上进行分级运动实验方案，以4m/s的初始速度开始进行1分钟，然后逐步升至6m/s进行1分钟，然后以每分钟1m/s的增量提高速度，直到马疲劳。将疲劳识别为即使在人的鼓励下，马仍不能跟上踏板速度的点。在疲劳时，停止踏板，收集5分钟的运动后量热数据和血液动力学数据。在踏板实验之间间隔一周。
量热法：在实验过程中，使用间接开放流动OXYMAX-XL量热装置(Columbus Instruments，Inc.Columbus，OH)连续测量耗氧量(VO2)和二氧化碳(VCO2)，以十秒的间隔记录。对于每匹马，确定在平稳VO2时观察到的最大氧摄取(VO2max)，记录马的速度(VvO2max)。将恢复时间确定为VO2回到运动前水平所用的时间。
血液化学：在GXT之前、在每一分钟GXT步骤结束时、和在疲劳后24小时的时间段内(即在GXT后2分钟、5分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和24小时)采集血样。所观察的血液参数包括血细胞比容、总蛋白、和血浆中乳酸盐、肌酸激酶和天冬氨酸转氨酶的浓度。将血样放入包含EDTA或肝素钠(Becton Dickson，Inc.Franklin Lakes，NJ)的预冷VACUTAINER试管中，立即放在冰上。用乳酸盐SPORT 1500分析仪(YSI，Inc.Yellow Springs，OH)将乳酸盐浓度测量三次。使用微血细胞比容技术和折射法将血细胞比容和血浆蛋白测量两次。McKeever等(1998)Vet.J.155：19-25。使用酶反应测定法(BMD Roche/Hitachi 747-100，HighTechnology，Inc.Walpole，MA)测量肌酸激酶和天冬氨酸转氨酶。
细胞因子表达的测量：在GXT之前、紧接在运动后、和运动后0.5、1、2、4和24小时时，通过静脉穿刺从马体内抽取血样，并收集到PAXGENE试管(Qiagen，Valencia，CA)内，确定白介素6(IL-6)、组织坏死因子α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)RNA的表达水平。根据制造商的说明书，使用旋转柱从试管中分离总RNA。使用BIOPHOTOMETER分光光度计(Eppendorf，Hamburg，Germany)定量RNA。在所有情况下，OD260/280比率均大于1.9，RNA收率均大于50μg/ml。将1微克RNA逆转录到cDNA的80μl反应物溶液中，该反应物包含20单位AMV逆转录酶、0.5μg寡dT引物、40单位RNAsin和5mM MgCl2(Promega，Madison，WI)。然后基于马细胞因子和β-肌动蛋白的已知序列，通过“实时”聚合酶链反应(PCR)(ABI Systems 7500 Sequence Detectiort System，Foster City，CA)，使用Taq热稳定的DNA聚合酶和引物，放大并定量细胞因子特异性cDNA。参见Swiderski等(1999)JImmunol.Methods 222：155-69。各种细胞因子和β-肌动蛋白的特异性引物和FAM-标记探针作为ASSAY-BY-DESIGN试剂盒(ABI)提供，将它们添加到96孔微板内的25μl反应物中，该反应物包含Taq聚合酶(12.5μl UNIVERSAL MASTER MIX反应缓冲液，ABI)和5μl cDNA。按照制造商的推荐，使用下列PCR条件：在95℃反应10min，然后将95℃15秒和60℃60秒循环40次。
使用β-肌动蛋白作为各样品的内标，校正样品之间RNA分离和cDNA构成的差异。通过相对定量确定由运动所致的细胞因子mRNA表达的相对差异。相对定量提供了样品中靶cDNA的初始水平之间的精确比较，而无需确定确切的复制数。参见Livak & Schmittgen(2001)Methods25：402-408。选择运动前的样品作为校正物，然后确定各样品的运动后细胞因子表达相对于校正物的变化。
统计分析：将结果表示为平均值+/-平均值的标准偏差(SEM)。为了按组和时间比较，使用用于重复测量的双途径ANOVA，其中统计显著性的优先水平设置为P＜0.05。使用Tukey检验确定后hoc差异，使用Pearson积差(Sigma Stat 2.0；SPSS Inc.Chicago，IL)获得相关系数。
7.4.2.结果
图2示意VO2恢复时间的比较，显示与用水治疗的组相比，在用橙皮提取物治疗的组中，运动后恢复时间明显减少。
图3显示用水或橙皮提取物治疗组的需氧代谢水平，即最大耗氧量(VO2max)。显示治疗组和对照组之间不存在最大需氧代谢水平的差异(p＞0.05)。
在核心体温、直肠温度、心率或血细胞比容方面，在治疗组和对照组之间没有观察到差异(p＞0.05)。
