CN101015572A - 红松松塔提取物的提取方法 - Google Patents

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杨鑫
张华�
张英春
王静
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Abstract

红松松塔提取物的提取方法，它涉及一种松塔提取物的提取方法。它解决了目前红松松塔被人弃而不用或仅作为薪柴、工艺品利用，利用率和附加值低的问题。提取方法：(一)乙醇回流提取；(二)减压浓缩；(三)用无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液加入硅胶中搅拌均匀；(四)装柱；(五)洗脱，即得到红松松塔提取物。本发明采用有机溶剂作为提取剂，提取率高，占原料(红松松塔)质量的16.8％～17.5％。本发明提取方法简单易行，工艺难度低，便于操作，提取过程中所用溶剂和硅胶对提取物无影响，不会造成有效成分失活。本发明得到的红松松塔提取物有抑制肿瘤生长和消炎的作用。将红松松塔提取物制成药品，其利用率和附加值得到了显著的提高。

Description

红松松塔提取物的提取方法
技术领域
本发明涉及一种松塔提取物的提取方法。
背景技术
白松塔(白松松塔)作为一种中药具有镇咳，祛痰，消炎，平喘；治疗慢性气管炎，咳嗽，气短，吐白沫痰的作用。目前采用热水提取法提取白松松塔，其水提取物主要是酸性多糖，活性随酸性的增强而增大，具有延长感染腹水肿瘤细胞小鼠存活时间、降低小鼠乳汁中鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)含量和有效防止乳汁中鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)含量的增加的作用；而且在白松塔碱性水溶液中还能提取具有抗艾滋病病毒(HIV)活性的高分子量活性组分。但是白松塔水提取过程中溶液的pH值对提取物有效成分的活性影响大，导致白松塔水提取物中部分有效成分的失活，而且白松塔水提取的提取物少，仅占原料(白松松塔)质量的4％～5％。
红松材质优良、纹理通直，抗压力强是优质的木材，作为高附加值经济作被大面积栽种。因为红松松塔没有可以入药的记载，所以红松松塔往往被人弃而不用或仅作为薪柴、工艺品利用，存在利用率和附加值低的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前红松松塔被人弃而不用或仅作为薪柴、工艺品利用，利用率和附加值低的问题，而提供的一种红松松塔提取物的提取方法。红松松塔提取物按以下步骤进行：(一)将红松松塔粉碎成150～840μm的颗粒，然后用浓度为95％的乙醇回流提取3～4次，每次回流提取2±0.1h，每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的5～10倍；(二)合并提取液，减压浓缩得到浸膏；(三)用浸膏体积3～5倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分批次加入浸膏质量2.5～3.5倍的硅胶中搅拌均匀，并在60±2℃的条件下干燥；(四)装柱；(五)洗脱，即得到红松松塔提取物。
本发明采用有机溶剂作为提取剂，提取率高，提取物占原料(红松松塔)质量的16.8％～17.5％。本发明提取方法简单易行，工艺难度低，便于操作，提取过程中所用溶剂和硅胶对提取物无影响，不会造成有效成分失活。本发明得到的红松松塔提取物有抑制肿瘤生长和消炎的作用。将红松松塔提取物制成药品，其利用率和附加值得到了显著的提高。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式红松松塔提取物按以下步骤进行：(一)将红松松塔粉碎成150～840μm的颗粒，然后用浓度为95％的乙醇回流提取3～4次，每次回流提取2±0.1h，每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的5～10倍；(二)合并提取液，减压浓缩得到浸膏；(三)用浸膏体积3～5倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分批次加入浸膏质量2.5～3.5倍的硅胶中搅拌均匀，并在60±2℃的条件下干燥；(四)装柱；(五)洗脱，即得到红松松塔提取物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(一)中每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的6～8倍。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(一)中每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的7倍。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(一)中将红松松塔粉碎成178～297μm的颗粒。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(一)中将红松松塔粉碎成840μm的颗粒。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(一)中乙醇回流提取3次，每次回流提取2h。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(二)中合并的提取液在400～500Pa、60～80℃的条件下浓缩。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(二)中合并的提取液在450Pa、70℃的条件下浓缩。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)用浸膏体积3.5～4.5倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分3～5次加入浸膏质量2.6～3.4倍的硅胶中搅拌均匀，并在60℃的条件下干燥。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)用浸膏体积4倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分4次加入浸膏质量3倍的硅胶中搅拌均匀，并在60℃的条件下干燥。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)中待每一批次的浸膏醇溶液加入硅胶中搅拌均匀并在60℃条件下干燥后再加入下一批次的浸膏醇溶液。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)中的填料硅胶为74～150μm。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)中的填料硅胶为89～124μm。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(三)中的填料硅胶为104μm。其它步骤及所选参数与实施方式一相同。
