RU2411245C9

RU2411245C9 - Новые производные 5,7-дизамещенного [1,3] тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3h)-она

Info

Publication number: RU2411245C9
Application number: RU2007140552/04A
Authority: RU
Inventors: Гуннар НОРДВАЛЛЬ (SE); Гуннар Нордвалль; Колин РЭЙ (SE); Колин РЭЙ; Тобиас РЕЙН (SE); Тобиас Рейн; Дэниел СОН (SE); Дэниел СОН
Original assignee: Астразенека Аб
Priority date: 2005-04-06
Filing date: 2006-04-03
Publication date: 2011-05-27
Also published as: AU2006231835A1; MX2007012067A; AU2006231835B8; WO2006107257A1; CN101193898B; EP1869055A1; ZA200708182B; IL185913A0; AR053347A1; BRPI0609736A2; RU2411245C2; AU2006231835B2; UY29451A1; KR20080004484A; CN101193898A; RU2007140552A; US8088780B2; JP2008535834A; US20090124637A1; NO20075610L

Abstract

Изобретение относится к производным 5,7-дизамещенного [1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-она формулы (I), где R1 представляет собой СН3 или СН3СН2; R2 представляет собой Н, 3-CN, 2-CF3, 2-F, 3-F, 3-CF3, 3-CONH2 или 3-SO2CH3; R3 представляет собой Н; R4 представляет собой Н или СН3; и R5 представляет собой Н; или, когда R4 представляет собой СН3, R5 представляет собой Н или F; и его фармацевтически приемлемым солям. Также изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей свойствами антагониста рецептора CX3CR1, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Технический результат - производные 5,7-дизамещенного[1,3]тиазоло[4,5-D]пиримидин-2(3Н)-она в качестве селективных антагонистов рецептора CX3CR1. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 табл.

Description

Область изобретения

В настоящем изобретении раскрыты новые производные 5,7-дизамещенного [1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-она, а также способы их получения, фармацевтические композиции, содержащие их, и их применение в терапии.

Предшествующий уровень техники

Хемокины играют важную роль в иммунных и воспалительных ответах при различных заболеваниях и расстройствах, включая астму, атеросклероз и аллергические заболевания, а также аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит и рассеянный склероз. Эти небольшие, секретируемые молекулы представляют собой растущее суперсемейство белков с массой 8-14 кДа, которые характеризуются консервативным цистеиновым мотивом. В настоящее время суперсемейство хемокинов включает в себя 4 группы, демонстрирующие характерные структурные мотивы, С-Х-С, С-С и С-Х₃-С и ХС семейства. Семейства С-Х-С и С-С имеют сходство в последовательностях и различаются друг от друга по единственной аминокислотной вставке между NH-проксимальной парой цистеиновых остатков. Семейство С-Х₃-С отличается от других двух семейств тем, что имеет тройную аминокислотную вставку между NH-проксимальной парой цистеиновых остатков. Наоборот, у членов семейства ХС отсутствует один из первых двух цистеиновых остатков.

Хемокины С-Х-С включают несколько сильных хемоаттрактантов и активаторов нейтрофилов, таких как интерлейкин-8 (IL-8) и нейтрофил-активирующий пептид 2 (NAP-2).

Хемокины С-С включают сильные хемоаттрактанты моноцитов, лимфоцитов и нейтрофилов. Примеры включают человеческие моноцитарные хемотаксические белки 1-3 (МСР-1, МСР-2 и МСР-3), RANTES (регулируемый при активации, экспрессируемый и секретируемый нормальными Т-клетками), эотаксин и воспалительные белки макрофагов 1α и 1β (MIP-1α и MIP-1β).

Хемокин С-Х₃-С (также известный как фракталкин) представляет собой сильный хемоаттрактант и активатор микроглии в центральной нервной системе (ЦНС), а также моноцитов, Т-клеток, NK клеток и тучных клеток.

Исследования показали, что действия хемокинов опосредованы подсемействами рецепторов, связанных с G-белком, среди которых рецепторы, обозначенные CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 и CCR11 (для семейства С-С); CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 и CXCR5 (для семейства С-Х-С) и CX₃CR1 для семейства С-Х₃-С. Эти рецепторы представляют собой хорошие мишени для разработки лекарств, так как агенты, модулирующие эти рецепторы, были бы полезны при лечении нарушений и заболеваний, таких как те, которые упомянуты выше.

В WO 01/25242 раскрыты некоторые производные тиазоло[4,5-d]пиримидина, которые полезны в качестве антагонистов рецепторов, связанных с семействами хемокинов С-Х-С и С-С, особенно в качестве антагонистов рецептора CXCR2.

Настоящее изобретение относится к группе соединений, которые находятся в пределах общего объема WO 01/25242, но обладают структурой, для которой в указанном документе не приведено конкретных примеров. Соединения по настоящему изобретению при сравнении с Примерами, раскрытыми в WO 01/25242, неожиданно проявляют полезные свойства в качестве антагонистов рецептора CX₃CR1.

Описание изобретения

В настоящем изобретении предложены соединения формулы (I)

где R¹ представляет собой СН₃ или СН₃СН₂;

R² представляет собой Н, 3-CN, 2-CF₃, 2-F, 3-F, 3-CF₃, 3-CONH₂ или 3-SO₂CH₃;

R³ представляет собой Н;

R⁴ представляет собой Н или СН₃; и

R⁵ представляет собой Н; или, когда R⁴ представляет собой СН₃, R⁵представляет собой Н или F;

и их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения формулы (I) могут существовать в стереомерных и/или таутомерных формах. Следует понимать, что все энантиомеры, диастереомеры, рацематы, таутомеры и их смеси включены в объем настоящего изобретения.

В одном воплощении R¹ представляет собой СН₃. В другом воплощении R¹ представляет собой СН₃СН₂.

В одном воплощении R² представляет собой Н, 3-CN, 2-F, 3-F или 3-SO₂CH₃. В другом воплощении R² представляет собой Н. В еще одном воплощении R² представляет собой 3-CN. В еще одном воплощении R²представляет собой 2-F. В еще одном воплощении R² представляет собой 3-SO₂CH₃.

В одном воплощении R⁴ представляет собой СН₃. В другом воплощении R⁴ представляет собой Н.

В одном воплощении R⁵ представляет собой Н.

В одном воплощении R⁴ представляет собой СН₃, а R⁵ представляет собой F.

В одном воплощении R⁴ представляет собой СН₃, а R⁵ представляет собой Н.

В одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой Н, 3-CN, 2-F или 3-SO₂CH₃; R⁴ представляет собой Н; и R⁵ представляет собой Н.

В одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой Н, 3-CN, 2-F или 3-SO₂CH₃; R⁴ представляет собой СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

В еще одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой Н; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

В еще одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой 3-CN; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

В еще одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой 2-F; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

В еще одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой Н, 2-F или 3-CN; R³ представляет собой Н; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

В одном воплощении R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой 3-SO₂CH₃; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

Конкретные соединения формулы (I) включают:

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[2-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид;

3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид;

7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино-5-[(1-фенилпропил)тиол][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил;

7-{[(1R)-3-фтор-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;

5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он;

и их фармацевтически приемлемые соли.

По сравнению с соединениями, раскрытыми в WO 01/25242, соединения по настоящему изобретению характеризуются наличием разветвленной тиобензильной группы в положении 5 тиазолопиримидиновой кольцевой системы. То есть соединения по настоящему изобретению включают группу R¹, которая не является водородом.

Согласно изобретению далее предложен способ получения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, включающий:

а) взаимодействие соединения формулы (II):

где R³, R⁴ и R⁵ являются такими, как определено в формуле (I);

с соединением формулы (III):

где R¹ и R² являются такими, как определено в формуле (I), и L¹представляет собой уходящую группу; или

б) гидролиз соединения формулы (IV)

где R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ являются такими, как определено в формуле (I);

и, когда это необходимо, превращение полученного соединения формулы (I) или его другой соли в его фармацевтически приемлемую соль; или превращение полученного соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I); и, если требуется, превращение полученного соединения формулы (I) в его оптический изомер.

В способе (а) реагенты (II) и (III) соединяют вместе в подходящем органическом растворителе, таком как диметилсульфоксид (ДМСО), ацетонитрил или 1-метил-2-пирролидинон (NMP). Реакцию возможно осуществляют в присутствии дополнительного органического или неорганического основания, такого как триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин (ДИПЭА) или гидрид натрия. Реакцию осуществляют в присутствии мягкого восстановителя, такого как боргидрид натрия. Реакцию проводят при подходящей температуре, обычно между комнатной температурой и температурой кипения растворителя. Реакцию обычно проводят в течение периода времени от примерно одного часа до одной недели или до тех пор, пока анализ не покажет, что образование целевого продукта завершено. Подходящая уходящая группа L¹ представляет собой галоген, в частности хлоро или бромо. В одном из воплощений L¹ представляет собой хлоро.

В способе (б) реагент (IV) подвергают гидролизу, катализируемому кислотой, в подходящем органическом растворителе, таком как диоксан, тетрагидрофуран (ТГФ), диметилсульфоксид или 1-метил-2-пирролидинон. Подходящие кислоты включают неорганические кислоты, такие как соляная кислота или бромистоводородная кислота, или сильные органические кислоты, такие как трифторуксусная кислота. Реакцию проводят при подходящей температуре, обычно между комнатной температурой и температурой кипения растворителя. Реакцию обычно проводят в течение периода времени от примерно одного часа до одного дня или до тех пор, пока анализ не покажет, что образование целевого продукта завершено.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что в указанных выше способах может быть желательной или необходимой защита аминной, гидроксильной или другой потенциально реакционноспособной группы. Подходящие защитные группы и подробности способов введения и удаления таких групп, в общем, хорошо известны из уровня техники. (См., например, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts).

Настоящее изобретение включает соединения формулы (I) в форме солей. Подходящие соли включают соли, образованные с органическими или неорганическими кислотами или органическими или неорганическими основаниями. Такие соли обычно будут фармацевтически приемлемыми; хотя соли фармацевтически неприемлемых кислот или оснований могут быть полезны в получении и очистке рассматриваемого соединения.

Соли соединений формулы (I) могут быть образованы путем взаимодействия свободного соединения или его соли, энантиомера или рацемата с одним или более эквивалентами подходящей кислоты или основания. Реакцию можно проводить в растворителе или среде, в котором(й) соль нерастворима, или в растворителе, в котором соль растворима, например воде, диоксане, этаноле, тетрагидрофуране или диэтиловом эфире, или в смеси растворителей, которые могу быть удалены под вакуумом или посредством сублимационной сушки. Реакция также может представлять собой обменный процесс или может быть проведена на ионообменной смоле.

В общем, соединения формулы (II) могут быть получены с использованием известных способов, которые будут очевидны специалисту в данной области техники. Один такой подходящий путь синтеза показан на следующей схеме:

Соединения формулы (III) или имеются в продаже, или известны из литературы, или могут быть получены известными способами, которые будут очевидны специалисту в данной области техники.

Соединения формулы (IV) или известны из WO 01/25242, или могут быть получены известными способами, которые будут очевидны специалисту в данной области техники. Один такой подходящий путь синтеза показан на следующей схеме:

Соединения формулы (V) или известны из WO 00/09511, или могут быть получены известными способами, которые будут очевидны специалисту в данной области техники

Например, соединения формулы (V) и, следовательно, соединения формулы (VI) могут быть получены, как показано на следующей схеме:

Подходящие конкретные способы получения соединений формул (II), (III), (IV), (V) и (VI) подробно описаны в разделе Примеры настоящей заявки, и такие способы представляют собой конкретные воплощения способов по изобретению.

