CN101152215A - 卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途，本发明将卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中进行应用，本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品的特征是含有体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物，以及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂和抗氧化剂。本发明利用卵巢颗粒细胞能够在体外大量增殖、分泌多种生物活性物质，采用近乎女性生理的生物利用度极高的颗粒细胞培养上清及其细胞提取物，通过口服、皮肤吸收及阴道栓剂多途径达到抗衰老之目的。
Description
技术领域
本发明涉及卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途。
背景技术
卵巢的主要功能是排卵和分泌女性激素，在女性一生中掌控着几件重要的生理事件：青春发育、生儿育女、良好身材和美丽容颜的维持，其中卵巢颗粒细胞发挥了极其重要的作用。随着年龄增长，女性的卵巢功能在45-50岁左右时开始衰退，有些女性因为环境、心理或病理的因素发生卵巢早衰，随后出现一系列更年期症状，例如月经紊乱或绝经，情绪变化，肌肉松弛、弹性降低、没有光泽，继而衰老加速，身体免疫功能发生改变，心血管疾病、骨质疏松、生殖系统肿瘤和神经退行性疾病的发病率上升等，这一系列问题严重影响了女性的生活质量。因此，抗衰老或延缓衰老就成了众多女性追求的目标。
针对卵巢功能衰退传统的治疗方法就是激素替代治疗(HRT)，虽然雌激素单独或雌孕激素联合应用可以改善女性更年期症状，预防骨质疏松等疾病的发生，改善生活质量，但是HRT的弊端也是不容忽视的。HRT已经证实的副作用有撤退性出血，增加卒中、血栓形成和栓塞的风险，引起水钠储留导致体重增加，对于HRT引起子宫内膜癌和乳腺癌的观点还存在争议。权衡利弊，美国FDA和欧洲EMEA都对HRT做出了严格的限定。
颗粒细胞移植治疗虽然从理论上可行，但是组织相容性问题、移植部位、细胞活性及功能、可操作性等问题限制了其临床应用，国内外仅有个例报道，效果还不明确。
在护肤品中添加雌激素或其类似物解决更年期女性出现的皮肤问题，早已有产品问世，深得女性喜爱。但是这些添加剂均采用人工合成的雌、孕激素或从植物提取的雌激素类似物，有效成分比较单一，与生理状态差距较大，不能很好模拟生理状态，效果并不理想，有些甚至有较大的副作用。因此在皮肤抗衰老方面的作用也是十分有限的。
发明内容
本发明为避免上述现有技术所存在的问题，提供一种卵巢颗粒细胞抗衰老制品、其制备方法及其用途，针对卵巢功能减退是女性衰老的根本原因，利用卵巢功能的主要行使者颗粒细胞能够在体外大量增殖、分泌多种生物活性物质，采用近乎女性生理的生物利用度极高的颗粒细胞培养上清及其细胞提取物，通过口服、皮肤吸收及阴道栓剂多途径达到抗衰老之目的。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：
本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特点是含有体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物，以及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂和抗氧化剂。
卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特点是所述制品为口服制剂、表皮涂抹的膏剂、液体制剂或阴道栓剂。
本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特点是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物收集、浓缩，添加赋形剂、抗氧化剂。
