CN109453199A - 间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的应用 - Google Patents

间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的应用,该间充质干细胞及其组合物和注射液可以改善受损的大鼠的血糖调控能力;并且与胎盘造血干细胞或中药提取物联用后,降血糖作用更加显著,由此,得出本发明提供的间充质干细胞和其组合物及注射液可以用于治疗糖尿病。

Description

间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的 应用
技术领域
本发明属于间充质干细胞应用领域,特别涉及一种间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的应用。
背景技术
糖尿病是一种因体内胰岛素绝对或者相对不足所导致的一系列临床综合症,主要包括Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病。近年来,糖尿病发病率呈上升趋势,而且趋于年轻化,糖尿病已成为威胁人类健康的一大顽疾。不同类型的糖尿病都会导致胰腺内的β细胞不能产生足量的胰岛素以降低血糖的浓度,导致高血糖症的发生。目前治疗的手段主要采用药物治疗,药物治疗虽能降低血糖,但是不能修复胰岛功能;使用胰岛素进行治疗可以控制症状,但是长期使用会产生对胰岛素的耐受。
间充质干细胞是中胚层来源的成体干细胞,由于来源广泛、扩增潜能巨大,横向分化能力,以及可以降低免疫识别和免疫反应等其它干细胞无法比拟的优势,目前备受研究人员的关注。
所以进一步研究间充质干细胞及其组合物和制剂在治疗糖尿病中的应用是目前治疗糖尿病研究的热点。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供一种间充质干细胞、含有间充质干细胞的组合物及其注射剂在制备治疗糖尿病药物中的应用。
本发明具体技术方案如下:
本发明提供一种间充质干细胞、含有间充质干细胞的组合物及其注射液在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
进一步的改进,所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。
进一步的改进,所述间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞。
进一步的改进,所述培养具体为:将间充质干细胞在第一培养基中培养,当培养的细胞汇合达到85-90%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞。
优选地,所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1-3μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3-5μg/mL硬酯酰乳酸钙、5-10μg/mL维生素E、20-25μg/mL山梨酸钾、1-3μg/mL葡聚糖、6-8μg/mL绿原酸、3-5μg/mL大青叶水提物和15-20μg/mL蒲公英水提物。
优选地,所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%-10%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1-3μg/mL麦芽糖醇、15-20μg/mL硝酸铵、10-15μg/mL成纤维细胞生长因子、1-3μg/mL甘氨酸、2-5μg/mL氯化钠、3-5μg/mL磷酸二氢钾、5-10μg/mL连翘水提取和2-5μg/mL瓜蒌水提物。
进一步的改进,所述组合物由胎盘造血干细胞和间充质干细胞组成,所述胎盘造血干细胞和间充质干细胞的个数比为2-3:70-80。
胎盘造血干细胞的制备方法如下:
用酶溶液消化离体胎盘组织,得到消化产物,去除所述消化产物中的组织残渣,得到酶解液;将所述酶解液与羟乙基淀粉溶液混合并使混合得到的物料分层,得到上层的有核细胞悬液;将所述有核细胞悬液与冻存液混合即得到胎盘造血干细胞液。上述酶溶液包括100IU/mL的Ⅰ型胶原酶、30IU/mL的DNA酶I、3IU/mL的分散酶和600IU/mL的透明质酸酶。上述冻存液包括45mL/L的二甲基亚砜、20g/L的羟乙基淀粉、80g/L的人血白蛋白、25g/L的右旋糖酐、5g/L的氯化钠、4.5g/L的葡萄糖酸钠、4g/L的醋酸钠、0.4g/L的氯化钾和0.3g/L的氯化镁。
进一步的改进,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15-20mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5-10地锦草15-20佩兰5-10没药1-3。