Промежуточные соединения могут быть использованы как таковые или в защищенной форме. Подходящие защитные группы и подробности способов введения и удаления таких групп, в общем, хорошо известны из уровня техники. (См., например, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts).

Соединения по изобретению и промежуточные соединения (для их получения) могут быть выделены из реакционных смесей и, при необходимости, далее очищены с использованием стандартных методик.

Соединения формулы (I) могут существовать в стереоизомерных формах. Поэтому все энантиомеры, диастереомеры, рацематы и их смеси включены в объем настоящего изобретения. Различные оптические изомеры могут быть выделены путем разделения стереоизомерной смеси соединений с использованием обычных методик, например, фракционной кристаллизации или ВЭЖХ. Альтернативно, различные оптические изомеры могут быть получены непосредственно с использованием оптически активных исходных материалов.

Соединения формулы (I) содержат два стереогенных центра и таким образом могут существовать в четырех обособленных стереоизомерных формах, как показано в формулах (Ia)-(Id):

Все эти четыре стереоизомера и любые их смеси включены в объем настоящего изобретения. В одном из воплощений соединения формулы (I) имеют стереохимию согласно формуле (Ia). В другом воплощении соединения формулы (I) имеют стереохимию согласно формуле (Ib).

Промежуточные соединения также могут существовать в стереоизомерных формах и могут быть использованы в виде очищенных энантиомеров, диастереомеров, рацематов или смесей.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли являются полезными, так как они обладают фармакологической активностью в качестве антагонистов рецептора CX₃CR1. В частности, по сравнению с соединениями, конкретно проиллюстрированными примерами в WO 01/25242, соединения формулы (I) по настоящему изобретению обладают значительно улучшенной эффективностью в отношении ингибирования рецептора CX₃CR1 и/или пониженной эффективностью в отношении ингибирования рецептора CXCR2. Предпочтительные соединения по настоящему изобретению проявляют как повышенную эффективность в отношении ингибирования CX₃CR1, так и пониженную эффективность в отношении ингибирования CXCR2.

В одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики заболеваний или состояний, при которых полезен антагонизм рецептора CX₃CR1.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики нейродегенеративных расстройств, демиелинизирующего заболевания, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств, заболевания периферических артерий, ревматоидного артрита, легочных заболеваний, таких как ХОБЛ (хроническое обструктивное заболевание легких), астмы или боли.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики рассеянного склероза (PC).

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических повреждений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики атеросклероза путем изменения состава бляшек для снижения риска разрыва бляшек и возникновения атеротромботических событий.

Согласно изобретению также предложен способ лечения или снижения риска возникновения заболеваний или состояний человека, при которых полезен антагонизм рецептора CX₃CR1, включающий введение субъекту, страдающему от указанного заболевания или состояния, или с риском возникновения указанного заболевания или состояния, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения нейродегенеративных расстройств, демиелинизирующего заболевания, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств, заболевания периферических артерий, ревматоидного артрита, легочных заболеваний, таких как ХОБЛ, астмы или боли у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния, или с риском возникновения указанного заболевания или состояния, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения рассеянного склероза (PC) у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния, или с риском возникновения указанного заболевания или состояния, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических повреждений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния, или с риском возникновения указанного заболевания или состояния, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Также предложен способ лечения или снижения риска возникновения атеросклероза путем изменения состава бляшек для снижения риска разрыва бляшек и возникновения атеротромботических событий у субъекта, страдающего от указанного заболевания или состояния, или с риском возникновения указанного заболевания или состояния, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике заболеваний или состояний, при которых полезен антагонизм рецептора CX₃CR1.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике нейродегенеративных расстройств, демиелинизирующего заболевания, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств, заболевания периферических артерий, ревматоидного артрита, ХОБЛ, астмы или боли.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике рассеянного склероза.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических повреждений и/или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, для применения в лечении или профилактике атеросклероза путем изменения состава бляшек для снижения риска разрыва бляшек и возникновения атеротромботических событий.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли показаны для применения в лечении или профилактике заболеваний или состояний, при которых желательна модуляция активности рецептора CX₃CR1. В частности, соединения показаны для применения в лечении нейродегенеративных расстройств или демиелинизирующего заболевания у млекопитающих, включая человека. Более конкретно, соединения показаны для применения в лечении рассеянного склероза. Соединения также полезны в лечении боли, ревматоидного артрита, остеоартрита, кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств, заболевания периферических артерий и легочной артериальной гипертензии.

Состояниями, которые могут быть конкретно упомянуты, являются нейродегенеративные заболевания и различные виды деменций, например болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз и другие заболевания двигательных нейронов, болезнь Крейтцфельдта-Якоба и другие прионовые заболевания, ВИЧ энцефалопатия, болезнь Хантингтона, лобно-височная деменция, деменция с тельцами Леви и сосудистая деменция; полиневропатии, например синдром Гийена-Барре, хроническая воспалительная демиелинизирующая полирадикулоневропатия, многоочаговая моторная невропатия и плексопатии; ЦНС демиелинизация, например острый рассеянный/геморрагический энцефаломиелит и подострый склерозирующий лейкоэнцефалит; нейромышечные нарушения, например тяжелая миастения и синдром Ламберта-Итона; позвоночные нарушения, например тропический спастический парапарез и синдром негнущегося человека; паранеопластические синдромы, например мозжечковая дегенерация и энцефаломиелит; травматическое повреждение головного мозга; мигрень; рак; отторжение аллотрансплантата; системный склероз; вирусные инфекции; заболевания, переносимые паразитами, например малярия; заболевания периодонта; инфаркт миокарда; удар; коронарная болезнь сердца; ишемическая болезнь сердца; и рестеноз; ревматоидный артрит; легочные заболевания, такие как ХОБЛ; астма или боль.

Соединения по изобретению также предназначены для применения в лечении атеросклероза путем предупреждения и/или уменьшения образования новых атеросклеротических повреждений или бляшек и/или путем предупреждения или замедления развития существующих повреждений и бляшек.

Соединения по изобретению также показаны для применения в лечении атеросклероза путем изменения состава бляшек для снижения риска разрыва бляшек и возникновения атеротромботических событий.

Соединения по изобретению также показаны для применения в лечении воспалительного заболевания кишечника (IBD), например болезни Крона и неспецифического язвенного колита, путем индуцирования ремиссии и/или поддержания ремиссии IBD.

Полагают, что профилактика является особенно уместной для лечения субъектов, у которых уже наблюдался эпизод, или которые иначе рассматриваются как имеющие повышенный риск возникновения рассматриваемого заболевания или состояния. К субъектам с риском развития конкретного заболевания или состояния обычно относят тех, у кого в семейном анамнезе имеются случаи заболевания или состояния, или тех, кто признан особенно чувствительным к развитию заболевания или состояния после генетических тестов или скрининга.

Для упомянутых выше терапевтических показаний вводимую дозу, конечно же, будут варьировать в зависимости от используемого соединения, пути введения и желаемого лечения. Однако, в общем, удовлетворительные результаты получают, когда соединения вводят в твердой форме в дозировке от 1 мг до 2000 мг в день.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые производные можно использовать сами по себе или в форме подходящих фармацевтических композиций, в которых соединение или производное находится в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем. Введение может осуществляться энтеральным (включая пероральный, подъязычный или ректальный), интраназальным, внутривенным, местным или другими парентеральными путями, но не ограничивается ими. Обычные процедуры для выбора и приготовления подходящих фармацевтических препаратов описаны, например, в "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M.E.Aulton, Churchill Livingstone, 1988. Фармацевтическая композиция предпочтительно содержит менее чем 80% и более предпочтительно менее чем 50% соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Также предложен способ приготовления такой фармацевтической композиции, включающий смешивание ингредиентов.

Кроме того, изобретение относится к комбинированным терапиям, где соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, или фармацевтическую композицию или препарат, содержащие соединение формулы (I), вводят одновременно или последовательно с терапией и/или агентом для лечения любого из кардио- и цереброваскулярных атеросклеротических расстройств и заболевания периферических артерий.

В частности, соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в комбинации с соединениями из одной или более чем одной из следующих групп:

1) противовоспалительные агенты, например

а) НСПВП (нестероидные противовоспалительные препараты) (например, ацетилсалициловая кислота, ибупрофен, напроксен, флурбипрофен, диклофенак, индометацин),

б) ингибиторы синтеза лейкотриенов (ингибиторы 5-LO (5-липооксигеназы), например AZD4407, Зилеутон, ликофелон, CJ13610, СЛ 3454; ингибиторы FLAP (белка, активирующего 5-липооксигеназу), например BAY-Y-1015, DG-031, MK591, МК886, А81834; ингибиторы LTA4 (лейкотриен А4) гидролазы, например SC56938, SC57461A),

в) антагонисты рецепторов лейкотриенов (например, СР195543, амелубант, LY293111, акколат, МК571);

2) гипотензивные агенты, например

а) бета-блокаторы (например, метопролол, атенолол, соталол),

б) ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (например, каптоприл, рамиприл, хинаприл, эналаприл),

в) блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дилтиазем, фелодипин, амлодипин),

г) антагонисты ангиотензин II рецептора (например, ирбезартан, кандезартан, телемизартан, лозартан);

3) антикоагулянты, например

а) ингибиторы тромбина (например, ксимелагатран), гепарины, ингибиторы фактора Ха,

б) ингибиторы агрегации тромбоцитов (например, клопидогрел, тиклопидин, прасугель, AZ4160);

4) модуляторы метаболизма липидов, например

а) сенсибилизаторы инсулина, такие как агонисты рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом (PPAR) (например, пиоглитазон, розиглитазон, Галида, мураглитазаар, гефемрозил, фенофибрат),

б) ингибиторы HMG-CoA (3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим А) редуктазы, статины (например, симвастатин, правастатин, аторвастатин, розувастатин, флувастатин, питавастатин),

в) ингибиторы абсорбции холестерина (например, эзетимиб),

г) ингибиторы транспорта желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT) (например, AZD-7806),

д) агонисты LXR (например, GW-683965A, Т-0901317),

е) модуляторы рецептора FXR,

ж) ингибиторы фосфолипазы;

5) агенты против стенокардии, например нитраты и нитриты;

6) модуляторы окислительного стресса, например антиоксиданты (пробукол), ингибиторы миелопероксидазы.

Изобретение проиллюстрировано следующими примерами, но не ограничено ими.

Общие способы

Все используемые растворители были аналитической степени чистоты;

для реакций, как обычно, использовали коммерчески доступные безводные растворители. Реакции обычно проводили в инертной атмосфере азота или аргона.

¹H и ¹³С ЯМР спектры регистрировали при 400 МГц для протона и при 100 МГц для углерода-13 либо на ЯМР спектрометре Varian Unity+400, оснащенном 5 мм ВВО датчиком с Z-градиентами, либо на ЯМР спектрометре Bruker Avance 400, оснащенном 60 мкл датчиком двойного обратного потока с Z-градиентами, либо на ЯМР спектрометре Bruker DPX400, оснащенном 4-ядерным датчиком с Z-градиентами. ¹H ЯМР спектры при 600 МГц регистрировали на ЯМР спектрометре Bruker av600, оснащенном 5 мм ВВ1 измерительной головкой с Z-градиентами. ¹H ЯМР спектры при 300 МГц регистрировали на ЯМР приборе Varian Gemini 300, оснащенном 5 мм ВВ1 измерительной головкой.

