CN101181406A - 治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，该质量控制方法是由性状、鉴别、检查和含量测定组成，其中鉴别包括地稔、头花蓼、黄柏、五指毛桃和延胡索的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法对胶囊制剂中没食子酸的含量测定。与现有技术相比，本发明建立了治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，对胶囊制剂的性状、鉴别、检查和含量测定进行了研究和筛选，所采用的质量控制方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制质量妇科炎症的胶囊制剂的质量，确保该制剂的临床疗效。
Description
技术领域
本发明涉及药品的质量控制方法，特别是涉及一种治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法。
背景技术
妇科炎症是指妇女生殖系统感染所引起的疾病。全世界约87％的成年女性不同程度的感染过妇科炎症，临床常见的妇科炎症有阴道炎、宫颈炎、盆腔炎、子宫内膜炎等，往往经久不愈，影响生活质量和夫妻生活，并会导致不孕、诱发肿瘤等，后患无穷。妇科炎症已成为困扰现代女性的一大疾病，据世界卫生组织对中国妇女的调查：我国育龄女性约为1.5～2亿，其中约41％的女性患有不同程度的妇科炎症，已婚女性发病率更高达70％。由于女性生殖器官的特殊性，妇科炎症为成年女性的常见、多发病，其临床表现多种多样，病因复杂且常伴有多种严重并发症，对女性的生活和工作带来了很大影响。随着社会经济和文化的发展以及女性自我保健意识的增强，妇科炎症用药市场近年来增长很快，妇科炎症用药市场的格局也发生了很大变化。较高的发病率使得我国妇科炎症用药的市场稳步增长，年度增幅在10％左右。中成药由于副作用小，适于长期用药，适应了妇科炎症容易复发的特点，临床应用非常广泛。
本发明的发明人在专利申请号为CN2006102003230的专利申请中请求保护了一种治疗妇科炎症的药物及其制备方法，其中胶囊制剂是这样制备的：头花蓼400g、地稔400g、黄柏300g、延胡索50g、当归150g、五指毛桃100g和益母草50g，加水煎煮两次，每次加10倍量水煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至60℃相对密度为1.25的浸膏，减压干燥，粉碎，过80目筛，加入淀粉适量，以75％乙醇制粒，干燥，装入胶囊，每粒装0.25g，制成1000粒。该药物组合主要由地稔、头花蓼、黄柏、当归、五指毛桃、益母草等药味组成，具有清热解毒，除湿止带，散淤止痛的功效。用于妇女带下等症，带下症相当于现代医学的妇女盆腔炎、附件炎、宫颈炎等妇科生殖器官炎症。由于该药物是一种新药，目前还没有有效的质量控制方法。发明人对该药物的胶囊制剂进行了研究，以期探索如何有效控制胶囊制剂的质量，以确保胶囊制剂的临床疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，包括性状、鉴别、检查和含量测定，所制定的质量控制方法能全面有效地控制胶囊制剂的质量，从而确保了胶囊制剂的临床疗效。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别包括地稔、头花蓼、黄柏、五指毛桃和延胡索的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法对胶囊制剂中没食子酸的含量测定。
具体的质量控制方法为：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：以地稔对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂照薄层色谱法鉴别地稔；以头花蓼对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别头花蓼；以黄柏对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别黄柏；以补骨脂素对照品为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂照薄层色谱法鉴别五指毛桃；以延胡索对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以正己烷-氯仿-甲醇为展开剂照薄层色谱法鉴别延胡索；
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：以没事子酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.04％磷酸溶液为流动相照高效液相色谱法测定胶囊制剂中没食子酸的含量。
前述鉴别由以下项组成：
(1)地稔鉴别：取胶囊内容物3g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加20ml水溶解，以醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取地稔对照药材1g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩成稠膏，同供试品溶液制备方法制成地稔对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和地稔对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为17∶2∶2的氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)头花蓼鉴别：取胶囊内容物3g，加丙酮20ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取头花蓼对照药材1g，同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为30∶40∶1的60℃～90℃石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以6％三氯化铁乙醇溶液，放置30～60秒后观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)黄柏鉴别：取胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加1％盐酸20ml溶解，用氨水调PH至9，以氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取黄柏对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶4∶2的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)五指毛桃鉴别：取胶囊内容物2g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸至9～11ml，加水10ml，用氯仿提取4次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶5∶2的正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)延胡索鉴别：取胶囊内容物3g，加80％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用氨水调PH至9，以乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为15∶8∶2的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾溶液，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述胶囊制剂中没食子酸的含量测定方法具体为：
