CN101198321A - 骨髓祖红细胞分化诱导剂 - Google Patents
骨髓祖红细胞分化诱导剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101198321A CN101198321A CNA2006800218077A CN200680021807A CN101198321A CN 101198321 A CN101198321 A CN 101198321A CN A2006800218077 A CNA2006800218077 A CN A2006800218077A CN 200680021807 A CN200680021807 A CN 200680021807A CN 101198321 A CN101198321 A CN 101198321A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- erythropoietin
- anemia
- sample material
- hemopoietic factor
- arginine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 title description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 76
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 75
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims abstract description 70
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 21
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 178
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 claims description 99
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 80
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 69
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 69
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 69
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 46
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 38
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 34
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 24
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 21
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 claims description 17
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000488 activin Substances 0.000 claims description 14
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 claims description 13
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 206010058116 Nephrogenic anaemia Diseases 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000013329 compounding Methods 0.000 claims description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 102100031939 Erythropoietin Human genes 0.000 description 112
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 66
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 65
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 25
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 7
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 102100033183 Epithelial membrane protein 1 Human genes 0.000 description 5
- 101000850989 Homo sapiens Epithelial membrane protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 5
- 210000002960 bfu-e Anatomy 0.000 description 5
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 101150098072 20 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 4
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 4
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 description 4
- 101710177504 Kit ligand Proteins 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000000913 erythropoietic effect Effects 0.000 description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- -1 produces in kidney Chemical compound 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 3
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 3
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 208000008203 tachypnea Diseases 0.000 description 3
- 206010043089 tachypnoea Diseases 0.000 description 3
- 210000001694 thigh bone Anatomy 0.000 description 3
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010013183 Dislocation of vertebra Diseases 0.000 description 2
- 108010074604 Epoetin Alfa Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036581 Haemorrhagic anaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010021074 Hypoplastic anaemia Diseases 0.000 description 2
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 description 2
- 208000015710 Iron-Deficiency Anemia Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000003005 anticarcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 2
- 108010019691 inhibin beta A subunit Proteins 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N (13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl) 3-phenylpropanoate Chemical compound CC12CCC(C3CCC(=O)C=C3CC3)C3C1CCC2OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N Arginine hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- 101000957724 Catostomus commersonii Corticoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 108010075944 Erythropoietin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100036509 Erythropoietin receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 1
- 229960003388 epoetin alfa Drugs 0.000 description 1
- 108010002601 epoetin beta Proteins 0.000 description 1
- 229960004579 epoetin beta Drugs 0.000 description 1
- 229940089118 epogen Drugs 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000001295 genetical effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000002650 habitual effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010013846 hematide Proteins 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940027278 hetastarch Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000000231 kidney cortex Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000468 rubriblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012929 tonicity agent Substances 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
- G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明提供一种含精氨酸作为有效成分的骨髓祖红细胞的分化诱导剂，以及含该分化诱导剂的贫血治疗剂。该分化诱导剂是一种安全性高、可口服给药，而且具有广泛适用性的优异的物质。
Description
技术领域
本发明涉及一种骨髓祖红细胞的分化诱导剂，以及使用该分化诱导剂的贫血治疗剂。本发明还涉及一种造血因子产生促进剂以及筛选造血因子产生促进剂的增强物质或抑制物质的方法。
背景技术
红细胞生成是为了维持红细胞数的稳态所必需的过程。红细胞的平均寿命对于人约为120天，老化的红细胞持续地从循环系统中除去，因此在成人体内每天要新生成约千亿个红细胞。关于红细胞的生成有很多研究，记载在许多书籍中，但是作为代表例的“血液学中外医学社”的精要如下所述。
在骨髓中存在可分化到各种血细胞系的多效能干细胞，多效能干细胞的一部分分化成决定向红细胞系方向分化的祖红细胞。作为祖红细胞，所认定的最幼年的是BFU-E(红细胞爆发集落形成单位，burstforming unit-erythroid)和进一步微分化的CFU-E(红细胞集落形成单位，colony forming unit-erythroid)。CFU-E以后，向原红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞分裂的同时分化，去核后由网织红细胞成熟为红细胞。如果达到BFU-E、CFU-E的阶段，则完全决定了向红细胞系分化的方向，不会分化到红细胞系以外的血细胞系。因此，如果增加BFU-E、CFU-E数，则促进红细胞生成。
红细胞生成，主要是通过造血因子的红细胞生成素(Erythropoetin；EPO)来维持稳态。EPO主要在肾脏中产生，在血液中循环，通过作用于骨髓中的CFU-E刺激增殖、分化，从而促进红细胞生成。如果产生的EPO不能达到正常水平而不足，则CFU-E减少，红细胞生成降低，从而导致贫血。贫血是血红蛋白浓度不足而不能满足身体内对氧输送要求的病症，表现为乏力、疲倦、气促、头晕眼花、心悸等临床症状，因此希望改善症状。已知各种疾病会产生由EPO不足引起的贫血，最典型的例子为肾病。慢性肾衰竭患者由于肾脏受损而使EPO的产生降低，因此表现为贫血。慢性肾衰竭患者的大多数是需要用频繁的透析来代替肾功能的透析患者，然而透析患者的9成为贫血。目前，作为贫血的治疗方法，应用较广的是重组人EPO(rHuEPO)的给药。对透析患者的9成给予rHuEPO，可确认对其中的大多数患者能取得贫血改善的效果。
rHuEPO的贫血改善效果较高，但是随着临床应用的扩大，出现了多个问题。一个是长期治疗的费用问题。典型的rHuEPO给药量最大为9000国际单位/周，药价为约12,000日元，即使不治疗贫血的原始疾病而长期地给药，在费用方面对于患者、保险制度均有较大负担。另外，由于EPO必须静脉内给药，给药时每次到医院就诊等患者的负担较大也是问题。另外，尽管rHuEPO的给药可提高血液中EPO浓度，但是已知对于EPO的反应较弱、对于贫血改善需要高给药量的rHuEPO，或者几乎未发现贫血改善的患者(这些患者称为EPO不应答性患者)也存在1～2成左右。对于EPO不应答性患者的贫血改善，认为以与EPO不同的作用机制增加CFU-E的骨髓祖红细胞的分化诱导剂是有效的。另外，还期待通过并用骨髓祖红细胞的分化诱导剂取得减少rHuEPO的必需给药量的效果。
另外，对于采取自己的血液，并贮藏起来供将来使用的人(自己血液贮藏者)，也可用作采血后迅速促进造血作用的手段。
另一方面，已知祖红细胞还可以通过除EPO以外的多个造血因子来促进增殖、分化。已知造血因子的活化素、IGF-1，与EPO协调地对CFU-E作用，促进增殖、分化。(Blood，1992，Nov 15；80(10)：2503-12.)另外，已知造血因子的SCF，作用于由CFU-E未分化的祖红细胞即BFU-E，促进增殖、分化。(Blood，1991，Oct 15；78(8)：1975-80.)