Если в примерах не указано особо, спектры регистрировали при 400 МГц для протона и при 100 МГц для углерода-13. Использовали следующие базовые сигналы: осевая линия ДМСО-d₆ δ 2.50 (¹H), δ 39.51 (¹³С); осевая линия CD₃OD δ 3.31 (¹H) или δ 49.15 (¹³С); ацетон-d₆ 2.04 (¹Н), 206.5 (¹³С); и CDCl₃ δ 7.26 (¹H), осевая линия CDCl₃ δ 77.16 (¹³С) (если не указано иначе).

Энантиомерный избыток определяли ГХ (газовой хроматографией) на колонке Cyclodex В (изотермическое элюирование при 100°С).

Масс-спектры регистрировали на приборе жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХ-МС) Waters, состоящем из Alliance 2795 (ЖХ) и ZQ одноквадрупольного масс-спектрометра. Масс-спектрометр был оснащен источником ионизации электрораспылением (ИЭР), работающим в режиме положительных или отрицательных ионов. Капиллярное напряжение составляло 3 кВ; масс-спектрометр сканировал m/z 100-700 со временем считывания 0,3 или 0,8 сек. Разделения проводили либо на Waters X-Terra MS, С8-колонках, (3,5 мкм, 50 или 100 мм × 2,1 мм i.d. (внутренний диаметр)), либо на ScantecLab's АСЕ 3 AQ колонке (100 мм × 2,1 мм i.d.). Температура колонки была установлена 40°С. Применяли линейный градиент с использованием системы с нейтральной или кислотной подвижной фазой с изменением органической фазы от 0% до 100% за 4-5 минут, скорость потока 0,3 мл/мин. Система с нейтральной подвижной фазой: ацетонитрил/[10 мМ NH₄OAc (водн.)/MeCN (95:5)], или [10 мМ NH₄OAc (водн.)/MeCN (1/9)]/[10 мМ NH₄Oac (водн.)/MeCN (9/1)]. Система с кислотной подвижной фазой: [133 мМ НСООН (водн.)/MeCN (5/95)]/[8 мМ НСООН (водн.)/MeCN (98/2)].

Идентификацию соединений проводили на приборе ГХ-МС (GC 6890, 5973N MCD), поставляемом Agilent Technologies. Использовали колонку VF-5 MS, i.d. 0,25 мм × 30 м, 0,25 мкм (Varian Inc.). Применяли линейный температурный градиент, начиная с 40°С (выдержка 1 мин) и заканчивая при 300°С (выдержка 1 мин), 25°С/мин. МС прибор был оснащен источником электроионизации (ЭИ). МС сканировал m/z 50-500, скорость сканирования составляла 3,25 считываний/сек. Напряжение было установлено 70 эВ.

Анализы ВЭЖХ осуществляли на системе Agilent HP1000, состоящей из вакуумного микродегазатора G1379A, сдвоенного насоса G1312A, автосемплера для планшетов с лунками G1367A, термостатируемого блока с колонкой G1316A и детектора на диодной матрице G1315B. Колонка: Х-Тегга MS, Waters, 4,6×50 мм, 3,5 мкм. Температура колонки была установлена 40°С, скорость потока составляла 1,5 мл/мин. Детектор на диодной матрице производил считывания при 210-300 нм, шаг и ширина пика были установлены 2 нм и 0,05 мин соответственно. Использовали линейный градиент, поток от 0% до 100% ацетонитрила, за 4 мин. Подвижная фаза: ацетонитрил/10 мМ ацетат аммония в 5% ацетонитриле в MilliQ воде.

Обычная методика обработки после реакции состояла в экстракции продукта растворителем, таким как этилацетат, промывки водой с последующей сушкой органической фазы над MgSO₄ или Na₂SO₄ и концентрированием раствора в вакууме.

Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на ТСХ-пластинах Merck (силикагель 60 F₂₅₄); для визуализации пятен использовали УФ. Флэш-хроматографию проводили на Combi Flash® Companion™ с использованием RediSep™ флэш-колонок с нормальной фазой или на силикагеле 60 Merck (0,040-0,063 мм). Обычные растворители, использованные для флэш-хроматографии, представляли собой смеси хлороформ/метанол, толуол/этилацетат и этилацетат/гексаны.

Препаративную хроматографию осуществляли на автопрепаративном приборе ВЭЖХ Gilson с детектором на диодной матрице. Колонка: XTerra MS С8, 19×300 мм, 7 мкм. Градиент: ацетонитрил/0,1 М ацетат аммония в 5% ацетонитриле в MilliQ воде, поток от 20% до 60% ацетонитрила за 13 мин. Скорость потока: 20 мл/мин. Альтернативно, очистку проводили на полупрепаративной Shimadzu LC-8A ВЭЖХ с УФ-виз.-детектором Shimadzu SPD-10А, оснащенным колонкой Waters Symmetry® (C18, 5 мкм, 100 мм × 19 мм). Градиент: ацетонитрил/0,1% трифторуксусная кислота в MilliQ воде, поток от 35% до 60% ацетонитрила за 20 мин. Скорость потока: 10 мл/мин.

Перекристаллизацию обычно проводили в растворителях или смесях растворителей, таких как эфир, этилацетат/гептаны и метанол/вода.

Использовали следующие сокращения: ДХМ - дихлорметан; DIPCI - β-хлордиизопинокамфенилборан (DIP-Хлорид™); ДИПЭА - N,N-диизопропилэтил-амин; ДМФ - N,N-диметилформамид; ДМСО - диметилсульфоксид; NCS - N-хлорсукцинимид; NMP - 1-метил-2-пирролидинон; ТГФ - тетрагидрофуран; водн. - водный; конц. - концентрированный.

Используемые исходные материалы были или имеющимися в продаже, или были получены согласно методикам, приведенным в литературных источниках, и имели экспериментальные данные, аналогичные описанным. Ниже представлены примеры исходных веществ, которые были получены:

(2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол: WO 02/076990;

5-(бензилтио)-7-хлор[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2-амин: WO 00/09511;

1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанон: Т.Fujita, J.Iwasa and С.Hansch, Journal of the American Chemical Society, 1964, 86, 5175-5180;

3-[(1S)-1-гидроксиэтил]бензонитрил: Belley, M.Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 2697-2704;

3-(метилсульфонил)бензальдегид: P.L Ornstein et al., J.Med. Chem., 1998, Vol.41, No. 3, 358-378;

3-(1-гидроксиэтил)бензамид: Watson, C.Y; Whish, W.J.D; Threadgill, M.D.Bioorg. Med. Chem. 1998 6(6) 721-34;

(1-хлорпропил)бензол: Desai, V.R.; Nechvatal, A.; Tedder, J.M. J. Chem. Soc. (B) 1969, 30-32;

(1S)-1-(2-фторфенил)этанол: Garrett, С.Е. Tetrahedron: Asymmetry 2002, 13, 1347-1349; Doucet, H. Chem. Eur. J. 1999, 5, 1320-1330;

(2R)-2-амино-4-фтор-4-метилпентан-1-ол: Truong, V.L; Gauthier, J.Y; Boyd, M; Roy, B; Scheigetz, J. Synlett 2005, 8, 1279-1280; ниже следует путь для S энантиомера:

(1S)-1-(3-фторфенил)этанол: Pastor, I.M. Chem. Eur. J. 2003, 9, 4031-4045.

В общих способах, следующих далее, R представляет собой Н или СН₃, R' представляет собой Н или F; и Ar представляет собой фенил, замещенный R², где R² является таким, как определено в формуле (I).

Общий способ А

К боргидриду натрия (0,1 эквив.), ДИПЭА (1,5 эквив.) и А2 (1,2 эквив.) добавляли А1 (1,0 эквив.) в ДМСО в атмосфере азота. Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 40°С до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). Смесь выливали в ледяную воду и продукт экстрагировали ДХМ или EtOAc. Объединенные органические фазы сушили и концентрировали в вакууме. Сырой продукт при необходимости очищали с использованием препаративной ВЭЖХ или колоночной флэш-хроматографией.

Общий способ Б

Конц. HCl (2,5 мл/ммоль В1) добавляли к В1 (1,0 эквив.) в CH₃CN. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане и по каплям добавляли нитрит натрия (2,0 эквив.), растворенный в минимальном количестве воды. Реакционную смесь перемешивали при 0°С до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ), а затем выливали в ледяную воду, нейтрализовывали бикарбонатом натрия и экстрагировали ДХМ или EtOAc. Объединенные органические фазы сушили и концентрировали в вакууме с получением продукта.

Общий способ В

Гидроксид калия (2.0 эквив.), растворенный в метаноле, добавляли по каплям к охлажденному (0°С) раствору С1 (1,0 эквив.) в метаноле. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). Растворитель выпаривали и продукт использовали на следующей реакционной стадии без дополнительной очистки.

Общий способ Г

Раствор концентрированной HCl (1,0 эквив.) добавляли к охлажденному (0°С) раствору D1 (1,0 эквив.) в 1,4-диоксане. Полученную в результате смесь перемешивали при 40°С до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). Реакционную смесь нейтрализовывали насыщенным NaHCO₃ (водн.) и выпаривали диоксан. Остаток растворяли в ДХМ или EtOAc, промывали рассолом, сушили и концентрировали в вакууме. Сырой продукт при необходимости очищали с использованием препаративной ВЭЖХ или колоночной флэш-хроматографией.

Общий способ Д

Е1 (1,0 эквив.) в ТГФ добавляли при 0°С к (+)-DIPCI (с получением Е2) или к (-)-DIPCI (с получением Е3) (1,5 эквив.) в ТГФ в атмосфере аргона. Реакционную смесь оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Растворитель выпаривали, а затем добавляли Et₂O и диэтаноламин (2,2 эквив.). Смесь перемешивали до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). Образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали Et₂O, и в вакууме концентрировали фильтрат. Сырой продукт при необходимости очищали с использованием препаративной ВЭЖХ или колоночной флэш-хроматографией.

Общий способ Е

Трифенилфосфин (1,3 эквив.) в ТГФ добавляли при 0°С к NCS (1,3 эквив.) в ТГФ в атмосфере аргона. Полученную в результате смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. F1 или F2 (1 эквив.) добавляли при 0°С и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). Растворитель выпаривали, а затем добавляли гексан и фильтрованием удаляли осадок. Фильтрат концентрировали в вакууме и сырой продукт при необходимости очищали с использованием препаративной ВЭЖХ или колоночной флэш-хроматографией.

Общий способ Ж

Боргидрид натрия (от 1 до 2 эквив.) добавляли к G1 (1,0 эквив.) в ДМСО. После прекращения выделения пузырьков добавляли G2 (1,2 эквив.). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 40°С до тех пор, пока реакция не завершилась (наблюдали с помощью ЖХ-МС, ВЭЖХ или ТСХ). При необходимости проводили очистку с использованием препаративной ВЭЖХ или колоночной флэш-хроматографии.

