CN101167800A - 双莲注射液及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于半枝莲和半边莲混合的抗菌注射液及制备方法。本双莲注射液中按重量分，半边莲提取物占54～48％，半枝莲提取物占46～52％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％，每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配800～1200ml注射用水。双莲注射液制备方法：半边莲提取物和半枝莲提取物混合均匀，加注射用水后，加入活性炭搅拌处理均匀，静置8～20小时后过滤除去活性炭，加入亚硫酸氢钠、依地酸二钠，调节pH值到5.0－7.0，精滤，制得双莲注射液。本双莲注射液对菌毒混合感染、仔猪水肿病、呼吸系统感染、奶牛乳房炎的治疗有效率90％以上，而半枝莲注射液仅70％左右。

Description

双莲注射液及制备方法

技术领域

本发明属于广谱抗菌中药针剂，特别是涉及半枝莲和半边莲的抗菌中药水针剂。

背景技术

卫生部颁布的标准编号为WS3-10609(ZD-0609)-2002)的标准内容为：半边莲、半枝莲和白花蛇舌草各500g，煎煮提取制成1000ml溶液。其主要的功能和主治：清热解毒，消肿止痛。用于多发性疮肿，呼吸道疾病，咳喘及乳房炎等。实验表明对猪细菌、病毒引发的全身混合性感染及内毒素导致的多器官功能衰竭症等疾病有良好疗效。

此处方经人医上运用多年，疗效较确实，治疗成本较低，有人用此配方治疗畜禽的多种疾病也取得了不错的临床疗效，值得在兽医临床上推广。结合兽医临床的特点，该处方中暂未收载入《中国兽药典》二部的白花蛇舌草，因其的毒性较强，易发生不良反应。只用半枝莲提取物的注射液缺点是：

1、药物成分单一，临床使用的范围较窄，对治疗的病症较窄。对奶牛乳房炎感染无治疗和预防作用。

2、抗菌谱较窄，抑制细菌各类相对较少。对真菌感染无治疗和预防作用。

3、从不良反应看，半枝莲注射液的不良反应要比双莲注射液的不良反应更严重。说明通过合理复方可以有效降低毒副反应。如休克等。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有半枝莲和半边莲药物，但毒性较小的广谱抗菌中药针剂。

本发明的配方是：

双莲注射液，注射液中按重量分，半边莲提取物占54～48％，半枝莲提取物占46～52％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％，其余为注射用水；配方中半边莲提取物重量和半枝莲提取物重量都是按干燥品计算。一般每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配1000ml注射用水。

双莲注射液制备方法如下：

a、检验半边莲提取物和半枝莲提取物的质量：

半边莲提取物的主要质量标准为：

项目	标准要求
		性状	本品为棕色粉末，有引湿性。
鉴别	应符合要求(什么要求？？)
		干燥失重	不得过5.0％
澄明度	取本品2g，加热水溶解，过滤，稀释至100ml，溶液应澄清透明。

半枝莲提取物的主要质量标准为：

项目	标准要求
		性状	本品为棕色粉末，有引湿性.
干燥失重	不得过5.0％
		澄明度	取本品约2.0g，加热水溶解并稀释至100ml，摇匀，溶液应澄清透明.
含量测定	每1ml中含野黄芩苷不低于0.2mg

b、配制过程：按配方重量取检验合格的半边莲提取物和半枝莲提取物，用配方中注射用水总量的50％左右的注射用水量溶解混合的半边莲提取物和半枝莲提取物后，再加入针用活性炭。活性炭的用量比为：活性炭每1000ml药液体积用0.5～1.5g重量，一般活性炭用1.0g重量最合适搅拌均匀，静置8～20小时，一般静置12小时较好，而后过滤除去针用活性炭；加注射用水至全量的95％左右，加入依地酸二钠(用量为配液体积量的0.02％(g/ml))亚硫酸氢钠(按总配制药液体积量的0.2％(g/ml)加)，在用浓度为15％氢氧化钠或15％盐酸溶液调节pH值到5.0-7.0，加注射用水至接近配方注射用水全量。

c、过滤：用注射用水浸泡处理的滤膜过滤，先用0.65μm的滤膜粗滤，再用0.45μm的滤膜进行精滤。由于设备放置等原因，粗滤和精滤在不同房间中完成，并将药液用管道输送至灌封车间。

