CN101193898B

CN101193898B - 5，7-二取代的[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮衍生物

Info

Publication number: CN101193898B
Application number: CN2006800200730A
Authority: CN
Inventors: 冈纳·诺得瓦尔; 科林·雷; 托拜厄斯·赖因; 丹尼尔·索恩
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2005-04-06
Filing date: 2006-04-03
Publication date: 2010-12-01
Anticipated expiration: 2026-04-03
Also published as: CA2604016A1; JP2008535834A; RU2411245C9; US8088780B2; AR053347A1; NZ561462A; AU2006231835A1; EP1869055A1; IL185913A0; US20090124637A1; BRPI0609736A2; NO20075610L; CN101193898A; RU2411245C2; ZA200708182B; RU2007140552A; WO2006107257A1; TW200720279A; UY29451A1; AU2006231835B8

Abstract

本发明披露了新颖的式(I)的5，7-二取代的[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮衍生物，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如说明书中定义，以及它们的可药用盐，它们的制备方法，含有它们的药物组合物及其在治疗中的用途。式(I)化合物是CX₃CR1受体拮抗剂，因而特别适用于治疗或预防神经变性疾病、脱髓鞘疾病、心脑血管动脉粥样硬化症、外周动脉疾病、类风湿性关节炎、肺部疾病例如COPD、哮喘或疼痛。

Description

5，7-二取代的[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮衍生物

技术领域

本发明披露了新颖的5，7-二取代的[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮衍生物以及它们的制备方法、含有它们的药物组合物及其在治疗中的用途。

背景技术

趋化因子在多种疾病和障碍的免疫和炎性反应中发挥重要作用，这些疾病和障碍包括哮喘、动脉粥样硬化(atherosclerosis)和变应性疾病，以及自身免疫性病变如类风湿性关节炎和多发性硬化。这些被分泌出的小分子属于不断增加的8-14kDa蛋白超家族，该家族特征为保守的半胱氨酸基序。目前，趋化因子超家族包括显示出特征性结构基序的四类家族，C-X-C、C-C、C-X₃-C和XC家族。C-X-C和C-C家族具有系列相似性，并且它们相互的区别在于半胱氨酸残基NH-近端对之间的单个氨基酸插入。C-X₃-C家族与其它两个家族的区别在于半胱氨酸残基NH-近端对之间的三个氨基酸插入。相反，XC家族成员缺乏前两个半胱氨酸残基之一。

C-X-C趋化因子包括嗜中性粒细胞的几种强效的化学引诱物和活化剂，如白介素-8(IL-8)和嗜中性粒细胞活化肽2(NAP-2)。

C-C趋化因子包括单核细胞、淋巴细胞和嗜中性粒细胞的强效化学引诱物。实例包括人单核细胞趋化蛋白1-3(MCP-1，MCP-2和MCP-3)，RANTES(调节活化、正常T细胞表达和分泌)、嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)以及巨噬细胞炎性蛋白1α和1β(MIP-1α和MIP-1β)。

C-X₃-C趋化因子(也称作fractalkine)既是中枢神经系统(CNS)中的小神经胶质细胞的强效化学引诱物和活化剂，也是单核细胞、T细胞、NK细胞和肥大细胞的强效化学引诱物和活化剂。

研究已经表明趋化因子的作用是通过G蛋白-偶联受体亚族介导的，其中这些受体称为CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(对C-C家族而言)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(对C-X-C家族而言)和CX₃CR1(对 C-X₃-C家族而言)。由于调节这些受体的药物可用于治疗上述提及的那些疾病和障碍，因此这些受体表现了较好的药物开发目标。

WO 01/25242公开了某些噻唑并[4，5-d]嘧啶衍生物，它们可用作与C-X-C和C-C趋化因子家族相关的受体的拮抗剂，特别是用作CXCR2受体的拮抗剂。

本发明涉及落入WO 01/25242通式范围、但未加以明确示例说明的一组化合物。当与WO 01/25242中公开的实施例进行比较时，本发明化合物出人意料地显示出作为CX₃CR1受体拮抗剂的有用特性。

发明内容

本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐

其中：

R¹表示CH₃或CH₃CH₂；

R²表示H、3-CN、2-CF₃、2-F、3-F、3-CF₃、3-CONH₂或3-SO₂CH₃；

R³表示H；

R⁴表示H或CH₃；以及

R⁵表示H；或者当R⁴是CH₃时，R⁵表示H或F。

式(I)化合物可以以立体异构和/或互变异构形式存在。应该理解，所有对映异构体、非对映异构体、外消旋物、互变异构体及其混合物均落入本发明范围内。

在一实施方案中，R¹表示CH₃。在另一实施方案中，R¹表示CH₃CH₂。

在一实施方案中，R²表示H、3-CN、2-F、3-F或3-SO₂CH₃。在另一实施方案中，R²表示H。在另一实施方案中，R²表示3-CN。在另一实施方案中，R²表示2-F。在另一实施方案中，R²表示3-SO₂CH₃。

在一实施方案中，R⁴表示CH₃。在另一实施方案中，R⁴表示H。

在一实施方案中，R⁵表示H。

在一实施方案中，R⁴表示CH₃以及R⁵表示F。

在一实施方案中，R⁴表示CH₃以及R⁵表示H。

在一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示H、3-CN、2-F或3-SO₂CH₃；R⁴表示H；以及R⁵表示H。

在一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示H、3-CN、2-F或3-SO₂CH₃；R⁴表示CH₃；以及R⁵表示H。

在另一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示H；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

在另一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示3-CN；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

在另一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示2-F；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

在另一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示H、2-F或3-CN；R³表示H；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

在一实施方案中，R¹表示CH₃；R²表示3-SO₂CH₃；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

具体的式(I)化合物包括：

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[2-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{{(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺；

3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺；

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基-5-[(1-苯基丙基)硫基]}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈；

7-{[(1R)-3-氟-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

或其可药用盐。

当与WO 01/25242中公开的化合物比较时，本发明化合物其特征在于存在位于噻唑并吡啶环系5-位上的支链硫苄基。也就是说，本发明化合物包括不是氢的R¹基团。

根据本发明，发明人进一步提供了制备式(I)化合物或其可药用盐的方法，所述方法包括：

a)使式(II)化合物与式(III)化合物反应，

其中R³、R⁴和R⁵如式(I)中定义；

其中R¹和R²如式(I)中定义以及L¹表示离去基团；或者

b)水解式(IV)化合物

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如式(I)中定义；

以及如果需要的话，将所得到的式(I)化合物或其其它盐转化为其可药用盐；或者将所得到的式(I)化合物转化为其它式(I)化合物；以及如果需要的话，将所得到的式(I)化合物转化为其旋光异构体。

在方法(a)中，在适宜的有机溶剂例如二甲亚砜(DMSO)、乙腈或1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中偶联反应物(II)和(III)。反应任选在加入的有机或无机碱例如三乙胺、N，N-二异丙基乙基胺(DIPEA)或氢化钠存在下进行。反应在温和还原剂例如硼氢化钠存在下进行。反应在适宜的温度，通常是室温至溶剂沸点之间的温度进行。反应通常持续大约1小时至1周的时间，或者直到分析显示目标产物的形成结束。适宜的离去基团L¹是卤素，特别是氯或溴。在一实施方案中，L¹表示氯。

在方法(b)中，将反应物(IV)在适宜的有机溶剂例如二烷、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜或1-甲基-2-吡咯烷酮中进行酸催化水解反应。适宜的酸包括无机酸例如盐酸或氢溴酸、或者有机强酸例如三氟乙酸。反应在适宜的温度，通常是室温至溶剂沸点之间的温度进行。反应通常持续大约1小时至1天的时间，或者直到分析显示目标产物的形成结束。

本领域技术人员应该理解，在上述方法中可能希望或需要对胺、羟基或其它潜在的反应基团进行保护。一般来说，适宜的保护基团以及添加和除去这类基团的详细情况是本领域众所周知的。参见例如“Protective Groupsin Organic Synthesis″，第3版(1999)，Greene和Wuts著。

本发明包括盐形式的式(I)化合物。适宜的盐包括与有机或无机酸或者有机或无机碱形成的盐。这类盐通常应该是可药用的，但是非药用酸或碱的盐可以用于制备和纯化本发明所述的化合物。

式(I)化合物的盐可以通过将游离化合物或其盐、对映异构体或外消旋物与1或更多当量的适宜酸或碱反应形成。该反应可以在所述盐不溶于其中的溶剂或溶媒或者所述盐溶于其中的溶剂(例如水、二

烷、乙醇、四氢呋喃或乙醚或者溶剂的混合物)中进行，这些溶剂可以真空除去或冻干除去。该反应还可以是复分解反应或者可在离子交换树脂上进行。

式(II)化合物通常可以使用本领域技术人员易于显而易见的已知方法制备。这类适宜的方案如下图所示。

式(III)化合物既可以商购得到，也可以由文献已知，或者使用本领域技术人员易于显而易见的已知方法制备得到。

式(IV)化合物既可以由WO 01/25242已知，也可以使用使用本领域技术人员易于显而易见的已知方法制备得到。这类适宜的方案如下图所示。

式(V)化合物既可以由WO 00/09511已知，也可以使用使用本领域技术人员易于显而易见的已知方法制备得到。

例如，式(V)化合物，以及由其得到的式(VI)化合物可由下述方案制备。

适合用于制备式(II)、(III)、(IV)、(V)和(VI)化合物的具体方法详细描述在本申请的实施例部分，这些方法代表了本发明方法的具体实施方案。

中间体化合物可以按原样使用或者以受保护形式使用。适宜的保护基团以及添加和除去这类基团的详细情况是本领域众所周知的。参见例如“Protective Groups in Organic Synthesis″，第3版(1999)，Greene和Wuts著。