Пример 1

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1R)-1-[3-(метил-сульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (1R)-1-[3-(Метилсульфонил)фенил]этанол

К (R)-(+)-α,α-дифенил-2-пирролидинметанолу в ТГФ (5 мл) добавляли В(ОМе)₃ (62 мкл, 0,55 ммоль), а затем ВН₃.Me₃S (2М в ТГФ, 1,23 мл, 2,54 ммоль). Смесь перемешивали в течение 1 ч, затем за 1,5 ч добавляли 1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанон (458 мг, 2,31 ммоль) в ТГФ (5 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение ночи и затем гасили 1М HCl (2 мл). Смесь концентрировали и сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (CH₂Cl₂/MeOH, 50:1) с получением указанного в заголовке соединения (378 мг, выход 18%).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.89 (d, 1H), 7.75 (m, 1H), 7.59 (t, 1H), 7.48 (t, 1H), 4.92 (q, 1H), 3.00 (s, 3H), 1.45 (d, 3H).

б) 3-[(1S)-1-Хлорэтил]фенил-метилсульфон

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 86%, используя общий способ Е и начиная с (1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанола (370 мг, 1,85 ммоль).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.95 (m, 1H), 7.87 (t, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.55 (t, 1H), 5.10 (q, 1H), 3.04 (s, 3H), 1.83 (d, 3H).

в) (2R)-2-{[2-Амино-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 34%, используя общий способ А и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (431 мг, 1,44 ммоль) и 3-[(1S)-1-хлорэтил]фенил-метилсульфона (350 мг, 1,44 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 482 [M+H]⁺.

г) 2R)-2-{[2-Хлор-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 92%, используя общий способ Б и начиная с (2R)-2-{[2-амино-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола (136 мг, 0,28 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 500 [М+Н]⁺.

д) (2R)-2-{[2-Метокси-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)-[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 91%, используя общий способ В и начиная с (2R)-2-{[2-хлор-5-({(1R)-1-[3-(метилсульфонил)-фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло-[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола (130 мг, 0,26 ммоль).

MC(ИЭР⁺)m/z497[M+H]⁺.

е) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил}-3-метилбутил]амино}-5-({(1R}-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 19%, используя общий способ Г и начиная с (2R)-2-{[2-метокси-5-{(1R)-1-[3-(метилсульфонил)-фенил]этил}тио)[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола (118 мг, 0,24 ммоль).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8.18 (t, 1H), 7.77 (m, 2H), 7.51 (t, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.91 (q, 1H), 4.19 (m, 1H), 3.80 (dd, 1H), 3.63 (dd, 1H), 3.08 (s, 3H), 1.71 (d, 3H), 1.63 (m, 1H), 1.46 (m, 2H), 0.94 (d, 3H), 0.87 (d, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 483 [М+Н]⁺.

Пример 2

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

а) (2R)-2-{2-Хлор-5-[2-хлор-7-((1R)-1-гидроксиметил-3-метил-бутил-амино)-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-4-метил-пентан-1-ол

Нитрит натрия (5,19 г, 75 ммоль) в воде (25 мл) добавляли по каплям при 0°С к (2R)-2-[[2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино]-4-метилпентан-1-олу (7,50 г, 25 ммоль) в конц. HCl (150 мл) и CH₃CN (150 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при 0-5°С, а затем выливали на лед (500 мл) и экстрагировали EtOAc. Все оставшееся твердое вещество отфильтровывали. Объединенные органические фазы последовательно промывали насыщенным раствором NaCl и насыщенным водным раствором NaHCO₃. Органическую фазу сушили и упаривали; к остатку добавляли ранее отфильтрованное твердое вещество. Суммарное твердое вещество суспендировали в EtOAc и после фильтрования получали указанное в заголовке соединение (6,3 г, выход 80%) в виде твердого вещества.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆; интегралы для мономерной единицы) δ 7.98 (d, 1H), 4.47 (t, 1H), 3.99 (br s, 1H), 3.17 (m, 2H), 1,31-1.15 (m, 2H), 0.98 (m, 1H), 0.48 (d, 3H), 0.30 (d, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 635 [M+H]⁺.

б) (2R)-2-{5-[7-((1R]-1-Гидроксиметил-3-метил-бутиламино}-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-2-метокси-тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-иламино}-4-метил-пентан-1-ол

KОН (0,53 г, 9,4 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли при 0°С к раствору (2R)-2-{2-хлор-5-[2-хлор-7-((1R)-1-гидроксиметил-3-метил-бутиламино)-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-4-метил-пентан-1-ола (3,0 г, 4,7 ммоль) в МеОН (200 мл). Реакционную смесь выдерживали при 0-5°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривали, и остаток переносили в МеОН/EtOAc (1:1). Этот раствор быстро подвергали хроматографии (EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, выход 68%).

МС (ИЭР⁺) m/z 627 [M+H]⁺.

в) 5-[7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Смесь конц. HCl (20 мл) и воды (20 мл) добавляли к раствору (2R)-2-{5-[7-((1R)-1-гидроксиметил-3-метил-бутиламино)-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-4-метил-пентан-1-ола (1,5 г, 2,4 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл). Затем раствор перемешивали при 45°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривали и остаток переносили в EtOAc (нерастворившийся осадок отфильтровывали и с помощью ЖХМС установили, что он является чистым). Раствор подвергали флэш-хроматографии (МеОН:EtOAc, 5:95). Два образца объединяли вместе с получением указанного в заголовке соединения (600 мг, выход 42%).

¹Н ЯМР (ДМСО-d₆; интегралы для мономерной единицы) δ 12.45 (s, 2H), 7.33 (d, 2H), 4.62 (t, 2H), 4.17 (br s, 2H), 1.48-1.31 (m, 4H), 1.25-1.14 (m, 2H), 0.72 (d, 6H), 0.56 (d, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 599 [М+Н]⁺.

г) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифтор-метил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение синтезировали в виде смеси двух диастереомеров общим способом Ж, начиная с реакции 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло-[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она (20 мг, 0,033 ммоль) и 3-(1-бромэтил)трифторметилбензола (11 мкл, 0,066 ммоль), с получением 10 мг (выход 31%).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.68 (m, 2H), 7.51 (m, 1H), 7.42 (m, 1H), 4.97 (q, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.38-4.27 (m, 0.5H), 4.26-4.16 (m, 0.5H), 3.85 (dd, 0.5H), 3.64 (m, 1H), 3.53 (dd, 0.5H), 1.71 (dd, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.57-1.46 (m, 1H), 1.45-1.34 (m, 1H), 0.96 (dd, 3H), 0.88 (dd, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 473 [M+H]⁺.

Пример 3

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)бутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (2R)-2-{[2-Амино-5-(бензилтио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]-амино}пентан-1-ол

5-(Бензилтио)-7-хлор[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2-амин (6,0 г, 19,4 ммоль) растворяли в NMP (30 мл). Добавляли ДИПЭА (8,4 мл, 48,5 ммоль) и 2-амино-(2R)-1-пентанол (3,5 г, 33,9 ммоль), и смесь нагревали до 110°С в течение 4 дней. После охлаждения до комнатной температуры смесь выливали в воду (200 мл). Выпавший в осадок продукт собирали фильтрованием, промывали водой и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (7,0 г, выход 97%).

МС (ИЭР⁺) m/z 376 [M+H]⁺.

б) (2R)-2-[(2-Амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)-амино]пентан-1-ол

Круглодонную колбу снабжали конденсатором для смеси сухой лед-этанол и опускали в охлаждающую баню с использованием смеси сухой лед-этанол. В колбе конденсировали аммиак (250 мл), а затем добавляли (2R)-2-{[2-амино-5-(бензилтио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}пентан-1-ол (6,8 г, 18,1 ммоль). Полученную в результате смесь оставляли нагреваться до -33°С, и маленькими кусочками добавляли металлический натрий до тех пор, пока не появлялось голубое окрашивание, которое сохранялось в течение 30 секунд. Затем реакцию гасили добавлением столовой ложки твердого хлорида аммония. Аммиак выпаривали и к остатку добавляли воду (250 мл). Полученную в результате смесь нейтрализовывали 1М HCl (водн.). Выпавший в осадок продукт собирали фильтрованием, промывали водой и сушили в вакууме с получением 4,15 г (выход 80%) указанного в заголовке соединения.

МС (ИЭР⁺) m/z 286 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-{2-Хлор-5-[2-хлор-7-((1R)-1-гидроксиметилбутиламино)-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-пентан-1-ол

Следуя методике Примера 2(а), получали указанное в заголовке соединение с выходом 78%, начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ола (4,0 г, 14 ммоль), нитрита натрия (1,93 г, 28 ммоль), HC1 (100 мл), CH₃CN (100 мл) и H₂O (10 мл).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 8.27 (d, 1Н), 4.32-3.81 (m, 2H), 3.50-3.23 (m, 2H), 1.37-1.19 (m, 2H), 1.10-0.93 (m, 1Н), 0.94-0.78 (m, 1Н), 0.49 (t, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 607 [М+Н]⁺.

г) (2R)-2-{5-[7-((1R)-1-Гидроксиметилбутиламино)-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-пентан-1-ол

KОН (495 мг, 8,8 ммоль) добавляли к (2R)-2-{2-хлор-5-[2-хлор-7-((1R)-1-гидроксиметилбутиламино)-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-пентан-1-олу (2,68 г, 4,41 ммоль) в МеОН (200 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение ночи, а затем выпаривали метанол. Остаток выливали в воду, и полученный осадок собирали фильтрованием. Сырой влажный продукт использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

МС (ИЭР⁺) m/z 599 [М+Н]⁺.

д) 5-[7-{{(1R)-1-(Гидроксиметил)]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметилбутил]амино}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Следуя методике Примера 2(в), получали указанное в заголовке соединение с выходом 59% (за две стадии), начиная с сырого (2R)-2-{5-[7-((1R)-1-гидроксиметилбутиламино)-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-илдисульфанил]-2-метокси-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино}-пентан-1-ола (4,41 ммоль) (Пример 3(г)), конц. HCl (2 мл), воды (2 мл) и 1,4-диоксана (100 мл),

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 12.46 (s, 1Н), 7.33 (d, 1Н), 4.61 (t, 1Н), 4.10 (br s, 1Н), 3.35 (t, 2H), 1.37-1.20 (m, 2H), 1.13-1.10 (m, 1Н), 0.96-0.82 (m, 1Н), 0.59 (t, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 571 [М+H]⁺.

е) [(1R)-1-Хлорэтил]бензол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 67%, используя общий способ Е и начиная с (1S)-1-фенилэтанола (25 г, 0,20 мол.).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.42 (m, 2H), 7.36 (m, 2H), 7.30 (m, 1Н), 5.09 (q, 1Н), 1.85 (d, 3H);

MC (ХИ (химическая ионизация)) m/z 141 [М+1].

ж) 7-{[(1R)-1-(гидроксиметил}бутил]амино}-5-{[(1S]-1-фенилэтил]тио}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)бутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он получали с выходом 22% из 5,5'-дитиобис[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она] (40 мг, 0,07 ммоль) и [(1R)-1-хлорэтил]бензола (29 мг, 0,21 ммоль), используя общий способ Ж.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 12.34 (br s, 1Н), 7.44 (d, 2H), 7.33 (m, 2H), 7.23 (m, 2H), 4.93 (q, 1Н), 4.68 (t, 1Н), 4.21 (br s, 1Н), 3.49-3.33 (m, 2H), 1.68 (d, 3H), 1.64-1.51 (m, 1Н), 1.50-1.39 (m, 1Н), 1.34 (m, 2H), 0.87 (t, 3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 391 [M+H]⁺.