d、灌封：精滤液经澄明度检查合格后，迅速灌装(需冲入氮气，安瓿事先清洗，烘干，灌封机，及其他配套用具事先清洗干净备用)。装量按工艺规程调整装量为10.2～10.5ml。

e、灭菌：按照工艺规程，用双扉式高压灭菌器进行115℃环境中30min的流通蒸气灭菌，灭菌后成品经灯检，记录灯检结果。

f、包装：灯检合格品按GMP的相关设备操作规格和工序的操作规程进行产品的包装。

本发明中用的半枝莲提取物药性为：处方中半枝莲性辛、平，具有清热、解毒、散瘀、止血、定痛作用。全草中含黄酮类成分包括野黄芩苷(Scutellarein)、黄芩素甙(Scutellarin)、红花素(Carthamidin)及异红花素(Isocarthamidin)等。此外，尚从乙醚提取液中分离得到一种生物碱。又据报道半支莲根含β-谷甾醇和硬脂酸等。

半枝莲提取物中有效成分具多种药理作用：如其含有的红花素经药理试验证明有较强的对抗由组织胺引起的平滑肌收缩作用，并有很好的祛痰作用，是治疗慢性气管炎的有效成分。另外，赵惠仁等通过建立猪晶体醛糖还原酶的测定方法发现红花素对晶体还原酶有较强的抑制作用。佟继铭等发现用野黄芩苷对皮下注射10％干酵母混悬液引起的大鼠发热有明显解热作用，并有明显剂量依赖关系，而对正常大鼠的体温无明显影响。

半枝莲是一种具有广谱抗菌作用的中草药，对感染性疾病和某些病毒引起的疾病均有显著疗效。抑菌实验表明，用半枝莲、萆解、知母、黄柏、蒲公英制成的莲萆知柏汤对大肠杆菌和变形杆菌、甲型副伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌2a、金黄色葡萄球菌等有较强的抑菌作用。半枝莲对肝炎、肝肿、肝硬化腹水、肺脓肿和各种肿毒、胎毒、痈疔、咽喉肿痛、各种肠炎、黄疸、赤痢、惊风、跌打血伤、毒蛇咬伤等，都相当有效。佟继铭等发现用半枝莲水煎剂对皮下注射10％干酵母混悬液引起的大鼠发热有明显解热作用，并有明显剂量依赖关系，而对正常大鼠的体温无明显影响。许健鹏发现复方半枝莲注射液具有保肝作用，能有效降低小鼠血液中Bsp的潴留量，改善小鼠肝脏的排泄功能，对四氯化碳所致肝损伤的大鼠的SGPT有抑制其升高的作用。半枝莲水提液还对H2O2有清除作用，并呈量效关系，抗氧活性较强。盛丽等实验显示半枝莲对淋球菌抑制作用较明显。王刚等通过对小鼠移植性肿瘤的体内实验，观察了半枝莲醇提物对小鼠肉瘤(S1.0)和小鼠肝癌(H22)的抑制作用及通过体外细胞培养的方法观察了半枝莲醇提物对小鼠脾细胞增殖的影响，结果表明：半枝莲醇提物对体内移植的小鼠肉瘤株(s180)和小鼠肝癌细胞株(H22)具有显著的抑制肿瘤增殖活性作用，但是对小鼠脾细胞增殖无抑制作用，相反在体外实验中大剂量对脾细胞增殖有促进作用，因此推测半枝莲醇提物有可能是通过增强机体免疫力来实现其抗肿瘤作用的。

我国常把半枝莲与其他中草药制成配方，如复方止咳颗粒剂、五柴颗粒剂、扶正散结片、复方半枝莲胶囊等，在临床上广泛应用于预防和治疗细菌病毒感染性疾病，治疗肝炎和各种癌症如卵巢肿瘤、继发性胸膜肿瘤、鼻炎癌、肝癌、胃癌等，有一定的疗效。寇宁等用半枝莲与丹参、青箱子等组方的复方半枝莲滴眼液具有与“无环鸟苷滴眼液”相近的抗桶毒作用.