这些活化素、IGF-1、SCF，作用于与EPO不同的受体来增加CFU-E，因此对EPO不应答性患者的给药可期待改善贫血。但是，造血因子的重组蛋白质的给药与EPO一样为非口服给药，所以给药时需到医院就诊等，患者的负担较大。另外，已知一般使多个造血因子同时作用时显示出协同作用，但是并用多个造血因子在费用方面对患者的负担较大。
由以上可知，如果出现具有同时促进活化素、IGF-1、SCF产生的作用的药物，则可期待成为改善目前临床上存在的问题的贫血治疗剂。
非专利文献1公开了，对正常大鼠反复给予精氨酸，结果血红蛋白和红细胞数增加，但这是红细胞新生(造血)亢进效果、或是红细胞寿命亢进效果，其作用机制不明确，因此其对何种贫血症有效的临床有用性不清楚。非专利文献2公开了，对肾性贫血患者给予精氨酸，结果改善了贫血状态(红细胞数接近正常水平)，表述其作用机制为精氨酸促进肾脏EPO的产生。因此，可以理所当然而且容易地类推出非专利文献1的正常大鼠所观察到的红细胞数增加现象，是由于精氨酸促进了大鼠肾脏的EPO的产生。即，对于该领域的研究者来说，难以预见到精氨酸直接作用于骨髓而具有促进祖红细胞增殖的造血作用。另外，可理所当然地总结认为精氨酸有效的贫血症，限于与促进EPO产生的治疗效果有关联的贫血症。由以上可知，下述内容是不能达到的：精氨酸具有骨髓造血作用、对于EPO不应答性患者的贫血治疗也可适用、与EPO的协同作用可降低EPO给药量等。
非专利文献3中公开了，如果往猪原代肝细胞培养的培养基中以高浓度添加精氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸，则增加IGF-1的基因表达。这仅限于研究氨基酸对肝细胞的作用，其关于对肝脏以外的细胞的作用或者对红细胞生成的作用没有显示出任何教导。
非专利文献4中公开了，如果往成骨细胞样细胞株即MC3T3-E1细胞中添加精氨酸，则增加IGF-1的分泌量，进一步高浓度添加则增加基因表达。由于成骨细胞与骨形成相关，因此认为精氨酸通过IGF-1产生的亢进，有促进骨形成的可能性的启示。即，该研究着眼于对骨代谢调节的作用，论文中没有任何关于对红细胞生成的作用的教导。
非专利文献1：Int.J.Toxicol.，2004，23：101-105
非专利文献2：医学のぁゅみ2004，211，No.8
非专利文献3：J.Nutr.，1999，129；1298-1306
非专利文献4：Bone，1998，23；103-109
发明内容
本发明的目的是提供一种骨髓祖红细胞的分化诱导剂。
本发明的另一目的是提供一种贫血治疗剂。
本发明的又一目的是提供一种造血因子产生促进剂。
本发明的再一目的是提供一种筛选造血因子产生促进剂的增强物质或抑制物质的方法。
本发明人探索、研究可解决上述问题的药物，结果新发现氨基酸的精氨酸具有CFU-E增加作用，从而完成本发明。
本发明人还新发现，氨基酸的精氨酸通过促进骨髓细胞的活化素、IGF-1、SCF的生成而具有CFU-E增加作用，从而完成本发明。
更详细地是，测定CFU-E的方法中，一般常用使用甲基纤维素半固体培养基的离体集落分析法(colony assay)，这是发现CFU-E增加作用的最合适的实验体系。本发明人使用该方法，测定往分离的小鼠骨髓细胞中添加精氨酸600μM时的CFU-E集落数，结果发现与血液中平均精氨酸浓度170μM相比，CFU-E数显著增加。由于大鼠口服给药单次给予1.2g/kg精氨酸在血液中浓度达到600μM左右，因此经口服给药后可期待给药量依存性的CFU-E数增加。对于人，通过口服给药，也可期待血液中精氨酸浓度依存性的CFU-E数增加。
因此，提供以下所示的发明。
(1)骨髓祖红细胞的分化诱导剂，其含有精氨酸作为有效成分。
(2)贫血治疗剂，其含有上述(1)所述的分化诱导剂。
(3)(2)所述的贫血治疗剂，其用于血液、腹膜透析时的给药。
(4)(2)所述的贫血治疗剂，其用于口服给药。
(5)(2)所述的贫血治疗剂，其用于肠道给药。
(6)(2)～(5)中任一项所述的贫血治疗剂，其用于治疗肾性贫血。
(7)(2)～(5)中任一项所述的贫血治疗剂，其用于红细胞生成素不应答性患者。
(8)(2)～(7)中任一项所述的贫血治疗剂，其由进一步组合红细胞生成素样物质而成。
(9)(8)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
(10)(8)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
(11)(8)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
(12)(8)～(11)中任一项所述的贫血治疗剂，其特征在于，其为配合剂。
(13)(8)所述的贫血治疗剂，其特征在于，其为由含精氨酸的药物和含红细胞生成素样物质的药物组成的试剂盒。
(14)(13)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
(15)(13)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
(16)(13)所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
(17)红细胞生成素样物质效果增强剂，其含有精氨酸作为有效成分。
(18)(17)所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
(19)(17)所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
(20)(17)所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
(21)红细胞生成素样物质给药量减量剂，其含有精氨酸作为有效成分。
(22)(21)所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
(23)(21)所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
(24)(21)所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
(25)自己血液贮藏者用造血促进剂，其含有精氨酸作为有效成分。
(26)造血因子产生促进剂，其含有精氨酸作为有效成分。
(27)(26)所述的造血因子产生促进剂，其中，造血因子选自活化素、SCF和IGF-1中的至少一种。
(28)(26)所述的造血因子产生促进剂，其促进骨髓内造血因子的产生。
(29)筛选上述(26)所述的造血因子产生促进剂的增强物质的方法，包括：
在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，比较添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性的步骤，以及
选择添加被检物质时显示出高造血因子产生促进活性的被检物质的步骤。
(30)筛选上述(26)所述的造血因子产生促进剂的抑制物质的方法，包括：
在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，比较添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性的步骤，以及
选择添加被检物质时显示出低造血因子产生促进活性的被检物质的步骤。
附图说明
[图1]表示精氨酸的CFU-E增加作用。图1(A)表示在最大作用浓度1U/ml的EPO存在下的精氨酸的CFU-E增加作用。图1(B)表示在EPO的浓度存在性中0.5U/ml以上时EPO为最大作用量。
[图2]表示在EPO模拟肽存在下的精氨酸的CFU-E增加作用。图2(A)表示在最大作用浓度30μM的EPO模拟肽存在下的精氨酸的CFU-E增加作用。图2(B)表示在EPO模拟肽的浓度存在性中10μM以上时EPO模拟肽为最大作用量。
[图3]表示由精氨酸引起的从肾衰竭大鼠中分离的骨髓细胞的活化素、SCF、IGF-1产生促进作用。
[图4]表示由造血因子抑制剂导致的抑制精氨酸的CFU-E增加作用。
具体实施方式
