CN101163496A

CN101163496A - 促进内皮细胞的粘附或迁移的弹性蛋白原

Info

Publication number: CN101163496A
Application number: CNA2006800062463A
Authority: CN
Inventors: 狄恩·Y·李; 布伦特·D·威尔逊; 利塞·瑟伦森·布伦哈尔特
Original assignee: University of Utah Research Foundation UURF
Current assignee: University of Utah Research Foundation UURF
Priority date: 2005-02-25
Filing date: 2006-02-24
Publication date: 2008-04-16
Anticipated expiration: 2026-02-24
Also published as: MX2007010332A; EP1877078A2; US20160346440A1; WO2006091775A3; KR20070120967A; AU2006216635B2; JP2008532942A; US10052415B2; EP1877078B1; WO2006091775A2; US20090280152A1; EP2796146A1; CA2598289C; EP2796146B1; IL185378A0; CA2598289A1; US9005356B2; CN101163496B; AU2006216635A1; US20150151028A1

Abstract

本发明涉及用于促进内皮细胞的粘附或迁移的方法、组合物和装置。

Description

促进内皮细胞的粘附或迁移的弹性蛋白原

相关申请

本申请要求2005年2月25日提交的美国临时专利申请系列号60/656,360的优先权，其公开的内容在此以其全文引为参考。

发明背景

在心血管疾病和阻塞性血管病的治疗方面取得的进展导致产生了对多种疾病和症状的治疗方法。这些治疗方法，包括大量各种不同的药物流出和非药物流出装置的植入，已经极大地改善了病人的存活率和生活质量。但是，这些治疗方法并不是没有局限性和副作用的。

医学治疗方法聚焦于减少与阻塞性血管疾病相关的风险因素。抗血栓、抗高血压和降低胆固醇药物治疗目的在于降低堵塞的风险，而β-阻断剂和血管紧张肽转化酶抑制剂的作用是减少心脏的工作负荷。尽管这些药物的发展降低了血管堵塞和心脏事件的风险，对于来说，仍然极大地需要介入心脏病学和心脏手术直接治疗心血管疾病和血管堵塞。

血管成形术是冠状动脉病的主要介入治疗方法，每年仅在美国就有680,000例以上。简单来说，将气球放置在被阻塞的动脉内，然后使其扩张以解除堵塞。在大多数情况下，将支架放置在装有仪器的动脉内。但是，仅有70％的血管成形术能够长期(6个月)缓解血管的堵塞。在被称为再狭窄的过程中，血管平滑肌细胞对由血管成形术引起的血管损伤作出反应，重新阻塞了动脉。这种再狭窄过程在其它对身体管道造成损伤的操作过程中也被观察到，包括在任何身体管道中(例如在动脉、静脉、输尿管、尿道、输卵管、总胆管、胰腺导管、肾管、食管、气管、膀胱、子宫、卵巢管、输精管、前列腺管或淋巴管中)放置支架、金属丝、导管、分流通管或其它管腔内装置的操作过程。在支架的几何形状和组成方面的不断进展已经带来支架输送的极大便利性，但没能减少再狭窄的并发。最近，使用放射活性和其它细胞毒性药剂(例如paclitaxil、放线菌素D和雷帕霉素)来治疗再狭窄的策略受到了相当多的关注。这些策略依赖于阻断许多类型细胞的增殖的毒性药剂的暂时的和局部的投送。目前正在测试其长期有效性；但是这些药剂的毒性带来了对于处理通常是慢性的心脏和心血管症状来说它们是否能够作为长期的治疗选择的严肃的质疑。

目前的心血管和阻塞性血管疾病的治疗方法目的在于防止或抑制衬有血管平滑肌细胞的血管的过度增殖，从而防止或抑制管道的堵塞。但是，许多用于抑制血管平滑肌细胞的增殖的治疗方法、包括雷帕霉素和紫杉醇是通过细胞毒性机制起作用的。尽管这些疗法可以帮助防止堵塞，但它们的细胞毒性抑制了管道中或其附近的内皮细胞。那些通常用于投送这些和其它治疗药剂的管腔内装置的插入，进一步加剧了对内皮细胞的生长或结构的损害。由治疗药剂引起的损伤和/或由各种装置的插入引起的损伤一起，通常导致了再狭窄的发生。作为再狭窄的结果，患有心血管和阻塞性血管疾病的病人必须经常被重复地放入支架、导管，或进行其它治疗。这些重复的治疗将病人暴露于与住院治疗或侵入性操作过程有关的增加的风险中。此外，需要重复这些治疗过程极大地增加了处理这些病症的相关花费。减少或防止再狭窄的方法和组合物在本技术领域中将提供相当大的进步。

除了再狭窄问题之外，血栓形成也是与目前许多心血管疾病和阻塞性血管疾病的治疗方法相关的重要问题。事实上，只要将装置放置并留在身体内，血栓形成的风险就存在，因此它是许多外科操作过程的潜在并发症。因此，血栓形成这种严重的并发症不仅与心脏和血管内操作过程相关，而且也与其它涉及在身体内或身体管道的腔内放置装置的介入操作方法相关。特别是正如前文所述，许多当前的药物疗法损害了内皮细胞，然后抑制了它们的增殖。这极大地抑制了插入装置的内皮化。结果，在使用药物流出或非药物流出装置治疗的病人中可能发生后期的血栓形成。为了帮助防止潜在致命的血栓形成，病人通常用抗血小板和/或抗凝血素疗法进行侵害性的治疗(有时在长期的基础上)。这些治疗方法施加了它们自身的风险和花费。因此，促进插入装置(例如血管内或其它管腔内装置)的内皮化、从而防止或降低了血栓形成的可能性的方法和组合物，在本技术领域中将是巨大的进步。

本发明提供了用于促进内皮细胞的粘附、例如促进内皮细胞与可植入的生物相容的装置的粘附的方法和组合物。用于促进内皮细胞与例如生物相容性装置的粘附的方法和组合物，可以用于治疗或预防再狭窄和/或血栓形成。

发明简述

本发明提供了用于调节内皮细胞的粘附和/或迁移的组合物和方法。本发明提供了用于治疗和预防再狭窄或血栓形成的组合物和方法，这些再狭窄或血栓形成通常是用于多种心血管疾病和阻塞性血管疾病的、基于药物和装置的治疗方法的具有潜在致命副作用的结果。本发明还提供了被设计用于促进内皮粘附、从而防止再狭窄或血栓形成的可植入的装置。

第一方面，本发明提供了促进内皮细胞的的粘附的方法。该方法包括将该内皮细胞与一定量的含有有效剂量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触，其中该有效剂量足以促进内皮细胞的粘附。弹性蛋白原多肽或其生物活性片段具有天然的弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。

在一个实施方案中，促进内皮细胞的粘附的方法是体外方法。在另一个实施方案中，促进内皮细胞的粘附的方法是体内方法。

在一个实施方案中，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ IDNO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。在另一个实施方案中，组合物基本上由SEQ ID NO：5中描述的生物活性片段的至少一个重复组成。在另一个实施方案中，组合物基本上由SEQ ID NO：6中描述的生物活性片段组成。在另一个实施方案中，该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有由可以在包括了65℃下用0.2X SSC的清洗步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1中描述的核酸序列杂交的核酸所编码的氨基酸序列。在上述任何一种实施方案中，组合物含有或基本上由保留了天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段组成。被弹性蛋白原多肽或其生物活性片段所保留的、可用于本发明的方法和装置中的天然弹性蛋白原的生物学/功能活性的例子包括但不限于：(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。

在另一个实施方案中，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段与装置共价结合。示例性的装置由金属、硅酮、涤纶织物、塑料或PTFE制成或包被有上述材料。示例性的金属装置包括不锈钢装置。有效量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被结合在装置上，该有效量足以促进内皮细胞与装置的粘附。

第二方面，本发明提供了促进内皮细胞迁移的方法。该方法包括将该内皮细胞与一定量的含有有效剂量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触，其中该有效剂量足够促进内皮细胞的迁移。弹性蛋白原多肽或其生物活性片段具有天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。

在一个实施方案中，促进内皮细胞的迁移的方法是体外方法。在另一个实施方案中，促进内皮细胞的迁移的方法是体内方法。

在另一个实施方案中，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段与装置共价结合。示例性的装置由金属、塑料、涤纶织物、PTFE、硅酮或塑料制成或被上述材料包被。示例性的金属装置包括不锈钢装置。有效量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被结合在装置上，该有效量足以促进内皮细胞迁移到装置。

第三方面，本发明提供了促进内皮细胞与装置的粘附的方法。方法包括将该内皮细胞与装置相接触。装置含有包括有效量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物，弹性蛋白原多肽或其生物活性片段与装置共价结合。有效量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被结合在装置上，该有效量足以促进内皮细胞与装置的结合。

在一个实施方案中，该方法是体外方法。在另一个实施方案中，该方法是体内方法。

在一个实施方案中，该装置是金属装置，例如不锈钢装置。在另一个实施方案中，装置由塑料、硅酮、PTFE或涤纶织物制成或被上述材料包被。在一个实施方案中，装置从导管、支架、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。在另一个实施方案中，装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、人工瓣膜、心室辅助装置、血管移植物、鼻胃管、通气管或胸管中选择。

第四方面，本发明提供了治疗或预防再狭窄的方法。该方法包括使用一定量的组合物，该组合物含有治疗或预防性治疗再狭窄有效量的弹性蛋白原或其生物活性片段。弹性蛋白原或其生物活性片段与装置共价结合，使用该组合物促进了内皮细胞与该装置的粘附，从而治疗或预防了再狭窄。

在一个实施方案中，本方法在血管成形术、导管插入术、安装支架、外科手术或其它介入疗法之后进行。在另一个实施方案中，本方法伴随血管成形术、导管插入术、安装支架、外科手术或其它介入疗法而进行。在另一个实施方案中，为了防止再狭窄，同样的装置也按照本发明被包被用于防止堵塞。

在一个实施方案中，一种或多种其它的药剂作为适合于特定的心血管或阻塞性血管病症的治疗方案的一部分被同时或伴随使用。

在一个实施方案中，装置从支架、导管、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。在一个实施方案中，装置是金属装置，例如不锈钢装置。

在一个实施方案中，方法包括在血管内或管腔内使用该装置到身体管道中细胞损伤的位点。在另一个实施方案中，身体管道从动脉、静脉、输尿管、总胆管、胰腺导管、肾管、食管、气管、尿道、膀胱、子宫、卵巢管、输卵管、输精管、前列腺管或淋巴管中选择。

第五方面，本发明提供了治疗或预防血栓形成的方法。该方法包括使用一定量的组合物，该组合物含有有效量的治疗或预防性治疗血栓形成的弹性蛋白原或其生物活性片段。弹性蛋白原或其生物活性片段与装置共价结合，使用该组合物促进了内皮细胞与该装置的粘附，从而治疗或预防了血栓形成。

在一个实施方案中，本方法在血管成形术、导管插入术、安装支架、外科手术或其它介入疗法之后进行。在另一个实施方案中，本方法伴随血管成形术、导管插入术、安装支架或其它介入疗法而进行。在另一个实施方案中，为了防止血栓形成，用于防止堵塞的同样的装置也按照本发明被包被。

在一个实施方案中，一种或多种其它的药剂作为适合于特定的心血管或阻塞性管道病症的治疗方案的一部分被同时或伴随使用。

在一个实施方案中，装置从支架、导管、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。在另一个实施方案中，装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、人工瓣膜、心室辅助装置、血管移植物、鼻胃管、通气管或胸管中选择。在一个实施方案中，装置是金属装置。在另一个实施方案中，装置是不锈钢装置。在另一个实施方案中，装置由塑料、硅酮、涤纶织物或PTFE制成或被上述材料包被。

在一个实施方案中，方法包括将该装置血管内或管腔内使用到身体管道中细胞损伤的位点。在另一个实施方案中，身体管道从动脉、静脉、输尿管、总胆管、胰腺导管、肾管、食管、气管、尿道、膀胱、子宫、卵巢管、输卵管、输精管、前列腺管或淋巴管中选择。

第六方面，本发明提供了一种装置。该装置含有弹性蛋白原多肽或其生物活性片段。弹性蛋白原多肽或其生物活性片段共价结合在该装置上。装置含有一定量的该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段，所述量能够有效促进内皮细胞与该装置的粘附。

在一个实施方案中，装置是金属装置。在另一个实施方案中，装置是不锈钢装置。在另一个实施方案中，装置从导管、支架、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。在另一个实施方案中，装置从起搏器、心脏复律器一除纤颤器、人工瓣膜、心室辅助装置、血管移植物、鼻胃管、通气管或胸管中选择。

第七方面，本发明提供了用于鉴定保留了弹性蛋白原的一种或多种生物学活性的弹性蛋白原的生物活性片段的筛选方法。在一个实施方案中，筛选方法使用了培养的内皮细胞或内皮祖细胞来进行，以鉴定和/或定性保留了在体外促进内皮细胞的粘附和/或迁移的能力的弹性蛋白原的生物活性片段。

在一个实施方案中，培养的内皮细胞是哺乳动物细胞。在另一个实施方案中，培养的内皮细胞是小鼠细胞或大鼠细胞。在另一个实施方案中，培养的内皮细胞是猪细胞。在另一个实施方案中，培养的内皮细胞是人细胞。在另一个实施方案中，内皮细胞是人微管内皮细胞。在另一个实施方案中，内皮细胞是人主动脉内皮细胞(HuAEC)。

在一个实施方案中，筛选方法是高通量筛选方法。

本发明考虑到了任何上述的方面和实施方案的组合。在上述任何一个实施方案中，本发明提供了促进内皮细胞粘附的方法。在一个实施方案中，本发明提供了促进内皮干细胞粘附的方法。

在某些上述的任何实施方案中，本发明提供了促进内皮细胞或内皮干细胞粘附的方法，例如促进与装置的粘附的方法。本发明还提供了弹性蛋白原多肽或其生物活性片段与其共价结合或随附的装置。在某些实施方案中，内皮细胞或内皮干细胞的粘附足以使粘附细胞在生理相关的流速和/或压力下保留在装置上。所谓生理相关是指粘附于带有弹性蛋白原或其生物活性片段的装置上的细胞，在相当于静脉和/或动脉流速和/或压力的流速和/或压力下，被保留在装置上。对于装置被管腔内放置在动脉或静脉之外的管道腔内的实施方案来说，术语生理相关是指相当于具体的管道(例如输精管、尿道、输尿管、前列腺管、胆管等)中经历的压力和/或流速的压力和/或流速。