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的甲醇-0.04％磷酸溶液作为流动相，检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备 精密称定装量差异项下胶囊内容物0.4g，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每粒治疗妇科炎症的胶囊制剂中含地稔和头花蓼以没食子酸(C7H605)计，不少于0.20mg。
为了研究治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，发明人进行了大量的实验以筛选最佳方案，具体如下：
一、性状的研究
根据样品的试验结果拟定，三批中试样品均与拟定结果描述一致，列入质量控制方法正文。
二、鉴别方法的研究
2.1处方中地稔的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物3g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加20ml水溶解，以醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液。另取地稔对照药材1g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩成稠膏，同供试品制备方法制成对照药材溶液。再取缺地稔样品3g，同供试品制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为17∶2∶2的氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下在254nm检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，专属性强，故将其收入质量控制方法正文。
2.2处方中头花蓼的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物3g，加丙酮20ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取头花蓼对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺头花蓼样品3g，同供试品制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为30∶40∶1的石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以6％三氯化铁乙醇溶液，放置30～60秒后观察。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。供试品色谱与对照药材色谱对应整齐，斑点分离清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.3处方中黄柏的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加1％盐酸20ml溶解，用氨水调PH至9，以氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺黄柏样品2g，同供试品制备方法制成阴性对照溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶4∶2的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯下在254nm检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.4处方中五指毛桃的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物2g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸至约10ml，加水10ml，用氯仿提取4次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取缺五指毛桃样品2g，同供试品制备方法制成阴性对照溶液。再取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶5∶2的正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下在254nm检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
2.5处方中延胡索的薄层色谱鉴别
取胶囊内容物3g，加80％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用氨水调PH至9，以乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺延胡索样品2g，同供试品制备方法制成阴性对照溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为15∶8∶2的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。主斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量控制方法正文。
三、检查项的研究
3.1崩解时限
按《中国药典》2005年版一部“附录XII A崩解时限检查法”测定，规定本品应在30分钟内全部崩解，本品三批检测结果见表1，均符合规定。
3.2水分检查
按《中国药典》2005年版一部“附录IX H水分测定法第一法”测定，测定结果见表1，3批样品均符合规定。
3.3装量差异检查
依据《中国药典》2005年版一部“附录I L胶囊剂”项下进行检查，结果见表1，3批样品均符合规定。
3.4重金属检查
照《中国药典》2005年版一部附录IX E重金属检查法第二法操作。
3.4.1标准铅溶液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置1000ml容量瓶中，加硝酸5ml，水50ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，即得标准铅贮备液。
临用时，精密量取前贮备液10ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10ug的铅)。
3.4.2供试品溶液的制备 精密称取本品内容物1g，置坩锅中，电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸1ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽，加硝酸0.5ml，蒸干，放冷，马弗炉中500～600℃炽灼使完全灰化，放冷加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至酚酞指示剂显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释成25ml。
3.4.3阳性对照液的制备 将配制供试品溶液的试剂，置另一坩锅中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加入标准铅溶液1ml，再加水稀释成25ml。
3.4.4空白对照液的制备 将配制供试品溶液的试剂，置另一坩锅中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，再加水稀释成25ml。