Пример 4

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (1S)-1-[3-(Метилсульфонил)фенил]этанол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 58% из 1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанона (2,00 г, 10,1 ммоль), используя общий способ Д.

MC (ИЭР⁺) m/я 201 [М+Н]⁺.

б) 1-[(1R)-1-Хлорэтил]-3-(метилсульфонил)бензол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 21% из (1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанола (100 мг, 0,50 ммоль), используя общий способ Е.

MC (ИЭР⁺) m/z 219 [M+H]⁺.

в) (2R)-2-{[2-Амино-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали из (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (16,5 г, 55,3 ммоль) и 1-[(1R)-1-хлорэтил]-3-(метилсульфонил)бензола (12,1 г, 55,3 ммоль), используя общий способ А.

¹H ЯМР (600 МГц, ДМСО-d₆) 8.00 (m, 3H), 7.81 (m, 2H), 7.60 (t, 1Н), 6.91 (d, 1Н), 5.06 (q, 1H), 4.66 (t, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.38 (m, 1H), 3.28 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 1.69 (d, 3H), 1.59 (m, 1H), 1.46-1.34 (m, 2H), 0.86 (m, 6H);

MC (ИЭР⁺) m/z 482 [M+H]⁺.

г) (2R)-2-{[2-Хлор-5-({(1S)-1-{3-(метилсульфонил}фенил]этил}тио)[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1 ол

Указанное в заголовке соединение получали из (2R)-2-{[2-амино-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола, используя общий способ Б.

МС (ИЭР⁺) m/z 501 [М+Н]⁺.

д) (2R)-2-{[2-Метокси-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали из (2R)-2-{[2-хлор-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола, используя общий способ В.

MC(ИЭР⁺) m/z 497 [M+H]⁺.

е) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н]-он

Указанное в заголовке соединение получали из (2R)-2-{[2-метокси-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино}-4-метилпентан-1-ола, используя общий способ Г. Суммарный выход 490 мг; 38% за три стадии.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 8.07 (m, 1H), 7.78 (m, 2H), 7.52 (m, 1H), 4.95 (q, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.34 (br s, 1H), 3.73 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.07 (s, 3H), 1.70 (d, 3H), 1.64 (m, 1H), 1.48-1.38 (m, 2H), 0.93 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 483 [M+H]+.

Пример 5

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

Индивидуальный диастереомер (5 мг, выход 15%) получали выделением из смеси диастереомеров, полученной в Примере 2, с помощью препаративной ВЭЖХ.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.69 (s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.42 (t, 1H), 4.97 (q, 1H), 4.77 (d, 1H), 4.25-4.15 (m, 1H), 3.84 (dd, 1H), 3.64 (dd, 1H), 1.72 (d, 3H), 1.67-1.57 (m, 1H), 1.57-1.47 (m, 1H), 1.44-1.34 (m, 1H), 0.87 (dd, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 473 [M+H]⁺.

Пример 6

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[2-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он)

Указанное в заголовке соединение синтезировали в виде смеси двух диастереомеров общим способом Ж, начиная с реакции 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло-[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она (20 мг, 0,033 ммоль) и 2-(1-бромэтил)трифторметилбензола (11 мкл, 0,066 ммоль), с получением 13 мг (выход 43%).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.69 (d, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.53 (q, 1H), 7.34 (m, 1H), 5.45 (q, 0.5H), 5.39 (q, 0.5H), 5.21 (t, 1H), 4.46 (d, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 1.73 (d, 3Н), 1.69 (m, 1H), 1.65-1.55 (m, 1H), 1.47 (m, 1H), 0.98-0.88 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 473 [М+Н]⁺.

Пример 7

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[2-(трифторметил)-фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

Индивидуальный диастереомер (4 мг, выход 13%) получали выделением из смеси диастереомеров, полученной в Примере 6, с помощью препаративной ВЭЖХ.

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.71 (d, 3Н), 7.65 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.36 (t, 1H), 5.40 (q, 1H), 4.71 (d, 1H), 4.42 (m, 1H), 3.83 (dd, 1H), 3.68 (dd, 1H), 1.76 (d, 3Н), 1.74-1.64 (m, 1H), 1.64-1.53 (m, 1H), 1.54-1.43 (m, 1H), 0.96 (dd, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 473 [M+H]⁺.

Пример 8

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)бутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)-фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 55%, используя общий способ Ж и начиная с 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она (55 мг, 0,087 ммоль) и 1-[(1R)-1-хлорэтил]-3-(метилсульфонил)бензола (38 мг, 0,17 ммоль).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 10.64 (br s, 13H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (m, 2H), 7.50 (t, 1H), 5.52 (d, 1H), 4.96 (q, 1H), 4.23 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.64 (m, 1H), 3.08 (s, 3H), 1.67 (d, 3H), 1.55 (m, 1H), 1.38 (m, 1H), 0.89 (m, 5H);

MC(ИЭР⁺) m/z 469 [M+H]⁺.

Пример 9

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-[(1-фенилэтил)тио]-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (2R)-2-({2-Амино-5-{(1-фенилэтил}тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 67% согласно общему способу А, начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (320 мг, 1,01 ммоль) и (1-бромэтил)-бензола (245 мг, 1,21 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 7.94 (s, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.97 (m, 1H), 6.77 (d, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.87 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 1.72 (dd, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.42 (m, 2H), 0.87 (d, 3H), 0.85 (dd, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 405 [M+H]⁺.

б) (2R)-2-({2-Хлор-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 71% согласно общему способу Б, начиная с (2R)-2-({2-амино-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]-тиазоло[4,5-d)пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ола (335 мг, 0,83 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 423/425 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-({2-Метокси-5-[(1-фенилэтил]тио][1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 70% согласно общему способу В, начиная с (2R)-2-({2-хлор-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ола (500 мг, 1,2 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 419 [М+Н]⁺.

г) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-[(1-фенилэтил)-тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н]-он

Указанное в заголовке соединение получали в виде смеси двух диастереомеров с выходом 68% согласно способу Г, начиная с (2R)-2-({2-метокси-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ола (320 мг, 0,76 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) 7.43 (m, 2Н), 7.41 (m, 2Н), 7.31 (m, 1H), 6.37 (br s, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.25 (m, 1H), 3.45-3.39 (m, 2Н), 3.38-3.27 (m, 2Н), 1.66 (d, 3Н), 1.60 (m, 1H), 1.42 (m, 1H), 0.89 (d, 3H), 0.85 (d, 3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 405 [M+H]⁺.

Пример 10

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (2R)-2-[(2-Амино-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение (150 мг) получали в виде индивидуального диастереомера ВЭЖХ очисткой (2R)-2-({2-амино-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил}амино)-4-метилпентан-1-ола (Пример 9(а), 500 мг).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) 7.98 (s, 2Н), 7.45 (m, 2Н), 7.32 (m, 2Н), 7.24 (m, 1H), 6.87 (d, 1H), 4.95 (q, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 1.68 (d, 3H), 1.62 (m, 1H), 1.42 (m, 2Н), 0.88 (d, 3H), 0.82 (d, 3H).

б) (2R)-2-[(2-Хлор-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 51%, используя способ Б и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (150 мг, 0,37 ммоль).

MC (ИЭР⁺) m/z 423/425 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-[(2-Метокси-5-{[1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 91%, используя способ В и начиная с (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (70 мг, 0,17 ммоль).

MC (ИЭР⁺) m/z 419 [M+H]⁺.

г) 7-{[(1R}-1-(Гидроксиметил]-3-метилбутил]амино}-5-{[(1R]-1-фенил-этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 67% согласно способу Г, начиная с (2R)-2-[(2-метокси-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (65 мг, 0,15 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) 12.36 (s, 1Н), 7.42 (m, 2Н), 7.33 (m, 2Н), 4.91 (q, 1H), 4.72 (m, 1H), 4.25 (br s, 1H), 3.44 (m, 1H), 3.37 (m, 1H), 1.69 (d, 3H), 1.58 (d, 1H), 1.38 (m, 2Н), 0.88 (d, 3H), 0.84 (d, 3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 405 [M+H]⁺.

Пример 11

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (2R)-2-[(2-Амино-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 42%, используя общий способ А и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (27 г, 90 ммоль) и [(1R)-1-хлорэтил]бензола (19 г, 135 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 7.95 (br s, 2Н), 7.43 (m, 2Н), 7.31 (m, 2Н), 7.22 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 4,96 (q, 1H), 4.64 (t, 1H), 4.27 (br s, 1H), 3.44-3.30 (m, 2Н), 1.66 (d, 3H), 1.59 (m, 1H), 1.41 (m, 2Н), 0.87 (d, 3H), 0.84 (d, 3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 404 [М+H]⁺.

б) (2R)-2-[(2-Хлор-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиоимидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 85% согласно общему способу Б, начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (70 мг, 0,17 ммоль).

MC (ИЭР⁺) m/z 423/425 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-[(2-Метокси-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 51% согласно общему способу В, начиная с (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (77 мг, 0,18 ммоль).

MC (ИЭР⁺) m/z 419 [M+H]⁺.

г) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенил-этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 37% согласно общему способу Г, начиная с (2R)-2-[(2-метокси-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (50 мг, 0,12 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 7.36 (m, 2Н), 7.25 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 7.05 (br s, 1H), 4.87 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.35 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 1.62 (d, 3H), 1.55 (d, 1H), 1.35 (m, 1H), 0.84 (d, 3H), 0.78 (d, 3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 405 [M+H]⁺.

Пример 12

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)бутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

а) 3-[(1R)-1-Хлорэтил]бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 79% согласно общему способу Е, начиная с 3-[(1S)-1-гидроксиэтил]бензонитрила (3,35 г, 22,8 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7.97 (s, 1H), 7.82 (m, 2H), 7.60 (t, 1H), 5.40 (q, 1H), 1.80(d,3H);

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆): δ 144.1, 131.2, 131.6, 130.3, 129.9, 118.4, 111.6, 57.41, 25.5;

MC (ИЭР⁺) m/z 166 [M+H]⁺.

б) 3-{(1S)-1-[(2-Амино-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил}бутил]амино}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 75% согласно общему способу А, начиная с 2-амино-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5(6Н)-тиона (2,87 г, 10,0 ммоль) и 3-[(1R)-1-хлорэтил]бензонитрила (2,31 г, 13,9 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 8.00 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.52 (t,1H), 6.90 (d, 1H), 5.00 (q, 1H), 4.63 (t, 1H), 4.13 (br s, 1H), 3.41 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 1.66 (d, 3H), 1.57 (m, 1H), 1.43 (m, 1H), 1.29 (m, 2H), 0.86 (t, 3H);

¹³С ЯМР (ДМСО-d₆): δ 170.8, 168.7, 165.1, 155.7, 145.9, 132.3, 130.8, 130.6, 129.5, 118.7, 111.2, 63.3, 59.7, 51.8, 42.3, 33.0, 21.8, 18.8, 14.0;

МС (ИЭР⁺) m/z 415 [M+H]⁺.