本发明卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特点是按如下步骤操作：
a、获取卵巢颗粒细胞：
无菌条件下取出哺乳动物的卵巢颗粒细胞，400IU/ml透明质酸酶消化颗粒细胞3～5分钟，吸管反复吹打消化后颗粒细胞10～15次，使其分散成单个细胞并经200目滤网过滤，离心洗涤滤过的颗粒细胞两次；
b、获取卵巢颗粒细胞培养上清及细胞提取物：
采用含体积比为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基，步骤a所获取的颗粒细胞用所述培养基重悬，调整细胞密度为2×106/ml接种培养瓶，37℃、体积比为5％的CO2条件下培养6小时后用所述培养基换液一次，去除死细胞及组织碎片，继续培养至细胞90％融合再用所述培养基换液一次；48小时后收集颗粒细胞培养上清；重量体积比为0.25％的胰蛋白酶消化贴壁颗粒细胞，离心洗涤消化脱落的颗粒细胞两次，加入细胞裂解液裂解颗粒细胞，离心收集上清；或利用传2-6代或冻存复苏的颗粒细胞按照前述方法获取上清；
c、纯化
对步骤b所获得的上清利用柱层析和生物半透膜进行纯化、浓缩，以雌二醇的浓度为标准，调整其含量为200μg/ml，同时加入终浓度为200IU/ml的维生素E。
本发明卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中进行应用。
本发明卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中进行应用，其特点是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物在制备抗衰老制品中应用。
卵巢功能的主要行使者-颗粒细胞，除了分泌雌激素、孕激素等类固醇激素以外，还分泌多种生长因子如胰岛素样生长因子I(IGF-I)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)等，以及一些尚未发现的生物活性物质。本发明通过体外培养的颗粒细胞同样可以分泌这些物质，收集、浓缩的培养上清和细胞提取物完全近乎人的生理状态，通过口服、皮肤吸收以及阴道栓剂应用于人体生物利用度非常高。该制剂添加到护肤品中经皮肤吸收，通过细胞表面受体加快新陈代谢，促进细胞更新，加速自由基的清除，从而延缓皮肤衰老。阴道栓剂营养泌尿生殖道粘膜上皮，可以改善局部因激素水平下降导致的更年期改变。另外，局部应用或联合口服，相当于再续卵巢功能，对更年期的全身症状也有不同程度的改善作用。
由于卵巢颗粒细胞还可以分泌一类亲水性的非类固醇物质，即抑制素(INH)、激活素(ACT)和卵泡抑素(FS)，简称为INH-ACT-FS系统，其中INH可以抑制纤维蛋白溶酶原激活因子(PA)的活性，延缓卵泡的闭锁，已被很多学者定为判定卵巢功能的敏感指标之一。本发明利用颗粒细胞培养上清及其提取物不但可以部分替代卵巢功能，而且还可以延长卵巢的“服役”时间，为女性留住青春和美丽提供了新途径。
与已有技术相比，本发明有益效果体现在：
1、卵巢颗粒细胞是卵巢功能的主要行使者，体外培养能够分泌雌激素、孕激素、卵泡刺激素和黄体生成素等激素物质，IGF、EGF、TGF、INH、ACT、FS等多种生物活性物质，接近在体卵巢的内分泌功能。
2、各种生物成分接近生理状态，生物利用度高。
3、来源方便，多途径应用，没有任何毒副作用。
4、不但可在体外替代卵巢部分功能，而且可以激发卵巢潜能，延缓卵巢功能衰退。因此，在缓解女性更年期症状、抗衰老、美容、保健等领域有广阔的应用前景。
附图说明
图1为各组小鼠使用本发明颗粒细胞制剂灌胃2个月后肝脏内自然杀伤细胞(NK)的数量变化。其中图1A为成年鼠、图1B为去势鼠、图1C为老年鼠。
以下通过具体实施方式对本发明作进一步描述。
具体实施方式
1、获取卵巢颗粒细胞：取4-6周龄雌性昆明种小鼠腹腔注射孕马血清(PMSG)7.5U/只，常规饲养48小时后颈椎脱臼处死，无菌条件下取出双侧卵巢，置于盛有4℃预冷的平衡盐溶液(BSS，含400IU/ml透明质酸酶，100U/ml青、链霉素)的培养皿中，在体视显微镜下用28G注射针头刺破卵泡，颗粒细胞释放入BSS中；吸管反复吹打数次，使其分散成单个细胞并经200目滤网过滤，离心洗涤细胞两次。