本发明化合物及其中间体可以由其反应混合物中分离，如果需要的话，进一步通过标准技术纯化。

式(I)化合物可以以立体异构形式存在。因此，所有对映异构体、非对映异构体、外消旋物及其混合物均落入本发明范围内。可以使用常规技术，例如分步结晶或HPLC，对所述化合物的立体异构混合物进行分离，从而分离出各种旋光异构体。或者，各种旋光异构体可以直接使用具有旋光性的起始原料制备。

式(I)化合物含有两个产生立体异构的中心，因此可以以式(Ia)-(Id)所示的四种独立的立体异构形式存在。

所有这些立体异构体及其混合物均落入本发明范围内。在一实施方案中，式(I)化合物具有式(Ia)所示的立体化学。在另一实施方案中，式(I)化合物具有式(Ib)所示的立体化学。

中间体化合物也可以以立体异构形式存在，因而可用作纯化的对映异构体、外消旋物或其混合物。

因为式(I)化合物或其可药用盐具有作为CX₃CR1受体拮抗剂的药理活性，所以它们具有效用。特别地，当与WO 01/25242中具体示例的化合物相比较时，本发明的式(I)化合物抑制CX₃CR1受体的效力显著提高和/或抑制CXCR2受体的效力降低。本发明优选的化合物同时显示出抑制CX₃CR1的提高效力和抑制CXCR2的降低效力。

在一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐，其用作药物。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防下述疾病或病症的药物中的用途，在所述疾病或病症中，对CX₃CR1受体的拮抗作用是有益的。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防神经变性疾病(neurodegenerative disorders)、脱髓鞘疾病(demyelinating disease)、心脑血管动脉粥样硬化症(cardio-and cerebrovascularatherosclerotic disorders)、外周动脉疾病(peripheral artery disease)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、肺部疾病(pulmonary diseases)例如COPD、哮喘 (asthma)或疼痛(pain)的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在治疗或预防多发性硬化(MS)的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防动脉粥样硬化的药物中的用途，所述药物通过预防和/或减少新动脉粥样硬化损伤或斑块形成和/或通过预防或减缓现有损伤和斑块进展来治疗或预防动脉粥样硬化。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防动脉粥样硬化的药物中的用途，所述药物通过改变斑块组成以降低斑块破裂和动脉粥样血栓形成事件(atherothrombotic event)的危险来治疗或预防动脉粥样硬化。

本发明还提供了治疗下述疾病或病症或者降低所述疾病或病症危险的方法，在所述疾病或病症中，对CX₃CR1受体的拮抗作用是有益的，所述方法包括向患有或面临所述疾病或病症危险的人给药治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。

本发明还提供了治疗神经变性疾病、脱髓鞘疾病、心脑血管动脉粥样硬化症、外周动脉疾病、类风湿性关节炎、肺部疾病例如COPD、哮喘或疼痛或者降低所述疾病或病症危险的方法，包括向患有或面临所述疾病或病症危险的人给药治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。

本发明还提供了治疗多发性硬化(MS)或降低其危险的方法，包括向患有或面临所述疾病或病症危险的人给药治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。

本发明还提供了治疗动脉粥样硬化或降低其危险的方法，所述方法通过预防和/或减少新动脉粥样硬化损伤或斑块形成和/或通过预防或减缓现有损伤和斑块进展来治疗动脉粥样硬化或降低其危险，所述方法包括向患有或面临所述疾病或病症危险的人给药治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。

本发明还提供了治疗动脉粥样硬化或降低其危险的方法，所述方法通过改变斑块组成以降低斑块破裂和动脉粥样血栓形成事件的危险来治疗动脉粥样硬化或降低其危险，所述方法包括向患有或面临所述疾病或病症危险的人给药治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有药用辅料、稀释剂或载体，所述药物组合物用于治疗或预防下述疾病或病症，在所述疾病或病症中，对CX₃CR1受体的拮抗作用是有益的。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有药用辅料、稀释剂或载体，所述药物组合物用于治疗或预防神经变性疾病、脱髓鞘疾病、心脑血管动脉粥样硬化症、外周动脉疾病、类风湿性关节炎、COPD、哮喘或疼痛。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有药用辅料、稀释剂或载体，所述药物组合物用于治疗或预防多发性硬化。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有药用辅料、稀释剂或载体，所述药物组合物通过预防和/或减少新动脉粥样硬化损伤或斑块形成和/或通过预防或减缓现有损伤和斑块进展来治疗动脉粥样硬化。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有药用辅料、稀释剂或载体，所述药物组合物通过改变斑块组成以降低斑块破裂和动脉粥样血栓形成事件的危险来治疗动脉粥样硬化。

式(I)化合物或其可药用盐适用于治疗或预防需要调节CX3CR1受体活性的疾病或病症。具体地，所述化合物适用于治疗包括人在内的哺乳动物的神经变性疾病或脱髓鞘疾病。更具体地说，所述化合物适用于治疗多发性硬化。该化合物还适用于治疗疼痛、类风湿性关节炎、骨关节炎、心脑血管动脉粥样硬化症、外周动脉疾病和肺动脉高压(pulmonary hypertension)。

可具体提及的病症有：神经变性疾病和痴呆障碍，例如阿尔茨海默氏病，肌萎缩性脊髓侧索硬化和其它运动神经元疾病，Creutzfeldt-Jacob’s疾病和其它朊病毒病，HIV脑病、亨廷顿氏病、额颞痴呆、卢伊体痴呆和血管性痴呆；多发性神经病，例如吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barré syndrome)，慢性炎症性脱髓鞘多发性神经根神经病(chronic inflammatory demyelinatingpolyradiculoneuropathy)，多病灶运动神经病和神经丛病；CNS脱髓鞘疾病，例如急性弥散性/出血性脑脊髓炎和亚急性硬化性全脑炎；神经肌肉障碍，例如重症肌无力和兰伯特-伊特综合征(Lambert-Eaton syndrome)；脊柱障碍，例如热带痉挛性轻截瘫和僵人综合征；瘤外综合征，例如小脑变性和脑脊髓炎；创伤性脑损伤；偏头痛；癌症；同种异体移植物排斥；全身性硬化；病毒感染；寄生虫转移疾病，例如疟疾；牙周病；心肌梗塞；中风；冠心病；缺血性心脏病；以及再狭窄；类风湿性关节炎；肺部疾病例如COPD；哮喘或疼痛。

本发明化合物还适用于治疗动脉粥样硬化，其通过预防和/或减少新动脉粥样硬化损伤或斑块形成和/或通过预防或减缓现有损伤和斑块进展来治疗动脉粥样硬化。

本发明化合物还适用于治疗动脉粥样硬化，其通过改变斑块组成以降低斑块破裂和动脉粥样血栓形成事件的危险来治疗动脉粥样硬化。

本发明化合物还适用于治疗炎症性肠病(IBD)，例如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎，其通过诱导炎症性肠病(IBD)缓和和/或保持缓和而其起到治疗作用。

预防被认为与患有所述疾病或病症的先前发作的人员的治疗特别有关，或被认为与处于所述疾病或病症的增加危险之中的人员的治疗特别有关。处于形成具体疾病或病症的危险之中的人员，通常包括具有该疾病或病症的家族史的那些人员，或已经通过遗传学试验或筛选确定为特别易患该疾病或病症的那些人员。

对于上述治疗适应症，给药剂量自然可随所使用的化合物、给药方式和期望的治疗变化而变化。然而，当化合物按照1mg-2000mg/天固体形式的剂量给药时，通常会获得满意的结果。

式(I)化合物或其可药用衍生物可以单独使用，也可以以适宜的药物组合物形式使用，其中所述化合物或衍生物与药用辅料、稀释剂或载体相混合。给药可以是但不限于肠内(包括口服、舌下或直肠)、鼻内、静脉内、局部或其它肠胃外途径。选择和制备适宜药物组合物的常规步骤描述于例如″Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs″，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1988中。药物组合物优选含有低于80％、更优选低于50％的式(I)化合物或其可药用盐。

本发明还提供了制备这类药物组合物的方法，包括将这些成分进行混合。

本发明进一步涉及联合疗法，其中将式(I)化合物或其可药用盐或者含有式(I)化合物的药物组合物或制剂与用于心脑血管动脉粥样硬化症和外周动脉疾病中任何一种的疗法和/或药剂同时或顺序给药。

具体而言，式(I)化合物或其可药用盐可以与一种或多种选自下述的化合物联用给药：

1)抗炎剂，例如

a)NSAIDs(例如乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、氟比洛芬、双氯芬酸、吲哚美辛)；

b)白细胞三烯合成抑制剂(5-LO抑制剂，例如AZD4407、弃留通、licofelone、CJ13610、CJ13454；FLAP抑制剂，例如BAY-Y-1015、DG-031、MK591、MK886、A81834；LTA4水解酶抑制剂，例如SC56938、SC57461A)；

c)白细胞三烯受体拮抗剂(例如CP195543、阿美卢班(amelubant)、LY293111、扎鲁司特(accolade)、MK571)；

2)抗高血压剂，例如

a)β-阻断剂(例如美托洛尔、阿替洛尔、索他洛尔)；

b)血管紧张素转化酶抑制剂(例如卡托普利、雷米普利、喹那普利、依那普利)；

c)钙通道阻断剂(例如维拉帕米、地耳硫卓、非洛地平、氨氯地平)；

d)血管紧张素II受体拮抗剂(例如依贝沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、氯沙坦)；

3)抗凝血剂，例如

a)凝血酶抑制剂(例如美拉加群(ximelagatran))、肝素、Xa因子抑制剂；

b)血小板凝聚抑制剂(例如氯吡格雷(clopidrogrel)、噻氯匹定、prasugel、AZ4160)；

4)脂质代谢调节剂，例如

a)胰岛素致敏剂例如PPAR激动剂(例如吡格列酮、罗格列酮、Galida、muraglitazaar、gefemrozil、非诺贝特)；

b)HMG-CoA还原酶抑制剂、他汀类(例如辛伐他汀、普伐他汀、阿伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀)；

c)胆固醇吸收抑制剂(例如依泽替米贝)；

d)IBAT抑制剂(例如AZD-7806)；

e)LXR激动剂(例如GW-683965A、T-0901317)；

f)FXR受体调节剂；

g)磷脂酶抑制剂；

5)抗心绞痛药，例如硝酸酯(盐)和亚硝酸酯(盐)；

6)氧化应激调节剂，例如抗氧化剂(普罗布考)、髓过氧化酶抑制剂。

通过下面的实施例对本发明进行示例性但非限制性说明：

一般方法

使用的所有溶剂都是分析纯级的，商购得到的无水溶剂均是反应中常规使用的溶剂。反应通常在氮气或氩气的惰性气氛下进行。

在装备有Z-梯度的5mm BBO探针的Varian Unity+400 NMR光谱仪、或者装备有Z-梯度的60μl二元反流探针(dual inverse flow probe)的BrukerAvance 400 NMR光谱仪、或者装备有Z-梯度的4-核探针的Bruker DPX400NMR光谱仪记录400MHz(质子)的¹H和100MHz(碳-13)的¹³C NMR光谱。600MHz ¹H NMR光谱在装备有Z-梯度的5mm BBI探针头的Bruker av600NMR光谱仪上记录。300MHz ¹H NMR光谱在装备有5mm BBI探针头的Varian Gemini 300 NMR上记录。