3.4.5比色 供试品溶液、阳性对照液和空白对照液的3支纳氏比色管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试品液显出的颜色与阳性对照液比较，颜色更浅，空白对照无干扰。结果见表1。
结果表明，3批样品重金属含量均小于10ppm，故未列入正文。
3.5砷盐检查
照《中国药典》2005年版一部附录IXF砷盐检查法第一法操作。
3.5.1标准砷溶液的制备 称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于1μg的As)。
3.5.2供试品溶液的制备 精密称取本品内容物1g，置坩埚中，加入氢氧化钙0.5g，混匀，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼，(注意不使内容物溅出)至烟雾除尽，移入马弗炉中在500～600℃炽灼至灰化，放冷，加盐酸5ml和水23ml，水浴上加热溶解，作为供试品溶液。
3.5.3阳性对照液的制备 精密量取标准砷溶液2ml，置坩锅中，同3.5.2方法制得阳性对照液。
3.5.4空白对照液的制备 另取坩锅一只，加入氢氧化钙0.5g，同供试品溶液的制备方法制得空白对照液。
3.5.5砷斑的制备 将供试品溶液、阳性对照液、空白对照液分别移至测砷瓶中，再分别加碘化钾试液5ml，酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，30℃水浴中反应45分钟，取出溴化汞试纸，观察砷斑颜色，结果供试品溶液砷斑浅于标准砷斑颜色。结果见表1。
结果表明，3批样品砷盐含量均小于2ppm，故未列入正文。
表1 三批样品检查结果表
| 样品批号 | 2005001 | 2005002 | 2005003 |
| 崩解时间(min) | 18 | 18 | 19 |
| 装量差异 | 符合规定 | 符合规定 | 符合规定 |
| 水分(％) | 2.0 | 1.9 | 2.0 |
| 重金属(ppm) | ＜10 | ＜10 | ＜10 |
| 砷盐(ppm) | ＜2 | ＜2 | ＜2 |
3.6微生物检查方法验证
实验材料：生化培养箱、立式压力蒸汽消毒器、双筒实目显微镜。阳性对照菌及常规微生物检验用化学试剂和玻璃仪器等。
营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、曙红亚甲蓝琼脂、胆盐乳糖增菌培养基、胆盐乳糖发酵培养基(以上均为中国北京三科科技开发公司生产，按CP05版规定配制及灭菌)、四-甲基伞形酮葡萄糖苷酸(中国北京牛牛基因技术有限公司)；
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]，以上菌种均来源于贵州省药品检验所。
供试液制备：按规定取胶囊内容物，充分摇匀后混合，取胶囊内容物10g，加入pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，即为1∶10供试液。
验证结果见表2至表5。
表2 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证回收试验记录
回收率＝(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数×100％
表3 采用培养基稀释法0.2mL/皿
表4 控制菌检查方法验证记录(大肠埃希菌)
表5 控制菌检查方法验证记录(大肠菌群)
由验证试验可知，本品可采用常规法进行霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群检验，用培养基稀释法(0.2mL/皿)对细菌进行检验。按验证方法对本品的三批样品微生物限度进行了检查，结果均符合规定。
结论：由以上实验可知，可采用常规方法对胶囊制剂进行检查项下的各项检查。
四、胶囊制剂中没食子酸含量测定的研究
本品中主药地稔和头花蓼均含有没食子酸，现代研究表明，没食子酸具有收敛、抗炎的药理作用，因此，它是地稔和头花蓼的有效成分，本品采用高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定了其含量，测定方法参照药材地稔和头花蓼中没食子酸测定方法进行。
4.1仪器与试药 高效液相色谱仪：SeriesIII泵(美国)，Mode500紫外检测器(美国)；TG332A(十万分之一)天平(上海)；甲醇(色谱纯，天津大茂)；水(重蒸馏，临用前制备)，磷酸(分析纯，天津大茂)，没食子酸(中检所，批号：110831-200302)。样品三批(批号：2005001、2005002、2005003)。
4.2色谱条件DiamonsilC18柱(5μm)，流动相：甲醇-0.04％磷酸溶液(4∶96)，波长274nm，流速：1ml/min，柱温：35℃。
4.3系统适用性试验 分别取没食子酸对照品溶液、供试品溶液及缺地稔和头花蓼的双阴性对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可知，在此色谱条件下，没食子酸峰与其他组分峰分离完全，在与没食子酸峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰。
4.4供试品溶液的制备
本试验对供试品处理方法作了以下考察：
4.4.1提取方法选择
方法1：取本品内容物，置回流瓶中，以4mol/L盐酸溶液为提取溶剂，以回流提取为处理方法，考察了不同提取时间内容物没食子酸含量。结果见表6。
表6 提取方法1考察结果
| 提取时间(小时) | 2 | 3 | 4 |
| 含量(mg/g) | 0.87 | 1.18 | 1.13 |
方法2：取本品内容物，以50％甲醇为提取溶剂，以超声为处理方法，考察了不同提取时间内容物没食子酸含量。结果见表7。
表7 提取方法2考察结果
| 提取时间(分钟) | 30 | 45 | 60 |
| 含量(mg/g) | 1.06 | 1.25 | 1.25 |
试验结果表明，本品采用50％甲醇超声提取效率高、耗时短、操作简便，且供试品溶液不含酸，能有效保护色谱柱，可采用其为本品供试品处理方法，根据不同提取时间考察结果，确定超声时间为45分钟。
4.4.2提取溶剂比较
取本品内容物，分别以水、50％甲醇、乙醇50ml和4mol/l盐酸溶液为溶剂，超声提取30分钟，过滤，滤液经微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，测定没食子酸含量，结果溶剂水和50％甲醇的提取效率相当，而乙醇的提取效率较低，由于以水为溶剂制备的供试品较以甲醇为溶剂制备的供试品颜色深，考虑到对色谱柱的保护，我们选择50％甲醇为样品提取溶剂，结果见表8。
表8 提取溶剂考察结果
| 提取溶剂 | 水 | 乙醇 | 50％甲醇 | 4mol/l盐酸溶液 |
| 含量(mg/g) | 1.07 | 0.165 | 1.34 | 无法过滤 |
试验结果表明，本品还是采用50％甲醇作为提取溶剂较为合适。
4.5线性关系考察 精密称取没食子酸对照品15.50mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得0.0124mg/ml的没食子酸对照品溶液，分别精密吸取没食子酸对照品溶液2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，测定结果见表9，并以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积值Y(mv.s)为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，没食子酸在0.031～0.248μg范围内线性关系良好。
表9 没食子酸线性关系考察
将回归方程拟合为过原点的方程得：y＝1772238x。
取线性关系考察中最低点进样量(0.031μg)分别代入上述两个方程，计算得两者相对偏差为0.07％，说明本品可用外标一点法进行含量测定。