本发明的祖红细胞的分化诱导剂和造血因子产生促进剂，以精氨酸作为有效成分。作为精氨酸，可以是精氨酸和/或其生理学上可接受的盐。作为盐，有盐酸盐、枸橼酸盐、谷氨酸盐等，但并不受这些盐类的限定。关于有效成分的异构体，可使用L-体、D-体以及DL体中的任一种，但从天然存在的观点考虑优选L-体。例如，可以一并含有作为精氨酸的游离体的L-精氨酸和L-精氨酸盐酸盐。
本发明的祖红细胞的分化诱导剂和造血因子产生促进剂可以制备成公知的或将来开发的各种药物制剂的形式，例如：口服给药、腹腔内给药、经皮给药、皮下给药、静脉给药、吸入给药等各种给药形式。本发明的祖红细胞的分化诱导剂和造血因子产生促进剂可单独使用精氨酸，但是作为将精氨酸作为有效成分的药物制剂，可以适当采用公知的或将来开发的方法制成各种形式。
作为本发明的祖红细胞的分化诱导剂和造血因子产生促进剂的给药方法，都没有特别的限制，但是优选口服给药。这时，给药量根据被给药患者的贫血指标即血红蛋白浓度、年龄等而不同，对于一般成年人，给药量为每天0.1～12g左右，更优选为0.5～6g左右。
本发明的祖红细胞的分化诱导剂和造血因子产生促进剂，可用作由红细胞生成的降低引起的各种疾病的治疗和预防中所用的药物的有效成分或食品、药膳(medical food)的构成成分。预期本发明的祖红细胞的分化诱导剂为有效的疾病为，肾性贫血、缺铁性贫血、溶血性贫血、再生不良性贫血、恶性贫血、失血性贫血和伴随着抗癌剂治疗的贫血。其中，对肾性贫血，特别是EPO不应答性的肾性贫血的治疗是有用的。
本发明中的EPO不应答性是指，即使给予有效量的EPO也不能发现充分的效果的状态，并不是特别用来限定EPO的给药量的。优选指EPO的给药量为9000以上国际单位/周，也未发现充分的效果的状态。未发现充分的效果的状态是指，优选4～8周期间Ht值的上升不足3％的状态。一般，EPO不应答性患者的定义根据种族、生活习惯等而不同，本发明并不特别限于这些定义。例如，美国的准则(guideline)上定义为，以300-450国际单位/kg/周给予EPO 4～6个月，Hb仍然没有达到10～12g/dl(Am J Kidney Dis 30 Suppl.3 1997)；一般的用法用量150-300国际单位/kg/周给予EPO 2个月，Hb仍然没有上升2g/dl、Hb仍然没有达到10～12g/dl的即为EPO不应答性患者(EPOGEN包装说明书)。另外，欧洲的准则上定义为，300国际单位/kg/周以上皮下给药仍然没有达到目标Ht值的患者(Nephrol DialTransplant(1999)14 Suppl 5：25-27)。在日本认为，以EPO的必要给药量9000以上国际单位/周，给药4～8周，Ht值的上升不足3％的情形即为EPO不应答性。除上述以外的国家中所推荐的EPO不应答性定义为，以最大用法用量仍未能得到预期的贫血改善效果的情况。对于这样的EPO不应答性患者，必需给予本发明的祖红细胞的分化诱导剂。
EPO不应答性患者以外的给予EPO的患者中，EPO必要给药量不足最大用法用量(优选1500～9000国际单位/周)的患者，可期待由本发明的祖红细胞的分化诱导剂所产生的贫血改善的增强作用。因此，EPO单独进行贫血改善治疗时，预期可减少EPO的必要给药量。由本发明的祖红细胞的分化诱导剂的给药所产生的EPO增强和EPO减量在以下情况下有望都是有效的：从EPO给药开始时以通常EPO给药量，在通常给药期间不能确认充分的贫血改善(4～8周后Ht值的上升不足3％)的情况，到之后的EPO的给药量为通常给药的最高给药量，在通常给药期间仍不能确认充分的贫血改善的情况。作为以上的EPO增强和EPO减量给药方法，可以采用口服给药和非口服给药。另外，通过给予本发明的祖红细胞的分化诱导剂，对于肾性贫血患者中的未进行透析导入的患者和进行透析导入的患者，都可期待贫血改善，作为给药方法，可以采用口服给药和非口服给药。
红细胞生成素样物质是指，在往生物体内给药、被生物体摄取等情形，在生物体内发挥、诱导红细胞生成素样作用的物质。
例如，含有红细胞生成素、红细胞生成素模拟肽、红细胞生成素产生促进剂等，但并不受这些的限定。
红细胞生成素可以是天然型、基因重组型、修饰型的任一种。例如，如果是基因重组型，则可以是通过来自人肝细胞mRNA的人红细胞生成素cDNA的表达，在中国仓鼠卵巢细胞产生的165个氨基酸残基(C809H1301N229O240S5；分子量：18,235.96)所构成的糖蛋白(分子量：约30,000)，即红细胞生成素α(基因重组)(Epoetin Alfa(geneticalrecombination))或红细胞生成素β(基因重组)(Epoetin Beta(genetical recombination))等。
红细胞生成素模拟肽，是与EPO受体结合而活化，或者是作为EPO激动剂作用的肽。例如，WO96/40749中公开了包含长度为10～40个氨基酸残基的肽，其含有氨基酸序列X3X4GPX6TWX7X8，这里各氨基酸用标准的一个文字省略表示，X3为C；X4为R、H、L或W；X5为M、F或I；X6独立选自20个基因编码的L-氨基酸；X7为D、E、I、L或V；以及X8为C。
更详细的是，EPO模拟肽含有满足下述要件的肽成分。
1.长度为10～40个氨基酸残基的肽，其与红细胞生成素受体结合，含有氨基酸序列X3X4GPX6TWX7X8，这里各氨基酸用标准的一个文字省略表示，X6独立选自20个基因编码的L-氨基酸中的任一种；X3为C；X4为R、H、L或W；X5为M、F或I；X7为D、E、I、L或V；以及X8为C。
2.1所述的肽，其含有各氨基酸用标准的一个文字省略表示的氨基酸序列YX2X3X4X5GPX6TWX7X8，X2和X6分别独立选自20个基因编码的L-氨基酸中的任一种；X3为C；X4为R、H、L或W；X5为M、F或I；X7为D、E、I、L或V；以及X8为C。
3.2所述的肽，其含有氨基酸序列X1YX2X3X4X5GPX6TWX7X8X9X10X11，这里各氨基酸用标准的一个文字省略表示，X1、X2、X6、X9、X10和X11分别独立选自20个基因编码的L-氨基酸中的任一种；X3为C；X4为R、H、L或W；X5为M、F或I；X7为D、E、I、L或V；以及X8为C。
4.3所述的肽，其中，X4为R或H；X5为F或M；X6为I、L、T、M、E或V；X7为D或V；X9为G、K、L、Q、R、S或T；以及X10为A、G、P、R或Y。
5.4所述的肽，其中，X1为D、E、L、N、S、T或V；X2为A、H、K、L、M、S或T；X4为R或H；X9为K、R、S或T；以及X10为P。
6.1所述的肽，其选自下述组：
7.1所述的肽，其选自下述组：
8.1所述的肽，该氨基酸序列被环化。
9.8所述的肽，其选自下述组：
10.1所述的肽，该氨基酸序列进行了二聚合。
11.10所述的肽，该肽包含下述的氨基酸序列：
进一步，EPO模拟肽还包含AFFYMAX社开发的HEMATIDETM、实施例2中记载的EMP1。
另外，EPO产生促进剂可以是通过对生物体内给药而诱导产生生物体先天性的EPO的药物，例如为HIF(低氧诱导因子，Hypoxia-Inducible Factor)稳定剂等，只要是具有HIF稳定化作用的物质即可以为任何结构。例如，具体为FibroGen社开发的FG2216(日本名YM300)等。此外，还可以是具有低氧诱导因子脯氨酸氢氧化酶抑制剂以外的作用机制的EPO产生促进药物。
另一方面，本发明的造血因子产生促进剂，可以用作由红细胞生成的降低而引起的各种疾病的治疗或预防中所用的药品的有效成分，或者用作食品、药膳的构成成分。预期本发明的造血因子产生促进剂为有效的疾病为，肾性贫血、缺铁性贫血、溶血性贫血、再生不良性贫血、恶性贫血、失血性贫血和伴随着抗癌剂治疗的贫血。
作为本发明的有效成分在药物中的使用方法，可采用口服给药或非口服给药，但给药时，可以将有效成分与适于口服给药、注射等给药方法的固体或液体药用无毒载体混合后，以惯用的药物制剂的形式给药。作为这样的制剂，例如可列举：片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等固体制剂；溶液剂、混悬剂、乳剂等液体制剂；冻干制剂等，这些制剂可采用制剂上常用的方法进行制备。作为上述的药用无毒载体，例如可列举：葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羟乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯、氨基酸、明胶、白蛋白、水、生理盐水等。另外，根据需要还可以适当添加稳定剂、润湿剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂(tonicityagent)等常用的添加剂。