进一步的改进,所述注射液由间充质干细胞或含有间充质干细胞的组合物、生理盐水及辅料组成,每mL所述生理盐水含有2×106个间充质干细胞和/或添加15-20mg中药提取物,含有10-20mg辅料,所述辅料由如下重量份的成分组成:
海藻酸钠2-3 司盘60 1-3 山梨醇5-7。
进一步的改进,所述中药提取物是通过如下方法制备得到的:
将灯心草、地锦草、佩兰和没药粉碎,用水煎煮2次,第一次用水量为药材总重的7倍,煎煮5h,第二次用水量为药材总重的4倍,煎煮2h,合并煎煮液,过滤,滤液用活性炭脱色,先用环己烷萃取,弃去有机相,水相再用二氯甲烷萃取,弃去有机相,水相,浓缩,干燥,得中药提取物。
本发明另一方面提供一种用于治疗糖尿病的组合物,其特征在于,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,中药提取物的浓度为15-20mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5-10 地锦草15-20 佩兰5-10 没药1-3。
本发明提供一种间充质干细胞、组合物及注射液在制备治疗糖尿病药物的应用,该间充质干细胞及其组合物和注射液可以改善受损的大鼠的血糖调控能力;并且与胎盘造血干细胞或中药提取物联用后,降血糖作用更加显著,由此,得出本发明提供的间充质干细胞和其组合物及注射液可以用于治疗糖尿病。
具体实施方式
实施例1
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到85%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3μg/mL硬酯酰乳酸钙、5μg/mL维生素E、20μg/mL山梨酸钾、1μg/mL葡聚糖、6μg/mL绿原酸、3μg/mL大青叶水提物和15μg/mL蒲公英水提物;所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL麦芽糖醇、15μg/mL硝酸铵、10μg/mL成纤维细胞生长因子、1μg/mL甘氨酸、2μg/mL氯化钠、3μg/mL磷酸二氢钾、5μg/mL连翘水提取和2μg/mL瓜蒌水提物。
实施例2
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到87%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为2μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、4μg/mL硬酯酰乳酸钙、7.5μg/mL维生素E、22μg/mL山梨酸钾、2μg/mL葡聚糖、7μg/mL绿原酸、4μg/mL大青叶水提物和17.5μg/mL蒲公英水提物;所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为8%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为2μg/mL麦芽糖醇、18μg/mL硝酸铵、13μg/mL成纤维细胞生长因子、2μg/mL甘氨酸、4μg/mL氯化钠、4μg/mL磷酸二氢钾、7μg/mL连翘水提取和3μg/mL瓜蒌水提物。
实施例3
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到90%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为3μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、5μg/mL硬酯酰乳酸钙、10μg/mL维生素E、25μg/mL山梨酸钾、3μg/mL葡聚糖、8μg/mL绿原酸、5μg/mL大青叶水提物和20μg/mL蒲公英水提物;所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为10%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为3μg/mL麦芽糖醇、20μg/mL硝酸铵、15μg/mL成纤维细胞生长因子、3μg/mL甘氨酸、5μg/mL氯化钠、5μg/mL磷酸二氢钾、10μg/mL连翘水提取和5μg/mL瓜蒌水提物。
其中连翘水提物、瓜蒌水提物、蒲公英水提物和大青叶水提取都是加入原料5倍的水煎煮分别煎煮两次,合并煎煮液,过滤,滤液浓缩制得。
实施例4
一种组合物,所述组合物由胎盘造血干细胞和间充质干细胞组成,所述胎盘造血干细胞和间充质干细胞的个数比为2.1:70。
实施例5
一种组合物,所述组合物由胎盘造血干细胞和间充质干细胞组成,所述胎盘造血干细胞和间充质干细胞的个数比为3:80。
实施例6
一种组合物,所述组合物由胎盘造血干细胞和间充质干细胞组成,所述胎盘造血干细胞和间充质干细胞的个数比为2.5:75。
实施例7
