CN101185671A - 从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物及其制备方法，涉及医用配制品，同时涉及核桃树皮的提取分离物，该药物是以8－羟基－2－甲氧基－1，4－萘醌为活性成分的药物；制备方法分为提取活性物质和配制抗肿瘤药物两个阶段，提取分离物共5步：①将核桃树皮制成粉丝状，用酒精提取；②提取液浓缩得到浸膏；③用萃取剂萃取浸膏，得到萃取物；④萃取物浸膏用纯碱溶液溶解，用氯仿萃取，得到浸膏；⑤部分浸膏用氯仿溶解，柱层析分离，即得到8－羟基－2－甲氧基－1，4－萘醌。配制阶段是将提取的HT－12按照常规方法与淀粉和大豆蛋白制成口服药剂，或直接用浸膏制成口服药剂，或用蒸馏水配制成针剂。本发明提供的药物是一种抗肿瘤药物，用来治疗和预防癌症，为人类健康服务。

Description

从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及医用配制品，同时涉及核桃树皮的提取分离物，具体而言，涉及从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物。
背景技术
核桃属(Juglans)植物属于被子植物双子叶植物纲胡桃科(Juglandaceae)。核桃(Juglans regia)的枝、叶、外果皮、根皮、坚果及果仁均可入药。核桃对泌尿系统结石、慢性气管炎、皮炎、湿疹及痢疾等疾病疗效很高。在民间有用核桃树皮的提取液治疗癌症的方法。
文献调研表明，对核桃属植物的研究主要集中在种植、食品加工等方面，对其化学成分及活性的研究也主要集中在黑核桃(J.nigra)、核桃楸(J.mandshurica)的根皮、枝皮及青果。对核桃(J.regia)的化学成分研究相对较少，特别是核桃树皮中有效成分的抗癌活性研究更少。
1991年，有人申请了“治癌新药‘三宝功德丹’的制作方法”专利，其中以核桃皮为该药的原料药之一。但尚无从核桃树皮提取抗肿瘤药物的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物，使核桃属植物能够更有效地治疗肿瘤，为人类的健康服务。
本发明的又一目的是提供从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物的制备方法。
发明人经过深入的研究，对产于贵州省长顺县的核桃树皮中抗癌的成分进行了提取分离，获得了8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌的分离物，该物质能够有效抑制人白血病细胞株K562、人非小细胞肺癌细胞株A549的生长。因此，本发明提供的从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物，是以8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌为活性成分的药物。
发明人对8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌抗癌活性的研究过程如下：
1.对人白血病细胞株K562生长抑制作用筛选
(1)模型原理：
活细胞的线粒体中存在着与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原为不溶性的蓝紫色的Formanzan，死细胞此酶消失，MTT不还原。本模型根据MTT的还原程度，来检测样品对肿瘤细胞的作用强弱。
(2)筛选方法
采用四氮唑盐还原法(MTT法)研究化合物对人白血细胞株K562生长的抑制作用；
(3)计算公式
抑制率＝(标准对照的OD值-样品的OD值)/标准对照的OD值×100
(4)供试样品
核桃树皮乙醇提取物中分离得到的化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌；
(5)筛选结果(见表1)
2.对人非小细胞肺癌细胞株A549抑制作用筛选
(1)模型原理：
Sulforhodamine B(SRB)是一种蛋白结合的染料，可与生物大分子中的碱性氨基酸结合，其在540nm的OD值与细胞数呈良好的线性关系。本模型根据SRB结合的OD值，来计算样品的抑制率。
(2)筛选方法
采用SRB法研究化合物对A549癌细胞的生长抑制作用；
(3)计算公式
抑制率＝(标准对照的OD值-样品的OD值)/标准对照的OD值×100
(4)供试样品
核桃树皮乙醇提取物中分离得到的化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌；
(5)筛选结果(见表1、表2、3)
表1  用SRB法、MTT法研究化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌
          对A549、K562细胞株的抑制率(％)
  浓度(mg/mL)   A549(％)   K562(％)
  0.20.020.002   74.568.5365.77   104.41100.8188.32
表2  化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌与阿霉素抑制K562细胞的活性对照
  HT-12   阿霉素(阳性对照品)
  浓度(mol/L)抑制率(％)   9.8×10-688.32   1×10-778.29
表3  化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌与5-FU抑制A549细胞的活性对照
  HT-12   5-FU(阳性对照品)
  浓度(mol/L)抑制率(％)   9.8×10-665.77   3.83×10-550.0
注：5-FU＝5-氟尿嘧啶
本发明提供的从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物的制备方法分为提取分离物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌和抗肿瘤药物的配制两个阶段，其中分离物提取阶段包括以下步骤：
第一步 将核桃树皮制成粉丝状，用酒精提取；
第二步 提取液浓缩到无酒精味，得到浸膏；
第三步 依次用萃取剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取浸膏，回收溶剂，分别得到石油醚萃取物B、乙酸乙酯萃取物C、正丁醇萃取物D；
第四步 乙酸乙酯萃取物浸膏用Na2CO3水溶液溶解后，用氯仿萃取，挥发掉溶剂，得到浸膏E；
第五步 取浸膏E部分用氯仿溶解，用聚酰胺柱层析分离，即得到橙红色晶体化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌(HT-12)；
配制阶段是将提取的HT-12按照常规方法与淀粉和大豆蛋白制成口服药剂；干燥浸膏经粉碎后，可以进一步加工成片剂、或胶囊剂、或颗粒剂；或者按照常规方法用蒸馏水配制成针剂。
上述提取阶段的第一步中，所用的酒精是95％的工业酒精，提取的温度为50℃～60℃，提取时间为2～4小时。
上述提取阶段的第五步中，用聚酰胺柱层析分离2～5次。
上述配制阶段中，制成口服药剂的质量配比是：淀粉75％，大豆蛋白20％，HT-125％；制成针剂的质量配比是：蒸馏水99％，HT-121％。
本发明提供的从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物，其中的活性成分8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌能够有效抑制人白血病细胞株K562、人非小细胞肺癌细胞株A549的生长，因此是一种癌细胞抑制剂，也是一种抗肿瘤药物；提供的药物制备方法，可以从核桃树皮资源提取抗肿瘤药物，用来治疗和预防癌症，为人类的健康服务。
具体实施方式
实施例1
首先，提取活性成分物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌：
(a)将28kg核桃树皮制成粉丝状，置于30L不锈钢反应釜中，加入95％工业酒精约90kg，控温在50℃～60℃左右，机械搅拌，提取两次，第一次2小时，第二次1小时。再用离心机分离，合并提取液，弃残渣；
(b)提取液用自制的薄膜蒸发仪浓缩到小体积，再用旋转蒸发仪浓缩到无酒精味，得到浸膏A；
(c)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，得到石油醚萃取物B、乙酸乙酯萃取物C、正丁醇萃取物D；
(d)取乙酸乙酯萃取物浸膏约100g，用Na2CO3水溶液溶解后，用氯仿萃取，挥发掉溶剂，得到浸膏E；
(e)取E部分5g，氯仿溶解，用聚酰胺柱层析分离2～5次，得到橙红色晶体化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌。8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌的提取率为0.09％～0.14％。
之后，配制抗肿瘤药物：
取淀粉75g、大豆蛋白20g、上一步提取的HT-12晶体5g，按照常规方法制得100g口服药物，可以进一步加工成片剂、或胶囊剂、或颗粒剂。
实施例2
提取活性成分物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌的过程同实施例1。
之后，配制抗肿瘤药物：
取上一步提取的HT-12晶体0.1g，与蒸馏水99mL按照常规方法制得100g针剂，可按照每支5mL的规格制成20支注射剂。