本发明中用的半边莲提取物药性为：处方中半边莲性辛、平，归心、小肠、肺经，具有利尿消肿，清热解毒之功能。半边莲具有多种半边莲类生物碱，有中枢兴奋剂作用，是重要的神经胆碱受体激动剂。《陆川本草》云：“解毒消炎，利尿，止血生肌。治腹水，小儿惊风、双单乳蛾、漆疮、外伤出血、皮肤疥癣、蛇蜂蝎伤。”《中药大辞典》载：“利水，消肿，解毒。治黄疸，水肿，臌胀，泄泻，疔疮，湿疹，癣疾，跌打扭伤肿痛”。

动物实验证明，半边莲可扩张血管使血管软化，降低外周阻力而降低血压作用；其含有的山梗菜碱Lobeline为中枢兴奋药，能兴奋呼吸中枢，加强肺呼吸功能，对脑水肿、肺水肿及其它器官积水有较强的利水作用；还能扩张支气管，解除平滑肌痉挛和减少支气管的分泌，具有止咳祛痰作用。半边莲水煎液对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、白喉杆菌和常见致病真菌等有杀灭和抑制作用。半边莲的利尿作用显著而持久.能增加尿量和水的排出，同时还有解毒消肿之功效。近年来研究，半边莲有抑制癌细胞增殖作用，被用于多种癌症的治疗。

在兽医临床上，万萍等用半边莲治疗多种牲畜疾病，效果显著。如用半边莲外敷治耕牛蛇毒咬伤；用鲜半边莲与瞿麦、金银花、滑石、山楂内服治猪湿热泄泻；内服半边莲与茯苓、陈皮、苍术、五味子等治牛腹水病；用半边莲、旱莲草、陈皮、车前子等水煎液联合肌肉注射青霉素治疗牛胃肠炎；用半边莲与马鞭草、白英、丹参、白花蛇舌草等治疗耕牛血吸虫病。

两种提取物提取工艺：

(1)半边莲提取物的提取工艺：将半边莲洗净，置多功能提取罐中，加水煎煮，水煎液过滤(300目)，于80℃搅拌下加盐酸溶液调节pH值为1～2，静置。趁热过滤沉淀，将沉淀加水稀释，用氢氧化钠溶液溶解，加等量乙醇，加热至80℃，以盐酸溶液调节pH值为1～2，趁热收集沉淀。用乙醇洗涤，得粗品。将粗品加水适量，搅拌成浆状，加氢氧化钠溶解，再调节pH值至6.5～7.0，加2.5倍量乙醇，加热至完全溶解，过滤，滤液加盐酸溶液调节pH值至1～2时，即析出结晶，离心过滤，用乙醇洗涤，干燥，粉碎，即得。

(2)半枝莲提取物的提取工艺：将半枝莲洗净，置多功能提取罐中，加水煎煮，水煎液过滤(300目)，于80℃搅拌下加盐酸溶液调节pH值为1～2，静置。趁热过滤沉淀，将沉淀加水稀释，用氢氧化钠溶液溶解，加等量乙醇，加热至80℃，以盐酸溶液调节pH值为1～2，趁热收集沉淀。用乙醇洗涤，得粗品。将粗品加水适量，搅拌成浆状，加氢氧化钠溶解，再调节pH值至6.5～7.0，加2.5倍量乙醇，加热至完全溶解，过滤，滤液加盐酸溶液调节pH值至1～2时，即析出结晶，离心过滤，用乙醇洗涤，干燥，粉碎，即得。

通过对本发明的双莲注射液和市场上类似产品半枝莲注射液的对比可以看出，本发明的双莲注射液有下面较大的优势：

i从药物成分来讲：双莲注射液有二种主要的药物成分有药理活性，比半枝莲注射液的药理活性成分更为丰富，可以针对更广的病症范围进行病症的预防和治疗。

ii从功能与主治方面看：双莲注射液除其有清热解毒、消肿止痛、呼吸系统疾病外，尚有治疗乳房炎和抗致病性真菌感染等功效，比半枝莲注射液的功效更为广泛，因半枝莲注射液仅主要作为清热解毒、消肿止痛、呼吸系统疾病的产品使用，所以，双莲注射液在临床上的适应症更加广泛。

iii从不良反应看，因为我们在研究双莲注射液的过程中，充分参考和借鉴了以前中药注射剂的生产使用研制的先进经验，充分利用传统的中医理论和现代的的药理的配伍和组方理论，通过合理配伍有效降低了毒副反应，使双莲注射液的不良反应比半枝莲注射液的不良反应更轻，并且在临床上更能自行耐过，在半枝莲注射液因质量标准并未及时更新，较为陈旧，其生产工艺和配方设计上都和现在的设计理念有一定差距，如仍然使用易导致溶血的辅料吐温-80等，可见双莲注射液比参照的类似品种半枝莲注射液不良反应更轻，临床使用更安全。

iv从有效率来看(中剂量)：

药物名称	菌毒混合感染	仔猪水肿病	呼吸系统感染	奶牛乳房炎
					双莲注射液	27/30(90.0％)	32/35(91.4％)	29/32(90.6％)	17/20(85.0％)
半边莲注射液	21/30(70.0％)	23/35(65.7％)	21/32(65.6％)	13/20(65.0％)