根据本发明，可提供安全性高、可口服给药，而且具有广泛适用性的祖红细胞的分化诱导剂。
本发明的祖红细胞的分化诱导剂，预期可对贫血患者的贫血进行预防或治疗，并改善伴随贫血的乏力、疲倦、气促、头晕目眩、心悸等临床症状。另外，如果口服给药，则可以消除皮下或静脉注射时的疼痛，并且不用到医院就诊而可以在家里每日简单服用，因此预期可产生确实的贫血改善效果。此外，由于是生物体内存在的氨基酸，所以服用时未发现伴有副作用，不会使肾功能恶化，从而可以用来治疗。
例如，对于已经接受用rHuEPO进行治疗的患者，对必要给药量不足最大用法用量(优选1500～9000国际单位/周)的患者，通过加入本发明的有效成分给药，预期可减少EPO必要给药量，并在费用、皮下或静脉注射所带来疼痛等方面降低患者的负担。另外，也可预期对于EPO必要给药量在最大用法用量以上(优选9000国际单位/周以上)的EPO不应答性患者的贫血改善效果。此外，今后，在EPO模拟肽或EPO产生促进剂的治疗普及时，通过加入本发明的有效成分给药，预期可减少必要给药量等。
使用本发明的造血因子产生促进剂，可筛选其激动剂，即促进本发明的造血因子产生促进剂所具有的造血因子产生促进活性的物质(以下，也称为“造血因子产生促进活性促进剂”)。这样的造血因子产生促进活性促进剂，在与由造血促进(系由生物体内存在的精氨酸促进造血因子产生)不足等导致的疾病有关时，预期可开发成对该疾病的治疗药。这里，造血因子产生促进活性是指，某分子通过造血因子基因表达而促进产生的作用。
造血因子产生促进活性促进剂，例如可由以下的步骤筛选，但并不限于这些工序。
i)在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，测定添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性。
ii)比较往上述测定体系中仅添加精氨酸时的造血因子产生促进活性，和添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性。
iii)选择添加被检物质时显示出高造血因子产生促进活性的被检物质。
使用本发明的造血因子产生促进剂，可筛选其拮抗剂，即抑制本发明的造血因子产生促进剂所具有的造血因子产生促进活性的物质(以下，也称为“造血因子产生促进活性抑制剂”)。这样的造血因子产生促进活性抑制剂，在与由造血促进(系由生物体内存在的精氨酸促进造血因子产生)导致的疾病有关时，预期可开发成对该疾病的治疗药。
造血因子产生促进活性抑制剂，例如可由以下的步骤筛选，但并不限于这些工序。
i)在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，测定添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性。
ii)比较往上述测定体系中仅添加精氨酸时的造血因子产生促进活性，和添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性。
iii)选择添加被检物质时显示出低造血因子产生促进活性的被检物质。
造血因子产生促进活性的测定，例如可使用从动物分离的细胞来进行，上述细胞如果是造血因子产生促进活性测定体系可以检出添加被检物质后的基因表达、蛋白质产生的细胞，则可以没有特别限制地使用。作为造血因子产生促进活性测定体系，除了实施例中记载的定量PCR法等以外，还可以使用基因芯片法、微阵列法、原位杂交法、RNase保护试验法、RNA印迹法、差别展示法、SDS丙烯酰胺凝胶电泳法、蛋白质印迹法、柱色谱法等方法。
造血因子产生促进剂，可以任意含有精氨酸及其生理学上可接受的盐，也可以是这些物质的任意混合物。另外，被检物质的浓度，只要对造血因子产生促进活性测定体系不产生影响，则可以是任意浓度。另外，被检物质可以是单一的化合物，也可以是含有多种化合物的混合物或组合物。而且，精氨酸和被检物质往造血因子产生促进活性测定体系中的添加，通常是同时进行，但只要可以检出精氨酸的造血因子产生促进活性，则也可以不同时进行添加。
通过上述操作，或者反复上述操作，可以筛选抑制或者促进本发明的造血因子产生促进剂所具有的造血因子产生促进活性的物质以及含有该物质的组合物等。
如上述那样所选择的造血因子产生促进活性抑制剂和造血因子产生促进活性促进剂，作为精氨酸的造血因子产生促进活性的新型调节物质，预期可用作与造血因子产生促进活性相关的各种疾病的治疗药或其辅助药。
根据本发明可提供安全性高、可口服给药，而且具有广泛适用性的造血因子产生促进剂。
本发明的造血因子产生促进剂，预期可用于贫血患者的贫血的预防或治疗，并改善伴随贫血的乏力、疲倦、气促、头晕目眩、心悸等临床症状。另外，如果口服给药，则可以消除皮下或静脉注射时的疼痛，并且不用到医院就诊而可以在家里每日简单服用，因此预期可产生可靠的贫血改善效果。此外，由于是生物体内存在的氨基酸，所以服用时未发现伴有副作用，不会使肾功能恶化，从而可以用来进行治疗。
以下列举实施例更具体地说明本发明，但本发明并不受以下实施例的限定。
实施例
[实施例1]精氨酸的CFU-E增加作用
离体小鼠CFU-E集落分析法按下述的方法进行。用颈椎脱臼法处死10周龄的BDF-1雌性小鼠(日本チャ一ルズリバ一株式会社)后，从大腿骨分离骨髓细胞，混悬在含10％FCS(JRHバィォサィェンス)的IMDM培养基(ィン ビトロジェン株式会社)中。将骨髓细胞在1500rpm，4℃条件下，离心10分钟后，将沉淀的骨髓细胞置换到不含氨基酸的IMDM培养基中，测定细胞数。往直径3.5cm的盘(ナルジェヌンクィンタ一ナショナル )中，加入1ml混悬了骨髓细胞的精氨酸浓度170μM的甲基纤维素半固体培养基{1国际单位/mlrHuEPO(中外制药株式会社)、100μM2-巯基乙醇(和光纯药工业株式会社)、24％FCS(JRHバィォサィェンス)、0.8％甲基纤维素(ステムセルテクノロジ一社含甲基纤维素的IMDM溶液M3134)、2％BSA(シグマァルドリッチジャパン株式会社)、骨髓细胞2.2×105个/ml}。(与含有24％FCS的氨基酸组成为1/3浓度的IMDM培养基同等)。除上述组成外，还继续追加精氨酸至最终浓度为600μM，在37℃、5％CO2条件下培养48小时后，用倒置显微镜测定CFU-E集落数。对于各条件以N＝4进行。用不成对t检验(Unpaired t-test)进行统计学检验。
CFU-E集落分析的结果如图1(A)所示。图中，*P＜0.05。数据用平均值±SEM表示。纵轴为每2.2×105个骨髓细胞的CFU-E集落数。
图1中，添加精氨酸使其最终浓度为600μM时，CFU-E数显示为增加。因此可明确，精氨酸直接作用于骨髓细胞，从而使CFU-E数增加。
在EPO以充分量存在的条件下，由于精氨酸增加CFU-E数，因此预期可产生EPO效果增强作用和EPO给药量减量效果。如在与图1(A)相同的条件下实施的图1(B)的结果，0.5U/ml以上为最大作用量，因此可知1U/ml的EPO为充分量。与EPO模拟肽、EPO产生促进剂的组合也同样。以下详述。
认为EPO通过与干红细胞膜上存在的EPO受体结合从而对红细胞生成产生作用。如图1(B)所示，EPO浓度依存性地使干红细胞CFU-E增加，如果分别达到一定浓度则有最大活性，即使再进一步提高浓度仍然为最大活性。本发明中所发现的精氨酸不论是否存在那样充分量的EPO，如果同时作用则使CFU-E进一步增加。因此可知，虽然EPO和精氨酸作用点不同，但两者发挥协同作用。
如上所述，EPO不应答性是指即使给予有效量的EPO也不能发现充分的效果的状态，在这样EPO单独不能得到充分效果的情形下，通过给予精氨酸，则可以得到超过EPO最大活性的高效。另外，对于EPO不应答性以外的患者，在EPO必要给药量较多时，通过并用精氨酸来增强EPO效果，其结果可以减少EPO给药量。即，可用作“EPO效果增强剂”或“EPO给药量减量剂”。
EPO与EPO模拟肽的作用点均为共同的EPO受体，因此上述EPO与精氨酸的关系，对于EPO模拟肽也完全相同。即，可用作“EPO模拟肽效果增强剂”或“EPO模拟肽给药量减量剂”。