在任何上述的情况中，弹性蛋白原或其生物活性片段可以被单独使用以促进内皮细胞的粘附和/或迁移。此外，弹性蛋白原或其生物活性片段也可以与适合于被治疗的具体病症的一种或多种其它治疗方案组合使用。此外，弹性蛋白原或其生物活性片段也可以单独或与另一种粘附促进药剂组合使用。在一个实施方案中，使用了被弹性蛋白原或其生物活性片段所包被的装置来促进内皮细胞的粘附。在另一个实施方案中，装置被弹性蛋白原或其生物活性片段与抗CD34抗体共同包被。

在任何上述的情况中，其上结合了弹性蛋白原或其一种或多种生物活性片段的本发明的装置可以用金属、塑料、硅酮、涤纶、聚氨基甲酸酯、聚丙烯、PTFE或其衍生物制成或包被。结合可以是共价的，例如通过多糖连接。此外，结合也可以通过使用常用的交联试剂进行交联。

在任何上述的某些实施方案中，本发明的方法、组合物和装置可以用在血栓形成的预防或治疗中。在某些实施方案中，包被有目的多肽的装置可以是不产生血栓的。在另外的实施方案中，包被有目的多肽的装置可以是抗血栓形成的。在另外的实施方案中，包被有目的多肽的装置与相似的未包被的装置相比具有明显低的血栓形成。不论具体的包被的装置是具有抗血栓形成性质还是仅仅是不产生血栓，本发明的包被的装置与其它的介入治疗方法相比都减少或防止了血栓形成。

除非特别说明，本发明的实现将使用常规的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、病毒学、重组DNA和免疫学技术，它们都属于本领域的专业技术。这些技术在文献中有描述。参见例如Sambrook和Russell主编的《分子克隆实验指南》(第三版)(Cold Spring Harbor Laboratory Press：2001)；《酶学方法专著》(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Harlow和Lane主编的《使用抗体》(第二版)(Cold Spring Harbor Press，New York，1999)；Bonifacino、Dasso、Lippincott-Schwartz、Harford和Yamada主编的《当代细胞生物学实验方法》(Current Protocols in Cell Biology)(John Wiley and Sons，Inc.，New York，1999)。

下面的详细描述和权利要求将使本发明的其它特点和优点变得明显。

附图简述

图1显示了纤连蛋白和弹性蛋白原对CHO细胞、人胚胎肾细胞(HEK 293)、人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)和人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附的影响。对于每种细胞类型来说，细胞粘附在用纤连蛋白或重组人弹性蛋白原包被的培养皿中测量。注意到内皮细胞、以及较低程度上平滑肌细胞粘附在包被有弹性蛋白原的培养皿上。相比较而言，CHO细胞和HEK 193细胞粘附与纤连蛋白包被的培养皿，但不粘附于包被有弹性蛋白原的培养皿。

图2用图形概述了内皮细胞与包被有不同蛋白的培养皿的粘附。HuAECs与弹性蛋白原的粘附与使用纤连蛋白和胶原蛋白时观察到的相似。

图3描述了弹性蛋白原或弹性蛋白原的各种生物活性片段对内皮细胞迁移的影响。弹性蛋白原、以及弹性蛋白原的两种不同的生物活性片段，促进了内皮细胞的迁移。弹性蛋白原及其各种不同的生物活性片段对内皮细胞迁移的影响，可以与纤连蛋白对内皮细胞的迁移的影响相比。

图4显示了弹性蛋白原和弹性蛋白原的生物活性片段促进了A2058人黑素瘤细胞的粘附。

图5显示了弹性蛋白原以及弹性蛋白原的各种不同生物活性片段促进了A2058人黑素瘤细胞的迁移。

图6显示了另一种人内皮细胞类型(人微管内皮细胞HMVEC)粘附于共价结合了弹性蛋白原的不锈钢盘上。HMVECs与弹性蛋白原包被的不锈钢盘的粘附可以和HMVECs与抗CD34抗体包被的不锈钢盘的粘附相比。

图7显示了内皮祖细胞与包被有抗CD34抗体或弹性蛋白原的不锈钢盘的粘附。但是，在细胞与不锈钢盘结合后对细胞进行的研究表明，与弹性蛋白原的粘附与散布在盘表面上的细胞有关。相反，对于用抗CD34抗体包被的不锈钢盘培养的内皮细胞来说，我们观察到了粘附，但是没有观察到细胞的散布。

发明详述

(i)概述

弹性蛋白的生物学性质和弹性蛋白信号传导途径在Li等的(1998)Journal of Clinical Investigation 102：1783-1787、Li等的(1998)Nature393：276-280、Karnik等的(2003)Matrix Biology 22：409-425、Karnik等的(2003)Development 130：411-423和Brooke等的(2003)Trends inCardiovascular Medicine 13：176-181中有提供，它们公开的内容在此以其全文引为参考。简单来说，这些和其它的参考文献证实了调节弹性蛋白的信号传导对平滑肌细胞和血管平滑肌细胞的影响。但是，迄今为止，利用弹性蛋白原及其生物活性片段来调节内皮细胞的粘附和迁移，还没有被认识到。

基于本申请中公开的发现，弹性蛋白原及其生物活性片段可以用于促进内皮细胞的粘附和/或迁移。该发现允许开发出了单独或与装置结合使用弹性蛋白原及其生物活性片段的体外方法。体外使用的例子包括了筛选分析以鉴定和/或定性保留了天然(例如全长的)弹性蛋白原的一种或多种功能活性的弹性蛋白原片段或肽模拟物。

该发现还允许开发出了使用弹性蛋白原或其生物活性片段的体内方法。体内使用的例子是促进内皮细胞与已经共价结合有弹性蛋白原或其生物活性片段的装置的粘附。在体内的情况下，可植入装置的内皮化(例如在放置在病人中之前或之后)可以帮助防止或减轻再狭窄和/或血栓形成。促进可植入装置的内皮化的能力是一个重要的进步，将增加许多种介入治疗方法中任何一种的潜在效能。既然目前使用和考虑的可植入装置和介入治疗方法引起了严重的血栓形成和/或再狭窄风险，本发明的方法和组合物将极大地降低这些过程所涉及的风险，从而增加它们的安全性和效能。

(ii)定义

为方便起见，在本说明书、实施例和随附的权利要求中使用的某些术语被收集在这里。除非另外特别定义，所有本文中使用的技术和科学术语都具有与本发明所属专业领域中的专业技术人员所通常理解的同样的意义。

本文中使用的冠词″一个″是指一个或一个以上(即至少一个)冠词所修饰的语法上的对象。例如″一种成分″意味着一种成分或一种以上成分。

本文中使用的“蛋白”是基本上由20种氨基酸中的任何氨基酸组成的聚合物。尽管“多肽”通常用于指相对大的多肽，“肽”通常用于指小的多肽，这些术语在本技术领域中的用法是重叠的，并且可以改变。

术语“肽”、“蛋白”和“多肽”在本文中可以互换使用。

术语“多聚核苷酸序列”和“核苷酸序列”在本文中也可以互换使用。

本文中使用的“重组”意味着蛋白来自于原核或真核表达系统。

术语“野生型”是指天然存在的编码蛋白或其一部分，或分别如其在体内正常存在的蛋白序列或其一部分的多聚核苷酸序列。

术语“突变体”是指生物体的遗传物质中的任何变化，特别是野生型多聚核苷酸序列中的变化(即缺失、置换、添加或改变)或野生型蛋白中的任何变化。术语“变异体”可以与“突变体”互换使用。尽管通常假定遗传物质中的变化将导致蛋白功能的变化，术语“突变体”和“变异体”是指野生型蛋白的序列中发生了变化，而不管该变化是改变了蛋白的功能(例如提高、降低、赋予了新的功能)还是对蛋白的功能没有影响(例如突变或变异是沉默的)。

本文中使用的术语“核酸”是指多聚核苷酸，例如脱氧核糖核酸(DNA)以及如果合适的话，核糖核酸(RNA)。术语也将被理解为同样包含了用核苷酸类似物制成的RNA或DNA类似物，以及可用于描述的实施方案中的单链(正义链或反义链)和双链多聚核苷酸。

本文中使用的术语“基因”或“重组基因”是指含有为多肽编码的开放阅读框架的核酸，包括外显子和(可选的)内含子序列。

本文中使用的术语“载体”是指能够运输其上连接的另一个核酸的核酸分子。优选的载体是能够自主复制和/或表达其上连接的核酸的载体。能够指导与其可操作连接的基因的表达的载体在本文中被称为“表达载体”。

当表达控制序列控制并调节了多聚核苷酸序列(DNA、RNA)的转录和翻译时，称为该多聚核苷酸与表达控制序列“可操作地连接”。术语“可操作连接”包括了在被表达的多聚核苷酸之前有适合的起始信号(例如ATG)，维持正确的阅读框架以允许多聚核苷酸序列在表达控制序列的控制下表达，以及产生由多聚核苷酸序列编码的所需多肽。

“转录调控序列”是遗传学术语，在本说明书中用于指诱导或控制与其可操作连接的蛋白编码序列的转录的核酸序列，例如起始信号、增强子和启动子。在某些例子中，重组基因的转录是在控制重组基因在希望进行表达的细胞类型中的表达的启动子序列(或其它转录调控序列)的控制之下进行的。另外也可以理解的是，重组基因可以在与控制天然存在形式的蛋白转录的转录调控序列相同或不同的转录调控序列的控制之下。

本文中使用的术语“组织特异性启动子”是指用作启动子的核酸序列、即调控与启动子可操作连接的选定的核酸序列的表达的核酸序列，它在特定组织的细胞中、例如神经来源的细胞如神经元细胞中、影响选定核酸序列的表达。该术语也涵盖了所谓的“渗漏”启动子，它主要调控一种组织中选定核酸的表达，但是在其它组织中也引起表达。

“同一性”是指两个肽或两个核酸分子之间的序列相似性。同一性可以通过比较每个序列中的位置来确定，所述序列为了比较而进行排列。当被比较的序列中的位置被同样的碱基或氨基酸所占据时，则分子在该位置上是一致的。序列间的同一性程度是序列共有的匹配的位置的数量的函数。

“嵌合多肽”或“融合蛋白”是编码多肽的第一个氨基酸序列与定义了结构域(例如多肽一部分)的第二个氨基酸序列的融合，其中该结构域对第一个多肽的任何结构域来说是外来的并且是基本上不同源的。嵌合蛋白中可以存在外来结构域，其在也表达第一个蛋白的生物体中发现的(虽然是在不同的蛋白中)，或者它也可以是不同种类的生物体所表达的蛋白结构的“种间”、“基因间”等融合。

本发明的“非人的动物”包括哺乳动物例如大鼠、小鼠、兔、绵羊、猫、狗、牛、猪和人之外的灵长动物。

在本文中的术语“分离的”对于核酸例如DNA或RNA来说，是指分别与大分子天然来源中的其它DNAs或RNAs分开的分子。本文中使用的术语“分离的”也指核酸或肽，在通过重组DNA技术生产的情况下基本上不含有细胞物质或培养基，在化学合成的情况下基本上不含有化学前体或其它化学物质。此外，“分离的核酸”意味着包含了在天然情况下不以片段存在、从而不能在天然状态下发现的核酸片段。

本文中使用的“增殖的”和“增殖”是指细胞经历了有丝分裂。

本文中使用的词组“肠胃外使用”和“通过肠胃外使用”是指除了肠道和局部使用之外的药物使用方式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、血管内、肌肉内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、气管内、皮下、角质层下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和灌注。

本文中使用的词组“全身使用”、“通过全身使用”、“外周使用”和“通过外周使用”意味着以直接进入中枢神经系统之外的方式使用化合物、药物或其它物质，以便它进入动物的系统中并且进入代谢和其它类似过程中，例如皮下使用。

本文中使用的词组“有效量”是指含有一种或多种本文描述的药剂的一种或多种药剂、物质或组合物的量，其对于在患者中产生某些所需效果来说是有效的。

本文中使用的词组“可药用的”是指那些在合理的医学判断范围内适合用于与人和动物的组织接触，而没有毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，具有合理的利益/风险比例的化合物、物质、组合物和/或剂型。

本文使用的词组“可药用的载体”意味着可药用的物质、组合物或媒介，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或胶囊化材料，它们参与携带或运输目标药剂从身体的一个器官或一部分至身体的另一个器官或其它部分。每种载体必须在可以与制剂中的其它成分相容的意义上是“可接受的”。

多肽、多肽片段或多肽变异体的功能等价物是那些保留了天然的或天然存在的多肽的生物学和/或免疫学活性的多肽。免疫活性是指诱导针对天然多肽所具有的抗原表位的抗体的产生的能力；生物学活性是指特定的天然多肽产生的除了免疫活性之外的抑制性或刺激性功能。在本发明中，示例性的生物活性包括但不限于：(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。其它示例性的生物活性包括与特定受体结合的能力、激活特定基因的转录的能力、抑制特定基因的转录的能力、与特定的辅助因子结合(例如直接或间接地结合)的能力、通过特定的信号传导途径促进信号传导的能力，以及通过另一个特定的信号传导途径抑制信号传导的能力。

变异的核酸或氨基酸序列可以是全长的，也可以是不全长的。本发明的核酸或蛋白的变异体包括但不限于含有与本发明的核酸或蛋白一致的区域的分子。在不同的实施方案中，变异体在与具有同样大小的核酸或氨基酸序列相比、或在与用本领域所熟知的计算机同源性程序进行排列的序列相比、或与其编码核酸能够与编码上述蛋白的序列的互补序列在严格的、中度严格的和低严格的条件下杂交的序列相比时，具有至少大约60％、65％、70％、75％、80％、83％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或99％以上的同一性。变异体也可以按照多肽间有多少残基不同进行描述。例如，变异体可以与给定的多肽序列具有6个氨基酸残基中1个残基的不同、6个氨基酸残基中2个残基的不同或6个氨基酸残基中3个残基的不同。

“同源核酸序列”或“同源氨基酸序列”或其变异体是指在核苷酸水平或氨基酸水平上具有上面讨论的一定程度的同一性的特征的序列。同源核苷酸序列编码那些为特定序列的同工型编码的序列。作为例如RNA的旁路剪接的结果，可以在同样生物体的不同组织中表达同工型。此外，不同的基因也可以编码同工型。同源核苷酸序列包括了为来自其它物种的多肽编码的核苷酸序列，这些物种包括但不限于脊椎动物，因此可以包括例如人、蛙、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、马和其它生物。同源核苷酸序列也包括但不限于这里提出的核苷酸序列的天然存在的等位变异和突变。但是，同源核苷酸序列不包括编码特定蛋白的那个核苷酸序列。同源核酸序列包括了那些编码保守的氨基酸置换(见下文)的核酸。