в) 3-{(1S)-1-[(2-Хлор-7-{[(1R]-1-(гидроксиметил)бутил]амино}[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 84% согласно общему способу Б, начиная с 3-{(1S)-1-[(2-амино-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-бутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила (3,09 г, 7,46 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 8.19 (d, 1Н), 7.95 (br s, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.54 (t, 1H), 5.05 (q, 1H), 4.21 (m, 1H), 3.45-3.34 (m, 2H), 1.69 (d, 3H), 1.60 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.37-1.22 (m, 2H), 0.86 (t, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 434 [M+H]⁺.

г) 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)бутил]амино}-2-метокси[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали согласно общему способу В, начиная с 3-{(1S)-1-[(2-хлор-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила (2,43 г, 5,61 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7.94 (br s, 1H), 7.83 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.54 (m, 2H), 5.04(q, 1H), 4.68(m, 1H), 4.18 (br s, 1H), 4.16(s, 3H), 3.44-3.30 (m, 2H), 1.69 (d, 3H), 1.63-1.54 (m, 1H), 1.45 (m, 1H), 1.35-1.23 (m, 2H), 0.86 (t, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 430 [М+Н]⁺.

д) 3-{(1S]-1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил}бутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 19% согласно общему способу Г, начиная с 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила.

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 12.39 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.53 (t, 1H), 7.24 (d, 1H), 4.95 (q, 1H), 4.66 (m, 1H), 4.15 (br s, 1H), 3.42-3.27 (m, 2H), 1.67 (d, 3H), 1.57 (m, 1H), 1.43 (m, 1H), 1.35-1.22 (m, 2H), 0.86 (t, 3H);

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆): δ 171.9, 169.2, 165.8, 154.9, 145.4, 132.3, 130.8, 130.8, 129.6, 118.7, 111.4, 91.0, 63.1, 59.7, 42.6, 32.8, 21.0, 18.8, 13.8;

МС (ИЭР⁺) m/z 416 [М+Н]⁺.

Пример 13

7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) 1-[3-(Метилсульфонил)фенил]этанол

Метилмагниййодид (3М в ТГФ, 13,2 мл, 4,4 ммоль) по каплям, через шприц, при 0°С добавляли к 3-(метилсульфонил)бензальдегиду (0,74 г, 4,0 ммоль) в ТГФ (15 мл). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 0°С до прекращения образования продукта (наблюдали с помощью ГХ-МС). Реакцию гасили насыщенным хлоридом аммония, водную фазу экстрагировали EtOAc и органическую фазу промывали насыщенным бикарбонатом натрия, рассолом, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (EtOAc:гексан, 1: 4) с получением указанного в заголовке соединения (260 мг), которое использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки (приблизительная чистота 50%).

ГХ-МС (ЭИ) (HP5MS, 0,25 мм × 30 м, 0,25 мкм) m/z 200 M⁺.

б) 1-(1-Хлорэтил)-3-(метилсульфонил)бензол

Тионилхлорид (0,11 г, 0,91 ммоль) добавляли к раствору N,N-диэтиланилина (0,19 г, 1,3 ммоль) и 1-[3-(метилсульфонил)фенил]этанола (0,26 г, 1,3 ммоль) в толуоле (4 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 минут с последующим добавлением EtOAc. Органическую фазу последовательно промывали 2М HCl (водн.), водой, насыщенным бикарбонатом натрия и рассолом, затем сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Сырой продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на диоксиде кремния (этилацетат:гексан, градиент элюирования от 20:80 до 25:75) с получением указанного в заголовке соединения (60 мг), которое использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки (приблизительная чистота 75%).

ГХ-МС (ЭИ) (HP5MS, 0,25 мм × 30 м, 0,25 мкм) m/z 218 M⁺.

в) 7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение получали в виде смеси двух диастереомеров с выходом 42%, начиная с 1-(1-хлорэтил)-3-(метилсульфонил)бензола (27 мг, 0,12 ммоль) и 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-она (30 мг, 0,05 ммоль), с использованием общего способа Ж, но со следующими модификациями: добавляли боргидрид натрия (3 эквив.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре.

¹H ЯМР (MeOH-d₄) δ 8.06 (m, 1H), 7.84 (m, 2H), 7.58 (m, 1H), 5.12 (m, 1H), 4.41 (m, 0.5H от одного диастереомера), 4.36-4.25 (m, 0.5H от одного диастереомера), 3.57-3.42 (m, 2H), 3.12 (s, 1.51-1 от одного диастереомера), 3.11 (s, 1.5H от одного диастереомера), 1.74 (d, 1.51-1 от одного диастереомера), 1.72 (d, 1.5H от одного диастереомера), 1.70-1.56 (m, 1H), 1.56-1.36 (m, 2H), 0.93 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 483 [М+Н]⁺.

Пример 14

3-{1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид:

3-{(1S)-1-[(7-{[(1 R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид: и

3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид

а) 3-(1-Хлорэтил)бензамид

Диэтиланилин (390 мкл, 2,45 ммоль) добавляли к 3-(1-гидроксиэтил)бензамиду (400 мг, 2,45 ммоль), суспендированному в ДХМ (20 мл), и реакционную смесь охлаждали на ледяной бане. Добавляли по каплям тионилхлорид (255 мкл, 2,47 ммоль) и реакционную смесь помещали в холодильник на ночь. Добавляли воду, реакционную смесь экстрагировали дважды ДХМ, промывали 10%-ным раствором HCl, нейтрализовывали насыщенным раствором бикарбоната, обрабатывали рассолом, сушили (MgSO₄), фильтровали и упаривали до сухого состояния. Сырой продукт перекристаллизовывали из смеси диэтиловый эфир/гексан с получением 335 мг (75%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества.

¹H ЯМР (хлороформ-d) δ 7.90 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 5.14 (q, 1H), 1.88 (d, 3H), 1.60 (s, 2H);

МС (ИЭР⁺) m/z 183, 185 [М+Н]⁺.

б) 3-{1-[(7-{[(1R)-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид

Указанное в заголовке соединение получали в виде смеси двух диастереомеров с выходом 36%, используя общий способ Ж и начиная с 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она (30 мг, 0,050 ммоль) и 3-(1-хлор-этил)-бензамида (18 мг, 0,10 ммоль).

Диастереомеры указанного в заголовке соединения (58,6 мг, 0,131 ммоль) очищали ВЭЖХ с обращенной фазой [Kromacil-C18 колонка, 250×20 мм, размер частиц: 10 мкм, поток: 15 мл/мин, подвижная фаза: вода/MeCN/триэтиламин (80/20/0,1; об./об./об.)]. После лиофилизации получали 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]ам и но}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид (23 мг, выход 39%, 99,9% de (диастереомерный избыток)).

¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7.98 (s, 1H), 7.73 (d, 1H, J=7.7 Гц), 7.68 (d, 1H, J=7.7 Гц), 7.42 (t, 1H, J=7.6 Гц), 5.08 (q, 1H, J=7.3 Гц), 4.49-4.40 (m, 1H), 3.52 (dd, 1H, J=11.0, 5.4 Гц), 3.53 (dd, 1H, J=11.0, 5.4 Гц), 1.94 (s, 2H), 1.73 (d, 2H, J=7.2 Гц), 1.71-1.63 (m, 1H), 1.56-1.41 (m, 2H), 0.96 (d, 3H, J=7.1 Гц), 0.94 (d, 3H, J=7.1 Гц);

МС (ИЭР) m/z 448 [М+1];

и 3-{(1R)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид (19 мг, выход 32%, 99,9% de).

¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7.98 (s, 1H), 7.73 (d, 1H, J=7.8 Гц), 7.68 (d, 1H, J=7.8 Гц), 7.41 (t, 1H, J=7.7 Гц), 5.05 (q, 1H, J=7.3 Гц), 4.35-4.28 (m, 1H), 3.60 (dd, 1H, J=10.8, 5.8 Гц), 3.53 (dd, 1H, J=10.8, 5.8 Гц), 1.94 (s, 2H), 1.72 (d, 2H, J=7.1 Гц), 1.68-1.58 (m, 1H), 1.55-1.39 (m, 2H), 0.92 (d, 3H, J=6.7 Гц), 0.82 (d, 3H, J=6.6 Гц);

МС (ИЭР) m/z 448 [М+1].

Пример 15

7-{[(1R-1-(Гидроксиметил)-3-метилбутил]амино-5-[(1-фенилпропил)тиол]-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение получали в виде смеси двух диастереомеров с выходом 41%, используя общий способ Ж и начиная с 5-[7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он-5-илдисульфанил]-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-она (30 мг, 0,050 ммоль) и (1-хлорпропил)бензола (15 мг, 0,10 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 12.31 (br s, 1H), 7.45-7.28 (m, 4H), 7.28-7.14 (m, 2H), 4.77-4.65 (m, 2H), 4.40-4.19 (m, 1H), 3.51-3.31 (m, 2H), 2.16-2.02 (m, 1H), 2.02-1.86 (m, 1H), 1.69-1.54 (m, 1H), 1.52-1.32 (m, 2H), 0.95-0.76 (m, 9H);

MC (ИЭР) m/z 419 [M+1].

Пример 16

5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

a) 1-[(1R)-1-Хлорэтил]-2-фторбензол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 65% и энантиомерным избытком 93%, используя общий способ Е и начиная с (1S)-1-(2-фторфенил)этанола (3,56 г, 25 ммоль).

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.53 (td, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 5.42 (q,1H),1.84(d,3H);

MC (ИЭР⁺) m/z 158 [M+H]⁺.

б) (2R)-2-[(2-амино-5-{[1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 41%, используя общий способ А и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (800 мг, 2,67 ммоль) и 1-[(1R)-1-хлорэтил]-2-фторбензола (509 мг, 3,21 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 7.97 (s, 2H), 7.53 (td, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 5.22 (q, 1H), 4.61 (t, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.38 (dt, 1H), 3.28 (m, 1H), 1.65 (d, 3Н), 1.59 (m, 1H), 1.49-1.32 (m, 2H), 0.87 (d,, 3Н), 0.84 (d, 3Н);

МС (ИЭР⁺) m/z 422 [M+H]⁺.

в) (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 72% согласно общему способу Б, начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (1,12 г, 2,67 ммоль).

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ млн-¹ 8.08 (d, J=8.4 Гц, 1Н), 7,56 (td, J=7.6, 1.6 Гц, 1Н), 7.31 (m, 1Н), 7.20 (m, 1Н), 7.17 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 5.25 (q, J=7.0 Гц, 1Н), 4.73 (t, J=5.3 Гц, 1Н), 4.33 (m, 1Н), 3.43-3.33 (m, 2H), 1.69 (d, J=7.0 Гц, 3Н), 1.59 (m, 1Н), 1.48 (m, 1Н), 1.38 (m, 1Н), 0.87 (d, J=6.6 Гц, 3Н), 0.84 (d, J=6.6 Гц, 3Н);

МС (ИЭР) m/z 441 [М+1].

г) (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-Фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 85%, используя общий способ В (за исключением того, что реакционную смесь перемешивали при 40°С до тех пор, пока реакция не завершится) и начиная с (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (200 мг, 0,45 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 437 [М+Н]⁺.

д) 5-{[(1S}-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил}-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение получали в виде твердого вещества с выходом 38%, используя общий способ Г и начиная с (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (140 мг, 0,32 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 12.36 (s, 1Н), 7.55 (t, 1Н), 7.24-7.35 (m, 2H), 7.16-7.22 (m, 2H), 5.20 (q, 1Н), 4.65 (m, 1Н), 4.28 (m, 1Н), 3.37 (m, 1Н), 3.29 (m, 1Н), 1.68 (d, 3Н), 1.60 (m, 1Н), 1.47 (m, 1Н), 1.37 (m, 1Н), 0.87 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 423 [М+Н]⁺.