4.6精密度试验 精密吸取没食子酸对照品溶液10μl(浓度为0.0124mg/ml)，重复进样5次，测定没食子酸峰面积积分值，求出相对标准偏差，结果表明精密度良好，结果见表10。
表10 精密度实验结果
4.7稳定性试验 取一供试品(批号：2005001)，按质量质量控制方法正文中供试品溶液的制备方法制备供试液。在室温下每隔一段时间进样10μl，测定没食子酸峰面积值，求相对标准偏差，结果表明，没食子酸在12小时内基本稳定(RSD＝0.43％)，结果见表11。
表11 稳定性试验结果
4.8重复性试验 精密取本品(批号：2005001)各0.4g，共5份，按质量质量控制方法正文中供试品溶液的制备方法制备供试液。精密吸取供试品溶液各10μl，测定没食子酸峰面积积分值，计算含量，求相对标准偏差，结果表明，重复性良好(RSD＝1.04％)。见表12。
表12 重复性试验结果
4.9中间精密度 取同一批样品(批号：2005001)，分两组由不同操作人员在不同设备上对本品进行含量测定，结果表明，中间精密度良好(RSD＝1.4％)。结果见表13。
A组：LC-2010A高效液相色谱仪；B组：SSI高效液相色谱仪。
表13 中间精密度试验结果
4.10回收率试验 采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品(批号：2005001)6份，精密称取各约0.25g，精密加入没食子酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10μl，照上述色谱条件测定，记录色谱图，计算含量，结果表明，没食子酸的回收率良好，结果见表14。
表14 加样回收试验结果
4.11样品测定 取3批中试样品，按质量控制方法正文测定其中没食子酸含量(结果见表15)。按下式计算含量：
式中：A样-供试品没食子酸峰面积积分值
A对-没食子酸对照品峰面积积分值
C对-没食子酸对照品浓度(mg/ml)
M样-供试品取样量(g)
M装量-平均装量(g)
50-供试品稀释体积(ml)
表15 3批样品中没食子酸的含测结果
样品中含量限规定：本品处方中地稔和头花蓼共800g，两者没食子酸含量限均为0.10％，由中试结果可知，本品在生产过程中没食子酸转移率均不低于30％，按下式计算本品每粒胶囊没食子酸含量限：
含量限(mg/粒)＝药材量×药材含量限×转移率/制成量
即：含量限(mg/粒)＝800g×0.1％×30％/1000粒＝0.24mg/粒
考虑到生产和贮存过程对药品的影响，我们规定本品每粒含地稔和头花蓼以没食子酸计，不得少于0.20mg。
五、质量控制方法中所用到的标准物质
没食子酸对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110831-200302，供含量测定用。
盐酸小檗碱对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208，供含量测定用。
补骨脂素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110739-200310，供含量测定用。
延胡索乙素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：110726-200208，供含量测定用。
地稔对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：121239-200401，供鉴别用。
头花蓼对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：121282-200402，供鉴别用。
黄柏对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：120937-200305，供鉴别用。
延胡索对照药材：购于中国药品生物制品检定所，批号：120928-0301，供鉴别用。
与现有技术相比，本发明建立了治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，对胶囊制剂的性状、鉴别、检查和含量测定进行了研究和筛选，所采用的质量控制方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制质量妇科炎症的胶囊制剂的质量，确保该制剂的临床疗效。
具体实施方式
本发明的优选实施方式：
治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法如下：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：(1)地稔鉴别：取胶囊内容物3g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加20ml水溶解，以醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取地稔对照药材1g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩成稠膏，同供试品溶液制备方法制成地稔对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液和地稔对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为17∶2∶2的氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)头花蓼鉴别：取胶囊内容物3g，加丙酮20ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取头花蓼对照药材1g，同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为30∶40∶1的60℃～90℃石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以6％三氯化铁乙醇溶液，放置30～60秒后观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)黄柏鉴别：取胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加1％盐酸20ml溶解，用氨水调PH至9，以氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取黄柏对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶4∶2的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)五指毛桃鉴别：取胶囊内容物2g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸至9～11ml，加水10ml，用氯仿提取4次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶5∶2的正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)延胡索鉴别：取胶囊内容物3g，加80％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用氨水调PH至9，以乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为15∶8∶2的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾溶液，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定胶囊制剂中没食子酸的含量：
