CN101181312B - 一种红松松塔提取物的制备方法 - Google Patents

一种红松松塔提取物的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101181312B
CN101181312B CN2007101446912A CN200710144691A CN101181312B CN 101181312 B CN101181312 B CN 101181312B CN 2007101446912 A CN2007101446912 A CN 2007101446912A CN 200710144691 A CN200710144691 A CN 200710144691A CN 101181312 B CN101181312 B CN 101181312B
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
korean pine
extract according
pinecone extract
adsorptive resins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2007101446912A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101181312A (zh
Inventor
杨宝峰
陈秀杰
朱文良
李霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harbin Engineering University
Harbin Medical University
Original Assignee
Harbin Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harbin Medical University filed Critical Harbin Medical University
Priority to CN2007101446912A priority Critical patent/CN101181312B/zh
Publication of CN101181312A publication Critical patent/CN101181312A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101181312B publication Critical patent/CN101181312B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

一种红松松塔提取物的制备方法，它涉及一种松塔提取物的制备方法。它解决了目前红松松塔提取物制备、提取过程中使用氯仿，严重存在安全隐患的问题。制备方法如下：一、粉碎红松松塔，然后用水加热回流提取；二、保持提取液温度过滤，再将滤液上样于大孔吸附树脂柱；三、用水洗柱，然后再用乙醇溶液洗脱；四、减压浓缩乙醇洗脱液，将乙醇回收后的剩余物经喷雾干燥即得。本发明红松松塔提取物的制备方法中不使用氯仿，避免了严重的安全隐患。本发明方法红松松塔提取物的提取率为8.08％～11.5％。本发明方法红松松塔提取物具有增强自然杀伤细胞伤活性，提高机体固有免疫力的作用；还具有体外抑制肿瘤细胞生长的作用。