在本文中使用的某些示例性组合物包含、由或基本上由弹性蛋白原的氨基酸或核酸序列的所有或部分组成。在本文中使用的“弹性蛋白原”是指可以被弹性蛋白基因的全部或部分编码的蛋白的全部或部分。该术语也指弹性蛋白基因的拼接和蛋白酶水解产物。该术语也指由弹性蛋白基因编码的、合成生产的、或从天然存在的人或动物弹性蛋白来源纯化的弹性蛋白原蛋白和蛋白片段。术语弹性蛋白原或其生物活性片段在整个本申请中将被用来指任何基于上述的弹性蛋白的组合物。人弹性蛋白原的示例的核酸序列显示在SEQ ID NO：1中，氨基酸序列显示在SEQ ID NO：2中。其它示例的弹性蛋白原氨基酸序列显示在SEQ ID NO：3和4中。弹性蛋白原能够刺激弹性蛋白信号传导，而弹性蛋白信号传导的刺激具有一种或多种下列功能性结果，包括但不限于：.(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。用于本发明的方法和装置中的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段具有上述的天然弹性蛋白原的一种或多种功能活性。在一个实施方案中，由弹性蛋白原或其生物活性片段促进的粘附，(完全或部分地)依赖于整合蛋白α_vβ₃。

除了全长的弹性蛋白原之外，弹性蛋白原的生物活性片段也能刺激弹性蛋白信号传导。生物活性片段是指维持了全长蛋白的一种或多种功能属性的蛋白的给定部分。在本发明中，弹性蛋白原的生物活性片段保留了所有或部分的促进弹性蛋白信号传导的能力，因此导致了一种或多种弹性蛋白信号传导的功能性结果，包括但不限于：.(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。示例的弹性蛋白原的生物活性片段提供在SEQ ID NO：5中。另一个示例的弹性蛋白原的生物活性片段提供在SEQ ID NO：6中。片段可以通过任何方法包括合成方法制成。本发明不仅考虑到了弹性蛋白原的生物活性肽片段的使用，而且考虑到了肽模拟物(修饰的片段)的使用。示例的弹性蛋白原的肽模拟物是SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的肽模拟物。在一个实施方案中，由弹性蛋白原或其生物活性片段促进的粘附，(完全或部分地)依赖于整合蛋白α_vβ₃。

术语“抗增殖药剂”和“抗增殖化合物”在本申请中可以互换使用，是指任何抑制增殖的肽或非肽类药剂。本发明考虑到了本发明的组合物和装置可能有时将与作为适合于被治疗的特定指征的治疗方案的一部分的其它药剂同时或伴随使用。一种这类药剂包括抗增殖药剂。示例的抗增殖药剂包括但不限于卤代的嘌呤或嘧啶类似物(例如氟代的类似物)、大环内酯类、细胞骨架/微管去稳定剂、放射活性等。其它的非限制性的抗增殖药剂的例子包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、5′-脱氧-5-氟尿苷、5-氟尿苷、2′-脱氧-5-氟尿苷、氟代胞嘧啶、5-三氟甲基-2′-脱氧尿苷、alitretinoin(9-顺式视黄酸)、氨磷汀(amifostine)、蓓萨罗丁(bexarotene)(4-[1-(5，6，7，8-四氢-3，5，5，8，8-五甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸)、博来霉素、卡培他滨(capecitabine)(5′-脱氧-5-氟胞苷)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、克拉屈滨(cladribine)、阿糖胞苷、柔红霉素、多烯紫杉醇(docetaxel)、阿霉素、表柔比星(epirubicin)、雌氮芥、表鬼臼毒素吡喃葡糖苷、依西美坦(exemestane)(6-亚甲基雄烷-1，4-二烯-3，17-二酮)、氟拉达滨(fludarabine)、5-氟尿嘧啶、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、伊达比星(idarubicin)、伊立替康(irinotecan)、苯丙氨酸氮芥、氨甲蝶呤、米托蒽醌(mitoxantrone)、紫杉醇(paclitaxel)、喷司他丁、松龙苯芥、链脲霉素、替莫唑胺(temozolamide)、替尼泊苷、tomudex、拓扑替康(topotecan)、戊柔比星(valrubicin)(N-三氟乙酰阿霉素-14-戊酸盐)、长春瑞滨(vinorelbine)，以及上述物质的盐。其它的例子包括放线菌素D、细胞松弛素D、地塞米松、依维莫司(everolimus)、西罗莫司(sirolimus)、他克莫司(tacrolimus)、latrunculin A、雷帕霉素及其类似物例如ABT-578、卡维地洛(carvedilol)、FK506、紫杉醇、环孢霉素(cyclosporine)、喜树碱、去甲柔红霉素(carubicin)、链脲菌素、色霉素包括色霉素A3、克拉屈滨(cladribine)、秋水仙素、combretastatin、秋水仙胺、二甲叶酸(denopterin)、阿霉素、甲雄烷酮(dromostanolone)、依达曲沙(edatrexate)、依诺他滨(enocitabine)、环硫雄醇(epitiostanol)、福美斯坦(formestane)、香菇多糖、氯尼达明(lonidamine)、甲烯雌醇、美诺立尔(menogaril)、诺加霉素、去甲二氢愈创木酸、橄榄霉素例如橄榄霉素A、吡喃阿霉素(pirarubicin)、普卡霉素(plicamycin)、柏非霉素、松龙苯芥、嘌呤霉素、雷莫司汀(ranimustine)、利托霉素例如利托霉素A、替加氟(tegafur)、长春花碱、去乙酰长春酰胺和佐柔比星(zorubicin)。对于任何上述的抗增殖药剂来说，本发明同样考虑到了使用它们保留了所有或部分抗增殖活性的可药用的盐、酯、药物前体、类似物和保护的形式。另一类药剂包括膳食补充剂。另一类药剂包括beta-阻断剂和其它高血压药物。本发明考虑到了组合的治疗方法，其中包括了本发明的组合物和装置以及适合于被治疗的特定病症的其它治疗方案。但是，在某些实施方案中，本发明的组合物和装置的使用免除了对所有或部分前面推荐或医嘱的治疗方案的需要。

术语“附加”是指在氨基酸残基上添加一个或多个基团。该术语对在任何氨基酸残基上添加任何部分没有限制。该术语包括通过共价或非共价相互作用添加部分。

术语“N-末端氨基酸残基”是指多肽或肽的第一个氨基酸残基(1号氨基酸)。

术语“C-末端氨基酸残基”是指多肽或肽的最后一个氨基酸残基(n号氨基酸，其中n是肽或多肽中的残基总数)。

术语“氨基酸侧链”是除了-CH(NH₂)COOH部分之外的氨基酸部分，正如由K.D.Kopple在《肽和氨基酸》″Peptides and Amino Acids″，W.A.Benjamin Inc.，New York and Amsterdam，1966，第2和33页中所定义的那样；这样的常用氨基酸侧链的例子是-CH₂CH₂SCH₃(甲硫氨酸的侧链)、-CH₂(CH₃)-CH₂CH₃(异亮氨酸的侧链)、-CH₂CH(CH₃)₂(亮氨酸的侧链)或H-(甘氨酸的侧链)。

在某些实施方案中，用于本发明的申请中的氨基酸是可以在蛋白中发现的天然存在的氨基酸，或这些氨基酸的含有氨基和羧基基团的天然存在的合成或降解代谢产物。特别适合的氨基酸侧链包括从下列氨基酸的侧链中选择的侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。

术语“氨基酸残基”还包括本文所指的任何具体的氨基酸的类似物、衍生物和同类物，以及C-末端或N-末端被保护的氨基酸衍生物(例如用N-末端或C-末端保护基团修饰)。例如，本发明考虑到了使用其中的侧链被延长或缩短但同时仍然提供了用于环化的羧基、氨基或其它反应性前体官能团的氨基酸类似物、以及带有适当的官能团的变异的侧链的氨基酸类似物。例如，目标化合物可以含有氨基酸类似物例如氰丙氨酸、刀豆氨酸、黎豆氨酸、正亮氨酸、3-磷酸丝氨酸、高丝氨酸、二羟苯丙氨酸、5-羟色氨酸、1-甲基组氨酸、3-甲基组氨酸、二氨基庚二酸、鸟氨酸或二氨基丁酸。其它具有适合本发明的侧链的天然存在的氨基酸代谢物或前体可以被本技术领域的专业人员所识别，并包含在本发明的范围内。

当氨基酸的结构允许立体异构形式的存在时，本发明还包括了这些氨基酸的(D)和(L)立体异构体。本文的氨基酸和氨基酸残基的构型用适当的符号(D)、(L)或(DL)来指定，此外，当构型没有被指定时，氨基酸或残基可以具有(D)、(L)或(DL)构型。可以注意到本发明的某些化合物的结构中包含了不对称碳原子。因此可以理解从这种不对称性产生的异构体被包含在本发明的范围内。这些异构体可以通过经典的分离技术和空间上控制的合成以基本上纯的形式获得。对于本申请来说，除非明确注明相反的情况，否则所称的氨基酸都将被认为是包含了(D)和(L)立体异构体。

本文使用的“反转的”或“逆向的”肽序列是指共价键合的氨基酸残基(或其类似物或模拟物)的全部序列的部分，其中氨基酸骨架中正常的羧基到氨基的肽键形成方向已经被反转，使得当按照常规的从左到右的方向阅读时，肽键的氨基部分在羧基部分之前(而不是之后)。总体情况参见Goodman，M.和Chorev，M.Accounts of Chem.Res.1979，12，423。

本文描述的逆向肽包括(a)其中一个或多个氨基末端残基被转变为反(“rev”)方向的肽(因此在分子的最左边部分产生了第二个“羧基末端”)；以及(b)其中一个或多个羧基末端残基被转变为反(“rev”)方向的肽(因此在分子的最右边部分产生了第二个“氨基末端”)。在正常方向的残基和反方向的残基之间的界面处不能形成肽(酰胺)键。

因此，本发明的某些逆向肽化合物可以通过利用适当的氨基酸模拟部分使用逆向肽(逆向酰胺)键连接前面描述序列的两个邻近部分而形成。在上面的情况(a)中，二酮化合物的中心残基可以被方便地用于连接带有两个酰胺键的结构以获得肽模拟物结构。在上面的情况(b)中，二氨基化合物的中心残基同样可以被用于连接带有两个酰胺键的结构以形成肽模拟物结构。

此外，在这种化合物中逆向的键合一般需要转变被逆转的氨基酸残基的立体对映构型，以便将侧链的空间方向维持得与未逆转的肽相似。在肽的逆转部分中氨基酸的构型优选为(D)型，未逆转的部分的构型优选为(L)型。相反的或混合的构型，如果适合于最适化结合活性，也可以接受。

本发明的某些化合物可以以特定的几何或立体异构形式存在。本发明考虑到了所有这些化合物，包括顺式和反式异构体、R-和S-对映异构体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)异构体、其消旋混合物以及它们的其它混合物，这些都在本发明的范围内。其它的不对称碳原子可以存在于取代基中，例如烷基基团。所有这些异构体及其混合物都打算包含在本发明中。

如果需要例如本发明的化合物的特定的对映异构体，它可以通过不对称合成或通过用手性辅助试剂衍生来制备，在后一种情况下，将产生的非对映异构混合物分离，然后切开辅助基团以提供纯的所需要的对映异构体。此外，当分子含有碱性官能团例如氨基或酸性官能团例如羧基时，可以与适当的具有光学活性的酸或碱形成非对映异构盐，然后通过本技术领域所熟知的分级结晶或层析手段拆分如上形成的非对映异构体，然后回收纯的对映异构体。

对于本发明来说，化学元素与《化学和物理手册》(第67版，1986-87年)封二中的CAS版元素周期表中的一致。对于本发明来说，术语“碳氢化合物”被考虑到包含了所有具有至少一个氢和一个碳原子的容许的化合物。从广义的角度来说，容许的碳氢化合物包括无环的和有环的、分支的和未分支的、碳环的和杂环的、芳香族和非芳香族的有机化合物，它们可以是取代的，也可以是未取代的。

(iii)示例的基于弹性蛋白的组合物和方法

本发明提供了可以用于促进内皮细胞的粘附和/或迁移的组合物、方法和装置。具体来说，本发明提供了含有、或基本上由弹性蛋白原或其生物活性片段组成的组合物和装置。用于本发明的方法、组合物和装置的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段保留了天然弹性蛋白原的一种或多种功能/生物学活性。示例的生物学活性包括但不限于一种或多种下列的生物活性：(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。

多肽和肽片段：本发明提供了含有、或基本上由弹性蛋白原或其生物活性片段组成的组合物和装置。这些组合物和装置可以用于本发明的体内或体外方法中。

在某些实施方案中，组合物或装置含有弹性蛋白原多肽或其生物活性片段。这些多肽或片段可以含有野生型肽序列，也可以含有变异序列，变异序列可以被容易地构建和测试，以确保变异序列保留了天然多肽的一种或多种生物学活性。本领域的专业技术人员可以容易地制造含有与特定多肽具有至少60％、70％、75％、80％、83％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列的变异体，并鉴定能够激活弹性蛋白信号传导并保留天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性的变异体。为了进一步说明，本发明考虑到了含有与弹性蛋白原或其生物活性片段(例如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6)具有至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的变异体多肽。

弹性蛋白原的生物活性片段的变异体含有与天然弹性蛋白原的相应片段具有至少60％、70％、75％、80％、83％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的氨基酸序列。这些生物活性片段保留了全长弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。

此外，某些生物活性片段在天然弹性蛋白原中重复了多次。例如在SEQ ID NO：5中描述的六聚体序列在天然蛋白的环境中重复了多次。因此，本发明考虑到了含有或基本上由特定的生物活性片段的一个或多个重复组成的组合物和装置。例如，本发明考虑到了含有或基本上由SEQ ID NO：5中描述的六聚体序列的1、2、3、4、5、6或7个重复组成的组合物。此外，尽管在天然蛋白中C-末端片段没有重复，但本发明考虑到了含有或基本上由SEQ ID NO：6中描述的序列的1、2、3、4、5、6或7个重复组成的组合物。可以注意到，本领域的专业技术人员可以容易地制造和测试含有特定片段的多个重复的组合物，而不用进行过多的实验。

除了上面详细描述的多肽和片段之外，本发明也适用于含有为该多肽和片段编码的核苷酸序列的分离的核酸。本文中使用的术语核酸打算包含了等效的片段，其中该片段与衍生出它的全长核酸序列具有基本上相同的功能。等效的核苷酸序列将包含差别为一个或多个核苷酸置换、添加或缺失的序列，例如等位基因变异体；因此将包含与例如野生型弹性蛋白原的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)不同的序列。等效的序列包括那些由于遗传密码的简并性而与已知的野生型或变异体序列不同的序列。等效的序列还可以包括在严格条件下(即相当于在大约1M的盐中在比形成的DNA双链体的熔点温度(Tm)低大约20-27℃的条件下)与基于弹性蛋白的组合物的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。其它的严格杂交条件的例子包括在65℃下用0.2X SSC的清洗步骤。

