CN101161246B - 人参皂苷Rh2的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及人参皂苷Rh2的新用途,公开了人参皂苷Rh2在抗疲劳方面的新用途,属于医药及保健食品领域。

Description

人参皂苷Rh2的新用途
发明领域
本发明涉及人参皂苷Rh2的新用途,具体涉及人参皂苷Rh2在制备抗疲劳的保健食品或药品中的新用途。
背景技术
人参皂苷Rh2是人参皂苷的一种,因为具有显著的抗癌活性而备受关注。关于其生理活性以及制备方法等方面的研究论文及专利报道较多,但人参皂苷Rh2具有抗疲劳作用的研究结果至今未见报道,更没有利用人参皂苷Rh2制备抗疲劳产品的报道。
发明内容
本发明的研究者通过小鼠负重游泳实验以及通过观察肝糖原变化、血清尿素水平变化以及血乳酸变化情况首次发现并证明了人参皂苷Rh2具有抗疲劳作用。试验结果表明,经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2,能明显延长小鼠负重游泳时间;减少肝糖原的消耗量;降低运动时血清尿素水平;对小鼠运动后血乳酸升高有明显的抑制作用。证明人参皂苷Rh2具有抗疲劳作用。
本发明所述的人参皂苷Rh2可以购买市售产品或通过已见报道的酸水解、碱水解或酶水解的方法获得。把从人参属植物人参、西洋参、三七等中获得的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd等二醇组人参皂苷进行酸水解或碱水解或酶水解后再进行精制处理可以得到不同纯度的人参皂苷Rh2
在利用人参皂苷Rh2制备具有抗疲劳功能的产品时可以使用高纯度的人参皂苷Rh2单一化合物,也可以使用含有其他人参皂苷的人参皂苷Rh2混合物。将人参皂苷Rh2与赋形剂或载体混合后即可制备具有抗疲劳功能的产品,其剂型可以是胶囊、片剂、颗粒剂、口服液或饮料或其他适于口服的形式,也可以是注射剂。
具体实施方式
下面的实施例并不意味着利用人参皂苷Rh2制备的抗疲劳产品仅限于此。
实施例1
1 材料与方法
1.1 人参皂苷Rh2,白色粉末,利用中国专利00123073.5(申请号)的方法制备。
1.2 实验动物:
由黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心提供的健康雄性昆明种小鼠40只,(批准号为医动字第09-2-11号),体重18~22g,随机分为4组,每组10只,作为抗疲劳一组进行负重游泳实验;另取雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,作为抗疲劳二组,进行血清尿素测定;再取雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,作为抗疲劳三组,进行肝糖原测定;再取雄性小鼠40只,随机分为4组,每组10只,作为抗疲劳四组,进行血乳酸测定。
1.3 剂量设计:
人参皂苷Rh2设高中低三个剂量组,即6.7mg/kg体重(低剂量);13.4mg/kg体重(中剂量);40.2mg/kg体重(高剂量);另设一个对照组。以蒸馏水为溶剂各组动物均按20ml/kg体重灌胃容积进行灌胃,对照组灌胃等容积蒸馏水。连续灌胃30天后进行各项指标检测。
1.4 仪器与试剂
动物天平、电子天平、离心机、水浴、振荡器、722分光光度计。
游泳箱(大约50cm×50cm×40cm)、铅皮、计时器、血色素吸管、加样器、试管、离心管。
半自动生化分析仪,中生公司生产。
尿素测定试剂盒,中生公司生产;蛋白沉淀剂、1%NaF、4%CuSO4、乳酸标准液(0.01mg/ml)、1.5%对羟基联苯。5%三氯醋酸(蒸馏水配制)(TCA)、葡萄糖标准液100ml/dL、72%H2SO4(蒸馏水配制)、蒽酮试剂(含0.05%的蒽酮,1%的硫脲、用72%的H2SO4配制)。
1.5 实验方法
1.5.1 负重游泳实验
末次给予受试物30分钟后,置小鼠在游泳箱中游泳,水深为30cm,水温25℃,鼠尾根部负荷5%体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间,作为小鼠游泳的时间(分钟)。
1.5.2 血清尿素测定:二乙酰-肟法
末次给予受试物30分钟后,在温度为30℃的水中不负重游泳90分钟,休息60分钟后拨眼球采血0.5ml。于4℃冰箱约3h后2000rpm离心15分钟,取血清用半自动生化分析其测定尿素。
1.5.3 肝糖原测定:蒽酮法
末次给予受试物后30min处死动物,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干,精确称取肝脏100mg,加入8mlTCA,每管匀浆1min,将匀浆倒入离心管,以3000转/min离心15min。将上清夜转移至另一个试管内。
取1ml上清液放入10ml离心管中,每管加入95%乙醇4ml,充分混匀至两种液体间不留有界面。用干净塞子塞上,将试管放在37-40℃水浴3h。沉淀完全后,将试管于3000转/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。
用2ml蒸馏水溶解糖原,加水时将管壁的糖原洗下。如管底的糖原不立即溶解,振荡管子直到完全溶解。
制作试剂空白和标准管:
试剂空白:吸2ml蒸馏水到干净的离心管
标准管:吸0.5ml葡萄糖标准液(含100mg/dL葡萄糖)和1.5ml蒸馏水放入同样的管子。此时将10ml蒽酮试剂用力加入各管,液流(蒽酮试剂)直接进入管子中央,保证充分混合好。从管子中注入蒽酮试剂时起,将管子放在冷水龙头下冲凉。在所有管子都达到凉水温度后,将其浸于沸水浴(水浴深度略高于管子液面)15min,然后移到冷水浴。将管内液体移入比色管,再620nm波长下,用试剂空白管调零后测定吸光度。根据所称取的肝脏重量换算成肝糖原含量(以mg/g肝表示),并进行统计分析。按下式计算肝糖原含量:
Figure G061D1959420061025D000041
DU:样品管吸光度        提取液体积:为8ml