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5 地锦草15 佩兰5 没药1。
实施例8
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为17mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草7 地锦草17.5 佩兰8 没药2。
实施例9
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为20mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草10 地锦草20 佩兰10 没药3
中药提取物是通过如下方法制备得到的:将灯心草、地锦草、佩兰和没药粉碎,用水煎煮2次,第一次用水量为药材总重的7倍,煎煮5h,第二次用水量为药材总重的4倍,煎煮2h,合并煎煮液,过滤,滤液用活性炭脱色,先用环己烷萃取,弃去有机相,水相再用二氯甲烷萃取,弃去有机相,水相,浓缩,干燥,得中药提取物;
该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到90%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为3μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、5μg/mL硬酯酰乳酸钙、10μg/mL维生素E、25μg/mL山梨酸钾、3μg/mL葡聚糖、8μg/mL绿原酸、5μg/mL大青叶水提物和20μg/mL蒲公英水提物;第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为10%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为3μg/mL麦芽糖醇、20μg/mL硝酸铵、15μg/mL成纤维细胞生长因子、3μg/mL甘氨酸、5μg/mL氯化钠、5μg/mL磷酸二氢钾、10μg/mL连翘水提取和5μg/mL瓜蒌水提物。
实施例10
一种注射液,所述注射液由间充质干细胞、生理盐水及辅料组成,每mL所述生理盐水含有2×106个间充质干细胞、含有10mg辅料,所述辅料由如下重量份的成分组成:
海藻酸钠2 司盘60 1 山梨醇5。
实施例11
一种注射液,所述注射液由间充质干细胞组合物、生理盐水及辅料组成,每mL所述生理盐水含有2×106个间充质干细胞、15mg辅料,所述辅料由如下重量份的成分组成:
海藻酸钠3 司盘60 2 山梨醇6。
实施例12
一种注射液,所述注射液由间充质干细胞组合物、生理盐水及辅料组成,每mL所述生理盐水含有2×106个间充质干细胞、15mg中药提取物、20mg辅料,所述辅料由如下重量份的成分组成:
海藻酸钠3 司盘60 3 山梨醇7
所述中药提取物由如下重量份的成分制备而成:
灯心草7 地锦草16 佩兰8 没药2。
对照例1
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到85%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为5μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、1μg/mL硬酯酰乳酸钙、5μg/mL维生素C、20μg/mL柠檬酸钾、1μg/mL山梨醇、3μg/mL大青叶水提物和15μg/mL蒲公英水提物;第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL麦芽糖醇、15μg/mL硝酸铵、10μg/mL成纤维细胞生长因子、1μg/mL甘氨酸、2μg/mL氯化钠、3μg/mL磷酸二氢钾、5μg/mL连翘水提取和2μg/mL瓜蒌水提物。
对照例2
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到85%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3μg/mL硬酯酰乳酸钙、5μg/mL维生素E、20μg/mL山梨酸钾、1μg/mL葡聚糖、6μg/mL绿原酸、3μg/mL黄芪水提物和15μg/mL黄连水提物;第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL麦芽糖醇、15μg/mL硝酸铵、10μg/mL成纤维细胞生长因子、1μg/mL甘氨酸、2μg/mL氯化钠、3μg/mL磷酸二氢钾、5μg/mL连翘水提取和2μg/mL瓜蒌水提物。
对照例3
