CN101182484B - 粘性沙雷氏菌及其生物转化dl-乳酸生产丙酮酸 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种粘性沙雷氏菌及其生物转化DL-乳酸生产丙酮酸，本发明粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-07166 2007年9月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No：M207140；本发明所述的生物转化DL-乳酸生产丙酮酸，以DL-乳酸为底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体为生物催化剂，在转化体系溶液中，在20-50℃下转化反应6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，分离纯化得到丙酮酸，所述转化体系溶液为蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液；本发明反应条件温和，流程简单，环境友好，转化率较高。
Description
(一)技术领域
本发明涉及生物转化DL-乳酸生产丙酮酸，特别是以粘性沙雷氏菌生物转化DL-乳酸生产丙酮酸。
(二)技术背景
丙酮酸，是重要的α-氧代羧酸之一，为无色至淡黄色液体，呈醋酸香气，易吸潮、聚合、分解，能与水、乙醇、乙醚等混溶。
丙酮酸(盐)及其衍生物广泛应用于制药、日化、食品和农用化学品等行业。丙酮酸是酶法合成多种氨基酸和维生素的前体物质：制药工业上可用于酶法合成L-色氨酸、合成L-半胱氨酸、L-多巴、L-亮氨酸，合成系列酶蛋白抑制剂、镇静剂、2-苯基喹啉-4-羧酸、磷酸烯醇丙酮酸、4-甲唑甲酸等，特别是丙酮酸钙作为一种减肥药品被开发后，目前丙酮酸的市场需求量很大；食品工业上可用作防腐保鲜剂；日化工业上，丙酮酸乙酯可抑制表皮中酪氨酸酶的形成美白皮肤，可用作化妆品的防腐剂和抗氧剂，用作空气清新剂；农用化学方面，丙酮酸乙酯是合成乙烯聚合物、氢化阿托酸、谷物保护剂、成熟剂等多种农药的起始原料；生化试剂和生物传感器方面丙酮酸也有较广泛的应用。因此，微生物转化乳酸生产丙酮酸的研究有着重要意义。
国内外用微生物法转化乳酸生产丙酮酸已有一些文献报道，用于生产丙酮酸的微生物主要是迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)(J.Ferment.Bioeng.81(1996)357-359)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)(J.Biotechnol.31(1993)191-203)、奇异变形杆菌(Proteus mirabils)(J.Biotechnol.31(1993)191-203)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)(Chin.J.Appl.Envi ron.Biol.7(2001)617-620)、不动杆菌属(Acinetobacter)(Biotechnol.Prog.19(2003)1672-1676)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)(Biochem.Eng.J.22(2005)89-96)和斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)(Biotechnol.Lett.29(2007)105-110)。
微生物转化乳酸生产丙酮酸具有转化率高、产物易分离、环境污染小等优点，符合绿色化学的发展方向；DL-乳酸和丙酮酸也有较大的差价，因此，微生物转化DL-乳酸生产丙酮酸的研究有着重要的社会效益和经济效益。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供能转化乳酸生产丙酮酸的粘性沙雷氏菌(Serratiamarcescens)ZJB-07166及其在制备丙酮酸中的应用。
本发明提供的粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-07166保藏于中国典型培养物保藏中心，其简称为CCTCC，保藏地址：中国武汉武汉大学生命科学学院，保藏编号CCTCC No：M207140，保藏日期为2007年9月7日。
本发明所述粘性沙雷氏菌ZJB-07166由以下途径筛选得到：
(1)富集培养基及条件：DL-乳酸钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵3g/L，用蒸馏水配制，pH7.0。培养条件：30℃，摇床转速150r/min。5g土样加入100mL富集培养基培养，培养48小时后，转接1mL富集培养液至新的富集培养基培养。
(2)第二次富集培养液稀释后涂布到平板培养基上，30℃培养箱恒温培养24小时，挑取单菌落至斜面培养后保藏，斜面培养条件为30℃培养箱恒温培养24小时。平板培养基及斜面培养基组分：DL-乳酸钠10g/L，酵母粉5g/L，蛋白胨5g/L，琼脂15g/L-20g/L，pH7.0。
(3)挑取的单菌落接种到菌体培养基，培养36小时，离心收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，所得菌体与底物DL-乳酸均匀分散于蒸馏水中，底物浓度50mM，30℃，150r/min水浴下反应12小时。转化液通过液相检测，能转化DL-乳酸生成丙酮酸的菌株为目的菌株。所述菌体培养基组分：DL-乳酸钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵3g/L，用蒸馏水配制，pH7.0。