Пример 17

3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

а) 3-[(1R)-1-Хлорэтил]бензонитрил

¹H ЯМР (ДМСО-d₆): δ 7.97 (s, 1Н), 7.82 (m, 2Н), 7.60 (t, 1Н), 5.40 (q, 1H), 1.80(d, 3H);

¹³C ЯМР (ДМСО-d₆): δ 144.1, 131.2, 131.6, 130.3, 129.9, 118.4, 111.6,57.41, 25.5;

МС (ИЭР⁺) m/z 166 [М+Н]⁺.

б) 3-{(1S)-1-[(2-Амино-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 31% из (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (200 мг, 0,67 ммоль) и 3-[(1R)-1-хлорэтил]бензонитрила (166 мг, 1,0 ммоль) согласно общему способу А.

¹H ЯМР (CD₃OD) δ 7.89-7.76 (m, 2Н), 7.57 (d, 1Н), 7.49 (m, 1Н), 5.12 (q, 1Н), 4.42 (br s, 1Н), 3.53 (m, 1Н), 3.44 (m, 1Н), 1.63-1.76 (m, 4H), 1.41-1.60 (m, 2Н), 0.96 (t, 6H);

MC (ИЭР⁺) m/z 429 [M+H]⁺.

в) 3-{(1S)-1-[(2-хлор-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали в виде твердого вещества с выходом 70%, используя общий способ Б (за исключением того, что по завершении реакционную смесь выливали на лед, и выпавший в осадок материал собирали фильтрованием) и начиная с 3-{(1S)-1-[(2-амино-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила (92 мг, 0,21 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 449 [М+Н]⁺.

г) 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 45%, используя общий способ В (за исключением того, что реакционную смесь перемешивали при 40°С до тех пор, пока реакция не завершится) и начиная с 3-{(1S)-1-[(2-хлор-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила (67 мг, 0,15 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 444 [M+H]⁺.

д) 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил}тио]этил}бензонитрил

Указанное в заголовке соединение получали в виде твердого вещества с выходом 32%, используя общий способ Г и начиная с 3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрила (60 мг, 0,14 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 12.41 (s, 1Н), 7.93 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.53 (t, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.95 (q, 1H), 4.25 (m, 1H), 3.27 (m, 1H), 1.67 (d, 3H), 1.56 (m, 1H), 1.34-1.49 (m, 2H), 0.86 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 430 [M+H]⁺.

Пример 18

7-{[(1R)-3-фтор-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

а) 1-[(1R)-1-Хлорэтил]-2-фторбензол

¹H ЯМР (CDCl₃) δ 7.53 (td, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 5.42 (q, 1H), 1.84(d, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 158 [М+Н]⁺.

б) 6-Амино-2-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}пиримидин-4-ол

К моногидрату 6-амино-2-меркаптопиримидин-4-ола (4,23 г, 26,3 ммоль) в ДМФ (40 мл) порциями добавляли NaH (60% в масле, 1,05 г, 26,3 ммоль), а затем NaBH₄ (0,099 г, 2,7 ммоль). Через 30 минут добавляли 1-[(1R)-1-хлорэтил]-2-фторбензол (5,0 г, 31,5 ммоль) в ДМФ (10 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Реакционную смесь концентрировали и распределяли между водой и ДХМ, органическую фазу сушили (MgSO₄) и упаривали. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией (ступенчатый градиент: 5-10% МеОН в CHCl₃) с получением указанного в заголовке соединения (5,20 г, выход 75%).

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 7.35 (m, 1Н), 7.13 (m, 1H), 6.99 (m, 2H), 6.29 (s, 2H), 5.00 (q, 1H), 4.76 (br s, 1H), 1.49 (d, 3Н);

MC (ИЭР⁺) m/z 266 [M+H]⁺.

в) 2-Амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-7-ол

KSCN (10,76 г, 110,7 ммоль) и пиридин (3,9 мл, 49,2 ммоль) добавляли к 6-амино-2-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}пиримидин-4-олу (6,53 г, 24,6 ммоль) в ДМФ (70 мл). Смесь охлаждали до 0°С и по каплям добавляли Br₂. Через 3,5 ч реакционную смесь выливали в воду и образовавшийся осадок собирали фильтрованием. Твердое вещество суспендировали в смеси ДМФ (75 мл) и воды (15 мл) и нагревали до 120°С в течение 8 ч. Реакционную смесь выливали в воду, и твердое вещество собирали фильтрованием и сушили в вакууме при 40°С с получением указанного в заголовке соединения (6,42 г, выход 81%).

MC (ИЭР⁺) m/z 323 [М+Н]⁺.

а) 7-Хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]-пиримидин-2-амин

POCl₃ (2,77 мл, 29,7 ммоль) добавляли к ДМФ (3,07 мл, 39,6 ммоль) в диоксане (30 мл). Через 30 минут эту смесь добавляли к раствору 2-амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ола (6,38 г, 19,8 ммоль) в диоксане (100 мл). Через 30 минут добавляли POCl₃ (2,77 мл, 29,7 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 80°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры осторожно добавляли воду (20 мл) и полученную в результате смесь перемешивали при 80°С в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду и собирали образовавшийся осадок. Твердое вещество очищали колоночной флэш-хроматографией (5% МеОН в CHCl₃) с получением указанного в заголовке соединения (5,91 г, выход 88%).

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.94 (s, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.20 (m, 2H), 5.22 (q, 1H), 1.71 (d, 3Н);

MC (ИЭР⁺) m/z 341 [М+Н]⁺.

д) (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил]амино]-4-фтор-4-метилпентан-1-ол

ДИПЭА (2,09 мл, 12,0 ммоль) добавляли к 7-хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2-амину (1,36 г, 4,0 ммоль) и (2R)-2-амино-4-фтор-4-метилпентан-1-олу (4 ммоль) в NMP (3 мл). После перемешивания реакционной смеси при 120°С в течение 22 ч, ее выливали в воду и осадок собирали фильтрованием. Твердое вещество очищали колоночной флэш-хроматографией (ступенчатый градиент: 5%-10% МеОН в CHCl₃) и препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,22 г, выход 13%).

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.35 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.15 (q, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.35-3.21 (m, 2H), 1.82-1.72 (m, 2H), 1.50 (d, 3Н), 1.17 (m, 6H);

MC (ИЭР⁺) m/z 440 [M+H]⁺.

е) (2R)-2-[(2-Хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-фтор-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали, используя общий способ Б и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-фтор-4-метилпентан-1-ола (0,20 г, 0,44 ммоль) и NaNO₂ (0,092 г, 1,33 ммоль).

MC (ИЭР⁺) m/z 459 [М+Н]⁺.

ж) (2R)-4-фтор-2-[(5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]-тиазоло[4.5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

KОН (0,050 г, 0,89 ммоль) добавляли к (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-фтор-4-метилпентан-1-олу в МеОН (5 мл) и смесь нагревали до 50°С. Через 3 ч смесь разбавляли NaCl (водн.) и экстрагировали CHCl₃, органическую фазу сушили (MgSO₄) и упаривали с получением указанного в заголовке соединения.

MC (ИЭР⁺) m/z 455 [M+H]⁺.

з) 7-{[(1R)-3-Фтор-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение (0,067 г, 34%-ный выход, рассчитанный для стадий е-з) получали, используя общий способ Г и начиная с (2R)-4-фтор-2-[(5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола.

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.57 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 7.19-7.08 (m, 2H), 5.34 (q, 1H), 4.62 m, 1H), 3.58-3.45 (m, 2H), 2.08-1.90 (m, 2H);

МС (ИЭР⁺) m/z 441 [М+Н]⁺.

Пример 19

5-{[(1S)-1-(2-Фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]-амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) (2R)-2-[(2-Амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 96%, используя общий способ А и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ола (703 мг, 2,46 ммоль) и 1-[(1R)-1-хлорэтил]-2-фторбензола (469 мг, 2,96 ммоль).

¹H ЯМР (ДМСО-d₆) δ 8.38 (br s, 2H), 7.55 (td, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.18 (d, 1H), 5.26 (q, 1H), 4.19 (br s, 1H), 3.43 (dd, 5.6 Гц, 1H), 3.35 (dd, 1H), 1.69 (d, 3Н), 1.66-1.42 (m, 2H), 1.39-1.21 (m, 2H), 0.86 (t, 3Н);

МС (ИЭР⁺) m/z 408 [M+H]⁺.

б) (2R)-2-[(2-Хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали, используя общий способ Б и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ола (0,32 г, 0,79 ммоль) и NaNO₂ (0,16 г, 2,37 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 427 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло-[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-ол

KОН (0,089 г, 1,58 ммоль) добавляли к (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]пентан-1-олу в МеОН (10 мл) и смесь нагревали до 50°С. Через 3 ч смесь разбавляли NaCl (водн.) и экстрагировали CHCl₃, органическую фазу сушили (MgSO₄) и упаривали с получением указанного в заголовке соединения.

МС (ИЭР⁺) m/z 423 [М+Н]⁺.

г) 5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-[[(1R)-1-(гидроксиметил)-бутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение (0,22 г, 67%-ный выход, рассчитанный для стадий б-г) получали, используя общий способ Г и начиная с (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-пентан-1-ола.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.56 (t, 1H), 7.18 (q, 1H), 7.08 (t, 1H), 7.00 (t, 1H), 5.51 (d, 1H), 5.26 (q, 1H), 4.30 8 (br s, 1H), 3.59 (m, 2H), 1.65 (d, 3H), 1.60-1.36 (m, 4H), 0.93 (t, 3H);

МС (ИЭР⁺) m/z 409 [M+H]⁺.

Пример 20

5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он

а) 1-[(1R)-1-Хлорэтил]-3-фторбензол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 49% и энантиомерным избытком 94,5%, используя общий способ Е и начиная с (1S)-1-(3-фторфенил)этанола (4,20 г, 30 ммоль).

¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 7.47-7.30 (m, 3H), 7.16 (t, 1H), 5.36 (q, 1H), 1.78(d,3H).

б) (2R)-2-[(2-Амино-5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали с выходом 61%, используя общий способ А и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-меркапто[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (0,30 г, 1,0 ммоль), 1-[(1R)-1-хлорэтил]-3-фторбензола (0,17 г, 1,1 ммоль) и NaBH₄ (0,019 г, 0,5 ммоль).

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.23 (m, 2H), 7.13 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.01 (q, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.43 (m, 2H), 1.63 (d, 3H), 1.44 (m, 2H), 0.88 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 422 [М+Н]⁺.

в) (2R)-2-[(2-Хлор-5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

Указанное в заголовке соединение получали, используя общий способ Б и начиная с (2R)-2-[(2-амино-5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола (0,24 г, 0,56 ммоль) и NaNO₂(0,12 г, 1,69 ммоль).

МС (ИЭР⁺) m/z 441 [М+H]⁺.

г) (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло-[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ол

KОН (0,063 г, 1,12 ммоль) добавляли к (2R)-2-[(2-хлор-5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-олу в МеОН (5 мл) и смесь нагревали до 50°С. Через 4 ч смесь разбавляли NaCl (водн.) и экстрагировали CHCl₃, органическую фазу сушили (MgSO₄) и упаривали с получением указанного в заголовке соединения.