在一个实施例中，本发明考虑到了由或可以由核酸序列编码的组合物，其在包括65℃下用0.2X SSC的清洗步骤的严格条件下与SEQID NO：的核酸序列杂交。

可以在本文描述的方法中使用的等效的核苷酸序列也包括了与给定的核苷酸序列具有至少60％同一性的序列。在另一个实施方案中，核苷酸序列与编码基于弹性蛋白的组合物的天然序列的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％的同一性，并且保留了天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。

由于遗传密码的简并性而具有与编码特定的基于弹性蛋白的组合物的核苷酸序列不同的序列的核酸，也在本发明的范围内。这些核酸编码了功能上等效的肽，但是由于遗传密码的简并性而与本技术领域中已知的野生型序列在序列上不同。例如，许多氨基酸由一种以上的三联体密码子指定。指定同样氨基酸的密码子、或称同义密码子(例如CAU和CAC，每个都编码组氨酸)，可以产生不影响氨基酸序列的“沉默”突变。但是，预计导致氨基酸序列发生变化的DNA序列多态性也将存在。本领域的专业技术人员将意识到，由于天然等位基因变异，在为具有天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性的多肽编码的核酸的一个或多个核苷酸(最多为核苷酸的大约3-5％)中的这些变异，可能存在于给定物种的个体之中。

肽模拟物：在另外的实施方案中，本发明考虑到了含有肽模拟物的组合物(在本文中可以互换地指称基于弹性蛋白的组合物的模拟物)。优选的肽模拟物保留了天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。肽模拟物是基于肽和蛋白、或从肽和蛋白衍生的化合物。本发明的肽模拟物可以通过用非天然氨基酸对已知的基于弹性蛋白的组合物的氨基酸序列进行结构修饰、构象限制、同型空间配位置换等而获得。目的肽模拟物组成了肽类和非肽类合成结构之间的连续的结构空间。

示例的肽模拟物可以具有例如不能被水解(例如对蛋白酶或其它降解相应的肽的生理条件具有增加的稳定性)、具有增加的特异性和/或效力、具有增加的细胞透过性以用于细胞内定位等属性。出于说明的目的，本发明的肽类似物可以使用例如苯并二氮杂草(例如参见Freidinger等的《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistry and Biology，G.R.Marshall主编，ESCOM Publisher：Leiden，Netherlands，1988)、置换的γ内酰胺环(Garvey等的《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistryand Biology，G.R.Marshall主编，ESCOM Publisher：Leiden，Netherlands，1988，123页)、C-7模拟物(Huffman等的《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistry and Biologyy，G.R.Marshall主编，ESCOM Publisher：Leiden，Netherlands，1988，105页)、keto-methylene拟肽(Ewenson等的(1986)J Med Chem 29：295；以及Ewenson等的《肽：结构和功能》(第9届美国肽研讨会会议录)，Peptides：Structure and Function(Proceedings ofthe 9th American Peptide Symposium)Pierce Chemical Co.Rockland，IL，1985)、β-转角二肽核心(Nagai等的(1985)Tetrahedron Lett 26：647；和Sato等的(1986)J Chem Soc Perldn Trans 1：1231)、β-氨基醇(Gordon等的(1985)Biochem Biophys Res Commun126：419和Dann等的(1986)Biochem Biophys Res Commun 134：71)、二氨基酮(Natarajan等的(1984)Biochem Biophys Res Commun 124：141)以及亚甲基氨基修饰物(Roark等的《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistry and Biology，G.R.Marshall主编，ESCOM Publisher：Leiden，Netherlands，1988，134页)来产生。对于普遍情况来说也可以参见《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistry and Biology，G.R.Marshall主编，ESCOM Publisher：Leiden，Netherlands，1988，中的第三章：分析和合成方法，Session III：Analytic and synthetic methods。

除了可以进行各种侧链置换来产生目的肽模拟物之外，本发明还特别考虑到了使用肽二级结构的构象限制模拟物。对于肽的酰胺键已经开发了大量的代用品。经常使用的酰胺键的代用品包括下列组：(i)反式烯烃；(ii)氟代烯；(iii)亚甲基氨基；(iv)磷酰胺以及(v)磺酰胺。

代用品的例子

反式烯烃氟代烯烃亚甲基氨基

磷酰胺磺酰胺

此外，可以使用基于肽骨架的更实质性修饰的肽模拟物。这种类型的肽模拟物包括(i)反-转(retro-inverso)型类似物，以及(ii)N-烷基甘氨酸类似物(所谓的类肽)。

类似物的例子

反-转型肽 N-烷基甘氨酸

此外，组合化学的方法、例如PCT申请WO 99/48897、被引入，影响了新的肽模拟物的开发。例如所谓的“肽成型”策略的一个实施方案聚焦于随机产生包含了大量肽键置换的肽类似物文库。

在示例的实施方案中，肽模拟物可以衍生成肽的反-转型肽类似物。反-转型肽类似物可以按照本领域中所熟知的方法制造，例如Sisto等的美国专利4,522,752中描述的方法。总的准则是一般对最易于被蛋白酶水解的位点进行改变，而不易于水解的酰胺键可选择用于模拟物切换。最终的产物或其中间体可以通过HPLC纯化。

在另一个说明性的实施方案中，肽模拟物可以衍生成肽的反-对映异构类似物，例如从说明性的Val Gly Val Ala Pro Gly肽衍生的示例性反-对映异构肽类似物：

NH₂-(d)Gly-(d)Pro-(d)Ala-(d)Val-(d)Gly-(d)Val-COOH

象这样的反-对映异构类似物可以使用可商业购买的D-氨基酸(或其类似物)和标准的固相或液相肽合成技术来合成。例如在优选的固相合成方法中，氨基被适当保护(用叔丁氧羰基，Boc)的残基(或其类似物)被共价结合在固体支持物例如氯甲基树脂上。树脂用二氯甲烷(DCM)洗涤，通过用DCM中的TFA处理来除去BOC保护基团。树脂被清洗并中和，然后通过用二异丙基碳二亚胺结合引入下一个Boc保护的D-氨基酸。将树脂再次清洗，对于每个剩余的氨基酸轮流重复这种循环。当被保护的反-对映异构肽的合成完成时，移除保护基团，通过用氢氟酸/苯甲醚/二甲基硫醚/苯甲硫醚处理将肽从固体支持物上切下。最终的产物通过HPLC纯化，产生纯的反-对映异构类似物。

在另一个说明性的实施方案中，反式烯烃衍生物可用于制作任何目的多肽。反式烯烃类似物可以按照Y.K.Shue等(1987)TetrahedronLetters 28：3225的方法以及本技术领域所熟知的其它方法合成。应该认识到的是，根据所用试剂的本质，可能需要对引用的方法或其它可用的方法进行改变。

将通过上述方法合成的拟二肽与其它的拟二肽连接，以产生在酰胺官能团位置上被几个烯烃官能团置换的肽类似物，也是可能的。

另一类肽模拟物衍生物包括膦酸酯衍生物。这些膦酸酯衍生物的合成可以从现有的合成流程适当修改而来。参见例如Loots等的《肽：化学和生物学》，Peptides：Chemistry and Biology，(Escom SciencePublishers，Leiden，1988，118页)、Petrillo等的《肽：结构和功能》，Peptides：Structure and Function(第9届美国肽研讨会会议录，PierceChemical Co.Rockland，IL，1985)。

许多其它的肽模拟物结构在本技术领域内是已知的，可以被容易地改编以用于设计基于弹性蛋白的组合物肽模拟物。例如，肽模拟物可以将1-氮杂二环[4.3.0]壬烷代用品(参见Kim等的(1997)J.Ore.Chem.62：2847)、或N-酰基piperazic acid(参见Xi等的(1998)J.Am.Chem.Soc.120：80)、或2-取代的哌嗪基团作为受限制的氨基酸类似物整合进去(参见Williams等的(1996)J.Med.Chem.39：1345-1348)。在其它实施方案中，某些氨基酸残基可以用芳基或二芳基部分、例如单环或二环芳香族或杂环芳香族核、或二芳香、芳香、杂环芳香或二杂环芳香核取代。

目的肽模拟物可以通过例如组合合成技术与高通量筛选技术相结合来最适化，并可以被进一步测试以确保肽模拟物保留了天然弹性蛋白原的一种或多种生物学活性。

本发明考虑到了促进内皮细胞的粘附和/或迁移的方法、组合物和装置。本发明考虑到了使用单一的弹性蛋白组合物(例如弹性蛋白原多肽，单一生物活性片段、单一肽模拟物)，以及同时或依次使用一种以上的弹性蛋白组合物。因此，本发明考虑到了弹性蛋白原多肽和一个或多个弹性蛋白原片段或肽模拟物被同时或依次使用的实施方案。本发明考虑到了其中使用了两种或以上弹性蛋白原片段或肽模拟物的实施方案。

本发明提供了促进内皮细胞粘附和/或迁移的方法、组合物和装置。弹性蛋白原、或其一种或多种生物活性片段，可以被用来促进内皮细胞的粘附和/或迁移。在某些实施方案中，弹性蛋白原或其生物活性片段被共价连接在装置上，而弹性蛋白原或其生物活性片段促进了内皮细胞与金属装置的粘附。本发明考虑到了使用下列任何物质促进内皮细胞粘附的方法：弹性蛋白原、其生物活性片段、肽模拟物、一种以上其生物活性片段、一种以上肽模拟物、或全长弹性蛋白原与一种或以上其生物活性片段或肽模拟物的组合。

本发明提供了促进内皮细胞粘附和/或迁移的方法、组合物和装置。示例的内皮细胞包括但不限于内皮干细胞。本发明的方法、组合物和装置可以在体外或体内使用。装置的内皮化在体内可以发生在装置安放后。当内源的内皮细胞粘附于装置时，发生体内内皮化。装置的内皮化也可以在装置安放前在体外发生。换句话说，在安放前，装置可以用内皮细胞、例如来自病人的内皮细胞预先接种。此外内皮化也可以在装置安放后发生。

弹性蛋白对内皮细胞的迁移和增殖的影响提供了独特的治疗优势，可以防止某些与血管内装置例如冠状动脉支架的放置相关的并发症。新近采用的冠状动脉支架随之带来了原位血栓形成比率的提高，而一旦支架的金属支柱被内皮化，血栓形成的比率就急剧降低。这就要求使用多种抗血小板药剂例如阿司匹林和氯吡格雷(clopidogrel)，直到这种内皮化发生。尽管对这些抗血小板药剂通常具有较好的耐受性，但当需要外科操作、或当病人患有例如心房纤维性颤动这样的需要其它抗血凝方法、例如抑制维生素K依赖性凝血因子的疾病时，它们的使用可能引起治疗的两难困境。促进血管内装置的更快速的血管内内皮化的物质，不仅可以减少原位血栓形成的比率，而且能够潜在地降低双重抗血小板疗法所必需的时间。

因此，本发明提供了减少血栓形成的方法。本发明还提供了减少抗血小板疗法所需的治疗时间的方法。

冠状动脉支架放置的另一种并发症是随后的平滑肌细胞过度增殖以及支架内的再狭窄，特别是在高危个体例如患有糖尿病的个体中。为了试图与再狭窄抗争，已经开发出了药物流出支架平台。通过将细胞毒性药剂排出，药物流出支架已经很大程度上克服了再狭窄问题，并将介入心脏病学的领域扩展到包括了高风险病变，而它们以前一直属于胸心血管外科的领域。但是，药物流出支架也可能增加可能出现原位血栓形成的时间框架，而支架内血栓形成有时会发生在药物流出支架(DES)被放置≥1年以后。这可能是由于随着细胞毒性药剂排出的延长而发生的内皮化的延迟而产生的。

弹性蛋白原或其生物活性片段的使用，可以为克服这两种限制提供机会。这里我们证实了弹性蛋白促进内皮细胞的迁移。这种加速的迁移可以通过周围内皮细胞的迁移/侵入导致装置更加快速的内皮化。此外，我们证实了带有共价结合的弹性蛋白的不锈钢表面与同样的光秃的金属表面相比，明显增加了内皮细胞和内皮祖细胞的粘附。此外，粘附的内皮细胞在粘附到完整的内部弹性薄层(lamina)后，细胞质扩展。由于弹性蛋白原及其生物活性片段具有促进内皮细胞的粘附和/或迁移的能力，因此这些多肽可以用于减少血栓形成和再狭窄的方法和装置中。多肽可以单独使用，也可以与其它的装置或疗法组合使用。

在某些实施方案中，本发明提供了使用弹性蛋白原(或片段)与一种或多种其它促进粘附的试剂的组合促进内皮细胞粘附的方法。例如，弹性蛋白原(或片段)可以与抗CD34抗体同时或依次使用。在某些实施方案中，本发明提供了使用基于弹性蛋白的组合物和抗CD34抗体两者的方法和装置。

前面我们已经描述了弹性蛋白对平滑肌迁移和分化的影响，并证实了弹性蛋白外壳减少支架内内膜增生的能力。用弹性蛋白包被的不锈钢装置不仅可以快速内皮化，而且具有减少随后的内膜增生的附加好处。

前面对安放支架后血管内血栓形成的描述提供了具体的例子，说明了与将任何装置安放在身体或管腔中有关的普遍性的问题。血栓形成是与支架、导管、金属丝、分流通管以及其它管腔内装置的安放有关的问题，而不论装置是放置在血管内还是在其它类型的管道内。此外，血栓形成是与较大的装置、包括心脏复律器-除纤颤器、起搏器、胸管、心室辅助装置、通气管、专利卵圆孔封闭装置等的放置有关的问题。血栓形成的危险通常需要抗血小板或抗血凝处理，这增加了这些过程的总体风险。总的来说，与血栓形成有关的风险极大地影响了大量疾病和病症包括但不限于心血管病症的介入治疗。

在某些实施方案中，能够有效促进内皮细胞粘附的弹性蛋白原或其生物活性片段的量，是在生理相关的流速和压力条件下足够促进和维持内皮细胞的粘附的量。这种生理相关的条件是在动脉或静脉中遇到的流速和压力条件，或在其它身体管道中遇到的流体流速和压力条件。使用在动脉和/或静脉血流和压力的生理条件下、或在其它身体管道中遇到的流速和压力条件下能够有效维持粘附的量的弹性蛋白原或其生物活性片段，是在体内有效使用弹性蛋白原组合物和连接有弹性蛋白原组合物的装置的重要步骤。