生物体内EPO在肾脏内产生，而在伴随着肾性贫血症等疾病产生的、红血球生成中必需的EPO不足的情况下，EPO作为药品给药。但是，即使是肾性贫血症、肾脏也不是不能产生EPO，如果使用肾脏EPO产生促进剂可使EPO产生增加，则也可预期与EPO给药相同的治疗效果。本发明的精氨酸，无论是对将EPO作为药品给药的EPO，还是对来自肾脏的经产生促进的先天性EPO，都是同等的，因此可以与前述FG2216等EPO产生促进剂并用。在此情况下，可预期图1所示的效果，与单独给药相比可使效果增强，或者可减少给药量。即，可用作“EPO产生促进剂效果增强剂”或“EPO产生促进剂给药量减量剂”。
[实施例2]精氨酸的CFU-E增加作用(EPO模拟肽)
作为EPO模拟肽的代表例的引用文献(Science Vol.273，458-463，1996的表1等)中记载的EMP1(GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG-NH2，C6-C15二硫键)，可使用引用文献(Biochemistry Vol.37(11)，3699-3710的3700-3701页)中记载的方法进行制备。
用颈椎脱臼法处死10周龄的BDF-1雌性小鼠(日本チャ一ルズリバ一株式会社)后，从大腿骨分离骨髓细胞，混悬在含10％FCS(JRHバィォサィェンス)的IMDM培养基(ィンビトロジェン株式会社)中。将骨髓细胞在1500rpm，4℃条件下，离心10分钟后，将沉淀的骨髓细胞置换到不含氨基酸的IMDM培养基中，测定细胞数。往直径3.5cm的盘(ナルジェヌンクィンタ一ナショナル)中，加入1ml混悬了骨髓细胞的精氨酸浓度170μM的甲基纤维素半固体培养基{30μM的EMP1、100μM的2-巯基乙醇(和光纯药工业株式会社)、24％FCS(JRHバィォサィェンス)、0.8％甲基纤维素(ステムセルテクノロジ一社含甲基纤维素的IMDM溶液M3134)、2％BSA(シグマァルドリッチジャパン株式会社)、骨髓细胞2.2×105个/ml}。(与含有24％FCS的氨基酸组成为1/3浓度的IMDM培养基同等)。除上述组成外，在30μM的EMP1的存在下继续追加精氨酸至最终浓度为770μM，在37℃、5％CO2条件下培养48小时后，用倒置显微镜测定CFU-E集落数。对于各条件以N＝4进行。用不成对t检验(Unpaired t-test)进行统计学检验。
由CFU-E集落分析的结果可知，在最大作用浓度的EMP1存在下，精氨酸显示出增加效果。
在EPO模拟肽以充分量存在的条件下，由于精氨酸增加CFU-E数，因此预期可产生EPO模拟肽效果增强作用和EPO模拟肽给药量减量效果。如在与图2(A)相同的条件下实施的图2(B)的结果，10μM以上为最大作用量，因此可知30μM的EPO模拟肽为充分量。
[实施例3]精氨酸对肾衰竭大鼠分离骨髓细胞的活化素、SCF、IGF-1的产生促进作用
肾衰竭大鼠(摘除5/6部分肾脏的大鼠)的制作如下述进行。将8周龄的Wistar雄性大鼠(日本チャ一ルズリバ一株式会社)在戊巴比妥麻醉下，将右侧肾脏全部摘除、将左侧肾脏皮质的2/3部分摘除，然后缝合。手术后，在普通饲养条件下饲养(饲料CRF-1日本チャ一ルズリバ一株式会社)，手术后第6周，用二乙醚处死肾衰竭大鼠，摘取两足大腿骨，并分离骨髓细胞。在含10％FCS的血中氨基酸浓度IMDM培养基中混悬所分离的骨髓细胞。血中氨基酸浓度IMDM培养基，制备和使用IMDM培养基中的氨基酸组成仅为如表1所示组成的培养基。
在将所制备的2×106个/ml的骨髓细胞溶液10ml，在直径10cm的盘(ナルジェヌンク社)、37℃、5％CO2条件下培养24小时。培养24小时后，加入精氨酸HCl，2小时后回收盘内的骨髓细胞，用于总RNA的纯化、cDNA的合成。
表1
| No.氨基酸 | 浓度(μM) |
| 1L-精氨酸 | 100 |
| 2L-天冬酰胺 | 50 |
| 3L-天冬氨酸 | 10 |
| 4L-胱氨酸 | 25 |
| 5L-谷氨酸 | 60 |
| 6L-谷氨酰胺 | 600 |
| 7甘氨酸 | 250 |
| 8L-组氨酸 | 70 |
| 9丙氨酸 | 387 |
| 10L-异亮氨酸 | 75 |
| 11L-亮氨酸 | 130 |
| 12L-赖氨酸 | 260 |
| 13L-蛋氨酸 | 45 |
| 14L-苯丙氨酸 | 60 |
| 15L-脯氨酸 | 130 |
| 16L-丝氨酸 | 140 |
| 17L-苏氨酸 | 160 |
| 18L-色氨酸 | 50 |
| 19L-酪氨酸 | 70 |
| 20L-缬氨酸 | 200 |
用以下的方法进行总RNA制备和cDNA合成。将每根大腿骨的骨髓细胞混悬在Isogen(株式会社日本ジ一ン)1.5ml中，然后进行匀浆(バィォ101F astPrep)。取匀浆1ml，根据Isogen中记载的方法，纯化总RNA。用生物分析仪(bioanalyzer，日本ベクトン·ディッキンソン株式会社)确认总RNA的品质。将5μg的总RNA作为模板，使用寡DT20mer引物(ィンビトロジェン社)、上标III(SuperScript III，ィンビトロジェン社)进行cDNA的合成。cDNA合成法按照上标III中所记载的方法。
用以下的定量PCR法进行造血因子mRNA的定量。基于NCBI中记录的活化素(大鼠抑制素βA，rat Inhibin betaA)、SCF、IGF-1序列(各自的GenBank检索号依次为M37482、NM021843、NM178886)，用定量PCR法合成寡核苷酸引物。对于活化素基因使用表2的序列号1和2中记载的引物；对于SCF使用表2的序列号3和4中记载的引物；对于IGF-1使用表2的序列号5和6中记载的引物。定量PCR法按照SybrGreenPCR kit(TOYOBO株式会社)记载的方法。即，以1μl的cDNA溶液作为模板，使用500nM的上述引物、SybrGreenPCR试剂盒，用ABI7700(ァプラィドバィォシステムズジャパン株式会社)进行PCR反应(94℃下1分钟后，94℃下30秒，60℃下1分钟，共40次)以及进行扩增产物的检测，计算mRNA的相对浓度。定量PCR后，用琼脂糖凝胶电泳法确认扩增产物的有无以及大小。
表2
序列号寡核苷酸引物
从肾衰竭小鼠分离骨髓细胞，添加精氨酸2小时后回收骨髓细胞，用定量PCR法对活化素、SCF、IGF-1mRNA进行定量的结果如图3所示。数据用平均值±SEM表示。纵轴为总RNA的相对mRNA量。
Pre：添加精氨酸前精氨酸浓度100μM
Ctrl：未添加精氨酸2小时精氨酸浓度100μM
A400μM：添加精氨酸2小时精氨酸浓度400μM
A600μM：添加精氨酸2小时精氨酸浓度600μM
由该结果可知，精氨酸直接作用于骨髓细胞，促进活化素、SCF、IGF-1的产生。
[实施例4]
活化素、SCF、IGF-1抑制剂对精氨酸的CFU-E增加作用的抑制
按照实施例1中记载的方法，对10周龄的BDF-1雌性小鼠(日本チャ一ルズリバ一株式会社)进行离体CFU-E集落分析。在170μM的精氨酸HCl存在下，追加精氨酸HCl至最终浓度为600μM，再进一步添加滤泡素抑制素(FSN，抗活化素，R&D社，100ng/ml)、抗SCF抗体(ペプロテック社，1μg/ml)、抗IGF-1抗体(ペプロテック社，2μg/ml)。在37℃，5％CO2条件下培养28小时后，用倒置显微镜测定CFU-E集落数。对于各条件以N＝4进行。用不成对t检验(Unpaired t-test)进行统计学检验。*P＜0.05、**P＜0.005。数据用平均值±SEM表示。
CFU-E集落分析的结果如图4所示。纵轴为每2.2×105个骨髓细胞的CFU-E集落数。
由图4可知，精氨酸的CFU-E增加作用，被滤泡素抑制素、抗SCF抗体、抗IGF-1抗体所抑制。由以上可知，精氨酸作用于骨髓细胞，通过促进造血因子的活化素、SCF、IGF-1的产生，从而使CFU-E增加。
序列表
<110>味之素株式会社
<120>骨髓祖红细胞分化诱导剂
<130>Y1N-0092
<160>43
<210>1
<211>19
<212>核酸
<400>1
gaaaacgggtatgtggaga
<210>2
<211>19
<212>核酸
<400>2
tgaaacagacggatggtga
<210>3
<211>19
<212>核酸
<400>3
tggtggacgctcttcagtt
<210>4
<211>19
<212>核酸
<400>4
catctccagcctcctcaga
<210>5
<211>17