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到85%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3μg/mL硬酯酰乳酸钙、5μg/mL维生素E、20μg/mL山梨酸钾、1μg/mL葡聚糖、6μg/mL绿原酸、3μg/mL大青叶水提物和15μg/mL蒲公英水提物;第二培养基由DMEM培养液和第二添加剂组成,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL麦芽糖醇、15μg/mL硝酸铵、1μg/mL甘氨酸、2μg/mL氯化钠、3μg/mL磷酸二氢钾、15μg/mL连翘水提取和15μg/mL瓜蒌水提物。
对照例4
一种间充质干细胞,该间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞,培养具体方法为:将间充质干细胞于37±0.5℃、二氧化碳体积分数5±0.2%的条件下,加入第一培养基进行培养,当培养的细胞汇合达到85%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞;所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3μg/mL硬酯酰乳酸钙、5μg/mL维生素E、20μg/mL山梨酸钾、1μg/mL葡聚糖、6μg/mL绿原酸、3μg/mL大青叶水提物和15μg/mL蒲公英水提物;第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1μg/mL麦芽糖醇、15μg/mL硝酸铵、10μg/mL成纤维细胞生长因子、1μg/mL甘氨酸、2μg/mL氯化钠、3μg/mL磷酸二氢钾、5μg/mL蒲公英水提取、2μg/mL板蓝根水提物和2μg/mL穿心莲水提物。
对照例5
一种组合物,所述组合物由胎盘造血干细胞和间充质干细胞组成,所述胎盘造血干细胞和间充质干细胞的个数比为2:82。
对照例6
一种组合物,所述组合物由羊膜上皮细胞和间充质干细胞组成,所述羊膜上皮细胞和间充质干细胞的个数比为2:80。
对照例7
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
黄芪5 地锦草15 佩兰5 没药1。
对照例8
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5 葛根15 五味子5 三七1。
对照例9
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草2 地锦草25 佩兰15 没药7。
对照例10
一种组合物,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5 地锦草15 佩兰5 没药1 黄芪5。
对照例11
一种组合物,所述组合物由中药提取物组成,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草5 地锦草15 佩兰5 没药1。
试验例1治疗糖尿病效果试验
一、试验动物
清洁级大鼠120只,雌雄各半,体重150-220g,所有大鼠同室分笼饲养,自然光照,自由进食进水,饲养温度25±2℃,相对湿度45±2%,饲养一周,造模前禁食12h,不禁水。
二、糖尿病模型制备
大鼠单次腹腔注射STZ(50g·kg-1)诱发糖尿病,空白对照组动物腹腔注射等体积0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液。注射STZ 3天后用血糖测定仪检测血糖,用尿糖试纸检测尿糖。血糖≥16.7mmol·L-1,尿糖≥+++列入糖尿病动物。
三、试验方法
实验动物随机分组,分别为空白对照组、模型组、给药1-6组,对照1-11组,每组各6只。
其中,空白对照组为正常大鼠,其余各组均为糖尿病大鼠。
空白对照组和模型组均给予等体积0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液;
给药1组:灌胃给予间充质干细胞生理盐水溶液5mL,2×106个间充质干细胞/mL;
给药2组:灌胃给予实施例1获得的间充质干细胞生理盐水溶液5mL,2×106个间充质干细胞/mL;
给药3组:灌胃给予实施例4的组合物配成的生理盐水5mL,6×104个胎盘造血干细胞/mL,2×106个间充质干细胞/mL;
给药4组:灌胃给予实施例7的组合物配成的生理盐水5mL,2×106个间充质干细胞/mL、20mg中药提取物/mL;
给药5组:灌胃给予实施例9的组合物配成的生理盐水5mL,2×106个间充质干细胞/mL、20mg中药提取物/mL,
给药6组:注射给予实施例10的注射液1mL;
对照1-4组分别灌胃给予对照例1-4获得的间充质干细胞生理盐水溶液5mL,2×106个间充质干细胞/mL;
对照例5灌胃给予对照例5的组合物配成的生理盐水5mL,4.878×104个胎盘造血干细胞/mL,2×106个间充质干细胞/mL;
对照例6灌胃给予对照例6的组合物配成的生理盐水5mL,5×104个胎盘造血干细胞/mL,2×106个间充质干细胞/mL;