除非实施例中具体说明，光谱在400MHz(质子)和100MHz(碳-13)下记录。使用下面的参比信号：DMSO-d₆的中间线δ 2.50(¹H)，δ 39.51(¹³C)；CD₃OD的中间线δ3.31(1H)或δ 49.15(¹³C)；丙酮-d₆ 2.04(1H)，206.5(¹³C)；以及CDCl₃ δ 7.26(¹H)，CDCl₃的中间线δ77.16(¹³C)(除非另外指出)。

对映体过量通过GC在Cyclodex B柱上测定(恒温洗脱100℃)。

质谱在由Alliance 2795(LC)和ZQ单四极质谱仪组成的Waters LCMS上记录。质谱仪装备有电喷射离子源(ESI)，在阳性或阴性离子模式下操作。毛细管电压为3kV，质谱仪在m/z 100-700之间扫描，扫描时间为0.3或0.8s。分离在Waters X-Terra MS，C8-柱，(3.5μm，50或100mm×2.1mm i.d.)或者ScantecLab′s ACE 3 AQ柱(100mm×2.1mm i.d.)上进行。柱温度设定为40℃。使用中性或酸性流动相体系施加线性梯度，在0％-100％有机相中运行4-5分钟，流速0.3ml/min。中性流动相体系：乙腈/[10mM NH₄OAc(水溶液)/MeCN(95∶5)]、或[10mM NH₄OAc(水溶液)/MeCN(1/9)]/[10mM NH₄OAc(水溶液)/MeCN(9/1)]。酸性流动相体系：[133mMHCOOH(水溶液)/MeCN(5/95)]/[8mM HCOOH(水溶液)/MeCN(98/2)]。

化合物确认在由Agilent Technologies供应的GC-MS(GC 6890，5973NMSD)上进行。所使用的柱为VF-5 MS，ID 0.25mm×30m，0.25μm(VarianInc.)。采用的线性温度梯度在40℃开始(保持1min)，在300℃结束(保持1min)，25℃/分钟。MS装备有EI离子源。MS在m/z 50-500之间扫描，扫描速度设定为3.25扫描/s。电压设定为70eV。

HPLC分析在由G1379A微真空脱气器、G1312A二元泵、G1367A孔板自动进样器、G1316A柱温箱和G1315B二极管阵列检测器组成的AgilentHP1000系统上进行。柱：X-Terra MS，Waters，4.6×50mm，3.5μm。柱温设定为40℃，流速为1.5ml/min。二极管阵列检测器在210-300nm之间扫描，步长和峰宽分别设定为2nm和0.05min。采用线性梯度，由0％乙腈运行至100％乙腈，4min。流动相：乙腈/10mM醋酸铵的5％乙腈+MilliQ Water溶液。

反应后的典型操作步骤包括：产物使用溶剂例如乙酸乙酯萃取，用水洗涤后，有机相用MgSO₄或Na₂SO₄干燥，溶液真空浓缩。

薄层色谱法(TLC)在Merck TLC-板(硅胶60 F₂₅₄)上进行，使用UV显影斑点。快速色谱法在使用RediSep^TM正相快速柱的Combi Flash

Companion^TM或Merck硅胶60(0.040-0.063mm)上进行。用于快速色谱法的典型溶剂是氯仿/甲醇、甲苯/乙酸乙酯和乙酸乙酯/己烷混合物。

制备型色谱法在具有二极管阵列检测器的Gilson自动制备型HPLC上进行。柱：XTerra MS C8，19x 300mm，7μm。梯度为乙腈/0.1M醋酸铵的5％乙腈+MilliQ水溶液，由20％乙腈运行至60％乙腈，时间为13min。流速：20ml/min。或者，在半制备型Shimadzu LC-8A HPLC上进行纯化，所述半制备型Shimadzu LC-8A HPLC装备有Waters Symmetry

柱(C18，5μm，100mm×19mm)和Shimadzu SPD-10A紫外-可见光检测器。梯度为乙腈/0.1％三氟乙酸的MilliQ水溶液，由35％乙腈运行至60％乙腈，时间为20 min。流速：10ml/min。

重结晶通常在溶剂或溶剂混合物例如乙醚、乙酸乙酯/庚烷和甲醇/水中进行。

使用下面的缩写：DCM＝二氯甲烷；DIPCl＝β-氯二异松蒎烯基硼烷(β-chlorodiisopinocamphenylborane，DIP-Chloride^TM)；DIPEA＝N，N-二异丙基乙基胺；DMF＝N，N-二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲亚砜；NCS＝N-氯琥珀酰亚胺；NMP＝1-甲基-2-吡咯烷酮；THF＝四氢呋喃；aq＝水溶液；conc＝浓。

所使用的起始原料既可以商购得到，也可以按照文献步骤制备得到，且它们具有与所报道相一致的试验资料。下面是所制备起始原料的实例：

(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇：WO 02/076990；

5-(苄硫基)-7-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺：WO 00/09511；

1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙酮：T.Fujita，J.Iwasa和C.Hansch，Journal of theAmerican Chemical Society，1964，86，5175-5180；

3-[(1S)-1-羟乙基]苯甲腈：Belley，M.Bioorg.Med.Chem.，1999，7，2697-2704；

3-(甲磺酰基)苯甲醛：P. L Ornstein等人，J. Med.Chem.，1998，Vol.41，No.3，358-378；

3-(1-羟乙基)苯甲酰胺：Watson，C.Y；Whish，W.J.D；Threadgill，M.D.Bioorg.Med. Chem.1998 6(6)721-34；

(1-氯丙基)苯：Desai，V.R.；Nechvatal，A.；Tedder，J.M.J. Chem.Soc.(B)1969，30-32；

(1S)-1-(2-氟苯基)乙醇：Garrett，C.E.Tetrahedron：Asymmetry 2002，13，1347-1349；Doucet，H.Chem.Eur.J. 1999，5，1320-1330；

(2R)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇：Truong，V.L；Gauthier，J.Y；Boyd，M；Roy，B；Scheigetz，J.Synlett 2005，8，1279-1280；按照S对映异构体的路线；

(1S)-1-(3-氟苯基)乙醇：Pastor，I.M.Chem.Eur.J. 2003，9，4031-4045。

在下面的一般方法中，R表示H或CH₃，R’表示H或F；以及Ar表示被R²取代的苯基，其中R²如式(I)中定义。

一般方法A

在氩气氛下，将硼氢化钠(0.1当量)、DIPEA(1.5当量)和A2(1.2当量)加至A1(1.0当量)的DMSO溶液中。所得到的反应混合物在40℃搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。将混合物倾入冰水中，产物用DCM或EtOAc萃取。合并的有机相干燥并真空浓缩。如果需要的话，使用制备型HPLC或通过快速柱色谱法纯化粗产物。

一般方法B

将浓HCl(2.5mL/mmol B1)加至B1(1.0当量)的CH₃CN溶液中。反应混合物在冰浴中冷却，逐滴加入溶解于少量水中的亚硝酸钠(2.0当量)。反应在0℃搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)，然后倾入冰水，用碳酸氢钠中和，DCM或EtOAc萃取。合并的有机相干燥并真空浓缩得到产物。

一般方法C

将溶解于甲醇中的氢氧化钾(2.0当量)逐滴加至冷却的(0℃)C1(1.0当量)的甲醇溶液中。所得到的混合物在0℃搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。蒸发除去溶剂，产物直接用于接下来的步骤中不再进一步纯化。

一般方法D

将浓HCl(1.0当量)加至冷却的(0℃)D1(1.0当量)的1，4-二烷溶液中。所得到的混合物在40℃搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。反应混合物用饱和NaHCO₃(水溶液)中和，蒸发除去二

烷。残余物溶解于DCM或EtOAc中，用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。如果需要的话，使用制备型HPLC或通过快速柱色谱法纯化粗产物。

一般方法E

在氩气氛下，将E1(1.0当量)的THF溶液在0℃加至(+)-DIPCl(得到E2)或者(-)-DIPCl(得到E3)(1.5当量)的THF溶液中。使反应混合物缓慢达到室温，过夜。蒸发除去溶剂，然后加入Et₂O和二乙醇胺(2.2当量)。混合物搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。滤出所形成的沉淀，用Et₂O洗涤，滤液真空浓缩。如果需要的话，使用制备型HPLC或通过快速柱色谱法纯化粗产物。

一般方法F

在氩气氛下，将三苯基膦(1.3当量)的THF溶液在0℃加至NCS(1.3当量)的THF溶液中。所得到的混合物在环境温度搅拌30min。在0℃加入F1或F2(1当量)，反应混合物在环境温度搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。蒸发除去溶剂，然后加入己烷，过滤除去沉淀。滤液真空浓缩，如果需要的话，使用制备型HPLC或通过快速柱色谱法纯化粗产物。