МС (ИЭР⁺) m/z 437 [M+H]⁺.

д) 5-{[(1S)-1-(3-фторфенил]этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он

Указанное в заголовке соединение (0,16 г, 65%-ный выход, рассчитанный для стадий в-д) получали, используя общий способ Г и начиная с (2R)-2-[(5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}-2-метокси[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-ил)амино]-4-метилпентан-1-ола.

¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.30 (m, 2Н), 7.19 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 5.02 (q, 1H), 4.44 (m, 1H), 3.49 (m, 2Н), 1.69 (m, 4H), 1.55-1.40 (m, 2Н), 0.94 (m, 6H);

МС (ИЭР⁺) m/z 423 [М+Н]⁺.

Фармакологические исследования

Материалы

Рекомбинантный человеческий фракталкин (hCX₃CL1) и рекомбинантный человеческий интерлейкин-8 (IL-8 или hCXCL8) приобретали у PeproTech Inc., UK. Рекомбинантный [¹²⁵I]-фракталкин (человека) и [¹²⁵I] hIL-8 с удельной активностью 2200 Ки/ммоль приобретали у NEN® Life Science Products, Inc., UK. Fluo4-AM приобретали у Molecular Probes, US. Все остальные химикаты были аналитической степени чистоты.

Клетки

Полную человеческую CX3CR1 кДНК (GenBank инвентарный номер U20350) экстрагировали из мРНК мозга человека (Superscript, Life Technologies) и лигировали в pCR-Blunt II ТОРО вектор (InVitrogen). Соответствующую вставку hCX3CR1 изолировали и далее субклонировали в pcDNA3.1zeo. С использованием набора для плазмид (Plasmid Midi Kit (Qiagen)) изготавливали ДНК плазмиду. Затем, используя трансфекционный реагент Superfect (Qiagen) согласно протоколу производителя, ввели экспрессионную плазмиду для hCX₃CR1 в суспензию клеток почек человеческого эмбриона (HEKS) линии 293, содержащую вектор для стабильной экспрессии химерного G-белка Gα_qi5. Создавали стабильный клон, используя селекцию на зеоцине (500 мкг/мл) и гигромицине (100 мкг/мл). Для дальнейшего применения клетки содержали в среде Игла, модифицированной Дульбекко/питательной смеси Ham′s F12 (DMEM/F12), содержащей пиридоксин и обогащенной 10% (об./об.) фетальной телячьей сывороткой, 2 мМ L-глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мг/мл стрептомицина, 250 мкг/мл зеоцина и 100 мкг/мл гигромицина.

Клетки, экспрессирующие CXCR2 человека, полученные от AstraZeneca Charnwood, культивировали в ЕМЕМ, содержащей Глутамакс (Glutamax) и обогащенной 10% FBS (фетальной телячьей сывороткой) (от РАА, Austria), 1% заменимыми аминокислотами (NEAA), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (PEST) и 500 мкг/мл генетицин/G418.

Приготовление мембраны

Клетки выращивают при 37°С и 5% CO₂ и собирают при слиянии 60-80% в буфере, содержащем 10 мМ Tris-HCl рН 7,4, 5 мМ EDTA, 0,1 мг/мл бацитрацина. Клетки центрифугируют при 300 xg в течение 10 мин и осадок после центрифугирования ресуспендируют в буфере для сбора (10 мМ Tris-HCl, рН 7,4, 5 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) и 0,1 мг/мл бацитрацина), объединяют и гомогенизируют, используя гомогенизатор Dounce. Гомогенат центрифугируют при 48000 xg в течение 10 мин и ресуспендируют в буфере для сбора, используя Ultra-Turrax T8. Мембранные аликвоты хранят при -80°С. Концентрацию белка определяли на планшетах для микротитрования, как описано у Harrington (1990, Anal. Biochem. 186, 285-287).

Опыт на связывание рецептора in vitro

Исследования на конкурентное связывание [¹²⁵I]фракталкина проводили в 2 мл 96-луночных планшетах (Beckman, Germany) с общим объемом 1000 мкл/лунка. Каждая лунка содержала 10 пМ [¹²⁵I]-фракталкина и мембрану, эквивалентную концентрации рецептора 1 пМ в буфере для анализа (50 мМ Hepes-KОН, рН 7,4, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ EDTA, 0,1% (мас./об.) желатин). Десять концентраций (2 точки/логарифмическая единица (log unit)) тестируемых соединений предварительно растворяли в ДМСО и добавляли для достижения конечной концентрации 1% (об./об.) ДМСО. Опыт начинали добавлением мембран и инкубированием при 25°С в течение 24 ч. Реакции останавливали быстрым фильтрованием через фильтры из стекловолокна Whatman GF/B, предварительно обработанные 0,3% полиэтилимином, и последующей промывкой ледяным буфером (10 мМ Hepes-KOH рН 7,4, 500 мМ NaCl), используя харвестер для связывания рецепторов Brandel. Добавляли сцинтилляционный коктейль и с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика Packard 2500TR (Perkin Elmer, USA) определяли радиоактивность.

Исследования на конкурентное связывание [¹²⁵I]-hIL-8 проводят однократно в 96-луночных планшетах с белым прозрачным дном isoplate с общим объемом 200 мкл; каждая лунка содержит 150 пМ [¹²⁵i]-hIL-8 (удельная активность 2200 Ки/ммоль), препарат мембрана-SPA, эквивалентный 20 пМ рецепторов, и 1,5 мг SPA-гранул в буфере для анализа [50 мМ HEPES-KOH рН 7,4, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ EDTA, 0,5% (мас./об.) желатин]. Тестируемые соединения обрабатывали, как описано выше. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 500 нМ немеченного hIL-8. Агонист hIL-8 (кривая концентрация-ответ от 3 пМ до 30 нМ) используют в качестве соединения сравнения в каждом опыте. Кривая пептида не содержит ДМСО. Реакцию связывания начинают добавлением 140 мкл препарата мембрана-SPA и образцы инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение 4 ч. Планшеты для анализа обсчитывают с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика (Wallac MicroBeta® TriLux 1450 от PerkinElmer, США).

[³⁵S]GTPγS binding

Исследования на связывание [³⁵S]GTPγS проводили в планшетах для микротитрования с прозрачным дном в двух экземплярах с 10 концентрациями ингибитора (2 конц./log units), разбавленного ДМСО (конечная конц. 1%) и при комнатной температуре. Мембраны, экспрессирующие рецептор hCX3CR1 (конечная концентрация 20 мкг белка/лунка), добавляли вместе с гранулами SPA (конечная концентрация 1 мг/лунка), все суспендированы в буфере для связывания GTPγS (50 мМ Tris-HCl, 100 мМ NaCl, 0,1% желатин, 15 мкг сапонин/мл и 3 мкМ GDP, рН 7,4 при комнатной температуре). Мембраны, гранулы SPA и лекарства предварительно инкубировали 30 мин перед добавлением 310 пМ фракталкина для максимальной стимуляции. Основную активность определяли как активность, обнаруженную без фракталкиновой стимуляции (буфер для связывания GTPγS). Еще через 30 мин реакцию начинали добавлением [³⁵S]GTPγS до конечной концентрации 0,1 нМ и конечного объема опыта 0,2 мл. Эксперимент останавливали через 30 минут центрифугированием при 2000 об/мин в течение 2×5 минут (разные направления) и с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика (Wallac MicroBeta® TriLux 1450) определяли радиоактивность.

Результаты

Данные по связыванию рецептора для выбранных соединений по настоящему изобретению и для соединения сравнения 5-(бензилтио)-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-она приведены в Таблице.

Соединение сравнения 5-(бензилтио)-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3H)-он получали из (R)-2-(5-фенилметилтио-2-бром-тиазоло[4,5-d]пиримидин-7-иламино)-4-метил-пентан-1-ола (WO 02/076990), используя общие способы В и Г настоящей заявки.

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.36 (br s, 1Н), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.32-7.20 (m, 4H), 4.37-4.28 (m, 3H), 3.44-3.31 (m, 2H), 1.65-1.52 (m, 1Н), 1.48-1.32 (m, 2H), 0.90-0.78 (m, 6H); ЖХМС (ИЭР+) m/z 391 [М+Н]⁺.

Сравнение данных, приведенных в Таблице, ясно показывает, что соединения по настоящему изобретению, где R¹ представляет собой Me или Et, являются как более сильными антагонистами CX₃CR1 рецептора, так и менее сильными антагонистами CXCR2 рецептора, чем соответствующее соединение сравнения. Полагают, что такая улучшенная селективность в отношении антагонизма CX₃CR1 рецептора приводит к значительному терапевтическому преимуществу.

Таблица
Соединение	K_i,нМ
Соединение	CX₃CR1	CXCR2
	1.3	276
	5.8	651
	7.8	238
	8.0	1359
	54	79

Claims

1. Соединение формулы (I)

где R¹ представляет собой СН₃ или СН₃СН₂;
R² представляет собой Н, 3-CN, 2-CF₃, 2-F, 3-F, 3-CF₃, 3-CONH₂ или 3-SO₂CH₃;
R³ представляет собой Н;
R⁴ представляет собой Н или СН₃; и
R⁵ представляет собой Н; или, когда R⁴ представляет собой СН₃, R⁵ представляет собой Н или F;
и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой СН₃.

3. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой СН₃СН₂.

4. Соединение по п.1, где R² представляет собой Н, 2-F, 3-F, 3-CN или 3-SO₂CH₃.

5. Соединение по п.1, где R⁴ представляет собой Н.

6. Соединение по п.1, где R⁴ представляет собой СН₃.

7. Соединение по п.6, где R⁵ представляет собой Н.

8. Соединение по п.6, где R⁵ представляет собой F.

9. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой СН₃; R² представляет собой Н, 2-F или 3-CN; R³ представляет собой Н; R⁴ представляет собой Н или СН₃; и R⁵ представляет собой Н.

10. Соединение формулы (I) по п.1, представляющее собой:
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1R)-l-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({(1S)-1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[2-(трифторметил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1-(гидроксиметил)бутил]амино}-5-({(1S)-l-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-[(1-фенилэтил)тио][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1R)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-фенилэтил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-({1-[3-(метилсульфонил)фенил]этил}тио)[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид;
3-{(1(R)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензамид;
7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино-5-[(1-фенилпропил)тиол][1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
3-{(1S)-1-[(7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-2-оксо-2,3-дигидро[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-5-ил)тио]этил}бензонитрил;
7-{[(1R)-3-фтор-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}-5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
5-{[(1S)-1-(2-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1Н)-1-(гидроксиметил)бутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
5-{[(1S)-1-(3-фторфенил)этил]тио}-7-{[(1R)-1-(гидроксиметил)-3-метилбутил]амино}[1,3]тиазоло[4,5-d]пиримидин-2(3Н)-он;
или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства, обладающего свойством антагониста рецептора CX₃CR1.

12. Фармацевтическая композиция, обладающая свойством антагониста рецептора CX₃CR1, содержащая соединение формулы (I), как оно определено в любом из пп.1-10, или его фармацевтически приемлемую соль в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

13. Применение соединения формулы (I), как оно определено в любом из пп.1-10, или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики заболеваний или состояний, при которых полезен антагонизм рецептора CX₃CR1.