可见，其有效率比参比产品要更高，说明双莲注射液比半枝莲注射液更值得在临床推广。

v从抗菌谱看：二者对大肠杆菌、金色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌等均有抑制和杀灭作用，但双莲注射液同时对无乳链球菌、致病性真菌等均有抑制作用，可见，本品比参比品种具有更为广泛的抗菌谱，用途更加广泛。

双莲注射液和半枝莲注射液均为纯中药制剂，均无残留，在临床上可放心使用，不用考虑其药物残留对机体和食品的影响。

关于对本发明的双莲注射液和市场上类似产品半枝莲注射液的功能与主治、不良反应、治愈率、抗菌谱等情况和临床使用情况比较如下表：

双莲注射液		半枝莲注射液
			主要成分	半边莲、半枝莲	半枝莲
功能与主治	①清热解毒：可用于多种发热性疾病的治疗和预防。②消肿止痛：可用于毒蛇咬伤，跌打损伤、水肿病的治疗的预防。③呼吸道疾病：临床表现为以咳喘为主要病状的系列疾病。如咽喉肿痛等。④乳房炎：主要为无乳链球菌等致病菌感染导致的乳房炎症。⑤对致病性真菌感染也有一定疗效。	①清热解毒：可用于多种发热性疾病的治疗和预防。②化瘀消肿：可用于毒蛇咬伤，跌打损伤、水肿病的治疗的预防。③呼吸道疾病：临床表现为以咳喘为主要病状的系列疾病。如咽喉肿痛等。
			不良反应	通过临床实验和实验动物实验结果，按我们现在的配方和制作工艺新制得的产品，使用过程中有少许的刺激反应，偶有瘙痒、发热、厌食等，停药后能自行恢复。说明通过合理的组方有效降低了毒副反应。	通过临床实验和实验动物实验结果表明，此产品在使用过程中有变态反应，如瘙痒、发热、厌食等，同时伴有溶血反应和休克等不良反应。可见此单方制剂比和半边莲复方后的毒副反应更加剧烈，进一步说明半枝莲和半边莲进行复方后可有效降低产品在使用过程中的毒副反应。
有效率	见iv项表，可知治疗各种病症的有效率比参比产品半边莲注射液要更高。	见iv项表，可知单方的半边莲注射液其治疗各种病症的临床效果不如双莲注射液。
			抗菌谱	无乳链球菌、致病性真菌、大肠杆菌、金色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌	金色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、

下面给出本发明双莲注射液治疗几种主要病症的治疗方法和效果：(请分别写出下面各种病和病型的治疗方法、用药量、时间和阶段性效果和最后效果)。

双莲注射液治疗菌毒混合感染临床试验报告

时间：2006.11～2007.06，地点：四川正红原种猪场。验证双莲注射液在临床使用中的治疗效果。方法：连续四个月。通过对临床自然发病有细菌和病毒混合感染中猪(体重在40-50kg)进行治疗后进行跟踪调查，确定本产品在临床应用中的治疗效果。结果：本品中剂量有效率达90.0％，防治作用效果明显。高于半边莲注射液的有效率70.0％。本试验用40-50kg体重中猪。

症状：患猪高烧高热、精神不振，卧地不起，食欲减退或废绝，呼吸困难、咳嗽、腹泻便秘或以耳朵发蓝、眼圈发蓝，四肢末端严重发绀，以及机体免疫力下降所引起的细菌、病毒混合感染。

组织病理学检查：可视粘膜苍白，全身不同程度黄染，肺前叶边缘普遍有灰色肝变病灶；切开气管，内部充满泡沫状物；肺门淋巴结肿大，肺间质明显增宽，部分猪有渗出性肺炎或大叶性肺炎，个别严重者，肺边缘有红色肉变区；肝肿大变性，棕黄色，全身淋巴结肿大，切面有出血斑点；肾苍白，肿大，表面有凹凸不平的灰白色坏死灶，个别有针状出血点。