一般方法G

将硼氢化钠(1-2当量)加至G1(1.0当量)的DMSO溶液中。一旦停止冒泡，加入G2(1.2当量)。所得到的反应混合物在40℃搅拌直到反应完全(通过LC-MS、HPLC或TLC监测)。如果需要的话，使用制备型HPLC或者通过快速柱色谱法完成纯化。

实施例1

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a) (1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇

将B(OMe)₃(62μL，0.55mmol)加至(R)-(+)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇的THF(5mL)溶液中，再加入BH₃·Me₃S(2M THF溶液，1.23mL，2.54mmol)。混合物搅拌1h后，在1.5h内加入1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙酮(458mg，2.31mmol)的THF(5mL)溶液。所得到的混合物搅拌过夜，然后用1M HCl(2mL)猝灭。混合物浓缩后，粗产物通过快速柱色谱法纯化(CH₂Cl₂/MeOH 50∶1)，得到标题化合物(378mg，18％收率)。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.89(d，1H)，7.75(m 1H)，7.59(t，1H)，7.48(t，1H)，4.92(q，1H)，3.00(s，3H)，1.45(d，3H)。

b)3-[(1S)-1-氯乙基]苯基甲基砜

使用一般方法F，由(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇(370mg，1.85mmol)开始，获得标题化合物，收率为86％。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.95(m，1H)，7.87(t，1H)，7.69(m，1H)，7.55(t，1H)，5.10(q，1H)，3.04(s，3H)，1.83(d，3H)。

c)(2R)-2-{[2-氨基-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(431mg，1.44mmol)和3-[(1S)-1-氯乙基]苯基甲基砜(350mg，1.44mmol)获得标题化合物，收率为34％。

MS(ESI⁺)m/z 482[M+H]⁺。

d)(2R)-2-{[2-氯-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-{[2-氨基-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇(136mg，0.28mmol)开始，获得标题化合物，收率为92％。

MS(ESI⁺)m/z 500[M+H]⁺。

e)(2R)-2-{[2-甲氧基-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法C，由(2R)-2-{[2-氯-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇(130mg，0.26mmol)开始，获得标题化合物，收率为91％。

MS(ESI⁺)m/z 497[M+H]⁺。

f) 7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-2-{[2-甲氧基-5-{(1R)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基][1，3]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基}-4-甲基戊-1-醇(118mg，0.24mmol)开始，获得标题化合物，收率为19％。

¹H NMR(CDCl₃)δ8.18(t，1H)，7.77(m，2H)，7.51(t，1H)，5.00(m，1H)，4.91(q，1H)，4.19(m，1H)，3.80(dd，1H)，3.63(dd，1H)，3.08(s，3H)，1.71(d，3H)，1.63(m，1H)，1.46(m，2H)，0.94(d，3H)，0.87(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 483[M+H]⁺。

实施例2

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a) (2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羟甲基-3-甲基-丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇

将亚硝酸钠(5.19g，75mmol)的水(25mL)溶液在0℃逐滴加至(2R)-2-[[2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基]-4-甲基戊-1-醇(7.50g，25mmol)的浓HCl(150mL)和CH₃CN(150mL)溶液中。反应混合物在0-5℃搅拌18h，然后倾入冰(500mL)中，用EtOAc萃取。滤出所有残余固体。合并的有机相依次用饱和NaCl溶液和饱和NaHCO₃水溶液萃取。对有机相进行干燥并蒸发，向其中加入前面滤出的固体。全部固体在EtOAc中浆化，过滤后得到标题化合物(6.3g，80％收率)，为固体。

¹H NMR(DMSO-d₆；对单体单元积分)δ7.98(d，1H)，4.47(t，1H)，3.99(br s，1H)，3.17(m，2H)，1.31-1.15(m，2H)，0.98(m，1H)，0.48(d，3H)，0.30(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 635[M+H]⁺。

b)(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羟甲基-3-甲基-丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4 5-d]嘧啶-5-基二硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇

将KOH(0.53g，9.4mmol)的MeOH(5mL)溶液在0℃加至(2R)-2-{2-氯 -5-[2-氯-7-((1R)-1-羟甲基-3-甲基-丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇(3.0g，4.7mmol)的MeOH(200mL)溶液中。将反应在0-5℃保持18h。蒸发除去溶剂，将残余物吸收至MeOH/EtOAc(1∶1)中。上述溶液迅速经色谱法处理(EtOAc)得到标题化合物(2.0g，68％收率)。

MS(ESI⁺)m/z 627[M+H]⁺。

c)5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

将浓HCl(20mL)和水(20mL)的混合物加至(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羟甲基-3-甲基-丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-4-甲基-戊-1-醇(1.5g，2.4mmol)的1，4-二

烷(20mL)溶液中。溶液然后在45℃搅拌18 h。蒸发除去溶剂，将残余物吸收至EtOAc中(滤出未溶解的残余物，通过LCMS证实是纯的)。对溶液进行快速色谱法处理(MeOH∶EtOAc 5∶95)。两份样品合并得到标题化合物(600mg，42％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆；对单体单元积分)δ12.45(s，2H)，7.33(d，2H)，4.62(t，2H)，4.17(br s，2H)，1.48-1.31(m，4H)，1.25-1.14(m，2H)，0.72(d，6H)，0.56(d，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 599[M+H]⁺。

d)7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

按照一般方法G，由5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(20mg，0.033mmol)和3-(1-溴乙基)三氟甲基苯(11μL，0.066mmol)反应得到标题化合物(10mg，31％)，为两种非对映异构体的混合物形式。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.68(m，2H)7.51(m，1H)7.42(m，1H)4.97(q，1H)4.91(m，1H)4.38-4.27(m，0.5H)4.26-4.16(m，0.5H)3.85(dd，0.5H)3.64(m，1H)3.53(dd，0.5H)1.71(dd，3H)1.64(m，1H)1.57-1.46(m，1H)1.45-1.34(m，1H)0.96(dd，3H)0.88(dd，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 473[M+H]⁺。

实施例3

7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a) (2R)-2-{[2-氨基-5-(苄硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}戊-1-醇

将5-(苄硫基)-7-氯[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺(6.0g，19.4mmol)溶解于NMP(30mL)中。加入DIPEA(8.4mL，48.5mmol)和2-氨基-(2R)-1-戊醇(3.5g，33.9mmol)，将混合物加热至110℃，持续4天。冷却至室温后，将混合物倾入水(200mL)中。过滤收集沉淀析出的固体，用水洗涤后直接用于接下来的步骤中不再进一步纯化(7.0g，97％收率)。

MS(ESI⁺)m/z 376[M+H]⁺。

b) (2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇

将圆底烧瓶装备有干冰-乙醇冷凝器，浸于干冰-乙醇冷却浴中。使氨(250 mL)在烧瓶中冷凝，然后加入(2R)-2-{[2-氨基-5-(苄硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}戊-1-醇(6.8g，18.1mmol)。所得到的混合物温热至-33℃，加入小块金属钠直到出现蓝色，且持续30秒钟。反应随后通过加入一匙氯化铵固体猝灭。蒸发除去氨，向残余物中加入水(250mL)。所得到的混合物用1M HCl(水溶液)中和。过滤收集沉淀析出的固体，用水洗涤并真空干燥得到4.15g(80％收率)标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 286[M+H]⁺。

c)(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羟甲基丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇

按照实施例2(a)的步骤，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇(4.0g，14mmol)、亚硝酸钠(1.93g，28mmol)、HCl(100mL)、CH₃CN(100ml)和H₂O(10mL)开始，获得标题化合物，收率为78％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ 8.27(d，1H)，4.32-3.8 1(m，2H)，3.50-3.23(m，2H)，1.37-1.19(m，2H)，1.10-0.93(m，1H)，0.94-0.78(m，1H)，0.49(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 607[M+H]⁺。

d)(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羟甲基丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇

在0℃，将KOH(495mg，8.8mmol)加至(2R)-2-{2-氯-5-[2-氯-7-((1R)-1-羟甲基丁基氨基)-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇(2.68g，4.41mmol)的MeOH(200mL)溶液中。将反应在0℃搅拌过夜，然后蒸发除去甲醇。将残余物倾入水中，过滤收集所得到的沉淀。该潮湿的粗产物直接用于接下来的步骤中不再进一步纯化。

MS(ESI⁺)m/z 599[M+H]⁺。

e)5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)]氨基}-[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基丁基)氨基][1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

按照实施例2(c)的步骤，由粗(2R)-2-{5-[7-((1R)-1-羟甲基丁基氨基)-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基二硫基]-2-甲氧基-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基}-戊-1-醇(4.41mmol)(实施例3(d))、浓HCl(2 mL)、水(2mL)和1，4-二

烷(100mL)开始，获得标题化合物(两步)，收率为59％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ 12.46(s，1H)，7.33(d，1H)，4.61(t，1H)，4.10(br.s.，1H)，3.35(t，2H)，1.37-1.20(m，2H)，1.13-1.10(m，1H)，0.96-0.82(m，1H)，0.59(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z571[M+H]⁺。

f)[(1R)-1-氯乙基]苯

使用一般方法F，由(1S)-1-苯基乙醇(25g，0.20mol)开始，获得标题化合物，收率为67％。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.42(m，2 H)，7.36(m，2H)，7.30(m，1H)，5.09(q，1H)，1.85(d，3H)；

MS(CI)m/z141[M+1]。

g) 7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮以22％收率，由5，5′-二硫代双[7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮](40mg，0.07mmol)和[(1R)-1-氯乙基]苯(29mg，0.21mmol)使用一般方法G制备。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ12.34(br s，1H)7.44(d，2H)7.33(m，2H)7.23(m，2H)4.93(q，1H)4.68(t，1H)4.21(br s，1H)3.49-3.33(m，2H)1.68(d，3H) 1.64-1.51(m，1H)1.50-1.39(m，1H)1.34(m，2H)0.87(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 391[M+H]⁺。