图4显示各组换气比值的比较。显示治疗组和对照组之间不存在换气比值差异(p＞0.05)。
图5示意各治疗组到达疲劳的奔跑时间结果。
在施用橙皮提取物的马和施用水的马中，观察运动前(约240 IU/L)和运动后(在运动后2小时和4小时为约350 IU/L)肌酸激酶浓度的变化。在运动后24小时，两组的肌酸激酶水平回到接近运动前的水平。在观察血浆乳酸盐、肌酸激酶和天冬氨酸转氨酶的浓度方面，用橙皮提取物治疗的马与用水治疗的马之间没有显著差异。
在运动过程中血容量减少，相信这是因为流体划分的转移，表现为例如血浆蛋白浓度的变化。在用水治疗的马中，总血浆蛋白浓度从运动前的最初接近7.7g/dL增至接近疲劳点的约10g/dL最大浓度。相反，在用橙皮提取物治疗的马中，观察到的总血浆蛋白浓度从运动前的约7.5g/dL升至运动过程中的最大8.2g/dL。因此，显示橙皮提取物可在运动过程中减少血容量的降低。
反映作为炎症标志的细胞因子水平的数据表明，运动提高了IFN-γmRNA表达(图6)和TNF-αmRNA表达(图7)，但没有提高IL-6 mRNA表达。在一些早期时间点，在用橙皮提取物治疗的马和用水治疗的马之间发生了运动诱导的IFN-γ mRNA上调方面的一些差异(图6)。在用橙皮提取物和用水治疗的马之间，在TNF-α和IL-6 mRNA表达水平方面观察到了轻微的差异，或没有观察到差异。
7.5.姜提取物对运动表现和恢复的作用
该研究的目的是在马的耗竭性运动回合后，调查姜(Zingiber officinale)和蔓越橘(Vaccinium macrocarpon)提取物对表现标志(VO2、血细胞比容、血浆总蛋白)、体温调节(核心和直肠温度)和肌肉损伤(肌酸激酶或CK、和天冬氨酸转氨酶或AST)的影响。实验方案和用于获得生理学数据的方法学与上面部分7.4中所述的相同，除了用姜提取物、蔓越橘提取物或水治疗马。具体地，9匹未受训标准喂养的母马在随机交叉设计中完成了3级运动实验(GXTs)。在实验前1小时，母马接受水(2L)、蔓越橘(约30g的2L水溶液)或姜(约30g的2L水溶液)提取物的剂量。在给药前(运动前)、在每次踏板增量结束时、在运动结束时、在GXT后2分钟、5分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和24小时采集血样。紧接在运动实验后分析血浆总蛋白和血细胞比容值。
如图8(C)所示，姜明显减缓了心血管恢复时间。没有看到治疗对VO2max(图8(A))、血细胞比容或血浆总蛋白的影响。结果提示，在完成耗竭性运动回合的马中，姜提取物可减少心血管恢复时间。
本文引用的所有参考文献均被全部纳入本文作为参考并用于所有目的，如同具体和单独地说明每个单独的公开、专利或专利申请被全部纳入本文作为参考以用于所有目的。
在不背离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明进行许多修改和改变，这对本领域技术人员将是明显的。本文提供的具体实施方案只作为例子提供，本发明将只受限于所附权利要求书以及所述权利要求书授权的等价物的全部范围。

Claims (27)

1.一种用于减少个体的运动后恢复时间的方法，该方法包括向该个体施用有效量的组合物以减少该个体从运动中恢复所需的时间，该组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中该PMF部分包含一种或多种PMF，且其中在该个体运动之前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内施用该组合物。
2.权利要求1的方法，其中运动后恢复时间的减少为约25秒至约120秒。
3.权利要求1的方法，其中运动后的恢复时间是个体的运动后耗氧量(VO2)水平回到运动前基础VO2水平所用的时间。
4.权利要求1的方法，其中运动后的恢复时间是个体的运动后耗氧量(VO2)水平向运动前基础VO2水平恢复时完成快组分所用的时间。
5.权利要求1的方法，用于减少已经终止运动的个体使其运动后耗氧量(VO2)回到运动前基础VO2值所用的时间，该方法包括向该个体施用有效量的组合物，该组合物包含PMF部分和非PMF部分，其中该PMF部分包含一种或多种PMF，且其中在该个体终止运动之前将该组合物口服施用至该个体，从而使该个体的运动后VO2回到运动前基础VO2值所用的时间短于未施用该组合物时该个体的运动后VO2回到运动前基础VO2值所用的时间。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述一种或多种PMF选自：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