具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(四)中选用10cm×120cm(内径×长度)的层析柱，先在层析柱中装填12～17cm高的空白硅胶，再装填高度为100～105cm的浸膏硅胶，然后再装填3cm高的空白硅胶并覆盖一层厚度为0.5～2cm的脱脂棉。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(四)中选用10cm×120cm(内径×长度)的层析柱，先在层析柱中装填15cm高的空白硅胶，再装填高度为102cm的浸膏硅胶，然后再装填3cm高的空白硅胶并覆盖一层厚度为1～1.5cm的脱脂棉。其它步骤与实施方式一相同。
具体实施方式十七：本实施方式与具体实施方式十五或十六的不同点是：步骤(四)中的填料空白硅胶为74～150μm。其它步骤及所选参数与实施方式十五或十六相同。
具体实施方式十八：本实施方式与具体实施方式十五或十六的不同点是：步骤(四)中的填料空白硅胶为100μm。其它步骤及所选参数与实施方式十五或十六相同。
具体实施方式十九：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤(五)依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮洗脱层析柱，洗脱剂流速为8～10mL/min。其它步骤与实施方式一相同。
本实施方式分别将洗脱液中的洗脱剂挥发除去，即得到红松松塔提取物。本实施方式根据不同的洗脱剂将红松松塔提取物分为红松松塔提取石油醚洗脱物、红松松塔提取氯仿洗脱物、红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物和红松松塔提取丙酮洗脱物；本实施方式提取物可单独使用，也可以多种组合使用。
本实施方式洗脱时间由洗脱液中是否含有提取成分而定(即当洗脱液与洗脱剂的颜色完全相同时，证明提取成分已全部被洗脱出来，就可以停止该洗脱剂的洗脱)。
具体实施方式二十：本实施方式红松松塔提取物按以下步骤进行：(一)将红松松塔粉碎成840μm的颗粒，然后用浓度为95％的乙醇回流提取3次，每次回流提取2h，每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的7倍；(二)合并提取液，减压浓缩得到浸膏；(三)用浸膏体积3倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分批次加入浸膏质量3倍的硅胶中搅拌均匀，并在60℃的条件下干燥；(四)装柱：选用10cm×120cm(内径×长度)的层析柱，先在层析柱中装填15cm高的空白硅胶，再装填高度为102cm的浸膏硅胶，然后再装填3cm高的空白硅胶并覆盖一层厚度为1～1.5cm的脱脂棉；(五)洗脱：依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮洗脱层析柱，洗脱剂流速为8～10mL/min，然后再分别将洗脱剂挥发除去，即得到红松松塔提取物。
本实施方式得到的红松松塔提取石油醚洗脱物为淡黄色油状液体，质量占原料(红松松塔)质量的0.0933％。本实施方式得到的红松松塔提取氯仿洗脱物为棕绿色浸膏，质量占原料(红松松塔)质量的8.02％。本实施方式得到的红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物为棕绿色浸膏，质量占原料(红松松塔)质量的7.83％。本实施方式得到的红松松塔提取丙酮洗脱物为棕绿色浸膏，质量占原料(红松松塔)质量的0.973％。
以空白样为对照组，用不同浓度的红松松塔提取氯仿洗脱物(第1给药组)、红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物(第2给药组)、红松松塔提取丙酮洗脱物(第3给药组)和白松塔水提取物(第4给药组)分别对对数期的人结肠癌细胞HCT-8，人肝癌细Bel-7402，人胃癌细胞BGC-823，人肺癌细胞A549，人卵巢癌细胞A2780进行体外活性抑制实验(MMT法，肿瘤细胞抑制率(％)
Figure A20071007175200071
。以提取物的不同浓度对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出药物的半数抑制浓度(IC50)，4种提取物对5种人体癌细胞的半数抑制浓度(IC50)如表1所示。
表1
提取物                     IC50(μg/mL)
HCT-8  Bel-7402  BGC-823  A549  A2780
第1给药组 12.16  19.32  10.41  22.43  25.19
第2给药组 27.58  25.46  21.03  36.51  33.02
第3给药组 ＞100  ＞100  67.46  ＞100  ＞100
第4给药组 ＞100  ＞100  ＞100  ＞100  ＞100
当IC50值小于50μg/mL则认为该受试药物具有细胞毒活性，本实验测定结果表明红松松塔提取氯仿洗脱物具有抑制人结肠癌细胞HCT-8、人肝癌细Bel-7402、人胃癌细胞BGC-823、人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780的活性，其中对人结肠癌细胞HCT-8的抑制活性最为明显；红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物具有抑制人结肠癌细胞HCT-8、人肝癌细Bel-7402、人胃癌细胞BGC-823、人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780的活性，其中对人胃癌细胞BGC-823的抑制活性最为明显；红松松塔提取丙酮洗脱物对5种肿瘤细胞均未见抑制活性，不具有抗肿瘤活性。
以分析纯的二甲苯作为致炎剂，引起健康昆明种小鼠右侧耳部炎症，用打孔器在小鼠相一致部位铳下双耳耳片，称重，以左右耳片重量之差值作为肿胀程度。本实验红松松塔提取氯仿洗脱物(第1给药组)、红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物(第2给药组)、红松松塔提取丙酮洗脱物(第3给药组)和白松塔水提取物(第4给药组)均按小鼠体重2.15g/kg的剂量灌胃给药，对照组按小鼠体重2.15g/kg的剂量灌胃生理盐水；灌胃给药前健康昆明种小鼠禁食16h，不禁水，灌胃给药后1.2h在每只小鼠右耳涂二甲苯30μL，涂二甲苯1.5h后拉颈处死动物，剪下双耳，用直径为6mm的打孔器在小鼠相一致部位铳下双耳耳片，称重，以左右耳片重量之差值作为肿胀程度，计算受试物对炎症的抑制率。4种提取物对由二甲苯引起炎症的抑制效果和抑制率如表2所示。
表2
组别 剂量(按小鼠体重g/kg)     左右耳重量平均差值(mg)   炎症抑制率(％)
对照   -     11.70±2.42   -
第1给药组   2.15     8.94±3.63   23.59
第2给药组   2.15     6.37±3.53   45.56
第3给药组   2.15     6.98±2.78   40.34
第4给药组   2.15     8.95±3.22   23.50
本实验测定结果表明红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物和红松松塔提取丙酮洗脱物对炎症的抑制作用显著，其中红松松塔提取乙酸乙酯洗脱物的炎症的抑制作用最为明显，比白松塔水提取物高21.06个百分点。