在某些实施方案中，用于促进粘附和/或迁移的弹性蛋白原或其生物活性片段的量，是在生理相关条件下有效促进和维持内皮细胞的粘附的量。例如与装置共价结合的弹性蛋白原或其生物活性片段的量包括了在生理相关条件下有效促进和维持内皮细胞的粘附的量。示例的有效量是至少大约100ng/平方厘米、至少大约150ng/平方厘米、或至少大约200ng/平方厘米装置表面。其它示例的有效量是至少大约250ng/平方厘米、至少大约275ng/平方厘米、或至少大约300ng/平方厘米。其它示例的有效量是至少大约310ng/平方厘米、至少大约325ng/平方厘米、至少大约350ng/平方厘米、至少大约375ng/平方厘米、或至少大约400ng/平方厘米。其它示例的有效量是至少大约450ng/平方厘米、至少大约500ng/平方厘米、至少大约550ng/平方厘米、至少大约600ng/平方厘米、至少大约625ng/平方厘米、或至少大约650ng/平方厘米、或至少大约700ng/平方厘米。本发明认识到并考虑到了在生理相关条件下有效促进和维持粘附的量可以依赖于装置被放入的具体管道、以及病人的疾病状态或生理而变化。此外，有效量可以依赖于装置的材料而变化，因为某些材料比其它材料更容易形成血栓。例如，金属特别容易形成血栓，放置金属装置后的血栓形成风险比放置其它材料制成的装置后的血栓形成风险高。本领域的专业技术人员可以确定治疗特定病人的最佳条件。

示例的装置可以用多种材料中的任何材料制成或包被。正如在本文中详细描述的那样，本发明考虑到了将弹性蛋白原或其生物活性片段与事实上任何在使用时被放置在人或动物身体的管道中的装置结合。示例的材料是在制造医疗装置中典型使用的生物相容性材料。例如，装置可以用金属、塑料、硅酮、涤纶织物、PTFE或它们的衍生物或合金制成或包被。目的多肽可以共价结合或交联到装置表面上。将多肽共价结合到固体表面的方法在本技术领域内是熟知的。本文提供了一个例子。但是，其它本领域现有的将多肽结合到表面的方法同样也可以考虑，并可以容易地使用。本领域的专业技术人员可以根据被结合的蛋白的浓度以及需要进行结合的装置表面的本质，在各种不同的化学和方法中选择。

(iv)筛选方法

本申请描述了使用含有弹性蛋白原或其生物活性片段的组合物促进内皮细胞和内皮祖细胞的粘附和迁移的方法和组合物。由于提供有效的装置、方法和组合物以防止和/或减少再狭窄和血栓形成的重要性，本发明认识到了它们在筛选中鉴定能够用于促进内皮细胞的粘附和/或迁移的弹性蛋白原变异体多肽、弹性蛋白原生物活性片段以及肽模拟物的用处。用本发明的方法鉴定和/或定性的示例的片段、变异体和肽模拟物保留了一种或多种下列的天然弹性蛋白原的生物学活性：(i)在体外促进内皮细胞的粘附；(ii)在体内促进内皮细胞的粘附；(iii)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附；(iv)在体外促进人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)的粘附；(v)在体外促进内皮细胞的迁移；(vi)在体外促进人主动脉内皮细胞(HuAEC)的迁移；(vii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的粘附；(viii)在体外促进A2058人黑素瘤细胞的迁移；(ix)在体外促进人微管内皮细胞(HMVEC)的粘附。通过本发明的筛选方法鉴定的变异体、片段和肽模拟物然后可以被进一步分析，以确定它们是否可以在体内用于治疗或防止再狭窄和/或血栓形成。

考虑的筛选方法包含筛选单个候选多肽以及多肽文库。此外，筛选方法可以以高通量分析的方法进行。

在本发明中，可以在培养的内皮细胞或内皮细胞系中进行基于细胞的筛选。示例的内皮细胞或细胞系可以来自于任何物种，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔、牛、猪、人之外的灵长类动物等。此外，示例的内皮细胞包括内皮祖细胞或转化的内皮细胞系。在非限制性的例子中，筛选可以在人主动脉内皮细胞(HuAECs)或人微管内皮细胞(HMVECs)的培养物中进行。

不论使用何种具体的细胞类型，细胞培养物都可以与一种或多种候选多肽接触，并分析细胞的粘附和/或细胞迁移。作为对照，可以将候选多肽的效果与细胞在缺少多肽或存在载体例如BSA的情况下的行为进行比较。使用该方法，可以鉴定和/或定性潜在有用的多肽变异体、片段或肽模拟物。具体来说，与细胞在缺少多肽或只存在载体的情况下的行为相比能够促进内皮细胞的粘附和/或迁移的多肽，是可能在本发明的方法中有用的多肽。这样的多肽可以使用其它的体外或体内分析方法进一步分析。

不论使用了何种方法鉴定和/或定性弹性蛋白原多肽变异体、片段或肽模拟物，被鉴定为在体外促进内皮细胞粘附和/或迁移的多肽都具有多种体外或体内应用。因此，本发明还考虑到了通过本发明的筛选方法鉴定到的多肽的应用。鉴定到的基于弹性蛋白的组合物可以单独使用或与其它药剂组合使用，或者可以配制在可药用的载体中。

本发明还考虑到了测试各种结合了弹性蛋白原或肽片段的装置的效能的方法。例如，由各种材料(例如塑料、金属、PTFE、硅酮)制成的装置可以通过交联或共价键用有效量的弹性蛋白原或生物活性片段包被。包被的装置可以插入到动物模型的管道中。例如，猪通常被用做心血管适应症的动物模型。包被的装置可以被放入猪的动脉或静脉中。被植入的装置的血栓形成效应可以与放置在对照动物的动脉或静脉中的光秃的金属装置的血栓形成效应相比。因为金属一般是血栓形成最强的装置材料，因此光秃的金属对照物的使用代表了装置血栓形成的最高水平。

成像可以被用来观察被植入的装置。在实验后的某些时间点，可以取出装置并成像，以评估各种包被的装置与光秃的金属装置相比的相对内皮化。

使用其它管道和其它动物模型也可以进行同样的实验。此外，也可以使用受伤的或患病的动物进行实验。在医疗装置被植入患病或受伤动物的情况下，患病动物的使用可以为血栓形成过程提供更准确的模型。

(v)给药核酸、蛋白、化学化合物和试剂的药物组合物的方法

本发明还考虑到了含有弹性蛋白原多肽及其生物活性片段的药物组合物。在一个实施方案中，含有弹性蛋白原多肽及其生物活性片段的药物组合物按照常规的药物化合技术配制。参见例如《药物学》(第18版)Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.(1990，MackPublishing Co.，Easton，PA)。本发明的药物制剂可以含有活性药剂或活性药剂的可药用的盐。这些组合物除了活性药剂外，还可以包含可药用的赋形剂、载体、缓冲液、稳定剂或其它本技术领域已知的材料。这些材料应该是无毒的，并不干扰活性药剂的效能。优选的药物组合物是非热原性的。另外优选的药物组合物是无抗原性的。根据给药的途径、例如静脉内、血管内、口服、鞘内、神经弓上、或肠胃外、透过皮肤、通过肺部等，载体可以采取多种不同的形式。此外，载体适合于将弹性蛋白原多肽或其生物活性片段共价结合到金属装置上。

适合的载体的说明性的例子是水、盐水、葡萄糖溶液、果糖溶液、乙醇或动物来源、植物来源或合成来源的油。载体也可以含有其它的成分，例如防腐剂、悬浮剂、增溶剂、缓冲液等。

本发明的药物组合物包含了装置。这样的装置与含有弹性蛋白原或其生物活性片段的组合物共价结合。弹性蛋白原组合物也可以与装置表面交联。包被的装置适合于给药到人或动物体内(例如插入、植入、投送)。包被的装置可以或选被FDA批准用于一种或多种适应症。

示例的装置实际上可以是适合于特定适应症的任何形状或大小的金属装置。示例的金属可以由本领域的专业技术人员选择，包括但不限于不锈钢、外科用钢、钛、金、银、铂、镍钛诺、铝、镍以及其它适合于植入人或动物身体的金属和金属合金。其它示例的装置用塑料、硅酮、涤纶织物、PTFE或它们的衍生物或组合制成或包被。

示例的装置包括但不限于支架、导管、金属丝或其它管腔内装置。其它的示例性装置从包括分流通管、胸管、专利卵圆孔封闭装置、心脏复律器-除纤颤器、起搏器、血管内移植物、机械心脏、机械心脏瓣膜、心室辅助装置和通气管。这些装置可以通过静脉内、血管内、动脉内、口部、直肠、外科、尿道进行投送，也可以通过本技术领域已知的适合于投送特定装置的其它投送方法进行投送。

本领域的专业技术人员将会容易地认识到，血栓形成和再狭窄是不仅与心血管疾病、而且与其它的堵塞性身体管道疾病和病症的治疗相关的需要面对的问题。此外，血栓形成是与任何医疗装置的植入相关的潜在的问题，不论使用医疗装置进行治疗的是什么适应症。因此，本发明考虑到了在各种身体管道以及涉及各种疾病适应症使用的方法和装置。例如，示例的身体管道包括但不限于动脉、静脉、总胆管、胰腺导管、肾管、食管、气管、尿道、膀胱、子宫、卵巢管、输尿管、输精管、前列腺管或淋巴管。其它适合于非心血管适应症的特定装置包括但不限于胆囊支架、气管内支架、膀胱排泄导管、大脑-腹膜分路导管、透析导管、用于腹膜透析的移植物或导管等。简单来说，本发明基于认识和理解到，实际上每种涉及将装置放置于人或动物身体中的医疗干预，不论是暂时的还是永久的，都将产生血栓形成的风险。因此，本发明提供了可以作为事实上任何这种医疗干预的一部分的方法和组合物，以降低血栓形成的风险。

本发明还提供了包括本发明的药物组合物、装置和相关试剂盒的物品的生产。本发明涵盖了任何类型的包含了本发明的药物组合物的物品，但是生产的物品一般是容器，优选带有标签以标明其中包含的组合物，以及使用组合物和/或装置的说明书。

在前述的任何一方面的另一个实施方案中，本发明考虑到了用弹性蛋白原或其生物活性片段包被的装置，还可以用内皮细胞预先包被(在植入人或非人患者之前包被)。在这种实施方案中，内皮细胞或内皮祖细胞(例如从相同的病人或从相关或不相关的供体获得的)将离体被粘附到弹性蛋白原包被的装置上。然后将这些装置植入病人。不受理论的束缚，一旦植入体内，病人自身的细胞也可能粘附到装置上。但是，不论在体内是否发生进一步的内皮细胞粘附，装置已经用内皮细胞或内皮祖细胞包被，从而降低或防止了再狭窄或血栓形成。

本领域的专业技术人员将会认识到用来自病人之外其它来源的内皮细胞离体接种装置，可能在移植后引起免疫反应。因此，在一个实施方案中，本发明考虑到了同时使用抗排斥药物。

本发明包括预防或治疗与需要植入医疗装置的任何心血管或其它病症的治疗相关的再狭窄或血栓形成的方法。示例的病症包括心血管疾病、堵塞性血管疾病等。例如，本发明考虑到了在动脉粥样硬化、再狭窄、血管旁路移植狭窄、移植动脉病、动脉瘤和切除治疗后，预防或治疗再狭窄或血栓形成的方法。此外，本发明考虑到了在从总胆管、胰腺导管、食管、气管、尿道、膀胱、子宫、卵巢管、输卵管、输精管、前列腺管、泪管和淋巴管中选择的管道的治疗后，预防或治疗再狭窄或血栓形成的方法。此外，本发明认识到病人通常需要安放装置以作为多种疾病和病症的治疗的一部分。例如，事实上患有任何疾病、损伤或病症的病人都可能需要被放置在呼吸机上。在某些病人的情况下，置于呼吸机上可能是治疗的一个长期部分。例如，患有ALS或严重脊柱损伤、特别是发生在脊髓高位上的损伤的病人，可能需要在呼吸机上长期维持。另一个例子，透析的病人可能需要长期使用腹膜导管。本发明考虑到了用于减少或防止在与任何疾病、病症或损伤的治疗相关的装置放置后发生的血栓形成的方法、组合物和装置。

不论本发明的组合物是在体外还是体内使用，也不论它们是否是共价连接到装置上，本发明考虑到了本发明的组合物可以方便地用生物可接受的介质、例如水、缓冲盐水、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)或其适当的混合物进行配制以便使用。

在选定的介质中活性成分的最适浓度可以按照药剂师所熟知的方法凭经验确定。本文中使用的“生物可接受的媒介”包括对于一种或多种药剂的所需给药途径来说可能是适合的溶剂、分散媒介等。用于药物活性物质的介质的使用在本技术领域中是已知的。除了就常规的媒介或药剂来说与特定药剂或药剂组合的活性不相容之外，已经考虑了它在本发明的药物制备中的应用。包含了其它蛋白的适合的载体及其制剂在《Remington′s药物学》一书(Remington′s PharmaceuticalSciences.Mack Publishing Company，Easton，Pa.，USA 1985)中有描述。这些媒介包括了可注射的“沉淀组合物”。

导入方法也可以通过生物相容的装置投送来提供。适合于投送目的药剂的生物相容的装置包括管腔内装置，例如支架、金属丝、导管、外套等。但是，给药并不限于通过生物相容的装置投送。正如本文详细描述的那样，本发明考虑到了大量给药途径和投送方法中的任何一种。

有效量或剂量水平依赖于多种因素，包括所使用的具体的一种或多种药剂的活性、给药途径、给药时间、所使用的特定药剂的排泄速度、治疗周期、与所用的特定药剂组合使用的其它药物、化合物和/或材料、动物的年龄、性别、体重、病症、总的健康情况和以前的医疗史等在医学领域内所熟知的因素。

药剂可以单独给药，也可以作为药物制剂(组合物)给药。该药剂可以配制成给药剂型，以任何方便的方式给药于人医学或兽医。在某些实施方案中，药物制品中包含的药剂自身可以是有活性的，也可以是前体药物，例如能够在生理环境中被转化为活性化合物。

这些组合物也可以含有佐剂，例如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可以通过加入各种抗细菌和抗真菌药剂，例如对羟苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚山梨酸等来确保防止微生物的活动。也可以合需地在组合物中包含等渗试剂，例如糖、氯化钠等。此外，可注射的药物形式的延长的吸收，可以通过加入延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达成。

实施例

现在已经对本发明进行的大略的描述，通过参考下面的实施例，本发明将更容易被理解，包含这些实施例仅仅是为了说明本发明的某些特点和实施方案，并不是为了对本发明进行限制。

实施例1：弹性蛋白原促进内皮细胞的粘附

图1显示了纤连蛋白和弹性蛋白原对CHO细胞、人胚胎肾细胞(HEK 293)、人主动脉平滑肌细胞(HuAoSMC)和人主动脉内皮细胞(HuAEC)的粘附的影响。将细胞铺在用0.1％BSA(对照)、10ug/ml纤连蛋白(FN)或10ug/ml重组弹性蛋白原的培养平板上，然后分析与包被物质的粘附。