实施例4

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a) (1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇

使用一般方法E，由1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙酮(2.00g，10.1mmol)制备标题化合物，收率为58％。

MS(ESI⁺)m/z 201[M+H]⁺。

b)1-[(1R)-1-氯乙基]-3-(甲磺酰基)苯

使用一般方法F，由(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇(100mg，0.50mmol)制备标题化合物，收率为21％。

MS(ESI⁺)m/z219[M+H]⁺。

c) (2R)-2-{[2-氨基-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(16.5g，55.3mmol)和1-[(1R)-1-氯乙基]-3-(甲磺酰基)苯(12.1g，55.3mmol)制备标题化合物。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)8.00(m，3H)7.81(m，2H)7.60(t，1H)6.91(d，1H)5.06(q，1H)4.66(t，1H)4.24(br s，1H)3.38(m，1H)3.28(m，1H)3.23(s，3H)1.69(d，3H)1.59(m，1H)1.46-1.34(m，2H)0.86(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 482[M+H]⁺。

d) (2R)-2-{[2-氯-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-{[2-氨基-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇制备标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z501[M+H]⁺。

e) (2R)-2-{[2-甲氧基-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法C，由(2R)-2-{[2-氯-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基} 硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇制备标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 497[M+H]⁺。

f) 7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-2-{[2-甲氧基-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]氨基}-4-甲基戊-1-醇制备标题化合物。三步总收率490 mg，38％。

¹H NMR(CDCl₃)δ 8.07(m，1H)7.78(m，2H)7.52(m，1H)4.95(q，1H)4.63(m，1H)4.34(br s，1H)3.73(m，1H)3.57(m，1H)3.07(s，3H)1.70(d，3H)1.64(m，1H)1.48-1.38(m，2H)0.93(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z483[M+H]⁺。

实施例5

通过制备型HPLC分离实施例2中制备的非对映异构体混合物，得到单纯的非对映异构体(5mg，15％收率)。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.69(s，1H)7.66(d，1H)7.50(m，1H)7.42(t，1H)4.97(q，1H)4.77(d，1H)4.25-4.15(m，1H)3.84(dd，1H)3.64(dd，1H)1.72(d，3H)1.67-1.57(m，1H)1.57-1.47(m，1H)1.44-1.34(m，1H)0.87(dd，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 473[M+H]⁺。

实施例6

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[2-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮)

按照一般方法G，由5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(20mg，0.033mmol)和2-(1-溴乙基)三氟甲基苯(11μL，0.066mmol)反应，合成得到标题化合物(13mg，43％)，为两种非对映异构体的混合物形式。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.69(d，1H)7.63(m，1H)7.53(q，1H)7.34(m，1H)5.45(q，0.5H)5.39(q，0.5H)5.21(t，1H)4.46(d，1H)3.86(m，1H)3.68(m，1H) 1.73(d，3H)1.69(m，1H)1.65-1.55(m，1H)1.47(m，1H)0.98-0.88(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z473[M+H]⁺。

实施例7

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[2-(三氟甲基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

通过制备型HPLC分离实施例6中制备的非对映异构体混合物，得到单纯的非对映异构体(4mg，13％收率)。

¹H NMR(CDCl₃)δ 7.71(d，3H)7.65(d，1H)7.55(t，1H)7.36(t，1H)5.40(q，1H)4.71(d，1H)4.42(m，1H)3.83(dd，1H)3.68(dd，1H)1.76(d，3H)1.74-1.64(m，1H)1.64-1.53(m，1H)1.54-1.43(m，1H)0.96(dd，6H)；

MS(ESI⁺)m/z473[M+H]⁺。

实施例8

7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-5-({(1S)-1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法G，由5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基丁基)氨基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(55mg，0.087mmol)和1-[(1R)-1-氯乙基]-3-(甲磺酰基)苯(38mg，0.17mmol)开始，获得标题化合物，收率为55％。

¹H NMR(CDCl₃)δ10.64(br s，13H)，8.03(s，1H)，7.78(m，2H)，7.50(t，1H)，5.52(d，1H)，4.96(q，1H)，4.23(m，1H)，3.79(m，1H)，3.64(m，1H)，3.08(s，3H)，1.67(d，3H)，1.55(m，1H)，1.38(m，1H)，0.89(m，5H)；

MS(ESI⁺)m/z 469[M+H]⁺。

实施例9

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-[(1-苯乙基)硫基]-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)(2R)-2-({2-氨基-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基} 氨基)-4-甲基戊-1-醇

按照一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(320mg，1.01mmol)和(1-溴乙基)-苯(245mg，1.21 mmol)开始，获得标题化合物，收率为67％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.94(s，2H)，7.16(m，2H)，7.14(m，2H)，6.97(m，1H)，6.77(d，1H)，4.74(m，1H)，4.49(m，1H)，4.03(m，1H)，3.87(m，2H)，3.22(m，2H)，1.72(dd，1H)，1.61(m，1H)，1.42(m，2H)，0.87(d，3H)，0.85(dd，3H)；

MS(ESI⁺)m/z405[M+H]⁺。

b)(2R)-2-({2-氯-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇

按照一般方法B，由(2R)-2-({2-氨基-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇(335mg，0.83mmol)开始，获得标题化合物，收率为71％。

MS(ESI⁺)m/z423/425[M+H]⁺。

c)(2R)-2-({2-甲氧基-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇

按照一般方法C，由(2R)-2-({2-氯-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇(500mg，1.2mmol)获得标题化合物，收率为70％。

MS(ESI⁺)m/z419[M+H]⁺。

d)7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

按照一般方法D，由(2R)-2-({2-甲氧基-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇(320mg，0.76mmol)开始，获得标题化合物，为两种非对映异构体的混合物形式，收率为68％。

¹H NMR(DMSO-d₆)7.43(m，2H)，7.41(m，2H)，7.31(m，1H)，6.37(br s，1H)，4.94(m，1H)，4.64(m，1H)，4.25(m，1H)，3.45-3.39(m，2H)，3.38-3.27(m，2H)，1.66(d，3H)，1.60(m，1H)，1.42(m，1H)，0.89(d，3H)，0.85(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z405[M+H]⁺。

实施例10

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1 R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

HPLC纯化(2R)-2-({2-氨基-5-[(1-苯乙基)硫基][1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}氨基)-4-甲基戊-1-醇(实施例9(a)，500 mg)，得到标题化合物(150mg)，为单纯的非对映异构体。

¹H NMR(DMSO-d₆)7.98(s，2H)，7.45(m，2H)，7.32(m，2H)，7.24(m，1H)，6.87(d，1H)，4.95(q，1H)，4.24(br s，1H)，3.45(m，1H)，3.35(m，1H)，1.68(d，3H)，1.62(m，1H)，1.42(m，2H)，0.88(d，3H)，0.82(d，3H)。

b)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(150mg，0.37mmol)开始，获得标题化合物，收率为51％。

MS(ESI⁺)m/z 423/425[M+H]⁺。

c)(2R)-2-[(2-甲氧基-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法C，由(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(70mg，0.17mmol)开始，获得标题化合物，收率为91％。

MS(ESI⁺)m/z419[M+H]⁺。

d) 7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

按照一般方法D，由(2R)-2-[(2-甲氧基-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(65mg，0.15mmol)开始，获得标题化合物，收率为67％。

¹H NMR(DMSO-d₆)12.36(s，1H)，7.42(m，2H)，7.33(m，2H)，4.91(q，1H)，4.72(m，1H)，4.25(br s，1H)，3.44(m，1H)，3.37(m，1H)，1.69(d，3H)，1.58(d，1H)，1.38(m，2H)，0.88(d，3H)，0.84(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 405[M+H]⁺。

实施例11

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(27g，90mmol)和[(1R)-1-氯乙基]苯(19g，135mmol)开始，获得标题化合物，收率为42％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.95(br s，2H)，7.43(m，2H)，7.31(m，2H)，7.22(m，1H)，6.85(d，1H)，4.96(q，1H)，4.64(t，1H)，4.27(br s，1H)，3.44-3.30(m，2H)，1.66(d，3H)，1.59(m，1H)，1.41(m，2H)，0.87(d，3H)，0.84(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z404[M+H]⁺。

b)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

按照一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[((1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(70mg，0.17mmol)开始，获得标题化合物，收率为85％。

MS(ESI⁺)m/z423/425[M+H]⁺。

c)(2R)-2-[(2-甲氧基-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基成-1-醇

按照一般方法C，由(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(77mg，0.18mmol)开始，获得标题化合物，收率为51％。

MS(ESI⁺)m/z 419[M+H]⁺。

d)7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1 S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

按照一般方法D，由(2R)-2-[(2-甲氧基-5-{[(1S)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(50mg，0.12mmol)开始，获得标题化合物，收率为37％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.36(m，2H)，7.25(m，2H)，7.17(m，1H)，7.05(br s，1H)，4.87(m，1H)，4.62(m，1H)，4.24(m，1H)，3.35(m，2H)，3.25(m，2H)，1.62(d，3H)，1.55(d，1H)，1.35(m，1H)，0.84(d，3H)，0.78(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 405[M+H]⁺。

实施例12

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

a)3-[(1R)-1-氯乙基]苯甲腈

按照一般方法F，由3-[(1S)-1-羟乙基]苯甲腈(3.35g，22.8mmol)开始，获得标题化合物，收率为79％。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.97(s，1H)，7.82(m，2H)，7.60(t，1H)，5.40(q，1H)，1.80(d，3H)；

¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ144.1，131.2，131.6，130.3，129.9，118.4，111.6，57.41，25.5；