双莲注射液和半边莲注射液给药剂量分高、中、低剂量：高剂量组0.2ml/kg.bw；中剂量组0.1ml/kg.bw；低剂量组0.05ml/kg.bw。每日给药2次，上午和下午各一次。

给药途径：肌肉注射。给药时间：连续给药3天。

□各项观察指标的结果及分析：

药物名称	高剂量组(30头)			中剂量组(30头)			低剂量组(30头)
										有效	治愈	无效	有效	治愈	无效	有效	治愈	无效
	双莲注射液	28(93.3％)	25(83.3％)	2(6.6％)	27(90.0％)	24(80.0％)	3(10％)	25(83.3％)	21(70％)										5(16.7％)
半边莲注射液										20(66.7％)	17(56.7％)	10(33.3％)	21(70％)	16(53.3％)	9(30％)	18(60.0％)	14(46.7％)	12(40％)
	生理盐水	在未给药的20头猪中，经观察全部死亡。其无效率为100％。  有效率和治愈率均为0％。

结论：双莲注射液对临床上由于机体免疫力下降所引起的细菌、病毒混合感染有稳定的疗效。与半边莲注射液相对比可知，双莲注射液其有效率和治愈率均高于半边莲注射液。对双莲注射液的临床检验结果通过卡方检验(P＞0.05)，从高中低剂量治疗结果来看，高中剂量之间差异不显著，而和低剂量组间差异显著。故在临床用治疗猪的菌毒混合感染时可用请用0.1ml/kg.bw，肌肉注射。

双莲注射液治疗仔猪水肿病临床试验报告

验证双莲注射液在临床使用中的治疗效果。方法：在连续四个月中，通过对临床自然发病仔猪水肿病的仔猪(20-30日龄)进行治疗后进行跟踪调查，确定本产品在临床应用中的治疗效果。结果：本品中剂量有效率达91.4％，防治作用效果明显。高于半边莲注射液的有效率65.7％。

治疗前症状：食欲减退或完全停止，体温40-41℃，死前体温下降。有的大便干燥或腹泻，有的出现尿闭现象。行走时步态不稳，共济失调，无目的乱冲撞或转圈运动，有的两前肢跪地后肢直立或四肢下卧，突然向前猛跃。不能站立或爬行，强迫行走时，四肢乱蹬。皮肤感官敏感，触之惊叫，声音嘶哑。有时发生呕吐，皮肤有水波动感。后期反应迟钝，皮肤常出现红斑，腹部有臌气现象，卧地不起，呈昏迷状态。其主要特征是：眼睑严重水肿，颜面、颈部、头部发“胖”或水肿，有神经症状，共济失调，病程一般12-24h。

治愈：经用药治疗后，上述症状完全消失，不发生死亡，高热病状消除，精神食欲恢复正常，不发生反弹。

有效：经用药治疗后，症状缓解，精神好转，死亡趋势得到控制或是用药后恢复正常后反弹。

双莲注射液和半边莲注射液临床给药剂量分高、中、低剂量：高剂量0.2ml/kg.bw；中剂量组0.1ml/kg.bw；低剂量组0.05ml/kg.bw。每日给药总量：每日给药2次。

给药途径：肌肉注射。给药时间：连续给药3日。

各项观察指标的结果及分析：

药物名称	高剂量组(35头)			中剂量组(35头)			低剂量组(35头)
										有效	治愈	无效	有效	治愈	无效	有效	治愈	无效
	双莲注射液	33(94.3％)	30(85，7％)	2(5.7％)	32(91.4％)	31(88.6％)	3(8.6％)	26(74.3％)	24(68.6％)										9(25.7％)
半边莲注射液										25(71.4％)	22(62.9％)	10(29.6％)	23(65.7％)	21(60.0％)	12(34.3％)	20(57.1％)	18(51.4％)	15(42.8％)
	生理盐水	在未给药的20头猪中，经观察全部死亡。其无效率为100％。  有效率和治愈率均为0％。

结论：双莲注射液对临床上由于大肠杆菌感染所致的水肿病有稳定的疗效。与半边莲注射液相对比可知，双莲注射液其有效率和治愈率均高于半边莲注射液。对双莲注射液的临床检验结果通过卡方检验(P＞0.05)，从高中低剂量治疗结果来看，高中剂量之间差异不显著，而和低剂量组间差异显著。故在临床用上用于治疗大肠杆菌感染所致的仔猪水肿病时请用0.1ml/kg.bw，肌肉注射。