<212>核酸
<400>5
ctacaatggacagcaat
<210>6
<211>23
<212>核酸
<400>6
gaaactctctctctttctgttgc
<210>7
<211>20
<212>PRT
<400>7
gglylcrfgpvtwdcgykgg
<210>8
<211>20
<212>PRT
<400>8
ggtyschfgpltwvckpqgg
<210>9
<211>18
<212>PRT
<400>9
ggtyschfgpltwvckpq
<210>10
<211>20
<212>PRT
<400>10
ggdyhcrmgpltwvckplgg
<210>11
<211>20
<212>PRT
<400>11
vgnymchfgpitwvcrpggg
<210>12
<211>20
<212>PRT
<400>12
ggnymchfgpitwvcrpggg
<210>13
<211>20
<212>PRT
<400>13
ggvyacrmgpitwvcsplgg
<210>14
<211>19
<212>PRT
<400>14
vgnymahmgpitwvcrpgg
<210>15
<211>18
<212>PRT
<400>15
ggphhvyacrmgpltwic
<210>16
<211>18
<212>PRT
<400>16
ggtyschfgpltwvckpq
<210>17
<211>20
<212>PRT
<400>17
gglyachmgpmtwvcqplrg
<210>18
<211>22
<212>PRT
<400>18
tiaqyicymgpetwecrpspka
<210>19
<211>13
<212>PRT
<400>19
yschfgpltwvck
<210>20
<211>11
<212>PRT
<400>20
ychfgpltwvc
<210>21
<211>20
<212>PRT
<400>21
ggtyschfgpltwvckpqgg
<210>22
<211>14
<212>PRT
<400>22
ggcrigpitwvcgg
<210>23
<211>22
<212>PRT
<400>23
lgrkyschfgpltwvcqpakkd
<210>24
<211>20
<212>PRT
<400>24
ggtaschfgpltwvckpqgg
<210>25
<211>20
<212>PRT
<400>25
ggnyycrfgpitfechptgg
<210>26
<211>20
<212>PRT
<400>26
ggeylcrmgpmtwvctpvgg
<210>27
<211>20
<212>PRT
<400>27
gglytcrmgpitwvclpagg
<210>28
<211>20
<212>PRT
<400>28
ggttschfgpltwvckpqgg
<210>29
<211>20
<212>PRT
<400>29
ggtfschfgpltwvckpqgg
<210>30
<211>20
<212>PRT
<400>30
ggtyschfgaltwvckpqgg
<210>31
<211>20
<212>PRT
<400>31
ggtyschfgplawvckpqgg
<210>32
<211>20
<212>PRT
<400>32
ggtyschfapltwvckpqgg
<210>33
<211>20
<212>PRT
<400>33
ggtyschfgpatwvckpqgg
<210>34
<211>20
<212>PRT
<400>34
ggtyschfgpltavckpqgg
<210>35
<211>20
<212>PRT
<400>35
ggtyschfgpltfvckpqgg
<210>36
<211>16
<212>PRT
<400>36
tyschfgpltwvckpq
<210>37
<211>14
<212>PRT
<400>37
yschfgpltwvckp
<210>38
<211>12
<212>PRT
<400>38
schfgpltwvck
<210>39
<211>19
<212>PRT
<400>39
ggtyscfgpltwvckpqgg
<210>40
<211>18
<212>PRT
<400>40
tyschfgpltwvckpqgg
<210>41
<211>12
<212>PRT
<400>41
yschfgpltwvc
<210>42
<211>20
<212>PRT
<400>42
ggtyschfgpltfvckpqgg
<210>43
<211>8
<212>PRT
<400>43
hfgpltwv
Claims (30)
1.骨髓祖红细胞的分化诱导剂，其含有精氨酸作为有效成分。
2.贫血治疗剂，其含有权利要求1所述的分化诱导剂。
3.权利要求2所述的贫血治疗剂，其用于血液、腹膜透析时的给药。
4.权利要求2所述的贫血治疗剂，其用于口服给药。
5.权利要求2所述的贫血治疗剂，其用于肠道给药。
6.权利要求2～5中任一项所述的贫血治疗剂，其用于治疗肾性贫血。
7.权利要求2～5中任一项所述的贫血治疗剂，其用于红细胞生成素不应答性患者。
8.权利要求2～7中任一项所述的贫血治疗剂，其由进一步组合红细胞生成素样物质而形成。
9.权利要求8所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
10.权利要求8所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
11.权利要求8所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
12.权利要求8～11中任一项所述的贫血治疗剂，其特征在于，其为配合剂。
13.权利要求8所述的贫血治疗剂，其特征在于，其为由含精氨酸的药物和含红细胞生成素样物质的药物组成的试剂盒。
14.权利要求13所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
15.权利要求13所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
16.权利要求13所述的贫血治疗剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
17.红细胞生成素样物质效果增强剂，其含有精氨酸作为有效成分。
18.权利要求17所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
19.权利要求17所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
20.权利要求17所述的效果增强剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
21.红细胞生成素样物质给药量减量剂，其含有精氨酸作为有效成分。
22.权利要求21所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素。
23.权利要求21所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素模拟肽。
24.权利要求21所述的给药量减量剂，其中，红细胞生成素样物质为红细胞生成素产生促进剂。
25.自己血液贮藏者用造血促进剂，其含有精氨酸作为有效成分。
26.造血因子产生促进剂，其含有精氨酸作为有效成分。
27.权利要求26所述的造血因子产生促进剂，其中，造血因子选自活化素、SCF和IGF-1中的至少一种。
28.权利要求26所述的造血因子产生促进剂，其促进骨髓内造血因子的产生。
29.筛选权利要求26所述的造血因子产生促进剂的增强物质的方法，包括：
在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，比较添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性的步骤，以及
选择添加被检物质时显示出高造血因子产生促进活性的被检物质的步骤。
30.筛选权利要求26所述的造血因子产生促进剂的抑制物质的方法，包括：
在用于测定造血因子产生促进活性的造血因子产生促进活性测定体系中，比较添加精氨酸、或者添加精氨酸和被检物质时的造血因子产生促进活性的步骤，以及