Claims (5)

1.从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物，其特征在于该药物是以8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌为活性成分的药物。
2.按照权利要求1所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于该方法分为提取分离物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌和配制抗肿瘤药物两个阶段，其中提取分离物阶段包括以下步骤：
第一步将核桃树皮制成粉丝状，用酒精提取；
第二步提取液浓缩到无酒精味，得到浸膏；
第三步依次用萃取剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取浸膏，回收溶剂，分别得到石油醚萃取物B、乙酸乙酯萃取物C、正丁醇萃取物D；
第四步乙酸乙酯萃取物浸膏用Na2CO3水溶液溶解后，用氯仿萃取，挥发掉溶剂，得到浸膏E；
第五步取浸膏E部分用氯仿溶解，用聚酰胺柱层析分离，即得到橙红色晶体化合物8-羟基-2-甲氧基-1，4-萘醌，即HT-12；
配制阶段是将提取的HT-12按照常规方法与淀粉和大豆蛋白制成口服药剂，或者按照常规方法用蒸馏水配制成针剂。
3.按照权利要求2所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于所述提取阶段的第一步中，所用的酒精是95％的工业酒精，提取的温度为50℃～60℃，提取时间为2～4小时。
4.按照权利要求2所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于所述提取阶段的第五步中，用聚酰胺柱层析分离2～5次。
5.按照权利要求2所述的抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于所述配制阶段中，制成口服药剂的质量配比是：淀粉75％，大豆蛋白20％，HT-125％；制成针剂的质量配比是：蒸馏水99％，HT-121％。
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