2、颗粒细胞培养上清及细胞提取物的获取：含体积比为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基重悬颗粒细胞，调整细胞密度为2×106/ml接种培养瓶，37℃、体积比为5％CO2条件下培养6小时后第一次换液，去除死细胞及组织碎片，继续培养至细胞90％融合再换液一次。48小时后收集颗粒细胞培养上清；重量体积比为0.25％胰蛋白酶消化、收获颗粒细胞，离心洗涤两次，加入细胞裂解液裂解颗粒细胞，12000转/分离心20分钟收集上清；或利用传2-6代或冻存复苏的颗粒细胞按照前述方法获取上清。
3、调制：颗粒细胞培养上清及细胞提取物通过层析柱、生物半透膜，除去高丰度的胎牛血清成份、各种离子及盐类和多余的水分，将颗粒细胞分泌的有效成分进行纯化、浓缩。
a、口服液：以雌二醇含量计，调整其浓度至200μg/ml，同时加入VitE至终浓度为200IU/ml；
b、膏剂：按重量组分计算，收集的浓缩纯化液0.1-3、VitE0.5-1、凡士林5、硬脂酸15、丙三醇5、蒸馏水70，采用胶体磨匀质制成膏状，使雌二醇和VitE终浓度分别为5μg/mg和5IU/mg；
c、液体制剂：按重量组分计算，收集的浓缩纯化液0.1-3、VitE0.5-1、丙三醇10、1，3-丁二醇5、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯1、蒸馏水78，采用胶体磨匀质制成液态皮肤涂抹用品，其中雌二醇和VitE终浓度分别为5μg/mg和5IU/mg；
d、阴道栓剂：按重量组分计算，将丙三醇70、明胶20、蒸馏水7加热配制基质，待基质冷至55～60℃加入浓缩纯化液0.1-3和VitE0.5-1一起恒温搅拌混合30分钟，将混合物注入栓剂成型模具中制成阴道栓剂，每粒栓剂含雌二醇和VitE分别为200μg和200IU。
e、用法及用量：所有剂型每天用量折算成雌二醇的量为200μg/天，即口服液每天口服1ml，膏剂和液体制剂的皮肤涂抹用品每天脸部和手部皮肤涂抹40mg，阴道栓剂每晚塞1粒于阴道后穹窿部。
4、动物试验：
a、小鼠去势：6-8周雌性昆明种小鼠30只，手术切除双侧卵巢，继续饲养一个月，阴道脱落细胞检测小鼠动情周期消失，外周血雌、孕激素水平较去势前明显降低，即小鼠去势成功。选取20周龄雌性昆明种小鼠30只，作为老龄组。
b、口服组：成年鼠(对照)、去势鼠和老龄鼠各10只，每天用调制的口服液灌胃一次，每次1ml(以雌二醇含量计200μg/天)，连续2个月；
c、皮肤涂抹组：成年鼠(对照)、去势鼠和老龄鼠各20只，先用20％硫化钠脱去小鼠背部皮肤的毛，面积为1×2cm2；用调制的膏剂或液体剂型涂抹皮肤，每天两次，以雌二醇剂量计达到200μg/天，连续使用2个月。
d、阴道栓剂组：6个月-1岁昆明种大耳白兔6只，3只按照前述方法去势作为去势组，3只作为正常对照组；6-7岁龄昆明种大耳白兔3只，作为老龄组。兔子每晚阴道塞入一粒栓剂，空腹过夜，连续使用2个月。
5、效果观察：去势鼠/兔和老年鼠/兔外周血雌、孕激素水平有所上升，阴道恢复分泌功能，免疫功能也较使用前有所增强。部分结果参见表1和图1。
表1各组小鼠使用颗粒细胞制剂灌胃2个月后体内雌、孕激素水平变化
| 组别 | 使用前 | 使用后 | ||
| E2 | P | E2 | P | |
| 成年鼠去势鼠老年鼠 | 70.59±8.9510.34±2.8235.26±3.15 | 2.62±0.970.58±0.131.07±0.32 | 69.74±9.1642.67±6.23*57.86±9.22* | 2.69±0.910.69±0.141.53±0.36* |
*与使用前比较p＜0.05
表1中，去势鼠和老年鼠体内的雌、孕激素水平与成年鼠相比均处于较低的水平；使用口服型颗粒细胞制剂灌胃2个月以后，去势鼠和老年鼠体内的雌、孕激素水平较使用前明显上升(去势鼠孕激素水平使用前后变化不明显)，尽管仍然低于成年鼠，两种鼠的一些症状得到改善。
图1中，自然杀伤细胞(NK)是一种天然免疫细胞，无需抗原预先刺激就可以直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中发挥重要作用。卵巢功能衰退或丧失的老鼠(老年鼠和去势鼠)肝脏内NK细胞数量较正常成年鼠明显降低；使用口服型颗粒细胞制剂灌胃2个月以后，老年鼠和去势鼠肝内NK数量均有明显上升，正常成年鼠肝内NK数量变化不明显。