本发明中丙酮酸采用液相色谱的方法进行检测，检测条件为：C18反相色谱柱，流动相为0.005M硫酸溶液，流速为1mL/min，检测波长215nm，进样量20μL，柱温：30℃。
粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-07166具有如下特征：
菌落形态：在牛肉膏蛋白胨培养基上30℃培养箱恒温培养24小时后，菌落呈圆形，四周光滑，表面湿润，中央微凸起，深红色。
细胞形态：短杆状，个体细胞大小为(0.5-0.8)×(0.9-1.4)μm，无芽孢生成，能运动。
生理生化特征：详见表1：
表1：粘性沙雷氏菌ZJB-07166生理生化特
| 革兰氏染色 | - |
| 氧化酶 | - |
| 过氧化氢酶 | + |
| 鸟氨酸脱羧酶 | + |
| 精氨酸双水解酶 | - |
| 赖氨酸脱羧酶 | + |
| 脲酶 | - |
| L-阿拉伯糖 | - |
| 5-酮基-葡萄糖酸钠 | + |
| 脂肪酶 | + |
| 酚红反应 | - |
| β-葡萄糖苷酶 | + |
| D-甘露醇 | + |
| D-麦芽糖 | + |
| 侧金盏花醇 | + |
| 帕拉金糖 | - |
| β-葡萄糖酸酶 | - |
| 丙二酸盐 | - |
| N-乙酰-β-葡萄糖苷酶 | - |
| β-半乳糖苷酶 | + |
| D-葡萄糖 | + |
| D-蔗糖 | + |
| L-树胶醛糖 | - |
| D-阿拉伯糖 | - |
| α-半乳糖苷酶 | - |
| D-海藻糖 | + |
| L-鼠李糖 | - |
| 肌醇 | + |
| D-纤维二糖 | - |
| D-山梨醇 | + |
| α-麦芽糖甙酶 | - |
注：表中“+”表示阳性，“-”表示阴性。
以提取到的粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-07166细胞总DNA为模板，利用引物：P16s8(5’to 3’)AgAgTTTgATCCTggCTCAg和P16s-1492(5’to 3’)ggCTACCTTgTTACgACTT扩增菌株的16S rDNA，将扩增产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳，经PCR成功扩增获得一长约1.5kb的片断，经测序该片断长度为1461kb，将该序列(已提交GenBank，GenBank登记号为No.EU031439)与GenBank中相关数据进行相似性分析发现，该菌与粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)同源性最高(homology，99％/1461 bps，based on 16SrDNA)。
生理生化鉴定结合分子生物学鉴定，可确认该菌株为粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)。
本发明粘性沙雷氏菌(Serratia marcescens)ZJB-07166在微生物转化DL-乳酸制备生成丙酮酸中的应用。
反应式如下：
DL-乳酸 内酮酸
本发明所述的应用，以DL-乳酸为底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体为生物催化剂，在转化体系溶液中，在20-50℃下转化反应6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，分离纯化得到丙酮酸，所述转化体系溶液为蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。
推荐所述底物DL-乳酸的浓度为10mM-140mM，所述的湿菌体添加量为2-40g/L。
进一步，本发明所述的应用以粘性沙雷氏菌ZJB-07166进行种子培养和菌体培养，从培养液中离心得到的湿菌体作为生物催化剂，在EDTA溶液存在，以蒸馏水溶液为转化液，所述湿菌体添加量为2-40g/L，EDTA浓度为5-20mM，控制转化温度为20-50℃，进行微生物转化反应6-10小时，反应完全得含酸丙酮酸的转化液，经分离制得丙酮酸。EDTA在这里可以阻止生成的丙酮酸进一步代谢。
本发明所述的湿菌体的含水量为80～90％。
所述湿菌体按如下步骤制备得到：
(1)种子培养：将粘性沙雷氏菌ZJB-07166接种于斜面培养基在20-30℃的条件下培养24-36小时，获得斜面活化菌种，所述斜面培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白胨1-8g/L，琼脂15g/L-20g/L，溶剂为水，初始pH为6.0-7.5；再将斜面活化菌种接种于种子培养基，在20-35℃，100-200r/min条件下培养24-36小时得种子液，所述种子培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，溶剂为水，初始PH为6.0-7.5；
(2)菌体培养：菌体培养基中按照体积比接入1-5％的种子液，在20-35℃，摇床转速100-200r/min条件下培养24-56小时，将培养液离心、洗涤，收集湿菌体，冷藏备用；所述的菌体培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，0.0001-0.005g/LMgSO4·7H2O，溶剂为蒸馏水，初始PH为6.0-7.5。