所有的四种被研究的细胞类型都吸附于纤连蛋白。相反，HuAECs、以及在较小程度上HuAoSMCs，能够吸附于弹性蛋白原。但是，CHO细胞和HEK 293细胞都不吸附于弹性蛋白原。这些结果表明内皮细胞和平滑肌细胞吸附于弹性蛋白原。但是，和细胞与纤连蛋白的结合不同，细胞与弹性蛋白原的结合有某种细胞类型的特异性。例如，图1显示了吸附纤连蛋白的CHO细胞和HEK 293细胞不吸附弹性蛋白原。注意在这些实验中使用的全长的重组弹性蛋白原显示在SEQ ID NO：4中。具体来说，这些实验使用缺少天然信号序列的重组人弹性蛋白原进行。此外，蛋白被工程化，使其在N-末端有10个组氨酸标签，后面是一个因子Xa切割位点。在这些实验中使用的人弹性蛋白原蛋白的总长度是706个氨基酸残基。

图1中显示的结果在图2中用图形进行了描述。图2显示出弹性蛋白原促进了HuAECs的粘附。这种用每个孔结合的细胞数量进行度量的细胞粘附，可以与用纤连蛋白或胶原蛋白时观察到的相比。

为了确定整合蛋白的每种组合是否参与了细胞与纤连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白原包被的孔的粘附，在将细胞暴露于包被的表面之前，将内皮细胞与25μg/ml的免疫球蛋白G(IgG，对照)或25μg/ml的抗α_vβ₃或抗α₂β₁阻断抗体一起保温。与抗α_vβ₃或抗α₂β₁抗体的预保温没有明显降低内皮细胞与纤连蛋白或胶原蛋白包被的表面的粘附。但是，通过将细胞与抗α_vβ₃阻断抗体保温，内皮细胞与弹性蛋白原包被的孔的粘附被阻断了超过50％。这表明弹性蛋白原与整合蛋白α_vβ₃的结合对于内皮细胞与弹性蛋白原包被的表面的吸附有非常重要的贡献。

实施例2：弹性蛋白原及其生物活性片段促进了内皮细胞的迁移

图3用图形概述的结果证实了弹性蛋白原促进内皮细胞的迁移。测定了HuAECs向BSA、纤连蛋白和重组弹性蛋白原的迁移。重组的弹性蛋白原促进内皮细胞的迁移。此外，弹性蛋白原促进细胞迁移的水平可以与纤连蛋白的水平相比。

我们还评估了弹性蛋白原的两种生物活性片段促进内皮细胞迁移的能力，这些结果也概述于图3中。我们分析了六聚物VGVAPG.。该六聚物序列在全长的弹性蛋白原蛋白中重复了多次。此外，六聚物的单一重复以及六聚物的多个重复，已经显示出保留了全长弹性蛋白原蛋白的至少某些生物活性。我们还分析了弹性蛋白原蛋白17个氨基酸残基的C-末端片段。该17个氨基酸残基被描述在SEQ ID NO：6中(IFPGGACLGKACGRKRK)。

正如在图3中概述的那样，六聚物序列和C-末端17个氨基酸残基片段促进了内皮细胞的迁移。在该分析测试中，片段的功能一样好。此外，片段促进内皮细胞的迁移与全长的弹性蛋白原一样好，甚至可能更好。

实施例3：弹性蛋白原及其生物活性片段促进A2058人黑色素瘤细胞的粘附和迁移

图4显示了纤连蛋白、弹性蛋白原及弹性蛋白原的生物活性片段对A2058人黑色素瘤细胞的粘附的影响。分析了A2058细胞对用BSA(对照)、纤连蛋白、弹性蛋白原或对应于单一重复的六聚物序列VGVAPG的弹性蛋白原的生物活性片段包被的基材的粘附。与和BSA的粘附相比，A2058细胞粘附于用纤连蛋白、弹性蛋白原或弹性蛋白原的生物活性片段包被的基材。具体来说，与弹性蛋白原的粘附是剂量依赖性的，细胞与50ug/ml弹性蛋白原的粘附和与10ug/ml纤连蛋白的粘附相似。此外，10μM单一重复的六聚物序列VGVAPG(例如弹性蛋白原的生物活性片段)，与BSA相比促进了A2058细胞的粘附，其水平与10ug/ml全长弹性蛋白原的相同。

图5显示了纤连蛋白、弹性蛋白原和弹性蛋白原的两种不同的生物活性片段对A2058人黑色素瘤细胞的迁移的影响。A2058细胞对纤连蛋白、弹性蛋白原、单一重复的六聚物序列VGVAPG(例如弹性蛋白原的生物活性片段)和弹性蛋白原的C-末端片段(C-末端片段显示在SEQ ID NO：6中)作出反应发生迁移。全长的弹性蛋白原、单一重复的VGVAPG以及SEQ ID NO：6中显示的C-末端片段都以可比较的水平促进了A2058细胞的迁移。

实施例4：内皮细胞与包被的不锈钢装置的粘附

本发明是基于弹性蛋白原及其生物活性片段促进内皮细胞的粘附和迁移的发现。该发现也允许设计方法和组合物来促进内皮细胞与植入或可以植入人或人以外的动物的装置的粘附。如同在本申请中详细勾画的那样，用内皮细胞包被装置(例如在放置在身体中或体内之前)帮助防止再狭窄和血栓形成。

由于本发明的重要方面是防止再狭窄和血栓形成，我们进行了实验以研究内皮细胞是否粘附于用弹性蛋白原包被的金属装置。简单来说，将弹性蛋白原共价连接到直径大约6mm的不锈钢盘上。弹性蛋白原与圆盘表面的连接使用了中介的多糖分子。用于将弹性蛋白原共价连接到圆盘表面的示例的工艺以及这里使用的工艺，被用于制造Genous生物工程R支架。这些盘为显微镜成像提供了足够的表面积。盘也相似地用抗CD34抗体和用多糖载体单独包被。使用相似的工艺(Genous生物工程R支架)制造的用抗CD34抗体包被的支架目前正在进行人临床试验，有希望能够促进捕获循环系统中的内皮细胞和内皮祖细胞，从而加速内皮化。

将人微管内皮细胞(HMVEC)用这些包被的盘进行培养，并分析了细胞与包被的盘的粘附。这些实验的结果概述于图6中。弹性蛋白原促进了人内皮细胞与金属支架的粘附。

实施例5：内皮细胞粘附于包被的不锈钢装置的表面并在其上扩展

为了预防或治疗血栓形成和再狭窄，本发明提供了用于促进内皮细胞的粘附和/或迁移的方法和装置。在一个实施方案中，内皮细胞与可植入的医疗装置结合，从而减少或防止了血栓形成或再狭窄。本发明考虑到了装置可以被内皮细胞包被(例如病人自身的内皮细胞或来自其它人或来自动物的内皮细胞)。此外，本发明考虑到了在将装置植入病人中之后，病人自身的内皮细胞(例如内皮细胞或内皮祖细胞)将粘附到植入装置上。不受理论的束缚，细胞可以完全或部分包被装置，从而帮助防止或减少血栓形成和/或再狭窄。

我们进行了实验以评估弹性蛋白原是否促进了内皮祖细胞的粘附。将弹性蛋白原共价连接到直径大约6mm的不锈钢盘上。作为对照，将抗CD34抗体(已知促进内皮细胞的粘附)共价连接到相似的不锈钢盘上。用这些包被的盘培养内皮祖细胞，然后分析细胞与包被的盘的粘附。这些实验的结果概述在图7中。弹性蛋白原促进了人内皮细胞与金属装置的粘附。

我们也检查了粘附的内皮细胞的外观。我们观察到弹性蛋白原不仅促进了细胞与金属装置的粘附，而且还促进了粘附的细胞在装置表面上的扩展。这种细胞扩展只在弹性蛋白原包被的装置上发生，使用抗CD34抗体包被的装置上没有观察到。

通过用Triton X-100使粘附在包被的金属表面上的内皮细胞通透化，然后用鬼笔环肽染色标记肌动蛋白细胞骨架、用DAPI标记细胞核，来检查细胞的扩展。正如前面注意到的那样，用抗CD34抗体或弹性蛋白原包被的金属盘与多糖包被的对照盘或未包被的金属盘相比，导致了细胞粘附的显著增加。与弹性蛋白原包被的圆盘粘附的内皮细胞具有良好地扩展的细胞质和良好地组织的肌动蛋白细胞骨架。因此，用弹性蛋白原或抗CD34抗体包被的不锈钢表面与相似的未包被的金属表面相比，在放置于血管内时可能会更快地内皮化。

本发明考虑了使用弹性蛋白原或其生物活性片段包被的金属装置来促进内皮细胞与金属装置的粘附。本发明还考虑到了用弹性蛋白原或其生物活性片段与抗CD34抗体一起包被的金属装置的使用。既然两种药剂都具有促进内皮细胞粘附的能力，使用共同包被的装置在某些情况下可能是有利的。

上述的实验使用了下面的方法：

细胞粘附分析

用10μg/ml胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白原或0.1％牛血清白蛋白(BSA)将96孔板在4℃下包被过夜，实验进行两份重复。细胞用0.25％胰蛋白酶/1mM EDTA收获，在粘附缓冲液(含有0.5％BSA的基本培养基)中洗3次，以5×10⁵/ml的工作浓度悬浮在粘附缓冲液中，然后在37℃(5％CO₂)下恢复1小时。对于整合蛋白阻断分析来说，在恢复期间向细胞悬浮液中加入25μg/ml抗整合蛋白抗体(Chemicon，Temecula，CA)或对照IgG(Jackson ImmunoResearchLaboratories，Inc，West Grove，PA)。在细胞恢复期间，将包被的96孔板在dPBS中洗两次，在25℃下在5.0％BSA(dPBS)中阻断1小时。除去阻断溶液，将孔在dPBS中洗两次。恢复的细胞以每个孔100μl的量加入到包被的孔中，在37℃下放置30分钟(5％CO₂)。这个保温步骤后，将分析板倒置，分析孔用100μl dPBS洗两次以除去非特异性粘附的细胞。然后将孔在Zamboni固定液中固定，用Gill1苏木精染色，然后用80％甘油覆盖。分析用装备有Zeiss Axiocam数字相机的ZeissAxiovert 200倒置显微镜成像，放大倍数100x，每个孔捕获3个随机的视野。读数代表了每个孔中粘附细胞的数量(6个高倍100X视野的平均值，从两个分别的孔中各取3个)。

在不锈钢盘上的粘附分析

对用抗CD34抗体、弹性蛋白原、包被媒介预先包被的6mm不锈钢盘(Orbus Medical Technologies，Ft Lauderdale，FL)或未包被的金属的粘附分析以与前述相似的方式进行，只是进行了下面的修改：在分析期间使用48孔板盛放盘以便于盘的操作，以及施加2倍体积的细胞悬浮液(每个孔200μl)。与每个圆盘共价结合的总蛋白的示例量是大约100毫克。粘附后，孔在dPBS中洗两次，使用旋涡运动移去非特异性粘附的细胞。孔在25℃下在4％的中性缓冲甲醛溶液中固定10分钟，在dPBS中洗3次，在0.5％Triton X-100(dPBS)中通透化，在5％脱脂奶粉(dPBS)中阻断，用俄勒冈绿488结合的鬼笔环肽(MolecularProbes/Invitrogen，Carlsbad，CA)染色肌动蛋白纤维的装配。盘用Vectashield固定介质和DAPI(Vector Laboratories，Burlingame，CA)固定在修改过的显微镜载玻片上，用装备有Zeiss Axiocam数字相机的Zeiss Axiovert 2显微镜在汞灯下成像。

迁移分析

简单来说，在分析前16小时，将铺满75cm²摇瓶底部70％的人黑色素瘤细胞A2058(ATCC，3-12道)或人主动脉内皮细胞(HAEC，Cambrex，4-7道)保持在基本培养基(分别为dMEM+0.1％BSA，或EBM-2+0.1％FCS)中。用0.25％胰蛋白酶/1mM EDTA扬起细胞，在0.5％BSA(dMEM)中稀释，然后在基本培养基(dMEM+0.1％BSA)或(EBM-2+0.1％FCS)中洗3次，在37℃下以工作浓度(对于A2058来说2×10⁶/ml，或对于HAEC来说1.5×10⁶)在悬浮液中恢复1小时(5％CO₂)。为了进行迁移-抑制分析，在恢复期间将细胞在25μg/ml抗整合蛋白抗体(Chemicon，Temecula，CA)或对照IgG(JacksonImmunoResearch Laboratories，Inc)中预先保温30分钟。所有迁移分析都在48孔Boyden槽装置(NeuroProbe，Cabin John，MD)中进行，每个样品三份重复。将恢复的细胞以30μl的体积加入到底槽。用8μm孔径的聚碳酸酯膜(NeuroProbe，Cabin John，MD)覆盖孔，然后对A2058细胞来说孔用100μg/ml大鼠尾部胶原蛋白(Trevigen，Gaithersburg，MD)包被，对HAEC细胞来说孔用来自猪皮的1％乙酰化的明胶(Sigma，St.Louis，MO)包被。将装置装配好，在37℃下倒置存放(5％CO₂)2小时作为粘附期。将装置再次翻转，在上槽中加入52μl化学引诱物10mg/ml纤连蛋白、200ng/ml弹性蛋白原、10μM弹性蛋白衍生的肽、VGVAPG和IFPGGACLGKACGRKRK(C-末端肽)或0.1％BSA/dMEM(稀释剂，随机迁移对照)，在加湿的保温箱中在37℃下(5％CO₂)使迁移进行2小时。然后除去膜，在甲醇中固定，用Hema3染色套装(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA)进行染色，将迁移面朝下固定在50×75mm玻璃载玻片上。在使用90％固定液(溶于二甲苯)之前，使用湿拭子将未迁移的细胞从膜的暴露的、未迁移的一面除去。读数表示迁移过膜的细胞的数量(每个孔两个高倍X20视野的和，取6个孔重复的平均值)。

CD 34+细胞的纯化

人CD34+细胞从通过血浆析离方法收集的外周血单核细胞制备物中纯化。在收集步骤前，象犹他大学机构评审委员会批准的那样，将供体用10μg/kg粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员4天。CD34+细胞的纯化使用自动化细胞选择装置CliniMACS(Miltenyi Biotec，Auburn，CA)在封闭的无菌系统中进行。靶细胞用含有氧化铁和结合有鼠CD34单克隆抗体的葡聚糖的超顺磁颗粒标记。标记后，使用高梯度磁性分离柱分离细胞。磁性标记的细胞被保留在磁化柱中，而未标记的细胞能够通过。通过从柱子去除磁场和将细胞洗出到收集袋中来回收CD34+细胞。