对照例7-10分别灌胃给予对照例7-10的组合物配成的生理盐水5mL,2×106个间充质干细胞/mL,中药提取物15mg/mL。
对照11组灌胃给予对照例11的组合物的生理盐水5mL,中药提取物15mg/mL;
每天分别按照上述方式给药。
四、糖耐量试验
于试验第6周末,将大鼠禁食6h后,灌胃给予20%葡萄糖1mL/100g体重,用JPS-3+血糖仪分别测定空腹血糖(0min)及服糖后30min、60min及120min的血糖含量,各组血糖含量见表1。
表1各组糖耐量试验结果
与给药1组相比,Pa<0.05,Pb<0.01,Pc>0.05,与给药2组相比,Pd<0.01,Pe<0.05,与给药4组相比,Pg<0.05,Pf<0.01。
从表中可以看出,空白对照组大鼠具有正常血糖调节能力,而模型组大鼠不具有调节血糖的能力,糖调节机能受损。在给药组中,给药1组单独给药的间充质干细胞具有调节血糖机能的能力,给药2组经过培养后获得的间充质干细胞对血糖的修复机能更加,可以降低血糖;当间充质干细胞和胎盘造血干细胞或中药提取物组成的组合物时,其可以显著降低血糖,具有显著的调节血糖机能的能力,与其他各组存在显著差异性;当单身使用中药提取物或变换提取物内给成分的用量及种类,调节血糖机能的能力显著降低。
五、结论
本发明提供的间充质干细胞及其组合物和注射液可以改善受损的大鼠的血糖调控能力;并且与胎盘造血干细胞或中药提取物联用后,降血糖作用更加显著,由此,得出本发明提供的间充质干细胞和其组合物及注射液可以用于治疗糖尿病。

Claims (10)

1.一种间充质干细胞、含有间充质干细胞的组合物及其注射液在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述间充质干细胞为脐带来源的间充质干细胞。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述间充质干细胞为经过培养后获得的间充质干细胞。
4.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述培养具体为:将间充质干细胞在第一培养基中培养,当培养的细胞汇合达到85-90%后,加入第二培养基进行传代培养,收集第四代间充质干细胞。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述第一培养基由DMEM培养液和第一添加剂组成,所述第一添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1-3μg/mL聚乙二醇月桂酸酯、3-5μg/mL硬酯酰乳酸钙、5-10μg/mL维生素E、20-25μg/mL山梨酸钾、1-3μg/mL葡聚糖、6-8μg/mL绿原酸、3-5μg/mL大青叶水提物和15-20μg/mL蒲公英水提物。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述第二培养基由DMEM培养液、胎牛血清和第二添加剂组成,所述胎牛血清在DMEM培养液中的总体积分数为5%-10%,所述第二添加剂各成分及其在DMEM培养液中的浓度为1-3μg/mL麦芽糖醇、15-20μg/mL硝酸铵、10-15μg/mL成纤维细胞生长因子、1-3μg/mL甘氨酸、2-5μg/mL氯化钠、3-5μg/mL磷酸二氢钾、5-10μg/mL连翘水提取和2-5μg/mL瓜蒌水提物。
7.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述组合物由造血干细胞和间充质干细胞组成,所述造血干细胞和间充质干细胞的个数比为2-3:70-80。
8.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述组合物由间充质干细胞和中药提取物组成,所述间充质干细胞的浓度为2×106个/mL,所述中药提取物的浓度为15-20mg/mL,所述中药提取物是由如下重量份的成分制备而成:
灯心草 5-10 地锦草 15-20 佩兰 5-10 没药 1-3。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述注射液由间充质干细胞或含有间充质干细胞的组合物、生理盐水及辅料组成,每mL所述生理盐水含有2×106个间充质干细胞和/或添加15-20mg中药提取物,含有10-20mg辅料,所述辅料由如下重量份的成分组成:
海藻酸钠 2-3 司盘60 1-3 山梨醇 5-7。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述中药提取物是通过如下方法制备得到的:
将灯心草、地锦草、佩兰和没药粉碎,用水煎煮2次,第一次用水量为药材总重的7倍,煎煮5h,第二次用水量为药材总重的4倍,煎煮2h,合并煎煮液,过滤,滤液用活性炭脱色,先用环己烷萃取,弃去有机相,水相再用二氯甲烷萃取,弃去有机相,水相,浓缩,干燥,得中药提取物。
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