本发明所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166转化DL-乳酸制备生成丙酮酸中的应用，优选转化体系初始pH为6.5-9.0，在20-40℃摇床150r/min水浴中进行转化。推荐较好的方案是：以粘性沙雷氏菌ZJB-07166的湿菌体为生物催化剂，在初始pH为6.5-9.0，底物浓度为10mM-140mM，湿菌体浓度为2-40g/L，EDTA浓度为6-14mM条件下，在28-32℃，摇床转速50-250r/min震荡，转化6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，再以用SD-4型弱碱性离子交换树脂分离纯化得到丙酮酸。
具体的，本发明所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166转化DL-乳酸生成丙酮酸，其流程如下：
(1)种子的培养
粘性沙雷氏菌ZJB-07166接种于斜面培养基培养，斜面培养基配方为：DL-乳酸钠2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白胨1-8g/L，琼脂15g/L-20g/L，用盐酸或氢氧化钠调节至pH6.0-7.5，在20-30℃的条件下培养24-36小时。将斜面培养的菌体接种于种子培养基进行培养。种子培养基配方为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，用蒸馏水配制，用盐酸或氢氧化钠调节至pH6.0-7.5。种子培养基在20-35℃，100-200r/min条件下培养24-36小时。
(2)菌体培养
将培养好的种子接种于菌体培养基以获得菌体。其菌体培养基配方为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，0.0001-0.005g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，用盐酸或氢氧化钠调节至pH6.0-7.5，进行培养。培养条件为：在20-35℃，100-200r/min条件下培养24-56小时，培养液离心收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用。
(3)生物转化
以DL-乳酸为底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体为生物催化剂，转化体系溶液中，在20-40℃(其中以28-32℃较好)条件下，转化6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，分离纯化得到丙酮酸。所述转化体系溶液为蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液，初始pH6.5-9.0。
所述的转化体系溶液中，DL-乳酸的浓度为10mM-140mM(其中以30-60mM较好)，所述的湿菌体添加量为2-40g/L(其中以10g/L-20g/L较好)，EDTA浓度为5-20mM(其中以6-14mM较好)。
(4)产物分离
用SD-4型弱碱性离子交换树脂分离转化液中的乳酸和丙酮酸，离子交换固定床工艺为：上柱pH为2.0，上柱流速为0.5BV/h，用去离子水淋洗即可除去乳酸，1.0M盐酸逆流洗脱，流速保持0.5BV/h。收集洗脱液，浓缩得到丙酮酸，该工艺可使丙酮酸收率达到78％以上。
本发明有益效果在于提供了一种粘性沙雷氏菌ZJB-07166及这种粘性沙雷氏菌ZJB-07166在生物转化合成丙酮酸的应用，该合成反应条件温和，流程简单，环境友好，转化率较高。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
(1)湿菌体的制备：
种子培养：
斜面培养基：DL-乳酸钠10g/L，酵母粉6g/L，蛋白胨7g/L，琼脂13g/L，溶剂为水，初始pH为7.0；将粘性沙雷氏菌ZJB-07166接种于斜面培养基在25℃的条件下培养30小时，获得斜面活化菌种。
种子培养基：DL-乳酸钠7g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，磷酸氢二钾0.9g/L，氯化铵4g/L，溶剂为水，初始PH为6.5；再将斜面活化菌种接种于种子培养基，在25℃，150r/min条件下培养30小时得种子液，
菌体培养：
菌体培养基：DL-乳酸钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵3g/L，0.003g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，初始pH7.0，121℃灭菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的种子液按接种量为1-5％接种于菌体培养基，在30℃，150r/min下培养36小时。
将培养液离心(12000r/min)收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集湿菌体，冷藏备用。
(2)丙酮酸制备：
在磨口三角瓶中加入50mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸的浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L，EDTA浓度10mM，在30℃，转速为150r/min的水浴摇床中进行转化，每隔1小时取样一次，取样后立即离心、上清液进行HPLC检测丙酮酸浓度，观察转化终点。
转化进行到8小时，乳酸接近全部转化，8小时后丙酮酸浓度不再变化。
观察结果见表1.