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的甲醇-0.04％磷酸溶液作为流动相，检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备 精密称定装量差异项下胶囊内容物0.4g，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每粒胶囊含地稔和头花蓼以没食子酸(C7H6O5)计，不少于0.20mg。
功能主治：清热解毒，除湿止带，散瘀止痛。用于湿热蕴结所致的盆腔炎、附件炎、宫颈炎、阴道炎及泌尿系感染。症见赤白带下，阴部瘙痒，下腹疼痛等。
用法用量：口服。一次3粒，一日3次。
规格：每粒装0.25g
注意事项：孕妇忌服。本品处方中地稔、头花蓼、当归、延胡索和益母草皆有活血功效，因此规定本品孕妇忌服。
贮藏：密封，防潮。因本品为中药提取浸膏，容易吸潮变质，故需密封。
Claims (5)
1.一种治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，这种胶囊这样制备：头花蓼400g、地稔400g、黄柏300g、延胡索50g、当归150g、五指毛桃100g和益母草50g，加水煎煮两次，每次加10倍量水煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至60℃相对密度为1.25的浸膏，减压干燥，粉碎，过80目筛，加入淀粉适量，以75％乙醇制粒，干燥，装入胶囊，每粒装0.25g，制成1000粒；其特征在于：质量控制方法由性状、鉴别、检查和含量测定组成，其中鉴别是对地稔、头花蓼、黄柏、五指毛桃和延胡索的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法对胶囊制剂中没食子酸的含量测定。
2.按照权利要求1所述的治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕褐色颗粒及粉末，气微，味苦、微涩；
鉴别：以地稔对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂照薄层色谱法鉴别地稔；以头花蓼对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以石油醚-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别头花蓼；以黄柏对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂照薄层色谱法鉴别黄柏；以补骨脂素对照品为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂照薄层色谱法鉴别五指毛桃；以延胡索对照药材为对照、以羧甲基纤维素钠为黏合剂、以正己烷-氯仿-甲醇为展开剂照薄层色谱法鉴别延胡索；
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定；
含量测定：以没食子酸对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.04％磷酸溶液为流动相照高效液相色谱法测定胶囊制剂中没食子酸的含量。
3.按照权利要求1或2所述的治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：所述鉴别由以下项组成：
(1)地稔鉴别：取胶囊内容物3g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加20ml水溶解，以醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取地稔对照药材1g，加水煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩成稠膏，同供试品溶液制备方法制成地稔对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和地稔对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为17∶2∶2的氯仿-甲醇-水的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)头花蓼鉴别：取胶囊内容物3g，加丙酮20ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取头花蓼对照药材1g，同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为30∶40∶1的60℃～90℃石油醚醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以6％三氯化铁乙醇溶液，放置30～60秒后观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)黄柏鉴别：取胶囊内容物2g，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加1％盐酸20ml溶解，用氨水调PH至9，以氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，制得供试品溶液；另取黄柏对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶4∶2的氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)五指毛桃鉴别：取胶囊内容物2g，加70％乙醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸至9～11ml，加水10ml，用氯仿提取4次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5∶5∶2的正己烷-甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)延胡索鉴别：取胶囊内容物3g，加80％乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用氨水调PH至9，以乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，制得供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，制得对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为15∶8∶2的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾溶液，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.按照权利要求1或2所述的治疗妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：所述胶囊制剂中没食子酸的含量测定为：
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为4∶96的甲醇-0.04％磷酸溶液作为流动相，检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，制得对照品溶液；
供试品溶液的制备 精密称定装量差异项下胶囊内容物0.4g，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.按照权利要求1、2或4所述的质量妇科炎症的胶囊制剂的质量控制方法，其特征在于：每粒胶囊含地稔和头花蓼以没食子酸(C7H6O5)计，不少于0.20mg。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080521 |