CD34+富集和纯度的分析通过流式细胞术使用FACScan分析仪(Becton Dickinson，San Jose，CA)来进行。细胞用单克隆抗体CD45-FITC和CD34-PE(Becton Dickinson，San Jose，CA)以及存活力探针7-氨基放线菌素-D(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)进行染色。简单来说，数据分析通过选择性通过所有白细胞(CD45阳性细胞)和所有活的(7-AAD阴性)细胞以检测与同种型(IgG_2a-PE)对照相比CD34-PE的表达来进行。为了确定CD34阳性细胞的百分比，分析了至少100,000个活的白细胞。用于实验的细胞98％是CD34+细胞。

重组人弹性蛋白原

内源的信号序列被除去，用10X-组氨酸标签代替。该cDNA被克隆到可以用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导的结构中(pET系统，Novagen/EMD Biosciences，San Diego，CA)，在大肠杆菌宿主菌Rosetta-2(DE3)pLysS(Novagen)中表达。将含有重组弹性蛋白原质粒的Rosetta-2(DE3)pLysS细菌接种到含有50μg/ml氨苄青霉素和34μg/ml氯霉素的LB生长培养基中，培养在37℃下进行，直到600nm处的光密度达到0.4-0.6。加入IPTG到终浓度为1mM来进行诱导，然后将培养物在37℃下保温4小时。通过在4℃下16,000xg离心20分钟来收集细菌沉淀。将沉淀重新悬浮在Bugbuster HT+溶菌酶中，通过用去离子水稀释10倍的Bugbuster洗涤，然后在4℃5,000xg离心(总共4次)来纯化包含体。在最后的洗涤步骤之后，通过在4℃下16,000xg离心15分钟来收集包含体。将包含体重新悬浮在含有6M尿素、pH已经调整到7.9(在加入尿素后)的1X结合缓冲液(500mM NaCl，20mM Tris-HCl，5mM咪唑)中。使沉淀在4℃下溶解过夜。然后通过在16,000xg离心30分钟来除去不溶性物质。上清液通过0.45μm的注射过滤器过滤。然后将样品加到预先用含有6M尿素的1X结合缓冲液平衡的His-Mag珠子(Novagen)中，在震荡器上放置5分钟。使用Magnatight试验台(Novagen)收集珠子，然后用含有6M尿素的1 X清洗缓冲液(500mM NaCl，60mM咪唑，20mM Tris-HCl)(调整到pH7.9)洗4次。在最后一次清洗后，用500mM咪唑，500mM NaCl，20mM Tris-HCl，6M urea，pH 7.9将蛋白从珠子上洗脱下来。然后使用10,000 MWCO的Slide-A-Lyzer透析盒(Pierce)将样品对HBSS进行透析。获得的蛋白通过标准技术用SDS-PAGE分析进行分析，储存于-80℃下。

其它试剂

用于粘附实验的人胶原蛋白I和纤连蛋白从BiomedicalTechnologies Inc.(Stoughton，MA)购买。弹性蛋白衍生的肽在犹他大学DNA/肽试验室合成。

参考文献：

WO00/50068

Olson et al.(1995)Hum MoI Genet.4(9)：1677-9.

Curran et al.(1993)Cell 73：159-168.

Ewart et al.(1993)Nat Genet.5：11-16.

Li et al.(1997)Hum.MoI.Genet.6：1021-1028.

Dietz and Mecham(2000)Matrix Biol.19：481-486.

Li et al.(1998)Nature 393：276-280.

Li et al.(1998)J Clin.Invest.102：1783-1787.

Karnik et al.(2003)Matrix Biology 22：409-425.

Karnik et al.(2003)Development 130：411-423.

Brooke et al.(2003)Trends in Cardiovascular Medicine 13：176-181.

所有的出版物、专利和专利申请在此以其全文引为参考，其程度视同每个单独的出版物、专利和专利申请被具体地、分别地指明以其全文引为参考。

等效物

本领域的专业技术人员仅使用常规的实验将会认识到或能够确认本文描述的本发明的具体实施方案的等效物。这些等效物也打算被下面的权利要求所涵盖。

序列表

<110>犹他大学研究基金会(University of Utah Research Foundation)

<120>促进内皮细胞的粘附或迁移的方法和组合物(METHODS AND COMPOSITIONS FOR PROMOTINGENDOTHELIAL CELL ADHESION OR MIGRATION)

<130>SCT073859-47

<150>US 60/656,360

<151>2005-02-25

<160>6

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>2274

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<400>1

atggcgggtc tgacggcggc ggccccgcgg cccggagtcc tcctgctcct gctgtccatc 60

ctccacccct ctcggcctgg aggggtccct ggggccattc ctggtggagt tcctggagga 120

gtcttttatc caggggctgg tctcggagcc cttggaggag gagcgctggg gcctggaggc 180

aaacctctta agccagttcc cggagggctt gcgggtgctg gccttggggc agggctcggc 240

gccttccccg cagttacctt tccgggggct ctggtgcctg gtggagtggc tgacgctgct 300

gcagcctata aagctgctaa ggctggcgct gggcttggtg gtgtcccagg agttggtggc 360

ttaggagtgt ctgcaggtgc ggtggttcct cagcctggag ccggagtgaa gcctgggaaa 420

gtgccgggtg tggggctgcc aggtgtatac ccaggtggcg tgctcccagg agctcggttc 480

cccggtgtgg gggtgctccc tggagttccc actggagcag gagttaagcc caaggctcca 540

ggtgtaggtg gagcttttgc tggaatccca ggagttggac cctttggggg accgcaacct 600

ggagtcccac tggggtatcc catcaaggcc cccaagctgc ctggtggcta tggactgccc 660

tacaccacag ggaaactgcc ctatggctat gggcccggag gagtggctgg tgcagcgggc 720

aaggctggtt acccaacagg gacaggggtt ggcccccagg cagcagcagc agcggcagct 780

aaagcagcag caaagttcgg tgctggagca gccggagtcc tccctggtgt tggaggggct 840

ggtgttcctg gcgtgcctgg ggcaattcct ggaattggag gcatcgcagg cgttgggact 900

ccagctgcag ctgcagctgc agcagcagcc gctaaggcag ccaagtatgg agctgctgca 960

ggcttagtgc ctggtgggcc aggctttggc ccgggagtag ttggtgtccc aggagctggc 1020

gttccaggtg ttggtgtccc aggagctggg attccagttg tcccaggtgc tgggatccca 1080

ggtgctgcgg ttccaggggt tgtgtcacca gaagcagctg ctaaggcagc tgcaaaggca 1140

gccaaatacg gggccaggcc cggagtcgga gttggaggca ttcctactta cggggttgga 1200

gctgggggct ttcccggctt tggtgtcgga gtcggaggta tccctggagt cgcaggtgtc 1260

cctagtgtcg gaggtgttcc cggagtcgga ggtgtcccgg gagttggcat ttcccccgaa 1320

gctcaggcag cagctgccgc caaggctgcc aagtacggag tggggacccc agcagctgca 1380

gctgctaaag cagccgccaa agccgcccag tttgggttag ttcctggtgt cggcgtggct 1440

cctggagttg gcgtggctcc tggtgtcggt gtggctcctg gagttggctt ggctcctgga 1500

gttggcgtgg ctcctggagt tggtgtggct cctggcgttg gcgtggctcc cggcattggc 1560

cctggtggag ttgcagctgc agcaaaatcc gctgccaagg tggctgccaa agcccagctc 1620

cgagctgcag ctgggcttgg tgctggcatc cctggacttg gagttggtgt cggcgtccct 1680

ggacttggag ttggtgctgg tgttcctgga cttggagttg gtgctggtgt tcctggcttc 1740

ggggcaggtg cagatgaggg agttaggcgg agcctgtccc ctgagctcag ggaaggagat 1800

ccctcctcct ctcagcacct ccccagcacc ccctcatcac ccagggtacc tggagccctg 1860

gctgccgcta aagcagccaa atatggagca gcagtgcctg gggtccttgg agggctcggg 1920

gctctcggtg gagtaggcat cccaggcggt gtggtgggag ccggacccgc cgccgccgct 1980

gccgcagcca aagctgctgc caaagccgcc cagtttggcc tagtgggagc cgctgggctc 2040

ggaggactcg gagtcggagg gcttggagtt ccaggtgttg ggggccttgg aggtatacct 2100

ccagctgcag ccgctaaagc agctaaatac ggtgctgctg gccttggagg tgtcctaggg 2160

ggtgccgggc agttcccact tggaggagtg gcagcaagac ctggcttcgg attgtctccc 2220

attttcccag gtggggcctg cctggggaaa gcttgtggcc ggaagagaaa atga 2274

<210>2

<211>757

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>2

Met Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Ser Ile Leu His Pro Ser Arg Pro Gly Gly Val Pro Gly Ala

20 25 30

Ile Pro Gly Gly Val Pro Gly Gly Val Phe Tyr Pro Gly Ala Gly Leu

35 40 45

Gly Ala Leu Gly Gly Gly Ala Leu Gly Pro Gly Gly Lys Pro Leu Lys

50 55 60

Pro Val Pro Gly Gly Leu Ala Gly Ala Gly Leu Gly Ala Gly Leu Gly

65 70 75 80

Ala Phe Pro Ala Val Thr Phe Pro Gly Ala Leu Val Pro Gly Gly Val

85 90 95

Ala Asp Ala Ala Ala Ala Tyr Lys Ala Ala Lys Ala Gly Ala Gly Leu

100 105 110

Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Leu Gly Val Ser Ala Gly Ala Val

115 120 125

Val Pro Gln Pro Gly Ala Gly Val Lys Pro Gly Lys Val Pro Gly Val

130 135 140

Gly Leu Pro Gly Val Tyr Pro Gly Gly Val Leu Pro Gly Ala Arg Phe

145 150 155 160

Pro Gly Val Gly Val Leu Pro Gly Val Pro Thr Gly Ala Gly Val Lys

165 170 175

Pro Lys Ala Pro Gly Val Gly Gly Ala Phe Ala Gly Ile Pro Gly Val

180 185 190

Gly Pro Phe Gly Gly Pro Gln Pro Gly Val Pro Leu Gly Tyr Pro Ile

195 200 205

Lys Ala Pro Lys Leu Pro Gly Gly Tyr Gly Leu Pro Tyr Thr Thr Gly

210 215 220

Lys Leu Pro Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Val Ala Gly Ala Ala Gly

225 230 235 240

Lys Ala Gly Tyr Pro Thr Gly Thr Gly Val Gly Pro Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Phe Gly Ala Gly Ala Ala Gly

260 265 270

Val Leu Pro Gly Val Gly Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Ala

275 280 285

Ile Pro Gly Ile Gly Gly Ile Ala Gly Val Gly Thr Pro Ala Ala Ala

290 295 300

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Ala

305 310 315 320

Gly Leu Val Pro Gly Gly Pro Gly Phe Gly Pro Gly Val Val Gly Val

325 330 335

Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile Pro

340 345 350

Val Val Pro Gly Ala Gly Ile Pro Gly Ala Ala Val Pro Gly Val Val

355 360 365

Ser Pro Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly

370 375 380

Ala Arg Pro Gly Val Gly Val Gly Gly Ile Pro Thr Tyr Gly Val Gly

385 390 395 400

Ala Gly Gly Phe Pro Gly Phe Gly Val Gly Val Gly Gly Ile Pro Gly

405 410 415

Val Ala Gly Val Pro Ser Val Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Val

420 425 430

Pro Gly Val Gly Ile Ser Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ala Ala Ala Lys

435 440 445

Ala Ala Lys Tyr Gly Val Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala

450 455 460

Ala Ala Lys Ala Ala Gln Phe Gly Leu Val Pro Gly Val Gly Val Ala

465 470 475 480

Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly

500 505 510

Val Gly Val Ala Pro Gly Ile Gly Pro Gly Gly Val Ala Ala Ala Ala

515 520 525

Lys Ser Ala Ala Lys Val Ala Ala Lys Ala Gln Leu Arg Ala Ala Ala

530 535 540

Gly Leu Gly Ala Gly Ile Pro Gly Leu Gly Val Gly Val Gly Val Pro

545 550 555 560

Gly Leu Gly Val Gly Ala Gly Val Pro Gly Leu Gly Val Gly Ala Gly

565 570 575

Val Pro Gly Phe Gly Ala Gly Ala Asp Glu Gly Val Arg Arg Ser Leu

580 585 590

Ser Pro Glu Leu Arg Glu Gly Asp Pro Ser Ser Ser Gln His Leu Pro

595 600 605

Ser Thr Pro Ser Ser Pro Arg Val Pro Gly Ala Leu Ala Ala Ala Lys

610 615 620

Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Val Pro Gly Val Leu Gly Gly Leu Gly

625 630 635 640

Ala Leu Gly Gly Val Gly Ile Pro Gly Gly Val Val Gly Ala Gly Pro

645 650 655

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Gln Phe

660 665 670

Gly Leu Val Gly Ala Ala Gly Leu Gly Gly Leu Gly Val Gly Gly Leu

675 680 685

Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Leu Gly Gly Ile Pro Pro Ala Ala Ala

690 695 700

Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Gly Leu Gly Gly Val Leu Gly

705 710 715 720

Gly Ala Gly Gln Phe Pro Leu Gly Gly Val Ala Ala Arg Pro Gly Phe

725 730 735

Gly Leu Ser Pro Ile Phe Pro Gly Gly Ala Cys Leu Gly Lys Ala Cys

740 745 750

Gly Arg Lys Arg Lys

755

<210>3

<211>712

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>3

Met Ala Gly Leu Thr Ala Ala Ala Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Ser Ile Leu His Pro Ser Arg Pro Gly Gly Val Pro Gly Ala

20 25 30

Ile Pro Gly Gly Val Pro Gly Gly Val Phe Tyr Pro Gly Ala Gly Leu

35 40 45

Gly Ala Leu Gly Gly Gly Ala Leu Gly Pro Gly Gly Lys Pro Leu Lys

50 55 60

Pro Val Pro Gly Gly Leu Ala Gly Ala Gly Leu Gly Ala Gly Leu Gly

65 70 75 80

Ala Phe Pro Ala Val Thr Phe Pro Gly Ala Leu Val Pro Gly Gly Val

85 90 95

Ala Asp Ala Ala Ala Ala Tyr Lys Ala Ala Lys Ala Gly Ala Gly Leu

100 105 110

Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Leu Gly Val Ser Ala Gly Ala Val