Claims (10)

1、红松松塔提取物的提取方法，其特征在于红松松塔提取物按以下步骤进行：(一)将红松松塔粉碎成150～840μm的颗粒，然后用浓度为95％的乙醇回流提取3～4次，每次回流提取2±0.1h，每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的5～10倍；(二)合并提取液，减压浓缩得到浸膏；(三)用浸膏体积3～5倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分批次加入浸膏质量2.5～3.5倍的硅胶中搅拌均匀，并在60±2℃的条件下干燥；(四)装柱；(五)洗脱，即得到红松松塔提取物。
2、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(一)中每次回流提取乙醇的用量为红松松塔质量的7倍。
3、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(二)中合并的提取液在400～500Pa、60～80℃的条件下浓缩。
4、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(三)用浸膏体积3.5～4.5倍的无水乙醇溶解浸膏，再将浸膏醇溶液分3～5次加入浸膏质量2.6～3.4倍的硅胶中搅拌均匀，并在60℃的条件下干燥。
5、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(三)中待每一批次的浸膏醇溶液加入硅胶中搅拌均匀并在60℃条件下干燥后再加入下一批次的浸膏醇溶液。
6、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(三)中的填料硅胶为74～150μm。
7、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(四)中选用10cm×120cm的层析柱，先在层析柱中装填12～17cm高的空白硅胶，再装填高度为100～105cm的浸膏硅胶，然后再装填3cm高的空白硅胶并覆盖一层厚度为0.5～2cm的脱脂棉。
8、根据权利要求7所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(四)中的填料空白硅胶为74～150μm。
9、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(五)依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和丙酮洗脱层析柱，洗脱剂流速为8～10mL/min。
10、根据权利要求1所述的红松松塔提取物的提取方法，其特征在于步骤(一)中将红松松塔粉碎成178～297μm的颗粒。
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