MS(ESI⁺)m/z 166[M+H]⁺。

b)3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

按照一般方法A，由2-氨基-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5(6H)-硫酮(2.87g，10.0mmol)和3-[(1R)-1-氯乙基]苯甲腈(2.31g，13.9mmol)开始，获得标题化合物，收率为75％。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ 8.00(s，2H)，7.91(s，1H)，7.82(m，1H)，7.69(m，1H)，7.52(t，1H)，6.90(d，1H)，5.00(q，1H)，4.63(t，1H)，4.13(br s，1H)，3.41(m，1H)，3.30(m，1H)，1.66(d，3H)，1.57(m，1H)，1.43(m，1H)，1.29(m，2H)，0.86(t，3H)；

¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ 170.8，168.7，165.1，155.7，145.9，132.3，130.8，130.6，129.5，118.7，111.2，63.3，59.7，51.8，42.3，33.0，21.8，18.8，14.0；

MS(ESI⁺)m/z 415[M+H]⁺。

c) 3-{(1S)-1-[(2-氧-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

按照一般方法B，由3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈(3.09g，7.46mmol)开始，获得标题化合物，收率为84％。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.19(d，1H)，7.95(br s，1H)，7.85(d，1H)，7.71(d，1H)，7.54(t，1H)，5.05(q，1H)，4.21(m，1H)，3.45-3.34(m，2H)，1.69(d，3H)， 1.60(m，1H)，1.48(m，1H)，1.37-1.22(m，2H)，0.86(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 434[M+H]⁺。

d) 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-2-甲氧基[[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

按照一般方法C，由3-{(1S)-1-[(2-氯-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈(2.43g，5.61mmol)开始，制备标题化合物。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ7.94(br s，1H)，7.83(m，1H)，7.71(m，1H)，7.54(m，2H)，5.04(q，1H)，4.68(m，1H)，4.18(br s，1H)，4.16(s，3H)，3.44-3.30(m，2H)，1.69(d，3H)，1.63-1.54(m，1H)，1.45(m，1H)，1.35-1.23(m，2H)，0.86(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 430[M+H]⁺。

e)3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

按照一般方法D，由3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈开始，获得标题化合物，收率为19％。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ12.39(s，1H)，7.93(s，1H)，7.84(d，1H)，7.70(d，1 H)，7.53(t，1H)，7.24(d，1H)，4.95(q，1H)，4.66(m，1H)，4.15(br s，1H)，3.42-3.27(m，2H)，1.67(d，3H)，1.57(m，1H)，1.43(m，1H)，1.35-1.22(m，2H)，0.86(t，3H)；

¹³C NMR(DMSO-d₆)：δ 171.9，169.2，165.8，154.9，145.4，132.3，130.8，130.8，129.6，118.7，111.4，91.0，63.1，59.7，42.6，32.8，21.0，18.8，13.8；

MS(ESI⁺)m/z 416[M+H]⁺。

实施例13

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇

将碘化甲基镁(3M THF溶液，13.2mL，4.4mmol)通过注射器在0℃逐滴加至3-(甲磺酰基)苯甲醛(0.74g，4.0mmol)的THF(15mL)溶液中。所得到的反应混合物在0℃搅拌直到不再发生转化成产物(通过GC-MS监测)。反应用饱和氯化铵猝灭，水相用EtOAc萃取，有机相用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化(EtOAc∶己烷 1∶4)，得到标题化合物(260mg)，其直接用于接下来的步骤中不再进一步纯化(大致纯度50％)。

GC-MS(EI)(HP5MS，0.25mm×30m，0.25μm)m/z 200M⁺。

b)1-(1-氯乙基)-3-(甲磺酰基)苯

在0℃，将亚硫酰二氯(0.11g，0.91mmol)加至N，N-二乙苯胺(0.19g，1.3mmol)和1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙醇(0.26g，1.3mmol)的甲苯(4mL)溶液中。反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后加入EtOAc。有机相依次用2M HCl(水溶液)、水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，然后干燥(MgSO₄)，过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速柱色谱法纯化(乙酸乙酯∶己烷梯度洗脱20∶80至25∶75)，得到标题化合物(60mg)，其直接用于接下来的步骤中不再进一步纯化(大致纯度75％)。

GC-MS(EI)(HP5MS，0.25mm×30m，0.25μm)m/z 218 M⁺。

c) 7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-({1-[3-(甲磺酰基)苯基]乙基}硫基)[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法G，由1-(1-氯乙基)-3-(甲磺酰基)苯(27mg，0.12mmol)和5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(30mg，0.05mmol)开始，制备标题化合物，但进行下述改变：加入硼氢化钠(3当量)，反应在室温搅拌，得到两种非对映异构体的混合物形式，收率为42％。

¹H NMR(MeOH-d₄，)δ 8.06(m，1H)，7.84(m，2H)，7.58(m，1H)，5.12(m，1H)，4.41(m，0.5H，来自一种非对映异构体)，4.36-4.25(m，0.5H，来自一种非对映异构体)，3.57-3.42(m，2H)，3.12(s，1.5H，来自一种非对映异构体)，3.11(s，1.5H，来自一种非对映异构体)，1.74(d，1.5H，来自一种非对映异构体)，1.72(d，1.5H，来自一种非对映异构体)，1.70-1.56(m，1H)，1.56-1.36(m，2H)，0.93(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 483[M+H]⁺。

实施例14

3-{ 1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺；

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺；和

3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺

a)3-(1-氯乙基)苯甲酰胺

将二乙苯胺(390μL，2.45mmol)加至在DCM(20mL)中浆化的3-(1-羟乙基)苯甲酰胺(400mg，2.45mmol)，反应混合物用冰浴冷却。逐滴加入亚硫酰二氯((255μL，2.47mmol)，反应置于冰箱中过夜。加入水，反应混合物用DCM萃取2次，用10％HCl溶液洗涤，饱和碳酸氢钠溶液中和，盐水处理，干燥(MgSO₄)，过滤后蒸发至干。粗产物由乙醚/己烷重结晶得到335mg(75％)标题化合物，为白色固体。

¹H NMR(氯仿-d)δ7.90(s，1H)7.73(d，1H)7.62(d，1H)7.46(t，1H)5.14(q，1H)1.88(d，3H)1.60(s，2H)；

MS(ESI⁺)m/z 183，185[M+H]⁺。

b)3-{1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺

使用一般方法G，由5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(30mg，0.050mmol)和3-(1-氯-乙基)-苯甲酰胺(18mg，0.10mmol)开始，获得标题化合物，为两种非对映异构体的混合物形式，收率为36％。

标题化合物的非对映异构体(58.6mg，0.131mmol)通过反相HPLC纯化[Kromacil-C18柱，250×20mm，粒径＝10μm，流速＝15mL/min，流动相＝水/MeCN/三乙胺(80/20/0.1；v/v/v)]。冻干得到3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺(23mg，39％收率，99.9％de)。

¹H NMR(CD₃OD)δ 7.98(s，1H)，7.73(d，1H，J＝7.7Hz)，7.68(d，1H，J＝7.7 Hz)，7.42(t，1H，J＝7.6Hz)，5.08(q，1H，J＝7.3Hz)，4.49-4.40(m，1H)，3.52(dd，1H，J＝11.0，5.4Hz)，3.53(dd，1H，J＝11.0，5.4Hz)，1.94(s，2H)，1.73 (d，2H，J＝7.2Hz)，1.71-1.63(m，1H)，1.56-1.41(m，2H)，0.96(d，3H，J＝7.1Hz)，0.94(d，3H，J＝7.1Hz

MS(ESI)m/z 448[M+1]；

以及3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺(19mg，32％收率，99.9％de)。

¹H NMR(CD₃OD)δ7.98(s，1H)，7.73(d，1H，J＝7.8Hz)，7.68(d，1H，J＝7.8 Hz)，7.41(t，1H，J＝7.7 Hz)，5.05(q，1H，J＝7.3Hz)，4.35-4.28(m，1H)，3.60(dd，1H，J＝10.8，5.8Hz)，3.53(dd，1H，J＝10.8，5.8Hz)，1.94(s，2H)，1.72(d，2H，J＝7.1Hz)，1.68-1.58(m，1H)，1.55-1.39(m，2H)，0.92(d，3H，J＝6.7Hz)，0.82(d，3H，J＝6.6Hz)。

MS(ESI)m/z 448[M+1]。

实施例15

7-{[(1R-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基-5-[(1-苯基丙基)硫基]}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法G，由5-[7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮-5-基二硫基]-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮(30mg，0.050mmol)和(1-氯丙基)苯(15mg，0.10mmol)开始，获得标题化合物，为两种非对映异构体的混合物形式，收率为41％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ12.3 1(br.s.，1H)，7.45-7.28(m，4H)，7.28-7.14(m，2H)，4.77-4.65(m，2H)，4.40-4.19(m，1H)，3.51-3.31(m，2H)，2.16-2.02(m，1H)，2.02-1.86(m，1H)，1.69-1.54(m，1H)，1.52-1.32(m，2H)，0.95-0.76(m，9H)；

MS(ESI)m/z 419[M+1]。

实施例16

5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)1-[(1R)-1-氯乙基]-2-氟苯

使用一般方法F，由(1S)-1-(2-氟苯基)乙醇(3.56g，25mmol)开始，获得标题化合物，收率为65％，对映体过量为93％。

¹H NMR(CDCl₃)δ7.53(td，1H)，7.28(m，1H)，7.16(m，1H)，7.04(m，1H)，5.42(q，1H)，1.84(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 158[M+H]⁺。

b)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法A获得，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(800mg，2.67mmol)和1-[(1R)-1-氯乙基]-2-氟苯(509mg，3.21mmol)开始，获得标题化合物，收率为41％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ7.97(s，2H)，7.53(td，1H)，7.29(m，1H)，7.17(m，1H)，7.15(d，1H)，6.89(d，1H)，5.22(q，1H)，4.61(t，1H)，4.24(br s，1H)，3.38(dt，1H)，3.28(m，1H)，1.65(d，3H)，1.59(m，1H)，1.49-1.32(m，2H)，0.87(d，，3H)，0.84(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 422[M+H]⁺。

c) (2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

按照一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(1.12g，2.67mmol)开始，获得标题化合物，收率为72％。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.08(d，J＝8.4Hz，1H)，7.56(td，J＝7.6，1.6Hz，1H)，7.31(m，1H)，7.20(m，1H)，7.17(d，J＝7.7Hz，1H)，5.25(q，J＝7.0Hz，1H)，4.73(t，J＝5.3Hz，1H)，4.33(m，1H)3.43-3.33(m，2H)，1.69(d，J＝7.0Hz，3H)，1.59(m，1H)，1.48(m，1H)，1.38(m，1H)，0.87(d，J＝6.6Hz，3H)，0.84(d，J＝6.6Hz，3H)；