Claims (6)
1.卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特征是含有体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物，以及一种或多种药学上可接受的药用赋形剂和抗氧化剂。
2.根据权利要求1所述的卵巢颗粒细胞抗衰老制品，其特征是所述制品为口服制剂、表皮涂抹的膏剂、液体制剂或阴道栓剂。
3.卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特征是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物收集、浓缩，添加赋形剂和抗氧化剂。
4.根据权利要求3所述的卵巢颗粒细胞抗衰老制品的制备方法，其特征是按如下步骤操作：
a、获取卵巢颗粒细胞：
无菌条件下取出哺乳动物的卵巢颗粒细胞，400IU/ml透明质酸酶消化颗粒细胞3～5分钟，吸管反复吹打消化后颗粒细胞10～15次，使其分散成单个细胞并经200目滤网过滤，离心洗涤滤过的颗粒细胞两次；
b、获取卵巢颗粒细胞培养上清及细胞提取物：
采用含体积比为10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基，步骤a所获取的颗粒细胞用所述培养基重悬，调整细胞密度为2×106/ml接种培养瓶，37℃、体积比为5％的CO2条件下培养6小时后用所述培养基换液一次，去除死细胞及组织碎片，继续培养至细胞90％融合再用所述培养基换液一次；48小时后收集颗粒细胞培养上清；重量体积比为0.25％的胰蛋白酶消化贴壁颗粒细胞，离心洗涤消化脱落的颗粒细胞两次，加入细胞裂解液裂解颗粒细胞，离心收集上清；或利用传2-6代或冻存复苏的颗粒细胞按照前述方法获取上清；
c、纯化
对步骤b所获得的上清利用柱层析和生物半透膜进行纯化、浓缩，以雌二醇的浓度为标准，调整其含量为200μg/ml，同时加入终浓度为200IU/ml的维生素E。
5.卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中的应用。
6.根据权利要求5所述的卵巢颗粒细胞在制备抗衰老制品中的应用，其特征是将体外培养扩增的雌性哺乳类动物卵巢颗粒细胞的培养上清和/或细胞提取物在制备抗衰老制品中应用。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110227087A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-09-13 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 石榴皮提取物在制备滋养卵巢中药产品中的用途 |
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110372779A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-10-25 | 南京医科大学 | 一种能保护及延长卵巢功能的多肽bpp及其应用 |
| CN110227087A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-09-13 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 石榴皮提取物在制备滋养卵巢中药产品中的用途 |
| CN113462637A (zh) * | 2021-08-12 | 2021-10-01 | 江苏省中医药研究院 | 一种小鼠卵巢颗粒细胞提取及培养方法 |
| CN115948324A (zh) * | 2022-10-28 | 2023-04-11 | 山东大学 | 氨基酸饥饿在制备治疗卵巢储备功能减退颗粒细胞衰老相关药物中的应用 |
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