双莲注射液治疗呼吸系统感染临床试验报告

验证双莲注射液在临床使用中的治疗效果。方法：通过对临床自然发病有细菌和病毒混合感染导致的呼吸系统感染的中猪(体重在40-50kg)进行治疗后进行跟踪调查，确定本产品在临床应用中的治疗效果。结果：本品中剂量的有效率达90.6％，防治作用效果

治疗前症状：急性型：同舍或不同舍的许多猪患病，体温41℃～42℃，少数42℃以上，个别超过43℃，拒食，呼吸困难(张口呼吸或呈犬坐姿势)，咳嗽，心衰，病程长短不定，可能转为亚急性或慢性。亚急性和慢性型：多由急性型转来，体温39.5℃～40℃，咳嗽，有一定程度的异常呼吸，生长迟缓，日增重比正常猪可减少30g～50g。最初暴发本病时，可见到流产、个别猪可发生关节炎、心内膜炎和不同部位的脓肿。组织病理学检查：为肺炎和胸膜炎。肺炎大部分是双侧炎性的，肺炎区呈暗红色，质部较硬，切面脆弱(最急性型)或颗粒状(急性中亚急性型)有的病例表现为肺水肿和出血。80％病例，可见纤维素性胸膜炎，而且胸腔含有血样液体。

治愈：用药后精神好转，烧热、炎症及咳喘症状均消失。猪只采食正常。

好转：用药后精神好转，其余症状有所减轻，但继续存在，如咳嗽，呼吸困难等。

无效：用药后机体的各项症状均无改善，有的还有恶化现象或死亡。

双莲注射液和半边莲注射液临床给药剂量分高、中、低剂量：高剂量组0.2ml/kg.bw；

中剂量组0.1ml/kg.bw；低剂量组0.05ml/kg.bw。每日给药总量：每日给药2次。

给药途径：肌肉注射。给药时间：连续3日。

各项观察指标的结果及分析：

药物名称	高剂量组(32头)			中剂量组(32头)			低剂量组(32头)
										有效	治愈	无效	有效	治愈	无效	有效	治愈	无效
	双莲注射液	30(93.8％)	28(87.5％)	(6.2％)	29(90.6％)	27(84.4％)	3(9.4％)	24(75.0％)	21(65.6％)										8(25.0％)
半边莲注射液										22(68.8％)	20(62.5％)	10(32.2％)	21(65.6％)	18(56.2％)	11(34.4％)	17(53.1％)	14(43.8％)	15(46.9％)
	生理盐水	在未给药的20头猪中，经观察全部死亡。其无效率为100％。  有效率和治愈率均为0％。

结论：双莲注射液对临床上中猪呼吸系统感染(如猪喘气病、蓝耳病毒感染等)有稳定的疗效。与半边莲注射液相对比可知，双莲注射液其有效率和治愈率均高于半边莲注射液。对双莲注射液的临床检验结果通过卡方检验(P＞0.05)，从高中低剂量治疗结果来看，高中剂量之间差异不显著，而和低剂量组间差异显著。故在临床用上用于治疗中猪呼吸系统感染(如猪喘气病、蓝耳病毒感染等)时请用0.1ml/kg.bw，肌肉注射。

双莲注射液临床治疗奶牛乳房炎试验报告

试验日期：2006.11～2007.06。试验地点：成都市温江区“奶牛之乡”的永宁镇。试验品种：黑白花奶牛，体重在300～400kg/头，月龄平均3～5岁，全部应患有乳房炎。验证双莲注射液在临床使用中的治疗效果。方法：通过对临床自然发病奶牛乳房炎进行治疗后进行跟踪调查，确定本产品在临床应用中的治疗效果。结果：本品中剂量的有效率达85.0％，防治作用效果明显。高于半边莲注射液的有效率65.0％。

临床症状：不同的病原微生物所引起的临床症状有所差异，但基本症状是患病乳房有不同程度的充血、增大、发硬、温热和疼痛，泌乳减少或停止。乳汁最初无显著变化以后因炎症波及乳腺的分泌部，乳汁变稀薄，且有絮状物或凝块，有时可见脓汁和血液。当实质排泄管及间质受波及时，乳腺可发生坏死；当皮下组织及腺间结缔组织被侵害时，则呈蜂窝织性乳房炎，它与坏死性乳房炎是乳房炎中最严重的两种类型。