MS(ESI)m/z 441[M+1]。

d) (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法C(不同的是反应混合物在40℃搅拌直到反应完全)，由(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(200mg，0.45mmol)开始，获得标题化合物，收率为85％。

MS(ESI⁺)m/z 437[M+H]⁺。

e)5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(140mg，0.32mmol)开始得到固体形式的标题化合物，收率为38％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ12.36(s，1H)7.55(t，1H)7.24-7.35(m，2H)7.16-7.22(m，2H)5.20(q，1H)4.65(m，1H)4.28(m，1H)3.37(m，1H)3.29(m，1H)1.68(d，3H)1.60(m，1H)1.47(m，1H)1.37(m，1H)0.87(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 423[M+H]⁺。

实施例17

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢 [1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

a)3-[(1R)-1-氯乙基]苯甲腈

按照一般方法F，由3-[(1S)-1-羟乙基]苯甲腈(3.35g，22.8mmol)开始，制备标题化合物，收率为79％。

MS(ESI⁺)m/z 166[M+H]⁺。

b)3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

按照一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(200mg，0.67mmol)和3-[(1R)-1-氯乙基]苯甲腈(166mg，1.0 mmol)开始，制备标题化合物，收率为31％。

¹H NMR(CD₃OD)δ7.89-7.76(m，2H)7.57(d，1H)7.49(m，1H)5.12(q，1H)4.42(br s，1H)3.53(m，1H)3.44(m，1H)1.63-1.76(m，4H)1.41-1.60(m，2H)0.96(t，6H)；

MS(ESI⁺)m/z429[M+H]⁺。

c)3-{(1S)-1-[(2-氯-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

使用一般方法B(不同的是反应完成后将反应混合物倾入冰上，过滤收集沉淀析出物质)，由3-{(1S)-1-[(2-氨基-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈(92mg，0.21mmol)开始获得固体形式的标题化合物，收率为70％。

MS(ESI⁺)m/z 449[M+H]⁺。

d)3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

使用一般方法C获得(不同的是反应混合物在40℃搅拌直到反应完全)，由3-{(1S)-1-[(2-氯-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈(67mg，0.15mmol)开始，获得标题化合物，收率为45％。

MS(ESI⁺)m/z 444[M+H]⁺。

e)3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈

使用一般方法D，由3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲腈(60mg，0.14mmol)开始获得固体形式的标题化合物，收率为32％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ12.41(s，1H)7.93(s，1H)7.84(d，1H)7.71(d，1H)7.53(t，1H)7.25(d，1H)4.95(q，1H)4.25(m，1H)3.27(m，1H)1.67(d，3H)1.56(m，1H)1.34-1.49(m，2H)0.86(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 430[M+H]⁺。

实施例18

7-{[(1R)-3-氟-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)1-[(1R)-1-氯乙基]-2-氟苯

使用一般方法F，由(1S)-1-(2-氟苯基)乙醇(3.56g，25mmol)获得标题化合物，收率为65％，对映体过量为93％。

¹H NMR(CDCl₃)δ 7.53(td，1H)，7.28(m，1H)，7.16(m，1H)，7.04(m，1H)， 5.42(q，1H)，1.84(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 1 58[M+H]⁺。

b)6-氨基-2-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}嘧啶-4-醇

将NaH(60％油分散液，1.05g，26.3mmol)分成数份与NaBH₄(0.099g，2.7mmol)先后加至6-氨基-2-巯基嘧啶-4-醇一水合物(4.23g，26.3mmol)的DMF(40mL)溶液中。30分钟后，加入1-[(1R)-1-氯乙基]-2-氟苯(5.0g，31.5mmol)的DMF(10mL)溶液，反应混合物搅拌24 h。反应混合物浓缩后，在水和DCM之间分配，有机相干燥(MgSO₄)并蒸发。残余物通过快速柱色谱法纯化(阶式梯度为5-10％MeOH的CHCl₃溶液)，得到标题化合物(5.20g，75％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.35(m，1H)，7.13(m，1H)，6.99(m，2H)，6.29(s，2H)，5.00(q，1H)，4.76(br s，1H)，1.49(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 266[M+H]⁺。

c)2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-醇

将KSCN(10.76g，110.7mmol)和吡啶(3.9mL，49.2mmol)加至6-氨基-2-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}嘧啶-4-醇(6.53g，24.6 mmol)的DMF(70mL)溶液中。混合物冷却至0℃，然后逐滴加入Br₂。3.5h后，将反应混合物倾入水中，过滤收集所形成的沉淀。将固体悬浮于DMF(75mL)和水(15mL)的混合物中，加热至120℃持续8h。将反应混合物倾入水中，过滤收集固体，在40℃真空干燥，得到标题化合物(6.42g，81％收率)。

MS(ESI⁺)m/z 323[M+H]⁺。

d)7-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺

将POCl₃(2.7 mL，29.7mmol)加至DMF(3.07mL，39.6mmol)的二

烷(30 mL)溶液中。30分钟后，上述混合物加至2-氨基-5-{[((1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-醇(6.38g，19.8mmol)的二烷(100mL)溶液中。30分钟后加入POCl₃(2.77mL，29.7mmol)，反应混合物加热至80℃持续2 h。冷却至室温后，小心加入水(20mL)，所得到的混合物在80℃搅拌30分钟，在室温搅拌2h。将反应混合物倾入水中，收集所形成的沉淀。固体通过快速柱色谱法纯化(5％MeOH的CHCl₃溶液)，得到标题化合物(5.91g，88％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.94(s，2H)，7.58(m，1H)，7.32(m，1H)， 7.20(m，2H)，5.22(q，1H)，1.71(d，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 341[M+H]⁺。

e) (2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-氟-4-甲基戊-1-醇

将DIPEA(2.09mL，12.0mmol)加至7-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2-胺(1.36g，4.0mmol)和(2R)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇(4mmol)的NMP(3mL)溶液中。反应混合物在120℃搅拌22h后，倾入水中，过滤收集沉淀。固体通过快速柱色谱法纯化(阶式梯度为5％-10％MeOH的CHCl₃溶液)，制备型HPLC纯化得到标题化合物(0.22g，13％收率)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.35(m，1H)，7.03(m，1H)，6.91(m，2H)，5.15(q，1H)，4.40(m，1H)，3.35-3-21(m，2H)，1.82-1.72(m，2H)，1.50(d，3H)，1.17(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 440[M+H]⁺。

f) (2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-氟-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-氟-4-甲基戊-1-醇(0.20g，0.44mmol)和NaNO₂(0.092g，1.33mmol)开始，制备标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 459[M+H]⁺。

g) (2R)-4-氟-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

将KOH(0.050g，0.89mmol)加至(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-氟-4-甲基戊-1-醇的MeOH(5mL)溶液中，混合物加热至50℃。3h后，混合物用NaCl(水溶液)稀释，CHCl₃ 萃取，有机相干燥(MgSO₄)并蒸发，得到标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 455[M+H]⁺。

h) 7-{[(1R)-3-氟-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-4-氟-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇开始，得到标题化合物(0.067g，34％收率，按照步骤f-h计算)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.57(m，1H)，7.29(m，1H)，7.19-7.08(m，2H)，5.34(q，1H)，4.62 m，1H)，3.58-3.45(m，2H)，2.08-1.90(m，2H)；

MS(ESI⁺)m/z 441[M+H]⁺。

实施例19

5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇

使用一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇(703mg，2.46mmol)和1-[(1R)-1-氯乙基]-2-氟苯(469mg，2.96mmol)开始，获得标题化合物，收率为96％。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ 8.38(br s，2H)，7.55(td，1H)，7.32(m，1H)，7.20(m，1H)，7.18(d，1H)，5.26(q，1H)，4.19(br s，1H)，3.43(dd，5.6 Hz，1H)，3.35(dd，1H)，1.69(d，3H)，1.66-1.42(m，2H)，1.39-1.21(m，2H)，0.86(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 408[M+H]⁺。

b)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇(0.32g，0.79mmol)和NaNO₂ (0.16g，2.37mmol)开始，制备标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 427[M+H]⁺。

c)(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3 ]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇

将KOH(0.089g，1.58mmol)加至(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇的MeOH(10mL)溶液中，将混合物加热至50℃。3h后，混合物用NaCl(水溶液)稀释，CHCl₃萃取，有机相干燥(MgSO₄)并蒸发，得到标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 423[M+H]⁺。

d) 5-{[(1 S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]戊-1-醇开始，得到标题化合物(0.22g，67％收率，按照步骤b-d计算)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.56(t，1H)，7.18(q，1H)，7.08(t，1H)，7.00(t，1H)，5.51(d，1H)，5.26(q，1H)，4.30 8(br s，1H)，3.59(m，2H)，1.65(d，3H)，1.60-1.36(m，4H)，0.93(t，3H)；