表1.不同转化时间后转化体系液中丙酮酸浓度
| 时间 | 1h | 2h | 3h | 4h | 5h | 6h | 7h | 8h | 9h | 10h |
| 丙酮酸浓度(Mm) | 1 | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 32 | 38 | 38 | 38 |
收集上述转化液100mL，用SD-4型弱碱性离子交换树脂分离转化液中的乳酸和丙酮酸，离子交换固定床工艺为：上柱pH为2.0，上柱流速为0.5BV/h，用去离子水淋洗即可除去乳酸，1.0M盐酸逆流洗脱，流速保持0.5BV/h。收集洗脱液，浓缩得到26.8mg丙酮酸，丙酮酸收率达到80％。
实施例2：
(1)湿菌体的制备：
制备粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体与实施例1同。
(2)丙酮酸制备：
在8个磨口三角瓶中，分别加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸的浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L，EDTA浓度10m，分别在20℃，25℃，30℃，35℃，40℃，45℃，50℃，60℃，转速为150r/min的水浴摇床中进行转化，8小时取样，立即离心、上清液进行HPLC检测。
表2.不同温度条件下得到的丙酮酸的量
| 温度 | 20℃ | 25℃ | 30℃ | 35℃ | 40℃ | 45℃ | 50℃ | 55℃ | 60℃ |
| 丙酮酸(mM) | 12 | 30 | 38 | 28 | 10 | 4.9 | 4.1 | 3.5 | 2.1 |
表2结果表明：相同底物浓度、菌体浓度情况下，30℃条件下转化率最高，接近95％，转化温度高于45℃时，转化率明显下降，低于10％。
实施例3：
(1)湿菌体的制备：
制备粘性沙雷氏菌ZJB-07166菌体与实施例1同。
(2)丙酮酸制备：
在11个磨口三角瓶中，分别加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含湿菌体浓度12.5g/L，EDTA浓度6mM，底物DL-乳酸浓度分别为10mM，20mM，30mM，40mM，50mM，60mM，70mM，80mM，100mM，120mM，140mM。在30℃，转速为150r/min水浴摇床中进行转化，转化8小时取样，取样后立即离心、上清液进行HPLC检测。
表3.不同底物浓度转化率
| 底物 | 10mM | 20mM | 30mM | 40mM | 50mM | 60mM | 70mM | 80mM | 90mM | 100mM | 110mM | 120mM | 130mM | 140mM |
| 丙酮酸(mM) | 9.6 | 19.2 | 28.8 | 38 | 45 | 54 | 56 | 62 | 65 | 50 | 31 | 20 | 15 | 14 |
| 转化率(％) | 96 | 96 | 96 | 95 | 90 | 90 | 80 | 77.5 | 72.2 | 50 | 28.18 | 16.7 | 11.5 | 10 |
表3结果表明：底物浓度小于60mM时，转化率均在90％，高于60mM时，转化率随底物浓度的提高明显下降，底物浓度在140mM时，转化率只有10％。转化最佳底物为60mM以下。
实施例4：
(1)湿菌体的制备：
制备粘性沙雷氏菌ZJB-07166菌体与实施例1同。
(2)丙酮酸制备：
在12个磨口三角瓶中，分别加入10mL pH4.0，pH4.5，pH5.0，pH5.5，pH6.0，pH6.5，pH7.0，pH7.5，pH8.0，pH9.0，pH10.0，pH10.9的缓冲液，每个三角瓶中含有湿菌体12.5g/L，底物DL-乳酸浓度40mM，EDTA浓度14mM，在30℃，转速为150r/min水浴摇床中进行转化、转化8小时取样，取样后立即离心、上清液进行HPLC检测。
表4.不同pH值下浓度转化率
| pH | 4.0 | 4.5 | 5.0 | 5.5 | 6.0 | 6.5 | 7.0 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 9.0 | 9.5 | 10.0 | 10.9 |
| 丙酮酸(mM) | 2 | 12 | 30 | 34 | 38 | 38 | 38 | 35 | 30 | 25 | 24 | 20 | 9 | 1 |
| 转化率(％) | 5 | 30 | 75 | 85 | 95 | 95 | 95 | 87.5 | 75 | 62.5 | 60 | 50 | 22.5 | 2.5 |
表5结果表明：菌体在pH6.0-7.0的溶液中其转化能力基本保持不变，放当pH值高于10.0和低于5.0的溶液中，菌体转化能力明显下降。
实施例5：
(1)湿菌体的制备：
种子培养同实施例1；
菌体培养：
菌体培养基：DL-乳酸钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵6g/L，0.003g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，pH7.0；121℃灭菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或种子液接种，在30℃，150r/min下培养36小时。
将培养液离心(12000r/min)收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用。
(2)丙酮酸制备：
在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L的水溶液，EDTA浓度6mM，在30℃，转速为150r/min水浴摇床中进行转化，8小时取样，取样后立即离心、HPLC检测，转化率为83％。
实施例6：
(1)湿菌体的制备：
种子培养同实施例1；
菌体培养：
菌体培养基：DL-乳酸钠5g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵3g/L，0.003g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，pH7.0；121℃灭菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或种子液接种，在30℃，150r/min下培养36小时。