Description

一种红松松塔提取物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种松塔提取物的制备方法。
背景技术
白松松塔作为一种中药，可用于镇咳，祛痰，消炎，平喘。治慢性气管炎，咳嗽、气短，吐白沫痰。日本学者Tanaka将其研究的提取方法申报美国专利(专利号6703053)，其白松有效成分提取方法简单来说是采用热水提取，并通过改变提取液pH值以得到有效成分酸性多糖。但是提取液的pH值不易控制，容易造成提取物中活性成分的丢失，从而影响提取率，导致白松松塔的提取率只有4％～5％。
红松(Pinus koraiensis)系松科(Pinaceae)松属植物，材质优良、纹理通直，抗压性强是优质的木材，作为高附加值经济树种作被大面积栽种。虽然红松松塔没有被列入药典，但红松松塔提取物的药用价值已被公众慢慢所知，如中国发明专利“一种红松松塔提取物及其应用和提取方法”(专利申请号200710072149.0，公开日为2007年11月07日)和中国发明专利“红松松塔提取物的提取方法”(专利申请号200710071752.7，公开日为2007年8月15日)。尽管现有技术红松松塔的提取率较高，但在硅胶柱洗脱的过程中都使用有毒的有机溶媒氯仿。氯仿属于三类致癌物质，在动物实验中已被证实，而且氯仿也是心脏血管抑制剂，对肝脏、肾脏也有毒性，可能造成肝脏的肿大和坏死，同时对中枢神经系统会产生抑制作用。因此在药物的制备过程中使用氯仿，严重存在安全隐患。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前红松松塔提取物制备、提取过程中使用氯仿，严重存在安全隐患的问题，而提供的一种红松松塔提取物的制备方法。
红松松塔提取物按以下方法制备：一、将红松松塔粉碎成小于20目的颗粒，然后用水加热回流提取1小时；二、保持提取液温度过滤，再将滤液上样于大孔吸附树脂柱；三、用大孔吸附树脂柱体积4～6倍的、温度为20～30℃的水洗柱，然后再用质量浓度为40％的乙醇溶液洗脱；四、减压浓缩乙醇洗脱液，将乙醇回收后的剩余物经喷雾干燥即得红松松塔提取物。
本发明红松松塔提取物的制备方法中不使用氯仿，避免了严重的安全隐患。
本发明方法红松松塔提取物的提取率为8.08％～11.5％。本发明方法红松松塔提取物可增强NK细胞杀伤活性，提高机体固有免疫力。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式红松松塔提取物按以下方法制备：一、将红松松塔粉碎成小于20目的颗粒，然后用水加热回流提取1小时；二、保持提取液温度过滤，再将滤液上样于大孔吸附树脂柱；三、用大孔吸附树脂柱体积4～6倍的、温度为20～30℃的水洗柱，然后再用质量浓度为40％的乙醇溶液洗脱；四、减压浓缩乙醇洗脱液，将乙醇回收后的剩余物经喷雾干燥即得红松松塔提取物。
本实施方式步骤三中的大孔吸附树脂柱水洗液可弃去不要，也可回收再次提取。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中加热回流的温度为100～110℃。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中加热回流提取的用水量为红松松塔质量的12～16倍。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中加热回流提取的用水量为红松松塔质量的14倍。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二中大孔吸附树脂柱为AB-8型大孔吸附树脂柱。其它步骤及参数与实施方式一相同。
本实施方式用AB-8型大孔吸附树脂填装。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中用大孔吸附树脂柱体积5倍的、温度为25℃的水洗柱。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将红松松塔粉碎成200目的颗粒。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中将红松松塔粉碎成500目的颗粒。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二中上样速度为0.5～1倍柱床体积(bed volume，BV)/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二中上样速度为0.6～0.8倍柱床体积(bed volume，BV)/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤二中选用10cm×200cm的层析柱，装柱后大孔吸附树脂柱的径高比大于、等于1∶12。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中水的洗脱速度为1～1.5倍柱床体积/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中水的洗脱速度为1.2～1.4倍柱床体积/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中乙醇的洗脱速度为0.5～1倍柱床体积/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤三中乙醇的洗脱速度为0.6～0.8倍柱床体积/h。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤四中减压浓缩乙醇洗脱液的温度为30～40℃。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤四中减压浓缩乙醇洗脱液的温度为35℃。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤四中喷雾干燥的进风温度为130℃，出风温度为70℃，转速为40Hz，进料速度为10mL/min。其它步骤及参数与实施方式一相同。
具体实施方式十九：本实施方式红松松塔提取物按以下方法制备：一、将红松松塔粉碎成100目的颗粒，然后用质量为红松松塔质量的14倍、100～110℃的水加热回流提取1小时；二、保持提取液100～110℃过滤，再将滤液上样于AB-8型大孔吸附树脂柱；三、用大孔吸附树脂柱体积5倍的、温度为25℃的水洗柱，然后再用质量浓度为40％的乙醇溶液洗脱；四、减压浓缩乙醇洗脱液，将乙醇回收后的剩余物经喷雾干燥即得。
本实施方式得到的水洗部分为黄色粘稠状固体，质量占原料(红松松塔)质量的16.2％。本实施方式得到的醇洗部分为棕黄色固体粉末，质量占原料(红松松塔)质量的11.0％。
对比试验：
第一组采用生理盐水，第二组采用本实施方式步骤三中的大孔吸附树脂柱水洗液，第三组采用红松松塔总水提物，第四组采用本实施方式制备的红松松塔提取物。用4组成分的不同浓度分别给昆明小鼠灌胃，每组每个浓度10只实验鼠，连续灌胃15天，然后对各实验组实验鼠的NK细胞的活性进行测定(乳酸脱氢酶释放法)，NK细胞活性计算公式如下：
Figure G2007101446912D00041
试验结果如表1所示。
表1
Figure G2007101446912D00042
注：自然释放孔A值＝0.377，最大释放孔A值＝0.595。
自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)是与T、B细胞并列的第三类群淋巴细胞。NK细胞可非特异直接杀伤靶细胞，这种天然杀伤活性既不需要预先由抗原致敏，也不需要抗体参与，且无MHC限制。NK细胞杀伤的靶细胞主要是肿瘤细胞、病毒感染细胞、较大的病原体(如真菌和寄生虫)、同种异体移植的器官、组织等。NK细胞的活性体现了机体的固有免疫力。
本实验测定结果表明本实施方式红松松塔总提取物和红松松塔提取物可明显增强小鼠NK细胞杀伤活性，可增强小鼠固有的免疫力，其中红松松塔提取物的活性最为明显，而水洗物活性不明显。
以空白样为对照组，用不同浓度的红松松塔提取物分别对对数生长期的人结肠癌细胞HCT-8、人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞BGC-823、人肺癌细胞A549和人卵巢癌细胞HELA进行体外活性实验(MTT法，
Figure G2007101446912D00051
Figure G2007101446912D00052
以提取物的不同浓度对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出药物的半数抑制浓度(IC50)，如表2所示。
表2
Figure G2007101446912D00053
当IC50值小于50μg/mL则认为该受试药物具有细胞毒性，本实验测定结果表明红松松塔提取物具有抑制人结肠癌细胞HCT-8、人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞BGC-823、人肺癌细胞A549和人卵巢癌细胞HELA的活性，其中对人结肠癌细胞HCT-8的抑制活性最为明显。

Claims (9)