选择添加被检物质时显示出低造血因子产生促进活性的被检物质的步骤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP128204/2005 | 2005-04-26 | ||
| JP2005128204 | 2005-04-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101198321A true CN101198321A (zh) | 2008-06-11 |
Family
ID=37214887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2006800218077A Pending CN101198321A (zh) | 2005-04-26 | 2006-04-26 | 骨髓祖红细胞分化诱导剂 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1884235A1 (zh) |
| JP (1) | JPWO2006115274A1 (zh) |
| KR (1) | KR20080003929A (zh) |
| CN (1) | CN101198321A (zh) |
| WO (1) | WO2006115274A1 (zh) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2426005T3 (es) | 2004-07-23 | 2013-10-18 | Acceleron Pharma Inc. | Polipéptidos del receptor ACTRII, procedimientos y composiciones |
| CN105001320A (zh) | 2005-11-23 | 2015-10-28 | 阿塞勒隆制药公司 | Activin-ActRIIa拮抗剂及其促进骨骼生长的应用 |
| US8128933B2 (en) | 2005-11-23 | 2012-03-06 | Acceleron Pharma, Inc. | Method of promoting bone growth by an anti-activin B antibody |
| WO2008050836A1 (fr) * | 2006-10-25 | 2008-05-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Agent destiné à l'amélioration des effets secondaires d'un agent chimiothérapeutique |
| MX2009006651A (es) * | 2006-12-18 | 2009-08-26 | Acceleron Pharma Inc | Antagonistas de activina-actrii y usos para incrementar los niveles de globulos rojo. |
| US8895016B2 (en) | 2006-12-18 | 2014-11-25 | Acceleron Pharma, Inc. | Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels |
| CN101835485B (zh) | 2007-02-01 | 2016-10-26 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素-actriia拮抗剂及在治疗或预防乳腺癌中的用途 |
| TW202021980A (zh) | 2007-02-02 | 2020-06-16 | 美商艾瑟勒朗法瑪公司 | 衍生自ActRIIB的變體與其用途 |
| ME02333B (me) | 2007-02-09 | 2013-04-30 | Acceleron Pharma Inc | FARMACEUTSKE SMEŠE KOJE SADRŽE AKTIVIN-ActRIIA ANTAGONISTE I NJIHOVA UPOTREBA U PREVENCIJI ILI LEČENJU MULTIPLOG MIJELOMA |
| CN101861161B (zh) | 2007-09-18 | 2017-04-19 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素‑actriia拮抗剂和减少或抑制fsh分泌的用途 |
| TWI748373B (zh) | 2008-08-14 | 2021-12-01 | 美商艾瑟勒朗法瑪公司 | 使用gdf阱以增加紅血球水平 |
| US8216997B2 (en) | 2008-08-14 | 2012-07-10 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators |
| MX2011013172A (es) | 2009-06-08 | 2012-04-02 | Acceleron Pharma Inc | Metodos para aumentar adipocitos termogenicos. |
| EP3805259A1 (en) | 2009-06-12 | 2021-04-14 | Acceleron Pharma Inc. | Truncated actriib-fc fusion proteins |
| CN102655872B (zh) * | 2009-08-13 | 2016-01-20 | 阿塞勒隆制药公司 | Gdf捕获物和促红细胞生成素受体激活剂联合应用以增加红细胞水平 |
| EP3332796A1 (en) | 2009-11-17 | 2018-06-13 | Acceleron Pharma Inc. | Actriib proteins and variants and uses therefore relating to utrophin induction for muscular dystrophy therapy |
| CN103298832A (zh) | 2010-11-08 | 2013-09-11 | 阿塞勒隆制药公司 | Actriia结合剂及其用途 |
| WO2014030683A1 (ja) * | 2012-08-21 | 2014-02-27 | 国立大学法人九州大学 | 貧血患者の貧血の要因を検出するためのバイオマーカー |
| CA2890217C (en) | 2012-11-02 | 2021-07-20 | Yifu FANG | Activin-actrii antagonists and uses for treating bone and other disorders |
| EP3154566B1 (en) | 2014-06-13 | 2022-08-03 | Acceleron Pharma Inc. | Actrii antagonist for the treatment or prevention of a cutaneous ulcer in a subject that has anemia |
| MA41052A (fr) | 2014-10-09 | 2017-08-15 | Celgene Corp | Traitement d'une maladie cardiovasculaire à l'aide de pièges de ligands d'actrii |
| EP4233889A3 (en) | 2014-12-03 | 2023-10-11 | Celgene Corporation | Activin-actrii antagonists and uses for treating myelodysplastic syndrome |