慢性病例：患区乳房组织弹性减低、僵硬，泌乳量减少，泌奶时乳汁不同程度地发黄和变厚，有时有凝乳块，乳房肿大。有些患布氏杆菌病的母牛，乳房很大，而没有泌乳能力。

(1)隐性型乳腺炎治疗组：

治愈：治疗后用CMT法检查为阴性；

好转：治疗后用CMT法检查阳性反应降低1个以上“十”；

无效：治疗后用CMT法检查，其阳性反应与治疗前无差别，加重或转为临床型乳腺炎。

(2)临床型乳腺炎治疗组：

治愈：试验牛治疗后乳房红肿、发热、疼痛、乳品质下降等临床症状完全消失；

好转：治疗后临床症状基本消失或明显好转；

无效：治疗后临床症状无变化或加剧。

双莲注射液和半边莲注射液高、中、低剂量：高剂量组20ml/乳头灌注；中剂量组10ml/乳头灌注；低剂量组5ml/乳头灌注。每日给药总量：每日给药2次。

给药途径：乳头灌注。给药时间：连用5日

□各项观察指标的结果及分析：

药物名称	高剂量组(20头)			中剂量组(20头)			低剂量组(20头)
										有效	治愈	无效	有效	治愈	无效	有效	治愈	无效
	双莲注射液	18(90.0％)	17(85.0％)	2(10％)	17(85.0％)	16(80.0％)	3(15.0％)	14(70.0％)	12(60.0％)										6(30.0％)
半边莲注射液										14(70.0％)	13(65.0％)	6(30.0％)	13(65.0％)	10(50.0％)	7(35.0％)	10(50.0％)	8(40.0％)	10(50.0％)
	生理盐水	在未给药的20头奶牛中，经观察全部症状无减轻。其无效率为100％。  有效率和治愈率均为0％。

结论：双莲注射液对临床上由于无乳链球菌感染所致的奶牛乳房炎有稳定的疗效。与半边莲注射液相对比可知，双莲注射液其有效率和治愈率均高于半边莲注射液。对双莲注射液的临床检验结果通过卡方检验(P＞0.05)，从高中低剂量治疗结果来看，高中剂量之间差异不显著，而和低剂量组间差异显著。故在临床用上用于治疗奶牛乳房炎感染时请用10ml/乳头灌注。

本发明的优点(和半边莲注射液比较)：

i从药物成分来讲：双莲注射液有二种主要的药物成分有药理活性，比半枝莲注射液的药理活性成分更为丰富，可以针对更广的病症范围进行病症的预防和治疗。

ii从功能与主治方面看：双莲注射液除其有清热解毒、消肿止痛、呼吸系统疾病外，尚有治疗乳房炎和抗致病性真菌感染等功效，比半枝莲注射液的功效更为广泛，因半枝莲注射液仅主要作为清热解毒、消肿止痛、呼吸系统疾病的产品使用，所以，双莲注射液在临床上的适应症更加广泛。

iii从不良反应看，因为我们在研究双莲注射液的过程中，充分参考和借鉴了以前中药注射剂的生产使用研制的先进经验，充分利用传统的中医理论和现代的的药理的配伍和组方理论，通过合理配伍有效降低了毒副反应，使双莲注射液的不良反应比半枝莲注射液的不良反应更轻，并且在临床上更能自行耐过，在半枝莲注射液因质量标准并未及时更新，较为陈旧，其生产工艺和配方设计上都和现在的设计理念有一定差距，如仍然使用易导致溶血的辅料吐温-80等，可见双莲注射液比参照的类似品种半枝莲注射液不良反应更轻，临床使用更安全。

菌毒混合感染、仔猪水肿病、呼吸系统感染、奶牛乳房炎

iv从有效率来看：

药物名称	菌毒混合感染	仔猪水肿病	呼吸系统感染	奶牛乳房炎
					双莲注射液	28/30(93.3％)	33/35(94.3％)	30/32(93.8％)	18/20(90.0％)
半枝莲注射液	20/30(66.7％)	25/35(71.4％)	22/32(68.8％)	14/20(70.0％)