7.权利要求6的方法，其中所述组合物中的PMF部分基本上由下列成分组成：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；或
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
8.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述PMF部分由选自下列的一种或多种PMF组成：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
9.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述一种或多种PMF构成所述组合物的约25％至约75％w/w的部分。
10.权利要求9的方法，其中所述组合物为食品、食品添加剂、膳食补充剂或药用食品。
11.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述组合物包含非PMF部分和PMF部分，该非PMF部分包含生理学可接受的载体或赋形剂，该PMF部分包括选自下列的一种或多种PMF：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
12.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述组合物包含非PMF部分和PMF部分，该非PMF部分包含生理学可接受的载体或赋形剂，该PMF部分基本上由选自下列的一种或多种的PMF组成：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
13.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述组合物包含非PMF部分和PMF部分，该非PMF部分包含生理学可接受的载体或赋形剂，该PMF部分由选自下列的一种或多种的PMF组成：
5，6，7，3′，4′-五甲氧基黄酮(橙黄酮)；
5，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮(川陈皮素)；
5，6，7，8，4′-五甲氧基黄酮(桔黄酮)；
5-羟基-6，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮(酸橙素)；
5-羟基-7，8，3′，4′-甲氧基黄酮；
5，7-二羟基-6，8，3′，4′-四甲氧基黄酮；
5，7，8，3′，4′-五甲氧基黄酮；
5，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮；
5-羟基-3，6，7，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；
5-羟基-6，7，8，4′-四甲氧基黄酮；
5，6，7，4′-四甲氧基黄酮；
7-羟基-3，5，6，8，3′，4′-六甲氧基黄酮；和
7-羟基-3，5，6，3′，4′-五甲氧基黄酮。
14.权利要求9的方法，其中将所述组合物口服施用至个体。
15.权利要求14的方法，其中以干燥形式施用所述组合物。
16.权利要求14的方法，其中以液体形式施用所述组合物。
17.权利要求14的方法，其中所述个体是人。
18.权利要求14的方法，其中所述个体是马。
19.权利要求14的方法，其中所述个体是狗。
20.权利要求17的方法，其中将所述组合物中约50mg至约1000mgPMF部分施用至所述个体。
21.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述非PMF部分包含生物活性成分。
22.利要求21的方法，其中所述生物活性成分为姜提取物。
23.权利要求1-5中任一项的方法，其中在所述个体运动前约2小时内、约1小时或约30分钟内施用所述组合物。
24.权利要求1-5中任一项的方法，其中在所述个体运动时施用所述组合物。
25.一种减少个体的运动后恢复时间的方法，该方法包括向个体施用有效量的包含姜提取物的组合物以减少该个体从运动中恢复所需的时间，其中在该个体运动之前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内施用该组合物。
26.一种提高个体的运动表现的方法，该方法包括向该个体施用一定量的包含姜提取物的组合物，其中所施用的该组合物的量可有效地提高该个体的运动表现，其中在该个体运动之前、在运动过程中、或在运动后约20分钟内施用该组合物。
27.权利要求25的方法，其中所述姜提取物还包含橙皮提取物。
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