DS:标准管吸光度        肝组织克数:为0.1g
0.5:0.5ml葡萄糖标准液中的葡萄糖含量
0.9:将葡萄糖换算成糖原的系数
1.5.4 血乳酸测定
末次给予受试物30min后各采血20μl加入5ml试管中(事先已加入0.48ml1%NaF溶液)再加入1.5ml蛋白沉淀剂混匀,3000转/分离心10分钟,留上清液备用。在温度30℃的水中不负重游泳10分钟后停止,立即采血20μl,休息20分钟后再采血20μl,处理方法同上。三个时间点的上清液均按手工法测定乳酸含量。
血乳酸含量按下式计算:
Figure G061D1959420061025D000051
血乳酸曲线下面积=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值
                   +2×游泳后休息20min的血乳酸值)
1.6 实验数据用LKAT软件进行统计。
2 结果
2.1 人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响
人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响分别见表1、表2、表3、表4。
                 表1  人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响
Figure G061D1959420061025D000052
            表2  人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响
Figure G061D1959420061025D000061
            表3  人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响
            表4  人参皂苷Rh2对小鼠体重的影响
Figure G061D1959420061025D000063
由表1、2、3、4可见,经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2 30天,经统计学处理,抗疲劳一组、二组、三组、四组实验中动物的体重增长值分别与对照组相比均无显著差别(P>0.05),即各实验组小鼠的体重增长均无明显差别。
2.2 人参皂苷Rh2对小鼠负重游泳时间的影响
人参皂苷Rh2对小鼠负重游泳时间的影响见表5。
            表5  人参皂苷Rh2对小鼠负重游泳时间的影响
Figure G061D1959420061025D000071
注:*与对照组相比差异显著P<0.05
由表5可见,经口给予人参皂苷Rh2 30天,实验组的高、中剂量组与对照组相比,能明显延长小鼠的负重游泳时间。经统计学处理均有显著性差别(P<0.05)。
2.3 人参皂苷Rh2对小鼠运动时血清尿素的影响
人参皂苷Rh2对小鼠运动时血清尿素的影响见表6
            表6  人参皂苷Rh2对小鼠运动时血清尿素的影响
Figure G061D1959420061025D000072
注:*与对照组相比差异显著,P<0.05
**与对照组相比差异极显著,P<0.01
由表6可见,经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2 30天,经统计学处理,高、中剂量组与对照组相比分别有极显著性差别(P<0.01)和显著性差别(P<0.05)。
2.4 人参皂苷Rh2对小鼠肝糖原消耗量的影响
人参皂苷Rh2对小鼠肝糖原消耗量的影响见表7
            表7人参皂苷Rh2对小鼠肝糖原消耗量的影响
注:*与对照组相比差异显著,P<0.05
由表7可见,经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2 30天,高剂量组能减少小鼠肝糖原的消耗。经统计学处理,小鼠肝糖原的消耗量高剂量组与对照组相比有显著性差别(P<0.05)。
2.5 人参皂苷Rh2对小鼠运动后血乳酸水平的影响
人参皂苷Rh2对小鼠运动后血乳酸水平的影响见表8
            表8  人参皂苷Rh2对小鼠运动后血乳酸水平的影响
注:*与对照组相比差异显著,P<0.05
由表8可见,经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2 30天,其小鼠运动后的血乳酸曲线下面积高、中剂量组均有明显下降。经统计学处理,高、中剂量组与对照组比均有显著差别(P<0.05),说明人参皂苷Rh2对运动后小鼠的血乳酸升高有明显的抑制作用。
3 小结
经口给予小鼠不同剂量的人参皂苷Rh2 30天,能明显延长小鼠负重游泳时间,减少肝糖原的消耗量,减低运动时血清尿素水平,对小鼠运动后血乳酸升高有明显的抑制作用。证明人参皂苷Rh2抗疲劳作用。
实施例2
取纯度为98%的人参皂苷Rh2 21克,加淀粉104克混合均匀,装入胶囊,制成1000粒,得每粒含人参皂苷Rh2约20毫克的抗疲劳药品。本品每日服用两次,每次两粒。
实施例3
取含人参皂苷Rh2 60%的人参叶总皂苷碱水解物35克,加淀粉90克混合均匀,装入胶囊,制成1000粒,得每粒含人参皂苷Rh2约20毫克的抗疲劳保健食品。本品每日服用两次,每次两粒。[人参叶总皂苷水解物参考中国专利00123073.5(申请号)的方法获得]。
实施例4
取含人参皂苷Rh2 60%的人参叶总皂苷碱水解物70克,加维生素B6 5克、B12 25毫克、无水咖啡因25克以及适量矫味剂,加水50升加热溶解,制成1000瓶口服液,得每瓶含人参皂苷Rh2约42毫克的抗疲劳保健食品。本品每日服用两次,每次一瓶。[人参叶总皂苷水解物参考中国专利00123073.5(申请号)的方法获得]。

Claims (1)

1.人参皂苷Rh2作为唯一活性成分在制备缓解体力疲劳的药品或保健食品中的应用。
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