可见，其有效率比参比产品要更高，说明双莲注射液比半枝莲注射液更值得在临床推广。

v从抗菌谱看：二者对大肠杆菌、金色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌等均有抑制和杀灭作用，但双莲注射液同时对无乳链球菌、致病性真菌等均有抑制作用，可见，本品比参比品种具有更为广泛的抗菌谱，用途更加广泛。

具体实施方式

实施例1、双莲注射液配方1

本注射液中按重量分，半边莲提取物占54％，半枝莲提取物占46％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％，其余为注射用水；每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配800ml注射用水。

实施例2、双莲注射液配方2

本注射液中按重量分，半边莲提取物占52％，半枝莲提取物占48％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠  0.02％，其余为注射用水；每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配900ml注射用水。

实施例3、双莲注射液配方3

本注射液中按重量分，半边莲提取物占50％，半枝莲提取物占50％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％，其余为注射用水；每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配1000ml注射用水。

实施例4、双莲注射液配方4

本注射液中按重量分，半边莲提取物占48％，半枝莲提取物占52％，亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％，其余为注射用水；每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配1200ml注射用水。

实施例5、双莲注射液制备方法

a、检验半边莲提取物和半枝莲提取物的质量。

b、配制过程：按配方重量取检验合格的半边莲提取物和半枝莲提取物，用配方中注射用水总量的50％左右的注射用水量溶解混合的半边莲提取物和半枝莲提取物后，再加入针用活性炭。活性炭的用量比为：活性炭每1000ml药液体积用0.5～1.5g重量，一般活性炭用1.0g重量最合适搅拌均匀，静置8～20小时，一般静置12小时较好，而后过滤除去针用活性炭；加注射用水至全量的95％左右，加入依地酸二钠(用量为配液体积量的0.02％(g/ml))亚硫酸氢钠(按总配制药液体积量的0.2％(g/ml)加)，在用浓度为15％氢氧化钠或15％盐酸溶液调节pH值到5.0-7.0，加注射用水至接近配方注射用水全量。

c、过滤：用注射用水浸泡处理的滤膜后再过滤，先用0.65μm的滤膜粗滤，再用0.45μm的滤膜进行精滤。由于设备放置等原因，粗滤和精滤在不同房间中完成，并将药液用管道输送至灌封车间。制得双莲注射液。

d、灌封：精滤液经澄明度检查合格后，迅速灌装(需冲入氮气，安瓿事先清洗，烘干，灌封机，及其他配套用具事先清洗干净备用)。装量按工艺规程调整装量为10.2～10.5ml。

e、灭菌：按照工艺规程，用双扉式高压灭菌器进行115℃环境中30min的流通蒸气灭菌，灭菌后成品经灯检，记录灯检结果。

f、包装：灯检合格品按GMP的相关设备操作规格和工序的操作规程进行产品的包装。制得双莲注射液商业产品。

Claims (7)

1.双莲注射液，在注射液中按重量分，包括半边莲提取物占54～48％，半枝莲提取物占46～52％，其余为注射用水；半边莲提取物重量和半枝莲提取物重量都是按全干基础计算。

2.根据权利要求1所述的双莲注射液，其特征在于：注射液中按重量分中，还包括亚硫酸氢钠0.2％，依地酸二钠0.02％。

3.根据权利要求1所述的双莲注射液，其特征在于：每100克半边莲提取物和半枝莲提取物重量之和配800～1200ml注射用水。

4.根据权利要求1所述的双莲注射液制备方法，包括以下过程

a、配制：按配方重量取检验合格的半边莲提取物和半枝莲提取物混合均匀，用注射用水溶解混合的半边莲提取物和半枝莲提取物，加入活性炭搅拌处理均匀，静置8～20小时后过滤除去活性炭，加注射用水至接近配方注射用水全量，加入亚硫酸氢钠、依地酸二钠，调节pH值到5.0-7.0，再用注射用水稀释至配方注射用水全量；

b、过滤：用制备针剂所有级别的滤膜进行精滤，制得双莲注射液。

5.根据权利要求4所述的双莲注射液制备方法，其特征在于：每配制药液1000ml加入活性炭用量为0.5～1.5g重量。

6.根据权利要求4所述的双莲注射液制备方法，其特征在于：调节pH值用浓度为15％氢氧化钠溶液或15％盐酸溶液。

7.根据权利要求4所述的双莲注射液制备方法，其特征在于：滤过分先粗滤后精滤，先用0.65μm的滤膜粗滤，再用0.45μm的滤膜进行精滤。