115 120 125

Val Pro Gln Pro Gly Ala Gly Val Lys Pro Gly Lys Val Pro Gly Val

130 135 140

Gly Leu Pro Gly Val Tyr Pro Gly Gly Val Leu Pro Gly Ala Arg Phe

145 150 155 160

Pro Gly Val Gly Val Leu Pro Gly Val Pro Thr Gly Ala Gly Val Lys

165 170 175

Pro Lys Ala Pro Gly Val Gly Gly Ala Phe Ala Gly Ile Pro Gly Val

180 185 190

Gly Pro Phe Gly Gly Pro Gln Pro Gly Val Pro Leu Gly Tyr Pro Ile

195 200 205

Lys Ala Pro Lys Leu Pro Gly Gly Tyr Gly Leu Pro Tyr Thr Thr Gly

210 215 220

Lys Leu Pro Tyr Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Val Ala Gly Ala Ala Gly

225 230 235 240

Lys Ala Gly Tyr Pro Thr Gly Thr Gly Val Gly Pro Gln Ala Ala Ala

245 250 255

Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Phe Gly Ala Gly Ala Ala Gly

260 265 270

Val Leu Pro Gly Val Gly Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Ala

275 280 285

Ile Pro Gly Ile Gly Gly Ile Ala Gly Val Gly Thr Pro Ala Ala Ala

290 295 300

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Ala

305 310 315 320

Gly Leu Val Pro Gly Gly Pro Gly Phe Gly Pro Gly Val Val Gly Val

325 330 335

Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile Pro

340 345 350

Val Val Pro Gly Ala Gly Ile Pro Gly Ala Ala Val Pro Gly Val Val

355 360 365

Ser Pro Glu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly

370 375 380

Ala Arg Pro Gly Val Gly Val Gly Gly Ile Pro Thr Tyr Gly Val Gly

385 390 395 400

Ala Gly Gly Phe Pro Gly Phe Gly Val Gly Val Gly Gly Ile Pro Gly

405 410 415

Val Ala Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Val

420 425 430

Pro Gly Val Gly Ile Ser Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ala Ala Ala Lys

435 440 445

Ala Ala Lys Tyr Gly Val Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala

450 455 460

Ala Ala Lys Ala Ala Gln Phe Ala Leu Leu Asn Leu Ala Gly Leu Val

465 470 475 480

Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly

485 490 495

Val Ala Pro Gly Val Gly Leu Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly

500 505 510

Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Ile Gly Pro Gly

515 520 525

Gly Val Ala Ala Ala Ala Lys Ser Ala Ala Lys Val Ala Ala Lys Ala

530 535 540

Gln Leu Arg Ala Ala Ala Gly Leu Gly Ala Gly Ile Pro Gly Leu Gly

545 550 555 560

Val Gly Val Gly Val Pro Gly Leu Gly Val Gly Ala Gly Val Pro Gly

565 570 575

Leu Gly Val Gly Ala Gly Val Pro Gly Phe Gly Ala Val Pro Gly Ala

580 585 590

Leu Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Val Pro Gly Val

595 600 605

Leu Gly Gly Leu Gly Ala Leu Gly Gly Val Gly Ile Pro Gly Gly Val

610 615 620

Val Gly Ala Gly Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala

625 630 635 640

Lys Ala Ala Gln Phe Gly Leu Val Gly Ala Ala Gly Leu Gly Gly Leu

645 650 655

Gly Val Gly Gly Leu Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Leu Gly Gly Ile

660 665 670

Pro Pro Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Val Ala Ala Arg

675 680 685

Pro Gly Phe Gly Leu Ser Pro Ile Phe Pro Gly Gly Ala Cys Leu Gly

690 695 700

Lys Ala Cys Gly Arg Lys Arg Lys

705 710

<210>4

<211>706

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>4

Met Gly His His His His His His His His His His Ser Ser Gly Gly

1 5 10 15

Ile Glu Gly Arg Gly Gly Val Pro Gly Ala Ile Pro Gly Gly Val Pro

20 25 30

Gly Gly Val Phe Tyr Pro Gly Ala Gly Leu Gly Ala Leu Gly Gly Gly

35 40 45

Ala Leu Gly Pro Gly Gly Lys Pro Leu Lys Pro Val Pro Gly Gly Leu

50 55 60

Ala Gly Ala Gly Leu Gly Ala Gly Leu Gly Ala Phe Pro Ala Val Thr

65 70 75 80

Phe Pro Gly Ala Leu Val Pro Gly Gly Val Ala Asp Ala Ala Ala Ala

85 90 95

Tyr Lys Ala Ala Lys Ala Gly Ala Gly Leu Gly Gly Val Pro Gly Val

100 105 110

Gly Gly Leu Gly Val Ser Ala Gly Ala Val Val Pro Gln Pro Gly Ala

115 120 125

Gly Val Lys Pro Gly Lys Val Pro Gly Val Gly Leu Pro Gly Val Tyr

130 135 140

Pro Gly Gly Val Leu Pro Gly Ala Arg Phe Pro Gly Val Gly Val Leu

145 150 155 160

Pro Gly Val Pro Thr Gly Ala Gly Val Lys Pro Lys Ala Pro Gly Val

165 170 175

Gly Gly Ala Phe Ala Gly Ile Pro Gly Val Gly Pro Phe Gly Gly Pro

180 185 190

Gln Pro Gly Val Pro Leu Gly Tyr Pro Ile Lys Ala Pro Lys Leu Pro

195 200 205

Gly Gly Tyr Gly Leu Pro Tyr Thr Thr Gly Lys Leu Pro Tyr Gly Tyr

210 215 220

Gly Pro Gly Gly Val Ala Gly Ala Ala Gly Lys Ala Gly Tyr Pro Thr

225 230 235 240

Gly Thr Gly Val Gly Pro Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala

245 250 255

Ala Ala Lys Phe Gly Ala Gly Ala Ala Gly Val Leu Pro Gly Val Gly

260 265 270

Gly Ala Gly Val Pro Gly Val Pro Gly Ala Ile Pro Gly Ile Gly Gly

275 280 285

Ile Ala Gly Val Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala

290 295 300

Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Ala Gly Leu Val Pro Gly Gly

305 310 315 320

Pro Gly Phe Gly Pro Gly Val Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Pro

325 330 335

Gly Val Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile Pro Val Val Pro Gly Ala Gly

340 345 350

Ile Pro Gly Ala Ala Val Pro Gly Val Val Ser Pro Glu Ala Ala Ala

355 360 365

Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Ala Arg Pro Gly Val Gly

370 375 380

Val Gly Gly Ile Pro Thr Tyr Gly Val Gly Ala Gly Gly Phe Pro Gly

385 390 395 400

Phe Gly Val Gly Val Gly Gly Ile Pro Gly Val Ala Gly Val Pro Gly

405 410 415

Val Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Val Pro Gly Val Gly Ile Ser

420 425 430

Pro Glu Ala Gln Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Val

435 440 445

Gly Thr Pro Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Gln

450 455 460

Phe Ala Leu Leu Asn Leu Ala Gly Leu Val Pro Gly Val Gly Val Ala

465 470 475 480

Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly

500 505 510

Val Gly Val Ala Pro Gly Ile Gly Pro Gly Gly Val Ala Ala Ala Ala

515 520 525

Lys Ser Ala Ala Lys Val Ala Ala Lys Ala Gln Leu Arg Ala Ala Ala

530 535 540

Gly Leu Gly Ala Gly Ile Pro Gly Leu Gly Val Gly Val Gly Val Pro

545 550 555 560

Gly Leu Gly Val Gly Ala Gly Val Pro Gly Leu Gly Val Gly Ala Gly

565 570 575

Val Pro Gly Phe Gly Ala Val Pro Gly Ala Leu Ala Ala Ala Lys Ala

580 585 590

Ala Lys Tyr Gly Ala Ala Val Pro Gly Val Leu Gly Gly Leu Gly Ala

595 600 605

Leu Gly Gly Val Gly Ile Pro Gly Gly Val Val Gly Ala Gly Pro Ala

610 615 620

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala Lys Ala Ala Gln Phe Gly

625 630 635 640

Leu Val Gly Ala Ala Gly Leu Gly Gly Leu Gly Val Gly Gly Leu Gly

645 650 655

Val Pro Gly Val Gly Gly Leu Gly Gly Ile Pro Pro Ala Ala Ala Ala

660 665 670

Lys Ala Ala Lys Tyr Gly Val Ala Ala Arg Pro Gly Phe Gly Leu Ser

675 680 685

Pro Ile Phe Pro Gly Gly Ala Cys Leu Gly Lys Ala Cys Gly Arg Lys

690 695 700

Arg Lys

705

<210>5

<211>6

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>chemically synthesized bioactive fragment of

tropoelastin

<400>5

Val Gly Val Ala Pro Gly

1 5

<210>6

<211>17

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<220>

<223>chemically synthesized bioactive fragment of

tropoelastin

<400>6

Ile Phe Pro Gly Gly Ala Cys Leu Gly Lys Ala Cys Gly Arg Lys Arg

1 5 10 15

Lys

Claims

1.促进内皮细胞粘附的方法，包括将该内皮细胞与含有有效促进内皮细胞粘附量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触。

2.权利要求1的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。

3.权利要求1的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。

4.权利要求1的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。

5.权利要求4的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：5所示的生物活性片段的至少一个重复组成。

6.权利要求4的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：6所示的生物活性片段组成。

7.权利要求1的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了65℃下用0.2X SSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1所述的核酸序列杂交。

8.权利要求1的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被共价连接到装置上，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的量有效促进内皮细胞与装置的粘附。

9.权利要求8的方法，其中该装置由金属、塑料、硅酮、涤纶织物或PTFE制成或被上述材料包被。

10.权利要求8的方法，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的量在生理相关的流体流速和/或管道压力下有效促进和维持内皮细胞的粘附。

11.权利要求10的方法，其中该生理相关的流体流速和/或管道压力是相当于静脉或动脉流速或压力的流速或压力。

12.权利要求1的方法，其中该内皮细胞是内皮干细胞。

13.促进内皮细胞迁移的方法，包括将该内皮细胞与含有有效促进内皮细胞迁移量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物相接触。

14.权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。

15.权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。

16.权利要求13的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。

17.权利要求16的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：5所示的生物活性片段的至少一个重复组成。

18.权利要求16的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：6所示的生物活性片段组成。

19.权利要求13的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了65℃下用0.2XSSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1所述的核酸序列杂交。

20.促进内皮细胞与装置的粘附的方法，包括将该内皮细胞与包含了含有一定量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物的装置相接触，其中该量有效促进内皮细胞与该装置的粘附，以及其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被共价结合到该装置上。

21.权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段的量在生理相关的流体流速和/或管道压力下有效促进和维持内皮细胞的粘附。

22.权利要求21的方法，其中该生理相关的流体流速和/或管道压力相当于静脉或动脉流速或压力。

23.权利要求20的方法，其中该装置是不锈钢装置。

24.权利要求20的方法，其中该装置由塑料、涤纶织物、硅酮或PTFE制成或被上述材料包被。

25.权利要求20的方法，其中该装置从导管、支架、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。

26.权利要求20的方法，其中该装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、心室辅助装置、血管移植物、人工瓣膜、鼻胃管、通气管或胸管中选择。

27.权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。

28.权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。

29.权利要求20的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。

30.权利要求28的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：5所示的生物活性片段的至少一个重复组成。

31.权利要求28的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：6所示的生物活性片段组成。

32.权利要求20的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了65℃下用0.2XSSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1所示的核酸序列杂交。

33.治疗或预防再狭窄的方法，包括给药含有有效治疗或预防性治疗再狭窄量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段被共价结合到装置上，以及其中给药该组合物促进内皮细胞与该装置的粘附，从而治疗或预防再狭窄。

34.权利要求33的方法，其中该装置从支架、导管、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。

35.权利要求33的方法，其中该装置是不锈钢装置。

36.权利要求33的方法，其中该装置由塑料、硅酮、涤纶织物、聚氨基甲酸酯、聚丙烯或PTFE制成或被上述材料包被。

37.权利要求33的方法，其中该方法包含血管内给药该装置至身体管道中细胞损伤的位点。

38.权利要求33的方法，其中该方法包含了共同给药一种或多种其它药剂。

39.权利要求37的方法，其中该身体管道从动脉、静脉、总胆管、胰腺导管、肾管、食管、气管、尿道、膀胱、子宫、卵巢管、输卵管、输精管、前列腺管或淋巴管中选择。

40.权利要求33的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。

41.权利要求33的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。

42.权利要求33的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。

43.权利要求42的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：5所示的生物活性片段的至少一个重复组成。

44.权利要求42的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：6所示的生物活性片段组成。

45.权利要求33的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了65℃下用0.2XSSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1所示的核酸序列杂交。

46.治疗或预防血栓形成的方法，包括给药含有有效治疗或预防性治疗血栓形成量的弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的组合物，其中该弹性蛋白原或其生物活性片段被共价结合到装置上，以及其中给药该组合物促进内皮细胞与该装置的粘附，从而治疗或预防血栓形成。

47.权利要求46的方法，其中该装置从支架、导管、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。

48.权利要求46的方法，其中该装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、血管移植物、心室辅助装置、人工瓣膜、鼻胃管、通气管或胸管中选择。

49.权利要求46的方法，其中该装置是不锈钢装置。

50.权利要求46的方法，其中该装置由塑料、涤纶织物、硅酮、聚氨基甲酸酯、聚丙烯或PTFE制成或被上述材料包被。

51.权利要求46的方法，其中该方法包括共同给药一种或多种其它药剂。

52.权利要求46的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列。

53.权利要求46的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6相同的氨基酸序列。

54.权利要求46的方法，其中该组合物基本上由与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6具有至少80％同一性的氨基酸序列组成。

55.权利要求54的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：5所示的生物活性片段的至少一个重复组成。

56.权利要求54的方法，其中该组合物基本上由SEQ ID NO：6所示的生物活性片段组成。

57.权利要求46的方法，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段含有可由核酸编码的氨基酸序列，该核酸在包括了65℃下用0.2XSSC清洗的步骤的严格条件下与SEQ ID NO：1所示的核酸序列杂交。

58.含有弹性蛋白原多肽或其生物活性片段的装置，其中该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段被共价结合到该装置上，以及其中该装置含有有效促进内皮细胞与该装置粘附量的该弹性蛋白原多肽或其生物活性片段。

59.权利要求58的装置，其中该装置是不锈钢装置。

60.权利要求58的装置，其中该装置由塑料、硅酮、涤纶织物、聚氨基甲酸酯、聚丙烯或PTFE制成或被上述材料包被。

61.权利要求58的装置，其中该装置从导管、支架、分流通管、金属丝或其它管腔内装置中选择。

62.权利要求58的装置，其中该装置从起搏器、心脏复律器-除纤颤器、人工瓣膜、心室辅助装置、血管移植物、鼻胃管、通气管或胸管中选择。

63.权利要求58的装置，其中所述有效量的该弹性蛋白原或其生物活性片段在生理相关的流体流速和/或管道压力下足以促进和维持内皮细胞的粘附。

64.权利要求63的装置，其中该生理相关的流速和/或管道压力相当于静脉或动脉流速或压力。