| JP6949350B2 (ja) * | 2017-01-30 | 2021-10-13 | 学校法人 久留米大学 | ＮＯおよびＮＯ−ｐａｔｈｗａｙ刺激によるエリスロポエチン受容体を標的とした腎性貧血に対する新規治療薬 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL185040B1 (pl) * | 1995-06-07 | 2003-02-28 | Affymax Tech Nv | Peptyd wiążący się z receptorami erytropoetyny, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ten peptyd i jego zastosowanie do wytwarzania środka leczniczego |
| TWI240627B (en) * | 1996-04-26 | 2005-10-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Erythropoietin solution preparation |
| JP3827923B2 (ja) * | 2000-06-20 | 2006-09-27 | 味の素株式会社 | 造血および栄養状態改善用アミノ酸組成物 |
-
2006
- 2006-04-26 JP JP2007514775A patent/JPWO2006115274A1/ja active Pending
- 2006-04-26 CN CNA2006800218077A patent/CN101198321A/zh active Pending
- 2006-04-26 WO PCT/JP2006/308763 patent/WO2006115274A1/ja active Application Filing
- 2006-04-26 EP EP06732369A patent/EP1884235A1/en not_active Withdrawn
- 2006-04-26 KR KR1020077027493A patent/KR20080003929A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1884235A1 (en) | 2008-02-06 |
| KR20080003929A (ko) | 2008-01-08 |
| WO2006115274A1 (ja) | 2006-11-02 |
| JPWO2006115274A1 (ja) | 2008-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101198321A (zh) | 骨髓祖红细胞分化诱导剂 | |
| Liu et al. | Sinomenine inhibits the progression of rheumatoid arthritis by regulating the secretion of inflammatory cytokines and monocyte/macrophage subsets | |
| Kivelä et al. | VEGF‐B‐induced vascular growth leads to metabolic reprogramming and ischemia resistance in the heart | |
| Vandyke et al. | Dysregulation of bone remodeling by imatinib mesylate | |
| Kaushansky | Lineage-specific hematopoietic growth factors | |
| Yang et al. | PSTPIP2 connects DNA methylation to macrophage polarization in CCL4-induced mouse model of hepatic fibrosis | |
| Savage et al. | Classical inherited bone marrow failure syndromes with high risk for myelodysplastic syndrome and acute myelogenous leukemia | |
| Polizzotti et al. | Neuregulin stimulation of cardiomyocyte regeneration in mice and human myocardium reveals a therapeutic window | |
| Zhang et al. | Epidermal growth factor receptor plays an anabolic role in bone metabolism in vivo | |
| Jaffer et al. | Regulation of mesangial cell growth by polypeptide mitogens. Inhibitory role of transforming growth factor beta. | |
| Fenton et al. | Sunitinib inhibits MEK/ERK and SAPK/JNK pathways and increases sodium/iodide symporter expression in papillary thyroid cancer | |
| Liang et al. | Inhibition of osteoblastic Smurf1 promotes bone formation in mouse models of distinctive age-related osteoporosis | |
| Mukhopadhyay et al. | Genetic deletion of the tumor necrosis factor receptor p60 or p80 abrogates ligand-mediated activation of nuclear factor-κB and of mitogen-activated protein kinases in macrophages | |
| EA023912B1 (ru) | Лечение воспалительных состояний | |
| Huang et al. | Critical role of synovial tissue–resident macrophage niche in joint homeostasis and suppression of chronic inflammation | |
| JPH07505139A (ja) | 肝成長因子レセプター | |
| KR20220164079A (ko) | 이미다졸디펩티드를 포함하는 제제 | |
| Shen et al. | Protein anabolic effects of insulin and IGF-I in the ovine fetus | |
| CN103421086A (zh) | 多胜肽、编码该多胜肽的核酸分子、以及该多胜肽的应用 | |
| WO2021075536A1 (ja) | 幹細胞遊走剤を使用した糖尿病治療 | |
| Marley et al. | Osteoprotegerin activates osteosarcoma cells that co-express RANK and RANKL | |
| CN106177954A (zh) | 使癌干细胞可视化并消除癌干细胞的组合物和方法 | |
| Li et al. | LncRNA Nron inhibits bone resorption in periodontitis | |
| KR20230152099A (ko) | 당뇨병 및 합병증의 신규 치료, 진단 및 검출을 위한 방법 및 제제 | |
| Liang et al. | Teriparatide prevented synovial inflammation and cartilage destruction in mice with DMM |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080611 |