1.一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于红松松塔提取物按以下方法制备：一、将红松松塔粉碎成小于20目的颗粒，然后用水加热回流提取1小时；二、保持提取液温度过滤，再将滤液上样于大孔吸附树脂柱；三、用大孔吸附树脂柱体积4～6倍的、温度为20～30℃的水洗柱，然后再用质量浓度为40％的乙醇溶液洗脱；四、减压浓缩乙醇洗脱液，将乙醇回收后的剩余物经喷雾干燥即得红松松塔提取物。
2.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤一中加热回流的温度为100～110℃。
3.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤一中加热回流提取的用水量为红松松塔质量的12～16倍。
4.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤二中大孔吸附树脂柱为AB-8型大孔吸附树脂柱。
5.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤二中选用10cm×200cm的层析柱，装柱后大孔吸附树脂柱的径高比大于、等于1∶12。
6.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤三中用大孔吸附树脂柱体积5倍的、温度为25℃的水洗柱。
7.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤二中上样速度为0.5～1倍柱床体积/h。
8.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤三中水的洗脱速度为1～1.5倍柱床体积/h。
9.根据权利要求1所述的一种红松松塔提取物的制备方法，其特征在于步骤三中乙醇的洗脱速度为0.5～1倍柱床体积/h。
CN2007101446912A 2007-11-28 2007-11-28 一种红松松塔提取物的制备方法 Active CN101181312B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2007101446912A CN101181312B (zh) 2007-11-28 2007-11-28 一种红松松塔提取物的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2007101446912A CN101181312B (zh) 2007-11-28 2007-11-28 一种红松松塔提取物的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101181312A CN101181312A (zh) 2008-05-21
CN101181312B true CN101181312B (zh) 2010-06-02

Family

ID=39446823

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2007101446912A Active CN101181312B (zh) 2007-11-28 2007-11-28 一种红松松塔提取物的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101181312B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102674910A (zh) * 2012-05-03 2012-09-19 潍坊太乙生物科技有限公司 一种用于农作物有机种植的生物肥料及其制备方法
CN104223072B (zh) * 2014-09-16 2015-12-09 吴世有 松塔营养口服液及其制备方法
CN105663179B (zh) * 2016-01-22 2019-04-30 江苏中兴药业有限公司 一种提高松塔清膏溶化性的生产方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015572A (zh) * 2007-02-07 2007-08-15 哈尔滨工业大学 红松松塔提取物的提取方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015572A (zh) * 2007-02-07 2007-08-15 哈尔滨工业大学 红松松塔提取物的提取方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨鑫,丁怡,张东明,张志浩.华山松松塔化学成分的研究.中国中药杂志30 7.2005,30(7),518-520.
杨鑫,丁怡,张东明,张志浩.华山松松塔化学成分的研究.中国中药杂志30 7.2005,30(7),518-520. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN101181312A (zh) 2008-05-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103073651B (zh) 一种灵芝多糖的提取方法及应用
CN104861015A (zh) 一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法
CN103432193A (zh) 一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法
CN102453075A (zh) 一种甘草酸的分离纯化工艺
CN101647828B (zh) 一种用离子交换树脂分离中药总生物碱的方法
CN102746362A (zh) 从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法
CN102078339B (zh) 一种富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法
CN102850419A (zh) 一种从蛹虫草提取虫草素和多糖的方法
CN101240005A (zh) 一种从桔梗中制备桔梗皂苷d的方法及其在抗癌药物中的应用
CN105267275A (zh) 一种菊花中黄酮的提取方法
CN101181312B (zh) 一种红松松塔提取物的制备方法
WO2012061984A1 (zh) 制备芍药内酯苷和芍药苷的方法
CN108117575A (zh) 一种从蛹虫草中连续提取虫草素和虫草多糖的提取方法
CN101396373B (zh) 一种华蟾素提取物及其制备方法
CN104784252A (zh) 苦参总生物碱提取物的制备方法及其应用
CN104922177A (zh) 一种蒲公英总生物碱的制备方法
CN108546304A (zh) 一种利用陈皮制备聚阿拉伯半乳糖醛酸的方法
CN104262448B (zh) 一种从甘草中提取甘草酸的方法
CN106674086A (zh) 一种哌啶酮类生物碱化合物及其制备方法和应用
CN108645944B (zh) 一种金银花总黄酮提取过程中的质量评价方法
CN101732391B (zh) 一种富集纯化桂竹糖芥中强心甙的方法
CN102138957A (zh) 药西瓜提取物及其生产方法和应用
CN101264442A (zh) 含极性基团的吸附树脂制备方法及该树脂在延胡索总生物碱纯化中的应用
CN100364569C (zh) 一种无花果果渣中抗癌活性部位的提取分离方法
CN105193871A (zh) 一种从银杏叶中加压提取黄酮的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Medical University Pharmaceutical Co.,Ltd.

Assignor: Harbin Medical University

Contract record no.: 2011230000169

Denomination of invention: Method for preparing korean pine cone extract

Granted publication date: 20100602

License type: Exclusive License

Open date: 20080521

Record date: 20110815