MS(ESI⁺)m/z 409[M+H]⁺。

实施例20

5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

a)1-[(1R)-1-氯乙基]-3-氟苯

使用一般方法F获得，由(1S)-1-(3-氟苯基)乙醇(4.20g，30mmol)开始，制备标题化合物，收率为49％，对映体过量为94.5％。

¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 7.47-7.30(m，3H)；7.16(t，1H)；5.36(q，1H)；1.78(d，3H)。

b)(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法A，由(2R)-2-[(2-氨基-5-巯基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(0.30g，1.0mmol)、1-[(1R)-1-氯乙基]-3-氟苯(0.17g，1.1mmol)和NaBH₄(0.019g，0.5mmol)开始，制备标题化合物，收率为61％。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.23(m，2H)，7.13(m，1H)，6.86(m，1H)，5.01(q，1H)，4.38(m，1H)，3.43(m，2H)，1.63(d，3H)，1.44(m，2H)，0.88(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 422[M+H]⁺。

c)(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

使用一般方法B，由(2R)-2-[(2-氨基-5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇(0.24g，0.56mmol)和NaNO₂(0.12g，1.69mmol)开始，制备标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 441[M+H]⁺。

d)(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3 ]噻唑并[[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇

将KOH(0.063g，1.12mmol)加至(2R)-2-[(2-氯-5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇的MeOH(5mL)溶液中，混合物加热至50℃。4 h后，混合物用NaCl(水溶液)稀释，CHCl₃ 萃取，有机相干燥(MgSO₄)并蒸发，得到标题化合物。

MS(ESI⁺)m/z 437[M+H]⁺。

e)5-{[(1 S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3 ]噻唑并[[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮

使用一般方法D，由(2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-氟苯基)乙基]硫基}-2-甲氧基[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)氨基]-4-甲基戊-1-醇开始，得到标题化合物(0.16g，65％收率，按照步骤c-e计算)。

¹H NMR(400MHz，CD₃OD)：δ7.30(m，2H)，7.19(m，1H)，6.95(m，1H)，5.02(q，1H)，4.44(m，1H)，3.49(m，2H)，1.69(m，4H)，1.55-1.40(m，2H)，0.94(m，6H)；

MS(ESI⁺)m/z 423[M+H]⁺。

药理学筛选

材料

重组人fractalkine(hCX₃CL1)和重组人白介素-8(IL-8或hCXCL8)购自PeproTech Inc.，UK。比活性为2200 Ci/mmol的重组[¹²⁵I]-fractalkine(人)和[¹²⁵I]hIL-8购自NENLife Science Products，Inc.，UK。Fluo4-AM购自Molecular Probes，US。其它所有化学试剂都是分析纯级的。

细胞

完全的人CX3CR1 cDNA(GenBank登录号U20350)由人脑mRNA(Superscript，Life Technologies)提取得到，与pCR-Blunt II TOPO载体(InVitrogen)相连。相应的插入片段hCX3CR1分离后，进一步亚克隆到pcDNA3.1zeo中。质粒DNA使用Plasmid Midi Kit(Qiagen)制备。然后使用Superfect Transfection Reagent(Qiagen)按照制造商的方案，将hCX₃CR1的表达质粒引入至人胚肾悬浮液(HEKS)293细胞系中，后者含有稳定表达嵌合G-蛋白质Gα_qi5的载体。使用zeocin(500μg/mL)和潮霉素(100μg/mL)生成稳定的克隆。为了进一步应用，将细胞保持在Dulbecco改进的Eagle培养基/Ham营养混合物F12(DMEM/F12)中，后者含有维生素B6，补充有10％(v/v)胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素、250μg/mL zeocin和100μg/mL潮霉素。

将由AstraZeneca Charnwood获得的表达人CXCR2的细胞在EMEM中培养，后者含有Glutamax，补充有10％FBS(来自PAA，Austria)、1％非必需氨基酸(NEAA)、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素(PEST)和500μg/mL遗传霉素/G418。

膜制备

使细胞在37℃和5％CO₂下生长，在含有10mM Tris-HCl pH 7.4、5mMEDTA、0.1mg/mL杆菌肽的缓冲液中以60-80％融合率收集。细胞在300xg下离心10min，将沉淀再次悬浮于收集缓冲液(10mM Tris-HCl，pH 7.4、5mM乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1mg/mL杆菌肽)中，汇集后使用Dounce匀浆器匀化处理。匀浆在48000xg下离心10min，使用Ultra-Turrax T8再次悬浮于收集缓冲液中。将膜等分储存于-80℃。按照Harrington(1990，Anal.Biochem.186，285-287)所述，测量微孔滴定板中的蛋白质浓度。

体外受体结合测定

[¹²⁵I]-fractalkine的竞争性结合研究在总体积为1000μL/孔的2mL 96-深孔板(Beckman，Germany)中进行。每孔含有10 pM[¹²⁵I]-fractalkine和相当于在测定缓冲液(50mM Hepes-KOH，pH 7.4、10mM MgCl₂、1mM EDTA、0.1％(w/v)明胶)中受体浓度为1 pM的膜。将10种浓度(2点/对数单位)的测试化合物预先溶解于DMSO中，加入使得最终浓度为1％(v/v)DMSO。加入膜开始启动测定，在25℃培养24h。使用Whatman GF/B玻璃纤维滤器进行快速过滤，从而终止反应，滤器预先使用0.3％聚乙烯亚胺处理，接下来使用冰冷的缓冲液(10mM Hepes-KOH pH 7.4，500mM NaCl)洗涤，同时使用Brandel受体结合捕获器。加入闪烁鸡尾酒，放射活性用Packard 2500TR液体闪烁计数器(Perkin Elmer，USA)测量。

[¹²⁵I]-hIL-8竞争性结合研究以单份在最终体积为200μL的白色透明底部96-孔板中进行，每孔含有150 pM[¹²⁵I]-hIL-8(比活性2200Ci/mmol)、相当于在测定缓冲液[50mM HEPES-KOH pH 7.4、10mM MgCl₂、1mM EDTA、0.5％(w/v)明胶]中为20 pM受体和1.5mg SPA-珠的膜-SPA制品。对测试化合物进行上述处理。非特异性结合在500nM未标记的hIL-8存在下测量。每次测试时，使用激动剂hIL-8(浓度响应曲线由3pM至30nM)作为对照化合物。肽曲线中不含DMSO。加入140μL膜-SPA制品启动结合反应，样品在室温避光培养4h。测定板用液体闪烁计数器(Wallac MicroBeta

TriLux1450 from PerkinElmer，USA)计数。

[³⁵S]GTPγS结合

[³⁵S]GTPγS结合研究在透明底部的微孔滴定板中以双份用稀释在DMSO(最终浓度1％)中的10种浓度的抑制剂(2浓度/对数单位)在室温进行。加入表达hCX3CR1受体的膜(最终浓度20μg蛋白质/孔)连同悬浮于GTPγS结合缓冲液(50mM Tris-HCl、100mM NaCl、0.1％明胶、15μg皂甙/mL和3μM GDP，pH 7.4，室温)的所有SPA-珠(最终浓度1mg/孔)。膜、SPA珠和药物预先培养30min，然后加入310 pM fractalkine进行最大刺激。将基础活性定义为在没有fractalkine刺激下测得的活性(GTPγS结合缓冲液)。再过30min，加入[³⁵S]GTPγS至最终浓度为0.1nM、最终测试体积为0.2mL启动反应。30分钟后，试验通过在2000 rpm下离心2x5分钟(不同方向)终止，放射活性用液体闪烁计数器(Wallac MicroBeta

TriLux 1450)测量。

结果

所选择的本发明化合物和对照化合物5-(苄硫基)-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮的受体结合数据如下表所示。

使用本申请的一般方法C和D，由(R)-2-(5-苯甲基硫基-2-溴-噻唑并[4，5-d]嘧啶-7-基氨基)-4-甲基-戊-1-醇(WO 02/076990)制备对照化合物5-(苄硫基)-7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.36(br s，1H)，7.44-7.39(m，2H)，7.32-7.20(m，4H)，4.37-4.28(m，3H)，3.44-3.31(m，2H)，1.65-1.52(m，1H)，1.48-1.32(m，2H)，0.90-0.78(m，6H)；LCMS(ESI+)m/z 391[M+H]⁺。

对照下表中的数据清楚表明，相对于相应的对照化合物，其中R¹表示Me或Et的本发明化合物对CX₃CR1受体而言是较强的拮抗剂，而对CXCR2受体而言则是较弱的拮抗剂。针对CX₃CR1受体的拮抗作用具有如此高的选择性，预期本发明化合物将具有显著的治疗优势。

表

Claims

1.式(I)化合物或其可药用盐

其中：

R¹表示CH₃或CH₃CH₂；

R²表示H、3-CN、2-CF₃、2-F、3-F、3-CF₃、3-CONH₂或3-SO₂CH₃；

R³表示H；

R⁴表示H或CH₃；以及

R⁵表示H；或者当R⁴是CH₃时，R⁵表示H或F。

2.权利要求1的化合物，其中R¹表示CH₃。

3.权利要求1的化合物，其中R¹表示CH₃CH₂。

4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R²表示H、3-CN、2-F、3-F或3-SO₂CH₃。

5.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R⁴表示H。

6.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R⁴表示CH₃。

7.权利要求6的化合物，其中R⁵表示H。

8.权利要求6的化合物，其中R⁵表示F。

9.权利要求1的化合物，其中R¹表示CH₃；R²表示H、2-F或3-CN；R³表示H；R⁴表示H或CH₃；以及R⁵表示H。

10.权利要求1的式(I)化合物，其为：

7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-5-{[(1R)-1-苯乙基]硫基}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基}-2-氧代-2，3-二氢[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-5-基)硫基]乙基}苯甲酰胺；和

7-{[(1R-1-(羟甲基)-3-甲基丁基]氨基-5-[(1-苯基丙基)硫基]}[1，3]噻唑并[4，5-d]嘧啶-2(3H)-酮；

或其可药用盐。

11.药物组合物，其包括权利要求1-10中任一项所述的式(I)化合物或其可药用盐，以及混合有可药用稀释剂或载体。

12.制备权利要求1-7中任一项所述的式(I)化合物或其可药用盐的方法，所述方法包括：

a)使式(II)化合物与式(III)化合物反应，

其中R³、R⁴和R⁵如式(I)中定义；

其中R¹和R²如式(I)中定义以及L¹表示离去基团；或者

b)水解式(IV)化合物

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如式(I)中定义；