将培养液离心(12000r/min)收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用。
(2)丙酮酸制备：
在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L的水溶液，EDTA浓度14mM，30℃，150r/min水浴中进行转化，8小时取样，取样后立即离心、HPLC检测，转化率为89％。
实施例7：
(1)湿菌体的制备：
种子培养同实施例1；
菌体培养：
菌体培养基：DL-乳酸钠10g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，氯化铵3g/L，0.005g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，PH＝7.0；121℃灭菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或种子液接种，在30℃，150r/min下培养36小时。
将培养液离心(12000r/min)收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用。
(2)丙酮酸制备：
在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L，EDTA浓度5mM，在28℃，转速为150r/min水浴摇床中进行转化，8小时取样，取样后立即离心、HPLC检测，转化率为82％。
实施例8：
种子培养同实施例1；
菌体培养：
菌体培养基：DL-乳酸钠5g/L，磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，硝酸铵6g/L，0.01g/L MgSO4·7H2O，用蒸馏水配制，pH7.0；121℃灭菌20min，用粘性沙雷氏菌ZJB-07166的斜面或种子液接种，在32℃，150r/min下培养36小时。
将培养液离心(12000r/min)收集菌体，用pH7.0，0.05M磷酸钠缓冲液洗涤两次后，离心收集菌体，冷藏备用。
(2)丙酮酸制备：
在磨口三角瓶中加入10mL水溶液(pH7.0)，其中含底物DL-乳酸浓度40mM，湿菌体浓度12.5g/L，EDTA浓度20mM，在30℃，转速为150r/min水浴摇床中进行转化，8小时取样，取样后立即离心、HPLC检测，转化率为87％。
Claims (9)
1.粘性沙雷氏菌ZJB-07166(Serratia marcescens ZJB-07166)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2007年9月7日，保藏编号CCTCCNo：M207140。
2.如权利要求1所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166在微生物转化DL-乳酸制备丙酮酸中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为，以DL-乳酸为底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体为生物催化剂，在转化体系溶液中，在20-50℃下转化反应6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，分离纯化得到丙酮酸，所述转化体系溶液为蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述底物DL-乳酸的浓度为10mM-140mM。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的湿菌体添加量为2-40g/L。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的应用以粘性沙雷氏菌ZJB-07166进行种子培养和菌体培养，从培养液中离心得到的湿菌体作为生物催化剂，在EDTA存在下，以蒸馏水为转化体系溶液，所述湿菌体添加量为2-40g/L，EDTA浓度为5-20mM，控制转化温度为20-50℃，进行微生物转化反应6-10小时，反应完全得含丙酮酸的转化液，经分离制得丙酮酸。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下步骤制备得到：
(1)种子培养：将粘性沙雷氏菌ZJB-07166接种于斜面培养基在20-30℃的条件下培养24-36小时，获得斜面活化菌种，所述斜面培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白胨1-8g/L，琼脂15g/L-20g/L，溶剂为水，初始pH为6.0-7.5；再将斜面活化菌种接种于种子培养基，在20-35℃，100-200r/min条件下培养24-36小时得种子液，所述种子培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，溶剂为水，初始PH为6.0-7.5；
(2)菌体培养：菌体培养基中按照体积比接入1-5％的种子液，在20-35℃，摇床转速100-200r/min条件下培养24-56小时，将培养液离心、洗涤，收集湿菌体，冷藏备用；所述的菌体培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，0.0001-0.005g/L MgSO4·7H2O，溶剂为蒸馏水，初始PH为6.0-7.5。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的转化体系初始pH为6.5-9.0，在20-40℃摇床150r/min水浴中进行转化。
9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以粘性沙雷氏菌ZJB-07166的湿菌体为生物催化剂，在初始pH为6.5-9.0，底物DL-乳酸浓度为10mM-140mM，湿菌体浓度为2-40g/L，EDTA浓度为6-14mM条件下，在28-32℃，摇床转速50-250r/min震荡，转化6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，再用SD-4型弱碱性离子交换树脂分离纯化得到丙酮酸。
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